Multiplikasi Tunas Pisang Ambon Dua Tandan Pada Pemberian Kinetin Dalam Kultur in Vitro
Multiplikasi Tunas Pisang Ambon Dua Tandan Pada Pemberian Kinetin Dalam Kultur in Vitro
890
Vol 38, No 1 Januari 2021 : 11-17
Abstrak
Kultur in vitro dapat dilakukan untuk mengatasi kendala dalam penyediaan bibit pisang ambon dua tandan melalui
multiplikasi tunas. Penelitian ini dilakukan dengan tujuan untuk mengetahui respon multiplikasi tunas tanaman pisang
ambon dua tandan pada pemberian kinetin dalam kultur in vitro, untuk menentukan konsentrasi kinetin yang paling
efektif untuk memacu multiplikasi tunas tanaman pisang ambon dua tandan dalam kultur in vitro. Rancangan yang
digunakan adalah Rancangan Acak Lengkap (RAL), dengan perlakuan K0 0 ppm, K1 1 ppm, K2 2 ppm, dan K3 3 ppm,
masing-masing perlakuan diulang 3 kali. Parameter yang diamati adalah jumlah tunas, panjang tunas, jumlah akar, dan
panjang akar. Data yang diperoleh dianalisis menggunakan Analisis Ragam (ANOVA) pada tingkat kepercayaan 95%
dan 99% dan dilanjutkan menggunakan Uji Beda Nyata Jujur (BNJ) pada tingkat kepercayaan 95%. Hasil penelitian
menunjukkan bahwa pemberian kinetin memberikan pengaruh nyata terhadap panjang akar namun tidak berpengaruh
nyata terhadap jumlah tunas, panjang tunas, dan jumlah akar. Kinetin 2 ppm (K2) merupakan konsentrasi yang paling
efektif untuk parameter panjang akar.
Kata kunci: Kinetin, kultur in vitro, multiplikasi tunas, pisang ambon dua tandan.
11
Multiplikasi Tunas Pisang Ambon … Hardiyati, Budisantoso dan Safia
tunas dari 1,30 menjadi 4,70 tunas/eksplan dengan pencahayaan lampu TL terus menerus pada
(Muhammad et al., 2007). Selain itu, penggunaan 2 suhu 24°C selama 8 minggu.
mg/l kinetin menghasilkan persentase eksplan
Pengamatan dan Pengambilan Data
bertunas yang cenderung lebih tinggi jika
Data pertumbuhan yang diamati meliputi, (1)
dibandingkan dengan konsentrasi kinetin 4 mg/l
Jumlah tunas, diamati dengan menghitung jumlah
(Suminar et al., 2016). Selanjutnya perlakuan kinetin
tunas yang terbentuk secara aseptif di dalam LAF,
0,5 mg/l merupakan perlakuan terbaik untuk inisiasi
dilakukan pada minggu ke-8; (2) Panjang tunas
tunas pada 14,88 hari setelah tanam (Karyanti,
(mm), diukur menggunakan milimeter blok steril di
2017).
dalam LAF, dilakukan pada 8 MST; (3) Jumlah akar,
Tujuan dari penelitian ini adalah mengetahui
diamati dengan cara menghitung jumlah akar yang
respon multiplikasi tunas tanaman pisang ambon
terbentuk secara aseptif di dalam LAF, dilakukan
dua tandan pada pemberian kinetin dalam kultur in
pada minggu ke-8; (4) Panjang akar (mm) diukur
vitro dan menentukan konsentrasi kinetin yang
dengan menggunakan milimeter blok steril di dalam
paling efektif untuk memacu multiplikasi tunas
LAF, dilakukan pada 8 MST.
tanaman pisang ambon dua tandan dalam kultur in
vitro. Analisis Data
Data yang diperoleh dianalisis menggunakan
Metode Analisis Ragam (ANOVA) pada tingkat kepercayaan
Penelitian dilaksanakan pada 21 Desember 95% dan 99% kemudian dilanjutkan menggunakan
2017 sampai dengan 14 Maret 2018 di BNJ pada tingkat kepercayaan 95%.
