 Penggunaan yang dimaksudkan

Untuk penentuan kuantitatif hemoglobin dalam darah lengkap.

 Sejarah Metode

Metode sebelumnya yang digunakan untuk penentuan hemoglobin darah

didasarkan pada perkiraan kapasitas oksigen atau karbon monoksida atau
kandungan besi. Dari semua metode, hanya sianmethemoglobin yang diterima
secara umum. Teknik sianmethemoglobin asli diusulkan oleh Stadie pada tahun
1920.1. Metode ini menggunakan reagen alkali ferricyanide dan sianida yang
terpisah. Sebuah reagen tunggal diperkenalkan oleh Drabkin dan Austin² pada
tahun 1935. Pada tahun 1958 Dewan Riset Nasional (NRC) merekomendasikan
adopsi prosedur cyanmethemoglobin berdasarkan uji coba lapangan yang
dilakukan oleh Departemen Medis Angkatan Darat.34 Pada tahun 1966 Komite
Internasional untuk Standardisasi dalam Hematologi menyetujui proposal bahwa
semua laboratorium klinis harus mengadopsi metode ini secara eksklusif.

 Prinsip

Dalam media basa, kalium ferisianida mengoksidasi hemoglobin dan

turunannya menjadi methemoglobin. Reaksi selanjutnya dengan kalium sianida
menghasilkan sianmethemoglobin yang lebih stabil yang memiliki absorbansi
maksimum pada 540 nm6 Intensitas warna sebanding dengan konsentrasi
hemoglobin total. Reagen Total Hemoglobin

 Reagen:

Kalium ferisianida 0,6 mM, kalium sianida 0,77 mM, penyangga dan
penstabil

 Persiapan Reagen

Reagen datang dalam bentuk siap pakai.

 Penyimpanan Reagen

Reagen hemoglobin harus disimpan pada suhu kamar terlindung dari cahaya.

 Kerusakan Reagen

Jangan gunakan reagen hemoglobin jika :

1. Ini telah menjadi warna yang berbeda dari kuning.

2. Reagen menjadi keruh.

 Tindakan pencegahan

1. Mengandung sianida. Racun bisa berakibat fatal jika tertelan. JANGAN

MENGGUNAKAN PIPET MELALUI MULUT.

2. Jangan dicampur dengan asam. Buang dengan menyiram dengan air dalam
jumlah besar.

 Pengumpulan dan Penyimpanan Spesimen

1. Gunakan darah lengkap dengan EDTA sebagai antikoagulan.

2. Oksalat, sitrat, atau heparin juga dapat digunakan sebagai antikoagulan.

3. Darah kapiler atau vena dapat dikumpulkan jika digunakan sebelum

pembekuan Terjadi.

4. Darah utuh yang dicampur dengan baik dengan antikoagulan tampak stabil
selama satu minggu pada suhu kamar

 gangguan

1. Zat yang menyebabkan kekeruhan akan salah meningkatkan nilai

hemoglobin. Ini termasuk lipid, protein plasma abnormal
(macroglobulinemia)8 atau stroma eritrosit.

2. Sebuah tinjauan oleh Young et al 10 mengungkapkan banyak obat yng

memberikan efek in vitro untuk menurunkan nilai hemoglobin darah.
 Bahan Disediakan

Reagen Total Hemoglobin.

 Bahan Diperlukan tetapi tidak Disediakan

1. Perangkat pemipetan yang akurat

2. Tabung reaksi/rak.

3. Timer

4. Spektrofotometer mampu membaca pada 540 nm.

 Prosedur (Otomatis)

Lihat instruksi aplikasi instrumen tertentu.

 Prosedur (Manual)

1. Masukkan 2,0 ml reagen hemoglobin total ke dalam tabung reaksi

berlabel "kosong", "kontrol", "pasien", dll.

2. Tempatkan 0,01 ml (10ul) standar, kontrol dan sampel ke dalam

masing-masing tabung. Mencampur.

3. Biarkan semua tabung berdiri selama tiga menit pada suhu kamar.

4. Atur spektrofotometer ke 540 nm (520-560 nm) dan nol dengan reagen

kosong.

5. Baca dan catat nilai absorbansi semua tabung. 6. Lihat "Perhitungan"

untuk mendapatkan nilai.

