Perubahan Biokimia Dalam Metabolisme Lipid

Dan Karbohidrat Pada Tikus Albino Jantan

Penderita Diabetes Obesitas
ARDI GANDA R

STAK CILEGON
 Obesitas adalah penumpukan lemak yang sangat tinggi di dalam tubuh sehingga
membuat berat badan berada di luar batas ideal. Kegemukan meningkatkan peluang
terjadinya berbagai macam penyakit, khususnya penyakit jantung, diabetes, apnea tidur
obstruktif, kanker tertentu, osteoarthritis dan asma. Kegemukan sangat sering disebabkan
oleh kombinasi antara asupan energi makanan yang berlebihan, kurangnya aktivitas fisik,
dan kerentanan genetik, meskipun sebagian kecil kasus terutama disebabkan oleh gen,
gangguan endokrin, obat-obatan atau penyakit psikiatri. Hanya sedikit bukti yang
mendukung pandangan bahwa orang yang gemuk makan sedikit namun berat badannya
bertambah karena metabolisme tubuh yang lambat. Rata-rata orang gemuk mengeluarkan
energi yang lebih besar dibandingkan orang yang kurus karena dibutuhkan energi untuk
manjaga massa tubuh yang lebih besar.
 Storlien dan timnya menunjukkan bahwa memberi makan tikus dengan
makanan yang tinggi lemak (59% energi) selama 24 hari menyebabkan
resistensi insulin seluruh tubuh dan menghambat insulin merangsang
pemanfaatan glukosa oleh hati, otot rangka serta jaringan adiposa. Serta
mereka menemukan bahwa memakan makanan berlemak yang menginduksi
resistensi insulin pada tikus dapat dicegah dengan memasukkan asam lemak
tak jenuh dalam makanan.
 Asam lemak dari jaringan adiposa merupakan pasokan utama untuk
plasma asam lemak. Hati menggunakan asam lemak plasma dalam
membangun lipid plasma dan lipoprotein yang berbeda, yang terlibat dalam
berbagai reaksi metabolis.

Penelitian ini adalah percobaan yang dilakukan pada tikus albino jantan
untuk mengetahui bagaimana obesitas mempengaruhi metabolisme
karbohidrat, lipid dan lipoprotein dan hubungannya dengan asam lemak
plasma, yang mencerminkan komposisi endogen dari adipose.
Hewan dan Perumahan Eksperimental
Tiga puluh tikus albino jantan dewasa secara acak diambil dari
kawanan yang dibesarkan di laboratorium rumah hewan di National
Research Centre, Dokki, giza, Mesir dengan berat badan rata-rata 120-130
gram . Hewan-hewan itu disimpan di kandang kaca transparan dan diletakan di
tempat yang cocok untuk menjaga makanan dan minuma.
Makanan dan Minuman
Makanan diberikan untuk memenuhi kebutuhan nutrisi
tikus. Komposisi makan yang diberikan ada pada table dibawah. Air dan pakan
tersedia sepanjang waktu selama periode percobaan.
 Basal et% Diet Di-
Bahan Eksperimental( 60%
lemak)
Tepung terigu 77 16.07
Meat Meal 6.0 20
Lemak hewani 3,5 57,93
gandum 10 3,0
Lemak 0,6 0,1
Metionin 0,4 0,4
Di- calciumphosphate 1,0 1,0
Sodium klorida 0,5 0,5
Campuran Vit.& Min. 1.0 1.0
Komposisi Nutrisi Yang Dihitung
Protein kasar 14,01 12,67
Energi (ME / KG) 3296.6 6239.23
Ekstrak Eter 5,27 60.02
Serat kasar 3,83 3,75
Abu 3,06 5,77
Lemak 1,09 0,81
Metionin 0,6 0,58
Kalsium 0,91 2,06
Fosfor 0,64 1.12
Desain eksperimental
Untuk penelitian ini, 30 tikus jantan dewasa albino dibagi menjadi 3 kelompok yang digunakan
sebagai berikut:

• Kelompok 1: hanya memberi makan makanan biasa dan berfungsi sebagai kelompok kontrol.

• Kelompok 2: diberi makan tinggi lemak (60% lemak) dan bertugas sebagai kelompok obesitas.

