PENGANTAR KROMATOGRAFI

Oleh:
Purwadi, M.Si.

UNIVERSITAS TULANG BAWANG, 2009

 Purwadi, S.Si. M.Si.
abuaidhan@yahoo.com

Graduated from:
Master of Science with Cume Laude,
School of Pharmacy - Institut Tecnology of
Bandung, 2007
Bachelor of Science in Chemistry,
University of Lampung, 1999
Office:
NQCLDF in Bandar Lampung, Deputy of Technical Manager -
Testing Laboratoria for Therapeutics, Narcotics, Traditional
Drugs, and Complement Product
Supervisor for Cosmetic and Forensic testing Laboratory
Competence for:

Gas Chromatography
High Performance Liquid Chromatograpy
UV/Vis Spectrophotometry
Spectrophotodensitometry
Spectrofluorometry
Validation of Analysis Method
ISO/IEC 17025-2005: Management &
Technical Prerequirement for Testing
Labotorium
Materi : 14 kali
Ujian : 2 kali (UTS & UAS)
Total : 16 kali

Metode Belajar: Ceramah

Diskusi
Tugas

Kehadiran mahasiswa minimum 75%

Keterlambatan maximum 15 menit
Mahasiwa diharap aktif mencari literatur,bertanya dan diskusi
 Metode Pemisahan
Ilmu Pemisahan (Sparation Science):
Ilmu yang mempelajari gejala fisika dan kimia
yang terlibat dalam proses /pencapaian pemisahan,
pengembangan & penggunaan berbagai proses
pemisahan.
Definisi Pemisahan menurut Karger:
Cara kerja / pengerjaan sehingga suatu campuran dibagi
menjadi sekurang-kurangnya 2 fraksi yang berbeda
susunannya.
Definisi Pemisahan menurut Rony:

Kondisi hipotetik di mana setiap komponen kimia terisolasi

sempurna dalam daerah makroskopik yang terpisah

Hipotetik karena tidak mungkin mengisolasi komponen suatu

campuran secara sempurna.
Teknik Pemisahan
a. Ekstraksi Pelarut
b. Pengendapan
c. Kopresipitasi
d. Elektrodeposisi
e. Pertukaran ion
f. Adsorbsi/desorbsi
g. Volatilisasi (destilasi, sublimasi, dll)
h. Absorbsi
i. Kromatografi, mekanisme:
> adsorbsi
> Partisi
> pertukaran ion
> eksklusi
> pengayakan molekul
> afinitas 10000
j. Dialisis 15000
k. Elektroforesis 20000
l. ultrasentrifugasi
Cara memilih Teknik pemisahan

1. Pilih langkah terbesar pada step pertama jika mungkin

termurah. Misal ekstraksi pelarut
2. Pilih proses pemisahan yang didasarkan pada perbedaan
sifat fisika. Misal muatan (pertukaran ion), ukuran (filtrasi
gel, sentrifugasi)
3. Pilih proses dimana mengeksploitasi perbedaan terbesar
sifat fisika antara analit/produk dengan matriks/pengotor
4. Pilih langkah termahal pada saat terakhir, misal hplc
Tujuan Pemisahan kimia:
1. Telaah Fitokimia -struktur
Bahan alam

simplisia Penapisan fitokimia

Ekstraksi
Ekstrak
Fraksinasi
Fraksi
Pemisahan/ pemurnian
Isolat
Karakterisasi & Identifikasi
Struktur kimia
2. Isolasi Senyawa Model /Lead Compound
- biasanya punya efek
- tidak harus dominan

3. Bahan Baku sediaan

Hasil ekstrak dapat digunakan untuk
membuat sediaan

4. Uji farmakologi  pada hewan coba

 Bahan alam

Simplisia

Ekstrak Uji efek

Fraksi Fraksi

Sub-fraksi Sub-fraksi Sub-fraksi Sub-fraksi Uji efek

Isolat Isolat Isolat Isolat Uji efek

Dalam teknik pemisahan, selalu terdapat
fase-fase :
• Fase 1
• Fase 2

Kecuali : elektroforesis dan ultrasentrifugasi hanya

melibatkan satu fase.
 Nama fase dalam beberapa metode pemisahan

Metode Fase 1 Fase 2

Kromatografi Diam Gerak

Eksraksi Cair-Cair Rafinat Ekstraktan
(yang sudah ada) (yang ditambahkan)
Dialisis Retentat Difusat/dialisat
(di tabung) (yang didialisa)
Penggolongan Metode Pemisahan
A. Berdasarkan Wujud Fase
Fase 1 Fase 2 keterangan
Gas Gas Difusi termal
Cair Krom. Gas-Cair
Padat Krom. Gas-Padat
Cair Gas Destilasi
Cair Krom. Cair-Cair, Ekstraksi,
dialisis, ultrasentrifugasi.
Padat Krom. Cair-Padat,
pengendapan, elektrodeposisi,
kristalisasi, pemebrntukan
senyawa, inklusi
Padat Gas Sublimasi
Cair Leaching
dengan
Fase 1: fase awal /mengandung cuplikan sendiri
Fase 2: fase yang ditambahkan / yang terbentuk
B. Berdasarkan asal Fase 2

