Protein

Plasma
Darah Disusun oleh :
Maya Tamara
(G4C019013)
Aulia Risqi Fatmariza
(G4C019016)
Anisa Nur Hasanah
(G4C019024)
 Komponen Darah
Darah dapat dibagi menjadi dua bagian utama, plasma darah dan sel darah.
Banyak istilah medis mengandung hemo-atau hemato sebagai awalan, berasal dari kata
Yunani haima (darah). Darah didistribusikan ke seluruh organisme oleh sistem
peredaran darah dan ada tiga jenis sistem peredaran darah:
 Tidak ada sistem peredaran darah misalnya pada cacing pipih (Platyhelminthes).
 Sistem sirkulasi terbuka hadir di banyak invertebrata seperti moluska dan artropoda.
Cairan peredaran darah disebut hemolimf dan tidak ada perbedaan antara darah dan
cairan interstitial.
 Sistem sirkulasi tertutup ada di semua vertebrata. Darah tidak pernah meninggalkan
sistem pembuluh darah, sistem kardiovaskular, yang terdiri dari arteri, vena, dan
kapiler.
 Sejarah
Tabib Yunani Galen Leonardo da Vinci 1452- Jean-Baptiste Denys
(129-ca. 200) 1519 1625-1704
mengidentifikasi vena mengembangkan teori Transfusi darah pertama
berwarna merah gelap) komprehensif yang baru kali dari darah domba ke
dan arteri (darah lebih tentang sistem peredaran manusia.
terang dan lebih tipis dan darah Lalu terus berlanjut
menugaskan mereka hingga abad 19 akhir
fungsi yang berbeda dan Dokter Inggris William dengan keberhasian
terpisah. Harvey (1575-1657) melakukan transfusi
orang pertama yang darah dari vena ke vena.
Ibn-el-Nafis 1206-1288 menggambarkan dengan
menggambarkan secara benar dan sangat Landsteiner-1937
akurat sirkulasi darah terperinci darah dipompa mengidentifikasi faktor
dalam tubuh manusia. oleh jantung melalui Rhesus.
sistem peredaran darah.
Fungsi utama darah adalah sebagai berikut :
• Sistem transportasi berbagai jenis komponen
• Batang pertahanan pada remaja yang rentan seperti bakteri, virus, dan jamur, sehingga
menjaga keseimbangan antara organisme dan lingkungan
• Sistem penyegelan dan penyembuhan luka, tindakan pencegahan yang menyelamatkan
jiwa jika terjadi cedera:
• Keseimbangan distribusi panas ke seluruh tubuh, sehingga menjamin suhu tubuh yang
konstan.
Darah dapat dipisahkan dengan sedimentasi menjadi dua bagian utama :
1. Sel-sel darah, yang terutama disintesis di sumsum tulang, mewakili sekitar 45 seluruh
darah.
2. Plasma darah atau bagian cair dari darah mewakili sekitar 55% dari seluruh darah.
 Komponen

Sel Darah Plasma Darah

• Sel prekursor limfoid, • Air (90%)
yang dibedakan menjadi • Garam dan ion mineral
berbagai jenis limfosit • Komponen dengan berat
seperti limfosit B dan molekul rendah
limfosit T. • Komponen berat molekul
• Sel-sel prekursor myeloid, tinggi
yang selanjutnya • Gas dalam bentuk terlarut
dibedakan menjadi • Metabolit
eritrosit, leukosit dan  
trombosit.
 Protein Plasma Darah

• Plasma darah mengandung banyak komponen yang larut dalam air, di antaranya
adalah protein plasma darah. Pada prinsipnya, setiap protein yang ada dalam tubuh
dapat menjadi protein plasma darah untuk sementara waktu, tergantung pada kondisi
aktual tubuh, misalnya dalam kasus situasi patologis.
• Sebuah protein yang biasanya tidak ada dalam plasma darah dapat terakumulasi
dalam plasma darah dan berfungsi sebagai penanda diagnostik khas untuk penyakit
tertentu. Sebagian besar protein plasma membawa modifikasi pasca translasi (PTM),
baik secara permanen atau sementara, dan sebagian besar adalah glikoprotein,
sehingga memastikan kelarutan yang wajar. Protein plasma darah menunjukkan
berbagai fungsi dan memiliki sifat struktural yang berbeda.
Enter the title
 Fungsi Protein Plasma
• Protein disekresikan oleh jaringan padat yang bekerja dalam plasma
• Imunoglobulin adalah protein plauna yang khas, tetapi karena kompleksitasnya
yang luar biasa, mereka mewakili protein khusus
• Ligan reseptor jarak jauh terdiri dari hormon peptida klasik dan protein seperti
insulin atau erythropoietin
• Ligan reseptor lokal yang mengandung sitokin
• Penumpang sementara  termasuk protein non hormonal pada jalur melalui
plasma dari situs sintesis dan sekresi ke situs aksi, seperti protein lisosom
• Produk dari kebocoran jaringan  mengandung protein yang biasanya bertindak di
dalam sel yang dilepaskan ke dalam plasma setelah kematian sel atau kerusakan sel
• Sekresi menyimpang  Kelompok protein ini dilepaskan dari tumor atau jaringan
penyakit lainnya, yang biasanya tidak ada dalam plasma, dan karenanya mewakili
penanda kanker
• Protein asing  Protein ini berasal dari organisme menular dan patogen dan
dilepaskan ke dalam plasma.
 Saat ini protein
yang tedapat di
dalam plasma ada
banyak sekali
sejenisnya.
 Banyaknya jenis
protein plasma
karena sekarang
biomarka suatu
penyakit dapat
TIDAK MEMBAHAS
dilihat dari protein
PROTEIN BIOMARKA
yang terbentuk atau
TETAPI MEMBAHAS
protein yang
PROTEIN PLASMA
kadarnya berubah.
DALAM TRANSFUSI
DARAH ^-^

