(33) Patogenesis penyakit virus. Patogenesis virus dapat didefinisikan sebagai metode yang menghasilkan penyakit virus di host.

Mayoritas cepat infeksi virus subklinis (tanpa gejala) dan pergi hampir tidak dikenali, Satu individu dapat menyerah pada penyakit dengan infeksi oleh virus, sementara yang lain mungkin sama sekali tanpa gejala saat terinfeksi oleh strain virus yang sama, faktor genetik, imunitas, nutrisi dan faktor lain mempengaruhi hasil infeksi.Studi tentang patogenesis virus dapat dipertimbangkan pada dua tingkat. Pertama, pada tingkat virus (parasit) dan, kedua, pada tingkat dari tuan rumah. Masuknya infeksi virus. Seperti dalam infeksi bakteri, virus mendapatkan masuk ke host dengan: Inokulasi (melalui kulit dan mukosa) Inhalasi (melalui saluran pernapasan) Penelanan (melalui saluran gastrointestinal). Lihat gambar 5.1. (Catatan: meskipun dalam bagian ini virus dianggap secara terpisah, mekanisme pertahanan tuan rumah sangat mirip beroperasi untuk mencegah masuknya semua patogen lain melalui portal ini.)

Gambar 5.1 Kulit dan mukosa. Kulit merupakan penghalang yang efektif terhadap infeksi virus sebagai selsel mati dari stratum korneum tidak dapat mendukung replikasi virus. Pelanggaran integritas kulit terjadi: Selama lecet disengaja atau luka jarum suntik (Selama vaksinasi, virus diinokulasikan ke dalam kulit) Melalui gigitan vektor arthropoda, misalnya nyamuk dan kutu (ini menginfeksi host baik karena air liur mereka yang terinfeksi sebagai akibat dari multiplikasi virus di dalam virus demam kuning pada arthropoda, misalnya nyamuk, atau karena mulut mereka terkontaminasi dengan virus)

 Sebagai hasil dari inokulasi jauh ke dalam jaringan subkutan dan otot, yang dapat mengikuti suntikan jarum suntik, tattoing, akupunktur, tindik telinga atau gigitan hewan.Sekali virus telah mencapai dermis yang memiliki akses ke pembuluh darah dan limfatik serta makrofag, sehingga infeksi dapat menyebar dengan mudah (Gambar 5.2). Orofaring dan saluran usus. Mekanisme pertahanan alami mulut dan saluran pencernaan yang mencegah virus masuk adalah: Terus menerus deskuamasi epitel Kehadiran air liur, lendir lapisan usus, asam lambung, empedu dan enzim proteolitik, yang semuanya menghambat masuknya virus nonspesifik Mekanis gerakan lidah, pipi, peristaltik, dll Mekanisme kekebalan tubuh (lihat Bab. 10). Saluran pernapasan. Sejumlah mekanisme pertahanan beroperasi untuk mencegah masuknya virus melalui saluran pernapasan. Ini termasuk: Sekresi lendir oleh sel goblet, hal ini, didorong oleh aksi sel epitel bersilia, membersihkan bahan asing dihirup (eskalator mukosiliar) IgA hadir dalam sekresi pernapasan Fagositik sel alveolar. Untuk mendapatkan akses ke saluran respiatory, virus perlu terutama dalam bentuk partikel aerosol atau tetesan. Faktor-faktor lain yang mempengaruhi infeksi virus pernapasan meliputi kelembaban dan suhu udara (misalnya influenza lebih sering terjadi pada bulan-bulan musim dingin) dan sifat fisik dan kimia dan struktur partikel virus. Saluran kemih. Vagina dan uretra dapat portal untuk masuknya infeksi virus. Faktor tuan rumah yang dapat mempengaruhi masuknya virus melalui rute ini meliputi: Alam deskuamasi mukosa Sekresi vagina dan lendir serviks, yang mengandung baik spesifik dan nonspesifik faktor pertahanan Intermiten pembilasan tindakan urin. Aktivitas seksual dapat menyebabkan air mata atau lecet epitel vagina atau trauma pada uretra, yang memungkinkan masuknya virus. Virus menular seksual termasuk HIV pada manusia, virus herpes, papillomavirus, dan kebanyakan virus hepatitis.

Gambar 5.2 (34) Mekanisme penyebaran virus dalam tubuh Virus, tidak seperti beberapa bakteri, benar-benar tidak memiliki organel transportasi, dan mereka menyebar ke seluruh tubuh oleh sejumlah rute. Ini termasuk: langsung lokal tersebar di permukaan epitel dan subepitelial. limfatik menyebar menyebar viraemic. sistem saraf pusat dan menyebar saraf perifer. Lokal tersebar di permukaan tubuh Sejumlah virus penyebab penyakit pada permukaan epitel tanpa penyebaran sistemik.Infeksi tersebut ditandai dengan: mereka lokal alam langsung virus shedding ke eksterior atau lumen (misalnya saluran pernapasan dan infeksi saluran pencernaan dengan rhinovirus dan rotavirus, masing-masing). Setelah virus menyerang mengatasi penghalang epitel itu terkena baris kedua dari

pertahanan tubuh dalam bentuk sel-sel fagositik, terutama histiosit dari seri makrofag.Ketika virus ini phagocytosed akan hancur tidak hanya oleh kondisi pH rendah dalam vesikel fagositik tetapi juga oleh enzymes.in phagolysosome tersebut. Beberapa virus telah mengembangkan mekanisme untuk menghindari jenis pertahanan dan, memang, meniru dalam makrofag.

