Panduan: Pakan Ternak Laboratorium Analisis Jaminan Kualitas Untuk

Machine Translated by Google
S8S1I
01
9111-N
14
PRODUKSI DAN KESEHATAN HEWAN FAO
panduan
JAMINAN KUALITAS UNTUK

PAKAN TERNAK
LABORATORIUM ANALISIS
Foto sampul:
Gambar kiri: ©FAO/Giuseppe Bizzarri

Pusat: ©FAO/Ishara Kodikara
Gambar kanan: ©FAO/Jon Spaull
14
PRODUKSI DAN KESEHATAN HEWAN FAO

panduan
JAMINAN KUALITAS UNTUK

PAKAN TERNAK
LABORATORIUM ANALISIS
Jim Balthrop, Benedikt Brand, Richard A.

Cowie, Jürgen Danier, Johan De Boever, Leon
de Jonge, Felicity Jackson, Harinder PS Makkar dan Chris Piotrowski
ORGANISASI PANGAN DAN PERTANIAN PERSERIKATAN BANGSA-BANGSA

Roma, 2011
Informasi untuk pengguna Manual ini
Jika Anda menghadapi masalah dalam menggunakan metode yang dijelaskan dalam manual ini atau memiliki pertanyaan
mengenai suatu metode, Anda dapat menghubungi para ahli yang terdaftar di Jaringan Pakar FAO:
http://www.fao.org/ag/againfo/home/documents/Network_Quality-control.pdf
Kutipan yang direkomendasikan
FAO. 2011. Penjaminan Mutu Laboratorium Analisa Pakan Ternak. Manual Produksi dan Kesehatan Hewan FAO No. 14.
Roma.
Penunjukan yang digunakan dan penyajian materi dalam produk informasi ini tidak
mewakili ekspresi pendapat apa pun dari Organisasi Pangan dan Pertanian Perserikatan Bangsa-
Bangsa (FAO) mengenai status hukum atau pembangunan negara, wilayah, kota mana pun. atau
wilayah atau kewenangannya, atau mengenai penetapan batas-batas atau batas-batasnya.
Penyebutan perusahaan atau produk dari produsen tertentu, baik yang sudah dipatenkan maupun
belum, tidak berarti bahwa produk tersebut didukung atau direkomendasikan oleh FAO dibandingkan
dengan produk lain yang sifatnya serupa dan tidak disebutkan.
Pandangan yang diungkapkan dalam produk informasi ini adalah milik penulis dan tidak mencerminkan
pandangan FAO.
ISBN 978-92-5-107050-5
Seluruh hak cipta. FAO mendorong reproduksi dan penyebaran materi dalam produk
informasi ini. Penggunaan non-komersial akan diizinkan secara gratis, berdasarkan permintaan.
Reproduksi untuk dijual kembali atau tujuan komersial lainnya, termasuk tujuan pendidikan,
mungkin dikenakan biaya. Permohonan izin untuk mereproduksi atau menyebarkan materi hak
cipta FAO, dan semua pertanyaan mengenai hak dan lisensi, harus ditujukan melalui email
ke
hak cipta@fao.org atau kepada Kepala, Cabang Kebijakan dan Dukungan Penerbitan, Kantor
Pertukaran Pengetahuan, Penelitian dan Penyuluhan, FAO,
Viale delle Terme di Caracalla, 00153 Roma, Italia.
© FAO 2011
aku aku aku
Isi
Kata pengantar ay
Penulis vii
Ucapan Terima Kasih viii
Daftar Istilah ix
Perkenalan 1
Bagian I
Prosedur penjaminan mutu dan praktik laboratorium yang baik 3
Menyiapkan sistem laboratorium yang berkualitas 5
Sistem kendali mutu dan mutu 5
Tujuan dan pedoman penjaminan mutu 6
Organisasi dan tanggung jawab laboratorium 7
Pelatihan dan kualifikasi personel 8
Prosedur analitis – Seleksi dan verifikasi 8
Prosedur Operasi Standar (SOP) 9
Pemeliharaan dan servis peralatan 10
Melaporkan data analitis 11
Akurasi dan sampel referensi 12
Sampel ganda presisi dan buta 12
Ketertelusuran hasil 14
Uji kemahiran (jaminan mutu eksternal) 14
Bagan kendali – Pengendalian proses statistik 15

Dokumentasi dan pengendalian dokumen 16
Keamanan laboratorium 18
Audit/Tindakan Korektif/Tinjauan Manajemen 18
Prosedur mutu 21
Memvalidasi metode baru 21
Kualifikasi (pelatihan) analis laboratorium 27
Reagen dan bahan kimia 29

Tes outlier 31
Daftar periksa audit mutu laboratorium 32
Menerima sampel laboratorium 40
Penanganan dan persiapan sampel pakan 42

Penggunaan saldo 47
iv
Penggunaan pipet 51
Pengoperasian pH meter 54
Pengoperasian spektrofotometer 55
Air laboratorium 57
Prosedur pembersihan peralatan gelas laboratorium 58
Keamanan laboratorium 61
Prosedur umum – Penggunaan peralatan laboratorium yang benar 68
Bagian II
Bagian analitis 79
Prosedur analitis 81
Perkenalan 81
Bahan kering 83
Abu mentah 86
Abu tidak larut dalam asam klorida 88
Nitrogen dan perhitungan protein kasar – Kjeldahl 90
Nitrogen dan perhitungan protein kasar – Pembakaran 93

Lemak kasar – Ekstrak eter 96
Serat kasar – Metode filtrasi 98
Serat Deterjen Netral (NDF) – Metode filtrasi 101
Serat Deterjen Asam (ADF) dan Lignin (ADL) – Metode filtrasi 103
Pati – Enzimatik 106
Mengurangi gula – Metode Luff Schoorl 110
Energi kotor 115
Asam Lemak Volatil (VFA) dalam silase – Kromatografi gas 118
Asam laktat dalam silase – Metode enzimatik 121
Urea – Metode spektrofotometri 123

Elemen – AAS 125
Kalsium – Metode spektrofotometri 130
Fosfor – Metode spektrofotometri 132

Klorin – Metode titrasi 134
Aflatoksin – metode HPLC 137
Fumonisin – metode HPLC 144
Zearalenon (ZON) – metode HPLC 154
Deoksinivalenol (DON) – metode HPLC 161
Kecernaan bahan kering – secara in vitro menggunakan cairan rumen 167
analisis NIR 172

ay
Kata pengantar
Pemberian pakan ternak berdampak pada banyak bidang pertanian: produktivitas, emisi lingkungan,
polusi air, penggunaan lahan, kesehatan hewan, keamanan produk, kualitas produk dan kesejahteraan hewan.
Setiap sektor industri peternakan, jasa terkait dan kesejahteraan hewan dan manusia dipengaruhi
oleh pemberian pakan hewan. Pemberian pakan ternak yang baik adalah penyediaan pakan yang
seimbang dalam semua nutrisi dan bebas dari komponen-komponen yang merusak, pada tingkat yang
memenuhi tujuan produksi, dengan mempertimbangkan keadaan fisiologis hewan, dan menghasilkan
produk hewani yang aman untuk dikonsumsi manusia. Ketersediaan data analitik yang akurat, andal, dan
dapat direproduksi sangat penting untuk formulasi pakan yang tepat. Selain itu, hanya data yang andal
saja yang dapat menghasilkan data ilmiah yang kuat.
Laporan yang diterima dari para ahli internasional yang mengunjungi laboratorium nutrisi hewan, yang
terlibat dalam analisis pakan dan bahan pakan di negara-negara berkembang, menyoroti perlunya
memperkuat sistem jaminan kualitas di laboratorium-laboratorium tersebut. Karena tidak adanya sistem
penjaminan mutu yang sesuai, personel laboratorium tidak dapat mengevaluasi mutu data yang dihasilkan.
Berbagai uji cincin yang dilakukan di negara-negara maju menunjukkan variasi yang tidak dapat diterima
untuk beberapa analit yang secara rutin ditentukan di laboratorium analisis pakan. Demikian pula bukti
yang diterima dari industri pakan di negara-negara berkembang mengenai keandalan data analisis pakan
menunjukkan bahwa hal ini tidak konsisten, oleh karena itu, ada kebutuhan mendesak untuk menghasilkan
dokumen yang mencakup sistem jaminan kualitas.
Dokumen saat ini telah dikembangkan dan disiapkan oleh panel yang terdiri dari sembilan ahli.
Penekanannya adalah pada analisis dasar yang digunakan untuk menentukan nilai gizi pakan dan bahan
pakan. Dokumen ini memberikan penjelasan komprehensif tentang praktik laboratorium yang baik,
prosedur jaminan mutu, dan contoh prosedur operasi standar yang digunakan di masing-masing
laboratorium spesialis. Penerapan praktik dan prosedur ini akan membantu laboratorium dalam
memperoleh pengakuan kompetensi yang diperlukan untuk sertifikasi atau akreditasi dan juga akan
meningkatkan kualitas data yang dilaporkan oleh laboratorium analisis pakan.
Selain itu, memastikan praktik laboratorium yang baik yang tercantum dalam dokumen ini akan
meningkatkan keselamatan pekerja laboratorium, melindungi lingkungan dari polutan yang dihasilkan
laboratorium, dan meningkatkan efisiensi laboratorium. Dokumen ini juga akan memberikan dasar yang
kuat bagi laboratorium untuk mengembangkan sistem yang memenuhi persyaratan standar internasional.
Panduan ini akan berguna bagi Analis Laboratorium, Manajer Laboratorium, mahasiswa penelitian dan
guru, dan diharapkan akan memungkinkan pekerja di industri peternakan, termasuk industri akuakultur,
untuk menghargai pentingnya data yang terbukti andal dan pendekatan penjaminan mutu yang terkait.
Dokumen ini, melalui peningkatan keterampilan dan pengetahuan personel laboratorium dan peneliti, juga
akan menghasilkan sistem jaminan mutu yang menjadi bagian integral dari fungsi laboratorium analisis
pakan. Hal ini akan membantu negara-negara untuk memulai proses mendapatkan akreditasi laboratorium
analisis pakan mereka sesuai standar internasional.
Dampak tambahan dari penerapan dan penerapan pendekatan pengendalian/penjaminan kualitas ini
adalah penguatan kemampuan penelitian dan pendidikan mahasiswa lulusan lembaga penelitian dan
pengembangan serta promosi lingkungan perdagangan yang lebih baik antar perusahaan.
vi
perekonomian berkembang dan maju. Hal ini akan memberikan manfaat jangka panjang dan akan mendorong
investasi pada industri pakan dan lembaga penelitian dan pengembangan.
Dokumen ini juga akan berfungsi sebagai dasar untuk mengembangkan e-modul pembelajaran mandiri dan
untuk menyelenggarakan lokakarya pelatihan yang ditujukan bagi Manajer Laboratorium dan Analis Teknis tentang
pendekatan pengendalian/penjaminan mutu. Berdasarkan masukan dari pengguna, dokumen ini akan diperluas di
masa depan dengan memasukkan teknik penting untuk bahan tambahan pakan, mikrobiologi, residu obat dan hal-
hal lain yang tidak diinginkan.
Berhe G.Tekola
Direktur
Divisi Produksi dan Kesehatan Hewan
Organisasi Pangan dan Pertanian

Perserikatan Bangsa-Bangsa
vii
Penulis
Jim Balthrop Leon de Jonge

Kantor Ahli Kimia Negara Bagian Texas Kelompok Nutrisi Hewan
Manajer Penjaminan Mutu PO Box Universitas Wageningen 338
Kotak PO 3160 6700 H Wageningen
College Station, Texas 77841, AS Belanda
Merk Benediktus Felisitas Jackson

Staatliches Veterinäruntersuchungsamt Manajer, Laboratorium Nutrisi
Arnsberg Institut Pangan, Gizi &
Dez. 43: Verbraucherschutz, Futtermittel Zur Kesehatan manusia
Taubeneiche 10-12 Tas Pribadi 11222, Riddet Rd

59821 Arnsberg Universitas Massey Palmerston Utara 4474
Jerman Selandia Baru
Richard A Cowie Harinder PS Makkar
Manajer Penjaminan Mutu Senior Petugas Produksi Hewan

KANTUNG Divisi Produksi dan Kesehatan Hewan
Gedung Ferguson Organisasi Pangan dan Pertanian

Perkebunan Craibstone Persatuan negara-negara
Aberdeen Viale delle Terme di Caracalla

AB21 9YA 00153, Roma, Italia
Skotlandia
Chris Piotrowski
Jürgen Danier c/ Direktur, Aunir

o Unit Weihenstephan Bioanalitik Aunir - sebuah divisi dari AB Agri
Pusat Penelitian Gizi dan Pangan The Byre, Taman Bisnis Pury Hill
Sains, Technische Universität München Alderton, Nr Towcester
Alte Akademie 10, 85354 Freising Orang Utara, NN12 7LS
Jerman Inggris
Johan De Boever
Institut Pertanian dan Perikanan

Riset
Unit Ilmu Hewan Scheldeweg 68

9090 Mel
Belgium
viii
Ucapan Terima Kasih
Kami berterima kasih kepada Dr. Jim Balthrop yang telah menyiapkan draf awal. Ucapan terima kasih khusus juga disampaikan kepada Ny.
Felicity Jackson dan Mr. Leon de Jonge atas upaya mereka yang tak kenal lelah dalam menyusun informasi dari kontributor lain dan
membawa konten ke dalam format yang seragam. Kami juga berterima kasih kepada Prof. Tim Herrman atas saran-sarannya pada tahap
awal penyusunan manual ini. Dukungan luar biasa diberikan oleh Bapak Simon Mack, mantan Kepala Cabang Sistem Produksi Ternak
(AGAS); Philippe Anker, Ketua AGAS saat ini dan Samuel Jutzi, mantan Direktur Divisi Produksi dan Kesehatan Hewan sangat
mengapresiasi hal ini.

ix
Daftar Istilah
Ketepatan. Perbedaan antara nilai yang diamati atau diukur dan nilai yang diterima atau “nilai sebenarnya”.
Karena akurasi dipengaruhi oleh kesalahan acak dan sistematis, akurasi juga dapat didefinisikan sebagai
jumlah kesalahan sistematis ditambah kesalahan acak.
Kosong. Sampel yang tidak mengandung analit tambahan atau sampel diolah sedemikian rupa sehingga
reaksi yang diinginkan tidak terjadi, misalnya salah satu reagen yang digunakan untuk menghasilkan reaksi
dihilangkan.
Koefisien Variasi (Deviasi Standar Relatif). Simpangan baku dibagi rata-rata dan dikalikan 100.
Bagan Kendali. Sebuah metode grafis untuk mencatat nilai terukur yang, dengan menggunakan batas
kendali, membantu menentukan apakah suatu proses stabil dan 'sesuai target'. Semua diagram kendali
mempunyai tiga komponen
dasar: Garis tengah, biasanya rata-rata matematis dari semua sampel yang diplot. Batas kendali statistik
atas dan bawah yang menentukan batasan variasi penyebab umum, dan data kinerja yang diplot sepanjang
waktu. Penggunaan diagram kendali proses statistik memungkinkan pemantauan variasi analisis laboratorium,
selama periode waktu tertentu.
Dokumen. Kebijakan, prosedur, atau instruksi kerja tertulis yang terkendali yang menjelaskan apa yang
dilakukan orang dan bagaimana melakukannya. Terkendali artinya dokumen tersebut menyatakan siapa yang
menulis atau mengesahkan kebijakan atau prosedur tersebut, kapan dikeluarkan dan mencantumkan nomor
versi apa pun untuk menghindari penggunaan dokumen yang sudah tidak berlaku lagi. Pengendalian
dokumentasi biasanya menjadi tanggung jawab Manajer Penjaminan Mutu.
Batas Deteksi (LOD). Sinyal terendah yang dapat dilihat di atas latar belakang untuk prosedur tertentu. LOD
didefinisikan sebagai mean dari blanko ditambah tiga deviasi standar dari mean dari blanko tersebut.
Batas Kuantifikasi (LOQ). Sinyal terendah yang dapat diukur secara eksperimental yang diperoleh untuk
analit sebenarnya dengan menggunakan prosedur tertentu. LOQ didefinisikan sebagai rata-rata titik kosong
ditambah sepuluh deviasi standar dari rata-rata titik kosong.
Linearitas. Dimana serangkaian titik menunjukkan penyimpangan kurang dari 3% terhadap garis lurus.
Aneh. Suatu pengamatan yang sangat menyimpang dari pengamatan lain sehingga menimbulkan kecurigaan
gambar bahwa itu dihasilkan oleh prosedur yang berbeda atau salah.
Presisi. Ukuran penyebaran data di sekitar rata-rata.

Sampel Kemahiran (Contoh Penjaminan Mutu Eksternal). Sampel disediakan oleh sumber eksternal untuk
membandingkan hasil laboratorium antar laboratorium dan dapat digunakan sebagai sampel kendali mutu
internal.
Kualitas asuransi. Kegiatan terencana dan sistematis yang dilaksanakan di laboratorium yang memberikan
keyakinan akan keakuratan dan keandalan hasil yang dihasilkan.
Kontrol kualitas. Aktivitas yang digunakan untuk memantau suatu proses atau untuk memeriksa hasil dan memberikan
jaminan bahwa semua aktivitas dilakukan dalam batas yang telah ditentukan sebelumnya yang ditetapkan oleh laboratorium.
Catatan. Bisa elektronik atau kertas. Contohnya termasuk dokumen lacak balak, hasil sampel, data QA/QC,
hasil audit, catatan kalibrasi, dll.
Prosedur Operasi Standar (SOP). Dokumen yang menjelaskan langkah-langkah tertentu yang diambil dalam
suatu metode. Metode ini dapat berupa prosedur analitis spesifik atau kebijakan yang mengendalikan aspek
yang lebih umum dari pekerjaan yang dilakukan (misalnya catatan pelatihan, penanganan keluhan, atau
penggunaan saldo).
Ketertelusuran. Sifat hasil pengukuran yang dapat dikaitkan dengan referensi yang ditetapkan, biasanya
standar internasional, melalui rantai perbandingan yang tidak terputus.
Kontrol kerja. Sampel pengendalian kualitas internal, yang nilainya diketahui, dianalisis dengan setiap
kelompok sampel untuk memantau kinerja metode dan analis (lihat Tabel 2).
Perkenalan
Ketersediaan pakan ternak dan pemberian pakan yang efisien merupakan fondasi keberhasilan produksi
ternak. Pemberian pakan dengan ransum seimbang dan formulasi pakan yang benar akan meningkatkan
produktivitas ternak, kualitas produk dan kesejahteraan hewan. Selain itu, untuk mengurangi pencemaran
lingkungan akibat peternakan, pemberian makanan yang sesuai dengan status fisiologis hewan juga sangat
penting.
Untuk perlindungan kesehatan terbaik bagi populasi hewan dan manusia dan untuk memfasilitasi
perdagangan antara negara berkembang dan belum berkembang, harmonisasi pendekatan Penjaminan
Mutu sangatlah penting.
Sistem Manajemen Mutu yang kuat menyediakan mekanisme untuk memastikan bahwa semua kriteria
ini terpenuhi dan menyediakan sistem untuk terus memantau hasil laboratorium dan mengidentifikasi
peluang untuk perbaikan.
Sistem Manajemen Mutu memberikan keyakinan kepada manajemen, staf, dan pelanggan bahwa
semua faktor teknis, administratif, dan manusia yang memengaruhi kualitas hasil yang dihasilkan berada di
bawah pengawasan terus-menerus dengan tujuan untuk mencegah ketidaksesuaian dan mengidentifikasi
Panduan ini disusun untuk menjelaskan Sistem Manajemen Mutu yang dapat digunakan oleh
laboratorium nutrisi/analisis pakan ternak dan berfungsi sebagai sumber referensi yang dapat digunakan
oleh laboratorium tertentu untuk menerapkan protokol yang sesuai dengan situasi spesifiknya.
Namun prinsip-prinsip yang ditetapkan bersifat umum dan mungkin tidak berlaku untuk semua laboratorium
situasi.
Sistem Manajemen Mutu yang dijelaskan dalam manual ini didasarkan pada prinsip-prinsip ISO
17025:2005 dan dimaksudkan untuk membantu personel laboratorium mempertahankan standar yang
diharapkan sekaligus memberikan layanan yang konsisten, andal, efisien dan profesional dengan tingkat
kualitas yang dibutuhkan oleh pelanggan laboratorium. Kebijakan ini dicapai melalui komitmen manajemen
dan staf di semua tingkatan untuk menerapkan praktik laboratorium yang menjamin kualitas layanan
pengujian dan hasil yang dihasilkan.
Karena pekerjaan di masing-masing laboratorium sangat bervariasi, maka penting untuk memiliki
Sistem Manajemen Mutu yang fleksibel namun terperinci. Personil laboratorium harus memahami prinsip-
prinsip yang mendasari penjaminan mutu dan harus menerapkannya di semua bidang pekerjaan mereka.
Hanya dengan cara ini mereka dapat menjaga kredibilitas, yang merupakan atribut terpenting dari
laboratorium mana pun. Manual ini memberikan landasan yang kuat bagi laboratorium untuk
mengembangkan Sistem Manajemen Mutu yang akan memenuhi persyaratan standar internasional.
Panduan ini telah dibagi menjadi dua bagian utama. Bagian I menyajikan aspek umum prosedur
penjaminan mutu dan praktik laboratorium yang baik yang harus diterapkan di laboratorium analisis pakan.
Bagian II berisi beberapa prosedur dasar penentuan nutrisi dan mikotoksin. Metode yang dijelaskan untuk
berbagai analit diambil dari metode resmi yang diakui serta dari laboratorium yang mewakilinya
2 Jaminan mutu laboratorium analisis pakan ternak
berkontribusi pada pembuatan dokumen ini. Para analis di laboratorium ini telah menggunakan
metode ini selama bertahun-tahun dan metode tersebut terbukti dapat diandalkan. Namun,
metode lain atau varian dari metode yang disajikan dalam manual ini juga dapat digunakan.
Direncanakan untuk memasukkan sejumlah teknik penting untuk bahan tambahan pakan,
agen mikro-biologi, residu obat dan hal-hal lain yang tidak diinginkan serta pendekatan jaminan
kualitas terkait dalam edisi berikutnya dari manual ini.
Bagian I
Prosedur penjaminan mutu dan

praktik laboratorium yang baik
Menyiapkan
sistem laboratorium yang berkualitas
Sistem Pengendalian Mutu dan Mutu

Bagian ini menjelaskan apa yang dimaksud dengan Sistem Manajemen Mutu dan Mutu dan bagaimana hal ini akan
berdampak pada dan meningkatkan kinerja di laboratorium.
Apa yang dimaksud dengan Kualitas?

Kualitas tidak mudah untuk didefinisikan tetapi perlu didefinisikan oleh laboratorium yang terakreditasi. Ini dapat memiliki
arti yang berbeda bagi orang yang berbeda. Namun, dalam semua aspek bisnis, 'Kualitas' menjadi sangat penting. Baik
itu organisasi manufaktur atau multidisiplin, semua organisasi yang sukses ingin diasosiasikan dengan kata 'Kualitas'.
Jadi apa itu Kualitas? Definisi buku teks adalah: Kualitas adalah kesesuaian untuk tujuan.
Organisasi Standar Internasional (ISO) telah menghasilkan dokumen berjudul 'Sistem Manajemen Mutu – Dasar-
Dasar dan Kosakata', yang mana kata 'Kualitas' diartikan sebagai: Sejauh mana serangkaian karakteristik yang melekat
memenuhi persyaratan.
Hal ini jelas menunjukkan bahwa mencapai kualitas berarti memenuhi persyaratan. Persyaratan-
Permintaan mungkin datang dari pelanggan dan dalam beberapa kasus dari otoritas pengatur.
Bagaimana Kualitas dapat dicapai?

Kualitas adalah tanggung jawab semua orang; hal ini harus dibangun di setiap tahap proses, mulai dari mengidentifikasi
kebutuhan pelanggan, melalui perencanaan dan implementasi hingga pelaporan hasil analitis.
Dalam beberapa kasus, kualitas perlu diperiksa bahkan setelah pengiriman ke pelanggan
kepuasan pelanggan dapat mempunyai dampak yang sangat besar terhadap kualitas yang dirasakan oleh mereka.
Mewujudkannya!
Harus dipahami bahwa kualitas tidak terjadi secara kebetulan. Titik awalnya adalah mengidentifikasi kebutuhan
pelanggan dan dari situ rencana harus dipertimbangkan untuk proses dan sumber daya serta penerapan pengendalian
pemantauan. Analis perlu terus-menerus menilai kinerjanya berdasarkan tujuan dan standarnya sendiri untuk
mengupayakan perbaikan. Karena mutu tidak terjadi secara kebetulan, maka perlu dibangun Sistem Manajemen Mutu
yang efektif untuk memastikan bahwa persyaratan dipenuhi secara efisien dan efektif. Panduan ini merupakan awal untuk
mencapai hal ini.
Sistem Manajemen Mutu

Sistem Manajemen Mutu mengarahkan dan mengendalikan organisasi yang berkaitan dengan mutu dengan menetapkan
prosedur operasi standar (SOP) yang mana setiap orang beroperasi dalam posisi yang sama.
cara yang konsisten. Hal ini, dikombinasikan dengan pemeriksaan internal (audit) secara teratur,
sistem penyelidikan masalah (anomali) dan identifikasi peluang perbaikan secara terus-menerus
akan mengurangi terjadinya hasil yang tidak dapat diandalkan.
Mengapa menerapkan Sistem Manajemen Mutu?

Memiliki sistem yang terdokumentasi akan menghasilkan semua staf beroperasi dengan standar
umum dan memberikan jaminan kepada pelanggan akan keandalan pengujian dan konsistensi
layanan. Sistem Manajemen Mutu yang sesuai dengan standar internasional akan diakui di seluruh
dunia dan akan menunjukkan kesesuaian di pasar internasional.
Apa yang diharapkan dilakukan oleh analis laboratorium untuk mematuhinya?

Saat mulai bekerja, semua staf baru harus diberikan salinan manual ini.
Staf diharapkan membacanya dan memahami isinya (bila diperlukan). Staf juga harus diberikan File
Pelatihan di mana mereka dapat menunjukkan pengalaman dan kompetensi mereka dalam
mengikuti standar, Sistem Manajemen Mutu dan kemahiran mereka dalam prosedur analisis nutrisi.
File Pelatihan
File pelatihan harus menunjukkan pengalaman dan kompetensi untuk melakukan pekerjaan yang
dipegang individu. File ini harus disimpan oleh individu dan diperbarui seiring dengan diberikannya
pelatihan, bekerja sama dengan supervisor mereka. File Pelatihan harus berisi deskripsi pekerjaan,
bagan organisasi, CV (resume) dan bukti pelatihan dan pendidikan relevan yang diterima hingga
saat ini. Saat pelatihan baru diterima, bukti yang diverifikasi oleh manajer lini harus disertakan yang
menjelaskan pelatihan tersebut. Kompetensi yang berkelanjutan juga harus ditunjukkan dengan
mendokumentasikan partisipasi dalam program EQA (External Quality Assurance) dan IQA (Internal
Quality Assurance) yang dikelola oleh laboratorium.
Tujuan dan Pedoman Penjaminan Mutu

Program kualitas laboratorium merupakan bagian penting dalam meningkatkan laboratorium
pertanian di negara-negara berkembang. Manual Mutu Laboratorium merupakan sumber penting
untuk mengkomunikasikan kepada staf laboratorium tentang cara pelaksanaan pengujian laboratorium.
Kepatuhan terhadap manual mutu oleh staf laboratorium diperlukan untuk menjamin mutu dan
konsistensi. Mengingat Pedoman Laboratorium mungkin tidak mencakup semua situasi dan variabel
yang timbul dari lingkungan laboratorium, setiap penyimpangan yang signifikan harus mendapat
persetujuan manajemen dan harus didokumentasikan dengan baik.
Manajemen dalam laboratorium bertanggung jawab atas kualitas dan integritas semua data
yang dihasilkan di laboratorium. Manajemen, secara kolektif, menjamin kualitas ini melalui kepatuhan
terhadap manual laboratorium, rencana jaminan kualitas, dan melalui pengembangan dan kepatuhan
terhadap prosedur operasi standar.
Diagram alir pada Gambar 1 memberikan representasi sederhana dari Sistem Manajemen
Mutu yang dijelaskan dalam manual ini dan bukan merupakan pengganti prosedur yang terdapat di
dalamnya.
Bagian I – Membangun sistem laboratorium yang berkualitas 7
Gambar 1
Diagram alur Penjaminan Mutu
Organisasi
laboratorium
dan tanggung jawab Permintaan pelanggan
Pilih metode Prosedur Memvalidasi

Laboratorium metode baru
analitis –
keamanan
Seleksi dan
verifikasi
Identifikasi peralatan Pemeliharaan Reagen dan Bagian yang relevan

Laboratorium dan servis peralatan bahan kimia
dan reagen dari Prosedur Mutu:
keamanan
penggunaan
timbangan,
pipet, dll. (hlm. 47–68)
Identifikasi staf terlatih Pelatihan dan kualifikasi Kualifikasi (pelatihan)

analis laboratorium
personel
Menerima sampel Menerima Penyerahan

sampel laboratorium dan penyiapan
sampel pakan
Lakukan analisis
Verifikasi hasilnya
Bagan kendali – Tes outlier
Kecakapan
Kontrol proses statistik
pengujian Prosedur
analitis
Hasil pelaporan Melaporkan

Ketertelusuran
hasil data analitis
Dokumentasi dan Tinjauan Audit/tindakan korektif/ Daftar periksa audit

pengendalian tinjauan manajemen mutu laboratorium
dokumen
Catatan: Kotak berwarna terang mengacu pada Bagian I – Menyiapkan sistem laboratorium yang bermutu; kotak berwarna lebih gelap mengacu
pada Bagian I – Prosedur mutu; kotak berwarna paling gelap lihat Bagian II.
Organisasi dan Tanggung Jawab Laboratorium

Setiap anggota laboratorium harus memiliki tanggung jawab yang jelas dan terdokumentasi (Deskripsi
Pekerjaan). Bagan organisasi harus disertakan dalam dokumen mutu laboratorium dan tersedia dalam
catatan pelatihan staf.
Manajer/Direktur Laboratorium mempunyai tanggung jawab utama untuk menerapkan sistem mutu.
Manajer Mutu melapor langsung kepada Manajer/Direktur Laboratorium dan bertanggung jawab
untuk memelihara dan mengembangkan prosedur mutu yang digunakan di laboratorium.
Analis laboratorium bertanggung jawab untuk mengikuti semua prosedur kualitas dan mengidentifikasi
Pelatihan dan Kualifikasi Personil

Personel yang berkualifikasi dan terlatih sangat penting untuk menghasilkan hasil analisis dengan kualitas
yang dapat diterima. Manajemen laboratorium memastikan bahwa personel laboratorium memiliki pengetahuan,
keterampilan dan kemampuan untuk melaksanakan tugasnya. Kompetensi didasarkan pada pendidikan,
pengalaman, keterampilan dan pelatihan yang ditunjukkan. File pelatihan staf berisi dokumentasi pendidikan
pribadi, pengalaman, keterampilan dan pelatihan untuk posisi yang dipegang.
Analis menjalani program pelatihan sesuai dengan prosedur pelatihan laboratorium. Analis harus
menunjukkan dan mendokumentasikan kemahiran dalam metode analitis sebelum melaporkan hasilnya
kepada pelanggan laboratorium. Langkah pertama untuk lolos dalam analisis baru adalah membaca prosedur
operasi standar (SOP). Salinan dokumen ini dapat diperoleh dari Manajer/Direktur Laboratorium. Metode
tersebut harus ditinjau oleh analis oleh seseorang yang memahami prosedur tersebut dan kemudian analis
harus menjalankan sejumlah sampel atau standar yang diketahui. Pelatihan harus didokumentasikan dalam
file pelatihan individu. Untuk menjamin keselamatan semua orang, peserta pelatihan harus membaca Lembar
Data Keamanan Bahan (MSDS) untuk informasi mengenai setiap bahan kimia yang digunakan dalam analisis.
Tingkat toksisitas dan metode pembuangan limbah harus dipahami dengan jelas sebelum memulai analisis
apa pun. Jumlah sampel dan standar yang dianalisis harus ditentukan oleh supervisor. Hasilnya harus
dibandingkan dengan hasil yang diperoleh sebelumnya dengan menggunakan uji t berpasangan. Jika tidak
terdapat perbedaan yang signifikan pada tingkat kepercayaan 95% maka analis baru dapat dianggap
memenuhi syarat. Kompetensi yang berkelanjutan harus ditunjukkan dengan berpartisipasi dalam Penjaminan
Mutu Internal (IQA) atau uji coba lapangan secara berkala.
Prosedur Analitis – Seleksi dan Verifikasi

Jika pelanggan tidak menentukan metode yang akan digunakan, metode standar yang diakui (ISO, CEN,
AOAC, FDA, dll.) lebih disukai. Jika metode standar tidak ditemukan, laboratorium dapat menggunakan
metode non-standar atau memodifikasi metode untuk digunakan dengan persetujuan pelanggan. Laboratorium
memberi tahu pelanggan bila metode yang diusulkan pelanggan dianggap tidak sesuai untuk tujuan yang
dimaksudkan. Metode standar dan non-standar atau metode modifikasi harus cukup divalidasi oleh
laboratorium sebelum digunakan untuk melaporkan data.
Ketika laboratorium mengembangkan metode untuk digunakan sendiri, laboratorium mempunyai prosedur
untuk pengenalannya.
Metode non-standar adalah metode yang tidak diambil dari sumber resmi dan tervalidasi. Suatu metode
yang tidak standar belum mengalami validasi, seperti studi kolaboratif atau proses untuk mengevaluasi
kemampuan kinerja metode tersebut.
Metode non-standar dipilih untuk digunakan ketika permintaan pelanggan tidak dapat ditangani dengan
penggunaan metode standar. Metode tersebut harus disetujui oleh pelanggan dan divalidasi.
Validasi adalah penegasan dengan pemeriksaan dan pemberian bukti-bukti yang obyektif
bahwa spesifikasi khusus untuk tujuan penggunaan terpenuhi.
Laboratorium memvalidasi metode standar, metode non-standar, metode yang dikembangkan

laboratorium dan metode standar yang dimodifikasi, termasuk penggunaan di luar lingkup dan aplikasi
yang dimaksudkan. Validasi dilakukan untuk memastikan bahwa metode tersebut sesuai dengan tujuan
penggunaan. Kinerja semua metode diverifikasi sebelum digunakan untuk menghasilkan data yang
dapat dilaporkan.
Proses validasi menjawab kebutuhan aplikasi yang diberikan. Atribut dan
sasaran kualitas data mencakup namun tidak terbatas pada:
•Ketepatan
•Presisi
•Batas deteksi (LOD)
•Batas kuantifikasi (LOQ)
•Linearitas
Batasan akurasi dan presisi target dapat diambil dari AOAC (Horwitz). Presisi atau keterulangan
dihitung sebagai deviasi standar relatif (koefisien variabilitas) dan akurasi dihitung sebagai persentase
pemulihan (Tabel 1).
Prosedur Operasi Standar (SOP)

SOP bersifat khusus untuk tujuan penggunaan SOP tersebut. Persetujuan SOP adalah komitmen area
tertentu terhadap suatu tindakan atau perilaku. SOP dapat ditulis oleh pegawai yang kompeten di
laboratorium. SOP tersebut kemudian ditinjau isinya dan disahkan oleh supervisor atau manajer di
area di mana SOP tersebut akan digunakan. Setelah SOP ditinjau dan disetujui oleh penyelia atau
manajer, SOP tersebut diberikan kepada Manajer Mutu untuk disetujui dan diterbitkan.
Format yang digunakan untuk menulis SOP harus memuat hal-hal berikut jika diperlukan:
•Prinsip
•Cakupan
•Tanggung jawab
•Peralatan
•Reagen
•Prosedur
•Kontrol kualitas
•Perhitungan
•Penyelesaian masalah
•Perkataan
•Referensi
•Lampiran (Bagan Alir, Tabel, Referensi, dll.)
SOP adalah dokumen yang dikontrol dan harus mencantumkan tanggal penerbitan (atau tanggal
berlaku), nama penulis dan orang yang memberi wewenang pada SOP, tanggal peninjauan, dan nomor versi.
Ketika versi baru SOP dikeluarkan, 'Log Pembaruan' akan merangkum perubahan yang dilakukan pada
awal dokumen. Ketika versi baru dari SOP diterbitkan, semua versi yang dikontrol sebelumnya harus
ditarik.
Disarankan untuk melarang versi SOP yang tidak terkontrol.
Pemeliharaan dan Servis Peralatan

Prosedur untuk menentukan, memelihara, dan memantau kinerja instrumen merupakan bagian integral dari
program pengendalian mutu karena prosedur tersebut meningkatkan tingkat kepercayaan yang tinggi
terhadap hasil analisis. Setiap prosedur dijelaskan dalam SOP peralatan masing-masing. Semua peralatan
pengujian penting memiliki SOP dan catatan pemeliharaannya sendiri yang mendokumentasikan
pengoperasian, kalibrasi, dan pemeliharaan rutin. Staf yang menggunakan peralatan penting harus memiliki
pelatihan yang sesuai yang didokumentasikan dalam file pelatihan mereka.
Pemeliharaan. Petunjuk pemasangan yang lengkap dan akurat, manual pengoperasian, manual suku
cadang, manual servis dan jaminan atau kontrak tertulis disimpan bersama setiap instrumen untuk
memastikan berfungsinya dengan baik. Penerapan program pemeliharaan preventif yang mencakup
pengujian peralatan terhadap spesifikasi dan prosedur untuk kalibrasi, pengecekan, dan pembersihan yang
sering dilakukan merupakan hal yang penting. Kinerja instrumen dan peralatan dievaluasi secara berkala
untuk memastikan bahwa peralatan atau instrumen tersebut tetap berfungsi dengan baik dan memiliki catatan
sejarah yang sesuai untuk diaudit dan dievaluasi dengan benar. Tugas perawatan rutin seperti pembersihan,
penyetelan, penggantian suku cadang atau pelumasan dilakukan pada setiap instrumen oleh petugas yang
bertanggung jawab sesuai dengan instruksi yang diberikan dalam manual pengoperasian instrumen atau
seperti yang diidentifikasi berdasarkan pengalaman masa lalu.
Semua tugas pemeliharaan dan perbaikan yang dilakukan oleh analis atau perwakilan layanan dicatat
pada lembar log instrumen terkini untuk setiap instrumen. Analis harus segera melaporkan semua malfungsi
kepada orang yang bertanggung jawab atas instrumen tersebut dan dengan jelas menunjukkan bahwa
instrumen tersebut “OUT OF ORDER” ketika terjadi malfungsi.
Jika tersedia, kontrak servis yang mencakup pemeliharaan peralatan tertentu setiap semester/tahunan
harus diperoleh.
Kalibrasi. Validitas hasil analisis yang dihasilkan sangat berkaitan dengan tingkat kinerja instrumentasi yang
digunakan untuk analisis. Oleh karena itu penting bahwa untuk setiap instrumen dan setiap metode, prosedur
kalibrasi yang tepat ditetapkan dan hasil kalibrasi dicatat dan digunakan sebagai dasar untuk penilaian
berkelanjutan terhadap instrumen.
kinerja instrumen. Persyaratan kalibrasi metode disertakan sebagai bagian dari metode. Kalibrasi peralatan/
instrumen dan keterlacakan terhadap standar nasional harus didokumentasikan. Anak timbangan dan
termometer bersertifikat tersedia dan harus digunakan serta dokumentasinya disimpan di laboratorium.
Inventaris. Catatan inventaris permanen semua peralatan disimpan oleh Manajer/Direktur Laboratorium.
Catatan ini mencakup nama peralatan, nomor model, nomor seri, pabrikan, tanggal perolehan, harga asli
dan lokasi sekarang serta pengenal unik apa pun yang ditetapkan secara lokal.
Suku Cadang dan Perlengkapan. Analis harus menyimpan daftar suku cadang yang penting untuk menjaga
instrumen tetap beroperasi dan harus meninjau daftar ini setidaknya setiap tahun. Daftar ini harus disimpan
dalam Buku Catatan Instrumen.
Petugas yang bertanggung jawab. Seorang petugas yang bertanggung jawab ditugaskan untuk peralatan penting. Orang ini
biasanya adalah pengguna utama sistem. Dalam kasus peralatan yang digunakan bersama, petugas yang bertanggung jawab
melakukan pemeriksaan kinerja dan pemeliharaan sementara operator memverifikasi kalibrasi, menjalankan standar,
mengoperasikan instrumen dengan cara yang benar, mencatat data sesuai kebutuhan dan memberi tahu petugas yang
bertanggung jawab jika ada anomali atau malfungsi.
Tugas petugas yang bertanggung jawab adalah sebagai berikut:
1) Menjadi akrab secara menyeluruh, melalui pelatihan dan pengalaman, dengan pengoperasian, pemeliharaan dan
penerapan instrumen.
2) Untuk menginstruksikan dan membantu orang lain dalam penggunaan instrumen.
3) Untuk melakukan pemeriksaan kinerja berkala pada instrumen sebagaimana diuraikan dalam instruksi
manual laboratorium dan laboratorium.
4) Untuk melakukan tugas pemeliharaan rutin sesuai dengan manual instrumen.
5) Untuk memastikan lembar log instrumen atau buku log terisi setiap kali digunakan.
6) Untuk memastikan bahwa manual instrumen tersedia dan diperbarui
diperlukan.
7) Untuk menetapkan daftar suku cadang yang penting untuk menjaga instrumen tetap beroperasi dan untuk memastikan
bahwa ada pasokan yang memadai untuk suku cadang tersebut. Sebagai alternatif, kontrak servis dan pemeliharaan
dapat dibuat dengan sub-kontraktor yang sesuai.
Seorang wakil yang dicalonkan harus diidentifikasi untuk melaksanakan tugas-tugas ini jika tidak ada
Petugas yang bertanggung jawab.
Buku Log Instrumen. Tujuan utama dari buku log instrumen adalah untuk menyediakan catatan kinerja instrumen secara
permanen dan digunakan sebagai dasar untuk memvalidasi data dan memperkirakan kebutuhan perbaikan dan penggantian,
atau perolehan baru. Jika berlaku, nomor kontrak layanan dicatat dalam buku log.
Setiap kali instrumen digunakan, analis harus memasukkan informasi yang diminta ke dalam Buku Log yang akan
memberikan laboratorium catatan penggunaan instrumen, kinerjanya, serta pemeliharaan dan perbaikannya.
Pelaporan Data Analitis

Setiap prosedur harus menentukan rentang analit yang dapat diterapkan dengan signifikansi yang realistis (batasan pengujian).
Analis Laboratorium wajib melaporkan nilai numerik yang hanya mencakup angka-angka tertentu ditambah satu digit perkiraan.
Kelompok angka inilah yang disebut dengan angka penting. Jika lebih dari satu angka yang tidak pasti dilaporkan, pembaca
mungkin disesatkan mengenai ketepatan pengukuran atau serangkaian pengukuran yang dilakukan. Untuk membakukan
pelaporan data laboratorium, dua konvensi harus digunakan. Yang satu berkaitan dengan pembulatan angka dan yang lainnya
berkaitan dengan pelaporan angka penting. Apabila data perlu dibulatkan, bulatkan angka tersebut ke nilai berikutnya yang
lebih tinggi jika angka di sebelah kanannya ÿ 5. Jika angka terakhir yang dibuang < 5, biarkan angka terakhir yang
dipertahankan tidak berubah. Jika bilangan disebelah kanan adalah 5 dan diikuti angka nol saja, maka dibulatkan ke bilangan
genap terdekat.
Definisi yang diberikan untuk angka penting adalah bahwa angka penting mencakup semua angka dalam suatu hasil
yang diketahui dengan pasti ditambah satu nilai yang tidak pasti. Posisi koma desimal adalah
tidak relevan. Ketika data dilaporkan, gunakan aturan berikut untuk menentukan jumlah angka penting: 1) Laporkan
hanya angka penting
sebanyak yang ditemukan dalam pengukuran yang paling tidak akurat.
manajemen; Dan
2) Memberikan perkiraan terbaik kepada pembaca mengenai kesalahan pengukuran.
Contohnya: Jika angka nol di kiri dan kanannya dibatasi oleh angka lain, maka angka tersebut selalu penting,
306 mempunyai tiga angka penting. Jika angka nol digunakan untuk menetapkan koma maka angka tersebut tidak
pernah signifikan, 0,0024 mempunyai dua angka penting, 0,00240 mempunyai tiga angka penting.
Akurasi dan sampel referensi

Untuk menjamin keakuratan prosedur, sampel referensi (standar kerja) dengan nilai yang diketahui dan stabil harus
dijalankan pada setiap batch dan dievaluasi melalui peta kendali (lihat bagian pada peta kendali).
Bahan acuan dapat berupa bahan murni Bahan Referensi (RM) dan perolehan analit akan menjadi ukuran
keakuratan metode.
Namun untuk sebagian besar analisis umpan, Bahan Referensi Bersertifikat (CRM) atau buatan sendiri
sampel referensi pakan (HRM) digunakan.
CRM dapat diperoleh dari organisasi yang melakukan uji profisiensi pakan ternak (Tabel 4) dimana nilai acuannya
ditentukan oleh beberapa laboratorium yang menerapkan beberapa metode uji independen yang tervalidasi. Sebuah
laboratorium juga dapat membuat sampel referensinya sendiri. Bahan pakan harus dipilih yang mewakili sebagian
besar sampel pakan yang dianalisis di laboratorium. Sampel ini harus dianalisis dalam rangkap dua, setidaknya
dalam 6 kali proses berbeda, yang tersebar selama beberapa hari/minggu. Dalam proses ini sebaiknya CRM dianalisis
dan hanya ketika nilai CRM berada dalam batas kendali, hasil HRM dapat diperhitungkan.
Sebelum menghitung mean dan SD, hasil yang jelas-jelas menyimpang harus dihilangkan. Dari HRM harus diberikan
porsi yang cukup; satu porsi harus cukup untuk setidaknya enam bulan dan sisanya harus disimpan di dalam freezer.
Peta kendali harus dievaluasi secara teratur untuk melihat tren yang mungkin mengindikasikan penurunan kualitas
porsi. HRM yang sama dapat digunakan untuk beberapa metode di laboratorium.
Sampel ganda presisi dan buta

Untuk meningkatkan ketepatan hasil (mengurangi penyebaran), semua analisis sebaiknya dilakukan dalam rangkap
dua. Karena hal ini tidak selalu dapat dilakukan karena alasan keuangan atau jumlah sampel, disarankan agar
minimal 10% sampel dalam satu batch dijalankan dalam rangkap dua.
Sampel yang diduplikasi sebaiknya tidak diketahui oleh analis (double blind), sehingga menjamin ketepatan sampel
yang dianalisis dalam bentuk tunggal. Kisaran hasil duplikat yang dapat diterima bervariasi tergantung pada metode,
kebutuhan pelanggan, dan matriks sampel. Kisaran relatif atau perbedaan persen relatif dapat dihitung sebagai:
Perbedaan Persen Relatif = (X1 – X2) x 100 / rata-rata nilai replikasi

Di mana,
X1 = nilai replika terbesar

X2 = nilai replikasi terkecil
Sebagai pedoman variasi analitis yang dapat diharapkan dari analisis sampel dua kali (Tabel 1). Variasi
analitik dalam hal ini adalah dua kali koefisien variasi atau deviasi standar relatif:
Tabel 1
Variasi Analitik (AV) dalam [%]; x = konsentrasi analit
Analis AV (%)
Kelembaban (Massa Kering) 12
Protein 20/x + 2
Gemuk 10
Serat Kasar 30/x + 6
Abu 45/x + 3
Total gula sebagai invert 12
Kalsium 10
Fosfor 3/x + 8
Garam 7/x + 5
vitamin A 30
Sumber: Dari Association of American Control Officials 2011, Official Publication 2011, halaman 298-299.
Untuk pedoman mengenai keakuratan atau persen perolehan kembali sampel kendali mutu, seseorang
dapat menggunakan “Pedoman Internasional untuk Validasi Laboratorium Tunggal Metode Kimia” AOAC (Tabel
2).
Meja 2
Batas Pemulihan yang Dapat Diterima
Konsentrasi Batas Pemulihan (%)
100% 98 - 101
10% 95 - 102
1% 92 - 105
0,1% 90 - 108
0,01% 85 - 110
10 ÿg/g (ppm) 80 - 115
1 ÿg/g (ppm) 75 - 120
10 ÿg/kg (ppb) 70 - 125
Untuk menghitung persen pemulihan dari bahan referensi:

Persen pemulihan % = (Xr / Xk) x 100
Di mana,
Xr = nilai pengamatan bahan acuan
Xk = bersertifikat atau nilai sebenarnya dari bahan referensi
Penelusuran Hasil
Karena semua pengukuran yang dilakukan oleh laboratorium harus dapat ditelusuri ke
Sistem Satuan Internasional (SI), ahli metrologi yang mengontrak harus memberikan bukti
ketertelusuran pengukuran dari standar pengukuran dan instrumen pengukurannya sendiri
ke SI. Selanjutnya, mereka harus menyediakan dokumentasi yang menunjukkan kemampuan
pengukuran dan kompetensi untuk melakukan layanan kalibrasi yang diminta oleh
laboratorium. Sertifikat kalibrasi untuk instrumen laboratorium (timbangan, pipet, dll.) harus
memuat hasil pengukuran beserta ketidakpastian pengukuran dan pernyataan kesesuaian
dengan spesifikasi metrologi yang diidentifikasi. Standar yang dibeli harus disertai dengan sertifikat analisis.
Uji Kemahiran (Jaminan Mutu Eksternal)

Berpartisipasi dalam program uji sampel profisiensi memungkinkan penilaian keakuratan
dan presisi laboratorium. Jika memungkinkan, matriks dan pengujian program harus sesuai
dengan matriks dan pengujian yang dilakukan di laboratorium. Untuk mengevaluasi kinerja
laboratorium, nilai “Z” dihitung. Setiap nilai Z ÿ 2 adalah memuaskan, nilai antara 2 dan 3
dipertanyakan dan setiap nilai ÿ 3 tidak memuaskan, sehingga memerlukan penyelidikan dan
tindakan perbaikan. Nilai Z dihitung dengan mengambil selisih antara hasil laboratorium dan
hasil yang dilaporkan program dan membagi selisih tersebut dengan standar deviasi yang
dilaporkan program. Dengan kata lain nilai Z adalah berapa simpangan baku hasil
laboratorium terhadap nilai konsensus. Association of American Feed Control Officials
(AAFCO), Ameri-can Association of Cereal Chemists (AACC), American Oil Chemists'
Society (AOCS) semuanya menyediakan program-program tersebut. Sistem Informasi PT
Eropa (EPTIS) menyimpan daftar program kemahiran terkini yang tersedia. Laboratorium
harus memiliki jadwal partisipasi dalam skema profisiensi yang terdokumentasi (Tabel 3).
Tabel 3
Organisasi yang menyediakan uji kemahiran dan sampel referensi pakan ternak
Organisasi Alamat Email Telepon Situs web
AAFCO 175 S. Jalan Universitas +1 7654941565 vsiegel@purdue.edu www.aafco.org

(Asosiasi Amerika IN47907-2063
Pejabat Pengawasan Pakan) Lafayette Barat
Indiana AS
IAG – Bahan Makanan 191 Spargelfeldstrasse +43 5055532700 Renate.oeschlmueller@ages.at www.ages.at

(Analitis Internasional 1220 Wina
Kelompok, bagian makanan) Austria
BIPEA 6-14 pagi. Louis Roche +33 147335460 Hubungi@bipea.org www.bipea.org

(Biro InterProfessionnel d'Etude F-92230 Gennevillier
Analytic) Perancis
FAPAS Pasir Hutton +44 1904462100 info@fapas.com www.fapas.com

(Kinerja Analisis Pangan YO41 1 LZ York
Skema Penilaian) Inggris
LGC 1 Ruang Kamar +44 1617622500 layanan pelanggan@lgcpt.com www.lgc.co.uk

(Laboratorium Taman Bisnis
Ahli Kimia Pemerintah) BL9 0AP Lancashire
Inggris
WEPAL Kotak PO 8005 +31 317482337 Info.wepal@wur.nl www.wepal.nl

(Evaluasi Wageningen NL-6700 EC Wageningen
Program untuk Analitik Belanda
Laboratorium)
Bagan Kontrol – Kontrol Proses Statistik

Untuk memastikan bahwa metode laboratorium berada dalam kendali statistik, kinerja laboratorium harus
dievaluasi menggunakan grafik kendali. Grafik mean atau X-bar dirancang untuk menunjukkan perubahan
nilai rata-rata jangka panjang untuk sampel yang dianalisis dengan metode tertentu.
Bagan rentang, atau batang R, dirancang untuk menunjukkan perubahan dalam pengulangan suatu
prosedur. Jika program perangkat lunak statistik tidak tersedia, data dapat diplot menggunakan prosedur
berikut:
Buatlah grafik dasar dengan menghitung rata-rata jangka panjang atau rata-rata keseluruhan dan
rentang rata-rata keseluruhan dengan membuat rata-rata setidaknya 6 set duplikat yang diperoleh selama
3 hari. Buat diagram batang X dengan menggambar garis horizontal padat di tengah halaman, beri label
“0”+, gambar garis putus-putus pada ± 1,25 (ini mewakili batas peringatan pada tingkat kepercayaan 95%.
Gambarlah dua garis lagi pada ± 1,88. Ini mewakili batas kendali pada tingkat kepercayaan 99%. Beri label
pada sumbu y dengan nilai-nilai ini dan apa yang diwakilinya, yaitu 1,88 adalah batas kendali atas dan -1,88
adalah batas kendali bawah. Rata-ratakan kedua hasil sampel kontrol. Hitung dan plot nilai Z sepanjang
sumbu Y dengan tanggal yang sesuai di sepanjang sumbu X. Nilai Z = (rata-rata dua kontrol dikurangi rata-
rata keseluruhan) dibagi dengan rentang rata-rata keseluruhan.
Buatlah diagram batang R dengan menggambar garis horizontal padat di bagian bawah halaman, beri label
“0”. Gambarkan garis putus-putus satu pada ± 2,51 yang mewakili tingkat peringatan pada tingkat
kepercayaan 95% dan yang kedua pada ± 3,27 yang mewakili batas kendali pada tingkat kepercayaan 99%.
Bagilah perbedaan dua sampel kontrol dengan rata-rata keseluruhan rentang kontrol dan plotkan pada
grafik di sepanjang sumbu Y dengan tanggal di sepanjang sumbu X.
Peta kendali harus dievaluasi setelah setiap kelompok sampel dianalisis dan diperiksa
untuk memastikan semuanya sesuai spesifikasi sebelum hasilnya dilaporkan kepada pelanggan.
Proses terkendali jika:
1) Semua titik pada grafik batang X dan batang R berada dalam batas kendali (sesuai dengan batasan
yang tercantum di bawah).
2) Satu dan hanya satu nilai rata-rata dalam 20 terakhir berada di luar batas kendali dan nilai
rentangnya tidak.
3) Satu dan hanya satu nilai kisaran dalam 20 terakhir berada di luar batas kendali dan nilai meannya
tidak.
4) Penyebab spesifik dari titik di luar kendali telah diidentifikasi dan dihilangkan.
bernama.
Prosesnya di luar kendali terhadap mean (grafik batang X) jika:

1) Lebih dari satu titik rata-rata dalam 20 titik terakhir telah melampaui batas kendali atas atau bawah
tetapi rentangnya masih dalam kendali.
2) Kedua nilai rata-rata individu untuk pengendalian tertentu berada di luar batas peringatan meskipun rata-ratanya tidak
berada di luar batas peringatan.
3) Tujuh rata-rata yang berurutan semuanya berada pada satu sisi garis “0”.
4) Tujuh berturut-turut berarti jatuh dengan pola naik atau turun yang konsisten.
5) Terdapat lintasan empat sarana antara batas peringatan atas dan batas kendali atas atau antara
batas peringatan bawah dan batas kendali bawah.
Prosesnya berada di luar kendali terhadap rentang (grafik batang R) jika:

1) Lebih dari satu poin dalam dua puluh terakhir telah melampaui batas kendali dan keduanya
nilai x berada di luar batas peringatan pada grafik X.
2) Titik-titik pada grafik batang X dan batang R berada di luar batas kendali.
3) Tujuh titik berturut-turut jatuh dalam pola naik atau turun yang konsisten pada
poin.
4) Terdapat jarak empat titik antara batas peringatan dan batas kendali.
Suatu metode tidak lepas kendali jika analis mengetahui bahwa dia melakukan sesuatu yang berbeda atau
ada kesulitan yang dialami dengan prosedur atau peralatan pada suatu himpunan. Hal ini harus dicatat
pada lembar kerja yang sesuai. Peta kendali hanya memungkinkan untuk menentukan apakah variasi yang
diamati dapat dijelaskan dengan variasi acak atau tidak. Variasi atau batasan yang dapat diterima ditentukan
oleh pelanggan laboratorium.
Lihat Gambar 2 dan Gambar 3 untuk contoh diagram kendali Mean dan Range.
Dokumentasi dan Pengendalian Dokumen

Dokumen mutu yang membentuk sistem manajemen harus dikendalikan. Prosedur pengendalian dokumen
laboratorium menjelaskan proses pengendalian dokumen mutu yang diperlukan untuk menghasilkan data
laboratorium. Dokumen-dokumen tersebut meliputi yang diterbitkan oleh laboratorium dan yang diterbitkan
secara eksternal. Dokumen yang berasal dari luar meliputi peraturan, standar, metode pengujian, instruksi
dan manual.
Dokumen yang diterbitkan untuk personel di laboratorium sebagai bagian dari sistem manajemen
ditinjau dan disetujui untuk digunakan sebelum diterbitkan sesuai dengan prosedur pengendalian dan
manajemen dokumen laboratorium. Daftar prosedur induk laboratorium mengidentifikasi status revisi terkini
dan distribusi dokumen. Melalui penggunaan daftar induk, dokumen mutu dikeluarkan untuk personel untuk
mencegah penggunaan dokumen usang.
Daftar induk laboratorium dan pengendalian dokumen serta prosedur pengelolaan catatan mengatur
hal-hal berikut:
•Dokumen sistem manajemen resmi dan dokumen eksternal disimpan di
titik penggunaan.
•Dokumen ditinjau sesuai jadwal dan direvisi untuk memastikan kesesuaian dan kesesuaian dengan
sistem manajemen, tanggal revisi yang sesuai akan diberikan untuk setiap dokumen.
•Dokumen yang tidak valid atau usang segera dihapus dari semua tempat penerbitan atau penggunaan
untuk menjamin terhadap penggunaan yang tidak disengaja.
•Dokumen usang yang disimpan untuk tujuan hukum atau pelestarian pengetahuan
ditandai sebagai diarsipkan atau usang.
•Untuk menghindari kemungkinan prosedur yang berbeda digunakan pada waktu yang sama di lokasi
yang berbeda, amandemen tangan atau salinan yang tidak terkontrol tidak boleh diizinkan.
• Header pengendalian dokumen, sebagaimana dijelaskan dalam prosedur pengendalian dan
pengelolaan dokumen laboratorium, secara unik mengidentifikasi dokumen sistem manajemen yang
dihasilkan oleh laboratorium. Identifikasi tersebut mencakup tanggal revisi, nomor identifikasi, otoritas
penerbit dan penomoran halaman. •Usulan
perubahan dokumen ditinjau dan disetujui sesuai dengan
Gambar 2
Bagan X-Bar untuk Serat Deterjen Asam (UCL, Batas kendali atas; LCL, batas kendali bawah)
12
UCL = 11,72
11.6
11.2
Garis tengah = 10,94

Duplikat
10.8
10.4
KPK = 10,16
10
0 10 20 30 40
Jalan analitis
Gambar 3
Tabel rentang untuk Serat Deterjen Asam (UCL, Batas kendali atas; LCL, batas kendali bawah)
1.6
UCL = 1,35
1.2
0,8
0,4 Garis tengah = 0,41
0 KPK = 0,00
0 10 20 30 40
Jalan analitis
prosedur pengendalian dan pengelolaan dokumen laboratorium. Kecuali ditentukan lain,

prosedur ini diikuti oleh personel yang sama seperti pada peninjauan atau persetujuan
awal.
•Teks yang diubah atau baru diidentifikasi baik di dalam dokumen, di halaman sampul, atau
di lampiran. Log pembaruan, yang disertakan di halaman pertama dokumen baru,
menyederhanakan identifikasi perubahan apa pun.
• Prosedur pengendalian dan pengelolaan dokumen laboratorium membahas pengendalian tersebut
dokumen sistem manajemen elektronik.
Keamanan Laboratorium
Sebagai seorang karyawan Anda mempunyai tanggung jawab untuk melakukan pekerjaan Anda dengan baik dan aman. Prioritas
laboratorium adalah menawarkan tempat kerja yang bebas dari bahaya yang dapat dikenali dan dapat dihindari terhadap kesehatan
dan keselamatan Anda.
Namun keselamatan tidak dapat diwajibkan atau diberikan kepada karyawan. Sebaliknya, Anda harus melakukan
upaya sadar untuk membantu memastikan kondisi yang aman bagi diri Anda sendiri dan pekerja lain di area tersebut. Hal
ini memerlukan pemahaman tentang potensi bahaya di tempat kerja dan pengetahuan tentang kebijakan dan peraturan
dalam menangani bahaya tersebut.
Ada sumber risiko yang tidak dapat dihindari di lingkungan kerja mana pun, khususnya di laboratorium. Untuk
menjaga agar bahaya tidak menyebabkan cedera, setiap individu harus mengetahui cara menggunakan alat dan
perlengkapan dengan aman dan diberi informasi tentang apa yang harus dilakukan jika terjadi kebakaran, cedera, atau
keadaan darurat lainnya. Namun, informasi saja tidak cukup. Keselamatan dalam pekerjaan merupakan suatu sikap dan
juga pengetahuan. Hal ini berarti menyadari bahwa kecelakaan tidak hanya terjadi pada orang-orang yang tidak mengetahui
cara mencegahnya. Seringkali para veteran berpengalaman, orang yang “lebih tahu”, yang menjadi korban karena
membiarkan keakraban menghilangkan kewaspadaan.
Anda harus menjaga kesadaran terus-menerus. Ini melibatkan komitmen pribadi Anda untuk melakukan setiap
pekerjaan dengan aman.
Pekerja lain harus diperingatkan akan bahaya jika mereka tidak mengikuti prosedur keselamatan, kejadian ini harus
didokumentasikan.
Supervisor dan petugas Keselamatan harus diidentifikasi. Personil ini harus diberitahu
segera dari peralatan darurat yang rusak atau potensi bahaya lainnya.
Dengan berpartisipasi dalam komite keselamatan, membantu dalam melakukan inspeksi keselamatan dan
memastikan bahwa semua praktik keselamatan dilakukan setiap saat, Anda dapat memastikan semua pekerjaan dilakukan
dengan cara yang aman.
Tidak ada pekerjaan yang begitu penting sehingga tidak ada waktu untuk melakukannya dengan aman dan benar!
Untuk informasi lebih lanjut mengenai Kesehatan & Keselamatan di laboratorium, lihat 'Keamanan Laboratorium' (lihat
halaman 61).
Audit/Tindakan Korektif/Tinjauan Manajemen

Audit internal dilakukan sesuai kebutuhan (minimal setiap tahun). Audit internal dilakukan untuk memverifikasi bahwa
operasi terus memenuhi persyaratan sistem manajemen mutu.
Jadwal audit internal membahas seluruh elemen sistem manajemen, termasuk aktivitas analitis. Manajer Penjaminan
Mutu Laboratorium bertanggung jawab atas koordinasi audit internal selain audit tambahan yang diminta oleh manajemen
atau diidentifikasi melalui anomali.
Personel yang terlatih dan berkualifikasi bertanggung jawab untuk melakukan audit internal. Auditor boleh melakukan
audit di wilayahnya sendiri, namun tidak boleh mengaudit pekerjaannya sendiri.
Ketika temuan audit meragukan efektivitas operasi atau kinerja korporat,

kebenaran atau validitas hasil analisis laboratorium, prosedur tindakan perbaikan laboratorium
dimulai.
Pelanggan diberitahu jika investigasi menunjukkan bahwa ketidaksesuaian yang terkait dengan hasil
audit telah mempengaruhi pekerjaan yang dilakukan untuk pelanggan. Pemberitahuan ini didokumentasikan
dan penilaian dampak dilakukan untuk mengidentifikasi kemungkinan hasil yang tidak wajar yang
dikeluarkan sebelum identifikasi temuan.
Bidang kegiatan yang diaudit, temuan audit, dan tindakan perbaikan dan pencegahan
(CAPA) yang timbul darinya dicatat sesuai prosedur audit laboratorium.
Kegiatan audit tindak lanjut dilakukan untuk memverifikasi dan mencatat pelaksanaan dan
efektivitas tindakan perbaikan yang diambil. Tindak lanjut ini dimasukkan sebagai bagian dari
proses tinjauan manajemen.
Prosedur tinjauan manajemen laboratorium memuat jadwal pelaksanaan tinjauan manajemen.
Tinjauan ini dilakukan oleh manajemen eksekutif laboratorium untuk memastikan kesesuaian
penggunaan dan efektivitas sistem manajemen dan untuk memperkenalkan perubahan yang
diperlukan dan mengidentifikasi peluang untuk perbaikan.
Tinjauan manajemen membahas elemen sistem manajemen dan
mencakup namun tidak terbatas pada unsur-unsur berikut:
•Kesesuaian kebijakan dan prosedur;
•Laporan dari personel manajerial dan pengawasan;
•Hasil audit internal terkini;
•Tindakan perbaikan dan pencegahan;
•Penilaian oleh badan eksternal;
•Hasil perbandingan antar laboratorium (uji profisiensi);
•Perubahan volume dan jenis pekerjaan;
•Timbal balik pelanggan;
• Keluhan; Dan
•Faktor lain, seperti aktivitas kendali mutu, sumber daya, dan pelatihan staf.
Temuan dan tindakan yang timbul dari tinjauan tersebut dicatat sesuai dengan prosedur tinjauan
manajemen laboratorium. Setiap tindakan mencakup tanggal target untuk penyelesaian.
tion.
21
Prosedur mutu
Memvalidasi Metode Baru

Ringkasan
Prosedur ini menjelaskan bagaimana laboratorium harus memilih dan memvalidasi prosedur
analisis laboratorium baru. Laboratorium akan menggunakan metode yang memenuhi
kebutuhan pelanggannya. Metode standar lebih disukai; namun, metode non-standar dan yang
dikembangkan di laboratorium dapat digunakan jika dianggap lebih tepat.
Cakupan
Prosedur ini berlaku untuk semua prosedur analitis yang digunakan di laboratorium.
Tanggung jawab
Analis Laboratorium menyelidiki metode yang tersedia, melakukan pengujian, menghasilkan dan menganalisis
data.
Manajer/Direktur Laboratorium mengevaluasi dan mengotorisasi metode, meninjau dan menyetujui data.
Manajer Mutu menentukan persyaratan validasi dan menyetujui metode.
Prosedur
Pemilihan metode
Kebutuhan akan metode baru akan ditentukan. Hal ini dapat dimulai oleh Manajer Lab, Manajer Mutu, Analis
Laboratorium, atau pelanggan.
Metode yang tersedia akan diselidiki dan dievaluasi oleh Analis Laboratorium dan Manajer Lab. Biaya/
manfaat akan menjadi bagian dari proses evaluasi.
Metode yang dipilih akan disetujui oleh Manajer Mutu.
Validasi/ Verifikasi metode
1. Menentukan prosedur pengembangan metode (Quality Manager).

