STUDI OBAT PENYERAPAN

FAKULTAS farmasi UNIVERSITAS

JEMBER
 pengantar

• penyerapan usus mempengaruhi bioavailabilitas obat

oral.
• Beberapa metode telah digunakan untuk
mengevaluasi penyerapan usus.
– in vivo
– ex vivo
– in situ
– In vitro
 In Vivo Studi

• In vitro dan in teknik in situ memberikan informasi

tentang penyerapan, tetapi dalam metode vivo
memberikan informasi tentang faktor penting yang
mempengaruhi penyerapan.
• In vivo metode:
– Langsung: Tingkat obat dalam darah atau urin ditentukan
sebagai fungsi waktu.
– tidak langsung: Mengevaluasi respon farmakologi dari
obat yang terkait dengan jumlah obat dalam tubuh.
 vivo ex dan in situ

• Digunakan untuk meniru situasi di vivo.

• Memungkinkan prediksi yang lebih akurat dari
penyerapan obat usus manusia.
• permeabilitas paracellular disediakan oleh epitel
usus kecil, lapisan lendir hadir dalam model,
metabolisme obat dan ekspresi protein transportasi.
• Untuk pemilihan entitas kimia baru selama
penemuan obat.
 Ex Cara Vivo
• Membalik keluar usus sac
– Tes hewan berpuasa untuk jangka waktu 20-24 jam dan air
diperbolehkan.
– hewan dibunuh dan seluruh usus kecil eversi.
– Distal dari segmen terikat dan ujung proksimal melekat cannula.
segmen ditangguhkan dalam larutan mukosa yang mengandung
obat.
– Sebuah obat penyangga bebas kemudian ditempatkan di
kompartemen serosa.
– Untuk menentukan laju perpindahan obat, seluruh volume
larutan serosal dihapus dari kantung pada setiap interval waktu
dengan bantuan jarum suntik dan diganti dengan larutan buffer
segar.
– Jumlah obat yang menembus mukosa usus diplot terhadap
waktu untuk menggambarkan profil penyerapan obat pada
setiap pH tertentu.
• Keuntungan:
– Sederhana dan direproduksi
– Hal ini membedakan antara difusi aktif dan pasif.
– Hal ini menentukan wilayah usus kecil di mana penyerapan
optimal
• kekurangan:
– Karena usus dihapus dari hewan dan suplai darah normal,
permeabilitas membran diubah.
– Laju transportasi mungkin lebih lambat dari binatang utuh.
 Dalam metode Situ

• suplai darah hewan tetap karena itu utuh

penyerapan lebih realistis daripada teknik in vitro.
• usus Perfusi
– loop tertutup teknik perfusi usus
– Teknik loop terbuka usus perfusi (single pass)
• Usus Perfusi dengan Model Sampling Vena
 usus Perfusi
• Dalam percobaan loop tertutup, dijelaskan oleh
Doluisio et al., Solusi obat ditempatkan dalam
segmen yang terisolasi dari usus dan solusi luminal
dihasilkan dianalisis di pra-ditentukan titik waktu.
• Di loop terbuka atau melalui dan melalui 'teknik
perfusi, awalnya diusulkan oleh Higuchi dan rekan
kerja, terus menerus cairan aliran dipertahankan
bawah usus, dan permeabilitas usus diperkirakan
melalui perbedaan konsentrasi di inlet dan outlet
perfusate.
 usus Perfusi

• loop tertutup teknik perfusi usus

– Tikus berpuasa semalam dan memungkinkan akses ke air.
– Tikus yang dibius untuk melakukan laparotomi.
– Kanula yang dimasukkan melalui celah kecil di ujung
duodenum dan ileum.
– Solusi perfusi melewati segmen untuk menghapus isi usus.
– Setelah bersih, solusi obat diperkenalkan dan solusi lumen
adalah samplet pada interval waktu yang telah ditentukan.
• Loop terbuka teknik perfusi usus
– Eksperimental set-up dan kanulasi dari usus ini mirip
dengan loop tertutup teknik perfusi usus.
– Solusi obat perfusi terus menerus (melalui pompa infus:
0,1-0,3 ml / menit).
– Sampel yang dikumpulkan di outflow yang diuji untuk
konten obat. Estimasi permeabilitas ditentukan dengan
menghitung perbedaan konsentrasi antara inlet dan outlet
cairan.
 permeabilitas Koefisien

Peff = Q. ln (C1 - C0) / 2πrl

Peff = permeabilitas efektif
Q = laju alir mL / s
C1 = konsentrasi awal
C0 = akhir konsentrasi
r = jari-jari lingkaran usus (cm)
l = panjang lingkaran usus
 loop tertutup terbuka loop

secara teoritis Menentukan penurunan Menentukan penurunan

konsentrasi obat untuk konsentrasi antara inlet dan
segmen usus dari waktu ke konsentrasi keluaran di
waktu steady state

Volume cairan 5-10 ml statis lebih ˷30 3-100 aliran kontinu ml

menit lebih ˷30 min

Hidrodinamika Baik diaduk Model, yaitu Paralel model tabung, yaitu

konsentrasi Uniform dalam Konsentrasi penurunan
usus secara eksponensial ke
bawah panjang usus

Usus set-up Usus dihapus awalnya dan Usus umumnya berada di

dapat dikembalikan ke luar perut selama perfusi.
perut selama perfusi
 perfusi usus dengan metode pengambilan
sampel vena
• Teknik-teknik perfusi usus memfasilitasi
determintation langsung fraksi dosis serap.
• Teknik-teknik melibatkan kanulasi dan drainase vena
dari segmen dan donor pengganti darah usus melalui
pembuluh darah yang berkelanjutan.
 Dalam studi vitro
1. Membran sel Berdasarkan
sel difusi sel difusi Franz / Vertikal
Sisi ke sel difusi sisi
Ussing Ruang.
2. Model Kultur Sel Berdasarkan
– Caco-2, MDCK
 Franz difusi sel/ Sel difusi Vertikal