Limfatik menyebar Partikel virus phagocytosed dan bebas bersembunyi di bawah epitel dengan cepat memasuki jaringan subepitelial / mukosa limfatik kapiler dan dibawa ke kelenjar getah bening regional (Gambar 5.2). Kelenjar getah bening melayani dua fungsi utama: mereka bertindak sebagai filter mikroba asing yang mendapatkan akses ke sistem limfatik mereka adalah situs di mana respon imun yang dihasilkan. Segera setelah memasuki kelenjar getah bening, virus yang terkena makrofag yang melapisi sinus marjinal. Jika virus ini phagocytosed, antigen disajikan ke sel-sel limfoid yang mendasari untuk membangkitkan respon kekebalan, pada keberhasilan yang tergantung hasil infeksi. Jika virus tidak aktif infeksi sembuh. Namun, organisme dapat menginfeksi makrofag dan limfosit jika respon imun pada tahap ini tidak memadai (misalnya, virus herpes, campak). Partikel virus yang lolos dari 'nodal menyaring kemudian dapat memasuki aliran darah melalui limfatik eferen dan duktus toraks (Gambar 5.2). (35) Ada gerakan dua arah konstan makrofag dan limfosit dari darah ke kelenjar getah bening dan sebaliknya. Jadi jika virus menginfeksi sel-sel di kelenjar getah bening tanpa merusak mereka, sel-sel dapat bertindak sebagai kendaraan penyebaran virus. Kadang virus menginfeksi dan berkembang biak di endothelium limfatik, lebih meningkatkan beban virus mencapai node dan karenanya sistem limfatik. Virus tampaknya tidak masuk ke pembuluh darah lokal secara langsung, kecuali mungkin saat ini rusak oleh trauma mekanis (luka jarum misalnya, gigitan). Peristiwa-peristiwa ini diikuti oleh respon inflamasi lokal yang mengubah hasil akhir dari infeksi virus, seperti dijelaskan dibawah. Viremia dan menyebar ke organ Masuknya virus ke dalam darah dan menyebar selanjutnya disebut viraernia. Setelah virus mencapai aliran darah, secara efektif disebarluaskan dalam hitungan menit. Episode pertama dari entrv virus ke dalam darah disebut viremia primer (Gambar 5.2). Virus ini kemudian dapat menjadi unggulan dalam berbagai organ jauh, setelah itu ada replikasi lebih lanjut di situs ini dan gelombang kedua dari masuknya virus ke dalam aliran darah - sebuah viremia sekunder. Hal ini biasanya lebih besar daripada viremia primer dan virus lebih mudah dideteksi dalam sampel darah. Para viremia sekunder sering menyebabkan infeksi

organ lain. Saya Virus mungkin bebas dalam plasma, dalam sel darah, atau keduanya (Gambar 5.3).Mereka dalam plasma dapat relatif mudah dibersihkan, tetapi virus dalam leukosit tidak mudah hancur. Jika leukosit yang terinfeksi tetap sehat itu mungkin menyebarkan infeksi ke bagian tubuh yang jauh. Setelah virus mencapai organ, lokalisasi tergantung pada kemampuan untuk menempel dan tumbuh dalam sel-sel endotel vaskular, dan pada fagositosis oleh sel retikuloendotelial. Sistem saraf pusat dan menyebar saraf perifer Selama viraemia, virus yang beredar menyerang sistem saraf pusat oleh lokalisasi dalam pembuluh darah:

HIV Gambar. 5.3 Pengangkutan beberapa virus penting dalam kompartemen yang berbeda dari darah. CMV, sitomegalovirus, EBV, virus Epstein-Barr, HIV, human immunodeficiency virus; HTLV-1, human T-cell leukemia virus tipe 1.

Gambar. 5.4 Para kemungkinan efek-efek virus pada sel inang.

meninges dan koroid pleksus, dengan bagian berikutnya melalui cairan cerebrospinal ke dalam jaringan saraf (misalnya virus gondok) sumsum tulang belakang atau otak, dengan infeksi langsung berikutnya (misalnya virus polio). Proses lokalisasi ditingkatkan bila ada fokus inflamasi terkait. Saraf perifer bertindak sebagai jalur efektif transmisi untuk beberapa virus, seperti virus herpes simpleks. Bagian virus dapat berupa sentripetal (dari ke dalam permukaan tubuh) seperti pada rabies, atau sentrifugal seperti di reaktivasi herpes simple'x (herpes labialis) atau varicella-zoster, modus transportasi ini adalah suatu proses yang lambat (mm / jam) dibandingkan denganviraemic menyebar. Empat rute kemungkinan trarismission virus pada saraf perifer yang dikenal: akson endoneural sel (e.g, sel Schwann) jaringan ikat ruang antara saraf perincural limfatik,

Virus dan sel inang interaksi

Setelah virus memasuki sel inang dapat berinteraksi dengan yang terakhir dalam dua cara utama: 1. Infeksi permisif, di mana ada sintesis virus komponen, perakitan mereka dan melepaskan. 2. Non-permisif infeksi, di mana infeksi dapat mengakibatkan transformasi sel, seringkali dengan integrasi DNA yang vital ke dalam genom inang. Permisif infeksi Infeksi sel oleh virus mungkin memiliki satu atau lebih gejala sisa (Gambar 5.4). Sekuel yang paling umum adalah untuk virus untuk bereplikasi dalam sebuah lirik atau infeksi cytocidal, menyebabkan sel-sel mati dan menghasilkan penyakit akut. Sebuah sel yang terinfeksi virus dapat mati sebagai akibat dari: 'menutup-down' protein sel inang dan sintesis asam nukleat lisis sel, dengan pelepasan virion progeni, (36)

pelepasan enzim intraseluler lvsosomal kerusakan membran sel.

