Urutan Dideoxy Sanger

1. Empat reaksi sintesis DNA yang

menggabungkan nukleotida dideoksi
pemutusan rantai menyebabkan berakhirnya
urutan pada setiap A, T, C, atau G, masing
masing dilabeli dengan nukleotida terpisah

2. Setiap reaksi yang menghasilkan

fragmen dengan ukuran yang
meningkat, berakhir pada basa yang
ditentukan oleh reaksi contohnya : A, T,
C, atau G
3. fragmen diselesaikan pada gel
atau mesin pengurutan secara
otomatis

Sampel pasangan dari penganalisa genetik,

yang memisahkan fragmen DNA
berdasarkan ukuran dan pembacaan
fluoresensi pada akhir setiap fragmen (yang
berasal dari nukleotida pemutusan rantai)
 Urutan Seluruh Genome
1. DNA genom secara acak 2. “Contig” pola dibuat dan
dipotong dan dikloning Pada diurutkan secara acak. Urutan
E Coli secara menumpuk dengan
menggunakan software

3. Rangkaian hasil akhir

Ringkasan skematis dari metode urutan
seluruh genom generasi
Pada dasarnya, semua teknologi menggunakan prinsip yang sama:
memecah DNA  tambahkan primer / adapter  amplifikasi  pengurutan.

Dalam urutan seluruh genom, sampel DNA secara acak dipecah menjadi banyak
fragmen kecil yang kemudian diurutkan menggunakan metode rangkaian terminasi.

Beberapa fragmen DNA yang saling menumpuk yang dihasilkan dari berbagai
pengulangan proses ini kemudian dirangkai menjadi satu urutan kontinu tunggal
pada software
 Metode 454
1. DNA dipecah menjadi fragmen kecil

2. Adapter yang menempel pada fragmen DNA memungkinkan untuk

membuat urutan amplifikasi
3. Rantai DNA ditambahkan yang berisi urutan kecil bagian yang cocok dari
adaptor. DNA berikatan dengan untaian rantai-rantai, bertujuan untuk menjadi satu
fragmen rantai DNA

4. Rantai DNA diperkuat, dan untaian DNA

didenaturasi untuk membuat fragmen beruntai
tunggal
5. Rantai DNA tunggal ditransfer ke pelat 96-lubang dengan enzim polimerase

6. Nukleotida dimasukkan dalam gelombang, yaitu, hanya A, lalu T, lalu C, lalu G.

Penggabungan nukleotida diukur dengan

pelepasan cahaya ketika nukleotida dimasukkan

7. Pelepasan cahaya untuk setiap nukleotida yang

diplot untuk setiap fragmen, memungkinkan
penentuan urutan
 Teknologi Solexa

1. DNA rantai ganda dipotong

menjadi fragmen yang lebih
pendek

2. Adapters (urutan DNA pendek)

terikat pada fragmen

3. Fragmen ditempatkan pada

slide
4. Fragmen DNA melengkung dan terikat pada permukaan
slide

5. Fragmen DNA diperkuat, membentuk kelompok DNA

yang padat pada setiap ruang

6. Satu jenis untai dibuang untuk membuat urutan lebih

efisien. DNA polimerase dan nukleotida berlabel
ditambahkan.
7. Saat basis dimasukkan, laser digunakan untuk
mengaktifkan fluoresensi

8. Setiap kluster DNA dipantau oleh komputer dan

warna setiap klaster dicatat saat masing-masing
dimasukkan