A.

Protein Sel Tunggal (PST) Protein sel tunggal (PST) adalah biomassa mikroba yang berbentuk protein sel

yang dihasilkan dari proses bioteknologi dengan memanfaatkan kemampuan mikroorganisme melakukan biotransformasi, yaitu mengubah substrat secara metabolik ke dalam massa sel didalam bioreaktor. Protein sel tunggal merujuk pada protein dalam sel mikroba yang dapat digunakan untuk pakan ternak atau konsumsi manusia. Istilah ini diciptakan untuk menggantikan 'protein mikroba' istilah lama yang pada akhir tahun enam puluhan dianggap kurang menarik. Isi protein 60-70% pada bakteri, 45-65% dalam khamir, dan 35-40% dalam kapang. Produksi dunia PST diperkirakan 2 juta ton per tahun. Kebutuhan untuk memproduksi protein sel tunggal didasarkan pada kelangkaan dan distribusi geografis yang tidak seimbang dari protein yang diproduksi saat ini. Keuntungan dan kerugian dari memproduksi protein sel tunggal : Keuntungan : a. Proses ini hanya memerlukan protein nabati atau hewani. b. Nutrisi yang dimiliki protein sel tunggal yang tinggi. c. Produksi protein sel tunggal tidak memerlukan lahan yang besar. d. Iklim tidak mempengaruhi produksi. e. Fleksibilitas dalam perancangan produksi karena beragamnya mikroorganisme dan substrat yang dapat digunakan. f. Memiliki kandungan lisin tinggi. Kerugian : a. Kandungan asam nukleat tinggi menyebabkan asam urat pada manusia. b. Beberapa komponen pada dinding sel tidak dapat dicerna dan beracun. c. Ketersediaan dan harga dari substrat yang tinggi. d. Kurangnya fungsi sebagai bahan makanan. e. Defisiensi asam amino bersulfur (metionin dan sistein). PST sebagai sumber protein bagi manusia masih sulit untuk diterima karena bau, rasa dan warna yang belum sesuai dengan selera, kandungan asam nukleatnya cukup tinggi dan dinding selnya keras. Untuk itu maka lebih tepat apabila aplikasinya sebagai sumber protein bagi makanan ternak. Mikroorganisme yang dapat digunakan sebagai penghasil protein yang telah diteliti para ahli adalah bakteri, ragi, jamur, dan ganggang. Mikroorganisme yang bersel satu yang digunakan sebagai sumber makanan untuk manusia mulai dikembangkan pada awal abad ke 19, khususnya golongan ragi Torula. Torula ini waktu yang singkat karena efisiensi mikroorganisme dalam memproduksi protein, dibandingkan dengan produksi

