ASSALAMUALAIKU

KELOMPOK 10

1. TRI LESTIANINGSIH
2. ULFAH NURUL
3. WINA WIRASWATI
4. YESI SEPTIANI DC
5. YUNIA AMALIA
6. YUSFI AZHAR
METODE MULTIPLEXING BRAFFORD
UNTUK ESTIMASI PROTEIN DALAM
MAKANAN FERMENTASI : SAUS
KEDELAI
 Abstrak
Protein untuk makanan, selain menyediakan nutrisi, juga harus
memiliki sifat fungsional tertentu yang memfasilitasi
pemrosesan dan berfungsi sebagai dasar kinerja produk.
Protein kedelai merupakan komponen utama dari diet
makanan dan semakin penting dalam diet manusia. Oleh
karena itu, digunakan metode cepat dan mudah untuk
penentuan kuantitatif konten protein total dengan sampel
multipleks dalam produk makanan seperti kecap atau
makanan fermentasi tradisional lainnya. Kami menggambarkan
prosedur bioassay (metode Bradford) untuk evaluasi
kandungan protein total dalam makanan. Metode ini
melibatkan pengukuran rasio efisiensi protein dalam kondisi
standar. Percobaan akan memberikan para peneliti cara ilmiah
untuk menentukan kualitas pretensi dari berbagai makanan
dan / atau suplemen kesehatan.
 PENDAHULUAN

• Produk kedelai dianggap makanan sehat, dan produk kedelai

terutama yang difermentasi merupakan makanan tradisional
yang penting di negara-negara Asia seperti Korea, Cina, dan
Jepang. Asupan diet produk kedelai yang difermentasi
dikaitkan dengan penurunan risiko penyakit kronis seperti
kanker dan penyakit kardiovaskular (Shon et al., 2007).

• Perusahaan produksi makanan perlu memantau kandungan

protein di beberapa titik di sepanjang rantai proses
makanan. Ada beberapa metode analitis yang tersedia
untuk penentuan kuantitatif kandungan protein seperti
metode berbasis titrasi, metode kromatografi dan metode
spektrofotometri.
• Pengujian protein Bradford adalah salah satu metode unik
dan sederhana yang biasa digunakan untuk menentukan
konsentrasi protein total berbagai sampel. Reagen Bradford
dapat digunakan untuk menentukan konsentrasi protein
dalam larutan. Prosedur ini didasarkan pada pembentukan
kompleks antara pewarna, Brilliant blue G, dan protein dalam
larutan. Kompleks protein-dye menyebabkan pergeseran
maksimum penyerapan pewarna dari 465 menjadi 595 nm.

• Konsentrasi protein sampel uji ditentukan dengan

perbandingan dengan serangkaian standar protein yang
diketahui menunjukkan secara reproduktif profil absorbansi
linier dalam pengujian ini. Dalam penelitian ini digunakan
protein yang paling banyak digunakan yaitu bovine serum
albumin (BSA) sebagai obat standar dalam penelitian
 Bahan dan Peralatan
Alat :
Micropipettor tips
Eppendorf tubes (1.5
mL)
Syringe filters (0.45
μm)
96-well microtiter
plate
Falcon tubes (15 mL)
Eppendorf tubes
Reagen :
Spectrophotometer
Bovine
(Tecan) serum
Vortex albumin (BSA) (Sigma-
Aldrich)
Reagen Bradford (Sigma-Aldrich)
Air sulingan
Sampel kecap tradisional (akan diuji
untuk penentuan protein total)
Reagen dan Larutan
Preparasi :
1. Siapkan 96 piring mikrotiter dengan tanda yang tepat pada sumur
untuk inokulasi sampel yang akurat
2. Siapkan berbagai 10 konsentrasi BSA standar yang berkisar dari
0,3-3,0 mg / mL menggunakan tabung Eppendorf berlabel tepat
3. Siapkan sampel kecap untuk diuji setelah menyaring melalui filter
syringe (0,45 µm)
[Kita dapat menggunakan segala jenis sampel makanan yang
menggantikan kecap]
[Jika sampel jika padat, maka kita perlu melakukan ekstraksi atau
penggilingan dengan pelarut yang tepat diikuti dengan
penyaringan]

Prosedur pemeriksaan :
1. Tambahkan 5 µL larutan standar dan sampel dalam piring
mikrotiter
2. Tambahkan 250 µL reagen Bradford di setiap sumur dengan
menggunakan pipet multichannel
3. Campurkan larutan dengan benar menggunakan pipet
4. Inkubasi pelat mikrotiter pada suhu kamar dalam kondisi gelap
selama 5 menit
5. Ukur absorbansi pada 595 nm
Pembahasan

Kecap adalah bumbu fermentasi tradisional yang

biasa dikonsumsi di Cina, Korea dan Jepang yang
mendapatkan popularitas dunia saat ini karena
berbagai sifat gizi (Lioe et al., 2010). Penelitian telah
menunjukkan bahwa kecap memiliki efek promotif
pada kesehatan manusia, seperti pada penyerapan zat
besi pada subyek manusia (Baynes et al., 1990). Kecap
adalah campuran protein hidrolisat dan bahan
karbohidrat yang dibuat oleh aksi enzim dan
mikroorganisme. Produk ini mengandung asam amino,
peptida, mengurangi gula dan senyawa rasa yang
terbentuk selama proses dan yang memberikan rasa
lezat dengan tindakan terapeutik dan farmakologi
ganda (Lioe et al., 2010).
Fermentasi kecap menggunakan enzim untuk menghidrolisis
protein dan pati, yang menghasilkan pembentukan sejumlah
zat seperti asam amino, dan gula. Beberapa peneliti
melaporkan 16-18% dari total protein dalam kecap yang
tersedia secara komersial. Di sini, dalam penelitian kami,
sampel tradisional saus kedelai menunjukkan kandungan
protein serupa yang berkisar antara 10-15%. Oleh karena itu,
dalam penelitian ini, kami mengembangkan dan
menunjukkan metodologi baru untuk menentukan
kandungan protein total dalam sampel kecap karena
prosedur yang dikembangkan memiliki keuntungan dari fitur
tambahan multiplexing yang tentunya akan membantu untuk
memproses sejumlah besar sampel pada saat yang sama.
sehingga dapat menghemat waktu dan ekonomis untuk
keperluan industri dan ilmiah. Protokol yang diusulkan dapat
diterapkan pada berbagai makanan dan / atau sampel klinis.
 
TERIMAKASIH