ISOLASI TRITERPENOID

METODE
1. Kulit kering B. platyphylla var. japonica (4,1 kg) diekstraksi dengan 80% EtOH (18 L 1 hari tiga kali) pada suhu
kamar dan disaring.
2. Filtrat diuapkan di bawah tekanan tereduksi menggunakan rotavapor untuk mendapatkan ekstrak EtOH (351
g), yang tersuspensi dalam H2O suling (2 L) dan berturut-turut pelarut dipartisi dengan CHCl3, EtOAc, dan n-
BuOH, menghasilkan 274 g, 25 g, dan 30 g residu, masing-masing.
3. Setiap fraksi dievaluasi untuk aktivitas antioksidan menggunakan DPPH assay radikal-scavenging.
4. Fraksi yang larut dalam EtOAc dan n-BuOH menunjukkan signifikan kapasitas pembilasan radikal dengan nilai
IC50 sebesar 10.21 dan 8,79 lg / mL, masing-masing, sedangkan fraksi terlarut CHCl3 menunjukkan aktivitas
lemah, dengan nilai IC50 78,26 lg / mL.
5. Untuk mengidentifikasi komponen antioksidan potensial, fraksi aktif, EtOAc dan fraksi larut n-BuOH, diselidiki
lebih lanjut
6. Fraksi larut EtOAc (25 g) dipisahkan oleh kolom silika gel kromatografi menggunakan sistem pelarut CH2Cl2-
MeOH-H2O (9: 3: 0,1) untuk memberikan tujuh fraksi (I-VII)
7. Fraksi II (5,3 g) adalah difraksinasi dengan kromatografi kolom fase terbalik (RP) -C18 dengan
70% MeOH dan 100% MeOH untuk memberikan enam sub-fraksi (II-1 – II-6)
8. Fraksi II-2 (0,7 g) menjadi sasaran silika kromatografi kolom menggunakan sistem pelarut
gradien CH2Cl2-MeOH (15: 1, 3: 1, 1: 1), dan 100% MeOH untuk mendapatkan 17 sub-fraksi (II-
2a – II-2q)
9. Fraksi II-2d (15 mg) dimurnikan oleh RP HPLC semi preparatif dengan sistem pelarut CH3CN-
H2O (56:44, laju aliran: 2 mL / menit) menggunakan Phenomenex Luna C18 (2) col umn (250 mm
10 mm i.d., 10 lm) untuk menghasilkan senyawa 2 (0,5 mg), 3 (0,8 mg), dan 5 (1,4 mg).
10. Fraksi II-2e (21 mg) adalah dimurnikan dengan RP HPLC semi preparatif menggunakan sistem
pelarut CH3CN-H2O (56:44) menghasilkan senyawa 4 (0,3 mg), 6 (0,6 mg), 7 (0,4 mg), dan 8 (0,3
mg)
11. Fraksi yang larut dalam n-BuOH (30 g) diaplikasikan pada kromatografi kolom silika
menggunakan sistem ventilasi sol gradien CH2Cl2-MeOH (10: 1), CH2Cl2-MeOH-H2O (7: 4: 1),
dan 100% MeOH untuk memberikan dua fraksi (B1 - B2). Fraksi B1 (4,6 g) dipisahkan dengan
kromatografi kolom silika dengan sistem pelarut gradien CH2Cl2-MeOH-H2O (7: 3: 0,5 dan 7: 4:
1) untuk mendapatkan lima fraksi (B1a - B1e)
12. Fraksi B1a (78,7 mg) adalah dimurnikan oleh RP HPLC semi preparatif dengan sistem pelarut MeOH-H2O (97: 3)
untuk memperoleh senyawa 9 (2,0 mg). Fraksi B1b (486,3 mg) dipisahkan oleh RP HPLC preparatif dengan gradien
sistem pelarut MeOH-H2O (50% MeOH - 100% MeOH, laju aliran: 5 mL / menit) menggunakan kolom Agilent Eclipse
XDB-C18 (250 mm 21,2 mm i.d., 7 lm) untuk menghasilkan delapan fraksi (B1b1 - B1b8).