2. Manajer/Direktur Laboratorium akan menugaskan Analis Laboratorium untuk proyek tersebut.
3. Analis Laboratorium akan membeli bahan kimia, perlengkapan, dan peralatan yang sesuai.
4. Analis Laboratorium akan menyiapkan dokumentasi tertulis yang merangkum prosedur yang akan
digunakan. CATATAN: Modifikasi prosedur yang digunakan sering kali diperlukan.
5. Manajer Mutu akan menyetujui prosedurnya.
6. Analis Laboratorium akan mengumpulkan data awal dan menyerahkan hasilnya ke Bagian Mutu
Manajer untuk ditinjau.
7. Analis Laboratorium akan menyelesaikan pengumpulan data.
8. Manajer/Direktur Laboratorium akan meninjau data, menyiapkan ringkasan, dan menyerahkan laporan
kepada Manajer Mutu.
9. Akan disiapkan SOP.
Kriteria Penerimaan Validasi Minimum

1. Akurasi/Pemulihan. Minimal 7 analisis independen per tingkat konsentrasi yang mencakup
rentang analitis. Sebaiknya menggunakan bahan referensi bersertifikat (CRM). Jika CRM
tidak tersedia, sampel program uji kemahiran dapat digunakan.
Standar/bahan kimia yang dimurnikan dapat digunakan jika tidak ada sampel referensi lain yang tersedia.
Sampel berduri mungkin juga diperlukan. Metode yang paling tidak disukai untuk menentukan keakuratan
penambangan adalah dengan membandingkan hasil dengan hasil yang diperoleh dengan menggunakan
prosedur lain yang sudah divalidasi.
2. Presisi. Biasanya untuk validasi lab tunggal, Analis Laboratorium harus melakukan r
analisis ulangan dari m bagian pengujian selama periode d hari untuk setiap jenis sampel
(matriks) n, di mana r adalah jumlah ulangan (2, 3,…), m adalah jumlah porsi tes pada
setiap kelompok, d adalah jumlah hari, dan n adalah jumlah jenis sampel yang berbeda.
r x m tidak boleh kurang dari 10
n harus minimal 2 (sebaiknya lebih)

d harus minimal 2
3. Kalibrasi. Garis kalibrasi harus mencakup 4–5 titik referensi. Kalibrasi titik tunggal harus
digunakan dengan hati-hati. Koefisien korelasi > 0,99 harus menjadi tujuan tetapi dengan
perangkat lunak pemasangan garis modern, garis kalibrasi non linier dapat diterima.
4. Batas deteksi (LOD) dan batas kuantifikasi (LOQ). Untuk beberapa pelanggan, LOD
harus ditunjukkan. Biasanya ini didefinisikan sebagai konsentrasi analit pada 3 kali sinyal
yang dihasilkan dengan menganalisis blanko. Bagi banyak laboratorium, LOD tidak
sepenting LOQ. Biasanya ini didefinisikan sebagai konsentrasi analit 10 kali lipat dari
sinyal yang dihasilkan dengan menganalisis blanko. Namun, LOQ yang berguna adalah
tingkat analit terendah yang dapat diukur oleh laboratorium dengan akurasi dan presisi
yang dapat diterima oleh pelanggannya. Kecuali ditentukan lain, laboratorium harus
mendokumentasikan LOD/LOQ yang umum (blangko 3x dan 10x). CATATAN: Secara
umum, laboratorium tidak boleh melaporkan hasil analisis apa pun yang tidak diberi tanda kurung pada kur
5. Kriteria. Batasan target akurasi dan presisi dapat diambil dari AOAC (Horwitz).
Presisi atau keterulangan dihitung sebagai deviasi standar relatif (koefisien variabilitas)
dan akurasi dihitung sebagai % pemulihan (Tabel 1).
Tabel 1
Batas sasaran ketelitian dan ketelitian
Konsentrasi Pengulangan (%) Pemulihan (%)
100% 1.3 98 – 102
10% 1.9 98 – 102
1% 2.7 97 – 103
0,1% 3.7 95 – 105
0,01% 5.3 90 – 107
0,001 % 7.3 80 – 110
1 ppm 11 80 – 110
100 ppb 15 80 – 110
10 ppb 21 60 – 115
1 hal 30 40 – 120
Bagian I – Prosedur mutu 23
Memvalidasi Kalibrasi NIR

Prinsip
Sampel yang mewakili komposisi kimia bahan sampel diukur dengan spektrometri NIR. Data spektral di
wilayah inframerah dekat dikumpulkan dan diubah menjadi konsentrasi konstituen atau parameter melalui
model kalibrasi yang dikembangkan pada sampel yang representatif.
Instrumen inframerah-dekat (NIR).

Instrumen NIR didasarkan pada reflektansi difus atau pengukuran transmitansi dalam jarak dekat
wilayah panjang gelombang inframerah 700–2500 nm (14300–4000 cm-1) atau segmen ini atau pada
panjang gelombang atau bilangan gelombang tertentu. Prinsip optiknya dapat bersifat dispersif (misalnya
monokromator kisi-kisi) interferometri atau nontermal (misalnya dioda pemancar cahaya, dioda laser, dan
laser). Instrumen harus dilengkapi dengan sistem uji diagnostik untuk menguji kebisingan fotometrik dan
reproduktifitas, akurasi panjang gelombang/bilangan gelombang, dan panjang gelombang/
presisi bilangan gelombang (untuk pemindaian spektrofotometer). Instrumen harus mengukur volume atau
permukaan sampel yang cukup besar untuk menghilangkan pengaruh signifikan ketidakhomogenan yang
berasal dari komposisi kimia atau sifat fisik sampel uji.
Panjang jalur sampel (ketebalan sampel) dalam pengukuran transmitansi harus dioptimalkan sesuai
dengan rekomendasi pabrikan sehubungan dengan intensitas sinyal untuk mendapatkan linearitas dan
rasio sinyal/kebisingan maksimum. Dalam pengukuran reflektansi, jendela kuarsa atau bahan lain yang
sesuai untuk menghilangkan efek pengeringan sebaiknya menutupi lapisan permukaan sampel yang
berinteraksi.
Kalibrasi dan validasi awal
Instrumen harus dikalibrasi sebelum digunakan. Prosedur ini berkaitan dengan kalibrasi yang diproduksi
sendiri atau dibeli dari penyedia eksternal.
Kalibrasi harus mempunyai jumlah sampel yang mewakili dan mencakup variasi seperti:
a) Kombinasi dan rentang komposisi komponen sampel mayor dan minor;

b) Dampak musiman, geografis dan genetik terhadap hijauan, bahan mentah pakan dan sereal;
c) Teknik dan kondisi pengolahan;
d) Kondisi penyimpanan; Dan
e) Sampel dan suhu instrumen.
Kalibrasi harus dilengkapi dengan informasi statistik mengenai kinerjanya seperti jumlah dan jenis
sampel, korelasi, kesalahan standar kalibrasi dan prediksi, serta dalam format yang memungkinkan
identifikasi outlier.
Analisis referensi dan pengukuran NIR

Metode referensi yang diterima secara internasional untuk penentuan kadar air, lemak, protein dan unsur
serta parameter lainnya harus digunakan.
Metode referensi yang digunakan untuk kalibrasi harus berada dalam kendali statistik, yaitu untuk
sampel apa pun, variabilitasnya harus terdiri dari variasi acak dari sistem yang dapat direproduksi. Penting
untuk mengetahui ketepatan metode referensi.
Pencilan
Dalam banyak situasi, outlier statistik diamati selama kalibrasi dan validasi. Outlier dapat berkaitan
dengan data NIR (spectral outlier, selanjutnya disebut x-outlier) atau kesalahan pada data referensi atau
sampel yang memiliki hubungan berbeda antara data referensi dan data NIR (selanjutnya disebut y-
outlier).
Untuk tujuan validasi, sampel tidak dianggap outlier jika memenuhi ketentuan berikut:
a) Berada dalam jangkauan kerja konstituen/parameter dalam

kalibrasi;
b) Mereka berada dalam variasi spektral sampel kalibrasi, misalnya diperkirakan
dengan jarak Mahalanobis; Dan
c) Dan jika sisa spektral berada di bawah batas yang ditentukan oleh proses kalibrasi.
Berurusan dengan outlier. Jika suatu sampel muncul sebagai outlier maka sampel tersebut harus diperiksa terlebih dahulu untuk melihat
apakah sampel tersebut merupakan x-outlier. Jika melebihi batas x-outlier yang ditentukan untuk kalibrasi, maka seharusnya demikian
Dihilangkan. Jika bukan merupakan x-outlier, maka nilai referensi dan nilai prediksi NIR harus diperiksa.
Jika ini mengkonfirmasi nilai asli maka sampel tidak boleh dihapus dan statistik validasi harus menyertakan
sampel ini. Jika nilai pengulangan menunjukkan bahwa nilai referensi asli atau nilai prediksi NIR salah,
maka nilai baru harus digunakan.
Validasi model kalibrasi. Sebelum digunakan, persamaan kalibrasi harus divalidasi secara lokal pada
perangkat pengujian independen yang mewakili populasi sampel yang akan dianalisis.
Untuk penentuan bias, diperlukan minimal 10 sampel; untuk penentuan Standard Error of Prediction
(SEP) minimal diperlukan 20 sampel.
Validasi harus dilakukan untuk setiap jenis sampel, konstituen/parameter dan suhu.
sifat.
CATATAN: Latihan validasi hanya berlaku untuk jenis sampel, rentang dan suhu
digunakan dalam validasi.
Hasil yang diperoleh pada set pengujian independen diplot, direferensikan terhadap NIR, dan residu
terhadap hasil referensi, untuk memberikan gambaran visual tentang kinerja kalibrasi. SEP dihitung dan
plot sisa data dikoreksi untuk kesalahan sistematik rata-rata (bias) diperiksa untuk outlier, yaitu sampel
dengan sisa melebihi 3 x SEP.
Jika proses validasi menunjukkan bahwa model tidak dapat menghasilkan statistik yang dapat diterima maka
itu tidak boleh digunakan.
Kriteria validasi
Langkah selanjutnya adalah melakukan fit NIR dan data referensi melalui regresi linier (referensi = a + bx NIR)
sehingga menghasilkan statistik yang menggambarkan hasil validasi.
Koreksi bias. Data juga diperiksa untuk mengetahui bias antar metode. Jika berbeda-
Jika nilai prediksi NIR dan nilai referensi berbeda secara signifikan dari nol maka hal ini menunjukkan
bahwa kalibrasinya bias. Bias dapat dihilangkan dengan menyesuaikan suku konstanta dalam persamaan
kalibrasi.
Penyesuaian kemiringan. Jika kemiringan (b) berbeda secara signifikan dari 1, kalibrasinya miring.
Menyesuaikan kemiringan/intersep kalibrasi umumnya tidak disarankan kecuali kalibrasi
diterapkan pada sampel atau instrumen jenis baru. Jika investigasi ulang kalibrasi tidak mendeteksi
outlier, terutama outlier dengan leverage tinggi, sebaiknya memperluas set kalibrasi untuk
menyertakan lebih banyak sampel.
Namun, jika kemiringannya disesuaikan, kalibrasi kemudian harus diuji pada set pengujian
independen yang baru.
Perluasan set kalibrasi. Jika kesalahan kalibrasi tidak memenuhi harapan, set kalibrasi harus
diperluas untuk mencakup lebih banyak sampel atau dilakukan kalibrasi baru. Dalam semua kasus
ketika kalibrasi baru dikembangkan pada set kalibrasi yang diperluas, proses validasi harus diulang
pada set validasi baru. Jika perlu, perluasan set kalibrasi harus diulang sampai diperoleh hasil
validasi yang dapat diterima
mengatur.
Perubahan kondisi pengukuran dan instrumen. Kecuali jika validasi tambahan dilakukan, validasi
lokal terhadap metode NIR yang menyatakan keakuratan metode tersebut secara umum tidak dapat
dianggap valid jika kondisi pengujian diubah.
Misalnya, kalibrasi yang dikembangkan untuk populasi sampel tertentu mungkin tidak valid untuk
sampel di luar populasi ini, meskipun rentang konsentrasi analit tidak berubah. Kalibrasi yang
dikembangkan pada silase rumput dari satu area mungkin tidak memberikan akurasi yang sama
pada silase dari area lain jika parameter genetik, pertumbuhan, dan pengolahannya berbeda.
Perubahan dalam teknik penyajian sampel atau kondisi pengukuran (mis.

perature) yang tidak termasuk dalam set kalibrasi juga dapat mempengaruhi hasil analisis.
Kalibrasi yang dikembangkan pada instrumen tertentu tidak selalu dapat ditransfer langsung ke
instrumen identik yang beroperasi berdasarkan prinsip yang sama. Mungkin perlu melakukan
penyesuaian bias dan kemiringan/intersep terhadap persamaan kalibrasi. Dalam banyak kasus,
kedua instrumen perlu distandarisasi satu sama lain sebelum persamaan kalibrasi dapat ditransfer.
Prosedur standardisasi dapat digunakan untuk mentransfer kalibrasi antar instrumen dari jenis yang
berbeda asalkan sampel diukur dengan cara yang sama (reflektansi, transmitansi) dan wilayah
spektralnya sama.
Jika kondisinya berubah, validasi tambahan harus dilakukan.
Kalibrasi harus diperiksa setiap kali ada bagian utama instrumen (sistem optik, detektor) yang
diubah atau diperbaiki.
Statistik untuk pengukuran kinerja

Performa model prediksi harus ditentukan oleh sekumpulan sampel validasi.
Set ini terdiri dari sampel yang tidak bergantung pada set kalibrasi. Di pabrik, itu akan menjadi batch
baru; di bidang pertanian, itu akan menjadi tanaman baru atau lokasi percobaan baru. Kumpulan
sampel ini harus dianalisis secara cermat dengan mengikuti metode referensi. Kehati-hatian dalam
menganalisis sampel validasi harus ditekankan dan ketepatan hasil ini lebih penting untuk set
validasi dibandingkan sampel yang digunakan pada tahap kalibrasi.
Jumlah sampel validasi harus minimal 20 untuk menghitung statistik dengan yakin.
Gambarkan hasilnya. Penting untuk memvisualisasikan hasil dalam plot, misalnya nilai prediksi vs. nilai
referensi, atau residu vs. prediksi.
Residu didefinisikan sebagai:
Residu = y – x
Di mana,
y adalah nilai referensi, ditentukan dengan metode standar, dan

x adalah nilai prediksi yang diperoleh saat menerapkan model NIR multivariat.
Cara penghitungan selisihnya akan memberikan bias negatif bila prediksi terlalu tinggi dan bias positif bila
prediksi terlalu rendah dibandingkan dengan nilai acuan.
Plot data segera memberikan gambaran tentang korelasi, bias, kemiringan dan Intersep serta
keberadaan outlier yang jelas (Gambar 1).
Biasnya. Seringkali bias atau kesalahan sistematis diamati pada model NIR.
Bias dapat terjadi karena beberapa sebab: sampel baru yang jenisnya belum pernah terlihat sebelumnya
oleh model, penyimpangan instrumen, penyimpangan kimia basah, perubahan proses, dan penyiapan
sampel. Dengan n jumlah sampel independen, bias (atau offset) adalah perbedaan rata-rata dan dapat
didefinisikan sebagai:
Bias = Mean (Data Referensi) – Mean (Data Prediksi NIR)
Gambar 1
Plot sebar untuk set validasi
25
Garis pada 45 derajat

20
15
Bias Aneh
Referensi
10
Mencegat
0
0 5 10 15 20 25
NIR
Outlier mempunyai pengaruh yang kuat terhadap penghitungan kemiringan dan harus dihilangkan jika hasilnya ingin digunakan
untuk penyesuaian
Jika bias berbeda secara signifikan dengan 0 maka nilai bias tersebut dapat ditambahkan ke nilai
konstanta pada model kalibrasi untuk mengoreksi kesalahan sistematis tersebut.
Kemiringan. Kemiringan b dari regresi sederhana y = a + bx sering dilaporkan dalam laporan dan
publikasi NIR.
Perlu diperhatikan bahwa kemiringan harus dihitung dengan nilai referensi sebagai variabel terikat
dan nilai prediksi NIR sebagai variabel bebas, jika kemiringan yang dihitung dimaksudkan untuk
digunakan dalam penyesuaian hasil NIR. Kemiringan dapat dihitung dari fungsi excel = kemiringan (nilai
REF, nilai NIR)
Jika kemiringannya sangat berbeda dari 1 maka kalibrasi dapat disesuaikan sesuai dengan instruksi
pemasok, namun prosedur yang disarankan adalah memasukkan sampel validasi ke dalam set kalibrasi
dan mengkalibrasi ulang.
Untuk mengatur kalibrasi dengan kemiringan maka diperlukan juga intersep, hal ini bisa
dihitung dari fungsi excel = intersep (nilai REF, Nilai NIR)
Koefisien determinasi (R2). Korelasi (r) menunjukkan derajat kecocokan. Nilai yang diberikan dalam
validasi tidak boleh berbeda secara signifikan dengan statistik kalibrasi asli. Koefisien determinasi (R2)
dapat dihitung dari fungsi excel = RSQ (nilai REF, nilai NIR)
Apabila korelasinya berbeda nyata dengan statistik kalibrasi maka dilakukan validasi
sampel harus ditambahkan ke dalam set kalibrasi dan dikalibrasi ulang.
Kesalahan prediksi standar (SEP). SEP memberikan informasi keakuratan prediksi NIR terhadap nilai
referensi. SEP dapat dihitung dari fungsi excel =STEYX (nilai REF, nilai NIR)
Jika SEP berbeda secara signifikan dengan statistik kalibrasi maka sampel validasi
harus ditambahkan ke dalam set kalibrasi dan dikalibrasi ulang.
Kualifikasi (Pelatihan) Analis Laboratorium

Ringkasan
Dokumen ini menguraikan Prosedur Operasi Standar (SOP) untuk kualifikasi Analis Laboratorium
dalam metode analitis. Ada tahapan tertentu yang harus diikuti secara sistematis untuk mencapai tujuan
ini. Dokumen ini berfungsi untuk memperjelas prosedur/
kriteria kualifikasi.
Cakupan
Prosedur ini berlaku untuk semua analis dan metode laboratorium.
Tanggung jawab
Analis Laboratorium menyelidiki metode yang tersedia, melakukan pengujian, menghasilkan dan
menganalisis data dan menunjukkan kompetensi berkelanjutan.
Manajer/Direktur Laboratorium mengevaluasi dan mengotorisasi metode, meninjau dan menyetujui data
serta menunjukkan kompetensi berkelanjutan.
Manajer Mutu menentukan persyaratan validasi dan menyetujui metode tersebut.
Prosedur
Mengumpulkan informasi
Langkah pertama untuk lolos dalam analisis baru adalah membaca SOP. Salinan dokumen ini dapat
diperoleh dari Manajer/Direktur Laboratorium.
Untuk menjamin keselamatan semua orang, peserta pelatihan harus membaca Lembar Data Keamanan
Bahan (MSDS) untuk informasi mengenai setiap bahan kimia yang digunakan dalam analisis. Tingkat
toksisitas dan metode pembuangan limbah harus dipahami dengan jelas sebelum memulai analisis apa pun.
Jika Anda kesulitan menemukan MSDS terkini, hubungi Petugas Keselamatan laboratorium.
Amati dan Praktekkan
Setelah memahami protokol dan reagen, peserta pelatihan mengamati Analis Laboratorium yang
berkualifikasi dan kompeten melakukan prosedur tersebut. Untuk memastikan peserta pelatihan benar-
benar memahami analisis, ia harus melakukan setidaknya satu set latihan sebelum memulai set kualifikasi
yang sebenarnya. Rangkaian latihan harus terdiri dari berbagai jenis sampel dan mencakup sampel yang
menantang jika tersedia. Kualifikasi dapat dimulai jika 1) pengendalian kerja memenuhi persyaratan
akurasi dan presisi dalam set praktik dan 2) Manajer/Direktur Laboratorium memberikan izin kepada
peserta pelatihan. Peserta pelatihan harus berkonsultasi dengan Manajer/Direktur Laboratorium untuk
menentukan reagen spesifik mana yang harus disiapkan untuk analisis.
Jalankan Set Kualifikasi

Manajer/Direktur Laboratorium, atau orang yang ditunjuknya, memilih sampel yang akan dijalankan oleh
peserta pelatihan. Sebaiknya menggunakan sampel yang telah dijalankan dalam rangkap dua dan
menggunakan hasil rata-rata untuk tujuan perbandingan. Set harus terdiri dari berbagai jenis sampel.
Contoh nilai target akan diberikan kepada peserta pelatihan.
Jumlah dan jenis sampel yang dianalisis akan ditentukan oleh Manajer/Direktur Laboratorium. Sampel
dapat mencakup: sampel laboratorium, sampel kemahiran, sampel kontrol kerja, bahan referensi standar,
dan blanko. Minimal tiga set harus dianalisis.
Interpretasi Kualifikasi
Jumlah Sampel yang Tersedia Cukup – Outlier akan dievaluasi dan dihilangkan menggunakan uji outlier
Dixon. Data yang tersisa akan dibandingkan menggunakan uji t berpasangan. Jika tidak ada perbedaan
yang signifikan (P > 0,05) maka Analis Laboratorium memenuhi syarat untuk menjalankan prosedur
analitis. Apabila terdapat perbedaan data yang signifikan (P < 0,05) maka Manajer/Direktur Laboratorium
harus berkonsultasi dengan Manajer Penjaminan Mutu.
Jumlah Sampel yang Tersedia Tidak Memadai – Manajer/Direktur Laboratorium harus berkonsultasi
dengan Manajer Penjaminan Mutu untuk mengembangkan prosedur kualifikasi yang sesuai dengan
metode tersebut.
Dokumentasi
Manajer/Direktur Laboratorium akan menyerahkan memo kepada Manajer Mutu (dengan data terlampir)
yang mendokumentasikan kualifikasi analis laboratorium. Hal ini harus didokumentasikan dalam file
pelatihan individu.
Reagen dan Bahan Kimia

Ringkasan
Prosedur ini menjelaskan pelabelan yang diperlukan dan penggunaan reagen curah serta larutan
yang disiapkan. Ini mencakup informasi yang diperlukan untuk dicatat pada label reagen dan persiapan.
Cakupan
Prosedur ini berlaku untuk semua bahan kimia dan reagen yang digunakan di laboratorium.
Tanggung jawab
Analis Laboratorium menyelidiki metode yang tersedia, melakukan pengujian, menghasilkan dan menganalisis data.
Prosedur
Ketentuan Umum
Reagen curah, bahan kimia, dan larutan harus diberi label dengan benar.
Tanggal kadaluwarsa harus konsisten dengan pedoman dan pengecualian yang tercantum dalam SOP analit.
Tanggal kadaluarsa bahan kimia dan larutan yang disiapkan (reagen) harus dibuang dengan benar.
Limbah tidak boleh disimpan di laboratorium kecuali dalam wadah limbah yang telah ditentukan.
Reagen massal
Reagen curah adalah bahan kimia yang diterima dari distributor atau produsen dalam wadah asli pabrik yang
tersegel seperti botol, stoples, tas, ember, dll. Reagen tersebut digunakan saat diterima, atau dalam pembuatan
larutan yang digunakan dalam prosedur analitis.
Semua reagen curah harus diberi label dengan tanggal diterima dan informasi kadaluwarsa.
Label reagen curah harus memuat (setidaknya) informasi berikut:
•Tanggal penerimaan
•Inisial orang yang menerima barang

• Tanggal kedaluwarsa yang ditetapkan
•Tanggal dibuka
•Inisial orang yang membuka barang
Semua reagen curah, berapapun ukuran wadahnya, harus mempunyai label reagen curah.
Beberapa produsen memberi spasi pada label mereka untuk informasi yang diperlukan pada label reagen
massal. Melengkapi informasi pada label pabrikan ini tidak menggantikan label reagen curah yang disiapkan oleh
laboratorium.
Aturan umum untuk menetapkan tanggal kadaluarsa pada bahan kimia curah adalah untuk digunakan dalam
waktu 10 tahun, kecuali bahan kimia tersebut mempunyai tanggal kadaluwarsa yang ditetapkan oleh produsen
(eter, titran bersertifikat) atau sebagaimana tercantum dalam Prosedur Operasi Standar (SOP) analit tertentu.
Putar stok agar bahan kimia lama digunakan terlebih dahulu.
Jangan menyimpan pelarut dalam jumlah besar (lebih dari persediaan enam bulan).
Jika tanggal kadaluwarsa ditulis bulan/tahun, maka kadaluarsanya diperpanjang sampai akhir bulan/tahun
bulan. Tanggal kadaluwarsa semua bahan kimia harus ditinjau setidaknya sebulan sekali.
Bahan kimia kadaluwarsa harus dibuang: Pengecualian apa pun harus disetujui oleh Manajer/
Direktur Laboratorium. Buang bahan kimia hanya melalui sistem pengelolaan limbah yang disetujui.
Sertifikat Analisis (C of A) atau analisis lot diberikan untuk beberapa bahan kimia. AC dari A
diperlukan untuk bahan referensi standar. File sertifikat harus disimpan di lokasi yang sama dengan
catatan analitis.
Reagen curah yang dipindahkan ke wadah lain (botol pemeras, dispenser, dll.) harus
mengandung (minimal) informasi berikut:
• Nama reagen
•Nomor Lot Asli dari kontainer curah
•Inisial
•Tanggal habis tempo
•Informasi keselamatan jika diperlukan
Bahan kimia curah berikut dapat disimpan dalam botol pencuci standar yang diberi label sebelumnya
yang dapat dibeli: •Air
Deionisasi
•Etanol
•Aseton
•Isopropanol
• Metanol
Botol-botol ini harus berisi informasi seperti nama kimia, rumus molekul, efek organ target dan
informasi rute masuk, nomor CAS dan berlian peringatan bahaya atau piktogram CLP.
Solusi yang disiapkan (reagen)

Ada dua persyaratan untuk memberi label pada larutan yang disiapkan (reagen). Persyaratannya bergantung
pada apakah larutan digunakan pada hari yang sama saat larutan disiapkan atau apakah larutan akan
disimpan untuk jangka waktu yang lebih lama.
Same Day – Solusi yang disiapkan setiap hari harus memiliki hal-hal berikut:
•Nama reagen (isi)
•Konsentrasi
•Tanggal persiapan
•Inisial Analis Laboratorium
Penggunaan yang Diperpanjang – Larutan reagen yang tidak akan dibuang pada hari yang sama harus dimiliki
informasi berikut pada label:
•Nama reagen (isi)
•Konsentrasi
•Tanggal disiapkan
•Inisial analis (orang yang menyiapkan solusi)
•Nomor persiapan
•Tanggal kedaluwarsa
Nomor persiapan diperlukan pada semua solusi yang dibuat sendiri dengan yang berikut ini
pengecualian: Pengenceran larutan referensi stok untuk menyiapkan kurva standar.

Nomor persiapan tidak diperlukan dalam hal ini, tetapi nomor persiapan atau informasi untuk larutan stok
harus dicantumkan.
Aturan umum untuk tanggal kedaluwarsa atau solusi yang disiapkan sendiri adalah satu tahun.
Pengecualian terhadap aturan ini mencakup bahan kimia yang tanggal kadaluwarsanya telah ditentukan oleh
produsennya. Pengecualian juga dapat dicatat dalam prosedur analit.
CATATAN: Tanggal kadaluwarsa larutan tidak boleh melebihi kadaluwarsa komponen mana pun.
Salah satu format yang dapat digunakan untuk nomor preparasi adalah format XXXX-YYYY, dimana
XXXX adalah nomor buku catatan laboratorium dan YYYY adalah nomor urut yang diawali dengan 0001.
Angka 0 di depannya wajib diisi agar nomor tersebut selalu berupa angka empat digit.
Tes Pencilan
Ringkasan
Jika hasil sampel tidak terduplikasi dengan baik, pengujian outlier mungkin perlu dilakukan untuk menentukan
apakah hasil tertentu dapat dikecualikan dari pertimbangan. Uji outlier mungkin diperlukan pada kumpulan
data lain, seperti kualifikasi metode atau validasi metode.
Laboratorium menggunakan uji outlier Dixon (Dixon, 1995) dengan nilai kritis, pada error 5%, sebagaimana
tercantum dalam Wernimont (1995).
Cakupan
Prosedur operasi standar ini berlaku untuk semua data laboratorium.
Tanggung jawab
data.
Prosedur
Uji Dixon diterapkan pada hasil analisis
Untuk sampel bermasalah yang tidak memenuhi persyaratan duplikasi laboratorium, mungkin perlu ditentukan
apakah hasil analisis tertentu merupakan outlier. Lakukan langkah-langkah berikut untuk membuat penentuan
ini.
Jika terdapat empat hasil analisis laboratorium, cantumkan keempat hasil tersebut secara berurutan.
besarnya (W, X, Y, Z).
Hitung rentang (R) nilai (tertinggi – terendah) (Z – W)
Tentukan hasil manakah yang diduga outlier (W atau Z).
Hitung selisih (T) antara dugaan outlier dan tetangga terdekatnya:
Jika W dicurigai : Tw = X – W
Jika Z dicurigai: Tz = Z – Y
Hitung perbandingan (I):
Bila W dicurigai : I = Tw / R
Bila Z dicurigai : I = Tz / R
Jika I lebih besar atau sama dengan nilai kritis (N = 4) 0,829, maka angka yang dicurigai merupakan outlier
dan dapat dikeluarkan dari pertimbangan. Jika I kurang dari 0,829, maka angka yang dicurigai BUKAN
merupakan outlier dan harus tetap dipertimbangkan.
Tes Dixon sebagaimana diterapkan pada situasi lain

Prinsip yang sama di atas dapat diterapkan pada data numerik dimana N selain 4. Tabel 2 menampilkan nilai
kritis N antara 3 dan 40. CATATAN: Gunakan perhitungan yang berbeda untuk N > 8 (lihat referensi).
Jika kumpulan data lebih besar dari 40, bagi data secara acak menjadi dua dan uji outlier di kedua ujung
rentang hasil.
Referensi
Dixon, WJ 1953. Pengolahan Data untuk Outlier, Biometrik. Dokumen Organisasi Internasional untuk Standardisasi (ISO)
ISO 5725-1981, hlm.74–89.
Wernimont, GT 1985. Penggunaan Statistik untuk Mengembangkan dan Mengevaluasi Metode Analisis (W. Pengeluaran-
ley, ed.), AOAC, 1985, Arlington, VA. Tabel A-9, hal. 156.
Daftar Periksa Audit Mutu Laboratorium

Ringkasan
Tujuan audit mutu laboratorium adalah untuk mengevaluasi secara sistematis operasi laboratorium yang sedang
berlangsung untuk memastikan bahwa data analitik yang dihasilkan oleh laboratorium memenuhi kriteria mutu
yang ditetapkan untuk tujuan penggunaannya. Audit adalah alat yang digunakan untuk menilai efektivitas
program mutu, untuk mengidentifikasi peluang perbaikan dan digunakan dalam pelatihan staf analitis mengenai
persyaratan kebijakan mutu yang baik.
Data yang dihasilkan oleh laboratorium harus kuat dalam hal pertahanannya. Audit rutin membantu
memastikan bahwa data yang dihasilkan oleh laboratorium dapat dipertahankan, yaitu memenuhi standar yang
ditentukan dalam hal presisi, akurasi, ketertelusuran, kelengkapan, dan keterbandingan.
Daftar periksa terlampir mencakup aspek-aspek utama operasi laboratorium. Dalam banyak hal, ini
merupakan dokumen umum. Oleh karena itu, sistem ini dapat dan akan berkembang sesuai kebutuhan untuk
mengakomodasi perubahan sistem dan prosedur.
Ini adalah dokumen yang dirancang untuk digunakan sebagai bantuan selama audit fisik analisis prosedur
laboratorium analitik tunggal. Namun ruang lingkup audit tidak begitu terbatas.
Banyak fungsi pendukung laboratorium (misalnya kalibrasi dan pemeliharaan peralatan rutin, keselamatan,
pelatihan, prosedur operasi standar, validasi, dll.) juga ditangani saat melakukan audit. Program penjaminan
mutu yang efektif terdiri dari pengumpulan kegiatan yang terintegrasi dan audit meneliti dan mengevaluasi
kembali setiap kegiatan secara teratur.
Dalam mempersiapkan audit, auditor harus membaca dengan cermat Prosedur Operasi Standar untuk
prosedur analitis yang diaudit. Memiliki daftar rincian yang akan ditinjau (reagen, peralatan, standar, waktu,
suhu, dll.) membantu memfokuskan audit.
Meja 2
Nilai kritis untuk menilai uji outlier Dixon

N Nilai kritis N Nilai kritis
3 0,970 22 0,468
4 0,829 23 0,459
5 0,710 24 0,451
6 0,628 25 0,443
7 0,569 26 0,436
8 0,608 27 0,429
9 0,564 28 0,423
10 0,530 29 0,417
11 0,502 30 0,412
12 0,479 31 0,407
13 0,611 32 0,402
14 0,586 33 0,397
15 0,565 34 0,393
16 0,546 35 0,388
17 0,529 36 0,384
18 0,514 37 0,381
19 0,501 38 0,377
20 0,489 39 0,374
21 0,478 40 0,371
Secara umum, jika jawaban atas pertanyaan audit adalah tidak, dan jika terdapat ruang untuk “Komentar”,
maka diperlukan penjelasan mengenai kekurangan tersebut.
Cakupan
Prosedur operasi standar ini berlaku untuk seluruh operasional laboratorium.
Tanggung jawab
data.
Prosedur
Beberapa terminologi yang digunakan dalam Daftar Periksa Audit (Tabel 3)
Auditee – Analis Laboratorium yang bertanggung jawab yang melakukan analisis terhadap analit yang diaudit.
Auditor – Manajer Mutu, atau wakil yang ditugaskan, yang secara resmi meninjau proses
dan menghasilkan laporan/temuan audit dan mengidentifikasi peluang perbaikan.
Tabel 3
Halaman sampul audit
Contoh Daftar Periksa Audit Analisis
Tanggal audit dilakukan:
Auditor:
Identifikasi Sampel:
Analit:
Tanggal dianalisis:
Pihak yang diaudit
Manajer saat ini:
Manajer yang Bertanggung Jawab:
Cantumkan semua dokumentasi yang ditinjau dalam mempersiapkan dan melaksanakan audit ini
SOP (termasuk nomor versi): ______________________________________________
Dokumentasi yang berkaitan dengan data analitis ___________________________
Laporan Lembar Kerja ______________________________________________
Buku Catatan Lab # ______________________________________________
Catatan kalibrasi timbangan __________________________
basis data LIMS ______________________________________________________________________________
Data Kontrol Kerja ______________________________

Catatan Kalibrasi Pipet __________________________
Log pemantauan peralatan __________________________________________________
Lainnya: _________________________________________________________
Lainnya: _________________________________________________________
Lainnya: _________________________________________________________
Dokumentasi
1. Apakah terdapat salinan prosedur operasi standar analitis terbaru yang disetujui untuk analit yang diaudit
dan tersedia pada saat digunakan untuk dijadikan acuan oleh analis selama analisis?
TIDAK ______________ Ya ________________ Tak dapat diterapkan _______________________

Komentar __________________________________________________________________
2. Apakah prosedur operasi standar konsisten dengan metode yang diakui?

(Penyimpangan yang tidak sepele dari metode resmi harus divalidasi sebelum penerapan.)
Komentar __________________________________________________________________
3. Apakah seluruh data dan dokumen pendukung segera tersedia dan mudah diambil? Semua dokumentasi
yang berkaitan dengan analisis tertentu harus mudah diambil. Data yang diperlukan mencakup, namun tidak
terbatas pada, lembar ringkasan analitis, lembar laporan lembar kerja tugas, buku catatan lab dengan
informasi persiapan solusi, log pemeliharaan dan kalibrasi peralatan, keluaran komputer dan instrumen,
diagram kendali, dll.
Komentar __________________________________________________________________
4. Apakah dokumentasi berisi informasi dan penjelasan yang cukup sehingga laporan analisis dapat dengan
mudah ditafsirkan oleh orang-orang yang berpengetahuan selain mereka yang bertanggung jawab atas
pembuatannya?
Komentar __________________________________________________________________
5. Apakah dokumentasi berisi informasi yang cukup sehingga memungkinkan, bila diinginkan, pengulangan
analisis yang memuaskan dalam kondisi awal?
Komentar __________________________________________________________________
6. Apakah semua entri asli yang terdapat dalam dokumentasi rapi dan terbaca serta dicatat
menggunakan tinta tahan air permanen berwarna hitam atau biru?
Komentar __________________________________________________________________
7. Jika prosedur yang digunakan untuk menganalisis sampel bukan merupakan prosedur yang diakui, apakah prosedur
tersebut telah divalidasi?

Komentar __________________________________________________________________
8. Jika prosedur yang digunakan untuk menganalisis sampel adalah prosedur yang telah divalidasi, apakah
dokumentasi validasi diarsipkan dan tersedia?
Komentar __________________________________________________________________
9. Jika ada koreksi atau perubahan pada entri apa pun dalam dokumentasi
apakah itu dibuat dengan benar? Koreksi yang tepat dilakukan sebagai berikut:
•Penghapusan, cairan koreksi, atau pita koreksi tidak boleh digunakan saat melakukan koreksi pada
dokumen apa pun.
•Gambarlah satu garis melalui entri yang salah; jangan hapus entri asli – entri tersebut harus dapat
dibaca melalui coretan.
•Tulis koreksi sedekat mungkin dengan aslinya.
•Inisial analis akan muncul di dekat koreksi.
•Tanggal koreksi akan muncul di dekat koreksi (kecuali ada tanggalnya

dikoreksi, dalam hal ini tanggal koreksi itu sendiri!).
•Jika alasan koreksi tidak jelas, maka harus ada penjelasan singkat mengapa perubahan itu perlu.
Penjelasan sebaiknya ditulis dekat koreksi jika memungkinkan, jika tidak maka dapat dirujuk di tempat
lain pada halaman atau lembar terlampir dengan menggunakan tanda “*”.

Komentar __________________________________________________________________
10. Apakah Lembar Ringkasan Analitik menyediakan pencatatan waktu tinggal, suhu, waktu pencernaan,
suhu penangas, dll. untuk semua langkah penting yang ditentukan dalam prosedur operasi standar?

Komentar __________________________________________________________________
11. Apakah semua berat di bawah 1 gram berbentuk 0,xxxx (termasuk sebelum nol)?
Komentar __________________________________________________________________
12. Jika sisipan digunakan (yaitu kertas seperti kromatogram, hasil cetakan, dll.) apakah sisipan tersebut
ditempel secara permanen (dijepit, ditempel) atau ditempatkan dalam amplop terpisah (direferensikan silang
sepenuhnya ke set aslinya dan mudah diambil)?
Komentar __________________________________________________________________
13. Selama analisis, apakah ada keluaran instrumen yang dihasilkan? Apakah semua entri pada keluaran
instrumen diberi label dengan benar (misalnya konsentrasi standar kalibrasi, ID standar kerja, nomor sampel
individual untuk sampel investigasi, pengenceran sampel [jika berbeda dari yang dijelaskan dalam prosedur
operasi standar], dll).
Komentar __________________________________________________________________
14. Apakah informasi database komputer konsisten dengan dokumentasi kertas?

Komentar __________________________________________________________________
15. Jika ada hasil yang diperoleh dengan menggunakan perangkat lunak eksternal (yaitu program
spreadsheet), apakah program eksternal tersebut divalidasi sebelum digunakan, dan apakah dokumentasi
validasi diarsipkan dan tersedia?
Komentar __________________________________________________________________
16. Apakah ada komentar, jika diberikan, masuk akal, lengkap, dan mendukung observasi data dalam dokumentasi
yang ditetapkan?
Komentar __________________________________________________________________
17. Apakah set telah direview dengan benar oleh reviewer?

Komentar __________________________________________________________________
18. Apakah semua bagian yang diperlukan sudah diisi atau diberi tanda dengan benar?
Komentar __________________________________________________________________
19. Apakah setiap halaman dokumentasi diberi nomor urut dengan format “m/n” atau “m dari n”, dimana m sama
dengan nomor halaman dan n sama dengan jumlah halaman seluruhnya?
(Berkelanjutan, yaitu cetakan komputer yang tidak dipisahkan dan lembar kerja yang diberi nomor halaman sendiri
serta cetakan instrumen dianggap satu halaman).
Komentar __________________________________________________________________
20. Apakah nomor identifikasi yang ditetapkan disertakan pada semua halaman dokumentasi yang diperlukan?
Komentar __________________________________________________________________
21. Apakah setiap halaman dokumentasi yang diwajibkan ditandatangani dan diberi tanggal oleh
analis yang bertanggung jawab?

Komentar __________________________________________________________________
Persiapan reagen dan larutan

22. Apakah seluruh larutan volumetrik dan larutan uji digunakan sebelum tanggal kadaluarsanya masing-masing?
Komentar __________________________________________________________________
23. Apakah nomor identifikasi unik untuk semua reagen curah, larutan volumetrik, dan larutan uji yang digunakan
selama analisis disertakan dalam Lembar Ringkasan Analitik?
Komentar __________________________________________________________________
24. Apakah semua nomor identifikasi unik untuk reagen curah, larutan volumetrik, dan larutan uji sudah sesuai format
yang dipersyaratkan dan dicatat dalam buku catatan laboratorium?
Komentar __________________________________________________________________
25. Apakah semua reagen curah yang digunakan dalam pembuatan larutan untuk analisis yang telah diaudit digunakan
sebelum tanggal kedaluwarsanya masing-masing?
Komentar __________________________________________________________________
26. Apakah tanggal persiapan dalam buku catatan laboratorium untuk setiap volumetrik dan larutan uji konsisten
dengan tanggal penggunaan yang tertera pada Lembar Ringkasan Analitik?
Komentar __________________________________________________________________
27. Apakah nomor identifikasi unik pada larutan volumetrik dan larutan uji terkini sesuai dengan sediaan yang
dijelaskan dalam buku catatan laboratorium?
Komentar __________________________________________________________________
28. Apakah semua sampel, ekstrak, reagen, bahan acuan dan standar disimpan sedemikian rupa untuk menjaga
identitas, konsentrasi, kemurnian dan stabilitasnya?
Komentar __________________________________________________________________
29. Apakah semua bahan standar kalibrasi atau bahan standar acuan yang digunakan dalam analisis ini dapat
ditelusuri ke Bahan Referensi Bersertifikat (primer) seperti NIST atau USP?
Komentar __________________________________________________________________
Buku catatan laboratorium

30. Apakah masing-masing sediaan reagen atau larutan terdapat pada halaman tertentu dalam buku catatan
laboratorium yang diparaf dan diberi tanggal oleh analis, dan apakah uraiannya mencakup hal-hal berikut?
•Nomor identifikasi unik untuk setiap solusi yang disiapkan.
•Nama/konsentrasi larutan volumetrik atau larutan uji yang sedang disiapkan (misalnya HCl 0,15 N dalam metanol).
•Nama (dan rumus molekul jika memungkinkan lebih dari satu bentuk) reagen curah yang digunakan dalam
pembuatan larutan volumetrik atau larutan uji.
•Berat [(kotor, tara, bersih) atau (berat menurut selisih)] atau volume, dinyatakan dalam satuan yang sesuai, dari
reagen curah yang digunakan dalam pembuatan larutan volumetrik atau larutan uji.
•Urutan pengenceran (jika perlu) yang digunakan untuk menyiapkan konsentrasi akhir
volumetrik atau larutan uji, termasuk volume yang diambil dan volume akhir.
•Identifikasi unik dari timbangan, pipet, atau dispenser yang digunakan.
• Tanggal kadaluarsa dari solusi yang disiapkan.
•Identifikasi sumber air.
Komentar __________________________________________________________________
Instrumentasi dan peralatan

31. Apakah Lembar Ringkasan Analitik menyediakan entri untuk mencatat nomor ID unik setiap peralatan
penting yang digunakan dalam analisis? (yaitu timbangan, oven, pipet,
dispenser, termometer, titrator, lemari es, dll.)?
Komentar __________________________________________________________________
32. Dari daftar peralatan yang memerlukan kalibrasi atau pemeliharaan, apakah masing-masing peralatan telah dilaksanakan
dengan benar?

Komentar __________________________________________________________________
33. Apakah kalibrasi timbangan harian atau mingguan untuk timbangan yang digunakan dalam analisis yang
diaudit didokumentasikan pada hari analisis? Apakah keseimbangannya terkendali? Apakah semua kalibrasi
terkait terkendali?
Komentar __________________________________________________________________
34. Apakah ada pencatatan suhu harian yang tidak terkendali pada peralatan yang terdaftar dan memerlukan
pemantauan harian?
Komentar __________________________________________________________________
Bagan kendali
35. Apakah data kendali kerja untuk kumpulan tersebut terdapat pada Lembar Ringkasan Analitik, dan apakah
data ini berada dalam kendali untuk analit yang diaudit? Jika terdapat kecenderungan pada data kendali kerja
tahun sebelumnya, apakah sudah diatasi pada notepad peta kendali?
Komentar __________________________________________________________________
36. Apakah database peta kendali terkini untuk analit yang diaudit?
Komentar __________________________________________________________________
37. Apakah statistik peta kendali telah dihitung dengan benar? Apakah itu didokumentasikan dengan benar?
Komentar __________________________________________________________________
Kesehatan dan Keamanan
38. Apakah semua personel yang ditemui selama audit ini mengenakan alat pelindung diri?
ment?
Komentar __________________________________________________________________
39. Apakah persyaratan penyimpanan atau penanganan khusus ditunjukkan pada dokumentasi analitis?
tion?
Komentar __________________________________________________________________
40. Apakah sampel yang ada saat ini memerlukan analisis yang sama disimpan/ditangani dengan benar?
Komentar __________________________________________________________________
41. Apakah analis yang saat ini ditugaskan untuk melakukan analisis yang diaudit dilengkapi dengan peralatan
keselamatan yang sesuai (yaitu jas lab, sarung tangan, sepatu kaki yang diperkuat, pelindung wajah, masker debu,
masker uap, celemek karet, dll.) jika diperlukan?
Komentar __________________________________________________________________
42. Apakah analis saat ini mengetahui lokasi tempat cuci mata terdekat? ALAT PEMADAM API? selimut api? peralatan
pembersih tumpahan? alarm kebakaran? pintu darurat? telepon darurat? mandi darurat? Apakah semuanya berfungsi
dan terkini?
Komentar __________________________________________________________________
Aneka ragam
43. Apakah ada penyimpangan dari protokol yang terlihat baik dari dokumentasi yang diaudit atau dari wawancara
dengan analis? Menjelaskan
Komentar __________________________________________________________________
44. Jika terdapat penyimpangan dari protokol, apakah hal tersebut disetujui oleh supervisor dan didokumentasikan
secara eksplisit?
Komentar __________________________________________________________________
45. Berapa nilai Z pada sampel pemeriksaan terakhir dan apakah hasilnya terkendali?
Komentar __________________________________________________________________
46. Apakah ada tren pada diagram kendali sampel cek tahun sebelumnya?
Komentar __________________________________________________________________
Penerimaan Sampel Laboratorium

Ringkasan
Bagian ini mengidentifikasi prosedur yang digunakan untuk menangani sampel yang diserahkan ke laboratorium, mulai
dari pengumpulan dan pengiriman oleh klien, hingga penerimaan.
Rantai penyimpanan sampel di laboratorium dimulai ketika sampel diterima secara fisik. Persyaratan
penanganan khusus ditentukan oleh sifat masing-masing sampel; lihat “Penanganan Sampel Pakan”.
Laboratorium mengharapkan staf inspeksi lapangan yang terlatih untuk melakukan pengambilan sampel yang
efektif guna menghasilkan sampel laboratorium yang representatif dan konsisten untuk evaluasi. Sejauh mana
sampel mewakili populasi induk sangat penting jika data yang dikembalikan ke klien ingin memiliki tujuan yang
berguna.
Cakupan
Prosedur ini berlaku untuk semua sampel pakan laboratorium dan bahan pakan yang diserahkan ke
laboratorium untuk diuji.
Tanggung jawab
data.

Teknisi Sampel menjadi mahir dalam penerimaan, penanganan, dan dokumentasi sampel.
Prosedur
Periksa Kondisi Sampel
Setiap sampel laboratorium harus tiba dalam kondisi fisik yang baik dan dalam wadah yang diberi label jelas
dan sesuai serta disertai formulir penyerahan sampel yang sesuai. Catat keadaan sampel pada saat
kedatangan yaitu beku, dingin, suhu kamar, dll.
Terima/ Tolak Sampel

Penolakan sampel dapat terjadi karena kerusakan fisik, potensi kontaminasi karena kebocoran, wadah rusak,
tercampurnya sampel yang dikirim bersama-sama, sampel yang tidak mencukupi untuk pengujian yang
diperlukan, dan sampel yang dikirim atau diidentifikasi secara tidak tepat.
Contoh Login atau Dokumen

Sampel yang tidak dapat diterima dirujuk ke supervisor yang sesuai, yang memberi tahu Klien untuk
mendiskusikan tindakan perbaikan yang diperlukan. Sampel masih dapat dianalisis, jika diminta oleh Klien,
namun semua laporan yang dihasilkan dengan sampel tersebut akan menyertakan pernyataan yang
menunjukkan penerimaan sampel dalam kondisi yang tidak dapat diterima dan akan menjelaskan sifat masalahnya.
Sampel yang tidak akan diproses dimasukkan ke dalam sistem dan dilaporkan kepada Klien sebagai “tidak
layak”. Komentar yang berkaitan dengan alasan menyatakan sampel “tidak layak” dapat ditambahkan ke
dokumen identifikasi sampel dan laporan analisis. Lihat Tabel 3 untuk contoh formulir login.
Identifikasi Sampel
Nomor identifikasi sampel unik diberikan – Nomor Sampel Laboratorium dicatat pada sampel laboratorium
(Tabel 4), dokumen dan sampel uji dan digunakan di laboratorium untuk melacak sampel selama proses
pengujian, yaitu sampel, penyimpanan, wadah, disimpan sampel, laporan analisis, dokumen, lembar kerja dan
buku kerja.
Lampiran
Tanggal: ____________________________________________________________
Diterima oleh: ______________________________________________________
CATATAN: Lingkari Kode Status yang sesuai di samping setiap Nomor Sampel
Tabel 4
Contoh status kedatangan
Nomor Sampel Kode status
1 ABCDEFGHJK
2 ABCDEFGHJK
3 ABCDEFGHJK
4 ABCDEFGHJK
5 ABCDEFGHJK
6 ABCDEFGHJK
7 ABCDEFGHJK
8 ABCDEFGHJK
9 ABCDEFGHJK
10 ABCDEFGHJK
11 ABCDEFGHJK
12 ABCDEFGHJK
Sampel dalam kondisi yang dapat diterima

B Wadah sampel rusak, sobek, atau bocor
C Segel hak asuh rusak
D Segel hak asuh hilang
E Sampel terkontaminasi oleh sampel yang bocor
F Sampel basah, kemungkinan terkontaminasi
G Jumlah sampel tidak mencukupi
H Sampel diterima tanpa dokumen
J Dokumen diterima tanpa sampel
K Masalah lainnya
Penanganan dan penyiapan Sampel Pakan
Ringkasan
Protokol ini menjelaskan penanganan/penggilingan/persiapan sampel pakan yang benar oleh para analis
di laboratorium. Persyaratan penanganan khusus ditentukan oleh sifat masing-masing sampel. Rantai
penyimpanan sampel di laboratorium dimulai ketika sampel diterima secara fisik.
Cakupan
Prosedur ini berlaku untuk semua sampel pakan laboratorium dan bahan pakan.
Tanggung jawab
Contoh
Pengambilan sampel dapat berupa salah satu dari dua jenis; Pengambilan Sampel Representatif atau Pengambilan Sampel Selektif.
Pengambilan Sampel Representatif
Pengambilan Sampel Representatif memperoleh sebagian kecil dari volume yang lebih besar sedemikian rupa sehingga
penentuan karakteristik yang diperlukan akan mewakili nilai rata-rata karakteristik seluruh sampel.
Pengambilan Sampel Selektif
Jika terdapat perbedaan nyata pada sebagian sampel yang akan dianalisis, bagian ini harus dipisahkan dari keseluruhan
sampel dan diperlakukan sebagai lot terpisah. Jika hal ini tidak memungkinkan, seluruh sampel harus diproses dan proporsi
sampel yang mempunyai perbedaan nyata dicatat.
Dalam kedua kasus tersebut, rinciannya harus dicatat dalam laporan akhir kepada klien.
Pertimbangan Statistik
Pengambilan sampel penerimaan adalah metode pengambilan sampel yang biasa dilakukan di laboratorium nutrisi hewan.
Untuk pengambilan sampel berdasarkan atribut, terdapat rencana pengambilan sampel teoretis berdasarkan distribusi binomial.
Rencana ini telah disederhanakan menjadi hubungan akar kuadrat antara ukuran lahan dan jumlah penambahan.
Pada produk curah, variasi sampel diharapkan seragam jika, untuk lot hingga 2–5 ton setidaknya diambil tujuh kelipatan
dan, untuk antara 2–5 dan 8 ton, jumlah kelipatan yang diambil setidaknya sama dengan ÿ20 m (di mana m = massa dalam
ton sampel). Jika jumlah lot melebihi 80 ton, hubungan akar kuadrat masih berlaku tetapi kurang akurat.
Peralatan
Penggiling atau Pabrik. Alat ini harus mampu menggiling bahan pakan tanpa menyebabkan perubahan nyata pada
kelembapan sampel dan tidak boleh menghasilkan panas berlebihan (yang dapat berdampak buruk pada sampel). Jika bahan
pakan yang akan dianalisis kemungkinan besar kehilangan atau menambah kelembapan, faktor koreksi harus diterapkan
pada hasilnya. Hal ini ditentukan dengan membandingkan kadar air sampel yang disiapkan (digiling atau digiling) dengan
sebagian sampel asli sebelum diproses. Setelah digiling atau digiling, sampel harus dapat lolos melalui saringan yang sesuai.
Penggiling atau penggilingan harus dibersihkan secara menyeluruh setelah digunakan untuk menghindari kontaminasi silang.
Riffler/ Homogeniser (atau pengaduk mekanis), untuk menghomogenisasi bahan pakan lembab. Alat penambang dengan pelat
4 mm juga berguna untuk bahan pakan beku.
Saringan dengan ukuran bukaan 1,0 mm, 2,8 mm dan 4,0 mm terbuat dari anyaman kawat logam atau sejenisnya.
Neraca Analitik, digunakan untuk menentukan berat sampel (lihat Prosedur Mutu Bagian 8 'Penggunaan Saldo').
Mechanical Shaker, digunakan untuk mengocok sampel molase cair kental.
Peralatan Pembagi atau Quartering, peralatan seperti pembagi berbentuk kerucut atau pembagi beberapa slot dengan sistem
penyortiran akan memastikan pembagian sampel laboratorium yang seragam.
Alatnya, palu, digunakan untuk memukul obeng/pahat.
Obeng/ pahat, digunakan untuk memecah blok molase menjadi potongan-potongan kecil.
Spatula, digunakan untuk menyendok sampel, lesung dan alu untuk menghancurkan sampel.
Pipet transfer, digunakan dalam pemberian pakan basah dan pakan cair.
Wadah Sampel, wadah ini harus sesuai untuk menjaga integritas sampel dan menghindari perubahan atau pengaruh
kelembaban, suhu, atau cahaya. Wadah sampel harus berukuran sesuai untuk memungkinkan penyimpanan sampel yang
cukup untuk menyelesaikan semua penentuan yang diperlukan (tidak kurang dari 100 g) dan harus ada ruang udara tersisa
setelah diisi (untuk memungkinkan pencampuran yang efektif sebelum pengambilan sampel untuk semua pengujian yang
diperlukan. ). Wadah tersebut harus mempunyai tutup yang rapat dan harus diidentifikasi secara unik dengan pengidentifikasi
sampel pada wadahnya dan bukan pada tutupnya.
Jika sampel ingin diperiksa secara mikrobiologis, sampel tersebut harus ditangani dalam kondisi steril.
tions untuk melestarikan beban mikrobiologis.
Prosedur
Untuk menghindari paparan atmosfer, penggilingan atau penggilingan harus dilakukan secepat mungkin. Sampel mungkin perlu
dipecah atau dihancurkan sebelum menggunakan penggiling atau gilingan.
Sampel yang bagus
Jika suatu contoh dapat lolos saringan 1,0 mm, maka contoh tersebut harus dicampur secara menyeluruh dan dibagi secara
berturut-turut dengan menggunakan alat pemisah atau pemisah (lihat 7.)
Sampel kasar
Bila benda uji tidak lolos saringan 1,0 mm tetapi lolos saringan 2,8 mm, maka benda uji harus digiling sampai lolos saringan
1,0 mm dan dibagi seperti contoh halus. Begitu pula jika sampel lolos saringan 4,0 mm tetapi tidak lolos saringan 2,8 mm.
Sulit untuk menggiling sampel

Jika sampel sulit digiling dengan menggunakan penggiling atau penggilingan, kadar air subsampel dari sampel awal
harus ditentukan dan sisa sampel dihancurkan dengan lesung dan alu hingga lolos saringan 1,0 mm. Kadar air sampel
yang dihancurkan kemudian harus ditentukan untuk memungkinkan penentuan faktor koreksi.
Silase rumput atau sereal

Seluruh sampel harus digiling dan dicampur. Beberapa sampel mungkin perlu dicincang halus terlebih dahulu. Jika
sampel tidak cocok untuk digiling atau dipotong, sampel dapat dikeringkan dalam oven semalaman (60–70 °C) dan
digiling. Kadar air harus ditentukan dan faktor koreksi diterapkan.
Sampel cair
Sampel harus dicampur menggunakan homogeniser atau pengaduk untuk memastikan bahan yang terpisah tersebar
sempurna dan sampel dipindahkan menggunakan pipet lubang lebar.
Penyelesaian masalah
Hasil tinggi/rendah yang salah untuk analit tertentu dan/atau duplikasi yang buruk mungkin disebabkan oleh satu atau
lebih hal berikut:
1. Pencampuran sampel kering, cair, dan basah yang tidak lengkap atau tidak konsisten sebelum ditimbang.
2. Tidak membiarkan sampel yang didinginkan atau dibekukan mencapai suhu kamar sebelumnya
menimbang.
3. Tidak mengumpulkan sebagian sampel dari lokasi berbeda di sekitar molase/
jilat blok sebelum menimbang atau tidak menganalisis sebagian besar sampel (bobot sampel mungkin perlu
ditingkatkan untuk duplikasi yang konsisten).
4. Sampel harus disiapkan sedemikian rupa sehingga jumlah yang ditimbang sebagaimana ditentukan dalam
metode analisis adalah homogen dan mewakili sampel akhir.
Penanganan Sampel
Persiapan Sampel Pakan Kering
1. Kocok sampelnya. Umumnya, kocok sampel asli hingga diperoleh sub-sampel dengan ukuran yang
memuaskan. Tempatkan sampel yang sudah dicacah dan tidak digiling ke dalam kantong berlabel Ziplock
(atau sejenisnya) dan bagian lain dari sampel yang tidak digiling kembali ke dalam kantong sampel untuk
disimpan. Beri label pada setiap wadah (kantong, botol, dll.) dengan nomor identifikasi yang cocok (misalnya
kode batang).
2. Giling salah satu bagian (bagian kantong) melalui penggilingan yang sesuai.
3. Penggilingan atau penggilingan beberapa sampel dapat mengakibatkan hilangnya atau bertambahnya kadar
air dan zat yang mudah menguap, hal ini harus diberi kelonggaran. Penggilingan harus dilakukan secepat
mungkin untuk menghindari paparan atmosfer.
4. Tempatkan sampel tanah di atas kertas coklat.
5. Campurkan sampel secara menyeluruh sebelum mengambil bagian laboratorium. 6.
Isi botol sampel laboratorium dengan sampel tanah secukupnya dengan melewati
sampel campuran.
7. Segera kembalikan ke ruang penyimpanan sampel setelah analisis.
Tata Cara Pengambilan Sampel Laboratorium

1. Biarkan sampel menghangat hingga suhu kamar jika disimpan dalam freezer atau lemari es.
2. Campurkan sampel dengan cara menggulung botol dan memiringkan botol dari kiri ke kanan (berputar)
selama beberapa detik. Jangan goyang.
Beberapa sampel mungkin memerlukan pencampuran tambahan (misalnya 41% sampel biji kapas).
3. Timbang sampel dengan cara yang sesuai dengan metode yang diinginkan.
4. Kembalikan sampel ke tempat penyimpanan yang sesuai.
Sampel Molase Cair

1. Sampel harus disimpan dalam lemari pendingin.
2. Biarkan sampel menghangat hingga suhu kamar.
3. Kocok sampel kuat-kuat selama 1 menit agar tercampur sempurna. Untuk sampel yang terlalu kental
untuk dikocok dengan tangan, diperlukan pengocok mekanis. Kocok sampel selama tidak kurang dari
15 menit atau seperti yang dijelaskan dalam protokol metode untuk menghasilkan pencampuran yang
menyeluruh.
4. Timbang sampel dengan cara yang sesuai dengan metode yang diinginkan. (Bersihkan semua tumpahan
dari luar botol).
5. Kembalikan sampel ke lemari es yang sesuai.
Sampel Molase/ Lick Block

1. Sampel harus disimpan dalam lemari pendingin.
2. Biarkan sampel menghangat hingga suhu kamar.
3. Untuk balok lunak, gunakan spatula untuk memotong sebagian kecil sampel dari lokasi berbeda di sekitar
balok hingga mencapai berat yang diinginkan. Pencampuran tidak praktis.
4. Untuk balok keras, pahat sebagian kecil sampel dari lokasi berbeda di sekitar balok hingga berat yang
diinginkan tercapai. (Gunakan palu dan obeng/pahat, pastikan alat pelindung diri yang sesuai
digunakan).
5. Kembalikan sampel ke lemari es.
Sampel untuk mikotoksin

1. Giling seluruh sampel (Romer Mill atau pabrik setara). CATATAN: Pabrik Romer akan memisahkan
sampel menjadi dua bagian yang tidak sama. Satu porsi kira-kira 1/3 dan porsi lainnya kira-kira 2/3 dari
keseluruhan sampel.
2. Giling 1/3 porsi melalui saringan 1,5 mm menggunakan penggiling yang sesuai (misalnya Retsch SR
300, Jerman atau penggiling setara).
3. Tuangkan sebagian tanah ke atas kertas coklat dan adonan empat sudut.
4. Bersihkan penggiling dengan udara bertekanan atau giling sejumlah kecil (200 g) bahan tak-kon-
biji-bijian yang terkontaminasi.
Referensi
ISO 6497. 2002. Bahan pakan ternak – Pengambilan sampel. Jenewa, Swiss.
EN ISO 6498. 2009. Bahan pakan ternak – Pedoman penyiapan sampel. Jenewa, Swiss-
Selandia Baru.
Penggunaan Saldo
Ringkasan
Dokumen ini memberikan prosedur untuk mengkalibrasi, membersihkan, menimbang bahan, dan
melakukan pemeliharaan rutin pada timbangan laboratorium pemuatan atas dan analitik.
Cakupan
Prosedur operasi standar ini berlaku untuk semua Analis Laboratorium yang menggunakan neraca analitik dan top loading.
Tanggung jawab
Peralatan
Set beban, baja tahan karat, NIST/NVLAP atau sertifikasi serupa setiap tahun
Kisaran 0,1 g, 1 g, 10 g, 50 g, dan 100 g
Prosedur
Pembersihan
Pembersihan sangat penting dalam penggunaan timbangan sehari-hari untuk menjaga jaminan kualitas di laboratorium
karena penimbangan adalah langkah paling dasar namun juga salah satu langkah terpenting dalam analisis. Tidak dapat
dihindari bahwa timbangan dan anak timbangan menjadi kotor karena penggunaan sehari-hari.
Oleh karena itu, penting untuk mengikuti metode yang tepat dengan hati-hati untuk mendapatkan hasil yang paling akurat.
Metode pembersihan timbangan dan anak timbangan berikut ini dikembangkan untuk memastikan hasil yang berkualitas.
Cabut timbangan sebelum membersihkan dan jangan gunakan bahan pembersih yang keras atau abrasif. Jangan
biarkan apa pun memasuki mekanisme internal keseimbangan. Tangani juga panci penyeimbang dengan hati-hati, jangan
menyentuh kaki panci penyeimbang yang menopangnya atau tempat di mana panci bersentuhan dengan timbangan. Saat
membersihkan wadah penimbangan dengan larutan cair, keluarkan wadah dan bersihkan bagian luar timbangan untuk
mencegah cairan masuk ke dalam perangkat elektronik internal dan menyebabkan kerusakan. Jika ada material yang
masuk ke dalam wadah timbangan, segera beri tahu supervisor agar dapat dilakukan tindakan yang tepat untuk membatasi
kerusakan pada timbangan.
Keseimbangan harus dibersihkan seperlunya. Untuk pembersihan sederhana, seperti mengeluarkan sampel dari
wadah timbangan, sikat bulu unta yang lembut harus digunakan. Pastikan tidak ada partikel kecil yang tertinggal di panci
keseimbangan karena jumlah terkecil sekalipun dapat mempengaruhi pembacaan atau menimbulkan korosi pada panci.
Jika panci timbangan tidak dapat dibersihkan hanya dengan menggunakan sikat, maka air dapat digunakan untuk
membersihkan panci timbang. Lap bebas serat harus digunakan untuk menyeka kotoran dan air pada panci. Air harus
dituangkan ke dalam lap, bukan pada timbangan.
Jika perlu, larutan sabun 1% dapat digunakan untuk membantu membersihkan wadah timbang, namun harus digunakan
dengan hati-hati. Larutan sabun harus dicuci bersih. Sabun cenderung

meninggalkan residu pada timbangan sehingga mempengaruhi hasil penimbangan. Lap bebas serat harus
digunakan untuk menyeka panci keseimbangan.
Untuk timbangan analitik, jendela dapat dibersihkan dengan pembersih kaca dan lap bebas serat. Pembersih
kaca harus disemprotkan ke lap dan kemudian dioleskan ke jendela. Ini akan mencegah penumpukan semprotan.
Anak timbangan tidak boleh ditangani tanpa menggunakan lap atau pinset yang tidak berbulu.
Untuk beban yang lebih besar, sarung tangan bebas bedak dapat digunakan bila diperlukan. Sidik jari akan
mempengaruhi hasil penimbangan dan akan menurunkan akurasi dan presisi.
Untuk membersihkan anak timbang, gunakan etil eter dan lap bebas serabut. Eter hanya boleh digunakan
dalam tudung pelarut. Seka pemberat hingga bersih secara visual dan tidak ada eter yang tersisa. Anak timbang
harus dibersihkan seperlunya.
Kalibrasi
Kalibrasi merupakan faktor penting dalam menjamin kualitas hasil. Tanpa kalibrasi yang tepat, timbangan tidak
dapat memberikan hasil yang layak dan konsisten. Oleh karena itu, penting untuk rutin memeriksa kalibrasi
timbangan. Ada tiga metode yang akan diterapkan untuk membangun rutinitas ini.
Pertama-tama, timbangan harus diperiksa dan dikalibrasi oleh teknisi servis bersertifikat setiap tahunnya.
Catatan pemeliharaan tahunan harus disimpan dalam buku catatan keseimbangan bersama dengan catatan
kalibrasi mingguan. Pemeliharaan harus dicatat dengan tanggal, perusahaan, teknisi dan alasan pemeliharaan.
Anak timbang kalibrasi juga harus diperiksa pada saat ini. Setiap faktor koreksi yang ditetapkan harus dicatat
dan digunakan hingga kalibrasi berikutnya
Kedua, setiap minggu Analis Laboratorium atau yang ditunjuknya akan memeriksa kalibrasi timbangan di
laboratoriumnya masing-masing dengan bobot terukur yang dapat dilacak secara nasional. Catatan kalibrasi
mingguan harus mencakup: judul deskriptif, nama, pabrikan, nomor model, nomor seri, nomor ruangan, frekuensi
kalibrasi yang diperlukan, batas “kerja” yang diizinkan, inisial dan tanggal kalibrasi, serta peninjauan Analis
Laboratorium yang bertanggung jawab. Bobotnya harus berada dalam rentang akurasi yang akan ditentukan
untuk setiap timbangan.
Terakhir, setiap hari dan sebelum pemeriksaan kalibrasi, kalibrasi internal akan dilakukan. Manual timbangan
individual dan protokol kalibrasi harus diikuti untuk teknik kalibrasi tertentu. Hal ini harus dicatat pada dokumen
yang sesuai.
Beberapa timbangan memiliki bobot internal yang digunakan untuk mengkalibrasi timbangan. Timbangan
lain memerlukan pemberat eksternal untuk dikalibrasi. Lihat manual saldo untuk prosedur spesifik untuk setiap
saldo.
Mengkalibrasi Saldo Pemuatan Atas

Langkah-langkah berikut harus diikuti setiap minggu untuk memeriksa kalibrasi saldo beban atas. Kalibrasi
yang kira-kira mencakup rentang penimbangan harus dilakukan menggunakan kumpulan anak timbangan yang
dapat ditelusuri secara nasional, dengan pembacaan kalibrasi tunggal untuk setiap anak timbangan. Sebelum
melakukan kalibrasi, pastikan timbangan bersih. Jangan menyentuh beban secara langsung dengan tangan
Anda. Gunakan sarung tangan bebas debu, pinset, atau lap bebas serat untuk menangani beban (lihat protokol
pembersihan).
Periksa gelembung leveling untuk memastikan keseimbangannya rata. Jika tidak, ratakan keseimbangannya
dengan mengatur keseimbangan kaki. Bohlam level biasanya terletak di bagian belakang timbangan untuk timbangan
beban atas. Putar kaki pengatur ketinggian searah jarum jam untuk menaikkan keseimbangan dan berlawanan arah
jarum jam untuk menurunkan keseimbangan. Saldo tidak dapat dipindahkan dan kemudian digunakan tanpa a
penyesuaian kembali atau pemeriksaan level.