Anderson NL, Anderson NG. The human plasma proteome: history, character, and
diagnostic prospects. Mol Cell Proteomics. 2002;1(11):845–67.
 Pemeriksaan Protein
Plasma Darah

Sejarah
1978 : elektroforesis dua dimensi (2D)
1989 : kromatografi immunoaffinity, kromatografi penukar anion-berurutan dan ukuran-eksklusi, dan
MALDI-TOF berikutnya serta spektrometri massa perangkap ion elektrospray daring

Sampel
Darah vena dengan antikoagulan EDTA

Metode terbaru yang digunakan

Elektroforesisi gel dengan Nano-HPLC
dan spektrometri massa.
Pra Analitik
1. Persiapan Spesimen:
• Digunakan darah vena dengan antikoagulan EDTA dan kemudian diolah
menjadi plasma darah dengan centrifugasi 400 rpm selama 20 menit dengan
suhu 4oC. Apabila plasma darah tidak segera diperiksa, disimpan pada suhu
-80oC.
2. Persiapan alat dan bahan:
• Elektroforesis gel dan pencernaan protein Elektroforesis gel dilakukan dengan
pre-cast NuPage Gel Bis-Tris (4–12%) dan buffer MES atau MOPS
(Invitrogen, Carlsbad, CA) sesuai dengan instruksi. Atau, sampel plasma
dijalankan gel gradien Tris-glisin besar 4–20%; Gel diwarnai dengan
Colloidal Blue Staining Kit (Invitrogen); NH4HCO3 / etanol tingkat HPLC
absolut; buffer 50 mM NH4HCO3; 55 mM iodoacteamide dalam 50 mM
Buffer NH4HCO3; larutan trypsin (12,5 ng / μl trypsin dalam 50 mM
NH4HCO3); asam trifluoroacetic (TFA) 3%; acteonitrile 100%;
3. Metode :
• Elektroforesisi gel dengan Nano-HPLC dan spektrometri massa.
A. Analitik
1) Elektroforesis Gel
a) Melakukan persiapan alat dan bahan sebelum pemeriksaan. Elektroforesis gel dan
pencernaan protein Elektroforesis gel dilakukan dengan pre-cast NuPage Gel Bis-Tris
(4–12%) dan buffer MES atau MOPS (Invitrogen, Carlsbad, CA) sesuai dengan
instruksi. Atau, sampel plasma dijalankan gel gradien Tris-glisin besar 4–20%. Gel
diwarnai dengan Colloidal Blue Staining Kit (Invitrogen).
b) Memotong pita protein kecil-kecil dan dicuci setidaknya dua kali (masing-masing 20
menit) dengan 50:50 (v / v) 50 mM NH4HCO3 / etanol tingkat HPLC absolut.
c) Membuang supernatan setelah pencucian.
d) Melakukan dehidrasi pada setiap potongan gel dengan etanol absolut sampai buram,
putih dan keras.
a) Membelah ikatan disulfide dengan 10 mM DTT dalam buffer 50 mM NH4HCO3 (tidak disesuaikan
dengan pH) selama 60 menit pada 56°C.
b) Alkilasi sistein dilakukan dengan penambahan 55 mM iodoacteamide dalam 50 mM Buffer NH4HCO3
c) Menginkubasi sampel untuk 45 menit pada suhu kamar dalam gelap.
d) Potongan gel itu dicuci dua kali dalam buffer NH4HCO3 50 mM dan didehidrasi dengan etanol absolut
e) Potongan gel dikeringkan (Speed-Vac) dan tertutup dengan larutan trypsin (urutan kelas yang
dimodifikasi, Promega, Madison, WI, A.S.) (12,5 ng / μl trypsin dalam 50 mM NH4HCO3).
f) Pencernaan protein dilakukan pada suhu 37°C semalam dan dihentikan dengan penambahan konsentrasi
akhir asam trifluoroacetic (TFA) 3% (v / v).
g) Supernatan dikumpulkan dan irisan gel diekstraksi setidaknya dua kali dengan acteonitrile 100%.
h) Supernatan dikumpulkan dan asetonitril dihapus menggunakan sentrifugasi Speed-Vac.
i) Sampel diasamkan dengan TFA hingga pH ≤ 2,5, dimuat pada tips C-18 terkondisi, dan disimpan pada
suhu 4°C sampai digunakan untuk spektrometri massa.
2) Nano-HPLC dan Spektrofotometri Massa