 Catatan :

1. Untuk spektrofotometer yang membutuhkan volume lebih besar untuk

pembacaan yang tepat, gunakan 4,0 ml reagen dan 0,02 ml (20 ul)
sampel. Ikuti petunjuk di atas.
 2. Warna akhir tampak cukup stabil tetapi harus dibaca dalam waktu satu
jam untuk menghindari penguapan.

 Keterbatasan

1. Prosedur ini mengukur hemoglobin dan turunannya kecuali:

sulfhemoglobin.

2. Spesimen dengan nilai di atas 20,0 g/dl harus dijalankan kembali dengan
menggunakan setengah volume sampel. Kalikan hasil akhir dengan dua.

 Kalibrasi

Gunakan standar hemoglobin darah utuh atau standar siap pakai yang telah
disiapkan berdasarkan volume sampel dan reagen yang digunakan dalam
prosedur ini.

 Perhitungan

Daya serap

Daya serap dari Tidak Diketahui x Konsentrasi Hemoglobin (g/dl) A

Daya serap Standar Standar (g/dl)
Contoh: Jika standar 15 g/dl memiliki absorbansi 0,406 dan absorbansi yang
tidak diketahui adalah 0,350 maka:

0,350 X 15,0 12,9 g/dl = 12. 9g/dl

0,406

 Kontrol kualitas

Integritas reaksi harus dipantau dengan menggunakan bahan kontrol

(normal/abnormal) dengan konsentrasi hemoglobin yang diketahui.

 Nilai yang Diharapkan

11,7 13,0-18,0 g/dl

Pria Dewasa : 11.0-16,0 g/dl

Wanita Dewasa : 10,0-14,0 g/dl

Anak-anak : 14.0-23.0 g/dl

Bayi baru lahir : 14.0-23.0 g/dl

Faktor-faktor seperti usia, ras, olahraga, musim dan ketinggian dilaporkan

mempengaruhi nilai kisaran normal. Kisaran di atas seharusnya hanya berfungsi
sebagai pedoman. Setiap laboratorium harus menetapkan jangkauannya sendiri.

 Performa

1. Linearitas: 20,0 g/dl

2. Perbandingan: Studi yang dilakukan terhadap prosedur serupa

menghasilkan koefisien korelasi 0,992 dengan persamaan regresi
y=0,985x + 0,098 pada sampel dengan nilai 8,7 hingga 18,2 g/dl (n =27)

3. Presisi: Pengujian (n=25) bahan kontrol hemoglobin menghasilkan

koefisien variasi 1,1% pada 8,9 g/dl dan 1,4% pada 12,6 g/dl.

 Referensi

1. Stadie, W.C., J.Biol. Kimia, 41:237, (1920)

2. Drabkin, D.L., Austin, J.H., J. Biol. Kimia., 112:51, (1935).

3. Crosby, W.H., dkk, U.S. Armed Forces Med J., 5:693, (1954).

4. Crosby, W.H., dkk, Blood, 12:1132, (1957).

5. Eilers, R.J., Am. J.klin. Pathol., 47:212, (1967).

6. Tietz, N.W., Fundamentals of Clinical Chemistry, 2nd ed., W.B. Saunders

Co., Philadelphia, hal.411, (1976).
 7. Henry, R.F., dkk, Prinsip dan Teknik dalam Kimia Klinis, 2nd Ed., Harper
& Row, Hagerstown, MD, hlm. 1128:1135, (1974).

8. Hijau, P., dkk, Am. J.klin. Jalan., 32:216, (1959).

9. Van Kampen, E.J., dkk, Clin. Kimia Acta, 6:538, (1961).

10. Muda, D.S., dkk, Clin. Kimia., 21:1D, (1975).

11. Wolf, PL, Hematologi Klinis Praktis, John Wiley & Sons, NY, hal. 144,
(1973).

Diproduksi oleh Pointe Scientific, Inc. 5449 Research Drive, Canton, MI 48188
Perwakilan Resmi Eropa: Obelis s.a.

Boulevard Général Wahis 53 1030 Brussel, BELGIA

Telp: (32)2.732.59.54

Faks: (32)2.732.60.03