Konsekuensi seluler merugikan dari infeksi virus, terutama yang diamati pada sel yang terinfeksi virus pada kultur jaringan, disebut efek sitopatik (lihat Bab. 7). Selama fase awal infeksi, sebelum kematian sel, perubahan karakteristik dalam membran sel yang terinfeksi dapat terjadi. Haernadsorption dan pembentukan sel raksasa adalah dua contoh. Haemadsorption. Dalam virus yang meninggalkan sel oleh tunas melalui membran plasma, glikoprotein virus (ditakdirkan untuk amplop) yang pertama dimasukkan ke dalam membran. Sebuah protein amplop umum adalah hemaglutinin; protein ini memungkinkan sebuah sel yang terinfeksi untuk menarik sel darah merah di permukaan, sebuah fenomena yang disebut haemadsorption. Haemadsorption dapat digunakan di laboratorium untuk mendeteksi sel-sel yang terinfeksi dengan virus tertentu (misalnya orthoviruses dan paramyxoviruses). Pembentukan sel raksasa. Beberapa virus, seperti herpes simplex dan HIV, mempromosikan fusi sel di mana membran sel yang berdekatan bergabung untuk menghasilkan sel raksasa multinuklear (polykaryons, syncytia). Penanda infeksi virus lainnya termasuk badan inklusi intranuklear atau sitoplasma. Non-permisif infeksi Kematian sel tidak iringan tak terelakkan dari replikasi virus. Kadang-kadang infeksi persisten mungkin terjadi di mana mungkin ada replikasi virus dalam sel, tetapi sel tetap hidup. Banyak virus dapat menghasilkan infecions persisten. Beberapa contoh

yang relevan adalah virus hepatitis B, papillomaviruses, herpesvirus dan retrovirus. Faktor-faktor yang mendukung kegigihan meliputi: rendahnya patogenisitas virus tidak efektif atau tidak ada antibodi-mediated atau sel-media, ed tuan respon imun cacat atau tidak ada produksi interferon infeksi limfosit dan macropliages oleh virus. Ada empat kategori infeksi persisten, laten, kronis, onkogenik dan lambat (Gambar, 5,5). Laten infeksi virus. Ini terjadi ketika asam nukleat virus bertahan dalam sel, biasanya diintegrasikan ke dalam DNA inang sebagai provirus (misalnya HIV, herpes simpleks, varicella-zoster). Infeksi herpes simpleks Seperti dapat dianggap sebagai klasik contoh infeksi laten, mekanisme ketekunan dijelaskan. Setelah infeksi akut virus herpes simplex perjalanan sepanjang serabut saraf sensorik (intra-aksonal transportasi) ke ganglion akar dorsal yang sesuai (misalnya herpes mulut virus perjalanan ke ganglion trigerninal). Selama latency, virus yang menular tidak terdeteksi, tetapi virus dapat sembuh dengan fragmen ganglion tumbuh dalam kultur jaringan. Munculnya kembali virus dicegah, mungkin karena menjadi tuan rumah imunitas yang diperantarai sel tetapi, saat ini berkurang, mungkin ada kambuhnya dan penumpahan virus dalam cairan dari daerah tersebut. Demikian pula, varicelia-zoster tetap laten selama bertahun-tahun dan secara spontan dapat muncul kembali sebagai zoster (shingles) pada dermatom yang diberikan oleh ganglion sensorik tertentu di mana virus laten. Infeksi virus laten yang diaktifkan kembali terutama pada pasien immunocompromised, yang kemudian menderita infeksi dan mengeluarkan virus (lihat Bab. 30).

Gambar. 5.5 Mode infeksi virus, sebagai fungsi waktu (Infeksi onkogenik tidak ditampilkan).

Infeksi kronis. Ini terjadi ketika virus bertahan dalam jumlah di dalam tubuh dalam jangka waktu lama, dengan atau tanpa riwayat penyakit. Individu-individu yang terinfeksi kronis, yang sering tanpa gejala, disebut 'operator' dan merupakan sumber potensial yang penting infeksi bagi orang lain. Operator membuat proporsi yang signifikan tetapi tidak diketahui dari pasien yang diobati dengan gigi petugas kesehatan (lihat Bab. 36).Perbedaan utama antara infeksi kronis dan laten adalah bahwa virus terus terdeteksi di bekas tapi tidak di yang terakhir, Infeksi onkogenik. Infeksi persisten di mana faktor genetik dan perkembangan yang penting dalam menentukan apakah virus onkogenik tertentu dalam host yang diberikan (misalnya virus Epstein-Barr yang menyebabkan karsinoma nasofaring dan lymphonia Burkitt). Lambat infeksi virus. Ini adalah jarang, dengan bulan incubations abadi atau tahun,

menyebabkan cacat berat dan akhirnya kematian (misalnya subakut sclerosing panencephalitis, konsekuensi terlambat campak). Transmisi infeksi virus dan pengendalian infeksi Lihat Bab 36. Tuan penentu infeksi virus Hasil dari 'infeksi virus di host tidak hanya tergantung pada jenis dan virulensi dari virus tetapi juga pada faktor tuan rumah, termasuk: Status kekebalan - lihat Bab 10. konstitusi genetik. Faktor genetik sekarang diketahui mempengaruhi kerentanan terhadap infeksi oleh virus herpes, myxoviruses dan poxvirus. Kerentanan juga dapat dikaitkan dengan kehadiran reseptor sel inang yang sesuai pada sel target.
(37)