13. Pecahan B1b2 (20,6 mg) dimurnikan dengan RP HPLC semi preparatif dengan a sistem pelarut MeOH-H2O (83:17)
untuk menghasilkan senyawa 13 (2,6 mg) dan fraksi B1b4 (20,6 mg) dimurnikan dengan RP HPLC semi preparatif
dengan sistem pelarut gradien MeOH H2O (93% MeOH - 85% MeOH dalam 30 menit) untuk mendapatkan senyawa 1
(0,8 mg), 10 (0,8 mg), 15 (0,6 mg), dan 16 (1,8 mg).
14. Fraksi B1b6 (31,2 mg) dimurnikan dengan RP HPLC semi preparatif dengan 85% MeOH menghasilkan senyawa 11
(7,0 mg), dan 14 (3,7 mg)
15. Pecahan B1e (646.2 mg) dipisahkan melalui RP HPLC preparatif dengan sistem ventilasi tunggal MeOH-H2O (88:12)
untuk menghasilkan enam fraksi (B1e1 - B1e6)
16. Fraksi B1e3 (10,3 mg) dimurnikan secara semi preparatif RP HPLC dengan sistem pelarut MeOH-H2O (83:17) untuk
melengkapi senyawa 19 (1,3 mg). Fraksi B1e4 (4,4 mg) dan B1e6 (9,4 mg) dimurnikan dengan RP HPLC semi preparatif
dengan pelarut sistem MeOH-H2O (78:22) untuk memberikan senyawa 18 (0,8 mg) dan senyawa 17 (2,7 mg), masing-
masing. Fraksi B2 (7,87 g) dialihkan ke kromatografi kolom silika menggunakan pelarut gradien sistem CH2Cl2-MeOH (5:
1), CH2Cl2-MeOH-H2O (7: 3: 0,1, 7: 4: 1), dan 80% MeOH untuk memberikan empat fraksi (B2a - B2d)
17. Fraksi B2b (210 mg) menjadi sasaran RP HPLC preparatif dengan sistem pelarut MeOH-H2O (9: 1) untuk
mendapatkan sembilan sub-fraksi (B2b1-B2b9). Fraksi B2b8 (9,7 mg) dimurnikan dengan RP HPLC semi preparatif
dengan sistem pelarut MeOH-H2O (88:12) untuk menghasilkan senyawa 12 (0,9 mg).
 HASIL
Isolasi yang dipandu oleh bioaktivitas dari senyawa-senyawa yang diisolasi
Ekstrak EtOH dari B. platyphylla var. gonggongan japonica ditampilkan aktivitas
antioksidan yang signifikan dalam pembersihan radikal DPPH uji, dengan nilai
IC50 9,85 lg / mL. Berdasarkan prinsip isolasi yang dipandu bioaktivitas, ekstrak
EtOH difraksinasi menjadi menghasilkan fraksi yang larut CHCl3, EtOAc, dan n-
BuOH. Diantara fraksi larut yang diturunkan, fraksi larut EtOAc dan n-BuOH
menunjukkan kapasitas pemulung radikal, dengan nilai IC50 10,21 dan 8,79 lg /
mL, masing-masing, sedangkan fraksi terlarut CHCl3 menunjukkan kapasitas
pemulungan radikal yang lemah, dengan nilai IC50 78,26 lg / mL. Hasil ini
mengarahkan kami untuk menyelidiki fraksi yang larut dalam EtOAc dan n BuOH
untuk senyawa antioksidan. Selanjutnya fraksinasi fraksi EtOAc yang larut
menggunakan kolom yang diulang kromatografi menghasilkan tujuh triterpenoid
yang dikenal (2-8). Demikian pula, investigasi kimia dari fraksi aktif n-BuOH aktif
mengakibatkan isolasi dan identifikasi triterpen baru (1), bersama dengan 11
triterpenoid yang dikenal (9-19).