• Kelompok 3: diberi makanan lemak tinggi (60% lemak) dan diinduksi diabetes oleh injeksi Alloxan
(120 mg / kg berat badan, setelah 24 jam puasa) dan bertugas sebagai kelompok obesitas dan diabetes.

Perawatan pemberian makan untuk semua kelompok telah berlangsung selama 60 hari.
Analisa karakteristik
Berat badan dicatat secara individual tiap minggu sebelum diberi
makan. Konsumsi makanan dihitung setiap hari, karena perbedaan antara
jumlah makanan yang dimakan dan sisa makanan.
Pada akhir eksperimen dilakukan analisis darah, sekitar 2 ml darah
dikumpulkan melalui tabung kapiler heparin setelah puasa semalaman. Plasma
dipisahkan dalam tabung polietilen setelah sentrifugasi selama 10 menit pada
3000 rpm. Glukosa darah dianalisa segera, dan sisa plasma dibekukan untuk
analisis darah berikutnya.
Akhirnya, hewan-hewan itu dibius dan dibelah. Jaringan
adiposa hati, dan omintal dengan hati-hati dibedah dan ditimbang. Jaringan
yang diperoleh dihomogenisasi dalam homogenizer, dan dibekukan untuk
penentuan lemak mereka.
Metode dan Analisis Biokimia
Lipid total dalam hati atau jaringan adiposa diekstraksi dengan kloroform-
metanol (2: 1). pembagian dari ekstrak digunakan untuk estimasi trigliserida,
fosfolipid dan kolesterol total. Glukosa darah ditentukan sesuai dengan metode
enzimatik dari Siest. Plasma Insulin diperkirakan dengan metode radioimmunoassay
dari Yalow dan Bauman. Lipid total plasma ditentukan oleh metode kolorimetri
dengan campuran sulfophosphovanilic oleh Schmit dan Dervon . Lipid plasma
disiapkan pertama dengan metode Dole, kemudian dimetilasi, dikuantifikasi dengan
menggunakan Kromatografi Gas Cair komputerisasi (GLC).
Metode dan Analisis Biokimia
Asam lemak diidentifikasi dengan membandingkan waktu retensi mereka dengan
asam campuran standar, kandungan asam lemak individu dalam plasma dinyatakan sebagai
persentase dari total asam lemak yang diidentifikasi. Trigliserida dalam plasma dan ekstrak
jaringan ditentukan dengan metode gliserol fosfat oksidase oleh Fossati dan Prencipe.
Fosfolipid diperkirakan dalam plasma dan ekstrak jaringan sesuai dengan prosedur King dan
Woolton. Kolesterol total ditentukan dalam plasma sesuai dengan metode enzimatik Allain
dan diperkirakan dalam jaringan sesuai dengan metode Ratliff and Hall. Plasma High density
lipoprotein (HDL-C) diukur sesuai dengan metode Lopez-Virella. sedangkan plasma low-
denisty dan low density lipoprotein cholesterol (LDL-C dan VLDL-C) diperkirakan menurut
Glatter persamaan.
Analisis statistik
Data dianalisis dalam SPSS (Statistical Package for Social Sciences)
versi perangkat lunak 17 menggunakan t-test siswa. Variabel kualitatif
dinyatakan sebagai persentase dibandingkan dalam kelompok yang berbeda.
Hubungan antara variable dianalisis menggunakan koefisien korelasi
sederhana dari Armitage.
Hasil
Setelah 60 hari, tikus obesitas secara signifikan (P <0,05) berat badan,
glukosa darah dan insulin plasma lebih tinggi daripada tikus control, tikus
diabetes obesitas menunjukkan secara signifikan (P <0,01) nilai lebih tinggi
dari parameter dibandingkan kelompok lain.
Kelompok Berat badan Gula darah Insulin
Kelompok I 155,9 ± 3,59 96,350 ± 5,77 7,220 ± 0,42
Kelompok II 292,4 * ± 5.83 107,57 ± 5,92 * 11,63 ± 0,66 *
Kelompok III 336,9 ** ± 8,780 304,21 ± 5,73 ** 24,05 ± 1,25 **

Data * <0,05: Signifikan. ** <0,01: Tinggi signifikan

 Tabel dibawah menunjukkan bahwa nilai rata-rata total lipid hati, kolesterol total, dan
konsentrasi trigliserida secara signifikan meningkat (P <0,01) pada diabetes obesitas non
diabetes dan obesitas (P <0,01) dibandingkan dengan tikus kontrol, sedangkan fosfolipid hati
tidak berubah. Pada Lipid plasma, lipid total, kolesterol total, trigliserida dan fosfolipid, secara
signifikan meningkat pada tikus obesitas dan diabetes yang obesitas bila dibandingkan dengan
tikus kontrol.

