International Journal of Biological Macromolecules 214 (2022) 312–323
Daftar isi tersedia di ScienceDirect
International Journal
of Biological Macromolecules
www.elsevier.com/locate/ijbiomac
Polisakarida dari Inonotus obliquus memperbaiki disfungsi penghalang
usus pada tikus dengan diabetes mellitus tipe 2
Ling Su a,b, Chuanxin Xin a, Jintao Yang a, Liran Dong a,b, Heiban Mei a,b, Xiaojing Dai a,b,
Qi Wang a,b,*
Pusat
Penelitian Teknik Kementerian Pendidikan Cina untuk Jamur yang Dapat Dimakan dan Obat, Universitas Pertanian Jilin, Changchun 130118, Jilin, Cina b
Sekolah Tinggi Perlindungan Tumbuhan, Universitas Pertanian Jilin, Changchun 130118, Jilin, Cina
INFO ARTIKEL
Kata Kunci:
Inonotus obliquus polisakarida Diabetes mellitus
Barrier usus
1. Pendahuluan
ABSTRAK
Diabetes melitus tipe 2 merupakan penyakit global yang membahayakan
kesehatan manusia, dan kebutuhan akan pengembangan kandidat pengobatan
nontoksik sangat mendesak. Dalam karya ini, satu polisakarida homogen dari
Inonotus obliquus (IN) diisolasi, dan efek perlindungan dan mekanisme IN pada
diabetes mellitus tipe 2 diselidiki dari aspek penghalang usus. IN terutama terdiri pasien, pengobatan tersebut juga menurunkan kualitas hidup pasien
dari 9 monosakarida dengan Mw 373 kDa. DI melemahkan penurunan berat
badan, mengurangi kerusakan patologis, dan menekan produksi sitokin
proinflamasi. Selain itu, IN memperbaiki penghalang usus dengan meningkatkan
ekspresi Ki
67, ZO-1 dan MUC2. Selain itu, kelimpahan Firmicutes meningkat secara
signifikan dengan pengobatan IN, sedangkan kadar Bacteroidetes secara signifikan
dihambat. Kesimpulannya, IN terlindungi dari diabetes mellitus tipe 2 dengan
memperbaiki disfungsi penghalang usus dan dapat berfungsi sebagai kandidat
obat baru untuk diabetes mellitus tipe 2.
melitus. Saat ini, pengobatan diabetes melitus didasarkan pada
terapi jangka panjang dengan obat kimia oral (α-glucosidase inhibitors,
Diabetes melitus adalah penyakit metabolik yang ditandai dengan
hiperglikemia kronis, dan kejadian global meningkat setiap tahunnya
[1]. Diabetes melitus tipe 2 dapat menyebabkan komplikasi seperti
beranda jurnal
penyakit kardiovaskular, penyakit serebrovaskular, nefropati diabetik,
reti
nopati diabetik, dan kaki diabetik [2]. Disfungsi barier usus
merupakan fokus utama penelitian di bidang kedokteran klinis, dan
erat kaitannya dengan penyakit seperti penyakit radang usus, diabetes
melitus dan gangguan mikrobiota usus [3–5]. Ketika keseimbangan
mikroba usus rusak, penghalang biologis usus terganggu.
Gangguan mikroba usus jangka panjang akan menyebabkan
peradangan tingkat rendah kronis jangka panjang dalam
tubuh,pankreas rusak βdan resistensi insulin terganggu, yang pada
akhirnya menyebabkan terjadinya diabetes melitus. Banyak penelitian
telah menunjukkan bahwa mikroba usus memainkan peran penting
dalam perkembangan diabetes mellitus [6,7]. Nadja dkk. menemukan
bahwa Firmicutes dan Clostridia pada pasien dengan diabetes tipe 2
berkurang secara signifikan dibandingkan dengan orang sehat,
sedangkan kelimpahan bakteri patogen seperti Proteobacteria dan Bac
teroidetes meningkat secara signifikan [8]. Oleh karena itu,
perlindungan integritas penghalang usus adalah salah satu cara untuk
secara efektif meringankan diabetes
biguanida, sulfonilurea, agonis glukagon-like peptide-1 receptor
(GLP-1R) dan dipeptidyl peptidase-4 (DPP-4) inhibitor) dan insulin
dalam suntikan. Selain ketidaknyamanan dan beban ekonomi bagi
karena relatif seringnya efek samping [9,10]. Oleh karena itu,
kebutuhan untuk menemukan dan mengembangkan pengobatan
antidiabetes alami baru dengan sedikit efek samping dan biaya rendah
sangatlah mendesak.
Inonotus obliquus adalah jamur obat berharga yang terutama
ditemukan di seluruh Cina Timur Laut. Penelitian sebelumnya
menunjukkan bahwa I. obliquus dapat menghambat kadar glukosa
darah mencit dengan hiperglikemia akibat aloksan [11]. Polisakarida
merupakan bahan aktif penting dari I. obliquus dan memiliki nilai obat
dan aktivitas biologis, seperti sifat hipoglikemik, hipolipidemik,
antitumor, dan antioksidan [12–15]. Polisakarida kasar pada I.
obliquus terbukti membalikkan berat badan abnormal dan kadar
glukosa darah puasa tikus model yang diinduksi diabetes dengan
streptozotocin (STZ) [16]. Selain itu, polisakarida yang dipisahkan dari
I. obliquus dengan pengendapan fraksional
dapat meningkatkan transportasi kolesterol di hati, sehingga
meningkatkan toleransi glukosa tikus dengan diabetes mellitus tipe 2
 * Penulis koresponden di: College of Plant Protection, Jilin Agricultural University, Changchun 130118, Jilin, Cina.
Alamat email: qiwang@jlau.edu.cn (Q. Wang).
https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2022.06.071
Diterima 24 Januari 2022; Diterima dalam bentuk revisi 5 Juni 2022; Diterima 10 Juni 2022
Tersedia online 15 Juni 2022
0141-8130/© 2022 Penulis. Diterbitkan oleh Elsevier BV Ini adalah artikel akses terbuka di bawah lisensi CC BY (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/).
L. Su et al.
diinduksi oleh diet tinggi lemak yang dikombinasikan dengan STZ
[11]. Namun, mekanisme aksi dasar polisakarida yang dimurnikan dari
I. obliquus pada disfungsi penghalang usus pada tikus dengan diabetes
mellitus tipe 2 masih belum diketahui.
Dalam penelitian ini, polisakarida homogen baru dimurnikan dari
I. obliquus (IN), dan model tikus diabetes tipe 2 yang diinduksi oleh
STZ dikombinasikan dengan diet tinggi lemak dibuat untuk
mengevaluasi aktivitas antidia betic IN. Penelitian ini juga menyelidiki
mekanisme metabolisme dari perspektif penghalang usus, memberikan
dasar eksperimental untuk pengembangan I. obliquus sebagai obat
hipoglikemik dan penurun lipid.
2. Bahan dan Metode