Dengan panci keseimbangan kosong, tekan tombol tara. Ini akan menghasilkan pembacaan
0,00.
Tempatkan pemberat bersih pada wadah penimbangan dengan menggunakan lap bebas serabut atau pinset.
Catat nilainya pada formulir kalibrasi. Jika rentangnya tidak berada dalam batas, hentikan penggunaan saldo dan selidiki
masalahnya (lihat Rentang dan Batas Saldo di bawah). Jika timbangan Anda memiliki fungsi kalibrasi, kalibrasi internal
juga dapat dilakukan menggunakan anak timbangan yang ditentukan (Kelas S) yang tercantum dalam manual timbangan.
Kalibrasi Neraca Analitik

Berikut ini adalah langkah-langkah yang harus diikuti setiap minggu untuk memeriksa kalibrasi neraca analitik dengan
benar. Kalibrasi yang kira-kira mencakup rentang penimbangan harus dilakukan menggunakan kumpulan berat yang
dapat dilacak. Sebelum melakukan kalibrasi, pastikan timbangan bersih. Jangan menyentuh beban secara langsung
dengan tangan Anda. Gunakan sarung tangan bebas debu, pinset, atau lap bebas serat untuk menangani beban (lihat
protokol pembersihan). Pastikan pintu ditutup sebelum kalibrasi dan selama penimbangan untuk mencegah aliran udara
mempengaruhi pembacaan.
Periksa gelembung leveling untuk memastikan keseimbangannya rata. Jika tidak, ratakan keseimbangan dengan
mengatur keseimbangan kaki. Bohlam level biasanya terletak di bagian belakang timbangan.
Putar kaki pengatur ketinggian searah jarum jam untuk menaikkan keseimbangan dan berlawanan arah jarum jam untuk
menurunkan keseimbangan. Saldo tidak dapat dipindahkan dan kemudian digunakan tanpa penyesuaian ulang atau
pemeriksaan level.
Pastikan panci keseimbangan kosong. Tekan tombol tara; outputnya harus berupa keduanya
0,0000 atau 0,00000.
Timbangan analitik mampu menggunakan bobot internalnya untuk kalibrasi. Jika saldo Anda memiliki tombol
kalibrasi, tekan tombol tersebut untuk mengkalibrasi. Pembacaan akan berkembang dari C ke CC. Setelah selesai,
pembacaan akan kembali ke 0,0000. Jika timbangan Anda memiliki kenop untuk kalibrasi, putar kenop secara perlahan
hingga muncul huruf C. Lanjutkan memutar kenop hingga kenop berada pada posisi kalibrasi. Pembacaan akan
menampilkan CC ketika kalibrasi selesai. Analis Laboratorium harus mengembalikan kenop ke posisi semula (atau
tengah) sebelum menimbang; tampilan akan kembali terbaca 0,0000. Lihat manual keseimbangan untuk instruksi
mengenai model lainnya.
Tempatkan pemberat bersih pada wadah penimbangan dengan menggunakan lap bebas serabut atau pinset.
Catat nilainya pada formulir kalibrasi. Jika rentangnya tidak berada dalam batas, hentikan penggunaan saldo dan selidiki
masalahnya (lihat Rentang dan Batas Saldo di bawah).
Rentang dan Batas Saldo

Kisaran penimbangan menunjukkan jumlah minimum dan maksimum yang dapat ditimbang oleh timbangan. Lihat
manual saldo individual untuk spesifikasinya.
Batas akurasi digunakan untuk pemeriksaan kalibrasi mingguan. Batasnya menunjukkan jumlahnya
bahwa beratnya dapat menyimpang dari jumlah yang disertifikasi. Batasan umum tercantum di bawah ini:
Berat Saldo Pemuatan Atas < 100 gram ± 0,10 gram ; > 100 gram ± 0,50 gram
Timbangan Analitik Berat ± 0,0005 gram
Tindakan Korektif untuk Masalah Keseimbangan
Jika pemeriksaan saldo mingguan di luar batas, maka saldo tersebut harus diperiksa kembali. Bersihkan, periksa levelnya,
dan kalibrasi ulang. Periksa draft atau kondisi lain yang dapat mempengaruhi saldo. Periksa kembali kalibrasi dengan
timbangan. Jika lolos, catat komentarnya pada lembar log. Jika pemeriksaan gagal pada semua rentang berat, timbangan
harus disingkirkan oleh Analis Laboratorium dan diberi label seperti itu untuk mencegah penggunaan. Jika pemeriksaan
lolos pada rentang berat yang lebih rendah, timbangan hanya boleh digunakan untuk menimbang dalam rentang yang lebih
rendah dan tanda peringatan harus diterapkan pada timbangan.
Jika ada masalah keseimbangan, beri tahu analis dan supervisor agar keseimbangan dapat dilakukan
diperbaiki atau diganti.
Gangguan
Ada beberapa anomali yang mungkin terjadi selama operasi standar saldo.
Kejadian umum adalah penyimpangan keseimbangan yang dapat timbul dari beberapa faktor berbeda. Ke
periksa keseimbangan untuk penyimpangan, tara keseimbangan dan lihat apakah pembacaan tetap stabil.
Penyebab paling mungkin dari penyimpangan keseimbangan adalah keseimbangan yang tidak seimbang. Sebelum
menggunakan timbangan, sangat penting untuk memeriksa tingkat gelembung dan kaki timbangan
disesuaikan jika tidak disejajarkan dengan benar.
Penyimpangan timbangan juga akan terjadi jika pintu pada timbangan analitik dibiarkan terbuka saat penimbangan.
Pintunya harus tertutup rapat; arus udara mampu mempengaruhi berat akhir. Pengaruh arus udara pada pembacaan
bervariasi tergantung pada kondisi ruangan di mana timbangan digunakan.
Getaran pada suatu ruangan juga mengakibatkan penyimpangan keseimbangan. Masalah ini tergantung pada ruangan
dan bangunan di mana keseimbangan berada.
Kadang-kadang perlu untuk menempatkan keseimbangan di lokasi yang memiliki banyak getaran. Misalnya, saat
menimbang zat beracun, zat tersebut perlu ditimbang di dalam lemari asam. Masalah penyimpangan keseimbangan
seringkali dapat diatasi dengan menempatkan keseimbangan pada dudukan marmer. Sekalipun timbangan tidak berada di
dalam lemari asam, sebaiknya letakkan timbangan analitik di atas dudukan marmer untuk melindungi timbangan dari
gerakan kecil yang disebabkan oleh getaran bangunan atau secara tidak sengaja membenturkan meja tempat timbangan
ditempatkan.
Ketika timbangan dipindahkan dari satu ruangan ke ruangan lain, timbangan harus dibiarkan seimbang di lingkungan
baru selama sekitar dua jam agar stabil pada kondisi suhu sekitar. Jangan pindahkan timbangan yang telah dikalibrasi.
Jika keseimbangan tidak berada dalam kesetimbangan termal dengan lingkungan maka akan terjadi pergeseran
keseimbangan. Saat memindahkan timbangan dari ruangan yang lebih dingin ke ruangan yang lebih hangat, biarkan
timbangan seimbang selama 2 jam tanpa kabel untuk menghindari kondensasi uap air pada atau di dalam timbangan.
Variasi kelembaban dan suhu menyebabkan penyimpangan.
Salah satu cara untuk mengatasi masalah kelembapan tinggi adalah dengan menempatkan AIR-DRYER (desikator
gel silika yang dibuat untuk timbangan) di bagian dalam timbangan untuk menghilangkan kelembapan. Lokasi ideal untuk
keseimbangan adalah ruangan dengan AC 24 jam sehari. Kondisi optimal termasuk menghindari paparan radiasi panas
yang ekstrim dan atmosfer kimia yang agresif.

Tip penimbangan
Jangan menjatuhkan benda yang akan ditimbang ke dalam wadah timbangan, karena akan merusak
struktur bagian dalam dan timbangan mungkin tidak lagi akurat.
Jangan meninggalkan sampel di atas wadah penimbangan untuk waktu yang lama. Selain itu, pastikan
sampel dan timbangan berada pada suhu yang sama. Jika sampel dingin, kondensasi dapat terbentuk
saat penimbangan dan jumlah yang diukur akan salah. Pastikan untuk menghitung kembali saldo setelah
digunakan.
Jika terjadi pemadaman listrik, keseimbangan harus dihangatkan selama satu jam.
Saat meletakkan benda di atas timbangan, biarkan timbangan mencapai keseimbangan (tampilkan 'g')
sebelum melanjutkan. Setelah 'g' muncul, beban dapat diambil atau timbangan dapat ditara.
Penggunaan Pipet
Ringkasan
Dokumen ini menjelaskan prosedur laboratorium yang akan digunakan dengan pipet dan dispenser.
Kondisi kalibrasi optimal, media kalibrasi, penghitungan spesifikasi pipet, dan pemecahan masalah
disertakan dalam protokol ini. Ada tiga jenis pipet yang dijelaskan dalam protokol ini. Salah satunya adalah
pipettor genggam, seperti Eppendorf dan Pipet-mann. Brinkmann atau Repipet ditempelkan pada botol,
dan dikenal sebagai dispenser. Tipe ketiga, seperti Brinkmann Dosimat, mempunyai unit penyalur yang
terpasang. “Pipet” digunakan untuk menjelaskan semua hal ini kecuali ditentukan lain. Dispenser mungkin
tidak perlu dikalibrasi tetapi harus diuji untuk memastikan kesesuaiannya dengan tujuan. Dosimat dan
pipettor genggam harus diservis dan dikalibrasi oleh teknisi servis setiap tahun dan didokumentasikan
dalam daftar peralatan yang sesuai.
Cakupan
Prosedur operasi standar ini berlaku untuk semua Analis Laboratorium yang menggunakan pipet dan
dispenser laboratorium.
Tanggung jawab
Analis Laboratorium menyelidiki metode yang tersedia, melakukan pengujian, menghasilkan dan
menganalisis data.
Peralatan
Neraca analitis
Pipet atau dispenser
Termometer
Prosedur
Kalibrasi
Sebelum kalibrasi, pipet harus dibilas dengan air, atau media penimbangan lainnya, untuk menghilangkan
semua larutan sebelumnya. Unit Dosimat juga harus dibilas dengan
media penimbangan sebelum kalibrasi. Kondisi optimal untuk pengukuran kalibrasi melibatkan
jenis wadah penimbangan, lingkungan, media pengujian, dan teknik Analis Laboratorium.
Wadah penimbangan kalibrasi harus berbentuk silinder untuk menjaga permukaan sampel
cairan tetap konstan. Untuk meminimalkan penguapan, wadah harus ditutup. Untuk
meminimalkan sidik jari, gunakan pinset, sarung tangan, atau tisu bebas serabut saat memegang
wadah penimbangan. Ruangan tempat pengukuran dilakukan harus bebas angin dan tidak
terkena sinar matahari langsung. Suhu ruangan harus normal (19–23 ºC) atau pipet harus
diseimbangkan dengan suhu ruangan sebelum dikalibrasi. Teknik Analis Laboratorium itu
penting, ikuti instruksi manual pipet dan jaga konsistensi waktu antar bobot.
Untuk sebagian besar pipet, media pengujiannya adalah air deionisasi. Sebagian media
perlu ditempatkan ke dalam wadah pengambilan sampel untuk diseimbangkan selama satu jam
sebelum kalibrasi. Suhu air harus diukur hingga 0,1 ºC terdekat untuk perhitungan selanjutnya
(lihat Tabel 5).
Ada kalanya pipet tidak boleh dikalibrasi menggunakan air. Pipet jenis ini harus dikalibrasi
menggunakan pelarut yang kompatibel. Jika pelarut yang kompatibel sangat mudah menguap,
media dimasukkan ke dalam labu, bagian atasnya diganti, dan labu ditimbang kembali untuk
mendapatkan berat akhir. Bila pelarut digunakan, densitas (g/ml) larutan harus diperhitungkan,
hal ini akan menggantikan faktor Z yang digunakan dalam kalibrasi air.
Untuk mencari massa jenis, suhu ruangan juga harus diukur.
Pipet yang digunakan secara rutin minimal harus dikalibrasi setiap bulannya dengan tiga set
5 kali penimbangan. Frekuensinya dapat dikurangi jika risiko rendah teridentifikasi. Untuk pipet
yang jarang digunakan, kalibrasi pipet setiap kali digunakan. Ini menentukan akurasi dan presisi.
Kalibrasi juga perlu dilakukan dengan tiga set yang terdiri dari 5 penimbangan setelah servis
besar selesai atau saat instrumen baru telah tiba. Unit penukaran Dosimat harus dikalibrasi
setahun sekali oleh produsen instrumen.
Penimbangan ini harus dilakukan pada tiga volume pipet yang berbeda. Penimbangan harus
mencakup rentang penggunaan pipet di laboratorium. Misalnya, pipet 10 ml akan diuji pada
volume 2 ml, 5 ml, dan 10 ml. Pipet juga dapat dikalibrasi pada pembacaan yang biasa
digunakan di laboratorium. Misalnya, jika diperlukan pengukuran 9 ml setiap hari, pipet dapat
dikalibrasi pada 2 ml, 5 ml, dan 9 ml. Analis perlu menentukan tiga pengukuran yang akan
dilakukan berdasarkan kebutuhan laboratoriumnya. Jika pipet diatur hanya untuk mengeluarkan
volume tertentu, maka kalibrasi hanya perlu dilakukan pada volume tersebut. Jika pipet hanya
digunakan untuk mengisi volume atau mengeluarkan volume yang tidak kritis, maka pipet
tersebut tidak perlu dikalibrasi. Pipet khusus ini harus diberi label untuk memberi tahu analis tentang status pipe
Spesifikasi
Spesifikasi ditentukan dari pengukuran yang dilakukan selama kalibrasi. Jika pipet tidak
memenuhi spesifikasi yang disyaratkan, pipet tersebut harus diperiksa sendiri atau dikirim ke
pabrik untuk dikalibrasi ulang atau diganti. Jika pipet tidak memenuhi spesifikasi, maka pipet
juga harus diberi label stiker tidak berfungsi. Perhitungan spesifikasinya adalah sebagai berikut.
Berat sampel diubah menjadi volume sampel dengan mengalikan faktor Z (ml/g). Namun
untuk pipet yang harus dikalibrasi dengan pelarut yang kompatibel, kepadatannya
Tabel 5
Z Faktor untuk mengubah berat sampel menjadi volume sampel
Suhu Air (ºC) Faktor Z (ml/g)
15 1.002
15.5 1.002
16 1.0021
16.5 1.0022
17 1.0023
17.5 1,0024
18 1,0025
18.5 1.0026
19 1.0027
19.5 1.0028
20 1.0029
20.5 1.003
21 1,0031
21.5 1,0032
22 1,0033
22.5 1,0034
23 1,0035
23.5 1,0036
24 1,0037
24.5 1,0038
25 1,0039
25.5 1.004
26 1,0041
26.5 1,0042
27 1.0043
27.5 1,0044
28 1,0045
28.5 1,0046
29 1,0047
digunakan, dan beratnya harus dibagi dengan kepadatan (g/ml). Pastikan untuk menggunakan
kepadatan pelarut yang benar berdasarkan suhu laboratorium. Daftar faktor Z terdapat pada Tabel 4.
Massa jenis dapat diperoleh melalui CRC, Buku Pegangan Kimia dan Fisika.
(Volume Rata-rata – Volume Teoretis) x 100

% Kesalahan (atau Akurasi) =
Volume Teoritis
Presisi = Deviasi Standar = Pengulangan

% CV (Koefisien Variasi) = (Deviasi Standar)/(Volume Rata-Rata) x 100
Spesifikasi atau batas kalibrasi untuk pipet tertentu ditentukan oleh penggunaannya di laboratorium.
Ada tiga jenis penggunaan di laboratorium; satu kritis, satu tidak kritis, dan satu lagi tidak perlu dikalibrasi.
Beberapa dispenser digunakan untuk mengisi hingga volume, dan untuk penggunaan tersebut, tidak
memerlukan kalibrasi. Hanya pengelola yang mempunyai wewenang untuk mengubah batasan.
Batasan yang disarankan untuk penggunaan kritis dan non-kritis tercantum di bawah.
Kritis: Akurasi: ÿ 2,0%
Presisi: ÿ 0,75%
Non-Kritis: Akurasi: ÿ 6%
Presisi: ÿ 2,5%
Penyelesaian masalah
Volume yang tidak akurat dapat terjadi jika prosedur pemipetan yang benar tidak diikuti, misalnya ujung
pipet tidak pas dengan pipet yang digunakan, atau tidak terpasang erat pada pipet. Permasalahan tersebut
dapat diketahui dengan mengamati penempatan lengan ejektor pada pipettor. Jika mengganggu
pengoperasian pipet, berarti ada yang salah. Pada semua pipet dan dispenser, poros yang kendor atau
retak akan mempengaruhi volume yang dikirimkan. Masalah apa pun pada mekanisme internal pipet harus
dirujuk ke teknisi perbaikan yang berpengalaman. Volume sampel juga bisa menjadi tidak akurat jika sampel
terciprat ke dalam pipet.
Perawatan Pipet
Harus disimpan dalam posisi tegak, jangan dibiarkan tergeletak di bangku. Jika menggunakan volume yang korosif atau besar,
gunakan filter.
Pengoperasian Pengukur pH
Ringkasan
Prosedur operasional standar ini menjelaskan metode yang digunakan untuk mengkalibrasi dan menggunakan
pengukur pH laboratorium.
Cakupan
Prosedur operasional standar ini berlaku untuk pH meter penggunaan umum.
Reagen
•Air, sulingan •pH
penyangga 4,00 ± 0,01
•pH penyangga 7,00 ± 0,01
•Kalium klorida 3 M – timbang 224 g KCl ke dalam labu takar 1L dan isi hingga volume
dengan air deionisasi.
Peralatan
•pengukur pH
•Kombinasi elektroda
• Gelas kimia
•Piring aduk
• Batang pengaduk
•Botol air
Prosedur
Kalibrasi (Harian)
•Tuangkan buffer segar pH 4 dan pH 7 ke dalam gelas kimia kecil (simpan sertifikat kalibrasinya
buffer)
•Pada pH meter, ubah pengaturan ke pH
• Bilas elektroda dengan air deionisasi
•Tempatkan elektroda dalam buffer pH 7. Aduk buffer pada piring pengaduk atau aduk dengan tangan.
•Jika perlu, sesuaikan pH ke 7,00 menggunakan kenop kalibrasi.
•Lepaskan elektroda dari buffer pH 7.
• Bilas elektroda dengan air deionisasi.
•Tempatkan elektroda dalam buffer pH 4. Aduk buffer pada piring pengaduk atau aduk dengan tangan.
•Jika perlu, sesuaikan pH ke 4,00 menggunakan kenop suhu.
•Lepaskan elektroda dan bilas dengan air deionisasi; simpan elektroda dalam gelas kimia berisi air
deionisasi selama penggunaan dan simpan dalam KCl 3 M setelah digunakan.
•Setelah digunakan, kembalikan pengaturan ke standby.
•Buang buffer yang digunakan.
Menggunakan
•Tempatkan elektroda dalam larutan yang akan diukur. Solusinya dapat diaduk jika diinginkan.
•Setelah pembacaan pH stabil, catat pHnya.

•Lepaskan elektroda dan bilas dengan air deionisasi.
•Ulangi untuk setiap sampel, elektroda dapat disimpan dalam air deionisasi di antara sampel.
•Setelah selesai simpan elektroda dalam KCl 3 M dan kembalikan pengaturan ke standby.
Pengoperasian Spektrofotometer
Ringkasan
Spektrometri adalah teknik yang digunakan untuk mengukur berapa banyak energi radiasi yang diserap
suatu zat pada panjang gelombang cahaya yang bervariasi. Panjang gelombang di mana puncak serapan
terjadi berguna ketika mencoba mengidentifikasi hal yang tidak diketahui. Dengan mengukur spektrum
serapan suatu zat maka dimungkinkan untuk mengidentifikasi atau menempatkan suatu zat ke dalam suatu
golongan senyawa. Hukum Beer-Lambert menjelaskan hubungan antara serapan dan konsentrasi zat
terlarut serta panjang jalur cahaya. Absorbansi berbanding lurus dengan konsentrasi dan panjang jalur
cahaya. Oleh karena itu, plot serapan versus konsentrasi menghasilkan garis lurus. Dan dengan membuat
serangkaian standar, dimungkinkan untuk menentukan jumlah suatu zat dalam suatu sampel.
Cakupan
Prosedur operasional standar ini berlaku untuk spektrofotometer laboratorium dasar yang mengukur serapan
dalam rentang tampak (280–760 nm). Panjang gelombang yang lebih pendek (UV atau ultra-violet) atau panjang
gelombang yang lebih panjang (IR atau inframerah) memerlukan instrumen lain.
Reagen
Air sulingan
Peralatan
•Spektrofotometer
•Kuvet
•Botol air
•Tisu pembersih (tisu bebas serat)
Prosedur
Untuk mengukur serapan zat tertentu dalam suatu campuran reaksi, pertama-tama perlu dilakukan peniadaan
spektrofotometer sedemikian rupa sehingga hanya zat yang diinginkan saja yang diukur. Hal ini dilakukan dengan
blanko atau kuvet yang berisi semua pelarut pembawa
kecuali substansi yang menarik. CATATAN: Blanko terpisah diperlukan untuk setiap reaksi unik.
campuran tion.
Pengoperasian Spektrofotometer
Mempersiapkan
1. Nyalakan instrumen dan biarkan memanas selama 5 - 10 menit.

2. Atur panjang gelombang menggunakan putaran yang sesuai.
3. Siapkan kuvet blanko dengan menambahkan semua pelarut kecuali bahan yang akan diukur.
4. Tanpa tabung sampel di dudukannya, sesuaikan meteran untuk membaca serapan tak terbatas
(transmisi 0%) menggunakan kontrol yang sesuai.
5. Menggunakan lap bebas serabut untuk membersihkan bagian luar kuvet kosong.
6. Angkat pintu penutup sampel dan masukkan kuvet lalu tutup. CATATAN: Jika kuvet atau tabung tidak
memiliki tanda penyelarasan, gunakan spidol untuk membuat tanda vertikal kecil di bagian atas setiap
kuvet untuk digunakan agar penyelarasan konsisten pada tempat sampel.
7. Menggunakan penyesuaian kontrol yang sesuai untuk membaca penyerapan 0,00 (transmisi 100%
sikap). Hal ini juga dikenal sebagai pengaturan skala penuh.
Mengukur serapan atau transmitansi

8. Keluarkan blanko dan masukkan kuvet yang berisi sampel. Tutup penutupnya.
9. Bacalah serapan atau transmisi yang sesuai untuk sampel.
CATATAN: Saat melakukan beberapa pengukuran pada panjang gelombang yang sama dalam jangka waktu
singkat, tidak perlu mengosongkan ulang setiap sampel. Dalam waktu yang lebih lama, unit mungkin melayang
dan perlu dilakukan kalibrasi ulang. Jika panjang gelombang berubah maka diperlukan pengaturan ulang.
Spektrofotometer harus dikalibrasi untuk keakuratan panjang gelombang secara berkala (biasanya dilakukan
oleh teknisi servis selama pemeliharaan rutin). Semua catatan kalibrasi tersebut harus disimpan dalam catatan
peralatan.
Air Laboratorium
Ringkasan
Air murni diperoleh dengan penyulingan, perlakuan pertukaran ion, osmosis balik, atau proses lain yang
sesuai. Keandalan air laboratorium dipantau dengan prosedur pengujian berikut.
Cakupan
Semua air yang digunakan laboratorium untuk menyiapkan reagen, mencuci peralatan gelas, atau bersentuhan
dengan sampel.
Tanggung jawab
Analis Laboratorium melakukan analisa air sesuai SOP.
Manajer/Direktur Laboratorium memastikan prosedur diikuti.
Manajer Mutu menentukan prosedur yang digunakan sudah sesuai.
Reagen
1. Larutan uji alkali Merkuri-Kalium Iodida. Larutkan 10 g kalium iodida dalam 10 ml air, dan tambahkan
perlahan sambil diaduk, larutan merkuri klorida jenuh sampai sedikit endapan merah yang tidak
larut. Ke dalam campuran ini tambahkan larutan es dingin 30 g kalium hidroksida dalam 60 ml air,
dan kemudian tambahkan 1 ml lagi larutan jenuh merkuri klorida. Encerkan dengan air hingga 200
ml. Biarkan endapan mengendap, dan tiriskan cairan beningnya.
2. Larutan uji Kalium Permanganat, KMnO4 (0,1 N). Encerkan 100 ml larutan 1 N
hingga 1 liter dengan air.
3. Larutan uji Perak Nitrat, AgNO3 (0,1 N).
4. Larutan uji Asam Sulfat, H2SO4 (2 N). Tambahkan 56 ml H2SO4 pekat ke dalam kira-kira 500 ml air
dalam labu 1 L. Isi hingga volume dengan air.
5. Asam Nitrat, HNO3 (70% b/v).
6. Larutan uji Amonium Hidroksida NH4OH (30 µg/100 ml). Ambil 0,1 ml NH4OH dan encerkan sampai
tanda batas dengan air dalam labu takar 100 ml. Dalam gelas kimia 100 ml, tambahkan 0,1 ml
larutan di atas. Gelas kimia ini digunakan untuk mengontrol NH3 dalam air dengan kemurnian tinggi.
Peralatan
•Pipet otomatis 1 ml
•Pipet otomatis 5 ml
•Dispenser
•Hotplate
Prosedur
1. KLORIDA. Ke dalam 100 ml air uji tambahkan 5 tetes asam nitrat dan 1 ml perak nitrat. Tidak ada
kekeruhan yang dihasilkan. CATATAN: Gunakan air keran yang mengandung klor sebagai kontrol.
2. KONDUKTIVITAS. Gunakan pengukur konduktivitas untuk menguji apakah sampel air memiliki
resistivitas lebih besar dari 16,6 Megohm pada 25 °C.
3. ZAT YANG TEROKSIDASI. Ke dalam 100 ml air uji tambahkan 10 ml asam sulfat 2 N, dan panaskan
sampai mendidih. Tambahkan 0,1 ml kalium permanganat 0,1 N, dan didihkan selama 10 menit.
Warna merah jambu seharusnya tidak hilang seluruhnya.
4. AMONIA. Tambahkan 2 ml larutan uji alkali merkuri kalium iodida ke dalam 100 ml air uji: Warna
kuning yang dihasilkan segera tidak boleh lebih gelap dari kontrol yang mengandung 30 µg
tambahan NH3 dalam 100 ml air dengan kemurnian tinggi.
Prosedur Pembersihan Peralatan Gelas Laboratorium

Ringkasan
Prosedur operasional standar ini menjelaskan berbagai metode yang digunakan untuk membersihkan
peralatan gelas di laboratorium. Peralatan gelas yang pecah, terkelupas, retak atau tergores disimpan untuk
diperbaiki dengan alat peniup kaca atau dibuang ke wadah limbah yang diperuntukkan bagi pecahan kaca.
Perhatian terhadap prosedur pembersihan ditentukan oleh kepekaan dan keakuratan hasil yang diperlukan.
Metode pembersihan peralatan gelas yang berbeda diperlukan karena beberapa alasan.
Peralatan gelas yang digunakan dalam pembuatan media mikrobiologi harus telah menghilangkan semua
bahan bakteriostatik atau bakterisida. Peralatan steril sekali pakai seperti cawan Petri dan pipet harus
memiliki sertifikat sterilitas dari produsen sebelum digunakan di laboratorium.
Dalam beberapa kasus, peralatan gelas harus dibersihkan sesuai dengan sensitivitas instrumen yang
digunakan dalam analisis. Untuk analisis jejak logam, peralatan gelas dibersihkan dengan asam sebelum
digunakan. Di laboratorium lain, seperti laboratorium mikotoksin, peralatan gelas harus dirawat untuk
menghilangkan sisa racun. Oleh karena itu, diperlukan beberapa prosedur pembersihan yang unik untuk
memenuhi kebutuhan yang berbeda dari setiap laboratorium dan analisis yang mereka lakukan.
Cakupan
Prosedur operasional standar ini berlaku untuk semua peralatan gelas laboratorium yang digunakan selama
produksi reagen laboratorium dan/atau penyiapan sampel.
Tanggung jawab
Analis Laboratorium membersihkan peralatan gelas sesuai SOP.
Manajer/Direktur Laboratorium memastikan prosedur diikuti.
Manajer Mutu menentukan prosedur yang digunakan sudah sesuai.
Reagen
•Deterjen Laboratorium (DeSCAL, Contrad NF, Dri-CONTRAD atau sejenisnya)
•Asam Nitrat, Kelas Logam Jejak
•Air, sulingan/deionisasi
•Pemutih
Peralatan
• Mesin pencuci piring gelas
•Sistem pemurnian air deionisasi

•Oven pengering kapasitas besar 75 °C
•Oven pengering kapasitas besar 110 °C
Prosedur
Peralatan Gelas Mikotoksin/ Keamanan Hayati
1. Gunakan aseton untuk menghilangkan tulisan apa pun pada peralatan gelas.
2. Bilas hingga bersih dengan air keran, pastikan tidak ada partikel tertinggal pada peralatan gelas yang dapat menyumbat
mesin cuci.
3. Masukkan ke dalam mesin cuci agar setiap bagian dapat dicuci dan dibilas dengan benar.
4. Nyalakan mesin cuci. Biarkan mesin cuci membilas selama kurang lebih 3 menit lalu isi dengan air dan tambahkan 350
ml deterjen (DRI-CONTRAD atau sejenisnya) ke dalam cucian.
5. Tutup pintu mesin cuci dan tekan start pada panel kontrol.
6. Setelah siklus pencucian selesai, biarkan peralatan gelas menjadi dingin dan masukkan ke dalam
oven yang sesuai.
7. Masukkan peralatan gelas ke dalam oven bersuhu 110 °C dan peralatan plastik ke dalam oven bersuhu 75 °C. Peralatan
gelas yang memiliki segel karet (yaitu stoples blender) harus dikeringkan dalam oven 75 °C.
Peralatan Gelas Laboratorium Umum
1. Benda yang terlalu besar untuk bisa dicuci secara efektif di mesin cuci, sebaiknya direndam
dalam rendaman deterjen 10% (Contrad NF atau sejenisnya).
3. Bilas hingga bersih dengan air keran, pastikan tidak ada partikel tertinggal pada peralatan gelas yang dapat menyumbat
mesin cuci.
5. Nyalakan mesin cuci.
oven yang sesuai.
7. Masukkan peralatan gelas ke dalam oven bersuhu 110 °C dan peralatan plastik ke dalam oven bersuhu 75 °C.
Peralatan gelas yang memiliki segel karet (yaitu stoples blender) harus dikeringkan pada suhu 75 °C
oven.
Peralatan Gelas Logam Jejak
1. Benda yang terlalu besar untuk bisa dicuci secara efektif di mesin cuci, sebaiknya direndam
dalam rendaman deterjen 10% (DeSCAL atau sejenisnya).
3. Bilas hingga bersih dengan air keran, pastikan tidak ada partikel yang tertinggal pada kaca-
peralatan yang dapat menyumbat mesin cuci.
5. Nyalakan mesin cuci.
6. Biarkan mesin cuci membilas selama kurang lebih 3 menit lalu isi dengan air dan tambahkan deterjen ke dalam cucian.
Tutup pintu mesin cuci dan tekan start pada panel kontrol.
oven yang sesuai.
8. Masukkan peralatan gelas ke dalam oven bersuhu 110 °C dan peralatan plastik ke dalam oven bersuhu 75 °C. Peralatan
gelas yang memiliki segel karet (yaitu stoples blender) harus dikeringkan dalam oven 75 °C.
Prosedur Pembersihan Menggunakan Bak Mandi/ Bak (Mandi Asam Nitrat, 10%)
Semua peralatan gelas yang digunakan dalam metode mineral harus dibersihkan menggunakan rendaman larutan HNO3 10%.
Hanya HNO3 kelas Trace Metal yang boleh digunakan saat membuat rendaman asam. CATATAN KESELAMATAN:
Kenakan peralatan pelindung sebelum bekerja dengan rendaman larutan HNO3 10%. Anda harus mengenakan sarung
tangan pelindung, pelindung wajah, dan celemek atau jas lab.
2. Bilas peralatan gelas sebaik-baiknya untuk menghindari kontaminasi HNO3 10%.

mandi larutan.
3. Pastikan peralatan gelas terendam seluruhnya di dalam bak mandi dan biarkan hingga terendam
setidaknya selama dua jam.
4. Keluarkan peralatan gelas dari bak mandi dengan hati-hati, pastikan tidak ada percikan asam
solusi pada Anda.
5. Bilas hingga bersih dengan air deionisasi.
Peralatan gelas yang memiliki segel karet (yaitu stoples blender) harus dikeringkan dalam oven 75 °C.
Deterjen Bath, 10% DeSCAL atau Contrad NF atau deterjen serupa

Semua peralatan gelas yang terlalu besar untuk dicuci secara efektif di mesin pencuci piring harus dibersihkan
menggunakan wadah deterjen. CATATAN KESELAMATAN: Kenakan peralatan pelindung sebelum bekerja dengan
rendaman deterjen 10%. Anda harus mengenakan sarung tangan pelindung dan celemek atau jas lab.
2. Bilas peralatan gelas sebaik mungkin untuk menghindari kontaminasi deterjen

mandi.
4. Keluarkan peralatan gelas dari bak mandi dengan hati-hati, pastikan tidak memercikkan larutan.
pada kamu.
5. Bilas hingga bersih dengan air keran diikuti dengan air deionisasi.
Peralatan gelas yang memiliki segel karet (yaitu stoples blender) harus dikeringkan dalam oven 75 °C.
Membersihkan Pipet Kaca

Wadah pipet terbuat dari larutan deterjen 10% (DeSCAL atau sejenisnya). Untuk membuat rendaman pipet segar,
tambahkan 13,5 liter air ke dalam bak mandi diikuti dengan 1,5 L deterjen
2. Keluarkan peralatan gelas dari bak mandi dengan hati-hati, pastikan tidak memercikkan larutan.
pada kamu.
3. Gunakan mesin cuci pipet untuk membilas pipet setidaknya tiga kali dengan deionisasi
air.
4. Masukkan pipet ke dalam oven bersuhu 110 °C hingga kering.
Prosedur Pembersihan Khusus

Cawan lebur Gooch kaca fritted (digunakan untuk beberapa metode gravimetri):
1. Bilas dengan air keran.
2. Rendam dalam larutan Amonium Hidroksida 1:7 setidaknya selama dua jam.
3. Pasang cawan lebur Gooch ke dudukan vakum.
4. Bilas tiga kali dengan air suling.
5. Keringkan di udara pada suhu kamar.
Labu Volumetrik. Berhati-hatilah untuk tidak menggunakan panas yang berlebihan karena dapat membatalkan validitas volume
yang dikalibrasi, pemeriksaan dengan air yang ditimbang harus dilakukan jika panas yang digunakan berlebihan.
Keamanan Laboratorium
Ringkasan
Sebagai seorang karyawan Anda mempunyai tanggung jawab untuk melakukan pekerjaan Anda dengan baik dan aman. Prioritas
laboratorium adalah menawarkan tempat kerja yang bebas dari bahaya yang dapat dikenali dan dapat dihindari terhadap kesehatan
dan keselamatan Anda.
Namun keselamatan tidak dapat diwajibkan atau diberikan kepada karyawan. Sebaliknya, Anda harus melakukan upaya sadar
untuk membantu memastikan kondisi yang aman bagi diri Anda sendiri dan pekerja lain di area tersebut. Hal ini memerlukan
pemahaman tentang potensi bahaya pekerjaan dan pengetahuan tentang kebijakan dan peraturan dalam menangani bahaya
tersebut.
Ada sumber risiko yang tidak dapat dihindari di lingkungan kerja mana pun. Laboratorium tentu saja tidak terkecuali. Untuk
menjaga agar bahaya tidak menyebabkan cedera, setiap individu harus mengetahui cara menggunakan alat dan perlengkapan
dengan aman dan diberi informasi tentang apa yang harus dilakukan jika terjadi kebakaran, cedera, atau keadaan darurat lainnya.
Namun, informasi saja tidak cukup. Keselamatan dalam pekerjaan merupakan suatu sikap dan juga pengetahuan.
Itu berarti:
• Menyadari bahwa kecelakaan tidak hanya terjadi pada orang-orang yang tidak mengetahui cara mencegahnya. Seringkali
para veteran berpengalaman, orang yang “lebih tahu”, yang menjadi korban karena membiarkan keakraban menghilangkan
kewaspadaan.
•Mempertahankan kesadaran yang konstan. Ini melibatkan komitmen pribadi Anda untuk melakukan semuanya
pekerjaan dengan aman.
•Memperingatkan pekerja lain akan bahaya jika mereka tidak mengikuti prosedur keselamatan. • Segera memberi tahu
supervisor jika ada peralatan darurat yang rusak atau lainnya
potensi bahaya.
•Berpartisipasi dalam komite keselamatan, membantu dalam melakukan inspeksi keselamatan, dan memastikan bahwa
semua praktik keselamatan dilakukan setiap saat.
Keselamatan adalah bagian penting dari setiap pekerjaan yang Anda lakukan, namun tidak ada pekerjaan yang begitu penting
tidak ada waktu untuk melakukannya dengan aman dan benar!
Cakupan
Semua area laboratorium termasuk penerimaan sampel, penyimpanan sampel, dan laboratorium analitik.
Prosedur-Peraturan Keselamatan Umum

•Tidak ada makan atau minum di laboratorium. Makanan tidak boleh disimpan di lemari es laboratorium mana pun, dan mesin
es tidak boleh digunakan untuk makanan atau minuman.

•Pintu laboratorium harus tetap tertutup untuk mematuhi peraturan Kebakaran setempat dan
meningkatkan keseimbangan udara di dalam laboratorium.
•Dilarang merokok.
•Pengunjung yang tidak sedang ada urusan resmi dilarang datang ke laboratorium.
Semua pengunjung harus login di bagian penerima tamu, mendapatkan alat pelindung diri dan didampingi
oleh karyawan selama berada di laboratorium.
•Saat memasuki lab, semua pengunjung diharuskan memakai alat pelindung diri (kacamata pengaman jika
kacamatanya tidak sesuai). Jika mereka menolak, mereka harus diminta dengan sopan untuk pergi;
menjelaskan laboratorium tidak dapat menanggung risiko cedera.
•Anak-anak di bawah usia kerja tidak diperbolehkan berada di laboratorium tanpa persetujuan manajer atau
direktur.
•Jaga area kerja tetap bersih dan rapi.
•Semua personel harus sadar akan bahaya yang ada dalam penanganan bahan kimia/
substansi atau pelaksanaan prosedur apa pun yang mungkin harus mereka lakukan.
Merupakan tanggung jawab setiap individu untuk mendapatkan informasi yang benar dan lengkap tentang
semua bahan kimia/zat yang digunakan di wilayah mereka dan bahaya yang terkait dengannya.
•Sebelum meninggalkan area kerja laboratorium yang ditugaskan karena alasan apa pun, pastikan tidak ada
risiko yang timbul dengan meninggalkan peralatan/prosedur tanpa pengawasan.
•Jangan pernah melakukan prosedur laboratorium yang berbahaya kecuali ada orang lain di dalam gedung.
Konsultasikan dengan supervisor Anda mengenai apa yang termasuk dalam prosedur berbahaya.
•Beri tahu personel yang tepat dan penyelia di area kerja Anda bila ada kondisi berbahaya yang tidak rutin
terjadi.
• Pasang rambu peringatan yang sesuai di area dimana kondisi berbahaya non-rutin mungkin terjadi
ada.
• Hafalkan di mana letak alat pemadam kebakaran, pancuran, dan obat cuci mata, kotak tumpahan bahan
kimia, dan kotak P3K, serta cara penggunaannya yang benar, sehingga dapat digunakan dengan cepat dan
efisien dalam keadaan darurat.
•Periksa pancuran secara teratur untuk mengetahui kemanjuran dan
kebersihannya. •Bekerja sendirian harus dihindari
Hubungi supervisor Anda jika:

•Tidak ada peraturan khusus yang mengatur penanganan bahan kimia atau prosedur yang aman, atau
peraturan tersebut tampaknya tidak berlaku untuk kasus tertentu. Konsultasikan dengan supervisor Anda
atau penasihat keselamatan sebelum melanjutkan.
•Ada keraguan mengenai tindakan pencegahan yang tepat yang harus diambil, atau jika Anda tidak memahami
petunjuk atau peralatan. Ingatlah bahwa kesehatan Anda, keselamatan Anda, dan keselamatan rekan kerja
Anda adalah perhatian utama.
•Sebelum melakukan prosedur untuk pertama kalinya. Baca instruksi dengan seksama dan diskusikan dengan
supervisor Anda. Hal ini akan mengurangi kebingungan mengenai bagaimana prosedur tersebut dapat
dilakukan dengan aman.
•Hanya mereka yang telah terlatih sepenuhnya (yang memiliki file pelatihan terkini) yang dapat melatih orang lain dalam penggunaan
peralatan kritis
Cara menggunakan alat pemadam api
Jika kebakaran kecil terjadi di laboratorium Anda dan Anda yakin dapat mengatasinya, ikuti prosedur di bawah ini untuk
mengendalikannya:
1. Beritahu personel lain bahwa ada kebakaran.
2. Temukan alat pemadam api terdekat yang sesuai dengan jenis kebakaran.*
3. Lepaskan peniti dari pegangannya (pecahkan label plastik yang menempelkan peniti ke alat pemadam).
4. Arahkan nosel pemadam api ke dasar api, lalu peras

lengan pelepasan.
5. Gunakan alat pemadam api seperti ini sampai api padam, sapu seluruh area
menutupi area tersebut.
6. Pastikan api sudah padam, menjauhlah dari area tersebut, lalu beri tahu Anda
pengawas.
7. Pastikan alat pemadam kebakaran diisi ulang setiap kali selesai digunakan, dengan memberitahukan kepada Lingkungan
Departemen Kesehatan dan Keselamatan ronmental.
* Jangan gunakan alat pemadam air atau busa pada peralatan listrik.
Jangan gunakan alat pemadam berbahan dasar air yang mengandung minyak atau pelarut.
Alat pemadam CO2 dapat digunakan pada sebagian besar jenis kebakaran.
JIKA TERJADI KEBAKARAN BESAR JANGAN COBA MENGATASI SENDIRI, AKTIFKAN ALARM,
HUBUNGI DINAS KEBAKARAN DAN IKUTI PROSEDUR EVAKUASI:
Prosedur-Aturan Keselamatan Pribadi
•Pelindung mata yang sesuai harus dipakai setiap saat saat berada di laboratorium, laboratorium persiapan, dan di lorong
laboratorium. Ini setidaknya terdiri dari kacamata resep atau kacamata pengaman. Kacamata resep atau keselamatan
tidak memberikan perlindungan yang memadai untuk beberapa prosedur.
Kacamata laboratorium dan/atau pelindung wajah harus dipakai saat melakukan atau di sekitar prosedur berikut:
1. Pembuangan dan pembersihan limbah
2. Bekerja dengan rendaman asam, dan mencuci peralatan gelas yang mengandung/mengandung bahan berbahaya.
zat-zat tersebut.
3. Asam perklorat mencerna.
•Satu-satunya pengecualian dalam penggunaan kacamata pengaman di laboratorium adalah saat melihat ke mikroskop,
menyiapkan reaksi PCR, atau memuat gel agarosa.
•Mengenakan jas lab adalah wajib di sebagian besar laboratorium. •Penutup
telinga atau pelindung pendengaran harus dipakai di ruangan mana pun saat terjadi kebisingan tinggi
tingkat.
•Pakai sarung tangan pelindung yang sesuai bila bahaya kesehatan lebih besar dari 2. Bahaya kesehatan adalah angka di
bagian biru pada berlian NFPA. Cuci tangan Anda setelah melepas sarung tangan pelindung. •Rambut panjang tidak
boleh mengganggu saat bekerja dengan bahan kimia
atau alat mekanis dan harus diikat ke belakang setiap saat

•Sandal yang dipotong atau tidak berjari kaki, dll. tidak boleh dipakai oleh petugas laboratorium atau penyiapan
sampel saat bekerja. •Pedoman untuk bahaya
kimia tertentu dapat ditemukan di bagian KASUS KHUSUS
dari panduan ini.
•Lepaskan sarung tangan sebelum menyentuh kenop pintu, telepon, saklar lampu, dll. untuk menghindarinya
kontaminasi pada permukaan umum.
Prosedur – Bahan Kimia

Penyimpanan
•Simpan asam dan basa di lokasi terpisah, dekat lantai dan dalam lemari berlabel.
•Isolasi asam perklorat dari bahan organik dan dari asam sulfat. Jangan simpan
asam perklorat di rak kayu.
•Pisahkan bahan kimia yang sangat beracun dan karsinogen dari semua bahan kimia lainnya.
•Jangan menyimpan bahan kimia pembentuk peroksida (misalnya etil eter, dioksan) lebih dari
dua belas bulan atau lebih dari tanggal yang direkomendasikan oleh pabrikan.
•Dinginkan bahan yang mudah terbakar di lemari es yang tahan ledakan/percikan api.
•Wadah bahan kimia yang terbuat dari kaca tidak boleh disimpan di lantai
•Pastikan baki penampung berada di bawah botol jika terjadi tumpahan.
Kembalikan bahan kimia, persediaan, dan peralatan terkait ke tempatnya yang semestinya setelah digunakan.
Jika wadah akan digunakan untuk limbah, lepaskan, tutupi, atau rusak label aslinya. Kemudian beri label secara
jelas dengan spidol atau label agar terlihat jelas isinya. Jika botol bahan kimia kosong, lepaskan juga atau rusak
labelnya.
Giling semua wadah pelarut logam secara elektrik sebelum memindahkan pelarut apa pun.
Botol bahan kimia cair harus diamankan saat dipindahkan antar laboratorium.
Jangan pernah menuangkan pelarut beracun atau mudah terbakar yang tidak larut dalam air ke dalam bak cuci.
Untuk menyiapkan wadah etil eter untuk dibuang, pastikan untuk menambahkan besi sulfat untuk menghilangkan
sadari bahaya ledakan akibat terbentuknya peroksida.
Saat mencampur larutan, SELALU tambahkan cairan pekat ke dalam cairan encer.
Selalu tambahkan asam ke dalam air.
Bahan organik tidak boleh diuapkan di dalam tudung. Gunakan wadah limbah untuk membuangnya
mereka. Wadah sampah organik harus ditutup bila tidak digunakan.
Bahaya Kimia Laboratorium Umum

Lembar data keselamatan bahan (MSDS) harus mudah diambil untuk semua bahan kimia/ zat yang disimpan di
laboratorium.
Asam asetat. Berbahaya jika terkena asam kromat, natrium peroksida atau nitrat
asam; harus disimpan jauh dari bahan pengoksidasi.
Aseton. Cairan yang mudah menguap. Mengeluarkan uap yang membentuk campuran yang mudah terbakar dan meledak.
tures dengan udara; jangan dicampur dengan kloroform.
Amonia (anhidrat). Cairan dan gas yang mengiritasi dan sangat kaustik serta bereaksi hebat dengan zat
pengoksidasi kuat. Isolasi dari bahan kimia lain, terutama klorin dan asam kuat.
Etil eter. Cairan yang sangat mudah menguap. Meledak secara spontan. Peroksida terkadang terbentuk saat berdiri.
Isolasi dan jauhkan dari sumber api apa pun.
Formaldehida. Paparan konsentrasi tinggi dapat menyebabkan iritasi dan peradangan kulit.
matinya selaput lendir, mata, dan saluran pernapasan.
Asam format. Korosif dan memiliki efek kaustik pada kulit. Mudah terbakar, dapat meledak
campuran besar dengan udara.
Asam hidroklorik. Larutan dalam air bersifat korosif dan mengiritasi. Asap bersifat korosif dan mengiritasi selaput
lendir. Hidrogen berevolusi saat kontak dengan logam. Jauhkan dari zat pengoksidasi.
Asam hidrosianat. Beracun, jika terhirup dapat menyebabkan hilangnya kesadaran dan kematian.
Hindari kontak dengan kulit; membentuk campuran yang mudah meledak dengan udara. Jauhkan dari sumber panas apa
pun.
Asam fluorida. Asam dan uapnya sangat beracun dan mengiritasi kulit, mata, dan saluran pernapasan. Bereaksi
dengan kaca; isolasi dan ventilasi pada saat penyimpanan.
Hidrogen peroksida. Paparan uap dalam waktu lama yang mengiritasi mata dan paru-paru. Penyebab iritasi kulit.
Dapat terurai dengan cepat jika terkontaminasi dengan tembaga, besi, atau kromium; simpan di tempat sejuk, jauh dari
bahan mudah terbakar.
Metanol. Mudah terbakar dan beracun. Hindari kontak dengan mata dan menghirup uap.
Asam sendawa. Korosif dan menyebabkan luka bakar parah jika terkena kulit. Bereaksi dengan penuh semangat
dengan anilin, hidrogen sulfida, pelarut yang mudah terbakar, hidrazin dan bubuk logam.
Asam oksalat. Membentuk senyawa yang mudah meledak dengan perak dan merkuri. Oksalat beracun.
Hindari kontak dengan kulit.
Kalium sianida. Sangat beracun jika tertelan. Mengembangkan gas asam hidrosianat
kontak dengan asam atau uap air.
Potasium hidroksida. Menghasilkan panas jika bersentuhan dengan air; simpan di tempat yang kering.
Asam salisilat. Padat yang mudah terbakar; simpan di tempat yang kering.
Natrium hidroksida. Di kelas yang sama dengan kalium hidroksida: Isolasi dari panas dan
air. Jika terkena air, akan melepaskan panas berlebih dan gas yang mengiritasi.
Asam sulfur. Asap yang korosif dan berbahaya jika terjadi kebakaran. Dapat menyala jika bersentuhan dengan
bahan yang mudah terbakar; menimbulkan korosi pada logam. Isolasi dari bahan yang mudah terbakar. Selalu tambahkan asam
ke air.
Reagen Khusus Lainnya

Eter. Sangat mudah menguap dan mudah terbakar; uapnya lebih berat daripada udara dan dapat menyebabkan kilas
balik; membentuk peroksida yang berpotensi meledak jika terkena udara dan cahaya; simpan di tempat yang berventilasi
baik; jangan simpan di lemari es kecuali jenisnya tahan ledakan.
Asam perklorat. Bereaksi hebat dengan bahan organik; penggunaan yang aman memerlukan lemari asam khusus
dengan sistem pencucian air; harus disimpan untuk melarang kontak dengan bahan organik (misalnya kayu).
Prosedur-Tumpahan Bahan Kimia. Cara penanggulangan dan pembersihan tumpahan sangatlah penting. Teknik
penahanan atau pembersihan yang tidak tepat dapat memperburuk situasi dibandingkan jika dibiarkan begitu saja. Bagian
ini memberikan beberapa pedoman khusus dalam membendung dan membersihkan tumpahan.
Ada enam kelas bahaya yang terkait dengan tumpahan, namun banyak di antaranya yang dapat diatasi
menggunakan teknik yang sama. Kelas bahaya umum adalah:
Mudah Terbakar/Organik Reaktif (terhadap udara atau air)
Asam Beracun
Pangkalan Biologis
Kelas-kelas ini memiliki bahan kimia padat dan cair di dalamnya.
Penahanan
Pastikan perlengkapan tumpahan merkuri dan asam tersedia pada saat digunakan.
Sederhananya, pengendalian adalah mencegah tumpahan agar tidak bertambah besar dan berdampak (migrasi).
Tergantung pada lokasi tumpahan dan bahan kimia yang terlibat, pembendungan dapat dilakukan dengan cara
sederhana seperti menutup pintu (untuk membatasi akses dan mencegah timbulnya debu), atau dapat juga memerlukan
penggunaan tanggul, sumbat pembuangan, dan perangkat lainnya. Pengendalian adalah langkah pertama dalam
membersihkan tumpahan, dan mencegah tumpahan berpindah sementara petugas pertolongan pertama cenderung
melukai dan terpapar pada personel. Selalu GUNAKAN PERLINDUNGAN PRIBADI YANG BENAR sebelum menangani
tumpahan apa pun. Persiapkan dan lindungi diri Anda dari kemungkinan terburuk.
Tumpahan bahan kimia padat biasanya dapat diatasi dengan sendirinya. Ambil tindakan untuk mencegah
tumpahan bahan kimia padat menyebar atau menghasilkan debu. Batasi lalu lintas di sekitar lokasi, dan larang aktivitas
mengepel/menyapu apa pun di area tumpahan sampai tumpahan selesai dibersihkan.
Tumpahan bahan kimia cair memerlukan tanggul untuk mencegah penyebaran. Sebaiknya tampung tumpahan
cairan ke arah tengah ruangan, jika memungkinkan. Hal ini terutama berlaku untuk asam dan bahan organik, yang
akan dengan mudah berpindah ke bawah dan melalui alas tiang, lemari, dan furnitur, sehingga memperparah masalah
tumpahan. Tanggul penutup dapat dibuat dengan menggunakan beberapa bahan yang berbeda: kaus kaki penyerap
universal yang panjang, bantal tumpahan, pasir, sampah tanah liat atau vermikulit – segala sesuatu yang akan
mencegah penyebaran cairan DAN tidak akan bereaksi dengan cairan yang tumpah. Alas pembuangan diperlukan
untuk mencegah tumpahan berpindah ke pipa ledeng, selokan, dan saluran air, jika ada saluran pembuangan di dalam
lokasi tumpahan.
Gunakan akal sehat dalam mencegah migrasi tumpahan; misalnya, setiap lantai memiliki kemiringan tertentu,
betapapun kecilnya, dan cairan yang tumpah selalu berpindah ke bawah kemiringan tersebut. Saluran air harus ditutup
terlebih dahulu, kalau-kalau tumpahan melewati tanggul. Penahanan yang tepat akan memudahkan pembersihan
tumpahan. Dalam beberapa kasus, mungkin perlu dilakukan tanggul dan bendungan yang harus ditangani oleh tim
tanggap tumpahan.
Selalu pastikan keselamatan pribadi terlebih dahulu, evakuasi area dan waspadai asap.
Membersihkan
Membersihkan tumpahan biasanya mengikuti pedoman umum yang ditetapkan di bawah ini. Prosedur pembersihan
yang tidak biasa mungkin memerlukan kehadiran tim tanggap tumpahan yang terlatih. Dalam keadaan apa pun,
PENGGUNAAN PERALATAN PERLINDUNGAN PRIBADI DAN PEMBERSIHAN YANG BENAR diperlukan untuk
membersihkan tumpahan apa pun dengan cara yang aman dan efisien.
Referensi harus dibuat untuk penilaian risiko lokal
Tumpahan bahan kimia padat kering/kristal/bubuk:

1. Dengan menggunakan sapu plastik dan pengki, ambil sebanyak mungkin bahan kimia yang tumpah. Berhati-
hatilah saat menggunakan sikat sebagai penahan untuk membantu menggunakan panci untuk menyendok
bahan kimia, dan bukan sebagai sapu untuk mendorong bahan kimia ke dalam panci. Yang terakhir
menghasilkan debu dalam proses pembersihan. Jika perlu, gunakan sedikit air untuk menghilangkan debu,
namun HANYA jika aman untuk dilakukan.
2. Buang bahan kimia yang tumpah, dan semua barang sekali pakai yang digunakan untuk membersihkan tumpahan,
ke dalam kantong tumpahan. Ikat, dan tempelkan label pembuangan limbah.
Tumpahan bahan kimia cair (termasuk Bahan Organik/Mudah Terbakar, Asam, dan Basa):
1. Setelah penahanan (dijelaskan sebelumnya), mulailah menempatkan bantalan tumpahan di sepanjang bagian
dalam tanggul, ke arah tengah area tumpahan. Gantilah bantal yang basah kuyup dengan yang baru sesuai
kebutuhan. JANGAN mencoba menetralisir tumpahan bahan kimia (atau bantalan tumpahan) saat menangani
tumpahan asam/basa. Hal ini berpotensi menimbulkan masalah yang lebih besar (akibat produksi gas beracun
atau panas yang tidak diperlukan dalam reaksi yang dihasilkan).
2. Gunakan ventilasi pembuangan darurat selama pembersihan untuk menghilangkan akumulasi uap. Pastikan
lemari asam terbuka penuh.
3. Setelah cairan yang tumpah dikeluarkan, hilangkan semua sisa bahan kimia dari area tumpahan. Untuk tumpahan
asam atau basa, netralkan pH area yang terkena tumpahan. Bersihkan area tersebut dengan larutan cuka (untuk
basa) atau larutan soda kue (untuk asam). Periksa pH area tersebut dengan kertas lakmus (jika tersedia) setelah
mengepel; pH area tersebut harus netral (pH 5–9).
4. PERHATIAN: Jika tumpahannya melibatkan larutan yang mengandung logam berat (kadmium, arsenik, selenium,
timbal, dan merkuri), air cucian harus ditampung, dan dibuang dengan benar.
5. Untuk tumpahan pelarut organik/mudah terbakar, bilas area tersebut dengan air sabun, dan rendam dengan bantal
tumpahan. Tergantung pada bahan kimianya, akses ke lokasi tumpahan mungkin perlu dibatasi sementara
residunya menguap.
6. Buang bantal bekas tumpahan, dan semua barang sekali pakai yang digunakan untuk membersihkan tumpahan,
ke dalam kantong tumpahan. Ikat, dan tempelkan label pembuangan limbah.
Jenis kimia berikut diklasifikasikan sebagai kasus khusus. Penanganan tumpahan yang melibatkan bahan kimia ini
memerlukan penggunaan pelindung diri khusus, peralatan/bahan pembersih dan/atau teknik khusus. Pembersihan
tumpahan ini (pengecualian: tumpahan biologis) memerlukan pemberitahuan kepada petugas keselamatan, baik untuk
meminta tanggapan terhadap tumpahan, atau untuk konsultasi mengenai tanggapan kita sendiri.
Merkuri dan senyawanya mempunyai potensi bahaya yang besar terhadap kesehatan dan lingkungan karena mudah
membentuk uap dan mudah diserap melalui kulit. Dalam insiden tumpahan, pengendalian dan pembersihan harus ditangani
dengan sangat hati-hati. Tumpahan kecil yang dapat diatasi dapat ditangani dengan menggunakan peralatan pembersih
merkuri yang tersedia secara komersial. Tumpahan yang lebih besar atau tidak terbatas (termasuk tumpahan standar
murni), atau merkuri yang ditemukan dalam perangkap pembuangan, harus dibersihkan oleh EHSD. Debu belerang tidak
boleh digunakan untuk membersihkan tumpahan merkuri; Meskipun dapat menangkap merkuri dengan baik, debu tersebut
hanya akan menambah upaya untuk mengembalikan lokasi tumpahan ke tingkat hunian/aktivitas normal.
Pelarut organik yang mengandung klor menimbulkan bahaya yang sama seperti yang disebutkan di atas, karena alasan
yang sama: pelarut tersebut mudah membentuk uap dan mudah diserap melalui kulit. Kloroform adalah bahan kimia yang
paling umum di kelas ini, mempengaruhi sistem saraf dan pernafasan, dengan menghirup uapnya secara signifikan
menyebabkan hilangnya kesadaran. Perhatian khusus harus diberikan ketika mendekati dan menangani tumpahan yang
melibatkan bahan kimia ini.