Kromatografi cair nano dan spektrometri massa (nano-HPLC-MS / MS) dilakukan dengan
menggunakan Sistem Agilent 1100 nanoflow LC (Agilent Technologies), dilengkapi dengan pelarut
degasser, pompa nanoflow dan autosampler termostatt. Sistem ini terhubung ke 7 Tesla Finnegan linear
quadrupole ion trap Fourier transform (LTQ-FT) spektrometer massa dan LTQ-Orbitrap (Thermo Electron,
Bremen, Jerman). Peptida tryptic dipisahkan secara kromatografi pada ketinggian 15 cm dikolom (diameter
dalam 75 μm), dikemas dengan tangan berbasis metanol dari fase terbalik ReproSil-Pur C18-AQ 3 μm resin
(Dr. Maisch HPLC GmbH; Ammerbuch, Jerman) dan dipasang pada ion nanoelectrospray sumber. Peptida
diautoamplasikan secara otomatis pada kolom yang dikemas pada laju aliran 500 nl / menit dan dipisahkan
20 menit menggunakan gradien linier asam 13-34% (v / v) asetonitril / 0,5% (v / v) asetat. Elusi terjadi
secara mengalir laju 250 nl / mnt dan ionisasi dilakukan menggunakan aditerapkan tegangan 2,4 kV ke
emitor. Data diperoleh dengan menggunakan perangkat lunak Xcalibur.
 Pelaporan Hasil
Menurut Schenk, S., (2008) pada penelitian “A high confidence, manually validated human blood
plasma protein reference set”, spektrum MS3 secara otomatis diberi skor menggunakan perangkat
lunak MSQuant sesuai dengan algoritma yang menetapkan spektrum MS3 untuk urutan fragmen
peptida. MSQuant adalah alat validasi yang dikembangkan in-house yang mem-parsing identifikasi
Maskot dan memungkinkan untuk penilaian MS3, kuantisasi, dan verifikasi spektrum manual.
Schenk, S., Schoenhals, G. J., de Souza, G., & Mann, M. (2008). A
high confidence, manually validated human blood plasma protein
reference set. BMC medical genomics, 1(1), 41.
KOMPONEN DARAH YANG
MENGANDUNG
PROTEIN PLASMA
 Komponen darah yang
mengandung protein plasma dalam
transfusi darah:

Fresh Frozen
Cryoprecipitate
Plasma (FFP)

Fresh Frozen
Frozen Plasma Plasma
Cryosupernatant

Emma Archer, et al. 2012. Emergency Transfusions: What Are the Options?
https://www.vin.com/apputil/content/defaultadv1.aspx?pId=11349&catId=34740&id=5328370
  Cryoprecipitate disebut juga dengan
Anti Hemophilic Factor, berisikan
fraksi krioglobulin plasma, yaitu
Faktor VIII, Faktor IX, Faktor XI,
Faktor XIII, Faktor Von Willebrand,
Fibrinogen dan Fibronectin dengan
kadar yang signifikan.
 Cryosupernatant adalah cairan sisa dari
plasma yang sudah diambil
cryoprecipitate-nya.
Patcharee Sriswasdi, et al. 2013. Use of Cryosupernatant in a Pediatric Jehovah’s Witness Patient Undergoing
Scoliosis Surgery. http://www5.pedsanesthesia.org/meetings/2013winter/posters/uploads/323--NM-172.pdf
About FFP, Cryopresipitate, Cryosupernatant…

• Indikasi untuk transfusi fresh-frozen plasma (FFP), cryoprecipitate dan c

ryosupernatant plasma sangat terbatas.
• FFP tidak diindikasikan dalam koagulasi intravaskular tanpa perdarahan, h
anya direkomendasikan sebagai media pertukaran plasma untuk purpura tromb
ositopenik trombotik (yang mana cryosupernatant adalah alternatif yang me
mungkinkan), tidak boleh digunakan untuk membalikkan antikoagulasi warfar
in dengan tidak adanya perdarahan hebat, dan hanya memiliki tempat yang s
angat terbatas dalam profilaksis sebelum biopsi hati.
• FFP tidak diindikasikan untuk membalikkan defisiensi vitamin K neonatus a
tau pasien di unit perawatan intensif.
• Ketika digunakan untuk perdarahan bedah atau traumatis, FFP dan dosis cry
oprecipitate harus dipandu oleh studi koagulasi, yang mungkin meliputi pe
ngujian pasien dekat.