2.1. Bahan dan bahan kimia
I. obliquus dibeli dari Changchun Jianlong Biological Technology
Co., Ltd. Kit untuk hemoglobin terglikasi (HbA1C), kolesterol total
(TC), lipoprotein densitas rendah (LDL), trigliserida (TG), lipoprotein
densitas tinggi (HDL), asam lemak bebas (FFA), IgA, IL-6 dan TNF-α
dibeli dari Perusahaan Immunoassay Enzim Wuhan. Obat dan reagen
lain bersifat analitik.
2.2. Pembuatan polisakarida IN
I. obliquus diekstraksi dengan air ultra murni (1:40 b/v) pada 80 ◦C
selama 2 jam dan kemudian diendapkan dengan etanol. Setelah depro
teinisasi dengan metode Sevag dan dialisis, polisakarida mentah
diperoleh. Polisakarida mentah dimurnikan dengan DEAE-52 dan
Sephadex G-200 dan dikeringkan beku, dan polisakarida homogen (IN)
diperoleh.
2.3. Analisis sifat fisikokimia IN
Kromatografi permeasi gel kinerja tinggi (HPGPC-ELSD) digunakan
untuk menentukan berat molekul IN. Secara singkat, sampel disaring
melalui membran filter fase air 0,22 μm. Kondisi kromatografi:
Detektor hamburan cahaya evaporatif Agilent 1260 Infinity ELSD,
kolom TSK-gel G-3000PWXL (7,8 × 300 mm), volume injeksi 10 μL, air
suling sebagai fase gerak, laju aliran 0,6 mL/menit, dan suhu kolom 35
◦
C [17].
Komposisi monosakarida dianalisis dengan kromatografi penukar
ion. Kondisi kromatografi: Kolom: Dionex™ Car boPac™ PA20. Fase
gerak: Fase A: ddH2O, Fase B: 200 mM NaOH, Fase C: 200 mM
NaOH/500 mM NaAC. Laju aliran: 0,5 mL / mnt.
International Journal of Biological Macromolecules 214 (2022) 312–323
Sebanyak 1,5 mg IN dan 190 mg KBr dicampur secara merata dan
ditekan menjadi serpihan transparan untuk analisis Fourier transform
infrared spec trometer (FT-IR) oleh spektrometer FT-IR (Equinx55,
Brucher, Jerman) [18].
2.4. Eksperimen hewan
2.4.1. Prosedur eksperimental
Delapan puluh tikus Kunming tingkat spesifik-patogen-bebas (SPF)
jantan (18-22 g) dibeli dari Liaoning Changsheng Biotechnology Co.,
Ltd. (nomor lisensi: SCXK (Liao) 2015-0001). Eksperimen hewan
dilakukan di bawah pengawasan Komite Etika Hewan Eksperimental
Universitas Pertanian Jilin, yang mematuhi undang-undang
kesejahteraan hewan China.
Setelah satu minggu aklimatisasi, prosedur percobaan hewan
dilakukan sesuai dengan Gambar. 1. Secara singkat, tikus dibagi secara
acak menjadi 6 kelompok, yaitu kelompok kontrol normal (NC),
kelompok kontrol model (MC), kelompok kontrol positif (PC),
kelompok 150 mg/mL IN (kelompok LIN), 300 mg/mL IN kelompok
(kelompok MIN), dan kelompok 600 mg/mL (kelompok HIN) (n = 8).
Kecuali untuk kelompok NC, diet tinggi lemak diberikan kepada semua
kelompok lain selama seluruh proses, STZ 120 mg/kg diberikan secara
intraperitoneal setelah 4 minggu pemberian makan, dan 1 mL larutan
glukosa 50% diberikan segera melalui gavage. Setelah 3 hari, model
mencit diabetes melitus berhasil dibentuk ketika glukosa darah puasa
mencit ≥11,1 mol/L. Semua kelompok diberi makan selama 5 minggu.
Berat badan, asupan air dan asupan makanan mencit dicatat setiap
minggu. Tikus dikorbankan 12 jam setelah gavage terakhir. Darah
mereka dikumpulkan dan disentrifugasi pada 2000 rpm/menit selama
10 menit, dan serum dan feses yang diperoleh disimpan pada suhu -80
◦ C.Sebagian dari jaringan usus halus yang terkumpul difiksasi dalam
paraformaldehyde 4%, sementara sebagian lainnya juga disimpan.
pada −80 ◦ 2.4.2C.
. Analisis Toleransi Glukosa
Setelah gavage terakhir, tikus diberi glukosa 2 g/kg melalui gavage,
dan glukosa darah puasa diukur pada 30, 60, 90, dan 120 menit.
2.4.3. Penentuan metabolisme lipid darah dan faktor inflamasi Isi serum
TG, TC, HDL, LDL, HbA1C, FFA, IL-6, TNF-α, dan IgA ditentukan sesuai
dengan instruksi kit.
2.4.4. Analisis histopatologis dan imunohistokimia Bagian usus halus
yang difiksasi dalam paraformaldehyde 4% didehidrasi dengan alkohol
bertingkat dan xylene dan direndam dalam parafin. Sekitar 5 μm
bagian diwarnai dengan hematoxylin-eosin (H&E) dan diamati dengan
mikroskop optik (Zeiss-Image A3).
 Gambar 1. Proses percobaan hewan.
313
L. Su et al.
Tingkat ekspresi MUC2, Ki-67 dan ZO-1 dianalisis dengan
imunohistokimia menurut laporan sebelumnya [19].
2.4.5. RT-PCR kuantitatif (qRT-PCR)
Total RNA diekstraksi dari usus kecil, dan cDNA disintesis sesuai
dengan metode Xia et al. [20]. PCR waktu nyata dilakukan dengan
menggunakan primer yang tercantum dalam Tabel 1 untuk
mengevaluasi tingkat ekspresi MUC2, ZO-1 dan Ki-67 . β-aktin dipilih
sebagai kontrol internal. Menurut kurva qRT–PCR, diperoleh nilai Ct
(threshold cycle number) dari setiap gen, dan gen target dikuantifikasi
menggunakan metode 2ΔΔCt −ΔΔCt = (Cttarget −
Ctactin)sample − (Cttarget − Ctaktin)kontrol).
2.4.6. Analisis mikrobiota usus
DNA genom total diekstraksi dari isi caecum menggunakan
FastDNA spin kit.V3–V4 dari 16S rDNA dipilih untuk amplifikasi dan
diurutkan melalui sistem Illumina MiSeq oleh Shanghai Majorbio
Biopharm Technology Co., Ltd.
2.5. Analisis statistik
Hasil dinyatakan sebagai mean ± (standard error of mean (SEM))
dan dianalisis dengan SPSS (26.0). Analisis varians (ANOVA)
digunakan untuk mengevaluasi signifikansi setiap parameter, dan P <
0,05 dianggap signifikan secara statistik, sedangkan P < 0,01 dianggap
sangat signifikan secara statistik. Perangkat lunak GraphPad Prism 8
dan Origin 2017 digunakan untuk pemrosesan data selanjutnya.
3. Hasil dan Pembahasan
3.1. Karakterisasi IN
Diagram pemurnian IN oleh DEAE-52 dan Sephadex G-100
masing-masing ditunjukkan pada Gambar 2A dan B. Polisakarida akhir
yang dielusi dengan 0,1 mol/L NaCl dipilih untuk percobaan
selanjutnya dan diberi nama I. polisakarida obliquus (IN). Berat
molekul IN adalah 373 kDa, seperti yang ditunjukkan pada Gambar.
2C. Analisis komposisi monosakarida mengungkapkan bahwa IN