Karbon Disulfida dan Amonium Hidroksida semuanya memiliki uap yang mudah bermigrasi ke area lain sehingga
menghambat hunian dan aktivitas normal. Senyawa ini diketahui menyebabkan kerusakan pernafasan dan/atau optik
yang parah, bahkan dalam jumlah kecil. Orang yang terpapar uap dengan konsentrasi signifikan dari bahan kimia
ini memerlukan perhatian medis segera.
Tumpahan yang melibatkan bahan kimia ini memerlukan perlindungan dan penanganan pribadi khusus untuk
mendapatkan respons, pengendalian, dan pembersihan yang aman.
Karbon Disulfida sangat mudah terbakar, sehingga pemusnahan semua sumber percikan dan penyalaan menjadi
prioritas utama. Titik didihnya yang rendah (46 °C) memerlukan waktu respons yang sangat cepat. Perlindungan
pribadi harus mencakup perlindungan seluruh wajah (uap menyebabkan iritasi mata), dan semua peralatan
pembersihan harus terbuat dari bahan non-logam. Orang yang terpapar karbon disulfida memerlukan perhatian
medis segera, karena menghirup uapnya dalam waktu lama dapat menyebabkan kerusakan pada sistem saraf
pusat dan perifer, serta hati dan ginjal.
Meskipun tidak termasuk dalam daftar bahan kimia berbahaya, amonium hidroksida merupakan bahan dasar
yang sangat kuat dan berbahaya yang dapat membanjiri kartrid respirator jika tumpah sebanyak satu liter atau lebih.
Hal ini menyebabkan rasa terbakar yang parah pada lapisan hidung dan pernapasan, dan jika terpapar dalam waktu
lama dapat menyebabkan gangguan pernapasan. Peralatan pernafasan mandiri harus digunakan untuk menampung
dan membersihkan tumpahan yang lebih besar dari botol 4 liter.
Tumpahan Biologis. Kategori tumpahan ini akan menjadi salah satu dari tiga jenis. Yang pertama adalah
pertumpahan darah akibat luka parah yang terjadi di tempat kerja. Yang kedua adalah kantong autoklaf yang bocor/
sobek, meneteskan limbah (sebelum diautoklaf). Yang ketiga melibatkan tumpahnya suspensi bakteri. Masing-masing
dari ketiga skenario ini berpotensi berbahaya tetapi semuanya ditangani dengan cara yang sama: mengenakan
pakaian pelindung diri, menyeka area tersebut hingga bersih, dan menindaklanjutinya dengan larutan natrium
hipoklorit (5%) atau pemutih (10%). Hal ini akan menghancurkan agen biohazard yang dapat menyebar dari lokasi
tumpahan. Berhati-hatilah saat menangani tumpahan darah dan perlakukan sebagai HIV atau Hepatitis positif
sebagai tindakan pencegahan.
mikotoksin. Semua sampel dan standar mikotoksin yang ditangani di laboratorium bersifat sangat karsinogenik,
menargetkan hati, otak, dan sistem saraf pusat. Semuanya berbahaya jika terhirup dan tertelan. Sarung tangan
harus dipakai setiap kali menangani sampel mikotoksin. Setiap tumpahan yang melibatkan mikotoksin memerlukan
langkah pembersihan khusus dan perhatian khusus terhadap keselamatan pribadi.
Tempat tumpahan harus didekontaminasi dengan larutan natrium hipoklorit (5%) atau pemutih (10%) selama 30
menit kemudian dibersihkan kembali dengan aseton. Tekan tombol Ventilasi Darurat dan evakuasi ruangan sampai
semua asap hilang.
Prosedur Umum – Penggunaan Peralatan Laboratorium yang benar

1. Autoklaf
2. Elektroforesis
3. Keamanan mikrobiologis BSL2 (Containment Level 2) 4. Keamanan
Mycotoxin BSL2 (Containment Level 2)
5. Vakum/tekanan
6. Peralatan listrik
7. Mengangkat
8. Cairan yang mudah terbakar
9. Tabung gas
10. Barang pecah belah
11. Benda tajam

12. Lemari asam
13. Tindakan pencegahan khusus untuk tudung perklorik
1. Autoklaf
•Autoklaf beroperasi pada tekanan uap 18–20 psi (0,12–0,14 MPa). Suhu yang dihasilkan adalah 121 oC atau
lebih. Sekalipun sudah familiar dengan penggunaan peralatan, personel baru harus meminta bantuan
mengenai prosedur pengoperasian, pengemasan, pemuatan dan pelabelan sebelum menggunakannya.
•Agar proses autoklaf efektif dalam mencapai sterilisasi, suhu, waktu, dan kontak uap langsung yang memadai
sangatlah penting. Udara harus benar-benar dikeluarkan dari ruang pensteril dan dari bahan agar uap dapat
masuk sehingga bahan yang diautoklaf akan berada pada suhu perlakuan dalam waktu yang cukup untuk
mencapai sterilisasi.
•Tekanan jaket akan tetap pada 18–20 psi (0,12–0,14 MPa) dan 121 oC. Tekanan ruang akan mencapai 18–20
psi (0,12–0,14 MPa) dan 121 oC selama sterilisasi.
•Cairan yang sangat panas sering kali akan mendidih jika dikocok sedikit dan dapat mengakibatkan
terbakar. Selalu gunakan pelindung yang direkomendasikan untuk menangani bahan panas.
•Gunakan siklus yang sesuai (gravitasi atau cairan) untuk waktu yang diperlukan untuk benda tersebut
diautoklaf.
•Jika Anda memiliki pertanyaan tentang penggunaan peralatan, bicarakan dengan supervisor Anda.
Kemasan
•Gunakan wadah berlabel “Biohazard” untuk limbah mikrobiologi.
•Jangan menutup wadah atau tas dengan rapat.
•Jangan memasukkan benda tajam seperti pecahan gelas ke dalam kantong autoklaf.
•Anda harus menempelkan selotip autoklaf (menampilkan perubahan warna ketika diautoklaf pada suhu 121
°C) pada benda apa pun yang diautoklaf atau menyertakan indikator yang sesuai (misalnya Tabung Browne)
untuk menunjukkan bahwa suhu target telah terpenuhi.
Memuat
•Tempatkan wadah yang mungkin mendidih atau bocor (piring agar, dll.) di dalam autoklaf
panci.
•Jangan sekali-kali meletakkan barang-barang yang bersentuhan langsung dengan bagian bawah autoklaf.
•Jangan membebani secara berlebihan; sisakan ruang yang cukup untuk sirkulasi uap secara menyeluruh.
•Pastikan saringan steker di bagian bawah autoklaf bersih.
Dokumentasi
•Dokumentasi pengolahan setiap muatan limbah yang diautoklaf pada tanggal pengolahan,
jumlah limbah yang diolah, metode pengolahan, tanggal dan inisial.
2. Elektroforesis
Peralatan elektroforesis dapat menjadi sumber utama bahaya listrik di laboratorium.
Kehadiran cairan bertegangan tinggi dan konduktif pada peralatan ini menimbulkan kombinasi yang berpotensi
mematikan.
Banyak orang tidak menyadari bahaya yang terkait dengan peralatan ini; bahkan elektroforesis standar yang
beroperasi pada 100 volt dapat menghasilkan kejutan mematikan pada 25 miliampere. Selain itu, kebocoran sedikit
saja pada tangki perangkat dapat mengakibatkan guncangan serius.
Lindungi diri Anda dari bahaya elektroforesis dan sengatan listrik dengan melakukan tindakan pencegahan
berikut:
•Gunakan penghalang fisik untuk mencegah kontak yang tidak disengaja dengan peralatan.
•Gunakan interlock listrik.
•Sering memeriksa integritas fisik peralatan elektroforesis.

•Gunakan tanda peringatan untuk mengingatkan orang lain tentang potensi kabel listrik.
•Gunakan hanya konektor kabel berinsulasi.
•Matikan daya sebelum menyambungkan kabel listrik.
•Hubungkan satu kabel pada satu waktu hanya dengan menggunakan satu tangan.
•Pastikan tangan Anda kering saat menyambungkan kabel.

•Jauhkan peralatan dari air dan sumber air.
•Matikan daya sebelum membuka tutupnya atau meraih ke dalam ruangan.
•Jangan menonaktifkan perangkat keselamatan.
•Ikuti petunjuk pengoperasian peralatan.
3. Keamanan Mikrobiologis BSL2 (Containment Level 2).

•Akses ke laboratorium mikrobiologi terbatas pada individu yang bekerja di laboratorium. Pengawas laboratorium
harus memastikan bahwa personel yang bekerja di laboratorium BSL2 menerima pelatihan yang
sesuai mengenai tugas mereka, tindakan pencegahan yang diperlukan untuk mencegah paparan, dan
prosedur evaluasi paparan. Pelatihan harus didokumentasikan dalam file pelatihan individu.
•Orang yang berisiko tinggi tertular infeksi (kekebalan tubuh terganggu), atau mereka yang terkena infeksi dapat
menimbulkan konsekuensi serius (misalnya wanita hamil), tidak diperbolehkan berada di laboratorium
mikrobiologi atau dibatasi pekerjaannya. Direktur Laboratorium mempunyai tanggung jawab akhir untuk
menilai setiap keadaan dan menentukan siapa yang boleh masuk atau bekerja di laboratorium mikrobiologi.
•Pegawai laboratorium akan menerima imunisasi atau tes yang sesuai untuk agen yang ditangani atau berpotensi
ada di laboratorium mikrobiologi.
•Jika diperlukan, mengingat agen yang ditangani, sampel serum dasar untuk staf laboratorium mikrobiologi dan
personel berisiko lainnya akan dikumpulkan dan disimpan.
•Personel harus menerima pelatihan keselamatan khusus laboratorium setiap tahunnya.
•Personel harus menerima pelatihan tambahan ketika terjadi perubahan prosedur atau kebijakan. •Status
kesehatan pribadi dapat berdampak pada kerentanan seseorang terhadap infeksi, kemampuan menerima
imunisasi, atau intervensi profilaksis. Oleh karena itu, semua petugas laboratorium dan khususnya wanita
usia subur harus diberikan informasi mengenai kompetensi imunitas dan kondisi yang dapat mempengaruhi
mereka terhadap infeksi. Individu yang memiliki kondisi ini harus didorong untuk menghubungi penyedia
layanan kesehatan di institusi tersebut untuk mendapatkan konseling dan bimbingan yang tepat.
•Prosedur Masuk
– Kenakan jas lab yang bersih setiap kali Anda memasuki lab atau segera kenakan jas lab
pintu masuk.
– Kenakan sarung tangan pelindung sebelum menangani bahan yang berpotensi menular.
•Orang yang tidak terdaftar dalam daftar personel yang berwenang, terletak di luar pintu, hanya dapat diterima
oleh Direktur atau Pengawas Laboratorium Mikrobiologi dan harus selalu didampingi oleh orang yang
berwenang.
•Lakukan semua prosedur dengan hati-hati untuk meminimalkan terciptanya percikan atau aerosol.
•Dekontaminasi semua permukaan kerja setelah pekerjaan selesai atau di penghujung hari kerja dan setelah
tumpahan atau percikan bahan yang dapat hidup dengan disinfektan yang efektif terhadap agen yang menjadi
perhatian.
• Tindakan pencegahan tingkat tinggi harus selalu dilakukan terhadap benda tajam yang terkontaminasi
barang, termasuk jarum suntik, alat suntik, kaca objek, tabung kapiler dan pisau bedah.
•Peralatan plastik harus diganti dengan peralatan gelas bila memungkinkan.
•Hanya jarum suntik pengunci jarum atau unit jarum suntik sekali pakai yang digunakan untuk injeksi
atau aspirasi bahan infeksius.
•Jarum sekali pakai yang sudah dipakai tidak boleh ditekuk, dicukur, dipatahkan, ditutup kembali, dikeluarkan
dari alat suntik sekali pakai atau dimanipulasi dengan tangan sebelum dibuang; sebaliknya, benda-benda
tersebut harus ditempatkan secara hati-hati dalam wadah tahan tusukan dan dapat diautoklaf yang digunakan
untuk pembuangan benda tajam.
•Peralatan gelas yang pecah tidak boleh ditangani langsung dengan tangan, tetapi harus dikeluarkan dengan
cara mekanis seperti sikat dan pengki, penjepit, atau tang. Wadah berisi jarum suntik, peralatan tajam, dan
pecahan kaca yang terkontaminasi harus didekontaminasi sebelum dibuang, sesuai dengan peraturan
setempat.
•Kultur, jaringan, spesimen cairan tubuh, atau limbah yang berpotensi menular ditempatkan dalam wadah
dengan penutup yang mencegah kebocoran selama pengumpulan, penanganan, pemrosesan, penyimpanan,
pengangkutan, atau pengiriman.
•Peralatan yang terkontaminasi harus didekontaminasi sesuai dengan peraturan yang berlaku sebelum dikirim
untuk perbaikan atau pemeliharaan atau dikemas untuk transportasi.
Dekontaminasi harus didokumentasikan.
•Segera laporkan semua tumpahan dan kecelakaan yang mengakibatkan paparan bahan infeksius kepada
Direktur Laboratorium dan Petugas Keselamatan.
•Memberikan evaluasi medis, pengawasan, dan pengobatan yang sesuai dan pertahankan
catatan tertulis.
•Segera laporkan semua tumpahan dan kecelakaan yang mengakibatkan paparan organisme secara nyata
yang mengandung DNA rekombinan.
•Program pengendalian serangga dan hewan pengerat harus dilaksanakan.

•Lemari keamanan biologis yang dirawat dengan baik harus digunakan setiap kali melakukan
prosedur yang berpotensi menimbulkan aerosol atau percikan yang menular.
•Kursi kain tidak diperbolehkan berada di laboratorium mikrobiologi.
•Pelindung wajah (kacamata, masker, pelindung wajah atau pelindung percikan lainnya) harus digunakan untuk
mengantisipasi percikan atau semprotan bahan menular atau bahan berbahaya lainnya ke wajah ketika
mikroorganisme harus dimanipulasi di luar kabinet keamanan hayati.
•Sarung tangan harus selalu dipakai setiap kali menangani bahan yang berpotensi menularkan, permukaan
atau peralatan yang terkontaminasi.
•Buang sarung tangan bila sarung tangan tersebut sangat terkontaminasi, bila pekerjaan dengan bahan yang
menular telah selesai, atau bila integritas sarung tangan terganggu. Sarung tangan sekali pakai tidak boleh
dicuci, digunakan kembali, atau digunakan untuk menyentuh permukaan yang “bersih” (keyboard, telepon,
dll.).
•Jas laboratorium pelindung harus dipakai saat berada di laboratorium mikrobiologi. •Jas lab yang kotor
harus disterilkan dan dicuci seperlunya. Jika Anda berencana untuk memakai jas lab lagi, gantungkan jas
tersebut di laboratorium mikrobiologi di rak jas. Jas laboratorium tidak boleh dipakai di luar laboratorium
mikrobiologi setelah dipakai di dalam laboratorium mikrobiologi.
•Jas lab akan dimasukkan ke dalam mesin cuci oleh personel BSL2.
•Jangan melakukan atau menjawab panggilan telepon saat berada di laboratorium mikrobiologi.
•Setiap individu mencuci tangannya setelah menangani bahan yang layak, setelah melepas sarung tangan
dan sebelum meninggalkan laboratorium mikrobiologi.
•Prosedur Keluar
– Lepaskan sarung tangan.

– Lepaskan jas lab.
– Gantung jas lab atau kirim untuk disterilkan dan dicuci.

- Cuci tangan.
•Tugas penitipan akan dilaksanakan oleh personel BSL2 di bawah arahan pengawas laboratorium mikrobiologi.
•Bahan yang akan didekontaminasi di luar
laboratorium mikrobiologi ditempatkan dalam kantong limbah biologis yang tahan lama, anti bocor, dapat
diautoklaf, dan ditutup untuk pengangkutan dari laboratorium.
•Semua wadah dan vial akan dibersihkan dengan 10% pemutih, 5% natrium hipoklorit atau alkohol 70%
sebelum keluar dari lab BSL2 untuk disimpan. CATATAN: Hindari penggunaan alkohol pada botol untuk
mencegah tanda ID hilang.
4. Keamanan Mikotoksin BSL2 (Penahanan Level 2).

•Akses ke laboratorium mikotoksin terbatas pada individu yang bekerja di laboratorium tersebut
laboratorium.
•Orang yang mempunyai risiko medis yang meningkat akibat paparan racun tidak diperbolehkan berada di
laboratorium mikotoksin. Direktur mempunyai tanggung jawab akhir untuk menilai setiap keadaan dan
menentukan siapa yang boleh masuk atau bekerja di laboratorium mikotoksin.
•Pegawai laboratorium akan memiliki akses terhadap tes kesehatan yang sesuai untuk agen
ditangani atau berpotensi ada di laboratorium mikotoksin.
•Jika diperlukan, dengan mempertimbangkan agen yang ditangani, sampel serum awal untuk staf laboratorium
mikotoksin dan personel berisiko lainnya akan dikumpulkan dan disimpan.
•Semua individu yang bekerja di laboratorium mikotoksin akan diberi pelatihan yang tepat mengenai potensi
bahaya yang terkait dengan pekerjaan yang dilakukan, tindakan pencegahan yang diperlukan untuk
mencegah paparan, dan prosedur evaluasi paparan. •Prosedur Masuk
– Kenakan jas lab yang bersih setiap kali Anda memasuki lab atau segera kenakan jas lab
pintu masuk.
– Kenakan sarung tangan pelindung sebelum menangani bahan yang berpotensi beracun.
•Orang yang tidak terdaftar dalam daftar personel yang berwenang, terletak di luar pintu, hanya dapat diterima oleh
Direktur atau Pengawas Laboratorium Mikotoksin dan/atau harus selalu didampingi oleh orang yang berwenang.
•Sampel dan standar toksin hanya dapat keluar dari laboratorium Toksin BSL2 dalam botol HPLC untuk dijalankan
pada instrumen analitik, semua pekerjaan toksin lainnya harus dilakukan di lab Toksin BSL2.
•Semua sampel toksin, ekstrak dan standarnya harus disimpan di laboratorium Toksin BSL2.
•Lakukan semua prosedur dengan hati-hati untuk meminimalkan terciptanya percikan atau aerosol.
•Dekontaminasi semua permukaan kerja setelah pekerjaan selesai atau di penghujung hari kerja dan setelah tumpahan
atau percikan bahan aktif dengan bahan penonaktif yang efektif melawan racun yang menimbulkan kekhawatiran.
Untuk sebagian besar mikotoksin, komposisinya adalah 10% pemutih diikuti dengan 5% aseton.
• Tindakan pencegahan tingkat tinggi harus selalu dilakukan terhadap benda tajam apa pun yang terkontaminasi,
termasuk pecahan kaca, jarum suntik, kaca objek, tabung kapiler, dan pisau bedah.
•Peralatan plastik harus diganti dengan peralatan gelas bila memungkinkan.
•Peralatan gelas yang pecah tidak boleh ditangani langsung dengan tangan, tetapi harus dikeluarkan dengan cara
mekanis seperti sikat dan pengki, penjepit, atau tang. Wadah berisi jarum suntik, peralatan tajam, dan pecahan
kaca yang terkontaminasi didekontaminasi sebelum dibuang, sesuai dengan peraturan lokal, negara bagian, atau
federal.
•Limbah yang berpotensi beracun ditempatkan dalam wadah dengan penutup yang mencegah kebocoran
selama pengumpulan, penanganan, pemrosesan, penyimpanan, pengangkutan, atau pengiriman.
•Peralatan yang terkontaminasi harus didekontaminasi sesuai dengan peraturan setempat sebelum dikirim untuk
perbaikan atau pemeliharaan atau dikemas untuk transportasi sesuai dengan peraturan yang berlaku, sebelum
dikeluarkan dari fasilitas.
•Segera laporkan semua tumpahan dan kecelakaan yang mengakibatkan paparan bahan beracun secara nyata.
laporan kepada Direktur Laboratorium dan Petugas Keselamatan.
•Memberikan evaluasi medis, pengawasan, dan pengobatan yang sesuai dan pertahankan
catatan tertulis.
•Program pengendalian serangga dan hewan pengerat harus dilaksanakan.
•Kursi kain tidak diperbolehkan di laboratorium mikotoksin.
•Sarung tangan harus selalu dikenakan setiap kali menangani bahan yang berpotensi beracun, kontaminan
permukaan atau peralatan tertentu.
•Buang sarung tangan bila sarung tangan tersebut sangat terkontaminasi, bila pekerjaan dengan bahan beracun telah
selesai, atau bila integritas sarung tangan terganggu. Sarung tangan sekali pakai tidak boleh dicuci, digunakan
kembali, atau digunakan untuk menyentuh permukaan yang “bersih” (keyboard, telepon, dll.).
•Jas laboratorium pelindung harus dipakai saat berada di laboratorium mikotoksin. •Masukkan jas lab yang
kotor ke dalam keranjang (dilapisi dengan kantong cucian yang larut dalam air panas) yang terletak di laboratorium
mikotoksin. Jika Anda berencana untuk memakai jas lab lagi, gantungkan di laboratorium mikotoksin di rak mantel.
Jas lab tidak boleh dipakai di luar laboratorium mikotoksin setelah dipakai di dalam laboratorium mikotoksin.
•Jas lab akan dimasukkan ke dalam mesin cuci oleh petugas BSL2, bila perlu disterilkan terlebih dahulu.
•Jangan membuat atau menjawab panggilan telepon saat berada di laboratorium mikotoksin.
•Setiap orang mencuci tangannya setelah menangani bahan beracun, setelah melepas sarung tangan
dan sebelum meninggalkan laboratorium mikotoksin.

•Prosedur Keluar
– Lepaskan sarung tangan

– Lepaskan jas lab
– Menggantung jas lab atau menaruhnya di keranjang (yang terletak di dalam laboratorium mikotoksin).
- Cuci tangan
•Tugas penitipan akan dilaksanakan oleh personel BSL2 di bawah arahan
pengawas mikotoksin.
•Semua peralatan gelas dan plastik yang perlu dikirim ke kamar kecil akan didekon-
terkontaminasi dengan pemutih sebelum meninggalkan laboratorium mikotoksin.
5. Vakum/Tekanan
•Matikan penyedot debu jika tidak digunakan.
•Gunakan hanya pipa vakum untuk sambungan ke peralatan vakum.
•Terapkan vakum hanya pada peralatan gelas yang dibuat khusus untuk tujuan tersebut, dan bungkus labu
dengan pita fleksibel (saluran, listrik, dll.) sebelum melakukan penyedotan.
• Hilangkan kekosongan secara perlahan di seluruh bagian sistem sebelum membuka peralatan.
•Periksa semua peralatan vakum untuk mengetahui adanya cacat sebelum digunakan. Buang semua peralatan gelas
vakum yang terkelupas, retak, atau pecah.
6. Peralatan Listrik
•Jangan menggunakan peralatan listrik jika tidak berfungsi dengan baik. Periksa apakah ada yang usang atau
kabel listrik rusak atau sakelar kontrol rusak.
•Pengujian keamanan kelistrikan lokal harus dilakukan secara berkala dan berkala (umumnya
sekali setahun)
•Hindari semua kontak dengan air saat menggunakan peralatan listrik.
•Gunakan stopkontak yang dibumikan dengan pemutus arus saja. Tidak ada kabel ekstensi.
•Pastikan instrumen yang digunakan secara seri mempunyai tegangan yang sama.
•Pastikan sakelar daya utama dalam posisi “OFF” dan instrumen dicabut sebelum diservis,
jika memungkinkan.
•Jangan pernah melewati perangkat keselamatan apa pun.
•Jangan gunakan peralatan listrik seperti mixer atau piring panas di sekitar yang mudah terbakar
pelarut.
•Gunakan hanya alat pemadam karbon dioksida atau bubuk kering jika terjadi kebakaran di dalam atau di dekat listrik.
peralatan kal.
•Jika listrik padam, matikan atau cabut peralatan untuk mencegah kerusakan; jika mengeluarkan asap
terdapat penutup kap dan pintu yang sesuai. Evakuasi jika perlu.
•Jangan menggunakan peralatan listrik atau peralatan apa pun yang melebihi arus listrik terukur dari sirkuit yang
dimaksudkan. Ingatlah bahwa peralatan lain di sirkuit itu juga perlu dipertimbangkan saat menghitung jumlah total
ampli yang akan ditarik. Jika Anda tidak yakin tentang nilai ampli untuk sirkuit tertentu, mintalah supervisor Anda
untuk meminta bantuan dari staf pemeliharaan yang sesuai.
•Jika, selama percobaan berlangsung, pemutus arus putus, matikan semua listrik
peralatan di sirkuit itu dan beri tahu supervisor Anda.

•Saat menggunakan beberapa colokan stopkontak untuk stopkontak listrik, berhati-hatilah agar tidak melebihi nilai arus
listrik pada sirkuit. Perangkat harus memiliki pemutus arusnya sendiri. Jika Anda mencapai titik dengan jumlah
stopkontak yang tidak mencukupi, sekarang saatnya untuk mengevaluasi beban sirkuit.
7. Mengangkat
•Perbedaan fisik membuat penetapan batas pengangkatan yang aman bagi semua pekerja menjadi tidak praktis.
Tinggi badan dan berat badan tidak selalu menunjukkan kemampuan mengangkat.
•Untuk mengangkat suatu benda, perhatikan pedoman berikut:
– Periksa benda yang akan diangkat.
– Lihat dan ketahui kemana tujuan Anda.
– Kenakan peralatan pelindung yang diperlukan, seperti sarung tangan, celemek, dan sepatu keselamatan.
– Jika beban terlalu berat atau besar untuk Anda tangani sendiri, carilah bantuan.
– Pada pekerjaan yang memerlukan dua orang atau lebih, bekerjalah secara bersama-sama. Tetapkan satu individu
untuk memanggil sinyal.
– Gunakan metode pengangkatan yang benar:
– Buatlah penilaian awal sebelum mengangkat untuk memastikan Anda dapat mengatasinya.
– Letakkan kaki Anda dengan kokoh, satu kaki sedikit di depan yang lain.
– Berjongkoklah sedekat mungkin dengan beban.
– Jaga punggung tetap lurus.
– Pegang benda tersebut dengan kuat menggunakan telapak tangan.
– Angkat dengan kaki dan lengan bawah untuk mencegah ketegangan punggung.
– Pegang erat benda tersebut saat sedang dipindahkan.
– Sebelum meletakkan beban, pastikan jari tangan dan kaki Anda dalam keadaan bersih.
– Bila harus mengubah arah, jangan memutar badan; gunakan kakimu untuk memutarnya
seluruh tubuh.
•Jika tersedia gunakan sabuk pengangkat untuk benda berat.
•Pelatihan yang sesuai harus diberikan dalam prosedur penanganan manual.
8. Cairan Mudah Terbakar
•Lembar data keselamatan bahan (MSDS) harus mudah diambil untuk semua bahan kimia
kalori/zat yang disimpan di laboratorium.
•Semua pelarut harus ditangani dengan hati-hati, meskipun pelarut tersebut mungkin relatif tidak aktif dari sudut pandang
kimia. Beberapa pelarut yang umum digunakan bersifat mudah menguap dan berbahaya jika terhirup dalam jumlah
yang relatif kecil. Beberapa mudah diserap melalui kulit dan sebagian besar mudah terbakar.
•Hindari timbulnya percikan api statis saat memindahkan cairan yang mudah terbakar dari drum
dengan membumikan drum secara elektrik.
•Simpan cairan mudah terbakar dalam jumlah besar di wadah penyimpanan aman dan mudah terbakar yang sesuai.
Simpan cairan yang mudah terbakar dalam jumlah minimum di laboratorium.
Gunakan reagen lama terlebih dahulu. Semua cairan yang mudah terbakar harus disimpan dalam wadah aman yang
disetujui. Jangan pernah mengembalikan cairan ke wadah aslinya.
•Jauhkan cairan yang mudah terbakar dari panas, sinar matahari langsung, dan zat pengoksidasi kuat seperti asam
kromat, permanganat, klorat, atau perklorat.

•Tangani bahan yang mudah terbakar dalam lemari asam, hindari penggunaan bahan pengoksidasi secara bersamaan.
•Pastikan wadah pelarut disimpan pada baki tetesan.
9. Tabung Gas
•Pastikan tutupnya terpasang erat saat menyimpan atau memindahkan silinder. (Ini melindungi batang katup agar tidak
patah secara tidak sengaja.) Pindahkan tabung gas dengan truk tangan yang sesuai. Tutup pelindung harus berada di
tempatnya sebelum silinder dilepaskan dari penyangganya.
•Selalu dukung tabung gas dengan tali pengikat, rantai atau penyangga yang sesuai untuk mencegahnya
dari terjatuh.
•Tutup semua silinder dan katup bangku bila tidak digunakan.
•Pastikan regulator yang sesuai digunakan pada setiap tabung gas.
•Jangan sekali-kali menggunakan silinder yang isinya tidak dapat diidentifikasi secara pasti.
•Jangan sekali-kali memaksakan katup silinder.
•Jangan sekali-kali menggunakan oli atau gemuk pada regulator atau katup
tangki. •Jangan gunakan regulator atau tangki jika terdapat oli atau gemuk yang mengandung oksigen atau oksidan lainnya.
Zat yang mudah terbakar jika terkena oksidan bersifat mudah meledak.
•Reaksi yang membutuhkan tabung gas beracun, mudah terbakar atau reaktif, harus dijalankan di lemari asam, dan rak
yang sesuai harus disediakan untuk menampung silinder.
•Jika terjadi kebakaran, matikan gas yang mudah terbakar, lalu gas pengoksidasi jika memungkinkan!
•Jangan memadamkan nyala api yang melibatkan gas yang sangat mudah terbakar sampai sumber gas telah dimatikan.
Jika tidak, api dapat menyala kembali disertai ledakan.
•Lepaskan regulator dari silinder yang hampir kosong dan segera ganti tutup pelindung;
dengan menggunakan selotip atau label, beri label pada silinder sebagai “KOSONG”.
•Untuk silinder yang digunakan dalam analisis GC/HPLC, perangkap kelembaban harus digunakan dan diperiksa
secara teratur.
10. Barang pecah belah
•Pakailah sarung tangan tahan panas atau gunakan penjepit saat menangani peralatan gelas atau peralatan tersebut
telah dipanaskan.
•Jika peralatan gelas sudah siap untuk dibersihkan, bawalah ke tempat pencucian, dan sebutkan apa saja
instruksi pembersihan khusus.
•Lumasi semua permukaan kontak dan kenakan sarung tangan pelindung tahan potong/slash saat memasukkan kaca ke
dalam sumbat atau pipa; masukkan kaca sehingga gaya yang diberikan menjauhi tubuh Anda. •Jangan menggunakan
kekuatan berlebihan.
•Jangan menutup labu kaca yang berisi uap panas yang dapat mengembun.
•Buang peralatan gelas yang terkelupas atau pecah ke dalam wadah Kaca Pecah. Semua pecahan barang pecah belah
harus segera disapu dan dikeluarkan dari bangku atau lantai dan ditempatkan di wadah yang disediakan khusus untuk
tujuan tersebut. •Jangan letakkan peralatan gelas apa pun di wadah limbah
umum. •Beri tahu supervisor Anda jika ada kerusakan signifikan.
•Peralatan gelas yang pecah dapat ditempatkan dalam wadah yang kaku dan tertutup rapat (misalnya kotak). Beri label
pada wadah dengan “Pecahan Kaca”.
11. Benda tajam
•Berhati-hatilah agar diri Anda tidak tertusuk jarum.
•Jangan letakkan alat suntik bekas di dalam wadah yang berisi pipet atau peralatan gelas lain yang memerlukannya
penyortiran.
•Jangan menutup kembali jarum bekas.
•Buang jarum ke dalam wadah benda tajam yang dapat diautoklaf.
•Pastikan wadah benda tajam diautoklaf sebelum dibuang.
•Setelah wadah benda tajam disterilkan, dapat ditambahkan Plester Paris dan dibiarkan kering sebelum dibuang, hal
ini akan melumpuhkan benda tajam dan memastikan tidak ada orang yang tersangkut secara tidak sengaja.
•Jarum, pisau, dll. dianggap berbahaya meskipun steril, tertutup, dan dalam
wadah aslinya.
12. Lemari Asam

•Tudung harus dimatikan dan selempang ditutup bila tidak digunakan. Jika tudungnya adalah a
kap kecepatan variabel tidak bisa dimatikan, pastikan saja selempangnya tertutup saat
tidak digunakan.
•Peralatan dan material lainnya harus ditempatkan dan semua pekerjaan harus dilakukan minimal 15 cm (6 inci) di
belakang bukaan selempang. Praktik ini akan mengurangi paparan area laboratorium terhadap asap kimia akibat
turbulensi udara.
•Saat tudung sedang digunakan, selempang harus dijaga pada ketinggian aliran udara optimal. Stiker yang ditempel
tepat di sebelah selempang menunjukkan ketinggian ini. Selempang adalah penghalang utama Anda untuk
perlindungan terhadap kebakaran dan ledakan yang mungkin terjadi di lemari asam.
•Kertas dan bahan lainnya tidak boleh masuk ke saluran pembuangan kap mesin. Benda asing dapat masuk ke dalam
saluran kerja dan kipas angin, dan akan berdampak buruk pada kinerja lemari asam.
•Tudung tidak dimaksudkan untuk menyimpan bahan kimia atau peralatan. Semua kelebihan bahan kimia dan
peralatan harus disimpan di tempat yang dirancang untuk penyimpanan jangka panjang.
•Peralatan dan material lainnya tidak boleh disimpan di dekat area penyekat (slot di belakang kap mesin). Penyekat ini
menyediakan sarana pergerakan udara melalui lemari asam. Jika terhalang, kap mesin tidak akan memberikan
pergerakan udara yang konsisten.
•Peralatan besar yang ditempatkan dalam lemari asam harus ditinggikan minimal 3 - 4 cm (1½ “) di atas permukaan
kerja untuk memungkinkan pergerakan udara tanpa hambatan di bawah peralatan.
•Saat personel bekerja di dalam lemari asam, selempang harus ditarik ke bawah hingga ketinggian yang dapat
melindungi wajah dan dada bagian atas pengguna. Satu-satunya saat selempang lemari asam harus terbuka penuh
adalah saat menyiapkan peralatan untuk suatu prosedur.
•Periksa apakah ada aliran yang cukup di dalam kap mesin sebelum mulai bekerja.
•Jangan mengandalkan knalpot lemari asam untuk melindungi Anda dari cipratan atau proyektil -- PAKAI PERALATAN
KESELAMATAN YANG SESUAI DENGAN JENIS BAHAN KIMIA DAN
PERALATAN YANG DIGUNAKAN.
•Jika Anda mempertanyakan apakah tudung asap berfungsi dengan baik, hubungi Kesehatan Lingkungan
dan Departemen Keamanan.

13. Tindakan Pencegahan Khusus untuk Tudung Perklorik

•Orang yang menggunakan asam perklorat harus benar-benar memahami bahayanya.
•Asam perklorat yang tumpah harus dicuci bersih dengan jumlah besar
air.
•Penggunaan bahan organik atau bahan kimia pada sungkup harus dihindari. •Api
gas atau penangas minyak tidak boleh digunakan di dalam kap mesin.
•Goggles atau pelindung wajah harus digunakan, serta penggunaan selempang lemari asam bila
memungkinkan untuk keamanan tambahan.
Prosedur pencucian lemari asam asam perklorat

1. Prosedur ini harus dilakukan setelah setiap penggunaan asam perklorat.
2. Cabut semua peralatan yang ada di lemari asam.
3. Tutup selempangnya.
4. Nyalakan semprotan pencuci.

5. Semprotan pencuci harus menyala setidaknya selama 15 menit.
Bagian II
Bagian analitis
81
Prosedur analitis
Perkenalan
Produksi ternak yang optimal terutama ditentukan oleh kecukupan nutrisi ternak baik dari segi
fisiologis, ekonomi, dan ekologi. Untuk menyediakan nutrisi yang dibutuhkan hewan untuk
memenuhi kebutuhan pemeliharaan, pertumbuhan, kehamilan dan produksi daging, susu, telur,
wol dan tenaga kerja, untuk mengurangi risiko terhadap kesehatan hewan dan untuk
meminimalkan ekskresi dan emisi ke lingkungan. Oleh karena itu, nilai gizi pakan yang
digunakan dalam pakan harus diketahui secara pasti. Sebagian besar pakan ternak seperti
hijauan dan produk sampingan dari makanan manusia serta produksi bioenergi memiliki kualitas
yang bervariasi sehingga memerlukan analisis per batch. Karena kebutuhan nutrisi diperoleh
dengan menggunakan metode standar, maka sangat penting bahwa kandungan nutrisi pakan
dianalisis dengan metode standar yang sama atau serupa. Selain itu, penggunaan metode
standar meningkatkan transparansi data di antara laboratorium, lembaga, dan perusahaan.
Bagian kedua dari manual ini menjelaskan metode yang umum digunakan untuk menentukan
komposisi kimia dan mineral pakan, serta beberapa mikotoksin penting.
Uraian metodenya sesuai dengan urutan item yang tetap dimulai dengan prinsip, ruang lingkup,
tanggung jawab, peralatan, reagen, prosedur, perhitungan, kendali mutu, keterangan, gangguan
dan pemecahan masalah serta referensi. Untuk peralatan dan reagen hanya disebutkan
kebutuhan khusus laboratorium. Prosedurnya dijelaskan secara singkat, lebih detail dapat
ditambahkan sesuai dengan fasilitas spesifik masing-masing laboratorium. Persiapan sampel
tidak dijelaskan dalam prosedur, namun pedoman diberikan pada bagian pertama manual ini.
Mengenai pengendalian kualitas, penggunaan sampel kontrol dalam setiap proses sangat
penting untuk menjamin presisi. Selain itu, analisis duplikat direkomendasikan dan batasan
ketat untuk mengevaluasi duplikat juga disebutkan. Ketika laboratorium tidak mampu mencapai
batas-batas ini, reproduktifitas intralab spesifik harus ditentukan dan dikutip bila diminta. Berikut
ini akan dibahas latar belakang dan relevansi metode analisis feed.
Sejak Henneberg dan Stohmann mengembangkan skema analisis Weende pada tahun
1860, komponen kimia utama pakan ternak dianalisis menggunakan metode empiris yaitu
kelembaban, protein kasar, serat kasar, lemak kasar dan abu kasar, sedangkan fraksi sisa
ekstraktif bebas nitrogen dihitung. berdasarkan perbedaan. Pada tahun 1963 Van Soest
mengembangkan skema analisis khusus yang bertujuan untuk mengkarakterisasi sifat dinding sel dengan lebih baik.
Pada Tabel 1, kedua skema analisis ini diberikan bersama dengan kandungan kimia yang
diwakilinya.
Penentuan kadar air yang diikuti dengan kadar abu kasar pada pakan menghasilkan
kandungan bahan organik yang mengandung zat nutrisi bagi hewan. Abu mentah terdiri dari
abu yang tidak larut, tidak berguna bagi hewan, mineral dan elemen jejak.
Protein kasar ditentukan sebagai nitrogen dan berasal dari protein asli, terutama asam
amino dan peptida, di satu sisi dan non-protein seperti amonia, urea, nitrat, amina
82 Penjaminan mutu laboratorium nutrisi/ analisis pakan ternak
di sisi lain; yang pertama adalah bahan penyusun langsung untuk pembentukan protein hewani; Nitrogen non
protein (NPN) dengan adanya energi merangsang pertumbuhan bakteri rumen, sumber protein berkualitas tinggi
bagi hewan.
Lemak kasar terutama mengandung asam lemak dan terkadang pigmen dan lilin; yang pertama menyediakan
energi, tetapi juga bahan penyusun pembentukan lemak hewani dan merupakan sumber vitamin.
Fraksi terbesar dalam sebagian besar pakan adalah karbohidrat, yang juga menghasilkan energi, dan sifatnya
sangat beragam. Ada yang membedakan karbohidrat struktural dan non-struktural. Ada beberapa metode untuk
mengkarakterisasi karbohidrat struktural.
Serat kasar terutama terdiri dari selulosa, polimer linier glukosa dan selanjutnya lignin, polimer asam fenolik. Serat
deterjen netral (NDF) mewakili total dinding sel: hemiselulosa, selulosa, dan lignin. Serat deterjen asam (ADF) mirip
dengan serat kasar. Perbedaan antara NDF dan ADF terletak pada ukuran hemiselulosa, yang merupakan polimer
bercabang dari gula yang berbeda. Perbedaan antara ADF dan lignin terletak pada ukuran selulosa.
Hemiselulosa dan selulosa sebagian dapat dicerna oleh hewan ruminansia, tetapi hampir tidak dapat dicerna oleh
hewan monogastrik; kecernaannya terutama bergantung pada derajat lignifikasi. ADF mungkin mengandung
nitrogen akibat denaturasi protein melalui pencoklatan enzimatik (reaksi Maillard). Pektin juga merupakan
polisakarida matriks, tetapi sangat mudah dicerna. Di antara karbohidrat non-struktural, pati, fruktosan dan gula
merupakan komponen penting.
Penentuan kandungan energi kotor pakan memberikan gambaran nilai kalorinya.
Hijauan yang dipanen pada kondisi iklim yang baik, dapat disimpan untuk pakan pada periode yang kurang
menguntungkan. Selama proses ensiling, gula difermentasi menjadi asam laktat dan asam asetat, sebagian menjadi
etanol, dan terkadang menjadi asam butirat yang kurang diinginkan. Karakterisasi produk fermentasi membantu
mengevaluasi kualitas silase dan juga dapat digunakan untuk mengoreksi kandungan DM pada silase karena
hilangnya zat-zat yang mudah menguap selama pengeringan oven.
Selain protein dan energi, hewan membutuhkan mineral dan trace elemen. Kalsium dan fosfor adalah dua
mineral yang sangat penting untuk perkembangan tulang hewan, tetapi juga untuk produksi susu dan telur. Mineral
penting lainnya adalah magnesium, natrium dan kalium. Karena sebagian besar tumbuhan menyediakan natrium
yang tidak mencukupi untuk pakan ternak dan mungkin kekurangan kandungan klorida yang cukup, suplementasi
garam adalah bagian penting dari pola makan bergizi seimbang untuk hewan. Elemen jejak sangat penting untuk
reaksi enzimatik dalam tubuh; ketersediaan hayatinya mungkin sangat bervariasi. Yang paling penting adalah besi,
tembaga, seng, mangan, kobalt, yodium dan selenium.
Karena hewan ruminansia mampu mencerna hijauan dan pakan yang kurang mudah dicerna seperti jerami dan
dedak, metode kecernaan in vitro mungkin sangat informatif untuk evaluasi pakan.
Selain zat gizi, pakan juga mungkin mengandung zat yang tidak diinginkan. Senyawa-senyawa tersebut
didefinisikan sebagai bahan-bahan atau produk-produk yang terdapat di dalam dan/atau pada produk yang ditujukan
untuk pakan ternak dan mempunyai potensi bahaya terhadap kesehatan hewan atau manusia atau terhadap
lingkungan atau dapat berdampak buruk terhadap produksi ternak. Perwakilan yang paling terkenal adalah dioksin,
PCB, logam berat dan mikotoksin. Sebagai kontaminan yang khas, keberadaannya tidak dapat sepenuhnya
dihilangkan, namun kandungannya dalam produk yang ditujukan untuk pakan ternak harus dikurangi, dengan
memperhatikan toksisitas akut, bioakumulasi, dan penguraian zat tersebut, untuk mencegah hal-hal yang tidak
diinginkan dan dapat terurai. efek berbahaya.
Bagian II – Prosedur analitis 83
Tabel 1
Skema Weende dan Van Soest untuk analisis pakan dan
kandungan kimia terkait
Analisis Weende Kandungan kimia Analisis Van Soest
kelembaban Air
Protein
Protein mentah
N non-protein
Lemak
Lemak kasar
Pigmen
Larut dalam deterjen netral
Pati
Gula
Bahan organik
Ekstraktif
bebas nitrogen Asam organik
Bahan kering
Pektin
Hemiselulosa
Selulosa
NDF
Serat kasar Lignin ADF
N. terikat serat
Abu yang tidak larut silika

Abu mentah Bahan anorganik
Abu larut
ADF = serat deterjen asam

NDF = serat deterjen netral
Catatan: Nilai seluruh konstituen yang diberikan pada Tabel 1 dan dianalisis dengan metode yang diberikan di bawah
ini HARUS dilaporkan ke satu tempat desimal saja.
Di hampir semua negara, tingkat maksimum zat-zat yang tidak diinginkan telah ditetapkan.
Jika melebihi batas tersebut, dilarang mengimpor produk dan pakan. Oleh karena itu, analisis yang akurat sangat
penting untuk zat-zat ini. Dalam dokumen ini diberikan metode untuk mikotoksin yang paling penting (aflatoksin,
fumonisin, deoxynivalenol dan zearalenone).
Bahan kering
1. Prinsip
Bahan kering ditentukan secara gravimetri sebagai residu yang tersisa setelah pengeringan pada suhu 103 ºC
dalam oven berventilasi.
2. Ruang Lingkup
Prosedur ini berlaku untuk penentuan bahan kering pada bahan pakan, pakan dan hijauan yang dikeringkan
sebagian (85% bahan kering) dengan kandungan asam volatil rendah. Untuk pakan gandum utuh, silase dan
pakan dengan kadar gula tinggi, gunakan prosedur yang berbeda (lihat keterangan 9.1).
3. Tanggung jawab
Analis Laboratorium harus melakukan analisis sesuai metode ini. Analis Laboratorium bertanggung jawab untuk memastikan
bahwa semua ketentuan yang ditetapkan dalam metode ini dipenuhi dan dipatuhi dengan ketat. Setiap penyimpangan dari
metode yang ditentukan harus dicatat dan penyelia diberitahu
4. Peralatan
4.1 Piring aluminium (panci), diameter kira-kira 50 mm, kedalaman 40 mm, tertutup.
4.2 Timbangan elektronik analitik, akurat hingga 0,1 mg.
4.3 Oven pengeringan udara paksa pada suhu 103 ± 2 °C. Oven sebaiknya dilengkapi dengan rak untuk memudahkannya
sirkulasi udara. Ini harus dioperasikan dengan ventilasi terbuka.

4.4 Desikator.
5. Reagen
Tidak ada.
6. Prosedur
6.1 Piring aluminium kering (4.1) dengan penutup pada suhu 103 ± 2 °C selama minimal 2 jam.
6.2 Tutupi cawan dan pindahkan ke desikator (4.4).
6.3 Segera tutup desikator dan biarkan cawan tertutup mendingin hingga mencapai suhu kamar.
Jangan biarkan cawan tertinggal di dalam desikator lebih dari 2 jam.
6.4 Timbang cawan dengan penutup (W1) hingga mendekati 0,1 mg, keluarkan satu per satu dari desikator dan jaga agar
desikator tetap tertutup di antara pelepasan cawan. Gunakan penjepit untuk memegang gelas kimia.
6.5 Tambahkan sekitar 2 g sampel bubuk ke setiap cawan. Catat berat cawan beserta penutup dan sampel (W2) hingga
0,1 mg terdekat.
6.6 Kocok cawan secara perlahan untuk mendistribusikan sampel secara merata dan memaparkan area maksimum
untuk pengeringan.
6.7 Masukkan sampel (dengan penutup dilepas ke samping) ke dalam oven yang sudah dipanaskan sebelumnya pada
suhu 103 ± 2 °C (4.3) dan keringkan setidaknya selama 2 jam, mulai menghitung waktu setelah oven mencapai
suhu (kering hingga berat konstan, mungkin perlu memeriksa ini untuk berbagai jenis sampel, setelah dipastikan
gunakan waktu pengeringan tersebut).
6.8 Pindahkan sampel ke dalam desikator (4.4), letakkan penutup pada setiap cawan, tutup desikator dan biarkan dingin
hingga mencapai suhu kamar. Jangan biarkan sampel tertinggal di dalam desikator lebih dari 2 jam.
6.9 Timbang cawan dengan penutup dan sampel kering (W3), catat beratnya hingga ketelitian 0,1 mg.
7. Perhitungan
Persen Bahan Kering (% DM):
% DM = (W3 – W1) x 100 / (W2 – W1)
Di mana,
W1 = berat cawan kosong (g), W2 = berat
cawan dan sampel (g), dan W3 = berat cawan dan
sampel setelah dikeringkan (g).

Persen Kelembaban:
% Kelembapan = 100 – % DM (lihat keterangan 9.2)
8. Pengendalian Mutu
Dalam setiap batch, standar kontrol (sampel QC) harus dianalisis. Sampel QC laboratorium dapat dibuat dari sampel pakan
ternak/hijauan yang sifatnya sama dengan sampel yang akan dianalisis. Ambil 3–4 kg sampel QC pilihan, giling hingga lolos
saringan ukuran pori 1 mm dan simpan di tempat sejuk dan kering. Analisis sampel QC 15–20 kali, ambil rata-rata dan berikan
± 2 SD sebagai rentang yang dapat diterima.
Sampel harus dianalisis dalam rangkap dua. Selisih antara nilai dua penentuan paralel alel yang dilakukan pada sampel
yang sama tidak boleh melebihi 0,2% dari nilai absolut bahan kering. Jika perbedaannya lebih tinggi dari 0,2%, ulangi
analisisnya.
9. Keterangan
9.1 Untuk penentuan bahan kering dalam butiran, keringkan pada suhu 135 ± 2 °C selama 2 jam; untuk silase (ukuran sampel:
minimal 500 g) gunakan suhu 60 ± 1 °C selama 24 jam dan untuk sampel dengan gula tinggi (misalnya molase, ampas
tebu, pakan majemuk yang mengandung sukrosa atau laktosa lebih dari 4%) gunakan suhu 80–85 °C dalam a oven
vakum.
9.2 Selain kelembapan, senyawa volatil lainnya, seperti amonia dan asam lemak volatil, hilang selama pengeringan. Hal ini
harus diperhitungkan dengan menghitung kadar air.

konten masa depan.
10. Interferensi, pemecahan masalah dan keamanan

10.1 Waktu dan suhu harus dipatuhi dengan ketat.
10.2 Sampel hendaknya ditempatkan dalam oven pengering agar udara dapat bersirkulasi dengan bebas.
10.3 Cawan sampel tidak boleh dikemas terlalu rapat dalam desikator. Pergerakan udara diperlukan untuk mendinginkan
cawan sampel. Buka desikator yang telah diisi dengan sangat perlahan setelah sampel mendingin. Kekosongan
terbentuk selama pendinginan dan pembukaan yang tiba-tiba mengakibatkan turbulensi yang dapat mengeluarkan
sampel dari wadah yang tidak tertutup.
10.4 Tutup desikator harus dibuka untuk mengeluarkan setiap wadah dan ditutup selama penimbangan. Membiarkan tutupnya
terbuka memungkinkan sampel menyerap kelembapan.
10.5 Desikan harus diperiksa dan dikeringkan secara berkala. Dianjurkan untuk menggunakan pengering dengan indikator
warna untuk kelembapan.
10.6 Gunakan penjepit untuk memegang gelas kimia setiap saat.
11. Referensi
AOAC 930.15. 2000. Kadar air pakan ternak hilang pada pengeringan 135 °C selama 2 jam. Pengumpul-
burg, MD, AS.
ISO 6496. 1999. Bahan pakan ternak – Penentuan kadar air dan bahan mudah menguap lainnya
isi. Jenewa, Swiss.
Peraturan Komisi (EC) No 152/2009. 27 Jan 2009. Menetapkan metode pengambilan sampel dan analisis untuk
pengendalian pakan secara resmi. Lampiran III, A, Jurnal Resmi Eropa
Serikat L54/1 tanggal 26/02/2009.
Abu Kasar
1. Prinsip
Abu ditentukan secara gravimetri sebagai residu setelah pembakaran pada suhu 550 °C.
2. Ruang Lingkup
Prosedur ini berlaku untuk penentuan abu pada bahan pakan dan pakan. Cara ini tidak dapat digunakan untuk
campuran mineral.
3. Tanggung jawab
Analis Laboratorium harus melakukan analisis sesuai metode ini. Analis Laboratorium bertanggung jawab untuk
memastikan bahwa semua ketentuan yang ditetapkan dalam metode ini dipenuhi dan dipatuhi dengan ketat. Setiap
penyimpangan dari metode yang ditentukan harus dicatat dan penyelia diberitahu.
4. Peralatan
4.1 Piringan pembakaran.

4.3 Muffle Furnace, mampu mempertahankan suhu hingga 550 ± 20 °C.
4.4 Desikator.
5. Reagen
Tidak ada.
6. Prosedur
6.1 Keringkan cawan insinerasi (4.1) pada suhu 103 °C selama minimal 2 jam, keluarkan dari oven dan dinginkan
dalam desikator.
6.2 Timbang cawan kosong (4.1) hingga ketelitian 0,1 mg (W1).

6.3 Tambahkan kira-kira 5 g sampel ke dalam cawan dan timbang hingga ketelitian 0,1 mg (W2).
6.4 Tempatkan cawan dalam tungku peredam yang telah dipanaskan sebelumnya pada suhu 550 ± 20 °C (4.3) selama 3 jam.
6.5 Periksa secara visual apakah residu bebas dari partikel karbon (lihat keterangan 9.1).
6.6 Pindahkan cawan ke dalam desikator (4.4) dan biarkan dingin hingga suhu kamar (kira-kira
pasangan 45 menit).
6.7 Timbang cawan hingga 0,1 mg (W3) terdekat.
7. Perhitungan
Persen Abu (% ASH):
% ASH = (W3 – W1) x 100 / (W2 – W1)
Di mana,
W1 = berat piring kosong (g),

W2 = berat cawan dan sampel (g), dan
W3 = berat cawan dan residu setelah pembakaran (g).
Dalam setiap batch, standar kontrol (sampel QC) harus dianalisis. Sampel QC laboratorium dapat dibuat dari sampel pakan
ternak/hijauan yang sifatnya sama dengan sampel yang akan dianalisis. Ambil 3–4 kg sampel QC pilihan, giling hingga lolos
saringan ukuran pori 1 mm dan simpan di tempat sejuk dan kering. Analisis sampel QC 15–20 kali, ambil rata-rata dan
berikan ± 2 SD sebagai rentang yang dapat diterima.
Sampel harus dianalisis dalam rangkap dua. Perbedaan antara nilai dua penentuan paralel alel yang dilakukan pada
sampel yang sama tidak boleh melebihi 0,2% secara absolut untuk kandungan yang lebih rendah dari 10%, dan 2% relatif
terhadap nilai yang lebih tinggi untuk kandungan ÿ 10% (dengan nilai maksimum perbedaan 0,5%-unit).
9. Keterangan
9.1 Jika residu mengandung partikel karbon, basahi dengan air suling, evaporasi air secara hati-hati hingga kering pada suhu
103 ± 2 °C dan bakar selama 1 jam pada suhu 550 ± 20 °C.

10.1 Jangan biarkan sampel yang sudah diabu mendingin di bawah 200 ºC di dalam oven pengabuan sebelum dipindahkan.
cincin ke desikator karena sampel mungkin menyerap uap air.
10.2 Jangan biarkan sampel tertinggal di dalam desikator pada suhu kamar lebih dari
2 jam sebelum penimbangan.
10.3 Berhati-hatilah saat membuka desikator untuk menghindari hilangnya abu.
10.4 Desikan harus tetap segar dan tutup desikator tertutup rapat dengan vakum tinggi
minyak, pelumas silikon.
10.5 Pastikan semua permukaan yang bersentuhan dengan cawan lebur khususnya bersih
desikator yang menggunakan minyak vakum.
10.6 Mengukur kembali timbangan di antara setiap penimbangan.
10.7 Tungku tidak boleh dipanaskan terlebih dahulu. Hal ini mencegah pengapian sampel secara cepat dan memungkinkan
hilangnya kelembapan secara perlahan. Pengapian yang cepat dapat menyebabkan nyala api dan hilangnya
kelembapan secara cepat dapat menyebabkan sampel tercecer; kedua situasi ini dapat mengakibatkan hilangnya
sampel.
10.8 Perlu diketahui bahwa beberapa sampel mengeluarkan busa dari wadahnya. Jika ini terjadi, ulangi analisisnya.
sis menggunakan pasir yang telah dicuci dengan asam dan/atau menggunakan wadah yang lebih besar.
BAHAYA: Gunakan penjepit dan sarung tangan bergagang panjang untuk mencegah luka bakar pada lengan dan tangan
saat memuat atau mengeluarkan oven abu panas. Berdirilah di satu sisi dan buka pintu oven setengah dengan hati-hati.
Jangan membuka oven panas sebelum sampel benar-benar menjadi abu karena akan terjadi pembakaran.
11. Referensi
AOAC 942.05. 2000. Abu pakan ternak. Gaithersburg, MD, AS.
ISO 5984. 2002. Bahan pakan ternak – Penentuan abu mentah. Jenewa, Swiss.
pengendalian pakan secara resmi. Lampiran III, M, Jurnal Resmi Eropa
Abu Tidak Larut dalam Asam Klorida
1. Prinsip
Abu yang tidak larut dalam asam klorida (AIA) ditentukan secara gravimetri sebagai residu yang tersisa setelah
fraksi abu dididihkan dengan asam klorida.
2. Ruang Lingkup
Prosedur ini berlaku untuk penentuan abu pada bahan pakan dan pakan. Cara ini tidak dapat digunakan untuk
campuran mineral.
3. Tanggung jawab
memastikan bahwa semua ketentuan yang ditetapkan dalam metode ini dipenuhi dan dipatuhi dengan ketat.
Setiap penyimpangan dari metode yang ditentukan harus dicatat dan penyelia diberitahu.
4. Peralatan
4.1 Piringan pembakaran.

4.3 Tungku peredam, mampu mempertahankan suhu hingga 550 ± 20 °C.
4.4 Desikator.
4.5 Piring panas.

4.6 Kertas saring bebas abu.
4.7 Oven pengeringan udara paksa yang mampu mempertahankan suhu hingga 103 ± 2 °C. Oven sebaiknya
dilengkapi dengan rak untuk melancarkan sirkulasi udara. Ini harus dioperasikan dengan ventilasi terbuka.
5. Reagen
5.1 asam klorida 3 M.
6. Prosedur
6.1 Keringkan cawan insinerasi (4.1) pada suhu 103 ± 2 °C selama minimal 2 jam, keluarkan dari oven dan
dinginkan dalam desikator.
6.2 Timbang cawan insinerasi kosong (4.1) hingga ketelitian 0,1 mg (W1).
6.3 Tambahkan kira-kira 5 g sampel ke dalam cawan dan timbang hingga ketelitian 0,1 mg (W2).
6.4 Tempatkan cawan dalam tungku peredam yang telah dipanaskan sebelumnya (4.3) dengan suhu 550 ± 20 °C selama 3 jam.
6.5 Periksa secara visual apakah residu bebas dari partikel karbon (lihat keterangan 9.1).
6.6 Pindahkan cawan ke dalam desikator (4.4) dan biarkan dingin hingga mencapai suhu kamar
(kurang lebih 45 menit).
6.7 Pindahkan abu secara kuantitatif ke dalam gelas kimia menggunakan 75 ml asam klorida 3 M (5.1).
6.8 Panaskan campuran di atas hot plate (4.5) dengan hati-hati hingga mendidih, lalu rebus selama 15 menit.
6.9 Saring campuran melalui kertas saring bebas abu (4.6) dan cuci dengan air suling panas
sampai cucian bebas dari asam.
6.10 Pindahkan kertas saring beserta residunya ke dalam cawan insinerasi.

6.11 Keringkan cawan insinerasi semalaman dalam oven pengering (4.7) dengan suhu 103 ± 2 °C.
6.12 Tempatkan cawan dalam tungku peredam yang telah dipanaskan sebelumnya (4.3) dengan suhu 550 ± 20 °C selama 2 jam.
6.13 Pindahkan cawan ke dalam desikator (4.4) dan biarkan dingin hingga suhu kamar (kira-kira
pasangan 45 menit).
6.14 Timbang cawan dan residunya hingga ketelitian 0,1 mg (W3)
7. Perhitungan
Persen AIA (% AIA)
% AIA = (W3 – W1) x 100 / (W2 – W1)
Di mana,
W1 = berat piring kosong (g),

W2 = berat cawan dan sampel (g), dan
W3 = berat cawan dan residu setelah pembakaran (g).
Dalam setiap batch, standar kontrol (sampel QC) harus dianalisis. Sampel QC laboratorium dapat dibuat dari sampel
pakan ternak/hijauan yang sifatnya sama dengan sampel yang akan dianalisis. Ambil 3–4 kg sampel QC pilihan, giling
hingga lolos saringan ukuran pori 1 mm dan simpan di tempat sejuk dan kering. Analisis sampel QC 15–20 kali, ambil
rata-rata dan berikan ± 2 SD sebagai rentang yang dapat diterima.
Sampel harus dianalisis dalam rangkap dua. Perbedaan antara nilai dari dua penentuan paralel yang dilakukan
pada sampel yang sama tidak boleh melebihi 10% relatif terhadap nilai yang lebih tinggi dan dengan perbedaan
maksimum sebesar 0,5% satuan.
9. Keterangan
9.1 Jika residu mengandung partikel karbon, basahi dengan air suling, evaporasi air secara hati-hati hingga kering pada
suhu 103 ± 2 °C dan bakar selama 1 jam pada suhu 550 ± 20 °C.

10.1 Jangan biarkan sampel yang sudah diabu mendingin di bawah 200 °C di dalam oven pengabuan sebelum dipindahkan.
cincin ke desikator karena sampel mungkin menyerap uap air.