Usia. Beberapa virus (seperti gondong, polio, EBV atau hepatitis) cenderung menghasilkan lebih sedikit infeksi berat pada bayi, sedangkan yang lain (seperti respiratory syncytial virus dan rotavirus) lebih parah pada anak-anak. Dasar untuk jenis ketergantungan usia infeksi virus tidak jelas. Lain-lain faktor. Status hormonal dan gizi dapat mempengaruhi hasil dari infeksi virus, seperti yang ditunjukkan oleh fakta bahwa sejumlah infeksi virus (misalnya polio, hepatitis A dan B) sering lebih parah selama kehamilan, dan kekurangan gizi protein secara dramatis memperburuk tingkat keparahan infeksi campak. Kebiasaan pribadi (misalnya merokok) dapat mempengaruhi hasil dari infeksi virus seperti influenza - mungkin karena gangguan bersihan mukosiliar di saluran pernapasan. Selanjutnya, diketahui bahwa olahraga berat dapat sebelumnya menonjolkan keparahan serangan berikutnya polio.

Patogenesis penyakit jamur Lihat Bab 22.

Postulat Koch Sebuah spektrum yang luas dari mikroba mendiami tubuh manusia. Beberapa penduduk tetap hidup sebagai commensals, lain adalah organisme sementara dan masih ada lainnya yang commensals yang berperilaku sebagai patogen dalam kondisi yang cocok (patogen oportunistik). Oleh karena itu ketika supervenes infeksi adalah penting untuk membedakan komensal dari patogen dalam rangka untuk mengidentifikasi dan menghilangkan yang terakhir. Masalah ini ditemui oleh Robert Koch, seorang dokter umum Jerman, pada tahun 1877 ketika ia mencoba untuk menentukan penyebab dari infeksi yang disebut

antraks pada sapi dan tuberkulosis pada manusia. Koch mendefinisikan kriteria untuk menghubungkan organisme sebagai penyebab penyakit yang spesifik. Kriteria ini, yang disebut postulat Koch, adalah sebagai berikut: 1. Organisme harus diisolasi dari setiap pasien dengan penyakit dan distribusi dalam tubuh sesuai dengan yang diamati lesi. 2. Organisme harus diisolasi dan berbudaya di luar tubuh (in vitro) dalam kultur murni. 3. Organisme yang murni harus menyebabkan penyakit pada sehat, susterhadap upaya hewan. 4. Organisme harus pulih dari diinokulasi hewan. Saat ini keempat postulat dilengkapi dengan yang lain: 5. Antibodi untuk organisme harus terdeteksi di serum pasien. Jelas, ini adalah kriteria ideal dan tidak selalu dicapai dalam praktek (misalnya M. leprae, basil kusta, tidak dapat dikultur secara in vitro), tetapi mereka memberikan suatu kerangka kerja untuk membangun peran actiological organisme dalam penyakit menular. Daftar Pustaka
FURTHER READING

Inglewski, BH, and Clark, LV (eds) (1990). The bacteria. Molecular basis of bacterial pathogenesis, %of. xi. Academic Press, London,

Minas, C, Dininiock, N, Nash, A, and Stephen j (1995). Mints' Pathogenesis ofinfectious disease (4th edn). Academic Press, London. Minis, C, Playfair, J, Roitt, 1, Wakelin, D, and Williams, R (1998). Pathologic consequences of infection. In Aledical microbiology (2nd edn), Ch. 12. Mosby, London.

Scully, C, and Samaranayake, IT (1992). Clinical virology in oral ?nedicine and dentistry, Ch. 3. Cambridge University Press, Cambridge.

Taussig, Mj (1984). Infection: bacteria. In Processes in pathology and mcrobiology (2nd edn), sect. 4. Blackwell, Oxford. (38)

Mikrobologi Diagnosis Mikrobiologi diagnosis melibatkan studi spesimen yang diambil dari pasien yang diduga menderita infeksi. Hasil akhirnya adalah laporan, yang harus membantu dokter dalam mencapai diagnosis definitif dan keputusan tentang terapi antimikroba. Oleh karena itu dokter harus berkenalan dengan teknik mengambil spesimen, dan memahami prinsip-prinsip dan teknik belakang analisis laboratorium. Diagnosis penyakit menular memerlukan sebuah nomor dari keputusan dan tindakan oleh banyak orang. Siklus diagnostik dimulai ketika dokter mengambil sampel miciobiological dan berakhir ketika dokter menerima laporan laboratorium dan menggunakan informasi untuk mengelola kondisi (Gambar 6. 1).Langkah-langkah dalam siklus diagnostik: Saya. Klinis permintaan dan penyediaan informasi klinis. 2. Pengumpulan dan transportasi spesimen yang tepat (s). 3. Laboratorium analisis. 4. Interpretasi laporan mikrobiologi dan penggunaan informasi.