terutama terdiri dari manosa (Man 14,19%), rhamnose (Rha 6,46%),
asam glukuronat (GlcA 3,76%), xilosa (Xil 9,07%), arabinosa (Ara
3,84%), fukosa (Fuc 2,98%), asam galakturonat (GalA 9,15%), glukosa
(Glc 29,85%) dan galaktosa (Gal 20,70%) ( Gbr. 2D). IN menunjukkan
perbedaan besar dalam komposisi monosakarida dan berat molekul
dari I. obliquus polisakaridaZhang dkk. melaporkan bahwa AIOPA
terdiri dari Rha, Xyl, Man, Gal, Glc dan GalA dalam rasio molar
3,09:1,61:2,06:4,45:19,7:1 dengan berat molekul 6,3 kDa [21 ]. TIO
polisakarida mentah dari I. obliquus, terdiri dari Glu, Rha, Rib, GlcA,
dan GalA dengan rasio 85,2:3,91:1,73:2,14:1 dengan berat molekul
42,28 kDa, menunjukkan penurunan lipid dan in vivo vitro
inefek [22]. Komposisi monosakarida polisakarida juga mempengaruhi
bioaktivitas polisakarida. Sebuah studi struktur-aktivitas hipoglikemik
Grifola frondosa polisakarida menemukan bahwa hampir semua
polisakarida hipoglikemik aktif mengandung glukosa, dan hanya
polisakarida aktif F3 yang terdiri dari Rib, Ara dan Xyl [23]. Aktivitas
in vitro α-glukosidase dan αdari I. obliquus berkorelasi negatif dengan
kandungan Xyl mereka [24]. Namun, kekurangan Fru pada Rosa
roxburghii meningkatkan efeknya pada α-glukosidase. Namun,
polisakarida
Tabel 1
Urutan primer yang digunakan untuk qRT-PCR.
Genes Forward (5′ to 3′) Reverse (5′ to 3′)
MUC2 ATGCCCACCTCCTCAAAGAC GTAGTTTCCGTTGGAACAGTGAA ZO-1
GCCGCTAAGAGCACAGCAA TCCCCACTCTGAAAATGAGGA Ki-67
ATCATTGACCGCTCCTTTAGGT GCTCGCCTTGATGGTTCCT β-Actin
GTGACGTTGACATCCGTAAAGA GCCGGACTCATCGTACTCC
International Journal of Biological Macromolecules 214 (2022) 312–323
composed of other sumber, seperti Xyl dan Fru, mungkin tidak
mengurangi aktivitas hipoglikemik [14]. Selain itu, berat molekul IN
adalah 373 kDa, yang jauh lebih besar daripada I. obliquus
polisakaridaHu dkk. melaporkan bahwa kemampuan pseudostellariae
Radix dengan berat molekul 52–210 kDa untuk menurunkan glukosa
darah pada tikus diabetes mirip dengan metformin, tetapi efek
pseudostellariae Radix dengan berat molekul kecil kurang baik [25],
yang mungkin terkait dengan ketidakmampuan polisakarida dengan
berat molekul rendah untuk membentuk struktur polimer polisakarida
aktif.dengan berat molekul tinggi I. obliquus yang dievaluasi dalam
penelitian ini mungkin juga memiliki aktivitas hipoglikemik yang baik.
Spektrum inframerah Fourier ditunjukkan pada Gambar 2E. Terjadi
vibrasi ulur –OH pada panjang gelombang 3400 cm− 1, vibrasi ulur
−1
akibat C–H pada 2900 cm , dan vibrasi ulur akibat C––O pada 1600
− 1
cm . Terdapat vibrasi ulur lainnya yang disebabkan oleh C–H pada
1400 cm− 1, dan puncak serapan karakteristik pada 1000 cm− 1
merupakan vibrasi ulur yang disebabkan oleh C–O–C. Singkatnya, IN
diduga sebagai α- polisakarida piranosa.
3.2. Pengaruh IN terhadap berat badan, air minum dan asupan makanan
Penderita diabetes memiliki karakteristik peningkatan asupan
makanan dan asupan air serta penurunan berat badan. Penurunan
berat badan adalah masalah serius yang mempengaruhi pasien dengan
diabetes [26]. Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 3A–C, kelompok
NC memiliki asupan makanan dan air yang normal, dan berat badan
mereka menunjukkan tren kenaikan, tetapi empat kelompok lainnya
menunjukkan tren penurunan. Setelah lima minggu perlakuan gavage,
berat badan mencit kelompok MC berkurang 7,6% dibandingkan
dengan kelompok NC, berat badan kelompok PC berkurang 4,7%,
berat badan kelompok LIN berkurang berkurang 7,3%, dan berat
badan kelompok HIN berkurang 5,6%. Metformin adalah obat yang
bekerja cepat untuk pengobatan diabetes melitus, tetapi memiliki
toksisitas dan efek samping yang tinggi, yang diwujudkan dalam
penurunan berat badan yang stabil pada kelompok PC. Tidak ada
perbedaan berat badan yang jelas pada kelompok IN yang berbeda
pada minggu keempat dan kelima. Sedangkan asupan air minum
menunjukkan tren peningkatan kecuali untuk kelompok NC, asupan air
berkurang pada semua kelompok IN. Hasil di atas menunjukkan bahwa
IN dapat secara efektif meredakan polidipsia, polifagia, dan penurunan
berat badan yang disebabkan oleh
diet tinggi lemak dan diabetes melitus tipe 2 yang diinduksi STZ pada
tikus, yang konsisten dengan hasil polisakarida biji Coix [20].
Gangguan metabolisme lipid dan glukosa merupakan faktor yang
berkontribusi terhadap penurunan berat badan yang progresif pada
diabetes [27]. Oleh karena itu, pekerjaan tindak lanjut akan
mengevaluasi efek pengaturan IN pada glukosa darah dan lipid darah
pada tikus dengan diabetes tipe 2.
3.3. Efek IN terhadap perubahan glukosa darah puasa dan toleransi
glukosa oral pada tikus
314
315
2
Disglikemia adalah serangkaian kompleks reaksi glukosa yang pada
akhirnya mengarah pada ikatan silang protein, menyebabkan dinding
pembuluh darah dan pengerasan jaringan ikat, terutama di antara
orang dengan asupan tinggi karbohidrat olahan [11]. Oleh karena itu,
kontrol glukosa darah sangat penting untuk diabetes mellitus [28].
Perubahan glukosa darah puasa
tikus diabetes selama periode pemberian ditunjukkan pada Gambar.
3D. Setelah 5 minggu pemberian IN, glukosa darah kelompok HIN
berkurang 6,4 mmol/L; dibandingkan dengan tikus diabetes kontrol,
pemberian IN 600 mg/kg oral mengurangi glukosa serum sebesar 26%
pada tikus, dan aktivitas hipoglikemik lebih baik daripada IOPS [11].
Kadar glukosa darah kelompok LIN, kelompok MIN dan kelompok PC
berturut-turut adalah 2,2 mmol/L, 4,3 mmol/L dan 3,8 mmol/L
dibandingkan kelompok MC. Perlakuan diet dengan A. muciniphila
telah terbukti meningkatkan kadar glukosa darah puasa dan resistensi
insulin tikus obesitas [9]. Hasil ini menggambarkan bahwa efek
hipoglikemik IN tergantung pada dosis.
Hasil tes toleransi glukosa oral ditunjukkan pada Gambar 3E. The
-