mula - mula ditemukan oleh Henneberg (1926) yang terkontaminasi pada pabrik ragi (Saccharomyces) di Jerman dan diberi nama Torula utilis. Ragi ini oleh Lodder J. Dan Kreger van Rij (1952) dimasukkan ke dalam genus Candida. Selama perang dunia II (1939 - 1948) ragi Candida utilis telah digunakan sebagai makanan oleh tentara Jerman. Berbagai bakteri, jamur, ragi dan ganggang telah digunakan untuk produksi protein sel tunggal. Bakteri termasuk Brevibacterium, Methylophilus methylitropous, Acromobacter delvaevate, Acinetobacter calcoacenticus, Aeromonas hydrophilla, Bacillus megaterium, Bacillus subtilis, Lactobacillus species, Cellulomonas species, Methylomonas methylotrophus, Pseudomonas fluorescens, Rhodopseudomonas capsulata, Flavobacterium species, Thermomonospora fusca dan lain-lain, beberapa ganggang yang digunakan adalah Chlorella pyrenoidosa, Chlorella sorokiana, Chondrus crispus, Scenedesmus acutus, Porphyrium sp dan Sprulina maxima. Jamur berfilamen yang telah digunakan termasuk Chaetomium celluloliticum, Fusarium graminearum, Aspergillus belerang, A.niger, A.oryzae, Cephalosporium cichhorniae, Penicillium cyclopium, Rhizopus chinensis, Scytalidium aciduphlium, Tricoderma viridae, Tricoderma alba, Paecilomyces varioti. Ragi seperti Candida utilis (torula ragi), Candida lipolytica, Candida tropicalis Candida novel, Candida intermedia dan Saccharomyces cerevisiae dan semua berbagai organisme yang telah digunakan untuk produksi PST. Mikroorganisme yang diinginkan dibudidayakan pada media di bawah kondisi steril. Organisme yang akan dibudidayakan harus memiliki sifat sebagai berikut yaitu: harus nonpatogenik untuk tanaman manusia dan hewan, harus memiliki nilai gizi yang baik, harus digunakan sebagai makanan dan pakan, tidak boleh mengandung senyawa beracun dan biaya produksi harus rendah. Faktor utama yang sangat mempengaruhi pembuatan protein sel tunggal yaitu konsentrasi substrat, umur inokulan dan proses fermentasi. Produksi protein sel tunggal hingga kini menggunakan mikroorgansime seperti kapang, khamir, alga dan bakteri yang ditumbuhkan pada media tertentu. Pemilihan jamur (kapang dan khamir) sebagai mikroba yang digunakan daripada bakteri disebabkan karena kandungan asam nukleat pada kapang dan khamir rendah. Kandungan asam nukleat yang terlalu tinggi dapat membahayakan kesehatan. Selain mempunyai kandungan asam nukleat yang rendah, kapang dan khamir lebih mudah untuk dipanen, tahan terhadap pH asam, mempunyai lisin yang tinggi dan sejak dahulu umum digunakan untuk fermentasi. Kandungan protein bahan ditentukan dengan menghitung kadar nitrogen total dalam bahan melalui cara Kjeldahl. Sampel ditimbang sebanyak 2 g dan dimasukan

ke dalam labu Kjeldahl. Kemudian ke dalam labu tersebut ditambahkan 1,15 g CuSO4.5H2O dan 5 g Na2SO4 yang telah bercampur rata. Selanjurnya ditambahkan 20 ml H2SO4 pekat dan didestruksi sampai cairan berwarna hijau. Setelah labu Kjeldahl dan cairannya menjadi dingin, cairan dimasukkkan ke dalam labu destilasi. Corong destilator diisi larutan NaOH 45% (b/v), dan destilator dipanaskan sampai semua ammonia menguap yang ditandai dengan perubahan warna cairan dalam labu destilator menjadi coklat kehitaman. Destilat diramoung dalam Erlenmeyer yang berisi 10 ml HCl standard dan indikator fenolftalin beberapa tetes. Kelebihan HCl dalam destilat dititrasi dengan larutan NaOH standard sampai warna merah berubah menjadi kuning. Selanjutnya kadar protein dihitung dalam persen sebagai berikut : Substrat yang digunakan dalam PST adalah molases dari pabrik gula atau hidrolisa pati, cairan sulfit dari pabrik kertas, hidropisat asam dari kayu, limbah pertanian, metana, methanol/etanol sebagai smber karbon bagi khamir, paraffin atau alkana, minyak bumi, gas pembakaran sebagai sumber CO2 bagi ganggang. B. Candida utilis Domain Kingdom Subkingdom Phylum Class Subclass Order Family Genus Scientific name : Eukaryota : Fungi : Dikarya : Ustilaginomycotina : Ustilaginomycetes : Ustilaginomycetidae : Ustilaginales : Ustilaginaceae : Candida : Candida utilis