Klinis permintaan Tahap pertama dalam siklus diagnostik terdiri dari spesimen dan formulir permintaan yang menyertainya. Berikut, yang mempengaruhi kualitas spesimen, perlu dicatat: Kondisi klinis pasien: jika pasien tidak menderita infeksi mikroba patogen sampling untuk kemudian akan sia-sia (misalnya tumor, trauma), Terapi antibiotik akan mengubah kualitas dan kuantitas organisme. Oleh karena itu spesimen harus dikumpulkan sebelum terapi antibiotik, jika mungkin; pengecualian adalah di mana pasien sakit parah, kekebalannya terganggu, atau tidak menanggapi antibiotik tertentu, dalam hal perlunya memperoleh laporan sementara sebagai panduan untuk pengelolaan selanjutnya membenarkan seperti tindakan. Penyediaan * informasi klinis Tes yang sesuai untuk setiap spesimen harus dipilih oleh ahli mikrobiologi sesuai dengan informasi klinis yang diberikan dalam formulir permintaan yang

menyertainya. Oleh karena itu informasi seperti usia, kondisi klinis utama, tanggal onset penyakit, terapi antibiotik terbaru / saat ini, alergi antibiotik dan sejarah spesimen sebelumnya semua penting untuk rasionalisasi investigasi dan harus disertakan dengan spesimen.

Pengumpulan dan transportasi spesimen Selalu mengumpulkan spesimen yang sesuai. Spesimen harus sesegar mungkin: banyak organisme (anaerob misalnya, virus yang paling) tidak bertahan lama dalam spesimen pada suhu kamar. Lainnya, seperti coliform dan staphylococci, dapat berkembang biak pada suhu kamar dan analisis berikutnya dari spesimen tersebut akan memberikan hasil yang menyesatkan. Transportasi spesimen dalam media yang sesuai (lihat di bawah), jika tidak dehidrasi dan / atau paparan organisme untuk kondisi aerobik terjadi, dengan kematian yang dihasilkan dan pengurangan dalam jumlah mereka. Media transportasi harus kompatibel dengan organisme yang diyakini hadir dalam sampel klinis (misalnya spesimen virus harus diangkut dalam media transportasi virus, yang tidak cocok untuk sampel bakteriologis).Transportasi spesimen di aman, wadah yang kuat untuk menghindari kontaminasi.

Laboratorium analisis Sebuah beragam spesimen yang diterima dan dianalisis oleh sejumlah metode di laboratorium mikrobiologi diagnostik. Proses analisis spesimen nanah dari abses gigi diberikan di bawah ini, sebagai ilustrasi (Gambar 6.2). 1. Buatlah smear spesimen, Pewarnaan Gram dan memeriksa dengan mikroskop.(Smear adalah dibuat dengan menyebarkan sejumlah kecil nanah pada slide kaca yang bersih dan memperbaiki panas.) 2. Menyuntik spesimen pada dua piring darah agar untuk kebudayaan di bawah kondisi aerobik dan anaerobik (lempengan-lempengan ini disebut sebagai pelat primarv). 3. Menetaskan pelat agar darah selama 2-3 hari pada 370C (karena kebanyakan patogen oral tumbuh lambat anaerob; untuk mengisolasi aerob masa inkubasi 18jam adalah memadai). 4. Periksa piring untuk pertumbuhan. Perhatikan bentuk dan ukuran jenis koloni yang berbeda untuk subkultur. Infeksi dapat disebabkan oleh satu organisme (monomicrobial) atau lebih dari satu organisme (polymicrobial), seperti dalam kasus mayoritas infeksi dentoalveolar, dimana sampel biasanya menghasilkan campuran dari dua atau tiga organisme.
(39)

Gambar 6.1 5. Isolasi patogen putatif (s) dengan subkultur pada agar darah pelat segar (s) (budaya organisme tunggal) dan inkubasi pada 370C selama 24-48 jam. 6. Panen budaya murni dan mengidentifikasi patogen menggunakan reaksi biokimia, media selektif atau reaksi antibodi spesifik (lihat di bawah). 7. Tes sensitivitas antibiotik dapat dilakukan pada pertumbuhan campuran yang diperoleh dari nanah (tes antibiotik primer) atau pada organisme murni (s) yang diperoleh pada langkah 6 (tes antibiotik sekunder) (lihat di bawah). Akhirnya, harus dicatat bahwa mikrobiologi dapat mengeluarkan laporan sementara setelah 2 hari tetapi laporan akhir mungkin membutuhkan waktu lebih lama (Gambar 6.2), Interpretasi laporan mikrobiologi dan penggunaan informasi Sementara interpretasi laporan mikrobiologi yang paling mungkin langsung, ada Situasi di mana harus menghubungi dokter mikrobiologi, misalnya untuk bimbingan dalam kaitannya dengan terapi antibiotik dan kebutuhan untuk pengambilan sampel lebih lanjut. Kerjasama

yang baik antara dokter dan ahli mikrobiologi sangat penting untuk mencapai terapi yang optimal. METODE LABORATORIUM Sejumlah metode dan teknik yang digunakan dalam diagnosis laboratorium infeksi, mereka dapat dikategorikan ke dalam luas: - Non-budaya metode. Ini adalah banyak dan bervariasi, dan termasuk - Metode mikroskopis (mikroskop cahaya, elektron mikroskop) - Deteksi mikroba dengan menyelidik untuk gen mereka. - Budaya metode. Klasik metode diagnosis, di yang - Media padat atau cair yang digunakan untuk bakteri dan jamur pertumbuhan - Sel kultur yang berasal dari hewan dan manusia digunakan untuk pertumbuhan virus. - metode imunologi. Ini digunakan untuk mengidentifikasi organisme - Mendeteksi antibodi dalam cairan tubuh pasien (misalnya serum, air liur), terutama ketika. organisme tidak dapat dibiakkan dalam media laboratorium.