da
h

(
edir

_
_

hc
c

lo
p

i
lb
o

tidak

ada

i
lb
o

et

al

_
o

di
r

hc
c

lo
p

la
n

r
e

hC
.

gi

la
n

dir
_

hc
c

so

th

al
u

lo

dir
_

hc
c

lo
p
316
o

l
t

fi

saya

a
r

do
o
l

b
t

af

_
)

lakukan
b
)

d
)

at

do
f

_
)

(
e

tidak

ff

gi

)5
0
.

<

(
s

a
 se
fi
t
n
fii
ng
fi
li
<
(
s
L. Su et al.
glukosa darah dari masing-masing kelompok tikus naik ke tertinggi
pada 30 menit. Pada 120 menit, glukosa darah kelompok gavage
menurun. Kadar glukosa darah pada kelompok HIN kembali ke tingkat
awal, sedangkan pada kelompok MC tetap pada tingkat yang lebih
tinggi. AUC masing-masing kelompok diabetes melitus secara
signifikan lebih tinggi daripada kelompok NC, AUC masing-masing
kelompok gavage berkurang dan berbeda secara signifikan dengan
kelompok MC. AUC dari kelompok IN, yang mirip dengan pengobatan
polisakarida dari Grifola frondosa (GFP-N), menunjukkan
kecenderungan penurunan secara bertahap dengan peningkatan dosis
(Gambar 3F) [29].
3.4. Efek IN terhadap metabolisme lipid darah pada mencit
Diabetes melitus erat kaitannya dengan terjadinya gangguan
metabolisme lipid dalam tubuh [30]. Seperti ditunjukkan pada Gambar
4A–D, IN tidak hanya efektif menurunkan kadar TC, TG, dan LDL
tetapi juga meningkatkan kadar HDL pada tikus diabetes. Kelompok
HIN menunjukkan penurunan kadar HbA1C dan FFA yang signifikan,
dengan demikian, dosis IN ini dapat meringankan kerusakan yang
disebabkan oleh diabetes mellitus (Gbr. 4E dan F). Hasil ini sesuai
dengan penelitian sebelumnya yang menunjukkan bahwa Cyclo carya
paliurus dapat menurunkan kadar TGs, TC dan peradangan pada tikus
yang diinduksi diabetes dengan diet tinggi lemak yang dikombinasikan
dengan STZ [27]. Momordica charantia L. polysaccharides dapat
memperbaiki gangguan metabolisme lipid dari tikus diabetes yang
diinduksi STZ dengan secara signifikan mengurangi kadar LDL serum,
meningkatkan kadar HDL, dan memperbaiki gejala hiperglikemia [31].
Schisandra chinensis dapat mengobati diabetes mellitus dengan
mengurangi kadar TG, TC, dan FFA serum pada tikus yang resistan
terhadap insulin [24]. IN dapat mengatur metabolisme lipid dengan
mengurangi LDL, TGs, dan TC dalam serum, yang mungkin menjadi
salah satu faktor yang mengurangi terjadinya diabetes melitus tipe 2,
sesuai dengan laporan literatur [32 ].
3.5. Efek IN pada penghalang usus pada tikus diabetes
T2DM adalah penyakit peradangan kronis tingkat rendah, oleh
karena itu, banyak faktor yang terkait dengan peradangan mungkin
terkait dengan timbulnya T2DM, seperti gangguan flora usus,
kerusakan penghalang usus, dan perubahan hormon usus. [33,34].
Penghalang usus terutama terdiri dari
International Journal of Biological Macromolecules 214 (2022) 312–323
dari penghalang mekanis, kimia, imunologi dan biologis [28].
Disfungsi penghalang usus yang disebabkan oleh asupan terus menerus
dari diet tinggi lemak merupakan link penting dalam pengembangan
T2DM [35].
3.5.1. Efek IN pada penghalang kekebalan usus pada tikus diabetes IgA
didistribusikan pada permukaan selaput lendir tubuh untuk
meningkatkan kekebalan lokal tubuh [36]. Namun, pelepasan faktor
peradangan yang berlebihan dapat menyebabkan ketidakseimbangan
sistem kekebalan tubuh. Dengan demikian, kadar IgA serum pada
kelompok MC meningkat secara signifikan dibandingkan dengan
kelompok NC, yang sejalan dengan laporan bahwa kekurangan IgA
dapat meningkatkan pertumbuhan bakteri anaerob yang berlebihan,
sehingga merusak stabilitas flora usus [37 ]. Namun demikian,
 kelompok yang menerima IN menunjukkan penurunan kadar IgA
serum yang signifikan dibandingkan dengan kelompok MC (Gbr. 5A).
Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 5B, kadar TNF-α pada
kelompok MC meningkat secara signifikan dibandingkan dengan
kelompok NC, sementara masing-masing kelompok IN menunjukkan
derajat penurunan yang berbeda dibandingkan dengan kelompok
MC.serum tertinggiα dibandingkan dengan kelompok PC, LIN dan
MIN. Level serum IL-6 memiliki kecenderungan yang sama dengan
level TNF-α (Gbr. 5C). Ketiga kelompok IN semuanya menunjukkan
penurunan kadar serum IL-6 secara signifikan dibandingkan dengan
kelompok MC. Dengan demikian, IN dapat menunjukkan efek
hipoglikemik dengan melindungi penghalang kekebalan usus.
diabetes
Untuk menilai efek IN pada struktur histologis usus kecil pada tikus
diabetes,&dilakukan pewarnaan Gambar 6 menunjukkan bahwa semua
lapisan jaringan utuh pada kelompok NC. Namun, pada kelompok MC,
struktur histologis usus halusnya hancur. Dibandingkan dengan
kelompok MC, kelompok HIN menunjukkan struktur histologis usus
kecil yang lebih baik, termasuk peningkatan panjang vili usus pada
irisan jaringan usus, sel Paneth yang tertata rapi dari kelenjar usus
kecil, dan sepenuhnya menghilangkan infiltrasi sel inflamasi.
Singkatnya, IN dapat meningkatkan
penghalang mekanis testinal pada tikus diabetes.
Tingkat ekspresi Ki-67, ZO-1, dan MUC2 di usus adalah

3.5.2. Efek IN pada penghalang mekanis dan kimia usus pada tikus

Gambar. 4. Efek IN pada serum (A) TC, (B) TG, (C) LDL, (D) HDL, (E ) HbA1C dan (F) FFA tikus. Huruf kecil yang berbeda menunjukkan signifikansi statistik (p <
0,05).

317
L. Su et al. International Journal of Biological Macromolecules 214 (2022) 312–323
 Gambar 5. Efek IN pada sitokin serum (A) IgA, (B) TNF-α dan (C) IL-6 pada tikus. Huruf kecil yang berbeda menunjukkan signifikansi statistik (p < 0,05).

Gambar 6. Analisis histologis usus kecil pada tikus dengan pewarnaan hematoxylin-eosin (200×/400×).

dievaluasi pada tingkat transkripsi dan protein, seperti yang
ditunjukkan pada Gambar. 7. Dibandingkan dengan kelompok MC,
tingkat ekspresi gen Ki -67, ZO-1, dan MUC2 pada kelompok NC
meningkat secara signifikan, dan pada kelompok IN juga meningkat
secara signifikan
tergantung dosis. Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 8A–C, tingkat
ekspresi ketiga protein ini lebih tinggi pada kelompok NC, tetapi tidak
diekspresikan pada kelompok MC, yang sejalan dengan hasil untuk So
matostatin dan Astragaloside IV [38 , 39]. Memang, IN secara
signifikan meningkatkan level ekspresi protein ini, yang konsisten
dengan level ekspresi gen, menunjukkan peran IN yang
menguntungkan dalam hambatan mekanik dan kimia usus pada tingkat
molekuler.
3.5.3. Efek IN pada penghalang biologis pada tikus diabetes Seperti yang
ditunjukkan pada Gambar. 9, kurva keragaman cenderung datar,
menunjukkan bahwa data pengurutan sampel dalam penelitian ini
dapat diandalkan, dan jumlah dan kedalaman data pengurutan
memenuhi persyaratan. . Keanekaragaman alfa dianalisis, dan hasilnya
menunjukkan bahwa indeks Chao, indeks Ace, dan indeks Shannon
adalah yang tertinggi pada kelompok PC dan terendah pada kelompok
MC, diikuti oleh kelompok IN, dengan cara yang bergantung pada
dosis terbalik (Tabel 2). Hasil ini menunjukkan bahwa mikrobiota usus
pada kelompok MC terganggu. Indeks kekayaan dan keragaman spesies
mengungkapkan tren penurunan dengan peningkatan dosis IN,
menunjukkan bahwa IN meningkatkan kelimpahan mikrobiota usus
tikus diabetes. Namun, indeks pada kelompok PC lebih rendah
dibandingkan kelompok lain, menunjukkan bahwa metformin
menurunkan darah
. Gambar 7. Tingkat ekspresi mRNA dari (A) Ki-67, (B) ZO-1 dan (C) MUC2 saluran usus tikus diabetes. Huruf kecil yang berbeda menunjukkan signifikansi
statistik (p < 0,05).