D F O’Shaughnessy, et al. 2004. Guidelines for the Use of Fresh-Frozen Plasma,

Cryoprecipitate and Cryosupernatant. Wiley Online Library.
 • FFP = Fresh Fro
zen Plasma,
• PT = Prothrombi
n Time, Tc = Th
rombocyts,
• PACU = Post Ane
sthesia Care Un
it,
• aPTT = activate
d Partial,
• Tromboplstine T
ime, TT = Throm
bin Time.

Natalie Urwyler, et al. 2009. Does point of care

prothrombin time measurement reduce the
transfusion of fresh frozen plasma in patients
undergoing major surgery? The POC-OP
randomized-controlled trial. ReasearchGate.
Natalie Urwyler, et al. 2009. Does
point of care prothrombin time
measurement reduce the transfusion
of fresh frozen plasma in patients
undergoing major surgery? The
POC-OP randomized-controlled trial.
ReasearchGate.
Basu, D., & Kulkarni, R. (2014). Overview of blood components and
their preparation. Indian journal of anaesthesia, 58(5), 529.
 Daftar Pustaka
 
1. Meyer, Harvey. Veterinary Laboratory Medicine. Philadhelpia, USA: Saunders; 2004.
2. Williams. A Course Manual In Nutrition and Growth. Melbourne: Australian VicE-Chonceloors-Committee; 1982.
3. Martini, Ober, Garrison, Weleh. Fundamentals of Anatomy and Physiology. 2nd ed. New Jersey: Prentice Hall, Englewood Cliffs; 1992.
4. Schaller J, Gerber S, Kaemfer U, Lejon S, Trachsel C. Human Blood Plasma Proteins: Structure and Function [Internet]. John Wiley & Sons;
2008. 538 p. Available from: https://books.google.co.id/books?
hl=id&lr=&id=Pw4xDPa0P_cC&oi=fnd&pg=PR5&dq=blood+plasma+proteins&ots=roKrAAYHCu&sig=ppTL_bko5N8DioaUjX3Zx7Ey-
VY&redir_esc=y#v=onepage&q=blood plasma proteins&f=true
5. Lazarovits J, Chen YY, Sykes EA, Chan WCW. Nanoparticle-blood interactions: The implications on solid tumour targeting. Chem Commun
[Internet]. 2015;51(14):2756–67. Available from: http://dx.doi.org/10.1039/C4CC07644C
6. Putnam FW. The Plasma Proteins V3: Structure, Function, and Genetic Control [Internet]. 2nd ed. Indiana: Academic Press; 1977. 630 p.
Available from: https://books.google.co.id/books?id=IuGnxKFPp9MC&dq=plasma+proteins&lr=&hl=id&source=gbs_navlinks_s
7. Anderson NL, Anderson NG. The human plasma proteome: history, character, and diagnostic prospects. Mol Cell Proteomics.
2002;1(11):845–67.
8. Pieper R, Gatlin CL, Makusky AJ, Russo PS, Schatz CR, Miller SS, et al. The human serum proteome: Display of nearly 3700
chromatographically separated protein spots on two-dimensional electrophoresis gels and identification of 325 distinct proteins. Proteomics.
2003;3(7):1345–64.
9. Basu D, Kulkarni R. Overview of blood components and their preparation. Indian J Anaesth. 2014;58(5):529–37.
10. Hughes GJ, Frutiger S, Paquet N, Ravier F, Pasquali C, Sanchez J ‐C, et al. Plasma protein map: An update by microsequencing.
Electrophoresis. 1992;13(1):707–14.
11. Omenn GS. The Human Proteome Organization Plasma Proteome Project pilot phase: Reference specimens, technology platform
comparisons, and standardized data submissions and analyses. Proteomics. 2004;4(5):1235–40.
12. States DJ, Omenn GS, Blackwell TW, Fermin D, Eng J, Speicher DW, et al. Challenges in deriving high-confidence protein identifications
from data gathered by a HUPO plasma proteome collaborative study. Nat Biotechnol. 2006;24(3):333–8.
13. Schenk S, Schoenhals GJ, de Souza G, Mann M. A high confidence, manually validated human blood plasma protein reference set. BMC
Med Genomics. 2008;1(1).
Thank
You