Metode mikroskopis Cahaya mikroskop Terang-lapangan atau mikroskop standar). Secara rutin digunakan dalam diagnostik mikrobiologi), noda noda dari lesi yang diperiksa dengan tujuan minyak imersi (x100) menggunakan mata x10-sepotong, menghasilkan perbesaran x1000. Film basah diperiksa dengan tujuan kering (X40) (misalnya untuk menunjukkan motilitas bakteri). Gelap-tanah mikroskop. Spesimen diterangi miring oleh kondensor khusus sehingga sinar cahaya tidak masuk tujuan langsung. Sebaliknya organisme tampak terang, seperti sinar cahaya memukul mereka, terhadap latar belakang gelap. Mikroskop fase kontras. Meskipun jarang digunakan dalam diagnostik mikrobiologi, teknik ini dapat digunakan untuk menentukan Struktur rinci mikroba tak bercacat. Fluoresensi mikroskop. Teknik fluoresensi secara luas digunakan, terutama dalam

imunologi. Metode ini menggunakan prinsip emisi panjang gelombang cahaya yang berbeda ketika (40)

Gambar 6.2

cahaya dari satu panjang gelombang pemogokan objek neon. Sinar ultraviolet biasanyadigunakan, dan bakteri atau sel yang diwarnai dengan pewarna fluorescent sepertiauramine, misalnya, untuk mendeteksi antigen mikroba dalam spesimen yang terakhiradalah 'ternoda' dengan antibodi spesifik ditandai dengan pewarna fluorescent(immunefluorescence, lihat di bawah). mikroskop elektron Dalam gelombang cahaya mikroskop elektron digantikan oleh sinar elektron, yang memungkinkan resolusi organisme yang sangat kecil seperti virion, misalnya 0,001 lim.Mikroskop elektron dapat digunakan dalam diagnostik virologi, misalnya untukpemeriksaan langsung dari spesimen (misalnya rotavirus, virus hepatitis A). Sekitar satu juta partikel virus yang diperlukan untuk visualisasi tersebut. Gumpalan partikel virustersebut dapat diperoleh dengan mereaksikan sampel dengan mikroskop antibodiantivirus immunoelectron. Cahaya mikroskop dan noda Dalam mikroskop cahaya noda bakteri yang digunakan: untuk memvisualisasikan bakteri jelas untuk mengkategorikan mereka sesuai dengan sifat pewarnaan. (41)

Noda yang paling umum digunakan dalam diagnostik mikrobiologi adalah Gram noda. Teknik pewarnaan gram 1. Setelah panas-memperbaiki film kering (dengan lembut melewati nyala api), banjir dengan kristal violet selama 15 detik. Kemudian mencuci kelebihan. 2. Banjir dengan iodin Lugol selama 30 detik (untuk memperbaiki noda), mencuci kelebihan. 3. Langkah penting. Membuat tdk berwarna dengan aseton atau alkohol selama sekitar 5 detik. Bila tidak ada warna biru datang dari Pap itu, segera cuci dengan air. 4. Counterstain dengan carbolfuchsin encer selama 30 detik (atau netral merah selama 2 menit). 5. Wash.with air, dan noda kering. Karakteristik pewarnaan. Menurut hasil pewarnaan Gram, bakteri dapat berupa Gram-positif atau Gram-negatif:

 bakteri Gram-positif mempertahankan noda ungu dengan menolak penghilangan warna dan noda biru-hitam. bakteri Gram-negatif kehilangan selama penghilangan warna ungu noda dan karena itu counterstained dengan pink, warna carbolfuchsin. Teknik pewarnaan Ziehl-Neelsen Beberapa bakteri, seperti basil tuberkulum, sulit untuk noda dengan metode Gram karena mereka memiliki dinding, lilin tebal sel luar. Sebaliknya, teknik pewarnaan Ziehl Neelsen-digunakan. Organisme yang terkena panas, carbolfuchsin terkonsentrasi selama sekitar 5 menit, decolorized dengan asam dan alkohol (maka asam dan alkohol jangka-cepat-basil), dan akhirnya counterstained dengan metilen biru atau hijau perunggu. Basil ini akan berwarna merah dengan latar belakang biru. Lain noda Sejumlah noda lain digunakan dalam mikrobiologi untuk menunjukkan flagella, kapsul dan butiran, dan untuk pewarnaan bakteri di bagian jaringan. Deteksi mikroba dengan menyelidik untuk gen mereka Polymerase chain reaction Nomor bakteri sangat kecil (10-100) dalam spesimen pasien dapat dideteksi dengan menggunakan reaksi rantai polimerase standar (PCR) teknik (Bab 3), sementara teknik yang lebih canggih dapat mendeteksi satu urutan DNA HIV provirus dalam 106 sel.Keuntungan utama dari metode ini adalah kecepatan nya (beberapa jam dibandingkan dengan hari banyak teknik budaya konvensional). Namun, reaksi PCR dapat menghasilkan non-spesifik data dan seleksi maka peradilan primer dan perilaku hati-hati terhadap tes (untuk mencegah kontaminan sehingga menimbulkan hasil positif palsu) yang penting. Untuk alasan ini teknik PCR yang tidak umum di laboratorium diagnostik, tetapi dengan perkembangan baru tersebut sebagai teknologi microarray dan PCR bersarang hanya masalah 'waktu sebelum teknik ini menjadi lebih populer. Probe asam nukleat Dalam teknik ini,, berlabel beruntai tunggal molekul asam nukleat digunakan untuk mendeteksi urutan DNA komplementer dari patogen dalam sampel pasien, dengan hibridisasi untuk itu. Probe diperoleh dalam contoh pertama dari alami DNA dengan kloning fragmen DNA ke dalam vektor plasmid yang sesuai dan kemudian mengisolasi DNA kloning. Namun, jika urutan gen target (dalam patogen) diketahui, probe oligonukleotida dapat disintesis dan diberi label dengan isotop radioaktif atau dengan senyawa yang memberikan reaksi warna di bawah kondisi yang sesuai. Teknik ini tidak sensitif untuk mendeteksi sejumlah kecil organisme (yaitu menyalin nomor beberapa gen) dalam sampel klinis. Namun, kombinasi dari teknik PCR (untuk menghasilkan menyalin nomor tinggi) dan hibridisasi dengan probe