318
L. Su et al.
International Journal of Biological Macromolecules 214 (2022) 312–323
 ZO-1 dan (C) MUC2.

Gambar 8. Analisis imunohistokimia usus mencit (200×/400×). (A) Ki-67, (B)

319
L. Su et al. Tabel 2 kelompok IN pada komposisi mikrobiota usus, hal ini menunjukkan
bahwa metformin dan IN dapat meringankan diabetes mellitus
melalui mikrobiota usus yang berbeda.
Analisis tingkat filum taksonomi menunjukkan bahwa mikrobiota
usus terutama terdiri dari Bacteroidetes dan Firmicutes (Gbr. 10C).
Kelimpahan Firmicutes dan Bacteroidetes dapat mencerminkan
komposisi mikrobiota usus. Ada korelasi positif dan signifikan
antara rasio Bacteroidetes terhadap Firmicutes dan toleransi glukosa
[41]. Rasio Firmicutes terhadap Bacteroidetes menurun pada kelompok
MC dibandingkan dengan pada kelompok CON tetapi diselamatkan
pada kelompok PC, LIN dan HIN, yang konsisten dengan laporan
sebelumnya [42]. Namun, rasio Firmicutes terhadap Bacteroidetes pada
kelompok MIN lebih rendah daripada pada kelompok MC, dan
Bacteroidetes berkurang, yang konsisten dengan laporan sebelumnya
yang menunjukkan peningkatan Bacteroidetes dan penurunan
Firmicutes dalam mikrobiota usus pasien dengan T1DM. dibandingkan
dengan kontrol [43–45]. Demikian pula, Bacteroides sp. ditemukan
lebih banyak daripada Firmicutes pada pasien
dengan diabetes menurut Fugmann et al. [46]. Nadja dkk. juga
menemukan bahwa Firmicutes dan Clostridia berkurang secara
signifikan pada pasien dengan diabetes tipe 2 dibandingkan dengan
individu sehat, sedangkan kelimpahan bakteri patogen seperti
Proteobacteria dan Bacter
oidetes meningkat secara signifikan [47]. Selain itu, jumlah tarian
relatif meningkat pada kelompok MIN dan menurun hingga hampir
nol pada
tikus untuk memainkan peran aktif pada tikus T2DM.
Dibandingkan dengan kelompok MC, kelompok PC menunjukkan
Jurnal Internasional Makromolekul Biologis 214 (2022) 312–323 peningkatan yang signifikan dalam kelimpahan filum Proteobacteria,
yang dapat menyebabkan penyakit hati [48]. Hasil ini konsisten
dengan efek samping metformin dalam pengobatan diabetes melitus.
Pada tingkat genus mikrobiota usus, kelimpahan relatif Bacteroides,
Alistipes, Parabacteroides, Faecalibaculum, dan Romboutsla meningkat
dan kelimpahan Akkermansia dan Lactobacillus menurun pada
kelompok MC. Setelah pemberian IN, kelimpahan relatif
Parabacteroides dan Bacteroides pada masing-masing kelompok
berkurang dibandingkan dengan kelompok MC. Ketika glukosa darah
meningkat, kelimpahan Bacteroides juga akan meningkat secara
signifikan, yang menyebabkan gangguan kekebalan dan infeksi
endogen [49]. Akkermansia adalah bakteri pendegradasi musin yang
berhubungan negatif dengan diabetes melitus dan inflamasi [50].
Selain itu, kelimpahan Lactobacillus pada pasien dengan diabetes
berkurang secara signifikan [51]. Mengurangi kelimpahan Lacto
bacillus dapat mengurangi obesitas pada tikus obesitas yang diinduksi
diet tinggi lemak [52]. Selanjutnya, pengurangan Lactobacillus akan
menyebabkan peningkatan permeabilitas usus [53], yang mungkin
menjadi alasan efek perlindungan pada penghalang mekanik usus.
Metformin dan dosis IN yang berbeda meningkatkan kadar
Akkermansia dan Lactobacillus, yang serupa dengan polisakarida
bawang putih [54]. Namun, dibandingkan dengan kelompok IN,
Gambar 9. Analisis keragaman alfa mikrobiota usus. (A) Kurva Shannon dan (B) Escherichia-Shigella, patogen mamalia umum, terdeteksi pada kelompok
PC [55]. Temuan ini menunjukkan bahwa metformin dapat
Kurva Simpson. kelompok MC dan MIN. Oleh karena itu, Verrucomicrobia menyebabkan efek toksik dalam menurunkan glukosa darah (Gbr.
10D). Perbedaan antar sampel yang divisualisasikan dengan heatmap
dapat menggantikan Fir menunjukkan bahwa kelompok HIN memiliki kesamaan paling tinggi
dengan kelompok NC, menunjukkan bahwa IN dosis tinggi dapat
memperbaiki mikrobiota usus mencit diabetes serta meringankan
Alpha dari spesies sampel.
gejala diabetes melitus hingga mendekati normal.Gambar 10E).
Sampel/Estimator Shannon Ace Chao Singkatnya, mirip dengan probiotik seperti inulin, polidekstrosa,
NC 4.28 356.22 361.37 MC 3.77 352.96 359.00 PC 3.47 276.81 272.80 Lin 4.30 polisakarida bawang putih dan komune Nostoc polisakarida
348.39 358.14 Min 342.34 351.45 Hin 3.89 327.02.90 342.34 351.45 Hin 3,89 Akkermansia dan Lactobacillus, dan mengurangi kelimpahan bakteri
327.02.02.90 336.34 351.45 Hin 3.89 327.02.02.02.02.27.02.90.34 patogen, seperti Parabacteroides dan Bacter odes [56,57]. Efek
pengaturan IN pada gangguan metabolisme lipid pada tikus diabetes
351,45 mungkin juga terkait dengan efek peningkatan penghalang ususnya,
Keragaman beta mewakili perbedaan antara kelompok sampel sehingga menunjukkan prospek aplikasinya sebagai prebiotik.
[40]. Gambar 10A menunjukkan bahwa pengelompokan mikrobiota
usus pada tikus diabetes secara signifikan berbeda dari kelompok NC, 4. Conclusion
dan IN secara signifikan mengubah komposisi mikrobiota usus
dibandingkan dengan tikus diabetes. Dari PCA, dengan peningkatan In conclusion, diabetes mellitus might be related to the over
dosis IN, jarak antara kelompok IN dan kelompok MC meningkat (Gbr. production of proinflammatory cytokines and intestinal barrier
10B). Selain itu, terdapat perbedaan antara kelompok PC dan