• Pengangkutan obat dari saluran pencernaan, kulit dll,

dapat dipahami & diprediksi dari prinsip-prinsip difusi.
• Reseptor dan donor kompartemen yang terbuat dari
pyrex kaca atau bahan plastik.
• Hewan atau kulit manusia bertindak sel sebagai
semipermeabel (penghalang).
• larutan sampel obat yang diambil dalam kompartemen
atas dan pelarut dalam kompartemen yang lebih rendah.
• Seluruh set ditempatkan di kamar mandi suhu konstan
hingga menjaga suhu 37 ± 0,2 C.
• Cairan di reseptor diaduk dengan menggunakan manik-
manik magnetik untuk mendapatkan distribusi seragam.
 Sel Transportasi horisontal
(Side by sel difusi sisi)
• Reseptor dan donor kompartemen yang terbuat dari
pyrex kaca atau bahan plastik.
• Hewan atau kulit manusia bertindak sel sebagai
semipermeabel (penghalang).
• sampel obat solusi dimasukkan ke dalam
kompartemen donor dan pelarut dalam
kompartemen reseptor.
• Seluruh set ditempatkan di kamar mandi suhu
konstan hingga menjaga suhu 37 ± 0,2 C.
• Cairan di reseptor diaduk dengan menggunakan
manik-manik magnetik untuk mendapatkan distribusi
seragam.
 Ussing Chamber
• Ussing ruang adalah suatu alat untuk mengukur sifat
membran epitel.
• Itu Ussing chamber menyediakan sistem untuk mengukur
transportasi ion, nutrisi, dan obat-obatan di berbagai
jaringan epitel.
• Epitel memiliki apikal atau sisi mukosa dan basolateral
atau serosal sisi.
• Studi permeasi dilakukan dengan segmen jejunum tikus
baru dipotong dipasang di Ussing ruang.
• Integritas membran usus dijamin selama pengujian
dengan mengukur transepitelial hambatan listrik.
 Ussing Chamber

• Donor kompartemen dan kompartemen reseptor

yang aerasi dengan oksigen dan diaduk
menggunakan magnet.
• Suhu dipertahankan pada 37 ± 0,2 C.
 Model kultur sel berdasarkan

• Sel-sel yang tumbuh di bawah kondisi terkontrol di luar

lingkungan alam mereka.
• Beberapa baris sel epitel berbudaya manusia atau hewan
dapat digunakan sebagai in vitro model penyerapan obat.
• The Caco-2 manusia garis sel kolon adalah yang paling
banyak digunakan.
• The Caco-2 monolayer sel manusia epitel sel
adenokarsinoma kolorektal yang dapat mengungkapkan
karakteristik morfologi dan fungsional dari enterosit usus
kecil.
• Keuntungan dari Caco-2 monolayer:
– Secara spontan membedakan untuk mengekspresikan
karakteristik morfologi dan fungsional dari enterosit kecil-
usus matang.
– resistensi transepitelial lebih tinggi dibandingkan dengan
HT 29-sel.
– Mengekspresikan berbagai enzim obat metabolisme.
• Batasan Caco-2 monolayer:
– Jaringan di villus mengandung lebih dari satu jenis sel.
– Tidak menghasilkan lendir dan air unstirred.
– Tidak ada P-450 enzim metabolisme obat.
– Mahal.
– Membuang-buang waktu.
– Perlunya LC / MS atau HPLC untuk kuantifikasi.
– Pengaruh P-gp
hambatan listrik epitel trans (Teer) pengukuran

• Pengukuran integritas monolayer sel Caco-2 (> 250

Ωcm2).
Papp = dQ / t (1 / CoA)
Papp = koefisien permeaility jelas
dQ / dt = laju transportasi obat (ug / s)
Co = konsentrasi donor awal (mg / mL)
A = luas permukaan lapisan tunggal (cm2)
 Model lainnya Co-terkait dengan Caco-2

• PAMPA Metode: Paralel Buatan Membran

Permeabilitas Assay.
• Hanya ukuran permeabilitas oleh difusi pasif.
• Hasilnya diukur dengan LC-MS / MS.
The Madin-Darby Canine Kidney (MDCK) Model
Sel
• Salah satu sistem monolayer sel yang biasa digunakan untuk
menilai penghalang usus manusia.
• Relatif mudah untuk kultur sel dan pemeliharaan assay.
• Tumbuh dan membedakan lebih cepat.
• Kerugian:
– baris sel MDCK berasal dari ginjal anjing
– Ekspresi transporter sangat berbeda dari usus manusia.
 Pertanyaan Tugas
1. Berapakah Nilai permeabilitas Suatu obat yang Baik?
Apakah SETIAP uji absorbsi memiliki Kriteria
permeabilitas Tertentu untuk review Suatu obat?
2. Rangkumlah Kelebihan & keterbatasan Metode uji
permeabilitas Yang Sudah disebutkan hearts geser di
differences!
3. Apa sajakah kegunaan uji permeabilitas DENGAN
Metode Yang Sudah disebutkan di differences? (3)
4. Untuk uji using sel Caco-2 bagaimanakah Cara
mengidentifikasi transportasi obat Yang Terjadi
Beroperasi paraselular?
5. Bagaimanakah Cara menentukan bahwa sel usus Yang
digunakan hearts uji membalik keluar usus kantung
ATAU Ussing ruang Masih layak?