Laboratorium Fisiologi Tumbuhan Fakultas Biologi
Universitas Jenderal Soedirman Purwokerto. Hasil dan Pembahasan
Penelitian dilakukan secara eksperimental
dengan Rancangan Acak Lengkap (RAL). Berdasarkan penelitian yang dilakukan
Perlakuan yang dicobakan adalah konsentrasi diperoleh hasil sebagai berikut.
kinetin meliputi : K0 (0 ppm), K1 (1 ppm), K2 (2
1. Respon Jumlah Tunas Tanaman Pisang
ppm), dan K3 (3 ppm). Setiap perlakuan diulang 3
Ambon Dua Tandan pada Pemberian Kinetin
kali. Bahan yang digunakan adalah planlet tanaman
pisang ambon dua tandan yang berasal dari Kebun Tabel 1. Analisis ragam jumlah tunas pisang ambon dua
Benih Hortikultura Salaman Magelang Jawa tandan pada perlakuan kinetin
Tengah, media MS, dan kinetin (6- Sumber Ftabel
furfurylaminopurine). DB JK KT Fhitung
keragaman 0,05 0,01
Cara Kerja Perlakuan 3 0,33 0,11 3,06 ns 4,07 7,59
Galat 8 0,29 0,04
Pembuatan Media Dasar Murashige and Skoog (MS Total 11 0,62
-1962) Keterangan :
Pembuatan media MS dilakukan dengan cara ns : Tidak berpengaruh nyata (Fhitung<Ftabel)
menimbang bahan-bahan yang diperlukan untuk
Hasil analisis ragam data jumlah tunas (Tabel
membuat larutan media. Media MS yang digunakan
1) menunjukkan bahwa perlakuan kinetin tidak
adalah 150 ml/perlakuan untuk 3 kali ulangan,
berpengaruh nyata terhadap jumlah tunas tanaman
sehingga masing-masing botol kultur berisi 50 ml.
pisang ambon dua tandan. Hal ini diduga kadar
Total media yang dibutuhkan sebanyak 600 ml
sitokinin endogen yang dihasilkan planlet yang
untuk 4 perlakuan. Media ditambah akuades sampai
ditanam telah mencukupi kebutuhan untuk
400 ml dan ditambahkan 12 g gula dan
menginduksi pembentukan tunas baru, sehingga
dihomogenkan. Media ditambah kinetin sesuai
perlakuan yang dicobakan tidak berpengaruh.
perlakuan. K0 sebagai kontrol 0 ml/ulangan, K1
Selain itu, sebagian eksplan mengalami browning
sebanyak 1 ml/ulangan, K2 sebanyak 2 ml/ulangan,
(pencoklatan) selama masa inkubasi yang
dan K3 sebanyak 3 ml/ulangan. pH media diukur
menyebabkan kemampuan multiplikasi eksplan
dan diatur hingga 5,83 dengan menggunakan 1 N
menurun. Browning dapat terjadi karena eksplan
NaOH atau 1 N HCl. Ditambahkan agar sebagai
tanaman pisang ambon dua tandan mengandung
pemadat sebanyak 1,2 g/perlakuan. Media
senyawa fenolik yang tinggi terutama polifenol
disterilisasi menggunakan autoklaf dengan suhu
oksidase (Ohanou et al., 2010). Perubahan warna
121°C dengan tekanan 0,15 MPa selama 20 menit.