Lipid hati Plasma Lipid

Kelompok T. Lipid Tri- Glyc Phos -Lipid T. Choles T. Lipid Tri- Glyc Phos -lipid T.Choles
Mg / g Mg / g Mg / g Mg / dl Mg / g Mg / g Mg / g Mg / dl
Kelompok I 43,99 ± 2,59 11,02 ± 0,83 22,43 ± 0,55 2,81 ± 0,10 392,9 ± 6.7 42,4 ± 3,44 117,3 ± 6,2 67,2 ± 4,52
Kelompok II 73,92 ± 4,67 ** 38,46 ± 2,70 ** 24,13 ± 0,74 4,45 ± 0,10 ** 589,5 ± 11,2 ** 90,79 ± 5,75 ** 242,4 ± 7,8 ** 99,3 ± 3,53 **
Kelompok III 81,88 ± 4,60 ** 43,72 ± 2,87 ** 24,24 ± 0,90 6,69 ± 0,17 ** 877,4 ± 11,7 ** 221,3 ± 5,11 ** 417,2 ± 3,1 ** 124,7 ± 4,96 **

Data * <0,05: Signifikan. ** <0,01: Tinggi signifikan

 LDL-C & VLDL-C meningkat secara signifikan pada tikus gemuk (bukan
diabetes dan diabetes). Sedangkan HDL-C secara signifikan berkurang pada
obesitas non diabetes (P <0,01) dan juga secara signifikan lebih rendah pada diabetes
obesitas (P <0,05) dibandingkan pada tikus kontrol (P <0,01).

Data * <0,05: Signifikan. ** <0,01: Tinggi signifikan

 Jaringan adiposa omental menunjukkan kandungan total lipid paling
tinggi pada tikus obisitas (P <0,05), sementara itu, nilai rata-rata kolesterol
total, trigliserida dan fosfolipid secara signifikan yang terendah adalah tikus
diabetes obesitas. Jaringan adipose coklat tikus obesitas non
diabetes menunjukkan peningkatan yang signifikan (P <0,05) pada total lipid
dan kandungan fosfolipid; sedangkan nilai rata-rata kolesterol total secara
signifikan lebih rendah (P <0,05) pada tikus obesitas & pada tikus obesitas
diabetes (P <0,01) bila dibandingkan dengan tikus kontrol.
 Adiposa Omental Adiposa coklat

Grup T. Lipid T. Chol Triglyc Pho.Lipid T. Lipid T. Chol. Triglyc Pho.Lipid

(mg / g) (mg / g) (mg / g) (mg / g) (mg / g) (mg / g) (mg / g) (mg / g)

Kelompok I 591,1 ± 37,2 3,76 ± 0,08 319,7 ± 9,49 1,83 ± 0,15 475.0 ± 19.8 2,60 ± 0,09 246,1 ± 5,08 8,39 ± 0,54
Kelompok II 818.0 ± 70.8 * 2,56 ± 0,36 * 164,4 ± 11,6 ** 1,31 ± 0,09 * 599,7 ± 35,2 * 2,01 ± 0,17 * 234,8 ± 8,99 14,7 ± 0,64 *
Kelompok III 782,8 ± 65,8 * 1,94 ± 0,21 83,12 ± 15,8 ** 1,20 ± 0,08 * 588,6 ± 52,8 * 1,69 ± 0,16 ** 262,2 ± 11,2 10,01 ± 1,7 *
**
 Persentase nilai rata-rata untuk sebagian besar asam lemak jenuh
plasma secara signifikan meningkat, kecuali untuk C15: 0.