oligonukleotida kemungkinan menjadi metode pilihan dalam mengidentifikasi organisme yang lambat atau sulit untuk tumbuh di laboratorium. Budaya metode Bakteri tumbuh baik pada media buatan, tidak seperti virus yang membutuhkan sel hidup untuk pertumbuhan. Agar darah adalah media yang paling banyak digunakan kultur bakteri. Ini adalah contoh dari media non-selektif seperti banyak organisme dapat tumbuh di atasnya. Namun, ketika bahan kimia yang dimasukkan ke dalam media untuk mencegah pertumbuhan spesies bakteri tertentu dan untuk mempromosikan pertumbuhan orang lain, media selektif dapat dikembangkan (misalnya penambahan garam empedu membantu isolasi enterobacteria dari sampel tinja dengan menekan pertumbuhan usus commensals yang paling).Beberapa contoh media selektif dan penggunaannya diberikan dalam Tabel 6. 1. Bakteriologis Media Konstituen utama media bakteriologi adalah: air agar-agar: karbohidrat diperoleh dari rumput laut (agar-agar mencair sebagai di 90'C dan membeku di 40'C, peka panas nutrisi dapat ditambahkan ke dasar agar-agar sebelum menengah mengeras) pertumbuhan memperkaya konstituen: misalnya ekstrak ragi, daging ekstrak (ini mengandung karbohidrat, protein, anorganik garam dan faktor pertumbuhan untuk pertumbuhan bakteri) darah: kuda darah atau darah domba defibrinated. Persiapan media padat dan prosedur inokulasi Ketika semua bahan yang diperlukan telah ditambahkan ke agar-agar cair, adalah ditiadakan, saat masih hangat, ke dalam plastik atau kaca piring petri. Agar-agar secara bertahap akan dingin dan ditetapkan pada suhu kamar, menghasilkan piring siap untuk inokulasi spesimen. Tujuan dari inokulasi spesimen atau budaya bakteri pada media padat untuk mendapatkan koloni organisme diskrit setelah inkubasi yang tepat. Oleh karena itu teknik standar (Gambar 6.3) harus digunakan. Media padat lebih berguna daripada media cair karena mereka memfasilitasi: pembentukan koloni Diskrit, memungkinkan tunggal, koloni murni diambil dari pelat utama untuk subkultur di piring sekunder. Pertumbuhan murni dari budaya sekunder kemudian dapat digunakan untuk identifikasi organisme menggunakan tes biokimia, dll Observasi karakteristik kolonial membantu dalam identifikasi organisme.

 Kuantifikasi organisme sebagai unit pembentuk koloni (CFU). Ini sangat berharga baik dalam penelitian dan diagnostik mikrobiologi (misalnya jika sebuah spesimen urin menghasilkan lebih dari
(42) Media Agen yang dipilih Bile salts Faktor Pembed a Lactose Tipe Koloni 1 Tipe Koloni 2 Organis me Inhibitor Hampir seluruh kokus Staphylo cocci enteric bacili Streptoc occi enteric bacili Kokus

MacConkey

FERMENTER/RED Escherichia coli BIG > 2 mm Streptococcus salivarius BIG/Yellow Staphylococcus aureus ROUGH Mycobacterium tuberculosis FERMENTER(YELLOW ) GREY COLONIES Neisseria gonorrhoeae Neisseria meningitidis. CUTGLASS COLONIES Legionella sp CREAM COLONIES Fungi

Mitis salivarius

Tellurite, crystal violet

Sucrose

NON-FERMENTER Salmonella pseudomonas SMALL < 1 mm

Mannitol salt

7,5% NaCl

Mannitol

SMALL/PINK Staphylococcus epidermis SMOOTH/PIGMENTED Atypical mycobacteria NON-FERMENTER Vibrio parahaemolyticus GREY COLONIES Neisseria gonorrhoeae Neisseria meningitidis

Lowenstein -lensen TCBS

Malachite

Thiosulphat e Antibiotics

Sucrose

ThayerMartin

Kokus, enteric bacilli Kokus gram positif

Charcoal yeast extract Sabouraud

Cysteine

CUTGLASS COLONIES Legionella sp CREAM COLONIES Fungi

Low pH (5.6) + Antibiotik

Kokus gram positif Kebanya kan bakteri

105 CFU / ml pasien dianggap memiliki infeksi saluran kemih; a. sampel dicampur dengan air liur lebih dari 106 CFU / ml menunjukkan adanya aktivitas Streptococcus mutans kariogenik tinggi). Media cair Media cair yang digunakan dalam mikrobiologi untuk: 0 Mempromosikan pertumbuhan sejumlah kecil bakteri hadir dalam spesimenterkontaminasi dengan antibiotik. Antibiotik diencerkan dalam medium cairan, sehingga meningkatkan pertumbuhan organisme.