menjadi coklat pada kultur terjadi karena akumulasi
Penanaman dan Inkubasi polifenol oksidase yang dilepas atau disintesis
Planlet tanaman pisang ambon dua tandan jaringan dalam kondisi teroksidasi ketika sel
dikeluarkan dari botol kultur menggunakan pinset. mengalami luka, sehingga jaringan yang diisolasi
Semua tunas yang telah terbentuk dipisahkan satu berwarna coklat. Menurut Nisa & Rodinah (2005),
persatu, dibersihkan dari media yang tersisa dan senyawa fenol sangat toksik bagi tanaman dan
bagian planlet yang telah mati dibuang. Tunas baru dapat menghambat pertumbuhan. Hutami (2008)
dengan tinggi 2-6 cm ditanam ke dalam media menambahkan toksisitas fenol kemungkinan
perlakuan secara aseptis, tiap botol ditanam 3 disebabkan oleh ikatan reversibel antara hidrogen
tunas. Selanjutnya botol kultur diletakkan pada rak dan protein. Penghambatan pertumbuhan yang
12
Majalah Ilmiah Biologi Biosfera : A Scientific Journal DOI: 10.20884/1.mib.2021.38.1.890
Vol 38, No 1 Januari 2021 : 11-17
tidak dapat diperbaiki terjadi ketika fenol teroksidasi Perlakuan kinetin dengan konsentrasi 2 ppm
menjadi senyawa aktif quinon yang tinggi yang menghasilkan rata-rata jumlah tunas terbanyak yaitu
kemudian memutar, memolimerase dan/atau 1,16 tunas/eksplan. Gambar 1 menunjukkan bahwa
mengoksidasi protein menjadi senyawa melanat sampai dengan konsentrasi 2 ppm pemberian
yang semakin meningkat. Pada penelitian tidak kinetin mampu meningkatkan rataan jumlah tunas.
dilakukan penambahan arang aktif maupun asam Selanjutnya pada penambahan kinetin >2 ppm
askorbat ke dalam media sehingga terjadi browning mengakibatkan penurunan rataan jumlah tunas
selama masa inkubasi. Menurut Latunra et al. eksplan pisang ambon dua tandan. Eksplan pada
(2017), penambahan arang aktif dalam media perlakuan K2 (Kinetin 2 ppm) dapat menghasilkan
perlakuan dapat menyerap fenol (Tisserat, 1979). jumlah tunas terbanyak (Gambar 2). Hal ini
Asam askorbat seringkali digunakan sebagai menunjukkan bahwa konsentrasi kinetin 2 ppm
antioksidan untuk mencegah dan mengurangi terdapat kecenderungan untuk menghasilkan jumlah
browning pada eksplan (Lisnandar et al., 2015). tunas terbanyak pada parameter ini. Jumlah tunas
Selanjutnya sumber eksplan yang digunakan yang dihasilkan eksplan cenderung sangat sedikit
sebagian besar berupa tunas besar (24 eksplan dari yaitu satu sampai lima tunas per eksplan. Hal ini
36 eksplan yang digunakan) yang memiliki diduga karena konsentrasi kinetin yang lebih tinggi
kemampuan multiplikasi rendah karena cenderung (Kinetin 3 ppm) telah melebihi konsentrasi optimal
tumbuh memanjang. Hal ini didukung oleh Ernawati eksplan tanaman pisang ambon dua tandan. Sesuai
et al. (2005) sumber eksplan dari anakan adalah dengan pernyataan Mahadi et al. (2013) rendahnya
berupa mata tunas besar yang akan tumbuh presentase tumbuh eksplan disebabkan oleh
menjadi tanaman sempurna dalam waktu yang tingginya konsentrasi kinetin. Selain itu, salah satu
singkat, sehingga kecepatan multiplikasinya rendah faktor yang menyebabkan tidak terbentuknya tunas
karena cenderung tumbuh membesar dan pada kultur eksplan pisang secara in vitro adalah
memanjang. Diketahui bahwa terdapat tiga jenis kurangnya sitokinin pada media kultur (Nisa &
tunas yang dapat diamati: 1. Tunas besar memiliki Rodinah, 2005). Seperti hasil penelitian Suminar et
panjang 4-10 cm dan menghasilkan akar; 2. Tunas al. (2017) pada multiplikasi tunas tanaman pisang
kecil memilliki panjang 2-4 cm dan tidak menunjukkan bahwa perlakuan kinetin pada
menghasilkan akar; 3. Tunas mikro memiliki konsentrasi rendah sebesar 1,50 mg/l dan
panjang tidak lebih dari 1 cm dan terlihat seperti konsentrasi tinggi sebesar 3,00 mg/l tidak
tonjolan kecil (Daungban et al., 2017). menghasilkan tunas sama sekali.