10.2 Jangan biarkan sampel tertinggal di dalam desikator pada suhu kamar lebih dari
2 jam sebelum penimbangan.
10.3 Berhati-hatilah saat membuka desikator untuk menghindari hilangnya abu.
10.4 Desikan harus tetap segar dan tutup desikator tertutup rapat dengan vakum tinggi
minyak, pelumas silikon.
10.5 Pastikan semua permukaan yang bersentuhan dengan cawan lebur khususnya bersih
desikator yang menggunakan minyak vakum.
10.6 Meratakan kembali timbangan di antara setiap penimbangan.
10.7 Tungku tidak boleh dipanaskan terlebih dahulu. Hal ini mencegah pengapian sampel secara cepat dan
memungkinkan hilangnya kelembapan secara perlahan. Pengapian yang cepat dapat menyebabkan nyala api
dan hilangnya kelembapan secara cepat dapat menyebabkan sampel tercecer; kedua situasi ini dapat
mengakibatkan hilangnya sampel dan oleh karena itu hasilnya rendah.
10.8 Perlu diketahui bahwa beberapa sampel mengeluarkan busa dari wadahnya. Jika ini terjadi, ulangi analisisnya.
sis menggunakan pasir yang telah dicuci dengan asam dan/atau menggunakan wadah yang lebih besar.
BAHAYA: Gunakan penjepit dan sarung tangan bergagang panjang untuk mencegah luka bakar pada lengan dan
tangan saat memuat atau mengeluarkan oven abu panas. Berdirilah di satu sisi dan buka pintu oven setengah
dengan hati-hati. Jangan membuka oven panas sebelum sampel benar-benar menjadi abu karena akan terjadi
pembakaran.
11. Referensi
AOAC 942.05. 2000. Abu pakan ternak. Gaithersburg, MD, AS.
ISO 5985. 2002. Bahan pakan ternak – Penentuan abu yang tidak larut dalam asam klorida.
Jenewa, Swiss.
pengendalian pakan secara resmi. Lampiran III, N, Jurnal Resmi Eropa
Nitrogen dan Perhitungan Protein Kasar – Kjeldahl
1. Prinsip
Untuk penentuan nitrogen, sampel dicerna menggunakan asam sulfat dengan adanya katalis untuk mengubah
nitrogen sampel menjadi amonium sulfat. Larutan asam dibuat basa dengan larutan natrium hidroksida. Amonia
disuling dan dikumpulkan dalam larutan asam borat berlebih, diikuti dengan titrasi dengan larutan asam sulfat. Untuk
penentuan protein kasar, nitrogen dikalikan dengan faktor 6.25 (atau faktor yang sesuai, lihat keterangan 9.3).
2. Ruang Lingkup
Metode yang dijelaskan dapat diterapkan untuk penentuan nitrogen dalam pakan.
3. Tanggung jawab
4. Peralatan
4.1 Neraca analitik, akurat hingga 0,1 mg.
4.2 Tabung pencernaan dipasang untuk unit pencernaan Kjeldahl.
4.3 Unit pencernaan Kjeldahl dengan manifold pembuangan asap.
4.4 Peralatan distilasi Kjeldahl.
4.5 Unit titrasi (pada peralatan canggih 4.4 digabungkan dengan 4.5).
5. Reagen
5.1 Asam sulfat, pekat, 95–98% (b/v), tingkat reagen.
5.2 Tablet katalis Kjeldahl (lihat keterangan 9.5).
5.3 Asam borat, 10 g/liter.

5.4 Larutan NaOH, 40% (b/v).
5.5 Larutan indikator: Indikator metil merah, larutkan 1 g metil merah (garam natrium) dalam 100
ml metanol atau etanol.
5.6 Larutan volumetrik standar asam klorida, c = 0,1 M (akurat hingga 0,1000 M).
6. Prosedur
6.1 Pencernaan
6.1.1 Timbang kira-kira 1 g rekaman sampel hingga ketelitian 0,1 mg (W) dan pindahkan ke tabung
pencernaan (4.2). Dalam setiap batch gunakan tabung tanpa sampel sebagai blanko
tes.
6.1.2 Tambahkan dua tablet Kjeldahl (5.2) dan 20 ml asam sulfat (5.1). Jika asap menjadi masalah,
tambahkan beberapa tetes bahan anti-busa.
6.1.3 Tempatkan tabung di unit pencernaan (4.3) dan sambungkan ke alat pembuangan asap.
melipat.
6.1.4 Cerna sampel minimal 1 jam pada suhu 420 ± 20 °C.

6.1.5 Matikan pencernaan, keluarkan tabung dan biarkan dingin selama 10–20 menit.
6.1.6 Tambahkan air suling ke setiap tabung hingga volume total kira-kira 80 ml.
6.2 Distilasi dan titrasi
Prosedur berikut menjelaskan metode distilasi dan titrasi manual. Jika unit distilasi dan titrasi otomatis
digunakan, ikuti instruksi dari pabriknya.
6.2.1 Tempatkan labu berbentuk kerucut yang berisi 25–30 ml asam borat pekat (5.3) di bawah
saluran keluar kondensor unit distilasi (4.4) sedemikian rupa sehingga tabung pengantar
berada di bawah permukaan larutan asam borat .
6.2.2 Tambahkan 50 ml NaOH (5.4) dan suling amonium dengan mengikuti petunjuk dari pabriknya.
6.2.3 Titrasi isi labu berbentuk kerucut dengan larutan standar asam klorida (5.6) (lihat keterangan
9.4) setelah menambahkan beberapa tetes larutan indikator (5.5) menggunakan unit titrasi
(4.5) dan baca jumlah titran yang digunakan. Titik akhir dicapai pada jejak pertama warna
merah jambu pada isinya.
6.2.4 Catat jumlah asam yang digunakan dengan ketelitian 0,05 ml untuk uji blanko (Vb)
dan untuk setiap sampel (Vs).
7. Perhitungan
Persen Nitrogen (% N)
% N = (Vs – Vb) x M(HCl) x 1 x 14,007 / (L x 10)
Di mana,
Vs = ml HCl diperlukan untuk mentitrasi
Vb sampel, = ml HCl diperlukan untuk uji blanko,
M(HCl) = molaritas HCl, = faktor
1 asam,
14,007 = berat molekul N,
10 = konversi dari mg/g ke %, dan
W = berat sampel (g).
Perhitungan persen Protein Kasar (% CP):

% CP = % N x F
Di mana,
F = 6,25 untuk semua hijauan, pakan dan pakan campuran,

F = 5,70 untuk biji-bijian gandum, dan
F = 6,38 untuk susu dan produk susu.
Dalam setiap batch, standar kontrol (sampel QC) harus dianalisis. Sampel QC laboratorium dapat dibuat dari
sampel pakan ternak/hijauan yang sifatnya sama dengan sampel yang akan dianalisis. Ambil 3–4 kg sampel QC
pilihan, giling hingga lolos saringan ukuran pori 1 mm dan simpan di tempat sejuk dan kering. Analisis sampel QC
15–20 kali, ambil rata-rata dan berikan ± 2 SD sebagai rentang yang dapat diterima.
Sampel harus dianalisis dalam rangkap dua.

Gunakan standar kimia untuk menguji keseluruhan prosedur, lisin hidroklorida, asetanilida, atau triptofan
yang sangat murni (> 99,7%) dan kering dapat digunakan. Garam amonium dapat digunakan untuk menguji
langkah distilasi dan titrasi.
Pengulangan
Selisih antara nilai dua penentuan paralel yang dilakukan pada sampel yang sama tidak boleh melebihi:
nilai absolut 0,2%, untuk kandungan protein kasar kurang dari 20%,
1,0% relatif terhadap nilai yang lebih tinggi, untuk kandungan protein kasar dari 20% hingga 40%, dan
Nilai absolut 0,4%, untuk kandungan protein kasar lebih dari 40%.
Pemulihan
Tes pemulihan harus dilakukan dan dievaluasi secara berkala. Pemulihan sebagian (distilasi saja) dan
keseluruhan prosedur (pencernaan dan distilasi) harus > 99%.
9. Keterangan
9.1 Untuk sampel segar, jumlah sampel yang lebih banyak harus digunakan.
9.2 Metode ini juga dapat digunakan untuk penentuan amonia dalam sampel silase. Itu
prosedur kemudian harus dilakukan tanpa pencernaan.
9.3 Faktor konversi internasional (F) didasarkan pada rata-rata komposisi asam amino dalam protein dalam
bahan pakan. Oleh karena itu, faktor sebenarnya dapat bervariasi antar bahan pakan.
9.4 Jika asam sulfat digunakan untuk titrasi, faktor asam yang digunakan harus 2.
9.5 Katalis juga dapat dibuat di laboratorium. Itu harus mengandung 3,5 g potasium
sulfat dan 0,4 g tembaga (II) sulfat pentahidrat.

10.1 Proporsi reagen, masukan panas, dan waktu pencernaan merupakan faktor penting – tidak demikian
mengubah.
10.2 Dispenser tersedia untuk kemudahan pengiriman campuran katalis bubuk.

TINDAKAN PENGAMANAN:
10.3 Tangani asam dengan aman. Gunakan lemari asam yang tahan asam. Selalu tambahkan asam ke dalam
air kecuali jika diarahkan sebaliknya. Kenakan pelindung wajah dan sarung tangan tebal untuk melindungi
dari percikan asam atau alkali. Jika asam tumpah ke kulit, segera cuci dengan jumlah banyak
air.
10.4 Asam sulfat dan natrium hidroksida dapat menyebabkan luka bakar parah pada kulit, mata, dan saluran pernapasan.
Gunakan perangkat penghilang asap yang efektif untuk melindungi dari asap asam atau debu atau uap
alkali. Selalu tambahkan asam sulfat pekat atau pelet natrium hidroksida ke dalam air, bukan sebaliknya.
Natrium hidroksida pekat dapat dengan cepat dan mudah menyebabkan kebutaan. Jika terkena kulit atau
mata, bilas dengan banyak air dan dapatkan bantuan medis.
10.5 Siapkan soda kue dan cuka jika terjadi tumpahan bahan kimia.
10.6 Asap sulfur oksida yang dihasilkan selama proses pencernaan berbahaya bagi pernapasan. Tidak
menghirup.
10.7 Pencernaan harus didinginkan sebelum air pengenceran ditambahkan untuk menghindari reaksi hebat
yang dapat menyebabkan asam keluar dari labu. Demikian pula, pencernaan yang diencerkan harus
didinginkan sebelum natrium hidroksida ditambahkan untuk menghindari reaksi hebat serupa.
10.8 Tanyakan kepada pihak berwenang setempat mengenai prosedur pembuangan yang benar atas kandungan tembaga
solusi limbah.
11. Referensi
AOAC 984.13. 2000. Protein (mentah) dalam pakan ternak dan makanan hewan, katalis tembaga Kjeldahl
metode. Gaithersburg, MD, AS.
AOAC 988.05. 2000. Protein (kasar) dalam pakan ternak dan makanan hewan: katalis campuran CuSO4/ TiO2
Metode Kjeldahl. Gaithersburg, MD, AS.
AOCS Ba4d-90. Metode Kjeldahl yang dimodifikasi nitrogen-amonia-protein, titanium dioksida + tembaga-
per katalis sulfat. Gaithersburg, MD, AS.
ISO 5983-2. 2009. Bahan pakan ternak – Penentuan kandungan nitrogen dan penghitungan kandungan protein
kasar – Bagian 2: metode pencernaan blok/ distilasi uap. Geneve, Switch-
Selandia Baru.
pengendalian pakan secara resmi. Lampiran III, C, Jurnal Resmi Eropa
Nitrogen dan Perhitungan Protein Kasar – Pembakaran
1. Prinsip
Nitrogen ditentukan oleh pembakaran total sampel pada suhu 950 ÿC dengan adanya oksigen dimana nitrogen
diubah menjadi gas NOx (prinsip Dumas). NOx direduksi menjadi N2 yang diukur dalam sel konduktivitas termal.
Persen protein dihitung dengan mengalikan nitrogen yang dilaporkan dengan 6,25, atau faktor konversi protein
yang berlaku untuk jenis sampel (lihat keterangan 9.3).
2. Ruang Lingkup
Metode yang dijelaskan dapat diterapkan untuk penentuan nitrogen di semua umpan.
3. Tanggung jawab
4. Peralatan
4.2 Aparat Dumas, mampu melakukan penetapan secara utuh.
5. Reagen
Bahan kimia dan bahan sekali pakai yang dibutuhkan oleh peralatan harus ditentukan oleh pabrikan.
mendatang.
5.1 EDTA, asam Ethylenediaminetetraacetic, C10H16N2O8, bubuk. Bahan kimia ini digunakan sebagai standar
kalibrasi untuk analisis ini.
6. Prosedur
6.1 Timbang ke dalam wadah timah kira-kira 0,22 g sampel atau EDTA (5.1) hingga 0,1 mg (W). Sampel pakan
cair harus ditimbang ke dalam kapsul timah dengan menggunakan pipet (lihat keterangan 9.1). Berat yang
disarankan untuk cairan: 0,2–0,5 g tergantung perkiraan
konsentrasi.
6.2 Tutup wadah timah dengan hati-hati dan letakkan di dalam auto sampler peralatan (4.2).
6.3 Analisis standar dan sampel sesuai dengan instruksi pabrik.
6.4 Hitung hasilnya dengan menggunakan standar kalibrasi (kebanyakan dilakukan secara otomatis oleh
peralatan).
7. Perhitungan
Persen Nitrogen (% N) dihitung secara otomatis oleh peralatan (lihat keterangan 9.2).
Perhitungan protein kasar (% CP):
% CP = % N x F
Di mana,
F = 6,25 untuk semua hijauan, pakan dan pakan campuran,

F = 5,70 untuk biji gandum, dan
F = 6,38 untuk susu dan produk susu.
Setiap batch harus menyertakan blanko (cangkir atau kapsul kosong), satu sampel lisin hidroklorida dengan
kemurnian tinggi, dan satu atau lebih sampel kendali mutu (QC). Sampel QC laboratorium dapat dibuat dari
sampel pakan ternak/hijauan yang sifatnya serupa dengan sampel yang akan dianalisis. Ambil 3–4 kg sampel
QC pilihan, giling hingga lolos saringan 1 mm
ukuran pori dan simpan di tempat sejuk dan kering. Analisis sampel QC 15–20 kali, ambil rata-rata dan
berikan ± 2 SD sebagai rentang yang dapat diterima. Sampel harus dianalisis dalam rangkap dua.
Pengulangan
Selisih antara nilai dua penentuan paralel yang dilakukan pada sampel yang sama tidak boleh melebihi:
nilai absolut 0,2%, untuk kandungan protein kasar kurang dari 20%,
1,0% relatif terhadap nilai yang lebih tinggi, untuk kandungan protein kasar dari 20% hingga 40%, dan
Nilai absolut 0,4%, untuk kandungan protein kasar lebih dari 40%.
9. Keterangan
9.1 Untuk pakan dengan jumlah N yang sangat rendah, berat sampel harus ditingkatkan.
9.2 Penghitungan kandungan N didasarkan pada perbandingan luas puncak yang ditemukan
standar kalibrasi (EDTA) dan sampel.
9.3 Faktor konversi internasional didasarkan pada komposisi rata-rata asam amino dalam protein bahan
pakan. Oleh karena itu, faktor sebenarnya dapat bervariasi antar bahan pakan.
9.4 Nitrogen dan oleh karena itu nilai protein kasar yang dihitung mungkin sedikit berbeda
yang dianalisis menggunakan metode Kjeldahl.

10.1 Kesalahan sistemis
10.1.1 Kalibrasi blanko dan/atau standar kalibrasi yang salah.
10.1.2 Selalu kalibrasi ulang instrumen setelah perawatan rutin.

10.1.3 Melebihi batas counter untuk cawan lebur/tabung reagen aliquot/tabung reduksi lebih dari
20% dapat menyebabkan penyumbatan.
10.1.4 Jangan mengisi wadah terlalu penuh.
10.1.5 Jika jumlah filter balast sekitar 800 serta kalibrasi dan pengendaliannya
sampel terus-menerus rendah, mengganti filter pemberat mungkin perlu

esai.
10.1.6 Untuk kesalahan tertentu, periksa instruksi pabriknya.
10.2 Kesalahan Acak
10.2.1. Penyimpangan signifikan dari kisaran bobot yang diberikan untuk sampel. Sampel yang terlalu sedikit
atau terlalu banyak dapat memberikan hasil yang tidak akurat.
10.2.2 Hilangnya sampel setelah ditimbang, karena cangkir kertas timah tidak dilipat/
kapsul atau lubang/sobek pada foil, menyebabkan hilangnya keakuratan hasil yang dilaporkan.
10.2.3. Hilangnya sebagian cangkir foil/kapsul timah setelah tara. Memutar tepi wadah foil atau
kapsul akan mengakibatkan kesalahan penimbangan.
11. Referensi
AOAC 990.03. 2000. Protein (mentah) dalam pakan ternak, cara pembakaran. Gaithersburg, MD,
AMERIKA SERIKAT.
AOCS Ba4e-93. Metode pembakaran generik untuk penentuan protein kasar. Petunjuk
manual pabrikan. Gaithersburg, MD, AS.
Lemak Kasar – Ekstrak Eter
1. Prinsip
Lemak diekstraksi dari sampel menggunakan petroleum eter. Pelarut didistilasi dan residunya dikeringkan
dan ditimbang. Lemak dapat diukur dengan atau tanpa hidrolisis sebelumnya dengan asam klorida.
Penggunaan hidrolisis sebelumnya sebagian besar memberikan hasil yang lebih tinggi, terutama untuk
pakan yang diberi perlakuan panas dan pakan asal hewan.
2. Ruang Lingkup
Penentuan lemak dapat digunakan untuk pakan dan bahan pakan dengan kandungan lemak lebih rendah
dari 20%. Untuk pakan dengan kandungan lemak lebih tinggi misalnya biji minyak lihat keterangan 9.1
dan 9.2.
3. Tanggung jawab
Analis Laboratorium harus melakukan analisis sesuai metode ini. Analis Laboratorium bertanggung jawab
untuk memastikan bahwa semua ketentuan yang ditetapkan dalam metode ini dipenuhi dan dipatuhi
dengan ketat. Setiap penyimpangan dari metode yang ditentukan harus dicatat dan penyelia diberitahu.
4. Peralatan
4.2 Peralatan pemanas dengan pengatur suhu.
4.3 Bidal ekstraksi, bebas lemak dan eter dicuci.
4.4 Peralatan pemanas.
4.5 Unit refluks.
4.6 Ekstraktor tipe Soxhlet.

4.7 Oven vakum yang dipanaskan dengan listrik.
4.8 Desikator.
4.9 Corong Buchner dihubungkan dengan penghisap.
5. Reagen
5.1 Petroleum eter ringan (titik didih 40–60 °C), dimurnikan untuk ekstraksi lemak (yaitu penguapan
sisa ransum harus kurang dari 20 mg/liter).
5.2 Asam klorida 3 M.
6. Prosedur
Untuk penentuan lemak tanpa hidrolisis, lanjutkan dari poin 6.2.
Untuk penentuan lemak dengan hidrolisis, lanjutkan dari 6.1.
Prosedur ini menjelaskan metode manual untuk kedua penentuan tersebut (lihat keterangan 9.3).
6.1 Hidrolisis
6.1.1 Timbang sedikitnya 5 g sampel ke dalam gelas kimia atau labu berbentuk kerucut dan catat
beratnya hingga terdekat 0,1 mg (W1).
6.1.2 Tambahkan 100 ml asam klorida (5.2) dan keping silikon karbida ke dalam sampel dan
tutup gelas kimia dengan kaca arloji atau masukkan labu berbentuk kerucut dengan kondensor
refluks (4.5).
6.1.3 Didihkan campuran di atas alat pemanas (4.4) dan biarkan selama 1 jam. Aduk setiap 10 menit untuk
mencegah produk menempel pada sisi wadah.
6.1.4 Saring campuran melalui kertas saring ganda bebas lemak dalam corong Buchner
(4.9) dengan hisap.
6.1.5 Cuci residu dengan air suling dingin sampai diperoleh filtrat netral.
6.1.6 Pindahkan kertas saring beserta residunya dengan hati-hati ke dalam bidal ekstraksi
(4.3) dan keringkan dalam oven vakum (4.7) selama 60 menit pada suhu 80 ± 2 °C.
6.1.7 Keluarkan bidal dari oven dan tutupi dengan gumpalan kapas bebas lemak
wol. Ikuti prosedur yang diberikan pada 6.2.2

6.2 Ekstraksi
6.2.1 Timbang sedikitnya 5 g sampel hingga ketelitian 0,1 mg (W1) ke dalam bidal ekstraksi (4.3) dan tutupi
dengan segumpal kapas bebas lemak.
Langkah ini hanya boleh dilakukan untuk penentuan lemak tanpa hidrolisis
6.2.2 Pindahkan beberapa keping silikon karbida ke dalam labu kering dan timbang hingga 0,1 terdekat
mg (W2), tambahkan 95 ml petroleum eter (5.1).
6.2.3 Tempatkan bidal di dalam ekstraktor (4.6) dan sambungkan ke labu kering (6.2.2) dan unit refluks (4.5).
6.2.4 Ekstrak selama 6 jam dengan petroleum eter dan atur peralatan pemanas (4.4) untuk memperoleh
sedikitnya 10 siphoning per jam. Atau ikuti pedoman pabrikan.
6.2.5 Distilasi pelarut hingga labu hampir terbebas dari pelarut, biarkan semalaman
dalam lemari asam untuk memastikan semua pelarut menguap.
6.2.6 Keringkan labu bersama residu selama 1,5 jam dalam oven vakum (4.7) pada suhu 80 ± 2 °C .
6.2.7 Dinginkan dalam desikator (4.8) dan timbang hingga ketelitian 0,1 mg (W3).
7. Perhitungan
Persen Lemak Kasar dengan atau tanpa hidrolisis:
% Lemak Kasar = (W3 – W2) x 100 / W1
Di mana,
W1 = berat sampel awal dalam gram, W2 =

berat tara labu dalam gram, dan W3 = berat labu
dan sisa lemak dalam gram.
Hasil yang dilaporkan harus dicatat jika hidrolisis digunakan.
Sertakan reagen kosong dan satu atau lebih sampel kontrol kualitas (QC) dalam setiap proses, pilih sampel QC
dengan mencocokkan tingkat analit dan matriks sampel QC dengan sampel dalam batch. Sertakan setidaknya satu
set duplikat di setiap proses. Misalnya sampel massal bungkil biji minyak dapat dijalankan sebagai sampel kendali
mutu pada setiap batch, rata-rata 15–20 ulangan dan memungkinkan ± 2 SD sebagai rentang yang dapat diterima.
Sampel harus dianalisis dalam rangkap dua.
CATATAN: Sampel kendali mutu untuk penentuan lemak harus diganti setiap 6 bulan karena ketidakstabilan
lemak. Sampel kontrol harus disimpan pada suhu 2–8 °C.
Perbedaan antara duplikat sampel harus lebih rendah dari 0,25% secara absolut pada prosedur tanpa
hidrolisis dan 0,50% pada prosedur dengan hidrolisis.
9. Keterangan
9.1 Sampel dengan kandungan lemak tinggi harus menjalani ekstraksi awal dengan petroleum eter ringan
sesuai prosedur yang dijelaskan dalam SOP penyiapan sampel (lihat halaman 42–47).
9.2 Untuk biji minyak, disarankan dilakukan ekstraksi ganda dengan petroleum eter. Metode alternatif untuk
produk ini ditentukan dalam ISO 659:2009.
9.3 Peralatan semi-otomatis untuk penentuan lemak tersedia. Dalam hal ini ikuti
instruksi pabriknya.

10.1 Eter memiliki titik nyala yang sangat rendah.
10.2 Hindari menghirup uap eter.
10.3 Simpan eter dalam wadah logam.
10.4 Tangani wadah terbuka (wadah reagen dan gelas kimia) di dalam lemari asam.
10.5 Lakukan ekstraksi di area yang berventilasi baik.
10.6 Peroksida dapat terakumulasi dalam wadah terbuka berisi eter. Ini bersifat eksplosif dan sensitif terhadap
guncangan. Periksa setiap wadah yang dibuka selama lebih dari 30 hari untuk mengetahui adanya
peroksida. Peroksida yang mengandung eter harus dibuang dengan teknik khusus. Dipstick tersedia
untuk memeriksa kadar peroksida.
10.7 Peralatan listrik harus dibumikan. Ekstraktor harus tahan percikan api.
10.8 Pastikan semua eter telah menguap dari gelas kimia sebelum dimasukkan ke dalam oven untuk
menghindari kebakaran atau ledakan, biarkan gelas kimia di dalam lemari asam semalaman.
11. Referensi
AOAC 920.39. 2000. Ekstrak lemak (kasar) atau eter dalam pakan ternak. Gaithersburg, MD, AS.
ISO 6492. 1999. Bahan pakan ternak – Penentuan kandungan lemak. Jenewa, Swiss.
pengendalian pakan secara resmi. Lampiran III, H, Jurnal Resmi Eropa
Serat Kasar – Metode Filtrasi
1. Prinsip
Sampel setelah dihilangkan lemaknya diolah secara berurutan dengan asam sulfat encer mendidih, dan
dengan larutan kalium hidroksida mendidih. Hilangnya massa akibat pembakaran setara dengan massa
serat kasar.
2. Ruang Lingkup
Metode yang dijelaskan dapat diterapkan untuk penentuan pakan dengan kandungan serat kasar lebih dari
1%. Jika sampel mengandung >10% lemak, ekstrak lemak dengan petroleum eter sebelum memulai analisis.
3. Tanggung jawab
untuk memastikan bahwa semua ketentuan yang ditetapkan dalam metode ini dipenuhi dan dipatuhi dengan
ketat. Setiap penyimpangan dari metode yang ditentukan harus dicatat dan penyelia diberitahu.
4. Peralatan
4.2 Cawan penyaring kaca, P100.
4.4 Peralatan filtrasi, dihubungkan ke sistem vakum, misalnya sistem Fibertec.
4.5 Desikator.
4.6 Oven pengeringan berventilasi, mampu dipertahankan pada suhu 103 ± 2 °C.
4.7 Tungku peredam, mampu dipertahankan pada suhu 550 ± 20 °C.
5. Reagen
5.1 Petroleum eter (titik didih 40 hingga 60 ÿC).
5.2 Asam sulfat, 0,15 M.
5.3 Kualitas teknis aseton.
5.4 Kalium hidroksida, 0,23 M.
6. Prosedur
6.1 Perlakuan awal
6.1.1 Untuk setiap wadah P100 (4.2) timbang 1 g sampel hingga ketelitian 0,1 mg (W1).
6.1.2 Tempatkan cawan lebur pada peralatan filtrasi (4.4) dan tambahkan kira-kira 30
ml petroleum eter (5.1) ke masing-masing krus dan disaring menggunakan vakum.
6.1.3 Ulangi pencucian dua kali.
6.1.4 Keringkan residu di udara dan pindahkan secara kuantitatif ke dalam gelas kimia.
6.2 Pencernaan
6.2.1 Tambahkan ke setiap gelas kimia 150 ml asam sulfat (5.3) dan didihkan selama 30 ± 1 menit.
Jika terjadi busa, tambahkan beberapa tetes bahan anti busa.
6.2.2 Saring campuran melalui krus (4.2) dengan menggunakan vakum (4.4).
6.2.3 Cuci residu sebanyak 5 kali, setiap kali dengan 10 ml air suling panas.
6.2.4 Tambahkan sejumlah aseton (5.4) untuk menutupi residunya. Hapus aseton
setelah beberapa menit dengan melakukan sedikit penyedotan.
6.2.5 Pindahkan residu secara kuantitatif ke dalam gelas kimia.

6.2.6 Tambahkan ke setiap gelas kimia 150 ml kalium hidroksida (5.1.8) dan didihkan selama 30 ± 1
menit.
6.2.8 Cuci residu dengan air suling panas sampai hasil pembilasan netral.
6.2.9 Cuci residu 3 kali dalam vakum, setiap kali dengan 30 ml aseton (5.4).
Keringkan residu dengan cara disedot setiap kali selesai dicuci.
6.3 Pengeringan dan pembakaran

6.3.1 Masukkan cawan lebur ke dalam oven (4.6) dengan suhu 103 ± 2 °C dan keringkan selama 4,0 jam.
Waktu pengeringan dimulai ketika oven telah mencapai suhu 103°C.
6.3.2 Masukkan cawan lebur ke dalam desikator dan biarkan dingin.
6.3.3 Timbang wadah segera setelah dikeluarkan dari desikator (4.5) hingga mendekati suhu
diperkirakan 0,1 mg (W2).
6.3.4 Tempatkan cawan lebur dalam tungku peredam (4.7), dan bakar sampel selama 2 jam pada suhu 550 ±
20 °C. Waktu pembakaran dimulai ketika tungku telah menyala
mencapai 550°C.
6.3.5 Masukkan cawan lebur ke dalam desikator (4.5) dan biarkan dingin.
6.3.6 Timbang krus segera setelah dikeluarkan dari desikator ke tempat terdekat
0,1 mg (W3).
7. Perhitungan
Persen Serat kasar (% CF):
% CF = (W2 – W3) x 100 / W1
Di mana,
W1 = berat sampel (g), W2 = berat wadah

dan residu setelah dikeringkan (g), dan
W3 = berat wadah dan residu setelah pembakaran (g).
Dalam setiap batch, standar kontrol (sampel QC) harus dianalisis. Sampel QC laboratorium dapat dibuat dari sampel
pakan ternak/hijauan yang sifatnya sama dengan sampel yang akan dianalisis. Ambil 3–4 kg sampel QC pilihan, giling
hingga lolos saringan ukuran pori 1 mm dan simpan di tempat sejuk dan kering. Analisis sampel QC 15–20 kali, ambil
rata-rata dan berikan ± 2 SD sebagai rentang yang dapat diterima. Sampel harus dianalisis dalam rangkap dua.
Selisih antara nilai dua penentuan paralel yang dilakukan pada

sampel yang sama tidak boleh melebihi:
0,3% secara absolut untuk konten yang lebih rendah dari 10%, dan
3% relatif terhadap nilai yang lebih tinggi untuk konten yang sama dengan atau lebih tinggi dari 10%.
9. Keterangan
9.1 Untuk penentuan serat kasar terdapat metode lain yang menerapkan pencucian otomatis kantong dengan reagen
yang dijelaskan. Untuk melakukan metode ini ikuti instruksi dari pabriknya. Penggunaan metode ini dapat
menyebabkan
hasil yang berbeda dibandingkan dengan yang diamati dengan metode filtrasi.
9.2 Jika ditemui masalah filtrasi, lapisan pasir laut dapat digunakan sebagai alat bantu filtrasi.
10. Referensi
ISO 6865. 2000. Bahan pakan ternak – Penentuan kandungan serat kasar – Metode dengan
filtrasi menengah. Jenewa, Swiss.
pengendalian pakan secara resmi. Lampiran III, I, Jurnal Resmi Eropa
Serat Deterjen Netral (NDF) – Metode Filtrasi
1. Prinsip
Sampel setelah dihilangkan lemaknya direbus dengan reagen deterjen netral (NDF) dilanjutkan
dengan perlakuan dengan ÿ-amilase dalam larutan buffer untuk melarutkan sisa pati. Kehilangan
berat akibat pembakaran residu kering setara dengan berat NDF.
2. Ruang Lingkup
Metode yang dijelaskan dapat diterapkan untuk penentuan pakan dengan kandungan NDF lebih
tinggi dari 1%.
3. Tanggung jawab
Analis Laboratorium harus melakukan analisis sesuai metode ini. Analis Laboratorium bertanggung
jawab untuk memastikan bahwa semua ketentuan yang ditetapkan dalam metode ini dipenuhi dan
dipatuhi dengan ketat. Setiap penyimpangan dari metode yang ditentukan harus dicatat dan penyelia
diberitahu.
4. Peralatan
4.2 Cawan penyaring kaca, P100 atau setara.
4.5 Desikator.
4.6 Oven pengeringan berventilasi, mampu dipertahankan pada suhu 103 ± 2 °C.
5. Reagen
5.1 Mutu teknis aseton.
5.2 Larutan deterjen netral (NDS), yang terkandung dalam 1 liter air suling: 30 g Natrium-
lauril sulfat (=dodesil-Na-sulfat) 6,81 g Natrium tetra borat
Na2B4O7.10 H2O. 4,56 g di-Natrium hidrogen
fosfat Na2HPO4 atau 5,72 g Na2HPO4.H2O 18,61 g Asam etilen diamina tetra
asetat, garam di-natrium.
10 ml 2-etoksi-etanol
Sesuaikan pH larutan menjadi 6,9–7,1 menggunakan natrium hidroksida atau asam klorida.
5.3 Larutan amilase. Larutkan 2,5 mg amilase stabil panas dalam 60,6 ml dinatrium hidrogen fosfat
(Na2HPO4) 0,1 M dan 39,2 ml kalium dihidrogen fosfat (KH2PO4) 0,1 M.
6. Prosedur
6.1 Perlakuan awal
6.1.1 Timbang setiap wadah P100 (4.2).

6.1.2 Timbang 0,5 g sampel hingga ketelitian 0,1 mg (W1) dalam wadah.
6.1.3 Tempatkan cawan lebur dalam peralatan filtrasi (4.4) dan tambahkan kira-kira 30 ml aseton (5.1)
ke dalam setiap cawan dan saring dengan menggunakan vakum.
6.2 Pencernaan
6.2.1 Tambahkan ke setiap wadah 50 ml NDS (5.2) dan didihkan selama 60 ± 1 menit dengan refluks,
jika terjadi busa, tambahkan beberapa tetes bahan anti busa.
6.2.3 Cuci residunya dua kali, setiap kali dengan 10 ml air suling panas.
6.2.4 Tambahkan sejumlah aseton (5.1) untuk menutupi residunya. Keluarkan aseton setelah
beberapa menit dengan sedikit menyedot.
6.2.5 Pindahkan residu secara kuantitatif ke dalam gelas kimia.
6.2.6 Tambahkan ke setiap gelas kimia 1–2 ml larutan ÿ-amilase (5.3) dan kemudian 30 ml
air sulingan mendidih. Diamkan 5–10 menit.
6.2.7 Pindahkan campuran ke dalam wadah (4.2) dan cuci dua kali dengan air suling panas dan dua
kali dengan aseton (5.1) hingga pencucian bersih. Keringkan residu dengan cara dihisap
setiap kali selesai dicuci.
6.3 Pengeringan dan pembakaran
6.3.1 Tempatkan cawan lebur dalam oven (4.6) dengan suhu 103 ± 2 °C dan keringkan minimal 4
jam. Waktu pengeringan dimulai ketika oven telah mencapai suhu 103°C.
0,1 mg (W2).
6.3.4 Tempatkan cawan lebur dalam tungku peredam (4.7), dan bakar selama 2 jam pada suhu 550
°C ± 20 °C. Waktu pembakaran dimulai ketika tungku telah mencapai
550 °C.
6.3.5 Tempatkan cawan lebur setelah pembakaran ke dalam desikator (4.5) dan biarkan dingin.
0,1 mg (W3).
7. Perhitungan
Persen NDF (%NDF):
%NDF = (W2 – W3) x 100 / W1
Di mana,
W1 = berat sampel (g), W2 = berat

wadah dan residu setelah dikeringkan (g), dan
Dalam setiap batch, standar kontrol (sampel QC) harus dianalisis. Sampel QC laboratorium dapat dibuat
dari sampel pakan/hijauan yang sifatnya sama dengan sampel tersebut.
untuk dianalisis. Ambil 3–4 kg sampel QC pilihan, giling hingga lolos saringan ukuran pori 1 mm dan simpan
di tempat sejuk dan kering. Analisis sampel QC 15–20 kali, ambil rata-rata dan berikan ± 2 SD sebagai
rentang yang dapat diterima.
Sampel harus dianalisis dalam rangkap dua. Perbedaan antara nilai dari dua penentuan paralel yang
dilakukan pada sampel yang sama tidak boleh melebihi: 0,3% secara absolut untuk kandungan yang lebih
rendah dari 10% dan 3% secara relatif terhadap nilai yang lebih tinggi untuk kandungan yang sama dengan
atau lebih tinggi dari 10%.
9. Keterangan
9.1 Untuk penentuan NDF, tersedia juga metode yang menerapkan pencucian otomatis kantong dengan
reagen yang dijelaskan. Untuk melakukan metode ini ikuti instruksi dari pabriknya. Penggunaan
metode ini dapat memberikan hasil yang berbeda dibandingkan dengan metode filtrasi.
9.2 Inkubasi tambahan dengan protease dapat digunakan untuk menghilangkan sisa protein yang tidak
larut dalam residu.
9.3 Karena perlakuan dengan ÿ-amilase dalam larutan buffer untuk melarutkan sisa pati, fraksi serat juga
disebut 'aNDF'. Penggunaan ÿ-amilase dapat dihilangkan jika sampel (misalnya jerami dan jerami)
tidak kaya akan pati.
10. Referensi
Robertson, JB & Van Soest, PJ 1981. Analisis sistem deterjen dan penerapannya pada makanan
manusia, Dalam Analisis Serat Makanan dalam Makanan. Jilid 3. Bab 8, (WPT James dan O.
Theander, eds.), Marcel Dekker, Inc.: New York.
Van Soest, PJ & Robertson, JB 1985. Analisis hijauan dan pangan berserat. Sebuah Laboratorium
Manual Ilmu Hewan 613. Cornell University, Ithaca, New York, AS.
Serat Deterjen Asam (ADF) dan Lignin (ADL) – Metode Filtrasi
1. Prinsip
Sampel setelah dihilangkan lemaknya direbus dengan larutan deterjen asam. Hilangnya berat akibat
pembakaran residu kering setara dengan berat ADF.
Untuk menentukan ADL, perebusan tambahan dengan asam sulfat pekat harus dilakukan sebelum
mengukur kehilangan berat akibat pembakaran residu kering.
2. Ruang Lingkup
Metode yang dijelaskan dapat diterapkan untuk penentuan pakan dengan kandungan ADF atau ADL lebih
tinggi dari 1%.
3. Tanggung jawab
4. Peralatan
4.2 Cawan penyaring kaca, P100 atau setara.
4.5 Desikator.
4.6 Oven pengeringan berventilasi mampu dipertahankan pada suhu 103 ± 2 °C.
4.7 Tungku peredam mampu dipertahankan pada suhu 550 ± 20 °C.
5. Reagen
5.1 Mutu teknis aseton.
5.2 Larutan deterjen asam (ADS), yang mengandung 20 g setil trimetilammonium bro-mida dalam 1 liter asam
sulfat 0,5 M.
5.3 72% Asam sulfat (b/b).
6. Prosedur
6.1 Perlakuan awal
6.1.1 Timbang wadah kosong (4.2) hingga ketelitian 0,1 mg (lihat keterangan 9.4).
6.1.2 Timbang 1 g sampel hingga ketelitian 0,1 mg (W1) ke dalam wadah (4.2).
6.1.3 Tempatkan cawan lebur dalam peralatan filtrasi (4.4) dan tambahkan kira-kira 30 ml aseton (5.1) ke
dalam setiap cawan dan saring dengan menggunakan vakum.
6.2 Pencernaan (langkah ADS)
6.2.1 Tambahkan ke setiap gelas kimia 50 ml ADS (5.2) dan didihkan selama 60 ± 1 menit dalam keadaan di bawah
refluks. Jika terjadi busa, tambahkan beberapa tetes bahan anti busa.
6.2.2 Saring campuran melalui krus (4.2) dengan menggunakan vakum.
6.2.3 Cuci residunya dua kali, masing-masing dengan 10 ml air suling panas.
6.2.4 Tambahkan sedikit aseton (5.1) untuk menutupi residunya. Keluarkan aseton setelah beberapa menit
dengan sedikit menyedot.
6.3 Pengeringan pertama
6.3.1 Tempatkan cawan lebur dalam oven (4.6) dengan suhu 103 ± 2 °C dan keringkan setidaknya selama
4 jam. Waktu pengeringan dimulai ketika oven telah mencapai suhu 103°C.
0,1 mg (W2).
6.4 Pencernaan (langkah ADL).
CATATAN: Kenakan Kacamata Keselamatan dan Sarung Tangan Saat Bekerja Dengan asam sulfat 72%.
6.4.1 Tambahkan 10 ml asam sulfat 72% (5.3) ke dalam setiap wadah dan aduk perlahan dengan batang
kaca untuk memecah semua gumpalan (lihat keterangan 9.3)
6.4.2 Isi cawan lebur setengah penuh dengan asam dan aduk setiap 30 menit.
6.4.3 Setelah 3 jam, saring asam sebanyak mungkin dengan penyedot debu dan cuci
isi dengan air suling panas sampai bebas asam.
6.5 Pengeringan kedua

6.5.1 Tempatkan cawan lebur dalam oven (4.6) dengan suhu 103 ± 2 °C dan keringkan setidaknya selama
4 jam. Waktu pengeringan dimulai ketika oven telah mencapai suhu 103°C.
0,1 mg (W3).
6.6 Insinerasi
6.6.1 Tempatkan cawan lebur dalam tungku peredam (4.7), dan bakar sampel selama 2 jam pada suhu
550 °C ± 20 °C. Waktu pembakaran dimulai ketika tungku telah menyala
mencapai 550°C.
0,1 mg (W4).
7. Perhitungan
Persen ADF (% ADF):
%ADF = (W2 – W4) x 100 / W1
Persen ADL (% ADL)

% ADL = (W3 – W4) x 100 / W1
Di mana,
W1 = berat sampel (g), W2 = berat

krus dan residu setelah pengeringan pertama (g),
W3 = berat wadah dan residu setelah pengeringan kedua (g), dan
Dalam setiap batch, standar pengendalian (sampel QC) harus dianalisis. Sampel QC laboratorium dapat dibuat
dari sampel pakan ternak/hijauan yang sifatnya sama dengan sampel yang akan dianalisis. Ambil 3–4 kg sampel
QC pilihan, giling hingga lolos saringan ukuran pori 1 mm dan simpan di tempat sejuk dan kering. Analisis sampel
QC 15–20 kali, ambil rata-rata dan berikan ± 2 SD sebagai rentang yang dapat diterima. Sampel harus dianalisis
dalam rangkap dua.
Selisih antara nilai dua penentuan paralel yang dilakukan pada
sampel yang sama tidak boleh
melebihi: 0,3% secara absolut untuk kandungan lebih rendah dari 10%.
3% relatif terhadap nilai yang lebih tinggi untuk konten yang sama dengan atau lebih tinggi dari 10%.
9. Keterangan
9.1 Untuk penentuan ADF, tersedia juga metode yang menerapkan pencucian otomatis kantong dengan reagen
yang dijelaskan. Untuk melakukan metode ini ikuti instruksi dari pabriknya. Penggunaan metode ini dapat
memberikan hasil yang berbeda
dibandingkan dengan yang ditemukan dengan metode filtrasi.

9.2 Inkubasi tambahan dengan amilase dapat digunakan untuk menghilangkan sisa-sisa zat yang tidak larut
pati dalam residu.
9.3 Berhati-hatilah agar tidak merusak frit kaca dalam wadah saat menggunakan batang kaca.
9.4 Beberapa laboratorium menghilangkan langkah insinerasi (6.6). Dalam kasus seperti ini, residu deterjen asam
(ADR) ditentukan yang merupakan jumlah ADF dan sisa traksi abu.
Persen ADR (% ADR):

% ADR = ( W2 – W0) x 100 / W1
Di mana,
W0 adalah berat wadah kosong yang diperoleh pada langkah 6.1.1. Jika koreksi abu tidak dilakukan, hal ini harus
dinyatakan dalam laporan.
10. Referensi
AOAC 973.18. 2010. Serat (deterjen asam) dan lignin (H2SO4) pada pakan ternak. Gaitersburg,
MD, AS.
Robertson, JB & Van Soest, PJ 1981. Analisis sistem deterjen dan penerapannya pada
makanan manusia, Dalam Analisis Serat Makanan dalam Makanan, Vol 3. Bab 8, (WPT James dan O.
Theander, ed.). Marcel Dekker, Inc.: New York.
Van Soest, PJ & Robertson, JB 1985. Analisis hijauan dan pangan berserat. Di Laboratorium
Manual Ilmu Hewan 613. Cornell University, Ithaca, New York, AS.
Pati – Enzimatik
1. Prinsip
Pati ditentukan dengan ekstraksi sampel sebelumnya dalam etanol 40% untuk menghilangkan gula terlarut, diikuti
dengan pelarutan pati menggunakan dimetil sulfoksida (DMSO), dan kemudian secara kuantitatif mengubah pati
menjadi glukosa oleh amiloglukosidase. Glukosa yang dilepaskan diukur secara spektrometri dengan metode
heksokinase.
2. Ruang Lingkup
Metode ini dapat digunakan untuk semua pakan dengan kandungan pati di atas 2% (lihat keterangan 9.1).
3. Tanggung jawab
4. Peralatan
4.1 Timbangan, analitis akurat hingga 0,1 mg.
4.2 Mesin centrifuge yang mampu mencapai 3000 g.
4.3 Penangas air mampu dipertahankan pada suhu 60 ± 1 °C.
4.4 Penangas air, mendidih 95 hingga 100 °C.
4.5 Pengaduk pusaran.
4,6 pengukur pH.

4.7 Spektrofotometer.
5. Reagen
5.1 Etanol, 40%
Campurkan etanol dan air suling dengan perbandingan volume 2:3.
5.2 Dimetil sulfoksida (DMSO) 90% Campurkan

DMSO murni dan air suling dengan perbandingan volume 9:1.
5.3 Asam klorida, 12 M.
5.4 Larutan natrium Hidroksida encer, 4 M Timbang 40
g NaOH dalam labu takar 250 ml dan hitung volumenya hingga tanda batas dengan H2O suling.
5,5 Larutan asam asetat, 2 M

Tambahkan ke dalam labu takar 500 ml sekitar 200 ml air suling dan 59 ml asam asetat.
Encerkan sampai tanda tera dengan air suling.
5.6 Larutan natrium asetat, 2 M Larutkan
82 g natrium asetat dalam kurang lebih 300 ml air suling dalam labu takar 500 ml lalu encerkan hingga
tanda tera dengan air suling.
5.7 Buffer natrium asetat, 2 M, pH = 4,8

Campurkan 41 ml larutan asam asetat (5.5) dengan 59 ml larutan natrium asetat (5.6).
Periksa pH dan sesuaikan jika perlu.
5.8 Larutan kalium heksasianoferrat (II), 0,25 M Dalam labu takar
1 L, larutkan 106 g kalium heksasianoferrat trihidrat dalam air suling, lalu encerkan dengan air suling
hingga tanda tera.
5.9 Seng asetat (1 M) dalam asam asetat 0,5 M
Dalam labu takar 1 L, larutkan 219,5 g seng asetat dehidrasi dan 30 g asam asetat glasial dalam air
suling dan encerkan hingga tanda tera dengan air suling.
5.10 Larutan yodium dalam kalium iodida

Dalam labu ukur 1 L, larutkan 12,7 g yodium dan 24 g kalium iodida dalam air suling dan encerkan
dengan air suling hingga tanda tera.
5.11 Larutan Glukosa Standar
Untuk sampel yang mengandung 200–1000 g/kg pati. Siapkan tiga larutan glukosa terpisah (0,0194
M). Dalam tiap labu ukur 100 ml larutkan 350 mg ± 1 mg glukosa anhidrat, encerkan sampai tanda
tera dengan air suling.
Untuk sampel yang mengandung 40–200 g/kg pati. Siapkan tiga larutan glukosa terpisah (0,0039 M).
Dalam tiap labu ukur 500 ml larutkan 350 mg ± 1 mg glukosa anhidrat, encerkan sampai tanda tera
dengan air suling.
Siapkan larutan glukosa segar setiap hari.
5.12 Larutan amyloglucosidase 160 U/ml (AMG)
Larutkan dalam campuran 9 ml H2O sulingan + 1 ml buffer natrium asetat (5.7), 267 mg AMG (EC
3.2.1.3 (Aspergillus niger, Roche Diagnostics, No.1 202 367, 6 U/mg).
Ikuti petunjuk penyimpanan yang diberikan oleh produsen.
CATATAN: 1 unit AMG akan melepaskan 1 µmol glukosa dari glikogen dalam 1 menit pada suhu 25
°C pada pH 4,75.
5.13 Uji UV D-Glukosa ditetapkan untuk mengukur glukosa secara enzimatis dengan metode heksokinase (R-
Biopharm, No. 10 716 251 035) sesuai dengan petunjuk pabrik. Kit yang tidak digunakan dapat
disimpan selama 1 tahun pada suhu 4 °C.
Alat tes komersial lainnya untuk penentuan glukosa berdasarkan metode heksokinase juga dapat
digunakan.
6. Prosedur
6.1 Ekstraksi Gula Gratis
6.1.1 Timbang sekitar 0,2 g sampel hingga ketelitian 0,1 mg (W) dalam centrifuge
tabung (4.2).
6.1.2 Tambahkan 10 ml etanol 40% (5.1), pusaran dengan baik dan kocok selama 10 menit.
6.1.3 Centrifuge selama 10 menit pada 3000 g dan buang supernatannya.
6.1.4 Ulangi langkah 6.1.2 dan 6.1.3.
6.2 Disintegrasi pati
Sertakan tabung kosong sebagai blanko pada tahap metode ini.
6.2.1 Tambahkan 15 gelas mutiara ke dalam tabung centrifuge (6.1.4) dan tambahkan 10,0 ml larutan
DMSO (5.2) dengan pencampuran pusaran terus menerus (lihat keterangan 9.3), tutup tabung dengan
tutup sekrup.
6.2.2 Kocok tabung dalam penangas air mendidih selama 30 menit.
6.2.3 Keluarkan tabung, biarkan dingin, tambahkan 1,7 ml asam klorida (5.3) menggunakan pipet dan
aduk rata.
6.2.4 Tutup tabung dan kocok selama 30 menit dalam penangas air dengan suhu 60 °C ±
1 °C.
6.2.5 Dinginkan tabung dan pindahkan secara kuantitatif ke dalam labu takar 100 ml.
6.2.6 Tambahkan 5,0 ml natrium hidroksida berair (5.4) dan 2.5 ml buffer natrium asetat (5.7) dan aduk
larutan secara menyeluruh. Sesuaikan pH, jika perlu, menjadi 4,8 ± 0,1 dengan asam klorida
encer atau natrium hidroksida. Buat volumenya hingga 100 ml dengan air suling.
6.3 Konversi enzimatik pati menjadi glukosa

6.3.1 Pipet 5,00 ml larutan (6.2.6) ke dalam tabung centrifuge lain dan tambahkan 0,125 ml larutan
enzimatik AMG (5.12). Tutup tabung dan aduk rata.
6.3.2 Inkubasi selama 16 jam dalam penangas air dengan suhu 60 °C ± 1 °C.
6.3.3 Setelah itu, masukkan tabung ke dalam penangas air mendidih selama 15 menit untuk menghentikan
reaksi.
6.3.4 Dinginkan tabung hingga suhu sekitar dan tambahkan 0,125 ml larutan kalium heksa-sianoferat
(II) (5.8) dan kocok selama 1 menit.
6.3.5 Tambahkan 0,125 ml larutan seng asetat (5.9), kocok selama 1 menit, sentrifugasi selama 10
menit pada 3000 g.
6.3.6 Pindahkan supernatan ke tabung lain (lihat keterangan 9.4).
6.4 Penentuan kandungan glukosa secara enzimatik
6.4.1 Encerkan 0,5 ml supernatan (6.3.6), standar (5.11), dan blanko masing-masing dengan 9,5 ml air
suling, untuk kandungan pati > 200 g/kg. Dalam hal kandungan pati lebih rendah, volume
supernatan yang lebih tinggi harus diambil dan volume dibuat hingga 10 ml dengan air suling.
6.4.2 Ukur glukosa dalam larutan encer (6.4.1) dengan metode heksokinase dengan mengikuti petunjuk
dari pabriknya. Ukur serapan pada 340 nm menggunakan spektrofotometer.
7. Perhitungan
Hitung kandungan glukosa dalam larutan yang diukur dengan regresi linier.
Persen pati dihitung sebagai:
% Pati = (C x V x DF x 162/180) / (W x 10)
Di mana,
C = konsentrasi glukosa dalam larutan terukur (mg/l), V = volume

larutan (dalam liter, yaitu 0,1),
DF = faktor pengenceran (4 atau 10),
162/180 = faktor pengubah glukosa menjadi pati,
W = berat sampel (g), dan
10 = faktorkan untuk mengubah g/kg menjadi %
8. Kontrol kualitas
Dalam setiap batch, standar kontrol (sampel QC) harus dianalisis. Sampel QC laboratorium dapat dibuat dari
sampel pakan ternak/hijauan yang sifatnya sama dengan sampel yang akan dianalisis. Ambil 3–4 kg sampel
QC pilihan, giling hingga lolos saringan ukuran pori 1 mm dan simpan di tempat sejuk dan kering. Analisis
sampel QC 15–20 kali, ambil rata-rata dan berikan ± 2 SD sebagai rentang yang dapat diterima.
Sampel harus dianalisis dalam rangkap dua. Perbedaan antara nilai dari dua penentuan paralel yang
dilakukan pada sampel yang sama harus < 0,5% + 1% relatif terhadap rata-rata nilai duplikat. Sebagai contoh:
Jika rata-rata duplikat adalah 12%, selisih antara duplikat tidak boleh lebih dari 0,5% ditambah 0,12% (1% dari
12%)
yaitu 0,62%.
9. Keterangan
9.1 Perlakuan teknologi dapat menyebabkan degradasi pati menjadi oligomer glukosa (dex-
trins) yang tidak diukur dengan metode ini.
9.2 Dianjurkan untuk menggiling sampel untuk melewati saringan ukuran pori 0,5 mm untuk
penentuan pati.
9.3 Homogenisasi/pencampuran yang kuat selama penambahan DMSO diperlukan untuk mencegah
pembentukan gumpalan.
9.4 Untuk memeriksa apakah seluruh pati telah diubah, uji yodium dapat dilakukan. Tambahkan beberapa ml
air suling ke dalam tabung, rebus selama 10 menit, dinginkan dan tambahkan 2 ml yodium (5.10).
Warna biru menunjukkan adanya pati dan karenanya konversi tidak sempurna. Dalam hal ini, analisis
harus diulangi.
9.5 Jika kandungan pati sampel tidak diketahui, pengukuran harus dilakukan dengan menggunakan dua laju
pengenceran. Hasilnya harus sesuai setidaknya dengan tuntutan duplikat.

10.1 Reagen dan larutan harus dibuat dengan air kualitas laboratorium.
10.2 Efisiensi enzim dan kondisinya harus divalidasi.
10.3 Konsentrasi glukosa > 0,5% dalam sediaan enzim dapat menyebabkan pembacaan serapan latar
belakang dan mengganggu pengukuran sampel.
11. Referensi
ISO 15904. 2004. Bahan pakan ternak – Penentuan kandungan pati total secara enzimatik.
Jenewa, Swiss.
pengendalian pakan secara resmi. Lampiran III, L, Jurnal Resmi Eropa
Union L54/1 tanggal 26/02/2009 – Metode polarimetrik untuk penentuan pati.
Mengurangi Gula – Metode Luff School
1. Prinsip
Gula diekstraksi dalam etanol encer dan larutan diklarifikasi dengan larutan Carrez I dan II. Setelah
etanol dihilangkan, gula pereduksi ditentukan menggunakan pereaksi Luff-Schoorl.
Metode ini menentukan jumlah gula pereduksi dan gula total setelah inversi,
dinyatakan sebagai glukosa atau jika sesuai sebagai sukrosa, diubah dengan faktor 0,95.
2. Ruang Lingkup
Hal ini berlaku untuk bahan pakan termasuk pakan majemuk.
3. Tanggung jawab
dipatuhi dengan ketat. Setiap penyimpangan dari metode yang ditentukan harus dicatat dan
penyelia diberitahu.
4. Peralatan
4.1 Timbangan, ketelitian analitis pada 0,1 mg.
4.2 Mixer (tumbler): kira-kira 35 hingga 40 rpm.
4.3 Satuan titrasi.
5. Reagen
5.1 Larutan etanol 40% (v/v), densitas: 0,948 g/ml pada 20 °C, dinetralkan menggunakan larutan phe-
nolphthalein 1% (5.18). (Jika perlu, hal ini dapat dilakukan dengan menempatkan larutan etanol pada
piring pengaduk dan menambahkan NaOH 5 M tetes demi tetes sampai air berubah menjadi merah
muda. Tambahkan 0,5 M H2S04 tetes demi tetes, hati-hati, sampai warna merah jambu hilang dan
kemudian dijadikan merah muda lagi dengan 0,5 M NaOH).
5.2 Solusi Carrez I
Larutkan 21,9 g seng asetat Zn(CH3COO)2.2 H2O dan 3 g asam asetat glasial dalam sulingan
air. Buat hingga 100 ml dengan air suling.
5.3 Solusi Carrez II
Larutkan 10,6 g kalium ferosianida K4Fe(CN)6,3 H2O dalam air suling. Buat hingga 100 ml
dengan air suling.
5.4 Larutan metil jingga, 0,1% (b/v).
5,5 4 M Asam klorida.
5,6 0,1 M Asam klorida.

5.7 Larutan natrium hidroksida 0,1 M.
5.8 Larutan tembaga sulfat
Larutkan 25 g tembaga sulfat, CuSO4.5 H2O, bebas besi, dalam 100 ml sulingan
air.
5.9 Larutan asam sitrat
Larutkan 50 g asam sitrat, C6H8O7.H2O dalam 50 ml air suling.

5.10 Larutan natrium karbonat
Larutkan 143,8 g natrium karbonat anhidrat dalam sekitar 300 ml air suling hangat. Biarkan hingga
dingin.
5.11. Reagen Luff-Schoorl

Sambil diaduk, tuangkan larutan asam sitrat (5.9) dengan hati-hati ke dalam larutan natrium
karbonat (5.10). Tambahkan larutan tembaga sulfat (5.8) dan buat hingga 1 liter dengan air suling.
Diamkan semalaman dan saring. Periksa konsentrasi reagen yang diperoleh (Cu 0,05 M; Na2CO3
1 M), lihat (6.4) paragraf terakhir. PH larutan harus sekitar 9,4.
5.12 Larutan natrium tiosulfat, 0,1 M

Larutkan 24,8 g Na2S2O3.5H2O ke dalam labu 1 L dan tambahkan dengan sulingan hingga volumenya
air.
5.13 Larutan pati
Tambahkan campuran 5 g pati larut dalam 30 ml air suling ke dalam 1 liter air suling mendidih.
Rebus selama 3 menit, biarkan hingga dingin dan bila perlu tambahkan 10 mg merkuri iodida
sebagai pengawet.
5.14 Asam sulfat, 3 M.
5.15 Larutan kalium iodida 30% (b/v).
5.16.Batu apung berbutir (dapat diperoleh misalnya dari Sigma-Aldrich) yang direbus dalam
asam klorida, dicuci dengan air suling dan dikeringkan.
5.17.3-metilbutan-1-ol.
5,18,1% Fenolftalein
Timbang 1 g fenolptalein ke dalam gelas kimia 200 ml, tambahkan 60 ml alkohol drum, 40 ml air
suling dan aduk.
6. Prosedur
6.1 Ekstraksi sampel
6.1.1 Timbang kira-kira 2,5 g sampel hingga ketelitian 0,1 mg dan masukkan ke dalam labu takar
250 ml.
6.1.2 Tambahkan 200 ml etanol (5.1) dan kocok selama 1 jam.
6.1.3 Tambahkan 5 ml larutan Carrez I (5.2) dan aduk selama kurang lebih 30 detik.
6.1.4 Tambahkan 5 ml larutan Carrez II (5.3) dan aduk selama 1 menit.
6.1.5 Buat hingga 250 ml dengan etanol (5.1), aduk rata dan saring.
6.1.6 Keluarkan 200 ml filtrat dan evaporasi hingga kira-kira setengah volumenya
untuk menghilangkan sebagian besar etanol.
6.1.7 Pindahkan residu yang diuapkan secara kuantitatif ke dalam labu takar 200 ml dengan
menggunakan air suling hangat, dinginkan, tambahkan air suling sampai tanda batas, aduk
rata dan saring bila perlu.
Larutan ini digunakan untuk menentukan jumlah gula pereduksi dan setelah inversi, jumlah gula
pereduksi.
6.2 Penentuan gula pereduksi
6.2.1 Dengan menggunakan pipet, keluarkan tidak lebih dari 25 ml larutan (6.1.7) yang mengandung
kurang dari 60 mg gula pereduksi yang dinyatakan sebagai glukosa (lihat keterangan 9.4).
6.2.2 Tentukan kandungan gula pereduksi dalam larutan ini dengan Luff-Schoorl
metode (6.4).
6.3 Penentuan total gula pereduksi setelah inversi
6.3.1 Dengan menggunakan pipet, pindahkan 50 ml larutan (6.1.7) ke dalam labu takar 100 ml.
6.3.2 Tambahkan beberapa tetes larutan metil jingga (5.4), hati-hati dan sambil terus diaduk, tambahkan
asam klorida (5.5) hingga cairan benar-benar berubah warna menjadi merah.
6.3.3 Tambahkan 15 ml asam klorida (5.6) dan rendam labu dalam bak berisi
air mendidih dengan kuat selama 30 menit.
6.3.4 Dinginkan dengan cepat hingga kira-kira 20 °C dan tambahkan 15 ml larutan natrium hidroksida.
tion (5.7). Pemandian es dapat digunakan untuk pendinginan.
6.3.5 Buat hingga 100 ml dengan air suling dan aduk rata.
6.3.6 Buang tidak lebih dari 25 ml yang mengandung kurang dari 60 mg gula pereduksi
dinyatakan sebagai glukosa (lihat keterangan 9.4).
6.3.7 Tentukan kandungan gula pereduksi dalam larutan ini dengan Luff-Schoorl
metode (6.4).
6.4 Titrasi dengan metode Luff-Schoorl
6.4.1 Dengan menggunakan pipet, pindahkan 25 ml reagen Luff-Schoorl (5.11) ke dalam 300 ml
Labu erlenmeyer.
6.4.2 Tambahkan tepat 25 ml larutan gula murni.
6.4.3 Tambahkan 2 butir batu apung (5.16), panaskan di atas api bebas dengan tinggi sedang dan
didihkan cairan dalam waktu kurang lebih 2 menit. Sambil memanaskan api, biarkan larutan
diaduk dengan tangan.
6.4.4 Segera letakkan labu Erlenmeyer di atas kain kasa kawat berlapis asbes yang diberi lubang
berdiameter kurang lebih 6 cm yang telah dinyalakan apinya. Nyala api harus diatur sedemikian
rupa sehingga hanya bagian dasar labu Erlenmeyer yang dipanaskan.
6.4.5 Pasang kondensor refluks ke labu Erlenmeyer. Rebus tepat 10 menit.

6.4.6 Segera dinginkan dalam air dingin dan setelah kira-kira 5 menit nyalakan
titrasi.
6.4.7 Tambahkan 10 ml larutan kalium iodida (5.15) dan segera setelah itu (hati-hati, karena risiko
terbentuknya busa yang banyak) tambahkan 25 ml asam sulfat (5.14).
6.4.8 Titrasi dengan larutan natrium tiosulfat (5.12) sampai muncul warna kuning kusam, tambahkan
indikator kanji (5.13) dan selesaikan titrasi dan catat volume yang digunakan (Vs).
6.4.9 Lakukan titrasi yang sama pada campuran 25 ml reagen Luff-Schoorl (5.8), 25 ml air suling, 10
ml larutan kalium iodida (5.15) dan 25 ml asam sulfat (5.14) yang diukur secara akurat tanpa
mendidih dan catat volume yang digunakan (Vb).
Meja 2
Nilai untuk 25 ml reagen Luff-Schoorl

ml Na2S2O3 (0,1 M), pemanasan 2 menit, perebusan 10 menit
Na2S2O3 Glukosa, fruktosa, gula invert
0,1 M C6H12O6
perbedaan ml mg
1 2.4
2 4.8
3 7.2
4 9.7
5 12.2
6 14.7
7 17.2
8 19.8
9 22.4
10 25
11 27.6
12 30.3
13 33
14 35.7
15 38.5
16 41.3
17 44.2
18 47.1
19 50
7. Perhitungan
Hitung untuk setiap sampel selisih antara volume titrasi yang digunakan untuk blanko (Vb)
dan sampel (Vs). Gunakan Tabel 2 untuk menerjemahkan perbedaan ini (dinyatakan di
kolom pertama) menjadi jumlah glukosa yang sesuai dalam mg (dinyatakan di kolom kedua).
Nyatakan hasilnya sebagai persentase sampel:
Kandungan glukosa [%] = jumlah glukosa [mg] / (berat sampel [g] x 10)
Contoh: Untuk setiap penentuan, dua volume yang diambil sesuai dengan sampel 250
mg. Dalam kasus pertama 17 ml larutan natrium tiosulfat (0,1 M) setara dengan 44,2 mg
glukosa yang dikonsumsi; dan di 11 ml kedua setara dengan 27,6 mg glukosa.
Selisihnya adalah 16,6 mg glukosa. Oleh karena itu, kandungan gula pereduksi (tidak termasuk laktosa)
yang dihitung sebagai glukosa adalah:
Kandungan glukosa [%] = 16,6 mg / (0,25 gx 10 g) = 6,64%
CATATAN: Selisih antara kandungan gula pereduksi total setelah inversi (dinyatakan sebagai glukosa)
dan kandungan gula pereduksi (dinyatakan sebagai glukosa) bila dikalikan dengan 0,95 menghasilkan
persentase kandungan sukrosa.
Dalam setiap batch, standar kontrol (sampel QC) harus dianalisis. Sampel QC laboratorium dapat
dibuat dari sampel pakan ternak/hijauan yang sifatnya sama dengan sampel yang akan dianalisis.
Ambil 3–4 kg sampel QC pilihan, giling hingga lolos saringan ukuran pori 1 mm dan simpan di tempat
sejuk dan kering. Analisis sampel QC 15–20 kali, ambil rata-rata dan berikan ± 2 SD sebagai rentang
yang dapat diterima.
Sampel harus dianalisis dalam rangkap dua. Perbedaan antara nilai dari dua penentuan paralel
yang dilakukan pada sampel yang sama harus < 12% dibandingkan dengan nilai yang lebih tinggi.
9. Keterangan
9.1 Jika pakan kaya akan molase, dan pakan lain yang tidak terlalu homogen, timbang 20 g dan
masukkan dengan 500 ml air suling ke dalam labu takar 1 L. Campur selama 1 jam dalam mixer.
Klarifikasi menggunakan reagen Carrez 1 (5.2) dan II (5.3) seperti dijelaskan pada 6.1; namun
kali ini menggunakan empat kali jumlah masing-masing reagen.
Tingkatkan volume hingga tanda 1 liter dengan etanol berair 80% (v/v). Aduk rata dan saring.
Hilangkan etanol seperti dijelaskan pada 6.1. Jika tidak ada pati terdekstrinisasi, naikkan volume
hingga tanda (1 liter) dengan air suling.
9.2 Untuk molase dan bahan pakan yang kaya akan gula dan hampir bebas pati (misalnya carob, bit
kering cossettes, dll.), timbang 5 g, masukkan ke dalam labu takar 250 ml, tambahkan 200 ml air
suling dan campur dalam mixer selama 1 jam, atau lebih jika perlu.
Klarifikasi menggunakan reagen Carrez I (5.2) dan II (5.3) seperti dijelaskan pada 6.1. Bawa
volume hingga tanda batas dengan air suling dingin, aduk rata dan saring. Untuk menentukan
jumlah total gula, lanjutkan seperti yang dijelaskan pada 6.3.
9.3 Karena laktosa juga merupakan gula pereduksi, metode ini juga menangkap kandungan laktosa.
Dalam hal pengganti susu atau pakan lain yang mengandung susu atau produk susu perlu
diperhatikan bahwa kandungan gula pereduksi juga termasuk laktosa.
9.4 Jika kadar gula pereduksi dalam porsi 25 ml terlalu tinggi, larutan harus diambil dalam jumlah yang
lebih kecil. Volume total harus disesuaikan hingga 25 ml dengan menambahkan air suling.