320
L. Su et al. International Journal of Biological Macromolecules 214 (2022) 312–323
Fig. 10. In regulates the changes of intestinal microbiota induced by diabetes. (A) Hierarchical clustering, (B) principal co-ordinates analysis, (C) the relative
abundance of intestinal microbiota community at the phylum level, (D) the relative abundance of intestinal microbiota community at the genus level and (E)
heatmap diagram.
IgA immunoglobulin A
penyelewengan fungsi. As expected, IN protected against diabetes LDL low-density lipoprotein
mellitus by ameliorating intestinal barrier dysfunction. IN also IL-6 interleukin-6
suppressed the pro duction of proinflammatory cytokines, enhanced TC total cholesterol
the function of the intestinal mucosal mechanical barrier, promoted the TGs triglycerides
proliferation of beneficial bacteria and reduced the abundance of TNF-α tumour necrosis factor-alpha
pathogenic bacteria, thereby ameliorating diabetes mellitus. Therefore,
IN could be regarded as a novel candidate for type 2 diabetes mellitus CRediT authorship contribution statement
treatment.
Ling Su: Conceptualization, Formal analysis, Investigation, Writing
Abbreviations – original draft, Visualization, Data curation. Chuanxin Xin: Method
ology, Writing – review & editing. Jintao Yang: Software. Liran
FFAs free fatty acids Dong: Software. Heriban Mei: Writing – review & editing. Xiaojing
FT-IR Fourier transform infrared spectrometer Dai: Writing – review & editing. Qi Wang: Validation, Resources,
HbA1C glycated haemoglobin Writing – review & editing, Supervision.
HDL high-density lipoprotein