1,2
(tunas/eksplan)
13
Multiplikasi Tunas Pisang Ambon … Hardiyati, Budisantoso dan Safia
cenderung kecil pada eksplan yang menghasilkan yang dilakukan oleh Indriani (2014), penambahan
jumlah tunas yang banyak. Hal tersebut terkait kinetin dengan konsentrasi yang melebihi 15 µM (3
dengan nutrisi di dalam media yang diserap eksplan ppm) menyebabkan penurunan rata-rata panjang
untuk pertumbuhan dan digunakan untuk tunas. Hal ini diduga karena semakin tinggi kadar
pembentukan tunas baru. Sejalan dengan ZPT yang diberikan justru akan menghambat
pernyataan Suminar et al. (2017) panjang tunas pemanjangan tunas. Selanjutnya Yudha et al.
diduga dipengaruhi oleh jumlah tunas yang muncul. (2015) juga melaporkan bahwa semakin tinggi
Sehingga semakin sedikit tunas yang muncul, maka pemberian konsentrasi ZPT sitokinin akan
panjang tunas semakin meningkat Hal ini terjadi menghambat pembentukan tunas.
karena energi yang dibutuhkan untuk pemanjangan
3. Respon Jumlah Akar Tanaman Pisang
tunas digunakan untuk pembentukan calon tunas
Ambon Dua Tandan pada Pemberian Kinetin
lainya. Fitramala et al. (2016) menambahkan bahwa
eksplan dengan tunas tunggal atau eksplan dengan Tabel 3. Analisis ragam jumlah tunas pisang ambon dua
jumlah tunas sedikit tidak meningkat jumlahnya tandan pada perlakuan kinetin
tetapi memanjang dengan cepat. Ftabel
Sumber
DB JK KT Fhitung
keragaman 0,05 0,01
3,5
Tunas (mm/eksplan)
3,5
penambahan kinetin > 2 ppm mengakibatkan
(akar/eksplan)
3,0
penurunan rataan panjang tunas eksplan tanaman 2,5
pisang ambon dua tandan. Selain itu, perlakuan K2 2,0
(Kinetin 2 ppm) juga dapat menghasilkan tunas 1,5
terpanjang eksplan tanaman pisang ambon dua 1,0
tandan (Gambar 4). Hal ini menunjukkan bahwa 0,5
konsentrasi kinetin 2 ppm terdapat kecenderungan 0,0
untuk menghasilkan tunas yang panjang. Perlakuan 0 3 1 2
kinetin cenderung menghasilkan tunas yang Konsentrasi (ppm)
panjang namun jumlah tunas yang dihasilkan
cenderung sedikit. Rendahnya jumlah tunas yang Gambar 5. Histogram pengaruh pemberian kinetin pada
dihasilkan kemungkinan disebabkan karena rataan jumlah akar tanaman pisang ambon
pemberian kinetin melebihi konsentrasi optimal dua tandan.
(Kinetin 2 ppm). Sejalan dengan hasil penelitian
14
Majalah Ilmiah Biologi Biosfera : A Scientific Journal DOI: 10.20884/1.mib.2021.38.1.890
Vol 38, No 1 Januari 2021 : 11-17
15
Multiplikasi Tunas Pisang Ambon … Hardiyati, Budisantoso dan Safia
b) Konsentrasi kinetin 2 ppm (K2) merupakan Indriani, B.S. and Pukan, K.K., 2014. Efektivitas
konsentrasi terbaik untuk memacu multiplikasi Substitusi Sitokinin dengan Air Kelapa pada
tunas eksplan pada parameter panjang akar. Multiplikasi Tunas Krisan secara In
Vitro. Life Science, 3(2), pp.148-155.
Daftar Referensi
Karyanti, K., 2017. Pengaruh Beberapa Jenis
Agromedia., 2009. Buku Pintar Budidaya Tanaman Sitokinin Pada Multiplikasi Tunas Anggrek
Buah Unggul Indonesia. Bogor: Agromedia Vanda Douglas Secara In Vitro. Jurnal
Pustaka. Bioteknologi & Biosains Indonesia
(JBBI), 4(1), pp.36-43.