Untuk mencegah pembentukan busa disarankan untuk menambahkan (berapapun volumenya) kira-kira
1 ml 3-metilbutan-l-ol (3.14) sebelum dididihkan dengan pereaksi Luff-Schoorl.
11. Referensi
pengendalian pakan secara resmi. Lampiran III, J, Jurnal Resmi Eropa
Energi Kotor
1. Prinsip
Energi kotor diukur dengan pembakaran sampel dalam oksigen berlebih dalam kalorimeter bom dalam
kondisi standar. Nilai kalor kotor dihitung dari kenaikan suhu air dalam bejana kalorimeter dan rata-rata
kapasitas panas efektif kalorimeter.
2. Ruang Lingkup
Metode ini berlaku untuk semua feed (lihat keterangan 9.1).
3. Tanggung jawab
4. Peralatan
4.1 Timbangan, akurat hingga 0,1 g, kapasitas 5000 g.
4.2 Timbangan, analitis akurat hingga 0,1 mg.
4.3 Kalorimeter bom, adiabatik otomatis.
4.4 Unit pengisian oksigen.
4.5 Unit titrasi (opsional).
5. Reagen
5.1 Benang katun.
5.2 Kawat platina.
5.3 Asam benzoat (tablet pembakaran atau kristal kelas standar).

5.4 Indikator fenolftalein (0,1% dalam etanol 95%).
5,5 Barium hidroksida, 0,1 N (17,13 g/liter).
5.6 Natrium karbonat, 0,1 N (14,2 g/liter).
5,7 HCl, 0,1 N (tempatkan 500 ml dalam labu 1 L, tambahkan 8,73 ml HCl pekat, encerkan hingga 1 liter
dengan air suling).
5.8 Metil jingga.
6. Prosedur
Sebelum memulai prosedur, periksa juga instruksi dari pabriknya.
Prosedur ini berisi tiga bagian. Bagian pertama (6.1) menjelaskan penentuan ekuivalen hidrotermal
kalorimeter bom dan harus dilakukan setiap tahun atau
jika terjadi perubahan pada peralatan, seperti penggunaan kapal bom baru atau kapal setelah
pemeliharaan. Bagian kedua (6.2) menjelaskan prosedur pengukuran sampel.
Bagian ketiga (6.3) menjelaskan penentuan keasaman, yang merupakan faktor koreksi nilai yang diamati.
Laboratorium harus memutuskan untuk menggunakan koreksi ini berdasarkan persyaratan akurasinya
(lihat keterangan 9.2).
6.1 Tentukan ekivalen hidrotermal (nilai air) kalorimeter bom
6.1.1 Gunakan sampel yang nilai kalornya diketahui (tablet pembakaran asam benzoat) untuk
menentukan ekuivalen hidrotermal (kenaikan joule/derajat suhu) bom, ember, dan air.
Hitung kenaikan suhu menggunakan prosedur di atas. Buatlah empat penentuan dan hitung
nilai rata-ratanya (nilai ini tidak boleh berubah kecuali bagian dari bom diganti).
6.1.2 Keringkan asam benzoat (5.3) pada suhu 105 ± 2 °C semalaman dan dinginkan dalam
desikator. Timbang 1 g kristal asam benzoat kering, buat menjadi tablet dan timbang
kembali. Tentukan kenaikan suhu hasil pembakaran asam benzoat dalam kalorimeter bom.
6.1.3 Untuk perhitungan yang diperlukan untuk menentukan ekuivalen hidrotermal termasuk koreksi
untuk benang kapas, kawat platina, dan panas yang dilepaskan dalam pembentukan asam
(lihat 7. Perhitungan).
6.2 Mengukur sampel
6.2.1 Timbang kira-kira 1 g sampel hingga ketelitian 0,1 mg (W) (lihat keterangan 9.1)
dan masukkan ke dalam wadah pembakaran.
6.2.2 Pasang kawat platinum 10 cm (5.2) di antara elektroda bom dan pasang wadah pembakaran
dengan sampel pada tempatnya di elektroda loop.
6.2.3 Ikat benang katun sepanjang 6,5 cm (5.1) di tengah kawat. Sesuaikan benang sehingga
menyentuh sampel.
6.2.4 Rakit bom, kencangkan tutup sekrup, tutup katup pelepas tekanan dan
isi dengan oksigen hingga 25–30 atmosfer.
6.2.5 Timbang 2000 g air sulingan dalam ember kalorimeter dan masukkan ke dalam wadah kalori
rimer. Tempatkan bom di dalam ember dan pasang terminal klip.
6.2.6 Tutup penutupnya, turunkan termometer dan nyalakan motor sirkulasi air.
Lepaskan tutup dari penutup jaket dan isi penutup dengan air hingga selang pembuangan
habis.
6.2.7 Sesuaikan suhu air dalam jaket luar hingga kira-kira sama dengan kalorimeter dengan
menambahkan air panas atau dingin, dan biarkan 1 menit untuk mencapai keseimbangan.
6.2.8 Baca dan catat suhu awal hingga mendekati 0,002 °C dan nyalakan sampel. Tunggu hingga
kenaikan suhu maksimum, baca dan catat suhu akhir. Hal ini juga dapat dilakukan secara
otomatis oleh peralatan.
6.2.9 Buka kalorimeter, ambil bom dari ember, lepaskan sisa tekanan bom dan buka.
6.3 Penentuan keasaman (lihat keterangan 9.2)

6.3.1 Setelah pembakaran selesai, keluarkan bom, lepaskan tekanannya, dan buka.
Bilas semua permukaan bagian dalam bom dengan aliran air suling, kumpulkan semua hasil
pencucian dalam gelas kimia bersih dan lakukan pencucian hingga 100 ml.
6.3.2 Saring dan rebus untuk menghilangkan karbon dioksida.
6.3.3 Titrasi filtrat panas sampai titik akhir fenolftalein (5.4) dengan 0,1 N barium hidroksida (5.5) (A).
6.3.4 Tambahkan 20 ml natrium karbonat 0,1 N (5,6) (B), saring endapannya dan cuci dengan air
suling.
6.3.5 Dinginkan dan titrasi dengan HCl 0,1 N (5,7) (C) menggunakan indikator metil jingga (5,8).
7. Perhitungan
7.1 Rumus yang digunakan untuk menghitung ekuivalen hidrotermal (He) bom adalah:
L x A – (P x C) –14
Dia =
Tf – Ti
Di mana,
He = setara hidrotermal (J/ÿC),

W = berat sampel asam benzoat (g),
A = joule per gram asam benzoat, yaitu 26442 J/g,
L = berat benang katun (g),
C = joule per g kapas, yaitu 17500 J/g,
14 = koreksi pembentukan asam (J),
Tf = suhu akhir, dan
Ti = suhu awal.
Untuk benang katun, nilai yang diberikan oleh pemasok dapat digunakan.
Koreksi pembakaran kawat platina sangat kecil dan dapat diabaikan.
Nilai pembentukan asam juga kecil dan ditetapkan pada 14 J. Nilai ini juga dapat diukur
dilakukan dengan mengikuti prosedur 6.3 dengan 1 ml air suling dan menghitung nilai koreksi seperti
dijelaskan dalam 7.3.
7.2 Rumus yang digunakan untuk menghitung kandungan energi kotor (GE) sampel adalah:
(Tf – Ti) x Dia

GE (kJ/g) =
W
Di mana,
Tf = suhu akhir (ÿC),

Ti = suhu awal (ÿC),
He = setara hidrotermal (J/ÿC)
Nyatakan hasilnya dalam kJ/g.
7.3 Perhitungan faktor koreksi asam
Perhitungan faktor asam dilakukan dengan cara:

Koreksi asam nitrat (J) = 6,0 (B – C)
15.1 (A – (B – C)
Koreksi asam sulfat (J/W) =
W
Koreksinya adalah 94,6 J untuk 0,01 g (1%) sulfur dalam bahan bakar dan 6 J/ml asam nitrat 0,1 N yang
terbentuk.
Faktor ini harus digunakan sebagai pengganti nilai tetap 14 J.
Asam benzoat dan sampel kontrol harus dijalankan setiap hari.
dibuat dari sampel pakan ternak/hijauan yang sifatnya sama dengan sampel yang akan dianalisis. Ambil
3–4 kg sampel QC pilihan, giling hingga lolos saringan ukuran pori 1 mm dan simpan di tempat sejuk dan
kering. Analisis sampel QC 15–20 kali, ambil rata-rata dan berikan ± 2 SD sebagai rentang yang dapat
diterima. Sampel harus dianalisis dalam rangkap dua.
Selisih antara nilai dua penentuan paralel yang dilakukan pada sampel yang sama harus < 0,5%
dibandingkan dengan hasil yang lebih tinggi.
9. Keterangan
9.1 Untuk sampel cair, kira-kira 5–10 g harus ditimbang ke dalam kantong dan dikeringkan
oven vakum atau bekukan kering sebelum dianalisis.
9.2 Variasi dalam pembentukan asam hanya mempunyai pengaruh yang sangat kecil terhadap nilai yang ditemukan. Oleh karena
itu, sebagian besar laboratorium menggunakan nilai tetap (yaitu 14 J) untuk koreksi asam.
10. Referensi
Hill, WH, Seals, J., dan Montiegel, E. 1958. Penghancuran jaringan hewan dan nabati oleh
pembakaran dalam bom oksigen Parr. Saya. Ind.Hyg. J.19 : 378–81.
ISO 9831. 1998. Bahan pakan ternak, produk hewani, dan feses atau urine – Penentuan
nilai kalor kotor – Metode kalorimeter bom. Jenewa, Swiss.
Parr Manual 120. 1948. Kalorimetri bom oksigen dan metode pembakaran bom oksigen.
Perusahaan Instrumen Parr, Moline, IL, AS.
Asam Lemak Volatil (VFA) dalam Silase – Kromatografi Gas
1. Prinsip
Ekstrak air dari silase diasamkan dan disentrifugasi. Alkohol dan asam lemak volatil (VFA) dipisahkan
dalam kolom kromatografi tergantung pada berat molekulnya dan kemudian dideteksi, diidentifikasi,
diamplifikasi, dan diintegrasikan areanya.
2. Ruang Lingkup
Prosedur penentuan alkohol dan asam lemak volatil hanya berlaku untuk silase.
3. Tanggung jawab
Analis Laboratorium harus melakukan analisis sesuai metode ini. Itu adalah tanggung jawab
Analis Laboratorium untuk memastikan bahwa semua kondisi yang ditetapkan dalam metode ini dipenuhi dan
diberitahu.
4. Peralatan
4.1. Kromatografi gas-cair dilengkapi dengan detektor ionisasi nyala.
4.2. Kolom kapiler EC-1000 (L = 30 m, ID = 0,53 mm) dengan fase diam polietilen glikol termodifikasi asam
(ketebalan = 1,20 µm) (lihat keterangan 9.1).
4.3. Integrator (perangkat lunak atau perekam grafik).
4.4. Mesin sentrifugal.
4.5. Pencampur pusaran.
4.6 Timbangan akurat hingga 0,1 g.
5. Reagen
5.1. Dehidrasi asam oksalat (pelarut); buatlah larutan 0,12 M dan 0,03 M.
5.2. Iso-butanol 99,9% (standar internal untuk alkohol); buat larutan 10 µmol/ml.
5.3. Asam iso-kaproat 99,0% (standar internal untuk VFA); buat larutan 10 µmol/ml.
5.4. Campuran standar: pipet 12,5 ml larutan asam oksalat (0,12 M) dalam labu takar 50 ml dan tambahkan
65,40 µl asam asetat, 10,60 µl asam propionat, 5,02 µl asam iso-butirat, 13,00 µl asam butirat, 2,48 µl
asam iso-valerat , 2,98 µl asam valerat, 4,00 µl metanol, 72,40 µl etanol, 5,74 µl propanol dan 1,98 µl
butanol dan tambahkan air suling sampai tanda tera.
5.5. Membuat blanko pelarut (Bs): 5 ml larutan asam oksalat (0,03 M).
5.6. Blanko standar internal (Bis): 4 ml larutan asam oksalat (0,03 M) + 0,5 ml
larutan isobutanol dan 0,5 ml larutan iso-kaproat.
5.7. Membuat standar kalibrasi: 3,5 – 3,0 – 2,5 – 2,0 – 1,5 ml larutan asam oksalat (0,03 M) + 0,5 ml larutan
isobutanol dan 0,5 ml larutan isokaproat + 0,5 – 1,0 – 1,5 – 2,0 – 2,5 ml campuran standar (5.4) .
5.8. Buatlah kontrol positif dengan menambahkan 0,2 ml larutan isobutanol (5.2) dan 0,2 ml isoca-
larutan proat (5.3) hingga 1,6 ml campuran standar (5.4).
6. Prosedur
6.1. Timbang 100 g silase dalam labu takar 1 L dan tambahkan air suling hingga tanda batas.
Biarkan silase terendam selama 16 jam (semalaman) di lemari es (2–8 ÿC). Saring melalui kertas
saring.
6.2. Analisis segera atau masukkan ekstrak ke dalam freezer. Dalam kasus terakhir, keluarkan ekstrak silase
dari freezer dan pindahkan ke lemari es (2–8 ÿC) sehari sebelum analisis.
6.3. Pipet selanjutnya 2,0 ml larutan asam oksalat 0,3 M (5.1), 0,5 ml larutan isobutanol (5.2), 0,5 ml larutan
iso-kaproat (5.3) dan 2 ml ekstrak silase ke dalam tabung 10 ml. Campur menggunakan vorteks (4.5).
Centrifuge (4.4) pada 2600 g selama 5 menit. Isi botol dengan 1,25 ml dan siram dengan nitrogen.
6.4. Atur kromatografi gas (4.1) sesuai dengan instruksi pabrik; antara lain: aliran gas helium 7,2 ml/menit,
Port injeksi 220 °C, kolom 200 °C dan detektor 220 °C.
6.5. Rangkaian dimulai dengan 2 blanko pelarut (5.5), kemudian blanko standar internal (5.6),
kemudian kontrol positif (5.8) dan terakhir blanko standar internal (5.6). Setelah masing-
masing 10 sampel, kontrol di antara yang selanjutnya berisi standar internal kosong (5.6),
kontrol positif (5.8) dan akhirnya standar internal kosong (5.6) dianalisis. Rangkaian ini diakhiri
dengan analisis standar internal kosong (5.6), kontrol positif (5.8) dan terakhir standar internal
kosong (5.6).
6.6. Suntikkan 1 ÿl sampel yang telah disiapkan dengan menggunakan injektor split/splitless (split
1/10) pada kolom kapiler lubang lebar (4.2). Komponen yang mudah menguap dipisahkan
melalui gas pembawa helium dan fase diam polar medium (polietilen glikol termodifikasi
asam) menggunakan gradien suhu (80 °C selama 5 menit, 10 °C/menit hingga 200 °C dan
200 °C). °C selama 8 menit), dan dideteksi oleh deteksi ionisasi nyala
untuk.
CATATAN: Di antara dua suntikan, larutan asam oksalat (0,03 M) digunakan untuk membilas kolom.
7. Perhitungan
Identifikasi dan kuantifikasi komponen didasarkan pada kalibrasi standar internal bertingkat. Untuk
setiap komponen, waktu retensi relatif dan permukaan di bawah puncak diukur.
Untuk setiap komponen kurva kalibrasi ditetapkan. Dari sini konsentrasi komponen (µmol/ml)
dalam sampel diturunkan dengan mempertimbangkan faktor pengenceran.
Konsentrasi % dalam silase dihitung dengan mengalikannya dengan berat molar.
8. Kontrol kualitas
Pencantuman standar kosong secara berkala diperlukan di antara sampel untuk mencegah efek
terbawa ke analisis sampel berikutnya.
Analisis berkala terhadap standar internal kosong diperlukan untuk mengevaluasi kondisi
kromatografi.
Analisis sampel kontrol yang sering diperlukan untuk mengontrol identifikasi dan kuantisasi
sertifikasi komponen.
Sampel harus dianalisis dalam rangkap dua. Selisih antara nilai dua penentuan paralel yang
dilakukan pada sampel yang sama harus < 5% dari nilai rata-rata.
9. Keterangan
9.1 Jenis kolom GC lainnya yang mampu memisahkan alkohol dan lemak yang mudah menguap
asam dapat digunakan.
10. Referensi
Blokir, H.-J. & Weissbach, F. 1982. Zur gaschromatografiphischen Bestimmung flüchtiger Fettsäuren
dalam Silagen mit innerem Standard. Lengkungan. Tierennährung 32 (9): 693–702.
Fussell, RJ & McCalley, DV 1987. Penentuan asam lemak volatil (C2 - C5) dan asam laktat
dalam silase dengan kromatografi gas. Analis 112: 1213–1216.
Jouany, JP 1981. Dosis acides gras volatils et des alcools dans les ensilages parchrom-
tographie en fase gazeuse. Banteng. Teknologi. CRZV Theix, INRA 46: 63–66.
Jouany, JP 1982. Penentuan asam lemak dan alkohol yang mudah menguap dalam isi pencernaan,
jus silase, kultur bakteri dan isi fermentor anaerobik. Ilmu makanan 2: 131–144.
Ottenstein, DM & Bartley, DA 1971. Peningkatan pemisahan kromatografi gas dari asam bebas
C2 - C5 dalam larutan encer. Dubur. kimia. 43 (7): 952–955.
Asam Laktat dalam Silase – Metode Enzimatik
1. Prinsip
Dalam ekstrak silase berair, asam laktat (D- dan L-laktat) dioksidasi oleh nikotinamida adenin
dinukleotida (NAD+) menjadi piruvat dengan adanya laktat dehidrogenase (LDH). Reaksi kedua
dikatalisis oleh glutamat piruvat transaminase (GPT) untuk membentuk NADH. Hal ini diukur dengan
menggunakan spektrofotometer pada 340 nm, yang secara stoikiometri setara dengan asam laktat
yang ada.
2. Ruang Lingkup
Prosedur penentuan asam laktat hanya berlaku untuk silase.
3. Tanggung jawab
diberitahu.
4. Peralatan
4.1. Mesin sentrifugal.
4.2. Spektrofotometer.
4.3 Timbangan akurat hingga 0,1 g.
5. Reagen
5.1. Kit enzim untuk penentuan asam D- dan L-laktat.
5.2. Standar laktat (D+L).
6. Prosedur
6.1. Masukkan 100 g silase ke dalam labu takar 1 L dan tambahkan air suling hingga tanda batas.
Biarkan terendam selama 16 jam (semalaman) di lemari es (4–8 ÿC). Saring melalui kertas saring.
6.2. Analisis segera atau masukkan ekstrak ke dalam freezer. Dalam kasus terakhir, keluarkan ekstrak
silase dari freezer dan masukkan ke dalam lemari es (4–8 ÿC) sehari sebelum analisis.
6.3. Pipet 5 ml sampel ke dalam tabung plastik 10 ml dan sentrifugasi (4.1) pada 3000 g
selama 5 menit.
6.4. Semua larutan dari kit enzim (5.1) siap digunakan, kecuali
solusi NAD.
6.5. Pindahkan ke dalam kuvet kuarsa 2 ml larutan buffer, NAD, GPT, air suling dan sampel dalam
jumlah sesuai petunjuk kit enzim. Sertakan juga blanko dan larutan standar (5.2).
6.6. Tempatkan kuvet dalam spektrofotometer (4.2) dan baca absorbansinya tepat setelah 5 menit
(A1).
6.7. Tambahkan larutan D-LDH ke dalam kuvet, masukkan ke dalam spektrofotometer dan baca
serapannya setelah tepat 40 menit (A2).
6.8. Tambahkan larutan L-LDH ke dalam kuvet, masukkan ke dalam spektrofotometer dan baca serapan tepat setelah
40 menit (A3).
6.9. Jika A3 > 1, ekstrak harus diencerkan lebih lanjut.
7. Perhitungan
D-asam laktat dalam g/l = (A2 – A1) x DF x 0,3204
L-asam laktat dalam g/l = (A3 – A2) x DF x 0,3232
Perbaiki hasil kandungan bahan kering (DM) sampel:
D-/L-asam laktat x (1000 – DM)/1000
Di mana,
A1 = Absorbansi setelah 5 menit,
A2 = Absorbansi setelah penambahan D-LDH,
A3 = Absorbansi setelah penambahan L-LDH,
DF = faktor pengenceran, dan
DM = kandungan bahan kering dalam %.

Karena ekstrak diperoleh dengan mengencerkan 100 g sampel menjadi 1 liter, hasilnya dinyatakan dalam % silase.
Dalam setiap proses, larutan standar D- dan L-laktat harus dianalisis untuk mengontrol presisi.
sion.
Sampel harus dianalisis dalam rangkap dua dan perbedaan antara duplikat tidak boleh lebih besar dari 2,8 kali
kemampuan reproduksi intra-laboratorium. Yang terakhir ini dihitung sebagai koefisien variasi (deviasi standar relatif
= SD dalam % mean) dari hasil 1 atau 2 sampel silase yang dianalisis pada hari berbeda dan pada akhirnya oleh
analis laboratorium berbeda.
9. Interferensi dan pemecahan masalah

9.1. Lihat instruksi dengan kit enzim
10. Referensi
Gawehn, K. 1984. Asam D-Laktat/Asam L-Laktat. Dalam: Metode Analisis Enzimatik (Bergmeyer HU, ed.)
Edisi ke-3, vol. VI, hal.588–592. Verlag Chemie, Weinheim, Pantai Deerfield/Florida,
Basel.
Noll, F. 1966. Metode kuantitatif Bestimmung van L(+)-Lactat mittels Lactat-Dehydroge-

nase dan Glutamat-Pyruvat-Transaminase, Biokimia. Z.346: 41–49.
Peraturan Komisi (EC) No 152/2009. 27 Jan 2009. Menetapkan metode pengambilan sampel dan
analisis untuk pengendalian pakan secara resmi. Lampiran III, K, Jurnal Resmi Uni Eropa L54/1 tanggal
26/02/2009 – Penentuan Laktosa menggunakan Titrasi.
Urea – Metode Spektrofotometri
1. Prinsip
Sampel (pakan atau bahan pakan) disuspensikan dalam air suling dengan bahan penjernih.
Kandungan urea ditentukan menggunakan spektrofotometer setelah penambahan 4-dimetil-
aminobenzaldehida (4-DMAB).
2. Ruang Lingkup
Metode ini cocok untuk pakan dan hijauan. Beberapa pakan telah menambahkan urea sebagai sumber
nitrogen tambahan. Metode ini menjelaskan penentuan urea, tidak termasuk kandungan amonia (lihat
keterangan 9.4).
3. Tanggung jawab
diberitahu.
4. Peralatan
4.1. Mixer (tumbler), kurang lebih 35 sampai 40 rpm.
4.2. Tabung reaksi, 160 mm × 16 mm dengan sumbat kaca tanah.
4.3. Spektrofotometer.
5. Reagen
5.1 Larutan 4-dimetilaminobenzaldehida (4-DMAB)
Larutkan 1,6 g 4-DMAB dalam 100 ml etanol berair 96% dan tambahkan 10 ml HCl (HCl 37%
atau ÿ20 = 1,19 g/ml). Reagen ini dapat disimpan paling lama dua minggu.
5.2 Solusi Carrez I

Larutkan 21,9 g seng asetat, Zn(CH3COO)2.2 H2O dan 3 g asam asetat glasial dalam air suling.
Buat hingga 100 ml dengan air suling.
Larutkan 10,6 g kalium ferosianida, K Fe(CN)6. 3 H2O dalam air suling. Buat hingga 100 ml
dengan air suling.
5.4 Karbon aktif yang tidak menyerap urea (periksa sebelum digunakan).
5,5 Urea, larutan 0,1% (b/v).
6. Prosedur
6.1 Analisis Sampel
6.1.1 Timbang 2 g sampel hingga mg terdekat dan tempatkan dengan 1 g karbon aktif
(5.4) dalam labu takar 500 ml.
6.1.2 Tambahkan 400 ml air suling dan 5 ml larutan Carrez I (5.2), aduk hingga
kurang lebih 30 detik dan tambahkan 5 ml larutan Carrez II (5.3).
6.1.3 Campur selama 30 menit dan tambahkan air suling hingga tanda batas, campur dan saring.
6.1.4 Pindahkan 5 ml filtrat transparan tidak berwarna ke dalam tabung reaksi dengan penutup
kaca, tambahkan 5 ml larutan 4-DMAB (5.1) dan aduk.
6.1.5 Tempatkan tabung dalam penangas air pada suhu 20 ± 4 °C.
6.1.6 Setelah 15 menit ukur serapan larutan sampel menggunakan spektrofotometer pada 420 nm.
Bandingkan dengan larutan blanko yang bersangkutan (mengandung 5 ml 4-DMAB dan 5 ml
air suling bebas urea).
6.2 Kurva kalibrasi
6.2.1 Pindahkan 1, 2, 4, 5 dan 10 ml larutan urea (5.5) ke dalam 100 ml volumetrik
labu dan tambahkan air suling sampai tanda tera.
6.2.2 Ambil alikuot 5 ml dari masing-masing larutan, tambahkan 5 ml larutan 4-DMAB (5.1), aduk
rata dan ukur serapannya terhadap blanko yang berisi 5 ml 4-DMAB dan 5 ml air bebas urea.
6.2.3 Ukur serapan pada 420 nm menggunakan spektrofotometer dan plot kali-
kurva brasi.
7. Perhitungan
Konsentrasi urea dalam larutan sampel ditentukan dari regresi linier kurva kalibrasi (6.2.3).
Sebagai – b
cs = ________
M
Di mana,
cs = konsentrasi urea larutan sampel dalam mg/100 ml,

As = nilai serapan larutan sampel,
B = perpotongan y terhadap garis regresi, dan
m = kemiringan garis regresi.
Kandungan urea sampel dengan mempertimbangkan kondisi sebagaimana disebutkan dalam 6.1 (berat 2
g dalam 500 ml pelarut) dihitung sebagai:
urea [%] = cs • 0,25
Kandungan urea sampel secara umum dihitung sebagai:
cs • V • F
urea [%] = ________
dengan • 1000
Di mana,
V = volume larutan sampel dalam ml,

F = faktor pengenceran, dan
w = berat sampel dalam g.
Sampel kontrol yang mengandung 2% urea harus dijalankan pada setiap batch. Sampel ini dapat dibuat
dengan mencampurkan 2 g urea dalam 98 g pakan kering bebas urea yang serupa dengan sampel yang
sedang dianalisis. Pemulihan harus 90 hingga 110%, jika tidak, rangkaian tersebut harus diulang.
CATATAN: Sampel pakan kontrol yang mengandung urea harus disimpan dalam desikator. Sampel yang
lama (> satu bulan) sebaiknya tidak digunakan.
Perbedaan antara duplikat harus lebih rendah dari 5% dibandingkan nilai yang lebih tinggi.
9. Keterangan
9.1 Jika konsentrasi urea melebihi 3%, kurangi sampel menjadi 1 g atau encerkan larutan asli sehingga
tidak lebih dari 50 mg urea dalam 500 ml.
9.2. Jika konsentrasi urea rendah, tambah jumlah sampel (asalkan filtratnya tetap transparan dan tidak
berwarna).
9.3 Absorbansi sangat bergantung pada suhu. Oleh karena itu disarankan untuk melakukan pengukuran
untuk menetapkan kurva kalibrasi dan untuk sampel uji pada saat yang bersamaan.
9.4 Hewan ruminansia dapat menghidrolisis urea menjadi amonia, sehingga menggunakan amonia tersebut untuk
diubah menjadi sumber protein. Namun, jika urea ditambahkan secara berlebihan ke dalam pakan, hal ini
dapat menjadi racun bagi hewan.
10. Pemecahan masalah

10.1 Karena banyak asam amino pada kondisi yang dijelaskan di atas menunjukkan serapan maksimum
pada sekitar 415 nm, penentuan urea pada 420 nm sangat terganggu. Pada 435 nm, serapan yang
dihasilkan oleh asam amino jauh lebih rendah dan serapan urea hanya sedikit lebih rendah
dibandingkan pada 420 nm. Karena sebagian besar sampel pakan mengandung senyawa nitrogen
sederhana seperti asam amino, umumnya disarankan untuk melakukan pengukuran sampel uji dan
kurva kalibrasi pada 435 nm.
11. Referensi
pengendalian pakan secara resmi. Lampiran III, D, Jurnal Resmi Eropa
Heckman, M. 1967. Penentuan kolorimetri urea dalam pakan (Laporan Komite AOAC).
J. Asosiasi. resmi. Dubur. Ahli kimia 50: 56–58 (1967), Ralston Purina Co., St. Louis, Mo.
Augustin, T. & Eckstein, M. 2010. Laporan uji cincin urea Nr. 387Q. Landesbetrieb Hessisches
buruh darat. Kassel, Am Versuchsfeld 13, 34128 Kassel.
Elemen – AAS
1. Prinsip
Bahan umpan dijadikan abu dalam tungku peredam dan abu yang dihasilkan dilarutkan dalam asam klorida.
Setelah filtrasi dan pengenceran yang sesuai, elemen jejak ditentukan dengan spektrofotometer serapan
atom.
2. Ruang Lingkup
Prosedur yang dijelaskan berlaku untuk penentuan kalsium (Ca), tembaga (Cu), besi (Fe), magnesium (Mg),
mangan (Mn), kalium (K), natrium (Na) dan seng (Zn) di semua bahan pakan ternak.
3. Tanggung jawab
4. Peralatan
4.1. Timbangan analitik, akurat hingga 0,1 mg.
4.2. Tungku peredam listrik, mampu dipertahankan pada suhu 550 ± 20 °C.
4.3 Piring panas.
4.4 Spektrofotometer Serapan Atom (AAS).
4.5 Peralatan gelas harus dari jenis borosilikat yang tahan dan direkomendasikan untuk menggunakan
peralatan yang khusus digunakan untuk penentuan elemen jejak.
5. Reagen
Gunakan bahan kimia tingkat reagen dan air deionisasi kecuali ditentukan lain.
5.1 Asam klorida, c = 12 M.
5.2 Asam klorida, c = 6 M.
5.3 Asam klorida, c = 0,6 M.
5.4 Larutan lantanum nitrat
Larutkan 133 g La(NO3)3.6 H2O dalam 1 liter air deionisasi
5.5 Larutan sesium klorida
Larutkan 100 g CsCl dalam 1 liter air deionisasi
5.6 Larutan stok Cu, Fe, Mn dan Zn
Campurkan 100 ml air deionisasi dan 125 ml asam klorida (12 M) dalam labu takar 1 L. Timbang
yang berikut ini:
392,9 mg tembaga(II) sulfat pentahidrat, CuSO4.5 H2O
702,2 mg amonium besi(II) sulfat heksahahidrat, (NH4)2SO4.FeSO4.6 H2O
307,7 mg mangan sulfat monohidrat, MnSO4.H2O
439,8 mg seng sulfat heptahidrat, ZnSO4.7 H2O
Pindahkan garam yang telah ditimbang ke dalam labu takar dan larutkan. Encerkan sampai tanda batas
dengan air deionisasi.
5.7 Larutan baku Cu, Fe, Mn dan Zn

Encerkan 20 ml larutan stok dengan air deionisasi dalam labu takar 1 L dan
encerkan sampai tanda batas dengan air deionisasi.
5.8 Larutan baku Ca, K, Mg dan Na

Encerkan 25 ml larutan stok (5.8) dengan asam klorida encer (5.3) hingga 250 ml dalam labu takar.
Kandungan Ca, K dan Na masing-masing 100 µg/ml, kandungan Mg 20 µg/ml. Siapkan larutan
segar untuk penggunaan seminggu dan simpan dalam botol polietilen.
5.9 Larutan blanko lantanum-cesium

Tambahkan 5 ml larutan lantanum nitrat (5.4), 5 ml larutan sesium klorida (5.5) dan 5 ml asam
klorida (5.3) ke dalam labu takar 100 ml. Encerkan sampai tanda batas dengan air deionisasi.
6. Prosedur
6.1 Persiapan sampel
6.1.1 Tempatkan 5–10 g sampel yang ditimbang hingga 0,2 mg terdekat dalam wadah kuarsa atau
platina, keringkan dalam oven pada suhu 105 ± 2 °C dan masukkan wadah ke dalam
tungku peredam dingin (4.2).
6.1.2 Tutup tungku dan naikkan suhu secara bertahap hingga 550 ± 20 °C selama kurang lebih 90
menit. Pertahankan suhu ini selama 4 hingga 16 jam (misalnya semalaman) untuk
menghilangkan bahan karbon, lalu buka tungku dan biarkan dingin.
6.1.3 Basahi abu dengan air deionisasi dan pindahkan ke dalam gelas kimia 250 ml.
Cuci wadah dengan total kurang lebih 5 ml asam klorida (5.1). CATATAN: Tambahkan
asam secara perlahan dan hati-hati ke dalam gelas kimia (mungkin terjadi reaksi hebat
karena pembentukan CO2).
6.1.4 Tambahkan asam klorida (5.1) tetes demi tetes sambil diaduk sampai semua buih berhenti.
6.1.5 Uapkan sampai kering, sesekali diaduk dengan batang kaca.

6.1.6 Tambahkan 15 ml asam klorida 6 M (5.2) ke dalam residu diikuti dengan sekitar 120 ml air
deionisasi. Aduk dengan batang kaca yang tertinggal di dalam gelas kimia, lalu tutup gelas
kimia tersebut dengan kaca arloji.
6.1.7 Didihkan perlahan dan pertahankan pada titik didih sampai tidak ada lagi abu yang tersisa
terlihat larut.
6.1.8 Saring pada kertas saring bebas abu dan kumpulkan filtratnya dalam wadah bervolume 250 ml.
labu.
6.1.9 Cuci gelas kimia dan saring dengan 5 ml asam klorida 6 M panas (5.2) dan dua kali dengan air
mendidih.
6.1.10 Sesuaikan tanda dengan air deionisasi (konsentrasi HCl kira-kira
0,5M).
6.1.11 Jika residu pada filter tampak hitam (karbon), masukkan kembali ke dalam tungku dan abu
lagi pada suhu 450 hingga 475 °C. Pengaburan ini memerlukan waktu sekitar 3–5 jam dan
selesai bila abu tampak putih atau hampir putih.
6.1.12 Larutkan residu dengan kurang lebih 2 ml asam klorida (5.1), evaporasi
tingkatkan hingga kering dan tambahkan 5 ml asam klorida 6 M (5.2).
6.1.13 Panaskan, saring larutan ke dalam labu takar dan ukur hingga tanda batas
dengan air deionisasi (konsentrasi HCl sekitar 0,5 M).
CATATAN: Metode pencernaan lain dapat digunakan asalkan metode tersebut terbukti memberikan hasil
yang serupa (misalnya pencernaan gelombang mikro).
Jika sampel tidak mengandung bahan organik (misalnya pakan mineral), pengabuan terlebih dahulu tidak diperlukan.
Lanjutkan seperti yang dijelaskan pada poin 6.1 nomor 3.
6.2 Penentuan spektrofotometri Fe, Cu, Mn dan Zn

6.2.1 Kondisi pengukuran
Sesuaikan AAS (4.4) sesuai dengan instruksi pabrik dan optimalkan respons instrumen
menggunakan api pengoksidasi udara-asetilen pada panjang gelombang berikut:
F : 248,3nm
Cu : 324,8 nm
Mn : 279,5nm
Zn : 213,8nm
6.2.2 Penyusunan kurva kalibrasi

1. Siapkan serangkaian larutan kalibrasi yang sesuai dengan mengencerkan larutan standar
(5.7) dengan asam klorida encer (5.3).
2. Ukur serapan asam klorida (5.3) dan serapan larutan kalibrasi dan kurangi serapan yang
diukur untuk
asam hidroklorik.
3. Gambarkan kurva kalibrasi dengan memplot serapan yang telah dikoreksi terhadap
masing-masing kandungan Cu, Fe, Mn dan Zn.
6.2.3 Pengukuran larutan uji
1. Ukur secara paralel dengan larutan kalibrasi, dalam kondisi yang sama, serapan larutan
uji dan larutan blanko. Kurangi yang terakhir
serapan dari serapan pertama.
2. Jika perlu, encerkan sebagian larutan uji dan larutan blanko dengan asam klorida encer
(5.3) untuk mendapatkan serapan pada bagian linier kurva kalibrasi.
6.3 Penentuan spektrofotometri Ca, Mg, K dan Na

6.3.1 Kondisi pengukuran
Sesuaikan AAS (4.4) sesuai dengan instruksi pabrik dan optimalkan respons instrumen
menggunakan api pengoksidasi udara-asetilen pada panjang gelombang berikut:
Ca : 422,6nm
Mg : 285,2nm
K : 766,5nm
Na : 589,6nm
6.3.2 Penyusunan kurva kalibrasi

1. Encerkan larutan standar (5.8) dengan air deionisasi. Ke dalam 100 ml larutan standar
encer tambahkan 5 ml larutan lantanum nitrat (5.4), 5 ml larutan sesium klorida (5.5) dan 5
ml asam klorida (5.2). Pilih pengenceran sehingga diperoleh larutan kalibrasi yang sesuai.
2. Ukur serapan larutan blanko lantanum-cesium (5.9).

3. Ukur serapan larutan kalibrasi dan kurangi serapannya.
nilai yang diukur untuk larutan blanko lantanum/cesium (5.9).
4. Gambarkan kurva kalibrasi dengan memplotkan serapan terkoreksi terhadap masing-
masing kandungan Ca, Mg, K dan Na.
6.3.3 Pengukuran larutan uji
1. Encerkan sebagian larutan uji dan larutan blanko dengan air deionisasi.
Ke dalam 100 ml larutan standar encer tambahkan 5 ml larutan lantanum nitrat
(5.4), 5 ml larutan sesium klorida (5.5) dan 5 ml asam klorida (5.2).

2. Ukur secara paralel dengan larutan kalibrasi, dalam kondisi yang sama, serapan larutan
uji encer dan larutan blanko encer. Mengurangi
serapan terakhir dari serapan pertama.
3. Jika perlu, encerkan sebagian larutan uji dan larutan blanko dengan larutan blanko
lantanum/cesium (5.9) untuk mendapatkan serapan pada bagian linier kurva kalibrasi.
7. Perhitungan
Dengan menggunakan kurva kalibrasi (6.2.2 dan 6.3.2), hitung konsentrasi elemen jejak dalam larutan:
Sebagai – b
cs = ________
M
Di mana,
cs = konsentrasi unsur larutan sampel [µg/ml],

As = Nilai serapan larutan sampel,
b = perpotongan y terhadap garis regresi, dan
m = kemiringan garis regresi.
Kandungan unsur sampel dalam mg/kg dengan mempertimbangkan langkah pengenceran dihitung sebagai:
cs • v • F
elemen [mg/ kg] = ________
w
Di mana,
v = volume larutan sampel [ml],

F = faktor pengenceran, dan
w = berat sampel [g].
Nyatakan hasilnya dalam miligram unsur jejak per kilogram sampel (ppm), dan untuk unsur makro dalam
gram per kilogram (g/kg).
• Duplikat pengendalian kerja harus dijalankan pada setiap rangkaian dan dibandingkan dengan
batasan pada peta kendali yang telah ditetapkan. Blank berduri pada tingkat konsentrasi medium
pada kurva kalibrasi harus menghasilkan pemulihan antara 80 dan 120%.
•Satu blanko harus dijalankan pada setiap set. Aliquot 10 ml akan diambil dan diperlakukan sebagai
sampel. Konsentrasi yang dihitung harus <0,5 ppm.
•Segera setelah pembuatan kurva kalibrasi, standar referensi 0 ppm harus dibaca sebagai sampel.
Konsentrasi pembacaan yang dihitung harus <0,1 ppm.
•Segera setelah pembacaan standar acuan 0 ppm, standar acuan 10 ppm harus dibaca sebagai
sampel. Pembacaannya harus berada dalam kisaran 2,5% dari 10 ppm (9,75–10,25 ppm).
•Jika standar blanko dan/atau 10 ppm gagal, maka instrumen harus dikalibrasi ulang dengan membuat
garis kalibrasi yang benar-benar baru menggunakan semua standar acuan. Segera setelah
kalibrasi ulang, standar 0 ppm dan standar 10 ppm harus diuji ulang dan harus memenuhi kriteria
penerimaan yang disebutkan di atas.
•Standar 0 dan 10 ppm harus dijalankan pada awal dan akhir setiap proses dan setelah setiap 10 sampel.

9.1. Buffer ionisasi lantanum harus ditambahkan ke setiap sampel. Keberadaannya dapat dideteksi dengan
nyala api hijau selama analisis. Hasil yang rendah akan terjadi jika buffer ionisasi dihilangkan.
9.2. Selama tahap pengasapan asam klorida, beberapa pencernaan tiba-tiba berubah penampilan (warna,
bentuk partikel), membentuk komponen yang kurang larut. Mungkin perlu untuk mencerna ulang
sampel baru sampai asam klorida mulai berasap.
10. Referensi
AOAC 968.08. 2000. Mineral dalam pakan ternak dan makanan hewan, metode spektrofotometri serapan atom.
Gaithersburg, MD, AS.
AOAC 965.09. 2000. Unsur hara (minor) pada pupuk, spektrofotometri serapan atom
metode. Gaithersburg, MD, AS.
pengendalian pakan secara resmi. Lampiran IV, C, Jurnal Resmi Eropa
ISO 6869. 2000. Bahan pakan ternak – Penentuan kandungan kalsium, tembaga, besi, magnesium, mangan,
kalium, natrium dan seng – Metode menggunakan spektrometri serapan atom. Jenewa, Swiss.
Kalsium – Metode Spektrofotometri
1. Prinsip
Sampel dinyalakan pada suhu 550 °C untuk membakar semua bahan organik. Mineral yang tersisa dicerna
dalam HCl 6 M untuk melepaskan kalsium, yang kemudian ditentukan menggunakan uji spektrofotometri
berdasarkan reaksi kalsium dengan o-cresolpthalein complexone (CPC) dalam larutan basa. Magnesium
ditutupi oleh 8-hydroxyquinoline.
2. Ruang Lingkup
Metode ini berlaku untuk pakan, makanan, pencernaan dan feses. Metode ini tidak berlaku untuk pakan
campuran mineral.
3. Tanggung jawab
4. Peralatan
4.1 Neraca analitik, ketelitian 0,1 mg.
4.2 Gelas kimia tahan tungku misalnya gelas kimia Pyrex.
4.3 Tungku peredam, mampu dipertahankan pada suhu 550 ± 20 ÿC.

4.4 Piring panas.
4.5 Spektrofotometer.
5. Reagen
5.1 Asam klorida, 6 M.
5.2 Larutan standar kalsium.
5.3 Alat uji kalsium, misalnya Ref No.11489216 216 dari Roche.
Kit dari produsen lain berdasarkan metode BPK juga dapat digunakan.
6. Prosedur
6.1.1 Timbang kira-kira 1 g hingga ketelitian 0,2 mg (W) dalam gelas kimia (4.2) dan masukkan ke dalam
tungku Muffle dingin (4.3).
6.1.2 Tutup tungku dan naikkan suhu secara bertahap hingga 550 °C selama sekitar 90 menit.
Pertahankan suhu ini selama 16 jam (misalnya semalaman) untuk menghilangkan bahan karbon
dan kemudian buka tungku dan biarkan dingin (lihat keterangan 9.1).
6.1.3 Tambahkan 10 ml asam klorida 6 M (5.1) ke dalam setiap gelas kimia dan letakkan di atas piring panas
yang sudah dipanaskan sebelumnya (kurang lebih 250 ÿC), tutup gelas kimia dengan piring kaca,
rebus selama 20 menit.
6.1.4 Biarkan gelas kimia mendingin dan keluarkan dari hot plate.
6.1.5 Pindahkan isi gelas kimia secara kuantitatif ke dalam labu ukur 25 ml, tambahkan air suling sampai
tanda tera dan aduk rata.
6.1.6 Ukur kalsium dalam larutan (6.1.5) dan standar (5.2) dengan metode CPC dengan mengikuti
instruksi dari produsen alat uji (5.3), ukur serapan pada 578 nm (lihat keterangan 9.2).
7. Perhitungan
Hitung kandungan kalsium dalam larutan yang diukur dengan regresi linier.
Persen kalsium dihitung sebagai:
% Kalsium = (C x V x DF) / (W x 10)

Di mana,
C = konsentrasi kalsium dalam larutan takar (mg/liter), V = volume

larutan (dalam liter, yaitu 0,025 (L)),
DF = faktor pengenceran (normalnya yaitu 1),
10 = faktor untuk mengubah g/kg menjadi %.
Garam yang mengandung kalsium dengan kemurnian tinggi dapat digunakan sebagai standar kontrol, rata-rata 15-20
ulangan dan memungkinkan ± 2 SD sebagai kisaran yang dapat diterima.
Dalam setiap batch, standar kontrol (sampel QC) harus dianalisis. Sampel QC laboratorium dapat dibuat
dari sampel pakan ternak/hijauan yang sifatnya sama dengan
sampel yang akan dianalisis. Ambil 3–4 kg sampel QC pilihan, giling dan saring dengan saringan ukuran pori
1 mm dan simpan di tempat sejuk dan kering. Analisis sampel QC 15–20 kali, ambil rata-rata dan berikan ± 2
SD sebagai rentang yang dapat diterima. Sampel harus dianalisis dalam rangkap dua. Selisih antara nilai dua
penentuan paralel yang dilakukan pada sampel yang sama harus < 5% dari nilai rata-rata.
9. Keterangan
9.1 Metode pencernaan lainnya dapat digunakan asalkan metode tersebut telah divalidasi untuk memberikan hasil yang
serupa (misalnya pencernaan dengan gelombang mikro).
9.2 Penentuan dapat dilakukan secara otomatis dengan menggunakan auto analyser. Hal ini akan
meningkatkan presisi dan efisiensi metode.
10. Referensi
AOAC 968.08D. 2000. Pencernaan asam. Gaithersburg, MD, AS.
Tietz, NW 1995. Penentuan Kalsium. Panduan Klinis Uji Laboratorium, 3 Auflage. Phila-
delphia, Pa: Perusahaan WB Saunders.
Gosling, P. 1986. Tinjauan analitis dalam biokimia klinis: Pengukuran kalsium. Ann Klinik
Biokimia 23: 146–156.
Fosfor – Metode Spektrofotometri
1. Prinsip
Bahan pakan dijadikan abu setelah dicerna dalam asam klorida. Ditambahkan pereaksi molibdovanadat yang
menghasilkan warna kuning khas setelah bereaksi dengan fosfor, yang diukur secara spektrofotometri.
2. Ruang Lingkup
Metode ini dapat diterapkan pada bahan pakan ternak dengan kandungan fosfor <50 g/kg.
Untuk sampel dengan kandungan fosfor yang lebih tinggi, metode gravimetri disarankan yaitu kuinolin
fosfomolibdat.
3. Tanggung jawab
Analis Laboratorium harus melakukan analisis sesuai metode yang ditentukan. Analis Laboratorium
bertanggung jawab untuk memastikan bahwa semua ketentuan yang ditetapkan dalam metode ini dipenuhi
dan dipatuhi dengan ketat. Setiap penyimpangan dari metode yang ditentukan harus dicatat dan penyelia
diberitahu.
4. Peralatan
4.2 Gelas kimia tahan tungku misalnya gelas kimia Pyrex.
4.3 Tungku peredam, mampu dipertahankan pada suhu 550 ± 20 ÿC.
4.4 Piring panas.
4.5 Spektrofotometer UV-VIS.
5. Reagen
5.1 Asam klorida 6 M.
5.2 14 M Asam nitrat.
5.3 Larutan amonium heptamolibdat
Larutkan 100 g amonium heptamolibdat tetra hidrat [(NH4)6Mo7O24.4H2O] dalam air suling panas.
Tambahkan 10 ml amonia (NH4OH: 14 M; ÿ(NH4OH) = 0,91 g/ml) dan encerkan hingga 1 liter
dengan air suling.
5.4 Larutan amonium monovanadat
Larutkan 2,35 g amonium monovanadat (NH4VO3) dalam 400 ml air suling panas. Aduk terus,
tambahkan perlahan 7 ml asam nitrat (5.2) dan encerkan hingga 1 liter dengan air suling.
5.5 Reagen molibdovanadat

Dalam labu takar 1 L, campurkan 200 ml larutan amonium heptamolibdat (5.3), 200 ml larutan
amonium monovanadat (5.4) dan 135 ml asam nitrat (5.2).
Encerkan sampai tanda tera dengan air suling. Saring jika ada partikel yang tidak larut.
5.6 Larutan standar fosfor (1 mg/ml)
Dalam labu takar 1 L, larutkan 4,394 g kalium dihidrogen fosfat (KH2PO4) yang sebelumnya
dikeringkan pada suhu 103 ± 2 °C selama 1 jam. Encerkan sampai tanda tera dengan sulingan
air.
5.7 Kurva kalibrasi.
Encerkan larutan standar fosfor hingga konsentrasi 5, 10, 20 dan 40 ÿg/ml.
Gunakan air suling sebagai blanko.
6. Prosedur
6.1.1 Timbang kira-kira 1 g hingga ketelitian 0,2 mg (W) dalam gelas kimia (4.2) dan masukkan ke
dalam tungku Muffle dingin (4.3).
6.1.2 Tutup tungku dan naikkan suhu secara bertahap hingga 550 °C selama kurang lebih 90
menit. Pertahankan suhu ini selama 16 jam (misalnya semalaman) untuk menghilangkan
bahan karbon dan kemudian buka tungku dan biarkan dingin (lihat keterangan 9.1).
6.1.3 Tambahkan 10 ml asam klorida 6 M (5.1) ke dalam setiap gelas kimia dan letakkan di atas piring
panas yang sudah dipanaskan sebelumnya (kira-kira 250 °C), tutup gelas kimia dengan piring
kaca, dan cerna selama 20 menit.
6.1.4 Biarkan gelas kimia mendingin dan keluarkan dari hot plate.
6.1.5 Pindahkan isi gelas kimia ke dalam labu takar 25 ml, tambahkan air suling hingga tanda
batas, dan aduk rata.
6.1.6 Diamkan larutan semalaman hingga mengendap.
6.2 Mengukur kandungan fosfor
6.2.1 Encerkan sebagian larutan (6.1.6) dengan air suling untuk mendapatkan fosfor
kandungan phorus tidak melebihi 40 ÿg/ml.
6.2.2 Pindahkan masing-masing 10 ml larutan encer (6.2.1) dan larutan standar (5.7) ke dalam
tabung reaksi terpisah. Ambil tabung reaksi yang berisi 10 ml air (kosong). Ke setiap tabung
tambahkan 10 ml reagen molibdovanadat (5.5). Campur dan diamkan selama 10 menit-
pada suhu 20 °C.
6.2.3 Ukur serapan larutan (6.2.2) pada 430 nm dalam waktu 45 menit
menggunakan spektrofotometer terhadap blanko.
7. Perhitungan
Hitung kandungan fosfor dalam larutan yang diukur dengan regresi linier.
Persentase fosfor dihitung sebagai:
% Fosfor = (C x V x DF) / (L x 10)
Di mana,
C = konsentrasi fosfor dalam larutan terukur (mg/liter), V = volume

larutan (dalam liter, yaitu 0,025 L), DF = faktor
pengenceran (normalnya, yaitu 1),
10 = faktor untuk mengubah g/kg menjadi %.
Dalam setiap batch, standar kontrol (sampel QC) harus dianalisis. Sampel QC laboratorium
dapat dibuat dari sampel pakan ternak/hijauan yang sifatnya sama dengan sampel yang akan
dianalisis. Ambil 3–4 kg sampel QC pilihan, giling hingga lolos saringan ukuran pori 1 mm dan
simpan di tempat sejuk dan kering. Analisis sampel QC 15–20 kali, ambil rata-rata dan berikan ±
2 SD sebagai rentang yang dapat diterima.
Sampel harus dianalisis dalam rangkap dua. Selisih nilai dua penentuan paralel alel yang
dilakukan pada sampel yang sama hendaknya < 5% dari nilai rata-rata.
9. Keterangan
9.1 Metode pencernaan lainnya dapat digunakan asalkan metode tersebut terbukti memberikan hasil yang serupa
(misalnya penggunaan asam yang berbeda atau pencernaan dengan gelombang mikro).
10 Referensi
pengendalian pakan secara resmi. Lampiran III, P, Jurnal Resmi Eropa
ISO 6491. 1998. Bahan pakan ternak – Penentuan kandungan fosfor – Spektrometri
metode. Jenewa, Swiss.
Klorin – Metode Titrasi
1. Ringkasan
Klorida dilarutkan dalam air suling. Jika produk mengandung bahan organik, produk tersebut
diklarifikasi. Larutannya sedikit diasamkan dengan asam nitrat dan klorida diendapkan dalam
bentuk perak klorida melalui larutan perak nitrat. Kelebihan perak nitrat dititrasi dengan larutan
amonium tiosianat. Konsentrasi klorida dinyatakan sebagai natrium klorida.
2. Ruang Lingkup
Metode ini dapat diterapkan pada pakan ternak.
3. Tanggung jawab
diberitahu
4. Peralatan
4.2 Pengaduk.
4.3 Peralatan titrasi.
5. Reagen
5.1 Larutan amonium tiosianat, 0,1 M.
5.2 Larutan perak nitrat, 0,1 M.
5.3 Amonium besi sulfat jenuh (NH4)Fe(SO4)2.
5.4 Asam nitrat, ÿ = 1,38 g/ml.
5.5 Dietil eter.
5.6 Aseton.
5.7 Solusi Carrez I
Larutkan 21,9 g seng asetat, Zn(CH3COO)2.2 H2O dan 3 g asam asetat glasial dalam air suling.
Buat hingga 100 ml dengan air suling.
Larutkan 10,6 g kalium ferosianida K4Fe(CN)6,3 H2O dalam air suling. Buat hingga 100 ml
dengan air suling.
5.9 Karbon aktif.
6. Prosedur
6.1 Persiapan larutan
Berdasarkan sifat sampelnya, siapkan larutan seperti yang diberikan pada 6.1.1, 6.1.2 atau
6.1.3.
Secara bersamaan lakukan uji kosong dengan menghilangkan sampel yang akan dianalisis.
Sampel bebas dari bahan organik
6.1.1 Timbang maksimal 10 g sampel hingga ketelitian 1 mg (W) ke dalam labu takar 500 ml
(lihat keterangan 9.1). Tambahkan 400 ml air suling ke dalam labu dan aduk selama 30
menit. Buat hingga 500 ml dengan air suling, aduk rata dan saring.
Sampel yang mengandung bahan organik, tidak termasuk produk yang tercantum pada 6.1.3
6.1.2 Timbang maksimum 5 g sampel hingga ketelitian 1 mg (W) dan 1 g karbon aktif (5.9) ke
dalam labu takar 500 ml. Tambahkan 400 ml air suling dan 5 ml larutan Carrez I (5.7) ke
dalam labu dan aduk selama 30 menit. Tambahkan 5 ml larutan Carrez II (5.8) ke dalam
labu dan aduk selama 30 menit. Buat hingga 500 ml dengan air suling, homogenkan dan
saring.
Untuk pakan masak, kue rami dan produk tepung yang kaya akan tepung rami, dan produk lainnya yang
kaya akan lendir atau zat koloidal; 6.1.3
Siapkan larutan seperti dijelaskan pada 6.1.2 tetapi jangan disaring. Buang 100 ml supernatan
dan pindahkan ke dalam labu takar 200 ml. Buat hingga 200 ml dengan aseton (5.6), aduk
rata dan saring.
6.2 Titrasi
6.2.1 Dengan menggunakan pipet, pindahkan 25 hingga 100 ml filtrat yang diperoleh (6.1) ke
dalam labu Erlenmeyer (lihat keterangan 9.2).
6.2.2 Encerkan jika perlu hingga tidak kurang dari 50 ml dengan air suling, tambahkan 5 ml asam
nitrat (5.4), 20 ml larutan jenuh amonium besi sulfat (5.3) dan dua tetes larutan amonium
tiosianat (5.1)
6.2.3 Dengan menggunakan buret, pindahkan larutan perak nitrat (5.2) ke dalam labu Erlenmeyer
(ini setara dengan 5 mmol ion perak dibandingkan dengan ion klorida 4,23 M ketika
diasumsikan kandungan maksimum 150 mg klorin, lihat keterangan 9.3) sedemikian rupa
sedemikian rupa sehingga diperoleh kelebihan 5 ml (lihat keterangan 9.5). Tambahkan 5
ml dietil eter (5,5) dan kocok kuat-kuat untuk menggumpalkan endapan.
6.2.4 Titrasi kelebihan perak nitrat dengan larutan amonium tiosianat (5.1)
sampai warna coklat kemerahan bertahan selama 1 menit.
7. Perhitungan
Jumlah klorin (X), yang dinyatakan dalam % natrium klorida, dihitung menggunakan rumus berikut: X =
5,845 (V1 – V2) /
W
Di mana,
V1 = volume larutan perak nitrat 0,1 M yang ditambahkan (dalam
ml), V2 = volume larutan amonium tiosianat 0,1 M yang ditambahkan (dalam ml), dan
W = berat sampel (g).
Jika uji blanko menunjukkan bahwa perak nitrat telah dikonsumsi, kurangi nilai ini
volumenya (V1 – V2).
dibuat dari sampel pakan ternak/hijauan yang sifatnya sama dengan sampel yang akan dianalisis. Ambil
3–4 kg sampel QC pilihan, giling hingga lolos saringan ukuran pori 1 mm dan simpan di tempat sejuk
dan kering. Analisis sampel QC 15–20 kali, ambil rata-rata dan berikan ± 2 SD sebagai rentang yang
dapat diterima.
Sampel harus dianalisis dalam rangkap dua. Selisih nilai dua penentuan paralel alel yang dilakukan
pada sampel yang sama hendaknya < 5% dari nilai rata-rata.
9. Keterangan
9.1 Sampel tidak boleh mengandung lebih dari 3 g klorin dalam bentuk klorida.
9.2 Bagian alikuot tidak boleh mengandung lebih dari 150 mg klorin.
9.3 Tergantung pada kandungan klorida, volume larutan perak nitrat harus disesuaikan untuk mentitrasi
larutan tiosulfat dalam jumlah besar.
9.4 Titrasi juga dapat dilakukan secara potensiometri.

9.5 Informasi atau pengalaman yang tersedia mengenai kandungan klorin dalam sampel harus digunakan
untuk mendapatkan kelebihan ini. Kelebihan ini dapat diperiksa dengan volume amonium tiosianat yang
dibutuhkan selama titrasi (6.2.4), yang minimal harus 4,5 ml.
10. Referensi
pengendalian pakan secara resmi. Lampiran III, Q, Jurnal Resmi Eropa
Aflatoksin – Metode HPLC
1. Prinsip
Aflatoksin B1, B2, G1 dan G2 (AFB1, AFB2, AFG1, AFG2) diekstraksi dari sampel umpan dengan aseton
berair. Ekstrak dimurnikan dengan kromatografi imunoafinitas dan analitnya diukur dengan kromatografi cair
kinerja tinggi fase terbalik (RP-HPLC) dengan derivatisasi pasca kolom (PCD) yang melibatkan brominasi.
PCD dicapai dengan brom yang dihasilkan secara elektrokimia atau dengan piridinium hidrobromida perbro-
mida (PBPB) yang diikuti dengan deteksi fluoresensi.
2. Ruang Lingkup
Metode ini untuk penentuan kadar aflatoksin pada bahan pakan ternak. Hal ini berlaku untuk pakan ternak
dengan kandungan lemak hingga 50%.
Batas kuantifikasi harus minimal 1 µg/kg untuk aflatoksin B1 (rasio signal-to-noise 6). Faktanya metode ini
telah terbukti mencapai batas kuantifikasi kurang dari 0,5 ÿg/kg untuk aflatoksin B1.
3. Tanggung jawab
4. Peralatan
Peralatan laboratorium biasa dan khususnya yang berikut ini:
4.1 Pengocok vertikal atau horizontal (dapat disesuaikan).
4.2 Kertas saring, ø 24 cm, dilipat sebelumnya (misalnya Whatman 2V).
4.3 Labu Erlenmeyer dengan tutup ulir atau sumbat kaca.
4.4 Kertas saring mikrofiber kaca, ø 5 cm (misalnya Whatman GF/A).
4.5 Reservoir, 75 ml dengan konektor ujung luer untuk kolom immunoaffinity.
4.6 Pompa tangan, spuit 20 ml dengan kunci luer atau sumbat karet untuk imunoafinitas
kolom.
4.7 Peralatan gelas volumetrik dengan kapasitas 5 ml, 10 ml dan 20 ml, mempunyai ketelitian sebesar
setidaknya 0,5%.
4.8 Pompa HPLC, cocok untuk laju aliran 1.000 ± 0.005 ml/menit.
4.9 Sistem injeksi
Mampu melakukan injeksi loop total (disarankan menggunakan katup dengan loop minimal 100 ÿl).
4.10 Kolom RP-HPLC, misalnya SUPELCOSIL LC-18 (Supleco) atau Octadecylsilane (ODS)-2 LC
(Fenomena).
Opsional tetapi disarankan: pra-kolom.
4.11 Sistem derivatisasi kolom pasca dengan PBPB (alternatif dari 4.12)
Pompa HPLC tanpa pulsa kedua, potongan T volume mati nol, tabung reaksi minimal 45 cm x 0,5
mm diameter dalam PTFE (polytetrafluoroethylene) (waktu reaksi harus minimal 4 detik sebelum
terdeteksi).
4.12 Sistem derivatisasi dengan brom yang dihasilkan secara elektrokimia (misalnya sel KOBRA), perangkat
harus dipasang sesuai dengan instruksi pabrik.
CATATAN: Untuk memastikan aflatoksin B1, kolom HPLC harus diputuskan dari perangkat brominasi dan
harus dihubungkan langsung ke detektor fluoresensi (tidak disarankan untuk mematikan arus listrik dengan
perangkat brominasi yang masih terhubung karena
dengan kemungkinan sisa brom di membran sel perangkat).

