Rekombinasi Dna Dan Rekombinasi Makhluk Eukariot
Rekombinasi Dna Dan Rekombinasi Makhluk Eukariot
OLEH KELOMPOK 8:
PUTRI
MIFTAH
FAHRUR
ROHMAH
PENGERTIAN
• Teknologi DNA rekombinan merupakan teknologi yang
memanfaatkan proses replikasi, transkripsi dan
translasi untuk memanipulasi, mengisolasi dan
mengekspresikan suatu gen dalam organisme yang
berbeda. Melalui rekayasa genetika, akan dihasilkan
kombinasi baru dari materi genetik melalui penyisipan
molekul asam nukleat kedalam suatu sistem DNA
vektor (plasmid bakteri, virus dan lain-lain) dan
kemudian memasukkan vektor ini kedalam suatu inang
sehingga akan dihasilkan suatu produk gen dalam
jumlah yang besar.
Teknik Rekayasa Genetika
• (1) isolasi DNA,
• (2) amplifikasi atau perbanyakan fragmen DNA,
• (3) pemotongan DNA dengan enzim restriksi,
• (4) kloning gen,
• (5) penentuan urutan DNA,
• (6) hibridisasi,
• (7) analisis RFLP, dan
• (8) produksi protein rekombinan.
1. Isolasi DNA
• Isolasi DNA kromosom
DNA kromosom atau DNA genom dipisahkan dari
komponen-komponen sel lain. Membran sel dilisis
dengan menambahkan detergen untuk membebaskan
isinya, kemudian pada ekstrak sel tersebut
ditambahkan protease dan RNase sehingga yang
tinggal adalah DNA. Selanjutnya ekstrak tersebut
dipanaskan sampai suhu 900C untuk menginaktifasi
DNase. Larutan DNA kemudian di presipitasi dengan
etanol dan bisa dilarutkan lagi dengan air
• Isolasi DNA plasmid
Untuk memisahkan DNA plasmid, membran sel dilisis
dengan penambahan detergen. DNA kromosom dan
protein diendapkan dengan penambahan potasium.
DNA + protein + potasium yang mengendap dipisahkan
dengan cara sentrifugasi. Supernatan yang mengandung
DNA plasmid, RNA dan protein yang tersisa dipisahkan.
Kemudian ditambahkan RNase dan protese untuk
mendegradasi RNA dan protein. Akhirnya DNA plasmid
dapat dipresipitasi menggunakan etanol
• Isolasi RNA
RNA, terutama mRNA merupakan materi genetik
yang mengkode suatu protein. mRNA eukariot dapat
dipisahkan dari DNA dengan menggunakan
oligonukleotida dT. Atau RNA total juga dapat di
isolasi dari sel dengan menambahkan enzim DNase
yang berfungsi untuk mendegradasi DNA.
2. PCR (Polimerase Chain Reaction)