Anwar, N., 2007. Pengaruh Media Multiplikasi
Terhadap Pembentukan Akar pada Tunas
Latunra, A.I., Masniawati, A., Baharuddin, B. and
In Vitro Nenas (Ananas comocus (L.) Merr.)
Tuwo, M., 2017. Induksi Kalus Pisang
cv. smooth cayenne di Media Pengakaran.
Barangan Merah Musa acuminata Colla
Skripsi, Bogor.
dengan Kombinasi Hormon 2,4-D dan BAP
Apriani, R. and Kurnianingsih, T.M.R., 2016. secara In Vitro. Jurnal Ilmu Alam dan
Penggunaan BA pada Mikropropagasi Lingkungan, 8(15), pp.1278.
Pisang (Musa paradisiaca L.) Kultivar
Lisnandar, D.S., Fajarudin, A., Effendi, D. and
Kusto. JURNAL BIOLOGI TROPIS, 16(1),
Tambunan, I.R., 2015. Organogenesis
pp.33-40.
Bunga Aksis Pisang Bergenom AAB dan
Budiarti, D.D., 2017. Pengaruh NAA dan BAP ABB. Jurnal Hortikultura, 25(1), pp.1-8.
terhadap Pembentukan Planlet dari Tunas
Mikro Pisang Gebyar secara In Vitro. Lestari, E.G., 2011. Peranan Zat Pengatur Tumbuh
Skripsi, Purwokerto. Dalam Perbanyakan Tanaman Melalui
Kultur Jaringan. Jurnal AgroBiogen, 7(1).
Cahyono, B., 2009. Pisang: Usaha Tani dan
Penanganan Pascapanen. Yogyakarta: Mahadi, I., Wulandari, S. and Trisnawati, D., 2013.
Penerbit Kanisius. Pengaruh Pemberian NAA dan Kinetin
terhadap Pertumbuhan Eksplan Buah Naga
Daungban, S., Pumisutapon, P. and Topoonyanont,
(Hylocereus costaricensis) melalui Teknik
N., 2017. Effects of Explants Division by
Kultur Jaringan secara In Vitro. Jurnal
Cutting, Concentrations of TDZ and Number
Biogenesis, 9(1), pp.14-20.
of Sub-culture Cycles on Propagation of
‘Kluai Hom Thong’ Banana in a Temporary Marks, T.R. and Simpson, S.E., 2000. Interaction of
Immersion Bioreactor System. Thai Journal Explant Type and Indole-3-Butyric Acid
of Science and Technology, 6(1), pp.89-99. during Rooting In Vitro in A Range of
Difficult and Easy-To-Root Woody
Eriansyah, M., Susiyanti, S. and Putra, Y., 2014.
Plants. Plant cell, tissue and organ
Pengaruh Pemotongan Eksplan dan
culture, 62(1), pp.65-74.
Pemberian Beberapa Konsentrasi Air
Kelapa terhadap Pertumbuhan dan Muhammad, A., Rashid, H. and Hussain, I., 2007.
Perkembangan Eksplan Pisang Ketan Proliferation-Rate Effects of BAP and
(Musa paradisiaca) secara In Kinetin on Banana (Musa spp. AAA Group)
Vitro. Agrologia, 3(1), pp.57. ‘Basrai’. HORTSCIENCE, 42(5), pp.1253.
Ernawati, A., Purwito, A. and Pasaribu, J.M., 2005. Nisa, C. and Rodinah, R., 2005. Kultur Jaringan
Perbanyakan Tunas Mikro Pisang Rajabulu beberapa Kultivar Buah Pisang (Musa
(Musa AAB Group) dengan Eksplan Anakan paradisiaca L.) dengan Pemberian
dan Jantung. Bul. Agron., 2(31), pp.31-38. Campuran NAA dan
Kinetin. BIOSCIENTIAE, 2(2), pp.23-36.