Fase 2 ditambah Fase 2

terbentuk
Kromatografi Destilasi
ECC Pengendapan
Dialisis kristalisasi
Elektroforesis Penghabluran
zona
Pengendapan
C. Berdasarkan lama fase berkontak

Kontak Kontak bertahap

sinambung
Kromatografi ECC (corong
ECC (Craig) pisah)
SOKLETASI
D. Berdasarkan arah fase berkontak

Lintas arus Lawan Arus

(Cross Current) (Counter
Current)
ECC (corong ECC (Craig)
pisah)

diam

Lawan arus: pada kenyataannya fase yang satu tidak

bergerak, fase yang lain bergerak  lebih tepat
disebut lawan arus semu (Pseudo counter current)
E. Berdasarkan jenis proses
Proses mekanis Pengayakan
Filtrasi/pengayakan
Sentrifugasi
Proses fisis Krom. Gas-Cair
Krom. Gas-Padat
Krom Cair-Cair
ECC
Destilasi, Sublimasi
Proses Kimia Pengendapan
Krom. Pertukaran
ion
Kromatografi

1. Merupakan salah satu teknik

pemisahan kimia
2. Berkembang pesat => penemuan
perangkat alat baru dan aplikasi
baru
3. Dikembangkan untuk analisis
kualitatif, kuantitatif, dan
preparatif
 Definisi Kromatografi
Menurut STAHL:
Metode fisikokimia untuk memisahkan campuran zat
berdasarkan perbedaan waktu huni (residence time) masing-
masing zat dalam fase gerak-fase diam
Senyawa A lebih dulu keluar karena waktu huni < senyawa B

Menurut Martin:
Metode Fisikokimia yang memisahkan suatu campuran
berdasarkan perbedaan perpindahan linarut dalam fase gerak-
fase diam
=> Senyawa A lebih dulu keluar karena bergerak lebih cepat
dari senyawa B
Sejarah kromatografi
Pemakaian Kromatografi:

Analitik:
= Kualitatif: Mengetahui identitatas suatu analit
= kuantitatif : menentukan kadar analit
Preparatif:
= untuk mendapatkan komponen murni
Penggolongan kromatografi:
a. Berdasarkan fase gerak
=> kromatografi cair: KLT, KK, KKt, KCKT
=> Kromatografi gas: KGC, KGP

b. Berdasarkan fase diam

=> kromatografi Cair-Cair: KKt, KCKT
=> Kromatografi Cair-Padat: KLT, KK, KCKT
c. Berdasarkan penampang fase diam:
=> kromatografi datar / planar: KLT, KKt
=> kromatografi kolom: KK, KGC, KGP, KCKT
d. Kromatografi berdasarkan proses/mekanisme yang terjadi

=> Partisi
=> Adsorbsi
=> Pasangan Ion
=> Kromatografi Penukar Ion
=> size eksklusi
=> Permeasi gel
=> Filtrasi gel
=> afinitas biologi
Teori Kromatografi

Pemisahan dalam kromatografi terjadi karena

 Perbedaan kecepatan migrasi dari berbagai komponen
dalam campuran
 Dengan kata lain, pemisahan terjadi karena perbedaan
waktu tambat masing-masing analit dalam fase diam
 Penyebaran komponen campuran sepanjang fase diam
Sampel
campuran
Arah aliran fase gerak

Kolom / fase diam

Analit dengan
migrasi paling cepat
Mengapa terjadi Perbedaan kecepatan migrasi ?

Dalam sistem kromatografi masing-masing analit akan

terdistribusi antara fase diam dan fase gerak sehingga
membentuk kesetimbangan.
Jumlah distribusi analit di antara 2 fase ditentukan oleh
konsntanta distribusi (Kd):
Kd A = [A]d / [A]g
[A]d = konsentrasi analit A dalam fase diam
[A]g = konsentrasi analit A dalam fase gerak
Jika Kd besar konsentrasi analit dalam fase diam lebih besar dari
pada dalam fase gerak
Senyawa A lebih lama tinggal dalam fase diam

KD besar KD kecil