• P: S ratio = Rasio antara jumlah tak jenuh ganda dan jumlah asam lemak jenuh.
• Data * <0,05: Signifikan. ** <0.01: tinggi signifikan
 Koefisien korelasi asam lemak dalam Plasma dan trigliserida hati di Tikus diabetes
dan non diabetes Obese
Trigliserida Obesitas Trigliserida tikus
non-diabetes diabetes obesitas
Asam lemak
SFAS: Jumlah asam lemak jenuh
Hati Plasma hati Plasma
MUSFAS: Jumlah asam lemak mono-jenuh
PUSFAS: Jumlah asam lemak tak jenuh SFAS - 0,334 -0,344 0,866 *** -0,377
ganda C 12: 0 -0.305 -0,403 0,422 -0,080
P: S ratio: Rasio PUSFAS:SFAS C 14: 0 -0.741 *** -0.269 0,654 ** -0.372
* <0,05: Signifikan . C 16: 0 0,294 0,344 -0,314 0,463 *
C 18: 0 -0,575 ** -0.144 0,166 -0.100
** <0,01: Tinggi signifikan. C 22: 0 0,394 0,042 0,225 0,079
* * < 0,001: Sangat signifikan MUSFAS -0,560 * -0.326 -0,784 *** 0,326
C 14: 1 -0,290 -0,634 ** -0,771 *** 0,465 *
C 16: 1 0,927 *** 0,025 0,212 0,317
C 18: 1 -0.021 -0,344 -0,401 0,123
PUSFAS 0,229 0,123 -0.649 ** 0,128
C 18: 2n-6 0,833 *** 0,007 -0,754 *** 0,243
C 18: 3n-6 -0,803 *** 0,108 -0,497 * -0.021
P:S ratio 0,318 0,304 -0,808 *** 0,270
Koefisien korelasi asam lemak plasma dengan indeks aterogenik dan rasio lipoprotein
pada tikus diabetes dan non-diabetes obesitas.

Asam lemak Tikus non-diabetes obesitas Tikus diabetes obesitas

SFAS: Jumlah asam lemak jenuh LDL-C+VLDL/ HDL-C/ HHDL-C/ LDL-C+VLDL/ HDL-C/ HHDL-C/
HDL-C LDL-C VLDL-C HDL-C LDL-C VLDL-C
MUSFAS: Jumlah asam lemak mono-jenuh
Jumlah SFA -0.253 0,071 0,342 -0,537 * 0,613 ** 0,691 ***
PUSFAS: Jumlah asam lemak tak jenuh ganda. C 12: O 0,061 0,075 -0,216 -0,707 *** 0,501 * 0,506 *
C 14: O -0,597 ** 0,582 ** 0,412 -0,222 0,090 0,415
P: S ratio: Rasio PUSFAS: SFAS C 16: O 0,040 -0,280 0,212 0,064 -0.144 0,032
C 18: O -0.371 0,203 0,437 0,037 0,292 -0,066
*<0,05: Signifikan. C 22: O 0,103 -0,344 0,241 0,239 -0,271 0,033
** <0,01: Tinggi signifikan.
Jumlah MUSFA -0,044 0,106 -0,166 0,204 -0,025 -0.092
*** < 0,001: Sangat signifikan C 14: 1 0,035 0,055 -0,044 0,325 -0,578 ** -0,370
C 16: 1 0,090 -0,089 0,0120 0,077 0,090 0,161
C 18: 1 -0.135 0,013 0,0108 0,253 0,082 -0,004

Jumlah PUSFA 0,252 -0,009 -0,456 * 0,027 -0.190 -0.273

C 18: 2 0,158 0,255 -0,019 0,146 -0,294 -0.373
C 18: 3 0,373 -0,271 -0,311 -0.120 -0.051 -0.132

P: S ratio 0,265 -0,055 -0,404 0,497 * -0,406 -0,702 ***

Kesimpulan
Kesimpulannya, Lemak tinggi atau tinggi karbohidrat yang diberi
makan tikus meningkatkan berat badan sebagai akibat dari perubahan dalam
metabolisme lipid.

Meskipun hasil percobaan pada tikus tidak dapat dieksploitasi secara

eksklusif pada manusia, namun penelitian ini menunjukkan bahwa substrat
dietetik memiliki dampak pada metabolisme tubuh, yang tidak diragukan lagi
menambah efek genetik dari individu yang memiliki kecenderungan.