Fitramala, E., Khaerunnisa, E., Djuita, N.R.D.R.,
Sunarso, H. and Ratnadewi, D., 2016. Nelimor, C., Sintim, H.Y., Kena, A.W. and
Kultur In Vitro Pisang (Musa paradisiaca L.) Akaromah, R., 2017. Using Surface
cv. Kepok Merah untuk Mikropropagasi Response Models to Evaluate the Effects of
Cepat. E-Journal Menara Perkebunan, Kinetin on Dioscorea alata Propagated in
84(2), pp.69-75. Vitro. Journal of Agricultural Science and
Technology,7(2017), pp.69-78.
Harahap, F., 2011. Kultur Jaringan Tanaman.
Medan: Unimed Press. Onuoha, I.C., Eze, C.J. and Unamba, C.I.N., 2011.
In Vitro Prevention In Plaintain Culture.
Harjadi, S.S., 2009. Zat Pengatur Tumbuh. Jakarta:
Online Journal of Biological Sciences,11(1),
Penebar Swadaya.
pp.13-17.
Hutami, S., 2016. Ulasan Masalah Pencoklatan
pada Kultur Jaringan. Jurnal Parida, S.R., Beura, S., Rout, S., Beura, R. and
AgroBiogen, 4(2), pp.83-88. Jagadev, P.N., 2017. Fast Protocol for High
16
Majalah Ilmiah Biologi Biosfera : A Scientific Journal DOI: 10.20884/1.mib.2021.38.1.890
Vol 38, No 1 Januari 2021 : 11-17
Frequency In Vitro Cloning of Banana Sobir, Rozyandra, C. and Darma, K., 2006. Studi
(Musa acuminate) cv. Grande Keragaman Morfologi Aksesi Pisang Koleksi
Naine. Journal of Applied and Natural dari Kabupaten Lampung Selatan.
Science, 9(1), pp.72-79. Floribunda, 3(1), pp.19-28.
Pierik, R.L.M. 1987. In vitro Culture of Higher Plants. Tisserat, B., 1979. Propagation of Date Palm
Netherlands: Martinus Nijhoff Publisher. (Phoenix dactylifera L.) in Vitro. J. Exp. Bot.
30, pp.1275-1283.
Perera, P.I., Hocher, V., Verdeil, J.L., Doulbeau, S.,
Yakandawala, D.M. and Weerakoon, L.K., Utami, R.S., Atra, R. and Marwanto, M., 2016.
2007. Unfertilized Ovary: A Novel Explant Multiplikasi Tunas Pisang Ambon Hijau
for Coconut (Cocos nucifera L.) Somatic pada Beberapa Konsentrasi BAP (6-Benzyl
Embryogenesis. Plant cell reports, 26(1), Amino Purine) dan NAA (α-Naphthalene
pp.21-28. Acetic Acid). Akta Agrosia, 19(1), pp.81-92.
Praseptiana, C., Darmanti, S. and Prihastanti, E., Yudha, H., Rahayu, S. and Hannum, S., 2015.
2017. Multiplikasi Tunas Tebu (Saccharumo Induksi Tunas Pisang Barangan (Musa
officinarum L. var. Bululawang) dengan acuminata L.) dengan Pemberian NAA dan
Perlakuan Konsentrasi BAP dan Kinetin BAP berdasarkan Sumber Eksplan Basal.
secara In Vitro. Buletin Anatomi dan Jurnal Biosains, 1(2), pp.13-17.
Fisiologi, 2(2), pp.153-160.
Yuliarti, N., 2010. Kultur Jaringan Tanaman Skala
Sunarjono, H., 2004. Budidaya Pisang dengan Bibit Rumah Tangga. Yogyakarta: Lily Publisher.
Kultur Jaringan. Jakarta: Penebar Swadaya.
Supriati, Y., 2010. Efisiensi Mikropropagasi Pisang
Kepok Amorang melalui Modifikasi Formula
Media dan Temperatur. Jurnal
AgroBiogen, 6(2), pp.91-100.
17