4.13 Detektor fluoresensi, dengan panjang gelombang ÿ = 360 nm filter eksitasi dan gelombang-
panjang ÿ > 420 nm filter emisi cut-off, atau setara
Pengaturan yang disarankan untuk detektor yang dapat disesuaikan adalah Eksitasi = 365 nm, Emisi
= 435 nm, Lebar Pita = 18 nm.
4.14 Unit filter sekali pakai (0,45 ÿm).
CATATAN: Sebelum digunakan, harus dipastikan bahwa tidak ada kehilangan aflatoksin selama filtrasi
(pengujian pemulihan) karena ada kemungkinan berbagai bahan filter dapat menahan aflatoksin B1.
4.15 Pipet bertanda tunggal, kapasitas 1 ml, 2 ml, 5 ml dan 10 ml.
4.16 Neraca analitik, akurat 0,1 mg.
4.17 Neraca laboratorium, akurat 0,01 g.
4.18 Jarum suntik mikroliter atau pipet mikroliter yang dikalibrasi (20–500 ÿl).
4.19 Evaporator (opsional; hanya diperlukan untuk opsi B, bagian 6.3)
5. Reagen
Gunakan hanya reagen dengan tingkat analitis yang diakui, kecuali ditentukan lain.
Semua larutan dibuat dengan pelarut tingkat HPLC dan bahan tingkat reagen kecuali dinyatakan lain.
5.1 Air sulingan ganda atau air deionisasi.
5.2 Larutan garam dengan buffer fosfat, PBS, pH 7,4

PBS dapat dibuat dari kalium klorida (0,20 g), kalium dihidrogen fosfat (0,20 g), dinatrium hidrogen
fosfat anhidrat (1,16 g) [atau dinatrium hidrogen fosfat.12 H2O (2,92 g)] dan natrium klorida (8,00 g)
ditambahkan ke 900 ml air suling ganda. Setelah pelarutan, pH harus diatur hingga pH 7,4 (dengan
HCl 0,1 M atau NaOH 0,1 M jika sesuai) dan larutan dibuat hingga 1,0 liter dengan air suling ganda.
Sebagai alternatif, tablet garam berdapar fosfat yang tersedia secara komersial dengan sifat setara
dapat digunakan.
Tabel 3
Persiapan solusi kalibrasi kerja
Opsi A Pilihan B
Larutan standar stok Aliquot Konsentrasi larutan stok Aliquot [ng Konsentrasi
yang berfungsi [µl] AFB1/ml] [µl] [ng AFB1/ml]
1 20 0,050 100 0,250
2 45 0,113 225 0,563
3 70 0,175 350 0,875
4 95 0,238 475 1.188
5 120 0,300 600 1.500
6 145 0,363 725 1.813
7 170 0,425 850 2.125
8 195 0,488 975 2.438
9 220 0,550 1100 2.750
5.3 Piridinium hidrobromida perbromida, PBPB, CAS 39416-48-3.

Reagen ini tidak diperlukan jika sel KOBRA ® digunakan.
5.4 Kalium bromida.
Reagen ini tidak diperlukan apabila reagen PBPB digunakan.
5.5 asetonitril tingkat HPLC.
5.6 Metanol tingkat HPLC.
5.7 Aseton, murni.
5.8 Air kelas HPLC (air sulingan ganda atau air deionisasi juga dapat digunakan).
5.9 Pelarut ekstraksi.
aseton (5.7):air suling ganda, (85:15, v/v).
5.10 Asam nitrat, c(HNO3) = 4 M
Reagen ini tidak diperlukan apabila reagen PBPB digunakan.
5.11 Kolom Imunoafinitas
Kolom afinitas harus berisi antibodi yang meningkat terhadap aflatoksin B1. Kolom tersebut
harus mempunyai kapasitas tidak kurang dari 40 ng aflatoksin B1 dan harus memberikan
perolehan tidak kurang dari 80% untuk aflatoksin B1 bila diterapkan sebagai larutan standar
dalam aseton: air suling ganda (85:15, v/ v) mengandung 0,25 ng aflatoksin B1.
5.12 Pelarut fase gerak HPLC A Air , untuk digunakan dengan reagen kolom pos PBPB saja:
suling ganda (5.8):asetonitril (5.5):larutan metanol (5.6) (6:2:3, v/v/v). Rasio pelarut dapat
disesuaikan untuk mendapatkan pemisahan terbaik.
5.13 Pelarut fase gerak HPLC B, untuk digunakan hanya dengan brom yang dihasilkan secara elektrokimia:
Air suling ganda (5.8):asetonitril (5.5):larutan metanol (5.6) (6:2:3, v/v/v)),
mengandung 120 mg kalium bromida (5,4) dan 350 ÿl asam nitrat (5,10) per liter fase gerak.
Rasio pelarut dapat disesuaikan untuk mendapatkan parameter pemisahan terbaik.
eter.
CATATAN: Pelarut fase gerak (5.12/5.13) harus dihilangkan gasnya.
5.14 Reagen kolom pos
Untuk digunakan hanya dengan reagen kolom pos PBPB:
Larutkan 25 mg PBPB (5.3) dalam 500 ml H2O suling ganda. Larutan dapat digunakan
hingga 4 hari jika disimpan di tempat gelap pada suhu ruangan. Reagen pasca kolom ini
hanya digunakan dalam kombinasi dengan pelarut fase gerak HPLC A (5.12) tetapi tidak
dengan pelarut fase gerak HPLC B (5.13).
5.15 Toluena:asetonitril (98:2, v/v).
5.16 Bahan standar aflatoksin B1 .
Standar aflatoksin B1 dalam bentuk kristal atau film kering untuk keperluan analisis.
5.17 Larutan stok kalibrasi untuk HPLC.
5.17.1 Umum
Siapkan larutan stok aflatoksin B1 (5.16) yang mengandung 50,0 ng/ml dalam
toluena:asetonitril (5.15).
5.17.2 Opsi A (lihat deskripsi metode 6.3)
Pipet dari larutan (5.16) volume seperti tercantum dalam Tabel 3 (Opsi A) ke dalam
satu set labu ukur 20 ml yang telah dikalibrasi. Uapkan larutan toluena:asetonitril
sampai kering di bawah aliran nitrogen pada suhu kamar. Ke dalam tiap labu
ditambahkan 7 ml metanol, biarkan aflatoksin larut, lalu tambahkan air suling ganda
hingga tanda tera dan kocok rata.
CATATAN: Ingatlah bahwa metanol dan air sulingan ganda dapat mengalami kontraksi volume
saat dicampur.
5.17.3 Opsi B (lihat deskripsi metode 6.3)
Ke dalam satu set labu ukur 20 ml yang telah dikalibrasi, pipet larutan (5.16) dengan
volume seperti tercantum dalam Tabel 3 (Opsi B). Uapkan larutan toluena-asetonitril
sampai kering di bawah aliran nitrogen pada suhu kamar. Ke dalam masing-masing
labu, tambahkan kurang lebih 10 ml metanol, biarkan aflatoksin larut, lalu tambahkan
metanol hingga tanda (bukan metanol encer) dan kocok rata. Tepat 1 ml larutan
kalibrasi kerja ini kemudian dipindahkan ke dalam botol kaca yang telah dicuci
dengan asam, diuapkan hingga kering seperti dijelaskan dalam opsi B di bawah 6.3
dan kemudian dilarutkan kembali dalam volume yang persis sama yang akan
digunakan untuk melarutkan kembali sampel sebelumnya. injeksi (6.3). Hitung
konsentrasi aflatoksin B1 dalam larutan yang diuapkan dan dilarutkan kembali dalam
ng/ml. Gunakan nilai konsentrasi ini untuk perhitungan seperti yang diberikan pada
bagian 6.6. Dalam hal ini rentang kalibrasi tidak akan berubah.
6. Prosedur
6.1 Pengkondisian kolom imunoafinitas
Kolom imunoafinitas (5.11) harus berada pada suhu kamar sebelum pengkondisian.
Untuk pengkondisian ikuti instruksi dari pabriknya. Jika tidak dinyatakan lain, oleskan 10 ml
PBS (5.2) pada bagian atas kolom dan biarkan mengalir dengan kecepatan 2–3 ml/menit
melalui kolom (berdasarkan gravitasi). Pastikan sebagian kecil (0,5 ml) PBS tetap berada di
kolom sampai larutan sampel diterapkan.
6.2 Ekstraksi
6.2.1 Timbang, dengan ketelitian 0,1 g, kira-kira 50 g bagian uji ke dalam labu Erlenmeyer
500 ml dengan tutup ulir atau sumbat kaca.
6.2.2 Tambahkan 250 ml aseton: pelarut ekstraksi air suling ganda (5.9).
6.2.3 Kocok secara intensif dengan tangan selama 15 hingga 30 detik pertama dan kemudian selama 30 menit dengan a
pengocok (4.1).
6.2.4 Saring ekstrak menggunakan kertas saring yang telah dilipat sebelumnya (4.2).
6.2.5 Pipet 5 ml filtrat bening ke dalam labu takar 100 ml dan imbangi dengan PBS atau air suling
ganda (Pelarut pengencer – PBS atau air suling ganda – harus dipilih sesuai dengan
spesifikasi kolom imunoafinitas kecuali dinyatakan lain, pengenceran harus dilakukan
dengan PBS).
Jika larutan tidak jernih, saring kembali melalui penyaring serat kaca (4.4) dan masukkan
tepat 50 ml filtrat bening ke dalam reservoir yang ditempatkan pada kolom imunoafinitas
terkondisi (Jika larutan bening, larutan encer dapat
diterapkan langsung pada kolom immunoaffinity).
6.2.6 Terapkan solusi pada kolom seperti dijelaskan pada bagian 6.3.
6.3 Pembersihan imunoafinitas
CATATAN: Metode pengkondisian, pemuatan, pencucian dan elusi sedikit berbeda antara produsen
kolom immunoaffinity dan oleh karena itu instruksi spesifik yang disertakan dengan kolom harus diikuti
dengan tepat. Secara umum, prosedur melibatkan ekstraksi sampel dengan metanol berair, filtrasi atau
sentrifugasi, kemungkinan pengenceran sampel dengan PBS atau air sulingan ganda, memasukkan
tekanan ke dalam kolom (mungkin pra-cuci), pencucian kolom dengan air sulingan ganda dan elusi
aflatoksin. B1 dengan metanol atau asetonitril.
6.3.1 Lewatkan filtrat melalui kolom secara gravitasi dengan laju aliran kira-kira 1 tetes/detik (kira-
kira 3 ml/menit). Jangan melebihi laju aliran 5 ml/
menit.
6.3.2 Cuci kolom dengan kurang lebih 20 ml air suling ganda (5.8), diaplikasikan dalam dua bagian
kira-kira 10 ml dengan laju alir 3 ml/menit dan keringkan dengan menggunakan vakum
ringan selama 5-10 detik atau melewatkan udara. melalui kolom imunoafinitas melalui jarum
suntik selama 10 detik.
6.3.3 Elusi aflatoksin B1 dalam prosedur dua langkah:
Oleskan 0,50 ml metanol pada kolom dan biarkan mengalir secara gravitasi. Kumpulkan
eluat dalam labu takar 5 ml (4.7). Tunggu 1 menit dan oleskan metanol porsi kedua 1,25
ml. Kumpulkan sebagian besar pelarut elusi yang digunakan dengan mengalirkan udara,
setelah sebagian besar larutan melewati gravitasi.
Opsi A (disarankan)
CATATAN: Opsi ini direkomendasikan, namun memerlukan detektor fluoresensi dan sistem injeksi yang
sesuai. Opsi B hanya berlaku jika sinyal detektor rendah untuk analisis menurut opsi A.
6.3.4 Kumpulkan eluat dalam labu takar 5 ml (4.7).

6.3.5 Isi labu sampai tanda batas dengan air dua kali lipat dan kocok rata. Jika solusinya adalah
jelas dapat digunakan langsung untuk analisis HPLC. Jika larutan tidak jernih, lewati melalui
unit filter (0,45 ÿm) (4.14) sebelum injeksi HPLC.
CATATAN: Injeksi dengan mode loop total menjamin akurasi maksimum. Dianjurkan (tergantung
pada sistem injeksi, misalnya jarum suntik atau autosampler) untuk mengambil volume sampel 3 kali
ukuran loop injeksi dan menyuntikkan setidaknya 2/3 dari volume ini ke dalam katup, untuk
memastikan bahwa fraksi tengah tetap berada di dalamnya. lingkaran injeksi. Dengan demikian, loop
dibilas dengan pelarut injeksi sementara cukup pelarut yang tersisa di dalam katup.
Opsi B (hanya jika berlaku)
CATATAN: Jika sinyal detektor sangat rendah untuk menjamin tingkat Deviasi Standar Relatif (RSD)
yang diperlukan, langkah penguapan tambahan dapat dimasukkan untuk memenuhi RSD yang
diperlukan (10% dari injeksi ganda (n = 10) larutan standar aflatoksin B1 dengan konsentrasi setara
dengan tingkat kontaminasi 1 ng/g).
6.3.6 Kumpulkan aflatoksin yang mengandung eluat metanol dari kolom imunoafinitas
umn dalam botol kaca yang dicuci dengan asam.
6.3.7 Evaporasi eluen hingga kering dengan aliran nitrogen lembut pada suhu 40 °C.
6.3.8 Larutkan kembali aflatoksin dalam larutan metanol berair (35%). Gunakan volume yang
sama persis untuk residu sampel yang diuapkan seperti yang akan Anda gunakan untuk
larutan kalibrasi yang diuapkan. Volume untuk pelarutan ulang (volume akhir) akan
bergantung pada ukuran loop injeksi Anda. Gunakan mode loop total untuk injeksi
seperti yang dijelaskan dalam opsi A.
6.4 Pasca derivatisasi kolom
Saat menggunakan PBPB, pasang T-piece pencampur dan tabung reaksi yang disebutkan
dalam 4.11, lalu operasikan menggunakan parameter berikut:
Laju aliran: 1 ml/menit (fase gerak 5.12)
0,30 ml/menit (reagen 5.14)
Saat menggunakan brom yang dihasilkan secara elektrokimia (sel KOBRA) ikuti petunjuk
pemasangan sel seperti yang disediakan oleh produsen dan pengoperasian menggunakan
parameter berikut:
Laju aliran: 1 ml/menit (fase gerak 4.13)
Saat ini: 100 ÿA
6.5 Kurva kalibrasi
Kurva kalibrasi harus disiapkan menggunakan solusi kalibrasi kerja yang dijelaskan (5.17).
Larutan ini mencakup kisaran 0,5–5,5 ÿg/kg untuk aflatoksin B1.
Buatlah kurva kalibrasi sebelum analisis sesuai tabel (5.17) dan periksa linearitas plotnya.
Regresi linier harus dilakukan dengan menggunakan kalkulator ilmiah atau program statistik.
CATATAN: Jika kandungan aflatoksin B1 dalam sampel berada di luar rentang kalibrasi, kurva
kalibrasi yang sesuai harus dibuat. Alternatifnya, larutan injeksi untuk analisis HPLC dapat diencerkan
hingga kandungan aflatoksin B1 sesuai dengan kurva kalibrasi yang telah ditetapkan.
6.6 Prosedur spiking untuk penentuan recovery

Untuk menentukan perolehan kembali, tambahkan larutan standar aflatoksin ke berat awal
bahan bebas aflatoksin. Tingkat spiking harus berada dalam kisaran kalibrasi (sebaiknya
kisaran menengah). Berhati-hatilah agar tidak lebih dari 2 ml pelarut spiking yang ditambahkan
(larutan harus memiliki konsentrasi aflatoksin B1 yang memadai) dan penguapan selanjutnya
dilakukan dalam gelap dan berlangsung selama 0,5–2 jam.
7. Perhitungan
Plot sinyal sebagai sumbu x (tinggi atau luas) terhadap konsentrasi aflatoksin B1 [ng/ml] sebagai sumbu y
dari larutan kalibrasi (bagian 6.5). Gambarkan kurva kalibrasi dan hitung kemiringan (a) dan intersep (b)
menggunakan regresi linier.
y = kapak + b
Dengan menggunakan fungsi yang dihasilkan, hitung konsentrasi aflatoksin B1 dalam larutan yang diukur.
Perhitungan konsentrasi aflatoksin B1 larutan yang disuntikkan dari kurva kalibrasi (fungsi) diperoleh
dengan regresi linier:
ÿ SMP = a • Asmp + b
ÿ SMP • VS • VE • VD
ÿkonta = ________________
m • VAE • VA/ AC
ÿ • 100 • VE
smp ÿconta = _____________
M
Di mana,
m = bahan sampel yang diambil untuk dianalisis [g] - (50 g),

VS = pelarut yang diambil untuk ekstraksi [ml] - (250 ml),
VAE = alikuot diambil bentuk ekstrak [ml] - (5 ml),
VD = volume yang dicapai setelah pengenceran dengan PBS (air) [ml] - (100 ml),
VA/ AC = alikuot yang diambil untuk pembersihan immunoaffinity [ml] - (50 ml),
= volume akhir yang dicapai setelah elusi dari imunoafinitas
kolom VE [ml],
ÿ SMP = konsentrasi aflatoksin dihitung dari regresi linier [ng/ml],
ÿconta = kontaminasi bahan sampel dengan aflatoksin B1 [ÿg/kg], dan
Asmp = luas atau tinggi puncak aflatoksin yang diperoleh dari larutan yang diukur [satuan].
Ingatlah, bahwa untuk larutan sampel dan larutan standar, volume yang sama harus disuntikkan agar
sesuai dengan rumus.
8. Kontrol kualitas
8.1 Akurasi
Pemulihan sampel berduri (6.6) harus mencapai 60 hingga 120%, jika tidak, rangkaian tersebut
harus diulang. Pengendalian kerja ini harus dijalankan pada setiap set dan dibandingkan dengan
batasan pada peta kendali yang telah ditetapkan.
8.2 Presisi
Suntikkan standar kalibrasi tingkat menengah sebagai pemeriksaan setelah kira-kira setiap 5 sampel
mengevaluasi perubahan area puncak. Area tersebut tidak boleh berubah lebih dari 10% dari
area puncak standar pada kurva kalibrasi. Periksa ini juga untuk AFB1, AFB2, AFG1
dan AFG2 jika keduanya juga sedang ditentukan.
9. Keterangan
9.1 Mengenai kapasitas pemuatan kolom afinitas imun mengacu pada pabrikan
spesifikasi.
9.2 Sebelum menerapkan konfirmasi HPLC, skrining aflatoksin dapat dilakukan dengan menggunakan
alat uji yang berbeda. Beberapa tes ELISA tersedia secara komersial.
9.3 Laporan pengujian harus berisi data berikut:
•informasi yang diperlukan untuk identifikasi sampel (jenis sampel, asal sampel, peruntukannya);
• referensi terhadap metode ini;

•tanggal dan jenis prosedur pengambilan sampel (jika diketahui);
•tanggal penerimaan;
•tanggal ujian;
• hasil tes dan satuan yang menyatakannya;
• tingkat pemulihan sampel kontrol kerja (8);
•pernyataan apakah hasilnya sudah dikoreksi untuk pemulihan; Dan

•poin-poin tertentu yang diamati selama ujian; operasi yang tidak ditentukan dalam metode atau
dianggap opsional, yang mungkin mempengaruhi hasil.
10. Referensi
AOAC 2005.08. 2008. Aflatoksin pada jagung, kacang tanah mentah dan selai kacang menggunakan
kromatografi cair dengan derivatisasi fotokimia pasca kolom, Bagian nomor 49.2.18A. Gaith-
ersburg, MD, AS
AOCS. 2005. Analisis aflatoksin menggunakan derivatisasi fotokimia pasca kolom HPLC, menemukan
latihan yang disarankan Aa 11-05. Kampanye, AS
EN 17375. 2006. Bahan pakan ternak – Penentuan aflatoksin B1, Organisasi Internasional
untuk Standardisasi. Jenewa, Swiss.
FumonisinS – Metode HPLC
1. Prinsip
Fumonisin B1 dan B2 (FB1, FB2) diekstraksi dari sampel pakan dengan meta-nol berair. Ekstrak
dimurnikan menggunakan kolom immunoaffinity. Analit dipisahkan dengan kromatografi cair kinerja
tinggi fase terbalik (RP-HPLC) dan dideteksi melalui fluoresensinya setelah derivatisasi kolom sebelum
atau sesudah dengan o-phtalaldehyde (OPA).
2. Ruang Lingkup
Prosedur ini paling tepat untuk analisis fumonisin pada jagung utuh dan pakan ternak majemuk. Batas
kuantifikasi harus minimal 3 mg/kg untuk jumlah fumonisin, namun tergantung pada peralatannya,
dimungkinkan untuk mencapai 0,5 mg/kg dan batas kuantifikasi yang lebih rendah untuk setiap
fumonisin.
3. Tanggung jawab
4. Peralatan
4.1 Pabrik.
4.2 Pengaduk Jatuh.
4.3 Pencampur pusaran.
4.4 Pengocok laboratorium.

4,5 labu 250 ml dengan tutup ulir.
4.6 Silinder ukur kapasitas 5, 50, 1000 dan 2000 ml.
4.7 Pipet ukur (Kelas A) dengan kapasitas 2, 10 dan 50 ml.
4.9 Filter serat mikro kaca, bebas pengikat dengan ukuran pori kira- kira 2 µm.
4.10 Corong penyaring dengan ukuran yang sesuai.
4.11 Botol sampel otomatis dengan ukuran yang sesuai dengan penutup.
4.12 Reservoir dengan ukuran yang sesuai untuk kolom immunoaffinity, dengan adaptor untuk menghubungkan
ke bagian atas kolom immunoaffinity.
4.13 Labu ukur (Kelas A) kapasitas 2, 5, 10 dan 20.
4.14 Alat suntik kaca kedap gas dan/atau pipet perpindahan positif yang mampu mengeluarkan volume secara
tepat: 5, 50, 125, 160 dan 500 ÿl dan 1 ml.
4.15 Tiang penyangga dengan ukuran yang sesuai untuk kolom imunoafinitas.
4.16 Instrumentasi HPLC, terdiri dari:
4.16.1 Sistem penyaluran pelarut mampu menghasilkan gradien biner dengan presisi yang cukup pada
tekanan yang diperlukan, misalnya pompa Agilent Seri 1200.
4.16.2 Pengambil sampel otomatis yang mampu menginjeksikan larutan injeksi dalam volume yang
cukup dengan kemampuan pengulangan yang memadai dan, untuk derivatisasi pra-kolom
mampu mencampurkan reagen dan larutan sampel sebelum injeksi, misalnya Agilent Seri 1200 ALS.
4.16.3 Kolom kromatografi: Setiap kolom yang menghasilkan puncak simetris (faktor asimetri puncak 0,9
< As < 1,4 pada 10% tinggi penuh), retensi yang cukup (k > 2), dan resolusi (Rs > 1) untuk FB1
dan FB2, misalnya Agilent Zorbax SB-C18 4,6 x 150 mm, 3,5 ÿm.
4.16.4 Detektor fluoresensi: mampu memberikan panjang gelombang eksitasi dan emisi yang diperlukan
dan dilengkapi dengan sel aliran dengan ukuran yang sesuai, misalnya
Agilent Seri 1200 FLD atau Waters 474.
4.16.5 Sistem derivatisasi pasca-kolom (tidak diperlukan jika digunakan derivatisasi pra-kolom): baik unit
komersial atau rakitan sendiri; jika dirakit sendiri barang-barang berikut diperlukan:
•Pompa reagen yang mampu mengalirkan aliran bebas pulsasi secara konstan
reagen derivatisasi terhadap tekanan yang diperlukan;
•PIPA PEEK dengan diameter luar yang dibutuhkan oleh sistem HPLC yang digunakan dan
diameter dalam yang bervariasi, misalnya 1/16” OD (diameter luar), 0,04”, 0,02” ID, 0,01” ID
atau 0,005” ID; Dan
•Mixing Tee: PEEK volume internal kecil (polyetheretherketon), misalnya VICI

JR-9000-0665.
4.17 Filter nilon 0,45 ÿm.
5. Reagen
Semua larutan dibuat dengan pelarut tingkat HPLC dan bahan tingkat reagen kecuali dinyatakan lain. Hanya
air sulingan ganda atau air dengan kadar minimal 2 sebagaimana didefinisikan dalam EN ISO 3696 yang boleh
digunakan.
5.1 Air sulingan ganda atau air deionisasi.
5.2 Metanol.
5.3 Asetonitril.
5.4 Kalium klorida (KCl).

5.5 Natrium klorida (NaCl).
5.6 Dinatrium hidrogenfosfat dodekahidrat (Na2HPO4.12 H2O).
5.7 Dinatrium tetraborat dekahidrat (Na2B4O7.10 H2O).
5.8 Natrium karbonat (Na2CO3).
5.9 Asam borat (H3BO3).
5.10 Kalium sulfat (K2SO4).
5.11 N-Asetil-L-Sistein (NAC).
5.12 o-Phtalaldehida (OPA).
5.13 ÿ-Mercaptoetanol (BME).
5.14 Asam Format (98–100%).
5.15 Konsentrat garam buffer fosfat (PBS).
Larutkan bahan berikut dalam 1800 ml air suling ganda (5.1):
4 gram KCl (5.4)
160 gram NaCl (5,5)
72 gram Na2HPO4.12 H2O (5.6)
Sesuaikan hingga pH 7,4 dengan HCl 10 M dan tambahkan volume hingga 2000 ml dengan air suling
ganda.
5.16 PBS Siap pakai: Encerkan 100 ml konsentrat PBS (5.15) ke dalam 1000 ml dengan air suling ganda (5.1)
atau tablet PBS misalnya Sigma P4417 (satu tablet dilarutkan dalam 200 ml air suling ganda (5.1)
menghasilkan 0,01 M buffer fosfat , 0,0027 M kalium klorida dan 0,137 M natrium klorida, pH 7,4 pada
25 °C).
5.17 Pengencer: Campurkan metanol (5.2) dan air suling ganda (5.1) dalam perbandingan 1:1 (v/v).
5.18 Pelarut ekstraksi:
Campur metanol (5.2) dan PBS (5.16) dengan perbandingan 1:1 (v/v).
5.19 Buffer reaksi untuk derivatisasi pasca dan pra-kolom

5.19.1 Derivatisasi pasca kolom: OPA 0,006 M, NAC 0,006 M, natrium 0,384 M
karbonat, asam borat 0,216 M dan kalium sulfat 0,108 M
•Larutkan 40,7 g natrium karbonat (5.8), 13,4 g asam borat (5.9) dan 18.8 g kalium sulfat (5.10)
dalam 1 liter air sulingan ganda (5.1);
•Aduk selama 10 menit;
•Tambahkan 800 mg OPA (5.12) dalam 1 liter larutan di atas;
•Tambahkan 1 g NAC (5.11) dalam 1 liter larutan di atas;
•Aduk selama 10 menit;

•Tempatkan dalam penangas air ultrasonik selama 15 menit.
•Aduk selama 10 menit; Dan

•Tempatkan dalam penangas air ultrasonik selama 15 menit. Saring larutan melalui a
Filter nilon 0,45 ÿm (4.17).
CATATAN:
•Pembubaran OPA secara tepat sangatlah penting

•Buffer reaksi tidak boleh diubah dalam rangkaian proses HPLC
•Persiapkan segar untuk setiap rangkaian proses HPLC
5.19.2 Derivatisasi pra-kolom: 0,1 M OPA, 0,24 M BME, 0,08 M dinatrium tet-raborat, metanol 16,7%
•Larutkan 40 mg OPA (5.12) dalam 1 ml metanol (5.2);

•Aduk hingga benar-benar larut;
•Tambahkan 5 ml larutan dinatrium tetraborat dekahidrat 0,1 M (3.8
gram/100ml; 5.7);
•Aduk rata;
•Tambahkan 50 ÿl BME (5.13); Dan
•Aduk rata.
Sebagai alternatif, reagen phthaldialdehyde (Sigma-Aldrich P0532) dapat digunakan
5.20 Larutan stok FB1 dan FB2 : Larutan bersertifikat Fumonisin FB1 dan FB2 kira -kira 50 ÿg/
ml masing-masing dalam pelarut yang sesuai. Ambil konsentrasi yang tepat dari sertifikat.
5.21 Larutan stok encer FB1 dan FB2 untuk kalibrasi: Tambahkan 160 ÿl larutan stok FB1 dan FB2 (5.20) ke
dalam labu takar 2 ml (4.13). Buat hingga 2 ml dengan pengencer (5.17). Ini akan menghasilkan 2,0 ml
pengenceran 12,5 kali lipat dari larutan 5,20.
CATATAN: Larutan di atas (5.20, 5.21) juga dapat dibuat secara gravimetri dengan menimbang secara
akurat bahan kering dan pelarut yang digunakan untuk melarutkannya.
5.22 Larutan kalibrasi: Dari larutan stok encer (5.21) siapkan 5 tingkat larutan kalibrasi dengan menambahkan
volume larutan stok encer yang tercantum pada Tabel 4 ke dalam labu takar (4.13) sesuai volume yang
ditunjukkan dan sesuaikan hingga tanda tera. dengan pengencer (5.17).
Hitung konsentrasi FB1 dan FB2 untuk tingkat kalibrasi yang berbeda dengan membagi konsentrasi
larutan stok yang disertifikasi atau dihitung (5.20) dengan pengenceran akhir yang dinyatakan dalam Tabel
4. Jika Anda mengamati saturasi sinyal detektor pada tingkat kalibrasi tertinggi , encerkan 250 ÿl larutan
stok encer (5.21) ke dalam 2 ml, untuk pengenceran akhir 100.
Tingkat kalibrasi ini merupakan rekomendasi dan dapat disesuaikan dengan kebutuhan individu.
5.23 Kolom imunoafinitas. Kolom immunoaffinity harus berisi fase stasioner dengan antibodi monoklonal
amobil yang spesifik untuk, setidaknya, FB1 dan FB2.
Agar cocok untuk metode ini, mereka harus memenuhi persyaratan yang dinyatakan di bawah ini:
Alikuot ekstrak bahan pakan ternak yang mewakili senyawa bebas fumonisin dibubuhi FB1 dan FB2 pada
920 (tinggi) atau 110 (rendah) ng/ml untuk jumlah keduanya. Kemudian encerkan 5 ml ekstrak berduri ini
hingga volume total 50 ml (lihat 6.2).
Tabel 4
Konsentrasi standar fumonisin
Kalibran No. Larutan stok Labu takar (4.13) Pengenceran akhir dari
encer (5.21) [µl] [ml] larutan stok (5.20)
1 50 20.0 5000
2 125 10.0 1000
3 125 5.0 500
4 500 2.0 50
5 1000 2.0 25
Mengikuti prosedur yang dijelaskan dalam 6.3 dan 6.4, hal ini akan menghasilkan konsentrasi
yang diharapkan dalam larutan injeksi sebesar 460 atau 55 ng/ml untuk jumlah FB1 dan FB2.
Setelah mengukur larutan ini, konsentrasi FB1 dan FB2 yang diamati dapat dihitung menggunakan
persamaan 1 dan 2 (diberikan pada bagian 7). Membagi jumlah konsentrasi FB1 dan FB2 yang
diamati dengan konsentrasi yang diharapkan akan menghasilkan hasil dari kolom imunoafinitas.
Hasil ini harus 99 ± 18% (U, k = 2) pada tingkat tinggi dan 118 ± 18% (U, k = 2) pada tingkat
rendah.
Uji kolom di atas harus dilakukan untuk setiap tingkat pada setidaknya tiga kolom yang dipilih
secara acak dari setiap kumpulan kolom imunoafinitas baru yang akan digunakan. Jika bets yang
diuji tidak memenuhi persyaratan di atas, maka bets baru harus diperoleh atau kondisi yang
dijelaskan dalam 6.3 perlu disesuaikan sehingga persyaratan terpenuhi (instruksi pengguna yang
disertakan dengan kolom merupakan titik awal yang baik).
Setiap perubahan dalam prosedur pembersihan memerlukan validasi ulang pembersihan dan
semua langkah selanjutnya (kromatografi).
6. Prosedur
6.1 Ekstraksi FB1 dan FB2
6.1.1 Timbang 20 g sampel uji ke dalam wadah yang cukup besar dan bertutup, misalnya labu
250 ml (5.5).
6.1.2 Tambahkan 200 ml pelarut ekstraksi (4.18), tutup labu dan kocok kuat-kuat dengan
tangan, agar bahan tersebar secara merata.
6.1.3 Masukkan ke dalam shaker (5.4) selama 120 menit. Pilih kecepatan agar bahan tercampur
dengan baik tanpa terkumpul di bagian atas labu.
6.1.4 Biarkan sampel yang diekstraksi mengendap setelah dikocok.
6.1.5 Ambil 5 ml ekstrak (6.1.4) dan encerkan dengan PBS (4.16) hingga volume total 50 ml dan
aduk.
6.1.6 Siapkan corong penyaring (5.10) dengan penyaring mikrofiber kaca (5.9).
6.1.7 Saring supernatan encer dari sampel yang diekstraksi ke dalam labu baru (5.5).
6.1.8 Ekstrak yang telah disaring dan diencerkan dapat disimpan pada suhu 4–10 ºC semalaman.
6.1.9 Jika bahan sangat terkontaminasi di atas 10.000 ÿg/kg (lihat 8) ambil 10 ml ekstrak encer
yang telah disaring dan diencerkan lagi dengan PBS (4.16) hingga volume total 50 ml
dan aduk.
6.2 Membersihkan
6.2.1 Ambil satu kolom immunoaffinity (IAC, 4.23) per ekstrak.
6.2.2 Pasang reservoir (5.12), jangan mengosongkan larutan penyimpanan dari kolom.
6.2.3 Ke dalam reservoir tambahkan 25 ml ekstrak encer yang telah disaring (6.1).
6.2.4 Buka outlet kolom.
6.2.5 Biarkan semuanya melewati kolom secara perlahan. Laju aliran harus satu hingga dua tetes
per detik.
6.2.6 Setelah ekstrak seluruhnya melewati kolom, cucilah imuno-
kolom noafinitas dengan 10 ml PBS (4.16).
6.2.7 Alirkan udara melalui kolom immunoaffinity (misalnya menggunakan kolom besar yang dipasang dengan benar
jarum suntik) untuk mengeluarkan kelebihan PBS.
6.2.8 Tempatkan labu takar 5 ml (5.13) atau gelas ukur 5 ml (5.6) di bawah kolom imunoafinitas dan
tambahkan 5 x 500 ÿl metanol (4.2) ke kolom imunoafinitas (tambahkan alikuot berikutnya
hanya setelah yang sebelumnya telah sepenuhnya melewati kolom).
6.2.9 Kumpulkan semua eluen dalam labu takar (5.13) atau gelas ukur (5.6).
6.2.10 Tambahkan 2 ml air sulingan ganda (4.1) ke kolom imunoafinitas setelah semua metanol
(4.2) melewati kolom.
6.2.11 Lanjutkan mengumpulkan eluen dalam labu ukur atau silinder ukur yang sama
dalam.
6.2.12 Lewatkan udara dengan hati-hati melalui kolom untuk mengumpulkan sebagian besar bahan yang digunakan
air (4.1).
6.3 Solusi uji
6.3.1 Untuk derivatisasi prakolom: Tambahkan air suling ganda ke dalam labu takar atau gelas ukur
hingga tanda 5 ml (4.1).
6.3.2 Untuk derivatisasi pasca kolom: tambahkan 5 ÿl asam format (4.14) dan isi labu takar atau
gelas ukur hingga tanda 5 ml dengan air ganda (4.1).
6.3.3 Campurkan isi labu takar atau gelas ukur dan pindahkan alikuot ke vial autosampler (5.11).
6.3.4 Larutan uji ini dapat disimpan pada suhu 4–10 ºC hingga 2 hari.
6.4 Prosedur penusukan
Untuk menentukan lonjakan pemulihan bahan pakan representatif bebas fumonisin dengan FB1
dan larutan stok FB2 (4.20) atau pengencerannya. Tingkat lonjakan harus berada dalam kisaran
kalibrasi (sebaiknya kisaran menengah). Konsentrasi larutan yang digunakan harus sedemikian
sehingga tidak lebih dari 2 ml yang ditambahkan. Biarkan sampel yang dibubuhi selama 30 menit
untuk memastikan penguapan pelarut.
6.5 Kondisi pengoperasian HPLC
Kondisi pengoperasian yang dijelaskan di bawah ini berfungsi baik dengan peralatan yang tercantum
dalam 4.16. Mungkin Anda harus melakukan penyesuaian jika Anda menggunakan peralatan yang
berbeda untuk mendapatkan resolusi dan retensi yang sesuai (4.16.3). Penyesuaian ini dapat berupa
program injektor, volume injeksi, persentase pengubah organik dalam mode isokratik atau gradien,
laju aliran, dan/atau suhu kolom.
Tabel 5
Pengaturan gradien (HPLC)
menggunakan derivatisasi pra-kolom
Waktu [menit] B [%]
0 69.5
14 79
14.01 100
17.01 100
17.02 69.5
20 69.5
6.5.1 Derivatisasi pra-kolom
Dengan menggunakan peralatan yang dijelaskan pada 4.16, kondisi berikut telah terbukti
memberikan hasil yang memuaskan.
•Program injektor sampler otomatis:
•Aspire 20 ÿl buffer reaksi pra-kolom (5.19.2);
•Larutan uji Aspire 40 ÿl (6.4);
•Aspire 20 ÿl buffer reaksi pra-kolom (5.19.2);
•Campur 20 kali; Dan
•Menyuntikkan semua.
Hal di atas dapat dilakukan secara manual (menyesuaikan volume total sambil
mempertahankan volume relatif jika perlu) jika dipastikan larutan disuntikkan dalam waktu
3 menit setelah pencampuran. Penting juga bahwa jangka waktu antara pencampuran dan
injeksi sama untuk semua larutan pengujian dan kalibrasi.
•Volume injeksi: 80 ÿl
•Suhu kolom: 40 ºC
•Aliran : 1,0 ml/menit
•Detektor fluoresensi: Eksitasi ÿ: 335 nm; Emisi ÿ: 440 nm (periksa menggunakan spektrum
panjang gelombang untuk detektor fluoresensi yang digunakan).
•Fase gerak: A: asam format 0,5% (5.14) dalam air sulingan ganda (5.1)
B: 0,5% asam format (5.14) dalam metanol (5.2)
•Pengaturan gradien (volume tinggal HPLC 0,8 ml), lihat Tabel 5:
Instrumen dengan volume diam yang berbeda memerlukan penyesuaian gradien untuk
mencapai pemisahan yang serupa. Tujuannya adalah untuk mencapai faktor kapasitas (k)
pada elusi FB1 > 3.
6.5.2 Derivatisasi pasca-kolom
Petunjuk untuk sistem rakitan sendiri:

Jalur aliran ke kolom kromatografi (4.16.3) tidak berubah dari operasi normal. Saluran
keluar kolom dihubungkan ke salah satu lubang luar dari Tee pencampur (4.16.5.3). Pipa
dari kolom ke Tee pencampur harus dibuat sependek mungkin.
Tabel 6
Pengaturan gradien
menggunakan derivatisasi pasca kolom
Waktu [menit] B [%]
0 34
13 34
13.01 95
16 95
16.01 34
19 34
Port luar lainnya dari Tee pencampur dihubungkan ke outlet pompa (4.16.5.1) yang
mengalirkan aliran reagen. Sambungan ini harus dibuat dari pipa ID PEEK 0,005” yang
panjang (4.16.5.2) sehingga tercipta tekanan balik yang cukup agar pompa reagen dapat
bekerja dengan baik. Yang paling penting adalah aliran reagen dialirkan bebas pulsasi.
Denyut kecil dapat diminimalkan dengan memasukkan volume redaman yang besar antara
pompa dan tekanan balik yang menciptakan pipa PEEK. Tabung ID PEEK yang besar
dapat memenuhi tujuan ini.
Port tengah yang tersisa dari Tee pencampur dihubungkan melalui loop reagen ke detektor
fluoresensi.
Panjang dan volume loop reagen ini merupakan keseimbangan antara mempertahankan
resolusi kolom kromatografi (pendek) dan mencapai reaksi sempurna (panjang). Diameter
bagian dalam kurang penting. Jika dipilih terlalu kecil, tekanan punggung yang berlebihan
akan tercipta. Hasil yang memuaskan dicapai dengan pipa ID PEEK 0,02” sepanjang 2,5 m.
Dengan menggunakan peralatan yang dijelaskan pada 4.16, kondisi berikut telah terbukti
memberikan hasil yang memuaskan.
•Volume injeksi: 50 ÿl
•Suhu kolom: 45 °C
•Aliran: 1,2 ml/menit (fase gerak); 0,45 ml/menit (reagen pasca kolom;
5.19.1).
•Detektor fluoresensi: Eksitasi ÿ: 335 nm; Emisi ÿ: 440 nm (periksa menggunakan spektrum
panjang gelombang untuk detektor fluoresensi yang digunakan).
•Fase gerak: A: asam format 0,1% (5,14) dalam air sulingan ganda (5,1)
B: 0,1% asam format (5.14) dalam asetonitril (5.3)
Pemisahan ini isokratik tetapi untuk menghindari akumulasi komponen matriks, langkah 95% B
disertakan. Persentase pengubah organik harus disesuaikan sedemikian rupa sehingga faktor
kapasitas (k) untuk FB1 > 2.
6.6 Penentuan fumonisin dalam larutan uji
Suntikkan sebagian larutan uji (6.4) ke dalam HPLC dengan menggunakan kondisi yang sama
seperti yang digunakan untuk larutan kalibrasi (5.22).
6.7 Komposisi Batch (Urutan).

Selalu memulai serangkaian pengukuran dengan reagen kosong untuk memeriksa
sistem. Selanjutnya menyuntikkan larutan kalibrasi. Sebelum penyuntikan larutan uji
pertama, blanko reagen harus diinjeksikan untuk membuktikan bahwa tidak ada sisa analit.
Solusi pengujian harus dijalankan dalam rangkap dua dan pengujian ulang solusi
kalibrasi harus diselingi secara berkala. Frekuensi pengulangan kalibrasi ini bergantung
pada stabilitas sistem kromatografi Anda.
6.8 Kalibrasi
Plot sinyal (luas atau ketinggian puncak) dari semua larutan kalibrasi terukur terhadap
konsentrasi yang sesuai untuk FB1 dan, secara terpisah, untuk FB2. Jangan gunakan
sarana suntikan ganda. Dengan regresi linier, perkirakan kemiringan dan intersep
masing-masing dari dua fungsi kalibrasi (FB1 dan FB2). Periksa signifikansi intersep
dan linearitasnya (misalnya, gunakan plot residu vs. nilai yang sesuai).
6.9 Identifikasi puncak
Identifikasi puncak Fumonisin B1 dan B2 dalam larutan uji dengan membandingkan
waktu retensi dengan waktu retensi larutan kalibrasi terdekat dalam batch. Sinyal (area
puncak atau tinggi) FB1 dan FB2 dalam larutan uji harus berada dalam rentang kalibrasi.
Jika sinyal FB1 dan/atau FB2 dalam larutan uji melebihi sinyal larutan kalibrasi tertinggi,
larutan uji harus diencerkan dengan pengencer (5.17) agar berada dalam rentang
kalibrasi, dan dianalisis ulang. Faktor pengenceran harus dimasukkan ke dalam semua
perhitungan selanjutnya.
7. Perhitungan
Dengan menggunakan perkiraan kemiringan dan perpotongan (jika signifikan, gunakan nol)
dari regresi linier (6.9) hitung konsentrasi FB1 (cFB1) dan FB2 (cFB2) dalam larutan uji (6.4)
dari sinyal rata-rata injeksi duplikat sebagai berikut :
sinyalFB1 – ke dalam erceptFB1

cFB1 = ______ [ng/ ml] kemiringanFB1 (1)
sinyalFB2 – ke dalam erceptFB2

cFB2 = ___________________ [ng/ ml] (2)
kemiringanFB2
Jika larutan uji diencerkan karena sinyal di atas rentang kalibrasi (6.10) kalikan cFB1 dan
cFB2 dengan faktor pengenceran.
Untuk menghitung fraksi massa (wSMP) analit pada bahan asli gunakan persamaan
berikut:
c • V5 • V3 • V1
wSMP = ________________ [ng/ g atau ÿg/ kg] (3)
V4 • V2 • mSMP
Di mana,
C = konsentrasi FB1 (1) atau FB2 (2) yang dihitung, kemungkinan dikoreksi untuk
pengenceran cFB1 dan cFB2,
mSMP = berat bahan uji yang digunakan untuk ekstraksi (20 g),
V1 = volume total pelarut ekstraksi (200 ml),
V2 = volume alikuot ekstrak mentah hasil saringan yang digunakan untuk pengenceran (5 ml),
V3 = total volume ekstrak mentah disaring yang diencerkan (50 ml),
V4 = volume alikuot ekstrak mentah yang disaring dan diencerkan yang digunakan
IAC (25 ml), dan
V5 = volume total larutan uji (5 ml).
Jika berat bahan uji dan volume yang dijelaskan di sini dijaga sama, persamaan (3) di atas dapat
disederhanakan menjadi:
wsmp = c • 20 [ÿg/ kg] (4)
Jika hasil persamaan 4 lebih besar dari 10.000 ÿg/kg atau jika diketahui sebelumnya bahwa tingkat kontaminasi
mungkin melebihi nilai tersebut, bersihkan masing-masing ekstrak tersaring yang diencerkan (6.1)
menggunakan pengenceran tambahan (faktor pengenceran tambahan 50/10 = 5). Persamaan sederhananya
akan menjadi:
wsmp = c • 20 • 5 = c • 100 [ÿg/ kg] (5)
Lakukan perhitungan di atas untuk FB1 dan FB2. Jumlah keduanya kemudian akan dihitung sebagai berikut:
wsmp = wsmp, FB1+ wsmp, FB2 [ÿg/ kg] (6)
8. Kontrol kualitas
8.1 Akurasi
Pemulihan sampel berduri (6.4) harus mencapai 60–120%, jika tidak, rangkaian tersebut harus diulang.
Pengendalian kerja ini harus dijalankan pada setiap set dan dibandingkan dengan batasan pada peta
kendali yang telah ditetapkan.
8.2 Presisi
Suntikkan standar kalibrasi rentang menengah sebagai pemeriksaan kira-kira setiap 5 sampel untuk
mengevaluasi perubahan area puncak. Area tersebut tidak boleh berubah lebih dari 10% dari area
puncak standar pada kurva kalibrasi. Lakukan ini untuk semua fumonisin, FB1 dan FB2.
9. Keterangan
9.1 Dengan menerapkan metode ini, fumonisin B3 (FB3) juga dapat ditentukan .
9.2 Mengenai kapasitas pemuatan kolom imunoafinitas mengacu pada pabrikan
spesifikasi.
9.3 Sebelum menerapkan prosedur HPLC, sampel dapat disaring untuk fumonisin dengan alat
uji yang berbeda. Misalnya beberapa tes ELISA tersedia secara komersial (lihat daftar link
dalam metode aflatoksin). Lihat deskripsi produk dan prosedur pabrikan.

•informasi yang diperlukan untuk identifikasi sampel (jenis sampel, asal
sampel, penunjukan);
•tanggal ujian;
•pernyataan apakah hasilnya sudah dikoreksi untuk pemulihan;

•poin-poin tertentu yang diamati selama ujian; operasi yang tidak ditentukan dalam metode
atau dianggap opsional, yang mungkin mempengaruhi hasil.
10. Referensi
EN 16006. 2011. Bahan pakan ternak – Penentuan jumlah Fumonisin B1 dan B2 dalam pakan
ternak majemuk dengan pembersihan imunoafinitas dan RP-HPLC dengan deteksi fluoresensi
setelah derivatisasi sebelum atau sesudah kolom. Jenewa, Swiss.
Peraturan Komisi (EC). 2006. No 401/2006 tanggal 23 Februari 2006 yang mengatur tata cara
pengambilan sampel dan analisis untuk pengendalian resmi kadar mikotoksin dalam bahan pangan.
Jurnal Resmi Uni Eropa, 2006. 49 (L70), hlm.12–34.
AOAC. 2000. Racun alami. Fumonisin B1, B2 dan B3 pada jagung. Metode Analisis Resmi.
Metode 995.15. Asosiasi Ahli Kimia Analitik Resmi, Inc., Gaithersburg, MD, AS.
Zearalenon (ZON) – Metode HPLC
1. Prinsip
Zearalenone diekstraksi dari sampel menggunakan metanol berair. Ekstrak diencerkan dengan
garam buffer fosfat dan zearalenon diisolasi pada kolom imunoafinitas yang mengandung
antibodi spesifik untuk zearalenon. Analit ditentukan secara kuantitatif dengan kromatografi cair
kinerja tinggi (HPLC) dengan deteksi fluoresensi (FLD).
2. Ruang Lingkup
Standar ini berlaku untuk penentuan zearalenon dalam pakan ternak pada konsentrasi 30
hingga 3000 ÿg/kg.
3. Tanggung jawab
Analis Laboratorium harus melakukan analisis sesuai metode ini. Analis Laboratorium
bertanggung jawab untuk memastikan bahwa semua ketentuan yang ditetapkan dalam metode
ini dipenuhi dan dipatuhi dengan ketat. Setiap penyimpangan dari metode yang ditentukan harus
dicatat dan penyelia diberitahu.
4. Peralatan
Peralatan laboratorium biasa dan khususnya berikut ini.
4.2 Pengocok horizontal atau vertikal.
4.3 Homogeniser/blender berkecepatan tinggi.

4.4 Mixer pusaran, atau sejenisnya.
4,5 pengukur pH.
4.6 Pabrik (berbagai layar).
4.7 Pengaduk jatuh.
4.8 Botol kaca, berbagai ukuran.
4.9 Pipet ukur kapasitas 5 ml dan 50 ml.
4.10 Tabung ukur dengan dan tanpa sumbat berkapasitas 5 ml dan 250 ml.
4.11 Labu ukur kapasitas 3 ml, 5 ml dan 10 ml.
4.12 Gelas kimia berkapasitas 250 ml.
4.13 Labu berbentuk kerucut atau bertutup ulir dengan kapasitas 100 ml dan 250 ml sampai dengan 500 ml.
4.14 Corong kaca dengan ukuran yang sesuai.

4.15 Filter terlipat, selulosa ( ukuran pori kira-kira 30 ÿm) untuk corong kaca (4.14).
4.16 Disk filter, serat mikro kaca bebas pengikat (ukuran pori < 2 ÿm) dengan ukuran yang sesuai untuk
sistem filtrasi vakum pelarut (4.22).
4.17 Pipettor atau spuit kaca kedap gas ukuran 100 ÿl dan 500 ÿl dan 1 ml.
4.18 Vacuum manifold atau Sistem Vakum SPE Otomatis, yang mampu menampung
kolom imunoafinitas.
4.19 Reservoir, dengan volume yang sesuai dengan lampiran yang sesuai dengan kolom imunoafinitas.
4.20 Jarum suntik plastik, 5 ml.
4.21 Pompa vakum yang mampu menghasilkan vakum yang cukup untuk penyaringan vakum pelarut
sistem tion (4.22).
4.22 Sistem filtrasi vakum pelarut dilengkapi dengan filter serat mikro kaca (4.16).
4.23 Unit filter jarum suntik HPLC, poliamida (nilon) dengan ukuran pori 0,45 ÿm.
4.24 Mandi ultrasonik.
4.25 Peralatan HPLC, terdiri dari:

4.25.1 Sistem injeksi, manual atau autosampler, dengan loop yang cocok untuk 100 hingga 300 ÿl
suntikan.
4.25.2 Pompa, isokratik, bebas pulsasi, mampu mempertahankan laju aliran volume sebesar
0,5 hingga 1,5 ml/menit.
4.25.3 Kolom HPLC fase terbalik analitik, umumnya semua kolom RP sesuai sehingga memungkinkan
pemisahan zearalenon yang cukup dari komponen pengganggu lainnya, misalnya
Phenomenex Octadecylsilane (ODS)3-Prodigy (150 mm x 4,6 mm ID.), Ukuran partikel 5 ÿm,
ukuran pori 250 Å, atau Spherisorb Octadecylsi-lane (ODS)2-Excel (ID 250 mm x 4,6 mm),
ukuran partikel 5 ÿm, ukuran pori 250 Å terbukti cocok.
4.25.4 Prakolom (opsional), sesuai dengan kolom analitik yang digunakan.

4.25.5 Detektor fluoresensi, dilengkapi dengan sel aliran dan cocok untuk pengukuran
dengan panjang gelombang eksitasi 274 nm dan emisi 446 nm.
4.25.6 Sistem data, integrator atau stasiun kerja PC.
4.26 Spektrofotometer UV untuk memeriksa konsentrasi larutan stok (5.15).
5. Reagen
Selama analisis, kecuali dinyatakan lain, gunakan hanya reagen dengan kadar analitis yang diakui
dan hanya air sulingan ganda atau air kadar 1 sebagaimana didefinisikan dalam EN ISO 3696 (1995).
Pelarut harus berkelas HPLC.
5.1 Asetonitril.
5.2 Metanol, tingkat teknis.
5.3 Metanol, tingkat HPLC.
5.4 Natrium klorida.
5.5 Dinatrium hidrogen ortofosfat.
5.6 Kalium dihidrogen fosfat.
5.7 Kalium klorida.
5.8 Asam klorida (32%).
5.9 Larutan buffer fosfat (PBS).
Larutkan 8 g natrium klorida (5,4), 1,2 g dinatrium hidrogen ortofosfat (5,5), 0,2 g kalium
dihidrogen fosfat (5,6) dan 0,2 g kalium klorida (5,7) dalam 1 liter air suling ganda. Sesuaikan
pH menjadi 7,4 dengan asam klorida (5,8).
CATATAN: Tablet garam berdapar fosfat yang tersedia secara komersial dengan sifat setara dapat
digunakan.
5.10 Pelarut ekstraksi, metanol: air suling ganda (75:25, v/v)
Campurkan 75 bagian volume metanol (5.2) dengan 25 bagian volume sulingan ganda
air.
5.11 Pelarut pencuci, metanol:PBS (15:85, v/v)
Campurkan 15 bagian volume metanol (5.3) dengan 85 bagian volume PBS (5.9).
5.12 Pelarut injeksi untuk analisis HPLC, metanol: air suling ganda (50:50, v/v)
Campurkan 50 bagian volume metanol (5.3) dengan 50 bagian volume air suling ganda.
5.13 Fase gerak HPLC, metanol: air suling ganda (75:25, v/v)
Campurkan 75 bagian volume metanol (5.3) dan 25 bagian volume air suling ganda.
Aduk rata dan hilangkan gas.
5.14 Zearalenone, kemurnian minimal 98%.

5.15 Larutan stok Zearalenone (ZON), 10 ÿg/ml
Tambahkan 4,0 ml asetonitril (5.1) ke 5 mg zearalenon (5.14) untuk larutan standar 1,25 mg/
ml. Encerkan 800 ÿl larutan standar 1,25 mg/ml menjadi 5,0 ml dengan asetonitril (5.1) untuk
larutan standar 200 ÿg/ml. Encerkan 250 ÿl larutan standar 200 ÿg/ml ke dalam 5,0 ml
asetonitril (5.1) untuk membuat larutan stok 10 ÿg/
ml.
Untuk menentukan konsentrasi yang tepat, catat kurva serapan larutan stok 10 ÿg/ml ini
dengan menggunakan spektrofotometer (4.26) dalam rentang 200 nm hingga 300 nm dalam
sel kuarsa berukuran 1 cm dengan asetonitril (5.1) sebagai acuan. Tentukan serapan
maksimum kedua pada l = 274 nm. Hitung konsentrasi massa zearalenone,
ÿ ZON, dalam mikrogram per ml menggunakan persamaan berikut:
Amaks • M • 100
ÿZON = ____________
ÿ•d
Di mana,
Amax = serapan yang ditentukan pada serapan maksimum kedua

kurva (274 nm);
M = massa molar zearalenon (M = 318,4 g/mol);
ÿ = koefisien serapan molar zearalenon (1262 m2/mol);
d = panjang jalur optik sel kuarsa dalam sentimeter (1 cm)
Simpan larutan standar pada suhu di bawah –18 °C.
5.16 solusi lonjakan ZON

Larutan stok yang telah dikalibrasi (lihat 5.15). Larutan ini stabil selama 2 bulan jika disimpan pada
suhu di bawah –18 °C.
5.17 solusi kerja ZON

Pindahkan sebagian larutan stok yang telah dikalibrasi (5.15), setara dengan 10 ÿg ZON, ke dalam
labu takar (4.11). Tambahkan asetonitril (5.1) untuk membuat volume total menjadi 5 ml. Ini adalah
solusi kerja 2 ÿg/ml. Larutan ini stabil selama 2 bulan jika disimpan pada suhu di bawah –18 °C.
5.18 Solusi Kalibrasi ZON untuk HPLC
Siapkan 5 larutan kalibrasi HPLC dalam labu ukur 10 ml terpisah (4.11) dengan memipet volume
yang ditunjukkan pada Tabel 7. Buat setiap standar hingga 10 ml dengan pelarut injeksi HPLC HPLC
(5.12).
5.19 kolom pembersihan imunoafinitas ZON
Kolom imunoafinitas berisi antibodi yang ditingkatkan terhadap zearalenon. Kolom tersebut harus
mempunyai kapasitas tidak kurang dari 1500 ng zearalenon dan perolehan kembali tidak kurang dari
70% ketika 75 ng zearalenon diaplikasikan dalam 10 ml pelarut pencuci (5.11).
6. Prosedur
6.1 Persiapan Sampel
Penting bagi laboratorium untuk menerima sampel yang benar-benar representatif dan tidak rusak
atau berubah selama pengangkutan atau penyimpanan. Sampel harus ditumbuk halus dan dicampur
secara menyeluruh menggunakan gilingan (4.6) dan mesin pengaduk (4.7) atau proses lain yang
telah terbukti menghasilkan homogenisasi sempurna sebelum bagian uji dikeluarkan untuk dianalisis.
Jika sampel telah dibekukan, biarkan sampel mencair sepenuhnya sebelum pengambilan sampel.
Aduk sampel secara menyeluruh sebelum mengeluarkan bagian uji analitis.
Tabel 7
Konsentrasi Kalibrasi ZON
Solusi Volume larutan kerja konsentrasi ZON
kalibrasi ZON (5.17) [µl] [ng/ml]
1 50 10
2 250 50
3 450 90
4 650 130
5 850 170
6.2 Ekstraksi
6.2.1 Timbang 20 g (dicatat hingga 2 tempat desimal) bagian uji ke dalam labu bertutup ulir
dari 250 ml sampai 500 ml (4.13).
6.2.2 Tambahkan 150 ml pelarut ekstraksi (5.10).
6.2.3 Aduk sebentar dengan tangan untuk mendapatkan suspensi yang homogen, lalu kocok selama 1
jam dengan pengocok (4.2), atau masukkan ke dalam penangas air ultrasonik selama 15 menit
(4.24).
6.2.4 Kocok dalam shaker (4.2) selama 15 menit lagi.
6.2.5 Saring ekstrak melalui kertas saring terlipat (4.15) dan kumpulkan ekstrak dalam sekrup
tutup labu 100 ml (4.13).
6.2.6 Pindahkan tepat 30 ml (atau 3 ml jika hasil di atas 500 ÿg/kg) ekstrak yang telah disaring ke
dalam gelas ukur 250 ml dengan sumbat (4.10). Encerkan ekstrak dalam silinder dengan
PBS (5.9) sampai tanda 150 ml.
6.2.7 Campur dan saring kira-kira 20 ml ekstrak encer ini melalui penyaring serat mikro kaca (4.16)
ke dalam gelas kimia dengan memberikan sedikit vakum (4.22). Jangan menggunakan ruang
hampa yang terlalu kuat pada awal proses filtrasi, karena hal ini dapat menyebabkan ekstrak
yang disaring menjadi keruh setelah penyaringan.
6.2.8 Buang 20 ml pertama dan saring kira-kira 70 ml lagi untuk dianalisis.

CATATAN: Segera lanjutkan dengan prosedur pembersihan kolom imunoafinitas (6.3).
6.3 Pembersihan Kolom Imunoafinitas
6.3.1 Hubungkan kolom imunoafinitas (5.19) ke manifold vakum (4.18) dan
pasang reservoir (4.19) ke bagian atas kolom immunoaffinity.
6.3.2 Prakondisikan kolom immunoaffinity (5.19) dengan 20 ml PBS (5.9) menggunakan a
laju aliran 3-5 ml/menit.
6.3.3 Pipet 50 ml ekstrak sampel yang telah disaring dan diencerkan (6.2) ke dalam reservoir.
6.3.4 Biarkan ekstrak melewati kolom secara gravitasi dengan laju aliran tetap hingga seluruh
ekstrak melewatinya dan bagian pelarut terakhir mencapai frit kolom. Laju aliran harus 1-2
tetes/detik.
6.3.5 Setelah ekstrak melewati kolom, cuci kolom dengan 5 ml pelarut pencuci (5.11) diikuti dengan
15 ml air suling ganda dengan laju aliran 1–2 tetes/detik.
6.3.6 Buang sisa air dari kolom dengan melewatkan 3 ml udara atau nitrogen melalui kolom (1–2
detik). Buang semua eluen dari tahap prosedur pembersihan ini.
6.4 Persiapan larutan uji untuk analisis HPLC

6.4.1 Tempatkan gelas ukur 5 ml (4.10) atau labu takar 3 ml (4.11) di bawah kolom dan masukkan
0,75 ml metanol (5.3) ke dalam kolom, kumpulkan eluennya.
6.4.2 Setelah tetes terakhir metanol melewati kolom, biarkan metanol tetap berada di kolom selama
kurang lebih 1 menit.
6.4.3 Tambahkan lagi 0,75 ml metanol (5.3) dan lanjutkan mengumpulkan eluen.
6.4.4 Lewatkan udara dengan hati-hati melalui kolom untuk mengumpulkan sisa metanol.
6.4.5 Isi gelas ukur/labu ukur sampai tanda 3 ml dengan air suling ganda dan aduk. Setelah
pencampuran, periksa kembali volumenya dan sesuaikan jika perlu.
6.4.6 Jika sampel keruh, saring larutan uji melalui unit penyaring jarum suntik HPLC (4.23) dengan
jarum suntik plastik (4.20) sebelum injeksi.
CATATAN: Sebagai alternatif, prosedur manual yang dijelaskan untuk pembersihan imunoafinitas (6.3)
dan elusi (6.4) dapat dilakukan dengan unit penyiapan sampel otomatis, asalkan volume dan laju aliran
tetap tidak berubah.
6.5 Kalibrasi
Siapkan grafik kalibrasi pada awal setiap hari analisis menggunakan larutan kalibrasi ZON (5.18).
Tetapkan kurva kalibrasi sebelum analisis sampel uji dengan memplot konsentrasi ZON [ng/ml]
(sumbu x) terhadap sinyal puncak sebagai luas atau tinggi (sumbu y), tentukan kemiringan dan
kemungkinan intersep dengan regresi linier sion, dan periksa linearitas menggunakan diagnostik
yang sesuai.
6.6 Penentuan dan identifikasi zearalenon dalam larutan uji
6.6.1 Menyuntikkan alikuot larutan uji (6.4) ke dalam HPLC menggunakan kondisi yang sama
dengan yang digunakan untuk pembuatan grafik kalibrasi.
6.6.2 Identifikasi puncak zearalenon dalam larutan uji dengan membandingkan waktu retensi
dengan waktu retensi larutan kalibrasi HPLC terdekat (5.18) yang disuntikkan selama batch
analisis HPLC.
6.6.3 Konsentrasi zearalenon dalam larutan uji harus berada dalam kalibrasi
rentang brarasi. Jika kadar zearalenon dalam larutan melebihi konsentrasi larutan kalibrasi
tertinggi, larutan uji harus diencerkan dengan pengencer HPLC agar berada dalam kisaran
kalibrasi dan dianalisis ulang. Faktor pengenceran harus dimasukkan ke dalam semua
perhitungan selanjutnya.
Ketika kolom yang ditentukan dalam 5.25.3 dan fase gerak yang ditentukan dalam 5.13 digunakan,
pengaturan berikut ini dianggap sesuai:
•Laju aliran, fase gerak (kolom): 0,7 hingga 1,0 ml/menit
•Deteksi fluoresensi, panjang gelombang emisi: 446 hingga 450 nm
•Deteksi fluoresensi, panjang gelombang eksitasi: 274 hingga 275 nm
•Volume injeksi: 100 hingga 300 ÿl
7. Perhitungan
Tentukan dari grafik kalibrasi konsentrasi massa dalam ng/ml zearalenon dalam alikuot larutan uji yang
disuntikkan ke kolom HPLC. Hitung fraksi massa zearalenon, dalam ng/g atau µg/kg hingga satu desimal
menggunakan persamaan
ÿ ZON, di bawah ini:
V5 V3 V1
ÿZON = cZON • ____ • ____ • ____
V4 V2 MS
Di mana,
cZON = konsentrasi massa ZON yang ditentukan dari kalibrasi (6.5);
V5 = volume larutan uji (3,0 ml; 6.4.5);
V4 = volume alikuot ekstrak encer yang diterapkan pada imunoafinitas
kolom (50 ml; 6.3.3);
V3 = volume total ekstrak hasil saringan yang diencerkan (150 ml; 6.2.6);
V2 = volume alikuot ekstrak yang digunakan untuk pengenceran (30 ml atau 3 ml; 6.2.6);
V1 = total volume pelarut ekstraksi (150 ml; 6.2.2); Dan
ms = massa sampel yang diekstraksi (20,00 g, 6.2.1).
Persamaan di atas dapat disederhanakan jika digunakan massa dan volume yang dijelaskan:
ÿZON = cZON • 2,25 (30 ml ekstrak diencerkan)
Jika perhitungan di atas menghasilkan nilai di atas 500 µg/kg maka pengenceran baru sebanyak 3 ml
ekstrak sampel harus disiapkan (lihat bagian 6.2). Persamaan yang disederhanakan kemudian adalah
sebagai berikut:
ÿZON = cZON • 22,5 (3 ml ekstrak diencerkan)
8.1 Akurasi
Untuk menentukan perolehan kembali, tempelkan material representatif bebas zearalenon
dengan larutan spiking ZON (5.16). Tingkat lonjakan harus berada dalam kisaran kalibrasi
(sebaiknya kisaran menengah). Konsentrasi larutan yang digunakan harus sedemikian sehingga
tidak lebih dari 2 ml yang ditambahkan. Diamkan sampel yang dibubuhi selama minimal 30 menit
untuk memastikan penguapan pelarut. Pemulihan harus mencapai 60 hingga 120% jika tidak,
rangkaian tersebut harus diulang. Pengendalian kerja ini harus dijalankan pada setiap set dan
dibandingkan dengan batasan pada peta kendali yang telah ditetapkan.
8.2 Presisi
Suntikkan standar kalibrasi rentang menengah sebagai pemeriksaan setelah kira-kira setiap lima
sampel untuk mengevaluasi perubahan pada area puncak. Area tersebut tidak boleh berubah lebih
dari 10% dari area puncak standar pada kurva kalibrasi.
9. Keterangan
9.1 Mengenai kapasitas pemuatan kolom imunoafinitas mengacu pada pabrikan
spesifikasi.
9.2 Sebelum menerapkan prosedur HPLC, sampel dapat disaring untuk ZON dengan alat tes yang
berbeda. Misalnya beberapa tes ELISA tersedia secara komersial (lihat daftar link dalam metode
aflatoksin). Lihat deskripsi produk dan prosedur pabrikan.
tions.
•tanggal ujian;

•poin-poin tertentu yang diamati selama ujian; Dan
•operasi yang tidak ditentukan dalam metode atau dianggap opsional, yang mungkin mempengaruhi
hasil.
10. Referensi
Arranz, I., Mischke, C., Stroka, J., Sizoo, E., Van Egmond, H.& Neugebauer, M. 2007.
Metode kromatografi cair untuk kuantifikasi zearalenon dalam makanan bayi dan pakan
ternak: Antar laboratorium Belajar; J.AOAC Int. 90 (6): 1598–1609.
Peraturan Komisi (EC) No 401/2006. 23 Februari 2006. Menetapkan metode pengambilan
sampel dan analisis untuk pengendalian resmi kadar mikotoksin dalam bahan makanan, ABl.
L 70 tanggal 9.3.2006, hlm.12–34.
EN 15792:2009. 2009. Bahan pakan ternak – Penentuan zearalenon dalam pakan ternak –
Metode kromatografi cair kinerja tinggi dengan deteksi fluoresensi dan pembersihan kolom
imunoafinitas. Brussel, Belgia.
Deoksinivalenol (DON) – Metode HPLC
1. Prinsip
Deoxynivalenol (DON) diekstraksi dari komoditas menggunakan air sulingan ganda. Ekstrak air dibersihkan
dengan kolom immunoaffinity untuk menghilangkan kotoran dari sampel. Selanjutnya DON ditentukan
secara kuantitatif dengan HPLC dengan deteksi UV.
2. Ruang Lingkup
Metode ini dapat diterapkan untuk penentuan DON dalam pakan ternak pada konsentrasi dari 150 ÿg/kg
hingga setidaknya 4000 ÿg/kg.
3. Tanggung jawab
4. Peralatan
Peralatan laboratorium biasa dan khususnya yang berikut ini:
4.1 Timbangan analitik, akurat hingga 0,001 g untuk penimbangan sampel, akurat hingga 0,01 mg untuk
persiapan gravimetri larutan stok DON.
4.2 Homogeniser/blender berkecepatan tinggi.
4.3 Pengocok laboratorium.
4.4 Mixer pusaran, atau sejenisnya.
4.5 Mill (berbagai layar).
4.6 Pengaduk jatuh.
4.7 Labu bertutup ulir kapasitas 250 ml dan 500 ml.