321
L. Su et al. respect to the work described in this manuscript.

Declaration of competing interest Acknowledgements

The authors confirm that they have no conflicts of interest with This work was supported by the Agriculture Research System of
China [CARS20-08B], the China Postdoctoral Science Foundation
[2016M600237], and the Jilin Provincial Department of Education
“13th Five-Year Plan” Science and Technology Project
[JJKH20180686KJ].
References
[1] L. Guariguata, DR Whiting, I. Hambleton, J. Beagley, U. Linnenkamp, JE Shaw,
Global estimates of diabetes prevalence for 2013 and projections for 2035,
Diabetes Res. Klinik. Praktek. 103 (2014) 137–149, https://doi.org/10.1016/j.
diabres.2013.11.002.
[2] C. Njume, O. Donkor, AJ Mcainch, Predisposing factors of type 2 diabetes mellitus
and the potential protective role of native plants with functional properties, J. Funct.
Foods 53 (2019) 115–124, https://doi.org/10.1016/j.jff.2018.12.001.
[3] AJ Macpherson, MB Geuking, E. Slack, S. Hapfelmeier, KD Mccoy, The habitat,
double life, citizenship, and forgetfulness of IgA, Immunol. Rev. 245 (2012)
132–146, https://doi.org/10.1111/j.1600-065X.2011.01072.x.
[4] PD Cani, AM Neyrinck, F. Fava, C. Knauf, RG Burcelin, KM Tuohy, GR Gibson, NM
Delzenne, Selective increases of bifidobacteria in gut microflora improve
high-fat-diet-induced diabetes in mice through a mechanism associated with
endotoxaemia, Diabetologia 50 (2007) 2374–2383, https://doi.org/10.1007/
s00125-007-0791-0.
[5] J. Yan, Q. Chen, L. Tian, K. Li, W. Lai, L. Bian, J. Han, R. Jia, X. Liu, Z. Xi,
Intestinal toxicity of micro- and nano-particles of foodborne titanium dioxide in
juvenile mice: disorders of gut microbiota-host co-metabolites and intestinal
barrier damage, Sci. Lingkungan Total. 821 (2022), 153279,
https://doi.org/10.1016/j. scitotenv.2022.153279.
[6] F. B¨ackhed, JK Manchester, CF Semenkovich, JI Gordon, Mechanisms
underlying the resistance to diet-induced obesity in germ-free mice, Proc. Natl.
Acad. Sains. USA 104 (2007) 979–984, https://doi.org/10.1073/
pnas.0605374104.
[7] JB Mcphee, JD Schertzer, Immunometabolism of obesity and diabetes:
microbiota link compartmentalized immunity in the gut to metabolic tissue
inflammation, Clin. Sains. 129 (2015) 1083–1096, https://doi.org/10.1042/
CS20150431.
[8] N. Larsen, FK Vogensen, FW van den Berg, DS Nielsen, AS Andreasen, BK
Pedersen, WA Al-Soud, SJ Sorensen, LH Hansen, M. Jakobsen, Gut microbiota in
human adults with type 2 diabetes differs from non-diabetic adults, PLoS One 5
(2010), e9085, https://doi.org/10.1371/journal.pone.0009085.
[9] Y. Terauchi, A. Ozaki, X. Zhao, C. Teoh, D. Jaffe, Y. Tajima, Y. Shuto, Humanistic
and economic burden of cardiovascular disease related comorbidities and
hypoglycaemia among patients with type 2 diabetes in Japan, Diabetes Res. Klinik.
Praktek. 149 (2019) 115–125, https://doi.org/10.1016/j.diabres.2019.01.019.
[10] E. Lazzaroni, M. Ben Nasr, C. Loretelli, I. Pastore, L. Plebani, ME Lunati, L.
Vallone, AM Bolla, A. Rossi, L. Montefusco, E. Ippolito, C. Berra, FD Addio, GV
Zuccotti, P. Fiorina, Anti-diabetic drugs and weight loss in patients with type 2
diabetes, Pharmacol. Res. 171 (2021), 105782, https://doi.org/10.1016/j.
phrs.2021.105782.
[11] J. Wang, C. Wang, S. Li, W. Li, G. Yuan, Y. Pan, H. Chen, Anti-diabetic effects of
inonotus obliquus polysaccharides in streptozotocin-induced type 2 diabetic mice
and potential mechanism via PI3K-akt signal pathway, Biomed. Apoteker. 95
(2017) 1669–1677, https://doi.org/10.1016/j.biopha.2017.09.104.
[12] S. Jiang, F. Shi, H. Lin, Y. Ying, L. Luo, D. Huang, Z. Luo, Inonotus obliquus
polysaccharides induces apoptosis of lung cancer cells and alters energy
metabolism via the LKB1/AMPK axis, Int. J.Biol. Makromol. 151 (2020)
1277–1286, https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2019.10.174.
[13] Y. Han, S. Nan, J. Fan, Q. Chen, Y. Zhang, Inonotus obliquus polysaccharides
protect against Alzheimer's disease by regulating Nrf2 signaling and exerting
antioxidative and antiapoptotic effects, Int. J.Biol. Makromol. 131 (2019)
769–778, https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2019. 03.033.
[14] C. Wang, W. Li, Z. Chen, X. Gao, G. Yuan, Y. Pan, H. Chen, Effects of simulated
gastrointestinal digestion in vitro on the chemical properties, antioxidant activity,
α-amylase and α-glucosidase inhibitory activity of polysaccharides from inonotus
obliquus, Food Res. Int. 103 (2018) 280–288, https://doi.org/10.1016/j.
foodres.2017.10.058.
[15] Y. Lu, Y. Jia, Z. Xue, N. Li, J. Liu, H. Chen, Recent developments in inonotus
obliquus (Chaga mushroom) polysaccharides: isolationstructural characteristics,
Biological Activities and Application, Polymers 13 (2021) 1441, https://doi.org/
10.3390/polym13091441.
[16] J. Wang, W. Hu, L. Li, X. Huang, Y. Liu, D. Wang, L. Teng, Antidiabetic activities of
polysaccharides separated from Inonotus obliquus via the modulation of oxidative
stress in mice with streptozotocin-induced diabetes, PLoS One 12 (2017),
e180476, https://doi.org/10.1371/journal.pone.0180476.
International Journal of Biological Macromolecules 214 (2022) 312–323
[17] C. Li, Z. Dong, B. Zhang, Q. Huang, G. Liu, X. Fu, Structural characterization and
immune enhancement activity of a novel polysaccharide from Moringa oleifera
leaves, Carbohydr. Polim. 234 (2020), 115897, https://doi.org/10.1016/j.
carbpol.2020.115897.
322
L. Su et al.
inflammasome signaling, Int. imunofarmaka. 78 (2020), 106066, https://doi.
org/10.1016/j.intimp.2019. 106066.
[40] W. Jiang, H. Zhu, W. Xu, C. Liu, B. Hu, Y. Guo, Y. Cheng, H. Qian, Echinacea
purpurea polysaccharide prepared by fractional precipitation prevents alcoholic
liver injury in mice by protecting the intestinal barrier and regulating liver-related
pathways, Int. J.Biol. Makromol. 187 (2021) 143–156, https://doi.org/10.1016/j.
ijbiomac.2021.07.095.
[41] J. Romano-Keeler, JH Weitkamp, DJ Moore, Regulatory properties of
[18] F. Huang, R. Hong, R. Zhang, Y. Yi, L. Dong, L. Liu, X. Jia, Y. Ma, M. Zhang,
Physicochemical and biological properties of longan pulp polysaccharides modified
by Lactobacillus fermentum fermentation, Int. J.Biol. Makromol. 125 (2019)
232–237, https://doi.org/10.1016/j. ijbiomac.2018.12.061.
[19] M. Bilal, A. Nawaz, T. Kado, MR Aslam, Y. Igarashi, A. Nishimura, Y. Watanabe, T.
Kuwano, J. Liu, H. Miwa, T. Era, K. Ikuta, J. Imura, K. Yagi, T. Nakagawa, S.
Fujisaka, K. Tobe, Fate of adipocyte progenitors during adipogenesis in mice fed a
high-fat diet, Mol. Metab. 54 (2021), 101328, https://doi.org/10.1016/j.
molmet.2021.101328.
[20] T. Xia, C. Liu, Y. Hu, Z. Luo, F. Chen, L. Yuan, X. Tan, Coix seed polysaccharides
alleviate type 2 diabetes mellitus via gut microbiota-derived short-chain fatty
acids activation of IGF1/PI3K/AKT signaling, Food Res. Int. 150 (PA) (2021)
110717–110726, https://doi.org/10.1016/j.foodres.2021.110717.
[21] L. Zhang, F. Cong, S. Liu, Z. Zang, L. Zhang, Chemical composition and antitumor
activity of polysaccharide from Inonotus obliquus, J. Med. Tanaman Res. 5 (2011)
323–329, https://doi.org/10.5897/JMPR.9000346.
[22] M. Yang, D. Hu, Z. Cui, H. Li, Y. Jiang, C. Man1, Lipid-lowering effects of Inonotus
obliquus polysaccharide in vivo and in vitro, Foods 3085 (2021) 1–17,
https://doi. org/10.3390/foods10123085.
[23] C. Xiao, Q. Wu, Y. Xie, J. Tan, JI Zhang, Hypoglycemic effects of Grifola frondosa
(Maitake) polysaccharides F2 and F3 through improvement of insulin resistance in
diabetic rats, Food Funct. 6 (2015) 3567–3575, https://doi.org/10.1039/
C5FO00497G.
[24] Z. Li, X. He, F. Liu, J. Wang, J. Feng, A review of polysaccharides from Schisandra
chinensis and schisandra sphenanthera: properties, functions and applications,
Carbohydr. Polim. 184 (2018) 178–190, https://doi.org/10.1016/j.
carbpol.2017.12.058.
[25] J. Hu, W. Pang, S. Bai, J. Chen, Z. Zheng, Hypoglycemic effect of polysaccharides
with different molecular weight of Pseudostellaria heterophylla, BMC Med. 13
(2013) 267, https://doi.org/10.1186/1472-6882-13-267.