Specific descriptor : utilis Torula adalah ragi yang secara resmi dikenal sebagai Candida utilis. Ragi ini memiliki sejumlah kegunaan praktis, dan juga dapat menjadi patogen dalam keadaan tertentu. Torula dapat ditemukan di seluruh dunia dalam berbagai pengaturan, memilih selulosa kaya substrat seperti kayu, sampah daun, dan bubur kertas. Di beberapa daerah, orang sengaja membudidayakan jamur ini untuk keperluan industri, biasanya pada substrat pulp kayu yang membuat ragi mudah untuk mengekstrak. Istilah "torula" referensi nama ilmiah sekarang ditinggalkan untuk ragi ini. Secara historis, torula dikenal sebagai utilis torula, sampai peneliti menyadari bahwa

ragi ini termasuk dalam genus Candida. Ragi juga telah melalui sejumlah nama ilmiah lainnya dan klasifikasi, mencerminkan kesulitan yang terlibat dalam mengklasifikasikan jamur banyak, tetapi istilah "torula" tampaknya terus dipakai hingga sekarang. C. Protein Sel Tunggal dari Candida utilis Candida utilis, yang dikenal sebagai ragi torula dan digunakan untuk bahan tambahan pakan ternak dan dikonsumsi manusia, dibuat dari bahan mentah yang beraneka macam. Ragi Candida sp. digunakan sebagai mikroba pilihan untuk produksi protein sel tunggal karena proteinnya tinggi (50-68%), kemudahan isolasi dan pertumbuhan pada media yang mengandung karbohidrat. Demikian pula, kebutuhan energi yang dianggap minim karena tumbuh sangat baik pada suhu kamar. Substrat yang digunakan adalah glukosa, karbohidrat molases, karbohidrat yg berasal dari hasil samping yang berasal dari pembuatan gula tebu ( Saccharum officinarum L.), etanol, cairan limbah sulfit dari pabrik kertas, hidrokarbon berupa parafin normal, limbah nanas. Pure Culture Products Division of Hercules, Inc., memiliki pabrik protein tunggal dalam Candida Ultis di Hutchinson, Minessota. Pabrik ini berkapasitas 6.800 ton setahun. Pabrik ini dioperasikan dengan sistem kontinyu dan dalam suasana steril. Sebagai sumber energi dan karbon digunakan etanol. Sel ragi diangkat terus menerus, dicuci, dan dikeringkan dengan semprotan. Produk ini dipakai untuk makanan. Selanjutnya dapat diproses untuk menghasilkan bumbu penyedap. Hasil biasanya sekitar 0,7 metrik ton ragi kering untuk tiap metrik ton etanol yang terpakai. Kandungan protein produk ini berkisar antara 40 % - 50 %. Pabrik berskala komersial di Amerika Serikat dan Eropa juga menghasilkan Candida Ultis dari cairan limbah sulfit. Dalam proses yang biasa, cairan sulfit, yang mengandung campuran gula, dibubuhi kapur. Lalu dididihkan secara terbuka untuk membuang sulfur dioksida, sulfit, dan senyawa sulfur lain yang dapat menghambat pertumbuhan ragi. Pengoperasian harus dalam suasana bersih tapi tak perlu steril. Produk diambil dengan sentrifugal, lalu dicuci dan dikeringkan. Dari cairan sulfit dapat diperoleh produk untuk makanan manusia atau pakan ternak, tergantung pada sistem proses dan kontrol kualitas produk yang diberlakukan. Dengan menggunakan cairan limbah sulfit, didapat hasil sekitar 1 metrik ton berat kering ragi untuk tiap 2 ton gula dalam cairan itu. Karbohidrat molasses (karbohidrat yg berasal dari hasil samping yang berasal dari pembuatan gula tebu (Saccharum officinarum L.)) yang didapatkan dari produk sugarbeet digunakan untuk menumbuhkan Candida utilis sebagai suplemen dari makanan manusia pada zaman perang dunia I dan II. Pada zaman sekarang, suplai dari molasses sekitar 10 juta ton per tahun