4.8 Corong dengan ukuran yang sesuai.
4.9 Filter, selulosa dengan ukuran pori sekitar 30 ÿm.
4.10 Filter, serat mikro kaca bebas pengikat dengan ukuran pori sekitar 2 ÿm.
4.11 Labu ukur kapasitas 2 ml, 5 ml dan 10 ml.
4.12 Pipet ukur kapasitas 1 ml dan 5 ml.
4.13 Pipet yang dapat disesuaikan atau alat suntik kaca kedap gas dengan kapasitas 100 ÿl dan 1 ml.
4.14 Sistem HPLC terdiri dari:
4.14.1 Pompa, setidaknya mampu menghasilkan gradien biner, bebas pulsasi, pada aliran
sesuai untuk kolom analitis.
4.14.2 Kolom analitik. Kolom mana pun yang memungkinkan pemisahan deoksinivalenol yang cukup dari
komponen pengganggu lainnya dapat digunakan. Contohnya adalah:
Phenomenex Octadecylsilane (ODS) 3-Prodigy (15 cm x 4.6 mm id), ukuran partikel 5 ÿm, ukuran
pori 100 Å, Octadecylsilane (ODS) 250 mm x 4.6 mm ID, ukuran partikel 3 ÿm, ukuran pori 80 Å,
Octadecyl ( C18) ID 250 mm x 4,6 mm, ukuran partikel 5 ÿm, ukuran pori 180 Å.
4.14.3 Prakolom (opsional), sesuai dengan kolom analitik yang digunakan.

4.14.4 Pengambil sampel otomatis mampu menginjeksikan volume yang sesuai dengan pengulangan yang cukup
kemampuan.
4.14.5 Detektor UV mampu mengukur pada 220 nm

4.14.6 Sistem pengumpulan data.
4.15 Spektrofotometer UV untuk memeriksa konsentrasi larutan stok DON.
4.16 Reservoir dengan ukuran yang sesuai dengan adaptor yang sesuai dengan kolom immunoaffinity.
4.17 Botol kaca, dengan ukuran yang sesuai untuk pengambilan sampel otomatis (4.14.4) tetapi dengan volume minimum
sebanyak 2,0 ml.
4.18 Unit filter jarum suntik, poliamida (nilon) dengan ukuran pori 0,45 ÿm.
4.19 Evaporator, mampu mempertahankan suhu 50 °C dengan aliran udara atau nitrogen yang stabil.
5. Reagen
Selama analisis, kecuali dinyatakan lain, gunakan hanya reagen dengan kualitas analitis yang diakui dan hanya
air sulingan ganda atau air dengan kualitas 1 sebagaimana ditentukan dalam EN ISO 3696. Pelarut harus
berkelas HPLC.
5.1 Asetonitril.
5.2 Deoxynivalenol (DON), dengan kemurnian minimal 97%.

5.3 Metanol.
5.4 Asam asetat glasial.
5.5 Fase HPLC Seluler
Campurkan 15 bagian volume metanol (5.3) dengan 84.9 bagian volume air suling ganda dan 0.1 bagian
volume asam asetat glasial (5.4). Jumlah pasti metanol yang digunakan dan apakah asam asetat harus
digunakan atau tidak bergantung pada kolom HPLC yang dipilih untuk analisis dan harus disesuaikan jika
perlu. Degas solusi ini sebelum digunakan.
5.6 Pelarut Cuci
Campur metanol (5.3) dan air suling ganda (1:1, v/v).

5.7 Larutan stok DON: 250 ÿg deoksinivalenol per ml asetonitril

Tambahkan 4,0 ml asetonitril (5.1) ke 5 mg DON (5.2) untuk larutan 1,25 mg/ml.
Encerkan 1 ml larutan 1,25 mg/ml menjadi 5,0 ml dengan asetonitril untuk larutan stok 250
ÿg/ml. Encerkan 200 ÿl larutan stok 250 ÿg/ml dalam labu takar 2 ml (4.11) dengan asetonitril
untuk memperoleh larutan stok encer sebesar 25 ÿg/ml.
Untuk menentukan konsentrasi yang tepat, catat kurva serapan larutan stok encer 25 ÿg/ml
ini dengan spektrofotometer (4.15) dalam kisaran 200 hingga 270 nm dalam sel kuarsa
berukuran 1 cm dengan asetonitril (5.1) sebagai referensi. Tentukan serapan pada 220 nm.
Hitung konsentrasi massa deoxynivalenol, ÿDON, dalam mikrogram per mililiter menggunakan
persamaan berikut:
Amaks • M • 100
ÿDON (ÿ 25 ÿg/ ml) = ____________
ÿ•d
Di mana,
Amax = serapan yang ditentukan pada kurva serapan maksimum (220 nm),
M = massa molar deoksinivalenol (M = 296,3 g/mol),
ÿ = koefisien serapan molar deoksinivalenol dalam asetonitril (681 m2/mol),
dan
d = panjang jalur optik sel kuarsa dalam sentimeter (1 cm).
Hitung konsentrasi yang tepat dari larutan stok 250 ÿg/ml menggunakan persamaan berikut:
ÿDON (ÿ 250 ÿg/ ml) = ÿDON (ÿ 25 ÿg/ ml) • 10
Larutan stok dapat disimpan dalam tempat gelap hingga 3 bulan pada suhu 44 hingga 8 °C atau setidaknya
6 bulan pada suhu di bawah –18 ºC.
5.8 JANGAN larutan spiking

Pipet sebagian larutan stok DON yang telah dikalibrasi (5.7), setara dengan 500 ÿg DON, ke
dalam labu takar 5 ml (4.11). Sesuaikan tanda tersebut dengan asetonitril (5.1).
Ini akan menghasilkan larutan spiking sebesar 100 ÿg/ml.
5.9 JANGAN solusi yang berfungsi
Pipet sebagian larutan stok DON encer yang telah dikalibrasi (5.7), setara dengan 50 ÿg DON,
ke dalam labu takar 5 ml (4.11). Sesuaikan tanda tersebut dengan asetonitril (5.1). Ini akan
menghasilkan larutan kerja DON sebesar 10 ÿg/ml.
5.10 Solusi Kalibrasi DON
Larutan kalibrasi dibuat dari larutan kerja DON 10 ÿg/ml (5.9). Misalnya, tambahkan volume
10 ÿg/ml larutan kerja DON (5.9) yang ditunjukkan pada Tabel 8 di bawah ke dalam labu takar
10 ml (4.11). Isi labu sampai tanda batas dengan fase gerak (5.5). Penyimpangan
diperbolehkan selama level terendah berada di atas batas deteksi, level tertinggi tidak
menyebabkan saturasi sinyal detektor, dan setidaknya ada dua level lagi yang berjarak sama
di antara keduanya.
5.11 DON kolom pembersihan imunoafinitas
Kolom imunoafinitas berisi antibodi yang meningkat melawan DON. Kolom
Tabel 8
Konsentrasi kalibrasi deoxynivalenol
Solusi Volume larutan konsentrasi JANGAN
kalibrasi kerja DON (5,9) [µl] [ng/ml]
1 450 450
2 375 375
3 300 300
4 225 225
5 150 150
6 75 75
harus mempunyai kapasitas tidak kurang dari 2500 ng DON dan harus memberikan pemulihan tidak
kurang dari 70% bila 25 ng DON diaplikasikan dalam 1 sampai 2 ml air suling ganda (tergantung pada
instruksi pabrik).
6. Prosedur
6.1 Persiapan Sampel
Penting bagi laboratorium untuk menerima sampel yang benar-benar representatif dan tidak rusak
atau berubah selama pengangkutan atau penyimpanan. Sampel harus ditumbuk halus dan dicampur
secara menyeluruh menggunakan gilingan (4.5) dan mesin pengaduk (4.6) atau proses lain yang telah
terbukti menghasilkan homogenisasi sempurna sebelum bagian uji dikeluarkan untuk dianalisis.
Jika sampel telah dibekukan, biarkan hingga mencair sepenuhnya sebelum pengambilan sampel.
Campur sampel secara menyeluruh sebelum mengeluarkan bagian uji analitis.
6.2 Ekstraksi
6.2.1 Timbang bagian uji seberat 25 g ke dalam labu bertutup ulir 250 ml atau 500 ml (4.7).
6.2.2 Tambahkan 200 ml air sulingan ganda atau air deionisasi, tutup dan kocok selama 1 jam dengan
shaker (4.3).
6.2.3 Siapkan corong (4.8) dengan kertas saring (4.9) dan saring sampel yang telah diekstraksi ke
dalam labu bersih bertutup ulir 250 ml atau 500 ml (4.7).
6.3 Pembersihan kolom imunoafinitas
6.3.1 Pasang reservoir (4.16) ke kolom imunoafinitas dan tambahkan 8 ml air deionisasi atau air
suling ganda.
6.3.2 Pindahkan 2 ml ekstrak yang telah disaring (lihat di atas; 0,5 ml jika hasil analisis di atas 4000
ÿg/kg) ke dalam reservoir (4.16). Biarkan larutan ini mengalir perlahan melalui kolom secara
gravitasi dengan kecepatan 1–2 tetes/detik.
6.3.3 Ketika ekstrak telah melewati kolom immunoaffinity sepenuhnya,
lewati 5 ml air deionisasi melalui kolom.
6.3.4 Buang sisa cairan dengan melewatkan nitrogen atau udara melalui kolom selama sekitar 5 detik.
Buang semua eluen dari tahap prosedur pembersihan ini.
6.3.5 Tempatkan botol autosampler HPLC (4.17) di bawah kolom dan masukkan 0,5 ml metanol (5.3)
melalui kolom secara gravitasi dan kumpulkan eluennya. Setelah
tetes terakhir metanol telah melewati kolom, biarkan metanol tetap berada di kolom selama
kurang lebih 1 menit.
6.3.6 Tambahkan lagi 1 ml metanol (5.3) dan lanjutkan mengumpulkan eluen. Lewatkan nitrogen atau
udara dengan hati-hati melalui kolom untuk mengumpulkan sisa eluen.
CATATAN: Sebagai alternatif, prosedur manual yang dijelaskan untuk pembersihan imunoafinitas (6.3) dan
elusi (6.4) dapat dilakukan dengan unit penyiapan sampel otomatis, asalkan volume dan laju aliran tetap tidak
berubah.
6.4 Persiapan larutan uji untuk analisis HPLC
6.4.1 Tempatkan vial berisi eluen ke dalam evaporator (4.19) dan evaporasi secara hati-hati
sampai kering di bawah nitrogen atau udara pada suhu sekitar 50 ºC.
6.4.2 Segera setelah itu dinginkan vial HPLC hingga suhu kamar dan susun kembali residunya dengan
0,50 ml fase gerak HPLC (5.5).
6.4.3 Aduk rata dengan mixer pusaran (4.4) selama minimal 30 detik untuk memastikan residu larut
kembali sepenuhnya. Jika terjadi kekeruhan, saring larutan uji melalui unit penyaring semprit
(4.18).
6.5 Kalibrasi
Siapkan grafik kalibrasi pada awal setiap hari analisis dengan menyuntikkan larutan kalibrasi (5.10)
pada konsentrasi berbeda yang sesuai ke dalam grafik kromatografi. Tetapkan kurva kalibrasi sebelum
analisis sampel uji dengan memplot konsentrasi DON [ng/ml] (sumbu x) terhadap sinyal puncak sebagai
luas atau tinggi (sumbu y), tentukan kemiringan dan intersep dengan regresi linier, dan periksa plot
menggunakan diagnostik yang tepat.
6.6 Penentuan dan identifikasi deoxynivalenol dalam larutan uji

6.6.1 Suntikkan sebagian larutan uji ke dalam kromatografi menggunakan kondisi yang sama dengan
yang digunakan untuk pembuatan grafik kalibrasi.
6.6.2 Identifikasi puncak DON dalam larutan uji dengan membandingkan waktu retensi dengan waktu
retensi larutan kalibrasi HPLC terdekat (5.10) yang disuntikkan dalam analisis HPLC.
6.6.3 Konsentrasi deoksinivalenol dalam larutan uji harus berada dalam kisaran kalibrasi. Jika kadar
deoksinivalenol dalam larutan uji melebihi konsentrasi larutan kalibrasi tertinggi, larutan uji harus
diencerkan dengan fase gerak HPLC agar berada dalam rentang kalibrasi dan dianalisis ulang.
Faktor pengenceran harus dimasukkan ke dalam semua perhitungan berikutnya.
tions.

Dengan menggunakan peralatan yang diuraikan dalam 4.14, kondisi berikut telah terbukti memberikan
pemisahan yang memadai:
Volume injeksi: 100–300 ÿl
Panjang gelombang deteksi UV: 220 nm
Laju aliran fase gerak (kolom): 1,0 ml/menit
Jika pompa HPLC menyalurkan fase gerak (5.5) melalui saluran A dan pelarut pencuci (5.6) melalui
saluran B, profil gradiennya akan terlihat sebagai berikut:
Tabel 9
gradien HPLC
Waktu [menit] Saluran A [%] Saluran B [%]
0 hingga 15 100 0
15 hingga 25 0 100
25 hingga 35 100 0
CATATAN: Fase gerak yang dibuat dengan asetonitril dan air suling ganda atau air deionisasi juga
telah terbukti menjadi alternatif yang sesuai. Fase gerak tersebut dapat digunakan asalkan
pemisahan yang memadai tercapai.
7. Perhitungan
Tentukan dari grafik kalibrasi konsentrasi massa dalam ng/ml deoksiniva-lenol dalam larutan uji
yang disuntikkan ke kolom HPLC. Hitung fraksi massa deoksinivalenol, dalam ng/g atau µg/kg
w menggunakan persamaan di bawah ini:
hingga satu desimal MENGENAKAN,
V3 V1
ÿDON = cDON • ____ • ____
V2 ms
Di mana,
cDON = konsentrasi massa deoksinivalenol yang ditentukan menggunakan kalibrasi (6.5);
V3 = total volume larutan uji (0,5 ml; 6.4.2);

V2 = volume alikuot ekstrak yang digunakan untuk pembersihan (2,0 ml atau 0,5 ml; 6.3.2);
V1 = total volume pelarut ekstraksi (200 ml; 6.2.2); Dan
ms = massa bagian uji yang diekstraksi (25 g; 6.2.1).
Persamaan di atas dapat disederhanakan jika digunakan massa dan volume yang dijelaskan:
ÿDON = cDON • 2 (2 ml ekstrak dibersihkan)
Jika perhitungan di atas menghasilkan nilai di atas 500 maka pembersihan baru dengan 0,5 ml
ekstrak sampel harus disiapkan (lihat bagian 6.3). Persamaan yang disederhanakan adalah sebagai
berikut:
ÿDON = cDON • 8 (0,5 ml ekstrak dibersihkan)
8.1 Akurasi
Untuk menentukan perolehan kembali, tambahkan bahan bebas deoksinivalenol dengan
larutan spiking (5.8). Tingkat lonjakan sampel kontrol kerja harus berada dalam kisaran
kalibrasi (sebaiknya kisaran menengah). Konsentrasi larutan yang digunakan harus
sedemikian sehingga tidak lebih dari 2 ml yang ditambahkan. Diamkan sampel yang diberi paku selama a
minimal 30 menit untuk memastikan penguapan pelarut. Pemulihan harus mencapai 60 hingga
120% jika tidak, rangkaian tersebut harus diulang. Pengendalian kerja ini harus dijalankan dengan
setiap set dan dibandingkan dengan batas-batas pada peta kendali yang telah ditetapkan.
8.2 Presisi
Suntikkan standar kalibrasi rentang menengah sebagai pemeriksaan setelah kira-kira setiap 5
sampel untuk mengevaluasi perubahan pada area puncak. Area tersebut tidak boleh berubah
lebih dari 10% dari area puncak standar pada kurva kalibrasi.
9. Keterangan
9.1 Untuk kapasitas pemuatan kolom immunoaffinity mengacu pada spesifikasi pabrikan.
tions.
9.2 Sebelum menggunakan prosedur HPLC, sampel dapat disaring untuk DON dengan alat tes yang
berbeda. Misalnya beberapa tes ELISA tersedia secara komersial (lihat daftar link dalam metode
aflatoksin). Lihat deskripsi produk dan prosedur pabrikan.
•tanggal ujian;

•poin-poin tertentu yang diamati selama ujian; Dan
•operasi yang tidak ditentukan dalam metode atau dianggap opsional, yang mungkin mempengaruhi
hasil.
10. Referensi
Peraturan Komisi (EC) No 401/2006. 23 Februari 2006. Menetapkan metode pengambilan sampel
dan analisis untuk pengendalian resmi kadar mikotoksin dalam bahan makanan, ABl. L 70
tanggal 9.3.2006, hlm.12–34.
EN 15791. 2009. Bahan pakan ternak - Penentuan deoxynivalenol dalam pakan ternak – HPLC
metode dengan pembersihan kolom immunoaffinity. Brussel, Belgia.
Stroka, J., Derbyshire, M., Mischke, C., Ambrosio, M., Kroeger, K., Arranz, I., Sizoo, E.
& Van Egmond, H. 2006. Penentuan kromatografi cair deoxynivalenol dalam makanan bayi dan
pakan ternak: Studi Antar Laboratorium. J.AOAC Int. 89 (4): 1012–1020.
Kecernaan Bahan Kering – in vitro Menggunakan Minuman Keras Rumen
1. Prinsip
Pencernaan pakan oleh ruminansia disimulasikan secara in vitro dalam dua langkah. Pertama, sampel
ditimbang dalam tabung reaksi diinkubasi dengan cairan rumen buffer selama 48 jam untuk
menghilangkan karbohidrat yang dapat dicerna. Setelah sentrifugasi dan filtrasi, sisa pakan kemudian
diinkubasi dengan pepsin dalam asam klorida selama 48 jam untuk melarutkan bahan yang dapat dicerna.
protein. Setelah penyaringan, residu dikeringkan, dijadikan abu dan ditimbang. Kecernaan in vitro akhirnya
diubah menjadi tingkat kecernaan in vivo melalui sampel standar dengan kecernaan in vivo yang diketahui ,
dijalankan di setiap seri sampel. Prosedur ini didasarkan pada Tilley dan Terry (1963) (lihat keterangan 9.3).
2. Ruang Lingkup
Tata cara penentuan kecernaan in vitro dengan cairan rumen hanya berlaku untuk pakan ruminansia.
3. Tanggung jawab
Analis Laboratorium harus melakukan analisis sesuai metode yang dijelaskan. Analis Laboratorium
bertanggung jawab untuk memastikan bahwa semua ketentuan yang ditetapkan dalam metode ini dipenuhi
dan dipatuhi dengan ketat. Setiap penyimpangan dari metode yang ditentukan harus dicatat dan penyelia
diberitahu.
4. Peralatan
4.1 Labu termos.
4.2 Saldo, akurat hingga 0,1 g.

4.4 Tabung sentrifugasi (plastik) kapasitas 75 ml dilengkapi dengan penutup karet dan katup pelepas gas
serta tanda kadar pada 50 ml.
4.5 Sentrifugasi.
4.6 Penangas air dengan termostat pada suhu 39 ± 1 °C.
4.7 Alat pengaduk.

4.8 Manifold untuk tabung centrifuge.
4.9 Saring cawan lebur atau kertas saring.
4.10 Oven pengering, mampu dipertahankan pada suhu 103 ± 2 °C.
4.12 Desikator.
4.13 pengukur pH.
5. Reagen
5.1 Amoniumsulfat, (NH4)2SO4.
5.2 Kalsium klorida dehidrasi, CaCl2.2 H2O.
5.3 Gas karbondioksida CO2.
5.4 Dinatriumhidrogenfosfat dodekahidrat, Na2HPO4.12 H2O.
5.5 Asam klorida 1 N.
5.6 Magnesiumklorida heksahidrat, MgCl2.6 H2O.
5,7 Pepsin (porc lambung, 766 U/mg).
5.8 Kalium klorida, KCl.
5.9 Natriumkarbonat anhidrat, Na2CO3.
5.10 Natrium klorida, NaCl.
5.11 Natriumhidrogenkarbonat, NaHCO3.
6. Prosedur
Prosedurnya sebaiknya dilakukan menurut jadwal waktu yang tetap, misalnya:
Jumat
6.1 Timbang ke dalam tabung sentrifugasi (4.4) kira-kira 0,5 g sampel sampai ketelitian 0,1 mg
(W1).
Dengan setiap batch dijalankan 4 blanko (tabung centrifuge tanpa sampel) dan sampel standar.
6.2 Siapkan larutan mineral:

Larutan A: larutkan 46,5 g Na2HPO4.12 H2O (5.4), 49.0 g NaHCO3 (5.11), 2.35 g NaCl (5.10)
dan 2.85 g KCl (5.8) dalam air suling dan buat hingga 1 liter dengan sulingan
air.
Larutan B: larutkan 12,81 g MgCl2,6 H2O (5,6) dalam 100 ml air suling.
Larutan C: larutkan 5,30 g CaCl2.2 H2O (5.2) dalam 100 ml air suling.
Senin mulai dari sekitar jam 08.00

6.3 Siapkan larutan buffer: untuk 80–90 sampel: campurkan 800 ml Larutan A, 8 ml Larutan B, 8 ml
Larutan C dan 12,8 g (NH4)2SO4 (5.1) dan buat hingga 4 liter dengan air suling. Jenuhkan
larutan dengan CO2 (5,3) hingga pH 6,9 (kontrol selama kurang lebih 15 menit dengan pH meter
(4,13) sambil diaduk dan hangatkan larutan dalam penangas air hingga 39 ± 1 °C (4,6).
6.4 Sekitar pukul 08.00 ambil sedikitnya 1,5 liter cairan rumen dari sapi yang berfistulasi atau 2
domba yang difistulasi dengan cara dihisap dan dikumpulkan dalam termos (4.1) (sebelumnya
dihangatkan dengan air dan diberi gas dengan CO2). Segera pindahkan ke laboratorium dan
saring melalui dua lapis kain tipis (lihat keterangan 9.3).
6.5 Tambahkan 1 liter cairan rumen yang telah disaring ke dalam larutan buffer (6.3) sambil diaduk
dan diberi gas dengan CO2 (kurang lebih 5 menit) ke seluruh campuran.
6.6 Tambahkan 50 ml cairan rumen buffer ke setiap tabung centrifuge, gas dengan CO2, tutup tabung
dengan sumbat karet dan katup dan inkubasi dalam penangas air pada suhu 39 ± 1 °C selama
48 jam.
6.7 Kocok tabung dengan tangan sekitar pukul 13.00 dan 17.00.
Selasa
6.8 Kocok tabung sekitar pukul 08.00, 13.00, dan 17.00.
Rabu dimulai sekitar pukul 08.00.
6.9 Membuat larutan pepsin: larutkan 10 g pepsin (5,7) dalam 5 liter air, tambahkan 250 ml 1 M HCl
(5,5) dan hangatkan dalam penangas air hingga 39 ± 1 °C (kontrol dengan termometer).
6.10 Tambahkan 5 ml larutan Na2CO3 (5,9) 10% ke setiap tabung dan sentrifugasi (4,5) pada 5000 g
selama 3 menit (jaga urutan tabung sama seperti pada awal inkubasi). Pastikan urutan tabung
tetap sama untuk semua prosedur.
6.11 Saring supernatan melalui kain kasa nilon dengan penyedotan dan masukkan kembali sisanya
ke dalam tabung dengan menyemprotkan larutan pepsin. Tambahkan lebih banyak larutan
pepsin hingga volume total mencapai tanda 50 ml pada tabung.
6.12 Tutup tabung dengan sumbat karet dan katup lalu masukkan ke dalam penangas air pada suhu 39 ± 1 °C selama
inkubasi 48 jam lagi.
6.13 Kocok tabung dengan tangan sekitar pukul 13.00 dan 17.00.
Kamis
6.14 Kocok tabung sekitar pukul 08.00, 13.00, dan 17.00.
6.15 Tempatkan cawan penyaring (4.9) dalam tungku Muffle pada suhu 550 ± 20 °C (4.11) selama 2
jam, biarkan dingin dalam desikator (4.12) selama kurang lebih 2 jam, timbang hingga ketelitian
0,1 mg (W2) dan masukkan kembali ke dalam desikator.
Jumat
6.16 Pindahkan isi tabung secara kuantitatif ke dalam wadah dan saring secara berturut-turut.
tion.
6.17 Keringkan cawan lebur dalam oven pada suhu 103 ± 2 °C (sekitar jam 12:00) sampai tengah malam;
mengatur pengatur waktu agar oven mulai mengering kembali pada hari Senin pagi pukul 02.00.
Senin dimulai sekitar pukul 08.00.

6.18 Masukkan cawan ke dalam desikator selama 2 jam, timbang cawan yang berisi residu hingga
ketelitian 0,1 mg (W3). Lakukan ini juga untuk bagian yang kosong.
6.19 Tempatkan cawan lebur dalam tungku Muffle pada suhu 550 ± 20 °C selama 3 jam, biarkan dingin
dalam desikator selama kurang lebih 2 jam, timbang hingga ketelitian 0,1 mg (W4). Lakukan ini juga
untuk bagian yang kosong.
7. Perhitungan
Hitung persen kecernaan bahan kering (% DC DM) sebagai:
DC DM (%) = [(W1 x DM%) – (W3 – W2) – BDM] / (W1 x DM%)
Di mana,
DC DM = kecernaan bahan kering,

W1 = berat sampel dalam g,
DM = Konten DM sampel,
W3 = berat krus ditambah residu setelah dikeringkan dalam g, W2 =
berat krus kering dalam g, dan
BDM = rata-rata berat bahan kering blanko.
DC OM (%) = [(W1 x OM%) – (W4 – W2) – BOM] / (W1 x OM %)
Di mana,
DC dari OM = kecernaan bahan organik,

W1 = berat sampel (g),
OM = OM isi sampel,
W4 = berat krus ditambah residu setelah pengabuan (g), W2 = berat
krus kering (g), dan
BOM = rata-rata berat bahan organik blanko.
Terakhir, nilai kecernaan sampel yang diperoleh diubah menjadi tingkat kecernaan in vivo dengan
menggunakan persamaan regresi linier: DCCOR = DC xb + a.
Persamaan ini diperoleh dengan meregresi nilai run (DCRUN) dari sampel standar
dengan nilai referensinya (DCREF): DCREF = a + b DCRUN.
Dalam setiap proses, setidaknya tiga sampel referensi dengan daya cerna in vivo yang diketahui
dianalisis dalam rangkap tiga. Sampel referensi ini sebaiknya memiliki sifat serupa dengan sampel
uji dan harus mencakup kisaran kecernaan sampel uji sebaik mungkin. Nilai rata-rata proses
sampel standar tidak boleh berbeda lebih dari 2% dari nilai referensi.
Sampel harus dianalisis setidaknya dalam rangkap dua. Perbedaan antara duplikat harus lebih
rendah dari 2,5%-unit untuk nilai kecernaan kurang dari 60%, lebih rendah dari 2,0%-
satuan untuk nilai antara 60 dan 80% dan lebih rendah dari 1,5%-unit untuk nilai lebih dari
80%.
9. Keterangan
9.1 Pola makan hewan donor harus distandarisasi. Kebanyakan diet jerami diberi makan iklan
libitum. Ambil cairan rumen sebelum pemberian pakan pagi.
9.2 Prosedur yang dijelaskan memberikan ukuran kecernaan nyata. Varian dari metode ini dimana
sisa pakan setelah tahap pertama diolah dengan larutan deterjen netral selama 1 jam,
memberikan kecernaan yang sebenarnya (Van Soest dan Robertson, 1985).
9.3 Sebagai pengganti cairan rumen, yang berarti ketersediaan dan pemeliharaan hewan
berfistulasi rumen, preparat enzim kering beku komersial dapat digunakan.
Sediaan ini dapat berupa selulase murni atau campuran polisakarida. Beberapa prosedur
dijelaskan (Jones dan Hayward, 1975; Dowman dan Collins, 1982; De Boever et al., 1986).
Jika memungkinkan, simulasi pencernaan rumen harus digunakan.
10. Interferensi dan pemecahan masalah

10.1 Penting untuk menjaga kondisi anaerobik selama tahap pertama; pemberian gas secara
menyeluruh pada larutan dan tabung dengan CO2 dan juga memperhatikan katup pelepas
gas agar berfungsi dengan benar.
10.2 PH harus dikontrol secara hati-hati dan inokulum disimpan sedekat mungkin
hingga 39 °C.
11. Referensi
De Boever, JL, Cottyn, BG, Buysse, FX, Wainman, FW & Vanacker, JM 1986. Penggunaan teknik enzimatik untuk
memprediksi kecernaan, metabolisme dan energi bersih suatu senyawa
bahan pakan ternak ruminansia. animasi. Ilmu Pakan. Teknologi. 14: 203–214.
Dowman, MG & Collins, FC 1982. Penggunaan enzim untuk memprediksi daya cerna hewan
feed. J.Ilmu. Pertanian Pangan. 33: 689–696.
Jones, DIH & Hayward, MV 1975. Pengaruh pretreatment pepsin herba terhadap prediksi kecernaan bahan kering
dari kelarutan dalam larutan selulase jamur. J.Ilmu. Pertanian Pangan. 26: 711–718.
Tilley, JMA & Terry, RA 1963. Teknik dua tahap untuk pencernaan tanaman hijauan secara in vitro .
J.Inggris. Rumput. sosial. 18: 104–111.
Van Soest, PJ & Robertson, JB 1985. Analisis hijauan dan makanan berserat. Dalam A Laboratory Manual for
Animal Science 613, Cornell University Ithaca, New York, AS, 202 hal.
Analisis NIR
1. Prinsip
Sampel yang mewakili komposisi kimia bahan sampel diukur dengan spektrometri NIR. Data spektral di
wilayah inframerah dekat dikumpulkan dan diubah menjadi konsentrasi konstituen atau parameter melalui
model kalibrasi yang dikembangkan pada sampel yang representatif.
2. Ruang Lingkup
Prosedur yang dijelaskan berlaku untuk pakan dan bahan pakan.
3.Tanggung jawab
4. Instrumen inframerah-dekat (NIR).

Instrumen NIR berdasarkan reflektansi difus atau pengukuran transmitansi dalam jarak dekat
wilayah panjang gelombang inframerah 700–2500 nm (14300–4000 cm-1) atau segmen ini atau pada
panjang gelombang atau bilangan gelombang tertentu. Prinsip optiknya dapat bersifat dispersif (misalnya
monokromator kisi-kisi) interferometri atau nontermal (misalnya dioda pemancar cahaya, dioda laser, dan
laser). Instrumen harus dilengkapi dengan sistem uji diagnostik untuk menguji kebisingan fotometrik dan
reproduktifitas, akurasi panjang gelombang/bilangan gelombang, dan panjang gelombang/
presisi bilangan gelombang (untuk pemindaian spektrofotometer). Instrumen harus mengukur volume atau
permukaan sampel yang cukup besar untuk menghilangkan pengaruh signifikan ketidakhomogenan yang
berasal dari komposisi kimia atau sifat fisik sampel uji.
Panjang jalur sampel (ketebalan sampel) dalam pengukuran transmitansi harus dioptimalkan sesuai
dengan rekomendasi pabrikan sehubungan dengan intensitas sinyal untuk mendapatkan linearitas dan
rasio sinyal/kebisingan maksimum. Dalam pengukuran reflektansi, jendela kuarsa atau bahan lain yang
sesuai untuk menghilangkan efek pengeringan sebaiknya menutupi lapisan permukaan sampel yang
berinteraksi.
5. Pengambilan sampel
Penting bagi laboratorium untuk menerima sampel yang benar-benar representatif dan tidak rusak atau
berubah selama pengangkutan atau penyimpanan.
Semua sampel laboratorium biasanya harus disimpan dalam kondisi yang tidak akan mengubah
komposisi sampel dari saat pengambilan sampel hingga saat dimulainya prosedur.
6. Prosedur
6.1 Persiapan sampel uji
Persiapan sampel harus dilakukan dengan cara yang sama seperti persiapan sampel validasi. Hal
ini diperlukan untuk menerapkan kondisi standar. Sebelum analisis,
sampel harus diambil sedemikian rupa sehingga diperoleh sampel yang mewakili bahan yang
akan dianalisis.
Untuk prosedur spesifik lihat standar spesifik.
6.2 Pengukuran
Ikuti instruksi untuk instrumen NIR spesifik dan kalibrasi terkait.

Sampel yang disiapkan harus mencapai suhu dalam kisaran yang termasuk dalam validasi.
6.3 Evaluasi hasil

Agar hasil validasi valid, harus berada dalam rentang model kalibrasi yang digunakan.
Hasil yang diperoleh pada sampel yang terdeteksi sebagai outlier spektral tidak dapat dianggap dapat
diandalkan.
7. Memeriksa kestabilan instrumen

7.1 Sampel kontrol
Setidaknya satu sampel kontrol harus diukur setidaknya sekali sehari untuk memeriksa
stabilitas perangkat keras instrumen dan untuk mendeteksi kerusakan apa pun. Pengetahuan
tentang konsentrasi sebenarnya analit dalam sampel kontrol tidak diperlukan. Bahan sampel
harus stabil dan, sejauh mungkin, menyerupai sampel yang akan dianalisis.
Parameter yang diukur harus stabil dan, sejauh mungkin, identik atau setidaknya dekat secara
biokimia dengan sampel analit. Sampel ini biasanya stabil untuk jangka waktu lama namun
stabilitasnya harus diuji dalam kasus sebenarnya. Pergeseran antar sampel kontrol harus
tumpang tindih untuk menjamin pengendalian tidak terganggu.
Variasi sehari-hari yang tercatat harus diplot dalam diagram kendali dan diselidiki untuk
mengetahui pola atau tren yang signifikan.
7.2 Diagnostik instrumen
Untuk spektrofotometer, keakuratan dan presisi panjang gelombang/bilangan gelombang
harus diperiksa setidaknya sekali seminggu, atau lebih sering jika direkomendasikan oleh
produsen instrumen, dan hasilnya harus dibandingkan dengan spesifikasi dan persyaratan.
Pemeriksaan serupa terhadap kebisingan instrumen juga harus dilakukan setiap minggu, atau
pada interval yang direkomendasikan oleh pabrikan.
8. Menjalankan pemeriksaan kinerja kalibrasi

Metode NIR harus divalidasi terus menerus terhadap metode referensi untuk menjamin kinerja
kalibrasi yang optimal dan ketaatan terhadap akurasi. Frekuensi pemeriksaan metode NIR harus
cukup untuk memastikan bahwa metode tersebut beroperasi di bawah kendali yang stabil terhadap
penyimpangan sistematis dan acak dari metode referensi. Frekuensinya bergantung pada jumlah
sampel yang dianalisis per hari dan laju perubahan populasi sampel.
Validasi yang berjalan harus dilakukan pada sampel yang dipilih secara acak dari kumpulan
sampel yang dianalisis.
Mungkin perlu dilakukan beberapa strategi pengambilan sampel untuk memastikan distribusi
sampel yang seimbang pada seluruh rentang kalibrasi, misalnya segmentasi rentang konsentrasi
dan pemilihan acak sampel uji dalam setiap segmen atau untuk memastikan bahwa sampel dengan
rentang yang penting secara komersial tercakup.
Jumlah sampel untuk validasi yang berjalan harus mencukupi statistik yang digunakan untuk memeriksa
kinerja. Untuk validasi yang solid, setidaknya diperlukan 20 sampel (untuk mengharapkan distribusi varians
yang normal). Seseorang dapat mengisi hasil set validasi independen untuk memulai validasi yang berjalan.
Melanjutkan sekitar 5 hingga 10 sampel setiap minggu sudah cukup untuk memantau kinerja dengan baik.
Dengan menggunakan sampel yang lebih sedikit, sulit untuk mengambil keputusan yang tepat jika salah satu
hasilnya berada di luar batas kendali.
Upaya untuk memaksakan hasil dalam batas dengan penyesuaian kalibrasi yang sering tidak akan
memperbaiki situasi dalam praktiknya. Kesalahan prediksi standar (SEP) sebaiknya dievaluasi ulang
menggunakan hasil terbaru.
Jika persamaan kalibrasi setelah periode stabilitas mulai bergerak di luar kendali, kalibrasi harus
ditingkatkan. Sebelum hal ini dilakukan, evaluasi harus dilakukan apakah perubahan tersebut disebabkan oleh
perubahan dalam analisis referensi, perubahan yang tidak disengaja dalam kondisi pengukuran (misalnya
disebabkan oleh operator baru), penyimpangan instrumen atau malfungsi, dll. Dalam beberapa kasus,
penyesuaian sederhana istilah konstan (bias) dalam persamaan kalibrasi mungkin cukup. Dalam kasus lain
mungkin diperlukan untuk menjalankan prosedur kalibrasi ulang yang lengkap, dimana keseluruhan atau
sebagian dari set kalibrasi dasar diperluas untuk mencakup sampel dari validasi yang sedang berjalan, dan
mungkin sampel tambahan yang dipilih untuk ini.
tujuan.
Mengingat analisis referensi berada dalam kendali statistik dan kondisi pengukuran serta kinerja instrumen
tidak berubah, bias yang signifikan atau peningkatan nilai SEP dapat disebabkan oleh perubahan sifat kimia,
biologi, atau fisik sampel dibandingkan dengan set kalibrasi yang mendasarinya.
9. Laporan pengujian
Laporan pengujian harus menentukan:
a) Semua informasi yang diperlukan untuk identifikasi sampel secara lengkap;

b) Metode pengujian yang digunakan, dengan mengacu pada Standar Internasional yang relevan;
c) Semua kondisi pengoperasian yang tidak ditentukan dalam Standar Internasional ini, atau dianggap sebagai
opsional;
d) Segala keadaan yang mungkin mempengaruhi hasil;
e) Hasil tes yang diperoleh; Dan
f) SEP dan bias saat ini (jika signifikan secara statistik), diperkirakan dari menjalankan per-
uji kinerja pada sedikitnya 20 sampel uji
10. Glosarium
Umum
Metode referensi. ISO, EN atau metode yang diakui dan divalidasi secara internasional, yang memberikan
nilai “benar” atau “yang ditetapkan” dari parameter yang akan diukur, termasuk ketidakpastian pengukuran.
Metode tidak langsung. Metode yang mengukur properti yang secara fungsional terkait dengan parameter
yang akan ditentukan. Sinyal yang diperoleh terkait dengan nilai “sebenarnya” sebagaimana ditentukan oleh
metode referensi.
NIRS. Spektroskopi Inframerah Dekat
Spektroskopi NIR adalah pengukuran intensitas penyerapan inframerah-dekat
cahaya oleh sampel dalam kisaran 700–2500 nm (14300–4000 cm-1). Instrumen NIR menggunakan
sebagian, keseluruhan, atau rentang yang mencakup wilayah ini (misalnya 400–2500 nm).
Teknik kalibrasi multivariat kemudian digunakan untuk menghubungkan kombinasi serapan
nilai baik untuk komposisi atau beberapa properti sampel.
NIR. Spektroskopi NIR Reflektansi Inframerah Dekat dimana pengukuran dasarnya adalah
penyerapan cahaya inframerah dekat yang dipantulkan kembali secara difusi dari permukaan sampel
untuk dikumpulkan oleh detektor di depan sampel.
NIT. Spektroskopi NIR Transmisi Inframerah Dekat dimana pengukuran dasarnya adalah
penyerapan cahaya inframerah dekat yang merambat melalui sampel seperti cairan atau bahan
padat (misalnya daging) dan kemudian dikumpulkan oleh detektor di belakang sampel.
jaringan NIR. Sejumlah instrumen inframerah dekat dioperasikan menggunakan model kalibrasi
yang sama. Instrumen dalam jaringan biasanya distandarisasi sehingga perbedaan nilai prediksi
untuk sekumpulan sampel standar dapat diminimalkan.
Standardisasi (instrumen). Sebuah proses dimana sekelompok instrumen inframerah dekat
disesuaikan sehingga memprediksi nilai yang serupa ketika mengoperasikan model kalibrasi yang
sama. Sejumlah teknik dapat digunakan namun teknik ini dapat didefinisikan secara luas sebagai
metode pra-prediksi di mana spektrum sampel disesuaikan untuk meminimalkan perbedaan antara
respons instrumen “master” dan masing-masing instrumen dalam kelompok dan “pasca”. metode
prediksi” di mana regresi linier digunakan untuk menyesuaikan nilai prediksi yang dihasilkan oleh
masing-masing instrumen agar semirip mungkin dengan nilai prediksi dari suatu instrumen.
instrumen “master”.
Skor-Z. Kriteria kinerja dihitung dengan membagi selisih antara hasil prediksi NIR dan nilai
referensi dengan nilai target standar deviasi, misalnya Root Mean Square Error of Prediction
(RMSEP) (lihat bagian terakhir 'Ekspresi Statistik' dalam bab ini).
Teknik kalibrasi
Analisis Komponen Prinsip (PC) (PCA) adalah bentuk kompresi data. Untuk sekumpulan sampel,
ia hanya bekerja dengan data X (spektral) dan menemukan Komponen Utama (faktor) berdasarkan
aturan yang mengatakan bahwa setiap PC menyatakan variasi maksimum dalam data kapan saja
dan tidak berkorelasi dengan PC lainnya. PC pertama mengungkapkan sebanyak mungkin variabilitas
dalam data asli. Efeknya kemudian dikurangkan dari data X dan PC baru diturunkan lagi untuk
menyatakan sebanyak mungkin variabilitas dalam data yang tersisa.
Anda dapat memperoleh PC sebanyak jumlah titik data dalam spektrum atau sampel dalam kumpulan
data, namun efek utama dalam spektrum terlihat terkonsentrasi pada beberapa PC pertama dan oleh
karena itu jumlah data yang perlu dipertimbangkan adalah berkurang drastis. PCA menghasilkan dua
set variabel baru di setiap tahap: Skor PC mewakili respons setiap sampel pada setiap PC; Pemuatan
PC mewakili kepentingan relatif setiap titik data dalam spektrum asli terhadap PC. PCA mempunyai
banyak kegunaan, misalnya dalam interpretasi spektral, namun paling banyak digunakan dalam
identifikasi outlier spektral.
Prinsip Regresi Komponen (PCR) menggunakan skor pada setiap PC sebagai regresi dalam
Regresi Linier Berganda terhadap nilai Y yang mewakili komposisi sampel. Karena setiap PC
ortogonal terhadap setiap PC lainnya, skor membentuk kumpulan data yang tidak berkorelasi dengan
properti yang lebih baik daripada spektrum aslinya. Meskipun dimungkinkan untuk memilih kombinasi
PC untuk regresi didasarkan pada seberapa baik setiap PC berkorelasi dengan konstituen yang diinginkan,
sebagian besar perangkat lunak komersial memaksa regresi untuk menggunakan semua PC hingga PC
tertinggi yang dipilih untuk model (“pendekatan top down”). Saat digunakan dalam NIRS, koefisien regresi
dalam ruang PC biasanya dikonversi kembali ke model prediksi menggunakan semua titik data dalam ruang
panjang gelombang.
Regresi Partial Least Square (PLS) adalah teknik analisis yang, seperti PCA, merupakan bentuk
kompresi data. Dengan PLS, aturan yang digunakan untuk menurunkan faktor adalah bahwa setiap faktor
pada gilirannya memaksimalkan kovarians antara data Y dan semua kemungkinan kombinasi linier dari data
X. Oleh karena itu PLS merupakan keseimbangan antara varians dan korelasi dengan masing-masing faktor
dipengaruhi oleh kedua efek tersebut. Oleh karena itu, faktor PLS lebih berhubungan langsung dengan
variabilitas nilai Y dibandingkan dengan Komponen Utama. PLS menghasilkan tiga variabel baru, yaitu bobot
pembebanan (yang tidak ortogonal satu sama lain), pembebanan, dan skor yang keduanya ortogonal. Model
PLS dihasilkan dengan meregresi skor PLS terhadap nilai Y. Seperti halnya PCR, ketika digunakan dalam
NIRS, koefisien regresi dalam ruang PLS biasanya diubah kembali menjadi model prediksi menggunakan
semua titik data dalam ruang panjang gelombang.
Regresi Linier Berganda (MLR) menggunakan kombinasi beberapa variabel X untuk memprediksi satu
variabel Y. DALAM NIRS, nilai X merupakan nilai serapan pada panjang gelombang terpilih dalam inframerah
dekat atau variabel turunan seperti skor PCA atau PLS.
Jaringan Syaraf Tiruan (JST) menjelaskan teknik pemodelan non-linier yang secara longgar didasarkan
pada arsitektur sistem saraf biologis. Jaringan awalnya “dilatih” dengan menyediakan kumpulan data dengan
beberapa nilai X (variabel spektral atau turunan seperti skor PCA) dan nilai referensi Y. Selama proses
pelatihan, arsitektur jaringan dapat dimodifikasi dan neuron diberi koefisien pembobotan untuk masukan dan
keluaran guna menghasilkan prediksi terbaik dari nilai parameter. Jaringan Neural membutuhkan banyak data
dalam pelatihan.
Model multivariat. Model apa pun yang sejumlah nilai X digunakan untuk memprediksi suatu nilai
atau lebih variabel Y.
Pencilan adalah titik-titik dalam kumpulan data apa pun yang dapat ditunjukkan secara statistik memiliki
nilai yang berada jauh di luar distribusi yang diharapkan. Untuk data NIRS, outlier biasanya diklasifikasikan
sebagai outlier X (spektral) atau outlier Y (data referensi).
X-outlier terkait dengan spektrum NIR. X-outlier dapat berupa spektrum dengan kesalahan instrumental
atau dari jenis sampel yang sangat berbeda dari sampel lain atau dalam prediksi, jenis sampel yang tidak
termasuk dalam set kalibrasi asli.
Y-outlier adalah outlier yang berkaitan dengan kesalahan pada data referensi, misalnya kesalahan
transkripsi atau pada nilai yang diperoleh laboratorium referensi.
Manfaat. Ukuran seberapa jauh letak sampel dari pusat ruang populasi yang ditentukan oleh suatu model.
Sampel dengan leverage yang tinggi memiliki pengaruh yang tinggi terhadap model. Usia tuas dihitung
dengan mengukur jarak antara titik yang diproyeksikan dan pusat model.
Jarak Mahalanobis. Jarak ruang PC antara titik data dan pusat ruang PC (Lihat nilai h di bawah). Ini
adalah pengukuran nonlinier. Di ruang PC, sekumpulan sampel biasanya membentuk distribusi berbentuk
kurva. Elipsoid yang paling mewakili distribusi probabilitas himpunan dapat diperkirakan dengan membangun
matriks kovarians sampel.
Jarak Mahalanobis hanyalah jarak titik uji dari pusat massa dibagi lebar ellipsoid searah dengan titik uji.
nilai-h. Dalam beberapa perangkat lunak, jarak Mahalanobis disebut sebagai “Global
nilai-h” dan deteksi outlier bergantung pada berapa banyak Standar Deviasi sampel yang berasal dari pusat.
Ukuran kedua “Lingkungan h” adalah jarak dalam ruang PC antara titik data dan “n” tetangga terdekatnya
dan menunjukkan apakah suatu sampel terisolasi atau berada di bagian distribusi yang berpenduduk banyak.
Sisa. Perbedaan antara nilai referensi dan nilai yang diprediksi oleh model regresi. Digunakan dalam
perhitungan statistik regresi.
Set tes. Saat menguji model regresi, kumpulan sampel apa pun yang tidak termasuk sampel digunakan
untuk mengembangkan kalibrasi.
Set tes independen. Set Pengujian yang terdiri dari sampel yang berasal dari wilayah geografis berbeda,
pabrik baru (dalam istilah industri), atau dikumpulkan di waktu yang berbeda (misalnya dari panen yang
berbeda) dibandingkan sampel yang digunakan untuk membuat dan memvalidasi model regresi.
Sampel ini membentuk pengujian model prediksi yang “benar”.
Set validasi. Sampel digunakan untuk memvalidasi atau “membuktikan” suatu kalibrasi. Biasanya sampel
mempunyai karakteristik yang sama dengan sampel yang dipilih untuk kalibrasi. Seringkali sampel alternatif
atau sampel “ke-n” (diurutkan berdasarkan konstituen yang diminati) dialokasikan ke kumpulan data kalibrasi
dan validasi dari kumpulan sampel yang sama.
Sampel validasi. Lihat di atas.
Validasi silang. Suatu metode untuk menghasilkan statistik prediksi yang mana, berulang kali, sebagian
sampel dikeluarkan dari populasi kalibrasi, model dihitung berdasarkan sampel yang tersisa, dan residu
dihitung pada subset validasi. Ketika proses ini dijalankan beberapa kali, statistik prediksi dihitung pada
semua residu.
Validasi silang penuh menghilangkan satu sampel pada satu waktu dan dijalankan sebanyak n kali (jika
terdapat n sampel kalibrasi). Jika subset yang lebih besar dihilangkan, siklus validasi silang biasanya
dijalankan setidaknya delapan kali sebelum statistik dihitung. Terakhir, model dihitung menggunakan semua
sampel kalibrasi. Validasi Silang harus digunakan dengan hati-hati. Pertama, statistik validasi silang cenderung
optimis jika dibandingkan dengan statistik pengujian independen. Kedua, kehati-hatian harus diberikan jika
ada duplikasi dalam data kalibrasi (misalnya sampel yang sama dipindai pada beberapa instrumen atau pada
waktu yang berbeda) untuk selalu menetapkan semua salinan sampel yang sama ke segmen validasi silang
yang sama jika tidak, statistik yang sangat optimis akan dihasilkan. .
Keterlaluan. Penambahan dua suku banyak regresi dalam regresi linier berganda.
Akibatnya, ketika sampel yang tidak berada dalam set kalibrasi diprediksi, statistik seperti RMSEP atau SEP
jauh lebih buruk dari yang diharapkan.
faktor PLS. Lihat Tolong di atas.
Skor/plot skor. Plot yang mana skor pada satu faktor PC atau PLS diplotkan terhadap skor faktor PC
atau PLS lainnya. Paling berguna jika ID sampel atau nilai konsentrasi digunakan untuk mengidentifikasi
setiap titik dalam plot. Pola-pola dalam data kemudian dapat dilihat yang tidak terlihat jelas dari data mentah.
Ekspresi statistik
Bias. Perbedaan antara nilai rata-rata referensi dan nilai rata-rata yang diprediksi oleh model NIR.
DETIK. Untuk model kalibrasi apa pun, Kesalahan Standar Kalibrasi (SEC) adalah ekspresi perbedaan
rata-rata antara nilai prediksi dan nilai referensi untuk sampel yang digunakan untuk
mendapatkan modelnya. Dalam statistik ini dan statistik berikutnya, ekspresi perbedaan rata-rata
mengacu pada akar kuadrat dari jumlah nilai sisa kuadrat dibagi dengan jumlah nilai yang
dikoreksi berdasarkan derajat kebebasan, yaitu batas yang mencakup 68% kesalahan. Hal ini
diperlukan karena ada residu yang positif, ada pula yang negatif.
SECV. Untuk model kalibrasi, Standard Error of Cross Validation (SECV) adalah ekspresi
dari perbedaan rata-rata bias yang dikoreksi antara nilai prediksi dan nilai referensi untuk
subkumpulan sampel yang dipilih sebagai sampel prediksi selama proses validasi silang (lihat
''Validasi Silang" di atas ).
September. Standard Error of Prediction (SEP) adalah ekspresi perbedaan rata-rata bias
yang dikoreksi antara nilai prediksi dan nilai referensi yang diprediksi oleh model regresi ketika
diterapkan pada sekumpulan sampel yang tidak termasuk dalam penurunan model.
RMSEP. Root Mean Square Error of Prediction adalah ekspresi perbedaan rata-rata antara
nilai referensi dan nilai yang diprediksi oleh model regresi ketika diterapkan pada sekumpulan
sampel yang tidak termasuk dalam penurunan model. CATATAN: RMSEP mencakup segala bias
dalam prediksi.
RMSECV. Root Mean Square Error of Cross Validation (RMSECV) adalah ekspresi perbedaan
rata-rata antara nilai prediksi dan nilai referensi untuk subkumpulan sampel yang dipilih sebagai
sampel prediksi selama proses validasi silang (lihat “Validasi Silang” di atas). CATATAN:
RMSECV menyertakan bias apa pun dalam prediksi.
MANUAL PRODUKSI DAN KESEHATAN HEWAN FAO

1. Produksi unggas skala kecil, 2004 (E, F)
2. Praktik yang baik untuk industri daging, 2006 (E, F, S, Ar)
3. Persiapan menghadapi flu burung yang sangat patogen, 2006 (E, Ar, Se, Fe, Me)
3. Versi Revisi, 2009 (E)
4. Surveilans HPAI burung liar – panduan pengumpulan sampel unggas sehat, sakit, dan
mati, 2006 (E, F, R, Id, Se, Are, Ce, Ba**)
5. Burung liar dan flu burung – pengenalan penelitian lapangan terapan
dan teknik pengambilan sampel penyakit, 2007 (E, F, R, Ar, Id, Ba, S**)
6. Program kompensasi terhadap munculnya HPAI-H5N1 di Amerika Latin
dan Karibia, 2008 (Ee, Se)
7. Sistem informasi geografis AVE untuk bantuan di
surveilans epidemiologi flu burung berdasarkan risiko, 2009 (Ee, Se)
8. Penyusunan rencana kontinjensi demam babi Afrika, 2009 (E, F, R, Hy, Ka, Se)
9. Praktik yang baik untuk industri pakan – menerapkan Codex Alimentarius Code of
Praktik pemberian pakan ternak yang baik, 2009 (E)
10. Epidemiología Participativa ÿ Métodos para la recolección de acciones y data orientados a la la inteligencia
epidemiológica, 2011 (Se)
11. Praktik Manajemen Darurat yang Baik: Hal Penting, 2011 (E)
12. Investigasi peran kelelawar dalam munculnya penyakit zoonosis – Menyeimbangkan ekologi, konservasi dan masyarakat
kepentingan kesehatan, 2011 (E)
13. Pemeliharaan ternak ruminansia muda dengan pakan pengganti susu dan pakan starter, 2011 (I)
14. Penjaminan mutu laboratorium analisis pakan ternak, 2011 (I)
Ketersediaan: November 2011
Ar – Arab Multil – Multibahasa

C – Cina *
Tidak lagi dicetak
**
E – Bahasa Inggris Dalam persiapan
F – Perancis e
Publikasi elektronik
P – Portugis
R – Rusia
S – Spanyol Ba – Bangla
M – Mongolia Hai – orang Armenia
ID – Bahasa Ka – orang Georgia
Manual Produksi dan Kesehatan Hewan FAO tersedia melalui Agen Penjualan resmi FAO atau langsung dari Grup
Penjualan dan Pemasaran, FAO, Viale delle Terme di Caracalla, 00153 Roma, Italia.
MANUAL KESEHATAN HEWAN FAO

1. Pedoman Diagnosis rinderpest, 1996 (E)
2. Manual mengenai bovine spongifom encephalophaty, 1998 (E)
3. Epidemiologi, diagnosis dan pengendalian parasit cacing pada babi, 1998 4.
Epidemiologi, diagnosis dan pengendalian parasit unggas, 1998
5. Mengenali peste des petits ruminansia – manual lapangan, 1999 (E, F)
6. Pedoman Penyusunan Rencana Kesiapsiagaan Darurat Penyakit Hewan Nasional, 1999 (E)
7. Pedoman penyusunan rencana kontinjensi rinderpest, 1999 (E)
8. Pedoman Sistem Informasi dan Surveilans Penyakit Ternak, 1999 (E)
9. Mengenali demam babi Afrika – panduan lapangan, 2000 (E, F)
10. Manual epidemiologi partisipatif – metode pengumpulan intelijen epidemiologi yang berorientasi
pada tindakan, 2000 (E)
11. Manual persiapan rencana darurat demam babi Afrika, 2001 (E)
12. Pedoman Tata Cara Pemberantasan Penyakit dengan Cara Stamping Out, 2001 (E)
13. Mengenali bovine pleuropneumonia yang menular, 2001 (E, F)
14. Penyusunan rencana kontinjensi bovine pleuropneumonia yang menular, 2002 (E, F)
15. Penyusunan rencana kontinjensi demam Rift Valley, 2002 (E, F)
16. Penyusunan rencana kontinjensi penyakit mulut dan kuku, 2002 (E)
17. Mengenali demam Rift Valley, 2003 (E)
Temukan publikasi lainnya

di http://www.fao.org/ag/againfo/resources/en/publications.html
Setiap sektor industri peternakan, jasa terkait dan kesejahteraan hewan dan
manusia dipengaruhi oleh pemberian pakan hewan. Ketersediaan data analitik yang
akurat, andal, dan dapat direproduksi sangat penting untuk formulasi pakan yang
tepat. Hanya analisis yang andal yang dapat menghasilkan data ilmiah yang kuat.
Dokumen ini memberikan penjelasan komprehensif tentang praktik laboratorium

yang baik, prosedur jaminan mutu, dan contoh prosedur operasi standar yang
digunakan di masing-masing laboratorium spesialis. Penerapan praktik dan prosedur
ini akan membantu laboratorium dalam memperoleh pengakuan kompetensi yang
diperlukan untuk sertifikasi atau akreditasi dan juga akan meningkatkan kualitas
data yang dilaporkan oleh laboratorium analisis pakan. Selain itu, memastikan
praktik laboratorium yang baik yang tercantum dalam dokumen akan meningkatkan
keselamatan pekerja laboratorium. Dokumen ini akan berguna bagi para analis
laboratorium, manajer laboratorium, mahasiswa penelitian dan guru dan diharapkan
akan memungkinkan para pekerja di industri peternakan, termasuk industri
akuakultur, untuk menghargai pentingnya data yang terbukti andal dan pendekatan
penjaminan mutu yang terkait. Dampak tambahan dari penerapan dan penerapan
pendekatan-pendekatan ini adalah penguatan kemampuan penelitian dan pendidikan
mahasiswa lulusan lembaga penelitian dan pengembangan serta promosi lingkungan
perdagangan yang lebih baik antara negara berkembang dan maju. Hal ini akan
memberikan manfaat jangka panjang dan akan mendorong investasi pada industri
pakan dan lembaga penelitian dan pengembangan.

Panduan: Pakan Ternak Laboratorium Analisis Jaminan Kualitas Untuk

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Panduan: Pakan Ternak Laboratorium Analisis Jaminan Kualitas Untuk

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

Machine Translated by Google

PRODUKSI DAN KESEHATAN HEWAN FAO

JAMINAN KUALITAS UNTUK

Gambar kiri: ©FAO/Giuseppe Bizzarri

PRODUKSI DAN KESEHATAN HEWAN FAO

JAMINAN KUALITAS UNTUK

Jim Balthrop, Benedikt Brand, Richard A.

ORGANISASI PANGAN DAN PERTANIAN PERSERIKATAN BANGSA-BANGSA

Informasi untuk pengguna Manual ini

Kutipan yang direkomendasikan

aku aku aku

Prosedur penjaminan mutu dan praktik laboratorium yang baik 3

Menyiapkan sistem laboratorium yang berkualitas 5

Sistem kendali mutu dan mutu 5

Tujuan dan pedoman penjaminan mutu 6

Organisasi dan tanggung jawab laboratorium 7

Pelatihan dan kualifikasi personel 8

Prosedur analitis – Seleksi dan verifikasi 8

Prosedur Operasi Standar (SOP) 9

Pemeliharaan dan servis peralatan 10

Melaporkan data analitis 11

Akurasi dan sampel referensi 12

Sampel ganda presisi dan buta 12

Uji kemahiran (jaminan mutu eksternal) 14

Bagan kendali – Pengendalian proses statistik 15

Audit/Tindakan Korektif/Tinjauan Manajemen 18

Memvalidasi metode baru 21

Kualifikasi (pelatihan) analis laboratorium 27

Reagen dan bahan kimia 29

Daftar periksa audit mutu laboratorium 32

Menerima sampel laboratorium 40

Penanganan dan persiapan sampel pakan 42

Prosedur pembersihan peralatan gelas laboratorium 58

Prosedur umum – Penggunaan peralatan laboratorium yang benar 68

Abu tidak larut dalam asam klorida 88

Nitrogen dan perhitungan protein kasar – Kjeldahl 90

Nitrogen dan perhitungan protein kasar – Pembakaran 93

Serat Deterjen Netral (NDF) – Metode filtrasi 101

Pati – Enzimatik 106

Mengurangi gula – Metode Luff Schoorl 110

Energi kotor 115

Asam Lemak Volatil (VFA) dalam silase – Kromatografi gas 118

Asam laktat dalam silase – Metode enzimatik 121

Urea – Metode spektrofotometri 123

Kalsium – Metode spektrofotometri 130

Fosfor – Metode spektrofotometri 132

Zearalenon (ZON) – metode HPLC 154

Deoksinivalenol (DON) – metode HPLC 161

Kecernaan bahan kering – secara in vitro menggunakan cairan rumen 167

analisis NIR 172

Organisasi Pangan dan Pertanian

Jim Balthrop Leon de Jonge

Merk Benediktus Felisitas Jackson

Taubeneiche 10-12 Tas Pribadi 11222, Riddet Rd

Richard A Cowie Harinder PS Makkar

Manajer Penjaminan Mutu Senior Petugas Produksi Hewan

Gedung Ferguson Organisasi Pangan dan Pertanian

Aberdeen Viale delle Terme di Caracalla

Jürgen Danier c/ Direktur, Aunir

Institut Pertanian dan Perikanan

Unit Ilmu Hewan Scheldeweg 68

Ucapan Terima Kasih

mengapresiasi hal ini.