[26] K. Khunti, M. Kosiborod, KK Ray, Legacy benefits of blood glucose, blood pressure
and lipid control in individuals with diabetes and cardiovascular disease: time to
overcome multifactorial therapeutic inertia? Diabetes Obes. Metab. 20 (2018)
1337–1341, https://doi.org/10.1111/dom.13243.
[27] J. Li, M. Luo, Z. Luo, A. Guo, X. Yang, M. Hu, Q. Zhang, Y. Zhu, Transcriptome
profiling reveals the anti-diabetic molecular mechanism of Cyclocarya paliurus
polysaccharides: anti-diabetic molecular mechanism of Cyclocarya paliurus
polysaccharides, J. Funct. Foods 55 (2019) 1–8, https://doi.org/10.1016/j.
jff.2018.12.039.
[28] Y. Gao, L. Meng, H. Liu, J. Wang, N. Zheng, The compromised intestinal barrier
induced by mycotoxins, Toxins 12 (2020) 619, https://doi.org/10.3390/
toxins12100619.
[29] Y. Chen, D. Liu, D. Wang, S. Lai, R. Zhong, Y. Liu, C. Yang, B. Liu, Moklesur
Rahman Sarker, C. Zhao, Hypoglycemic activity and gut microbiota regulation of a
novel polysaccharide from Grifola frondosa in type 2 diabetic mice, Food Chem.
Toksikol. 126 (2019) 295–302, https://doi.org/10.1016/j.fct.2019.02.034.
[30] M. Kosmidou, H. Milionis, Diabetes mellitus and non-alcoholic fatty liver disease:
the thread of Ariadne, Minerva Endocrinol. 42 (2017) 109–121, https://doi.org/
10.23736/s0391-1977.16. 02562-1.
[31] Q. Wang, X. Wu, F. Shi, Y. Liu, Comparison of antidiabetic effects of saponins and
polysaccharides from Momordica charantia L. in STZ-induced type 2 diabetic
mice, Biomed Pharmacother. 109 (2019) 744–750, https://doi.org/10.1016/j.
biopha.2018. 09.098.
[32] H. Zeng, P. Chen, Q. Chang, B. Zheng, Y. Zhang, Hypolipidemic effect of
polysaccharides from Fortunella margarita (Lour.) swingle in hyperlipidemic rats,
Food Chem. Toksikol. 132 (2019), 110663, https://doi.org/10.1016/j.
fct.2019.110663.
[33] DA Winer, H. Luck, S. Tsai, S. Winer, The intestinal immune system in obesity and
insulin resistance, Cell Metab. 23 (2016) 413–426, https://doi.org/10.1016/j.
cmet.2016.01.003.
[34] JM Wells, RJ Brummer, M. Derrien, TT MacDonald, F. Troost, PD Cani, V.
Theodorou, J. Dekker, A. M´eheust, WM de Vos, A. Mercenier, A. Nauta, CL
Garcia-Rodenas, Homeostasis of the gut barrier and potential biomarkers, Am. J.
Physiol. Pencernaan. Fisiol Hati. 312 (2017) G171–G193, https://doi.org/
10.1152/ajpgi.00048.2015.
[35] Y. Liu, Z. Xu, H. Huang, Y. Xue, D. Zhang, Y. Zhang, W. Li, X. Li, Fucoidan
ameliorates glucose metabolism by the improvement of intestinal barrier and
inflammatory damage in type 2 diabetic rats, Int. J.Biol. Makromol. 201 (2022)
616–629, https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2022.01.102.
[36] JJ Pestka, Deoxynivalenol-induced IgA production and IgA nephropathy-aberrant
mucosal immune response with systemic repercussions, Toxicol. Lett. 140–141 (2003)
287–295, https://doi.org/10.1016/S0378-4274(03)00024-9.
[37] K. Suzuki, B. Meek, Y. Doi, M. Muramatsu, T. Chiba, T. Honjo, S. Fagarasan,
Aberrant expansion of segmented filamentous bacteria in IgA-deficient gut, Proc.
Natl. Acad. Sains. USA 101 (2004) 1981–1986, https://doi.org/10.1073/
pnas.0307317101.
[38] X. Li, Q. Wang, H. Xu, L. Tao, J. Lu, L. Cai, C. Wang, Somatostatin regulates tight
junction proteins expression in colitis mice, Int. J.Clin. Exp. Patol. 7 (2014)
2153–2162, https://doi.org/10.7314/APJCP.2014.15.11.4733.
[39] S. Xie, T. Yang, Z. Wang, M. Li, L. Ding, X. Hu, L. Geng, Astragaloside IV
attenuates sepsis-induced intestinal barrier dysfunction via suppressing RhoA/NLRP3
theintestinal microbiome effecting the development and treatment of diabetes,
Curr. Opin. Endokrinol. 19 (2012) 73–80, https://doi.org/10.1097/
MED.0b013e3283514d43.
[42] M. Demirci, HB Tokman, Z. Taner, FE Keskin, P. Çagatay, ˘ YO Bakar, M. Ozyazar,
¨
N. Kiraz, BS Kocazeybek, Bacteroidetes and Firmicutes levels in gut microbiota
and effects of hosts TLR2/TLR4 gene expression levels in adult type 1 diabetes
patients in Istanbul, Turkey, J. Diabetes Complicat. 34 (2020), 107449,
https://doi.org/10.1016/j.jdiacomp.2019.107449.
[43] M. Murri, I. Leiva, JM Gomez-Zumaquero, FJ Tinahones, F. Cardona, F. Soriguer,
 MI Queipo-Ortuno, ˜ Gut microbiota in children with type 1 diabetes differs from
that in healty children: a case control study, BMC Med. 46 (2013) 11–46, doi:
10.1186/1741-7015-11-46.
[44] A. Giongo, MA Athkinson, EW Triplett, Microbiology of type 1 diabetes, possible
implication for management of the disease, Diabetes Manage 1 (2011) 325–331,
https://doi.org/10.2217/dmt.11.24.
[45] A. Giongo, KA Gano, DB Crabb, N. Mukherjee, LL Novelo, G. Casella, JC Drew, J.
Ilonen, M. Knip, H. Hyoty, ¨ R. Veijola, O. Simell, J. Neu, CH Wasserfall, D. Schatz,
MA Atkinson, EW Triplett, T. Simell, Toward defining the autoimmune
microbiome for type 1 diabetes, ISME J. 5 (2011) 82–91, https://doi.
org/10.1038/ismej.2010.92.
[46] M. Fugmann, M. Breier, M. Rottenkolber, F. Banning, U. Ferrari, V. Sacco, H.
Grallert, KG Parhofer, J. Seissler, T. Clavel, A. Lechner, The stool microbiota of insulin
resistant women with recent gestational diabetes, a high-risk group for type2 diabetes,
Sci. Rep. 5 (2015) 13212, https://doi.org/10.1038/srep13212.
[47] N. Larsen, FK Vogensen, FW van den Berg, DS Nielsen, AS Andreasen, BK
Pedersen, WA Al-Soud, SJ Sorensen, LH Hansen, M. Jakobsen, Gut microbiota in human
adults with type 2 diabetes differs from non-diabetic adults, PLoS One 5 (2010), e9085,
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0009085.
International Journal of Biological Macromolecules 214 (2022) 312–323
´ [56] M. Gurung, Z. Li, H. You, R. Rodrigues, DB Jump, A. Morgun, N. Shulzhenko, Role
[48] I. Vasques-Monteiro, FM Silva-Veiga, CS Miranda, E. de Andrade Gonçalves, JB
Daleprane, V. Souza-Mello, A rise in Proteobacteria is an indicator of gut-liver
axis-mediated nonalcoholic fatty liver disease in high-fructose-fed adult mice, Nutr.
Res. 91 (2021) 26–35, https://doi.org/10.1016/j.nutres.2021.04.008.
[49] GW Tannock, Molecular methods for exploring the intestinal ecosystem, Br.
J.Nutr. 87 (2002) S199–S201, https://doi.org/10.1079/BJN/2002538. [50] K. Zhou,
Strategies to promote abundance of Akkermansia muciniphila, an emerging probiotics
in the gut, evidence from dietary intervention studies, J. Funct. Foods 33 (2017)
323
194–201, https://doi.org/10.1016/j.jff.2017.03.045. [51] MR Halawa, MA El-Salam,
BM Mostafa, SS Sallout, The gut microbiome, lactobacillus acidophilus; relation with
type 2 diabetes mellitus, Curr. Diabetes Rev. 15 (2019) 480–485,
https://doi.org/10.2174/
1573399815666190206162143.
[52] R. Zhao, Q. Hu, G. Ma, A. Su, M. Xie, X. Li, G. Chen, L. Zhao, Effects of flammulina
velutipes polysaccharide on immune response and intestinal microbiota in mice, J.
Funct. Foods 56 (2019) 255–264, https://doi.org/10.1016/j.jff.2019.03.031.
[53] JD Schepper, FL Collins, ND Rios-Arce, S. Raehtz, L. Schaefer, JD Gardinier, RA
Britton, N. Parameswaran, LR Mccabe, Probiotic lactobacillus reuteri prevents
postantibiotic bone loss by reducing intestinal dysbiosis and preventing barrier
disruption, J. Bone Miner. Res. 34 (2019) 681–698, https://doi.org/10.1002/
jbmr.3635.
[54] C. Xie, W. Gao, X. Li, S. Luo, F. Chye, Study on the hypolipidemic properties of
garlic polysaccharide in vitro and in normal mice as well as its dyslipidemia
amelioration in type2 diabetes mice, Food Biosci. 47 (2022), 101683, https://doi.
org/10.1016/j.fbio.2022.101683.
[55] L. Yu, L. Wang, X. Wu, H. Yi, RSPO4-CRISPR alleviates liver injury and restores
gut microbiota in a rat model of liver fibrosis, Commun. Biol. 4 (2021) 230,
https:// doi.org/10.1038/s42003-021-01747-5.
of gut microbiota in type 2 diabetes pathophysiology, EBioMedicine 51 (2020),
102590, https://doi.org/10.1016/j.ebiom.2019.11.051.
[57] H. Li, S. Liu, Y. Liu, W. Li, A. Niu, P. Ren, Y. Liu, C. Jiang, M. Inam, L. Guan,
Effects of in vitro digestion and fermentation of Nostoc commune Vauch.
polysaccharides on properties and gut microbiota, Carbohydr. Polim. 281 (2022),
119055, https:// doi.org/10.1016/j.carbpol.2021.119055.