yang digunakan terutama untuk member makan hewan ternak karena masalah ekonomi. Tate dan Lyle Ltd mengembangkan sebuah prosses untuk membuat makanan hewan. D. Tahap Ferementasi dan Identifikasi a. Isolasi dan penyaringan ragi Sampel yang digunakan adalah sampel tanah mengandung bahan organik yang membusuk dalam kantong polietilen. Sekitar 1 g sampel tanahdilarut dalam air suling 100 ml disterilkan dalam 250 ml conical flask dan dikocok pada suhu 30oC selama 15 menit dalam water bath shaker. Satu ml suspensi tanah kemudian dipindahkan ke dalam 9 ml air suling steril dalam tabung tes untuk membuat seri pengenceran hingga 10-4 ml. Satu ml pengenceran masing-masing dituangkan ke dalam cawan petri steril yang berbeda dan kemudian ditambahkan 20-25 ml media potato dextrose agar dalam bentuk cair (451oC) ke setiap cawan petri dibawah kondisi steril. Setelah pencampuran yang tepat dan pendinginan pada suhu kamar, cawan petri kemudian diinkubasi pada suhu 30oC selama 72 jam dan dan koloni yang memiliki morfologi seperti ragi diambil pada bidang miring dan kemudian disaring pada cawan petri agar potato dextrose berdasarkan pertumbuhan yang cepat. b. Identifikasi Ragi Kultur ragi terpilih diidentifikasi melalui prosedur pemeriksaan mikroskopis. Kultur yang teridentifikasi ditumbuhkan pada miring PDA pada suhu 30oC selama 96 jam dan kemudian dipelihara pada media agar potato dextrose pada 4oC. c. Metodologi fermentasi Persiapan inikulum Inokulum dipersiapkan dengan memindahkan kultur lingkaran penuh Candida utilis dari agar potato dextrose (PDA) miring ke 50 ml potato dextrose broth (PDB) steril dalam 250 ml labu erlenmeyer. Cairan inokulasi diinkubasi pada suhu 30C dengan kecepatan pengocokan 120 rpm dalam water bath shaker selama 96 jam. pH dari media inokulum disesuaikan sebesar 5,5 dengan HCl 1N / NaOH sebelum sterilisasi pada 121oC selama 15 menit dalam autoklaf. Komposisi media pertumbuhan Untuk mempersiapkan media pertumbuhan, 100 ml ekstrak beras polish tanpa lemak telah diubah dengan garam-garam anorganik seperti K2HPO4 (0,25%), KCl (0,05%), CaCl2.2H2O (0,025%) dan MgSO4.7H2O (0,0025%) untuk menyediakan ion logam diperlukan

untuk pertumbuhan Candida utilis. pH media tersebut disesuaikan sebesar 5,5 dengan 1N HCl/NaOH sebelum sterilisasi. E. Penelitian terhadap Pembuatan Protein Sel Tunggal dari Candida utilis Telah dilakukan penelitian pemanfaatan buangan cair industri alkohol sebagai media pembuatan protein sel tunggal. Mikroba yang digunakan yaitu Saccharomyces cereviceae dan Candida utilis dengan faktor ubah suhu dan waktu fermentasi. Suhu fermentasi yang digunakan yaitu suhu udara luar, 30oC dan 34oC. Sedangkan waktu fermentasinya 12 jam, 18 jam, dan 24 jam. Hasil penelitian menunjukkan bahwa tidak ada perbedaan terhadap protein yang dihasilkan antara pengaruh mikroba, suhu dan waktu fermentasi yang dicobakan. Hasil protein tertinggi yaitu 0,264% pada fermentasi yang menggunakan Candida utilis dengan suhu dan waktu fermentasi 34oC dan waktu 24 jam.

Daftar Pustaka
Fardiaz, S. 1988. Fisiologi Fermentasi. Bogor: PAU-Lembaga Sumber Daya Informasi IPB. Hariyum, A. 1986. Pembuatan Protein Sel Tunggal. Jakarta: P.T. Wacana Utama Pramesti. Israelidis, J.C. 2001. Nutrition- Single Cell Protein, Twenty Years later. Nadeem, M. Biosynthesis of Protein Rich Biomass From Agricultural Waste by Newly Isolated Candida Utilis Pcsir-1. Roberts, T.A. dan F.A. Skinner. 1983. Food Microbiology: Advanced and prospects. London: Academic Press, Inc.