Gambar. 6.3 Metode inokulasi sebuah plate agar untuk memperoleh koloni bakteri diskrit(setelah inkubasi semalam). 0 preferentially meningkatkan pertumbuhan bakteri tertentu saat menekan commensalsbacteriall lain yang hadir dalam sampel. Ini disebut media pengayaan (misalnya kalduSelenite F digunakan untuk kultur tinja). 0 kegiatan Uji biokimia bakteri untuk tujuan identifikasi. Beberapa contoh media padat dan cair yang diberikan. dalam tabel 6.2. Media untuk kultur darah Ketika agen infeksi yang beredar dalam darah (misalnya di septikemia, endokarditis, pneumonia) yang terakhir harus aseptik ditarik oleh venepuncture dan berbudaya. Kultur darah harus dilakukan pada media cair khusus, baik dalam kondisi aerobik dan anaerobik. Darah aseptik ditransfer ke medium pertumbuhan yang kaya (misalnyaotakjantung kaldu infus) mengandung antikoagulan (Gambar 6.4). Budaya diperiksa untukkekeruhan dan produksi gas harian, tip untuk seminggu (di banyak laboratorium proses inisekarang otomatis dan mesin yang digunakan untuk mendeteksi pertumbuhan bakteri).Budaya positif sampel dan organisme (s) diisolasi dan diidentifikasi. Media transportasi

Spesimen klinik diangkut ke laboratorium depan dalam media transportasi, yang membantu untuk menjaga kelangsungan hidup organisme dalam perjalanan. Bakteriologi transportasi media. A, non-gizi semipadat agar seperti media transportasiStuart secara luas digunakan. Ini (43) Medium Media padat Agar nutrien Agar darah Agar coklat Agar CLED Antibiotik sensitif Media cair Pepton Broth nutrien Gandum Robertson Selenite F Bahan Agar Agar nutrien, 5-1-% darah kuda Agar darah yang dihangatkan Pepton, laktosa, dll. Pepton, & medium semisintetik Keaangu Tujuan utama Pada umumnya Isolasi Haemophilus Kultur coliforms Test sensitivitas antibiotik

Pepton, NaCl, air Air pepton, ekstrak gandum Nutrien brorh Air pepton, sodium selenite

Kegunaan utama Kultur umum Kultur anaerobik Medium untuk Salmonella sp.

juga mengandung asam thioglycolic sebagai agen mengurangi, dan elektrolit. Viral transportasi menengah. Ini adalah istilah umum yang menggambarkan suatu larutan yang mengandung protein dan garam seimbang yang menstabilkan virus selama transportasi. Agen antimikroba juga ditambahkan untuk membunuh bakteri yang hadir dalam sampel. Atmosfer persyaratan dan inkubasi Setelah diinokulasi piring agar-agar dapat diinkubasi: aerobik: tapi penambahan karbon dioksida 10% meningkatkan pertumbuhan patogen manusia yang paling. anaerobik: sebagian besar bakteri, khususnya patogen oral, anaerob ketat dan tumbuh hanya dalam ketiadaan oksigen. Kondisi anaerobik dapat diproduksi dalam stoples tertutup atau dalam inkubator anaerobik besar. Dalam kedua kasus lingkungan oksigen digantikan oleh nitrogen dioksida, hidrogen dan karbon, Pada suhu tubuh: 370C (beberapa bakteri tumbuh baik pada suhu yang lebih tinggi atau lebih rendah; jamur biasanya tumbuh pada suhu ambien). Ng. 6,4 botol kultur darah: botol di kiri berisi

IDENTIFIKASI BAKTERI Ketika patogen putatif dari spesimen klinis adalah diisolasi sebagai kultur murni adalah penting untuk mengidentifikasi organisme (s). Identifikasi bakteri (Gambar 6.5) pada awalnya memerlukan: 1. Pemeriksaan karakteristik kolonial: ukuran, bentuk, elevasi (datar, cembung, umbonate), margin (keseluruhan, berombak-ombak, berserabut), warna, bau dan tekstur; efek pada darah (-a, -, atau non-hemolitik). 2. Pemeriksaan karakteristik morfologi dan pewarnaan mikroskopis: sebuah film ternoda koloni membantu identifikasi. 3. Identifikasi kondisi pertumbuhan: aerobik, anaerobik, capnophilic (yaitu tumbuh baik di kelebihan karbon dioksida), pertumbuhan pada media selektif dan pengayaan. Hal tersebut di atas akan menunjukkan kelompok utama yang dimiliki organisme (misalnya streptokokus, enterobacteria, Clostridia) Namun, identifikasi definitif untuk tingkat spesies membutuhkan tes biokimia.

Tes biokimia Setiap spesies bakteri memiliki profil biokimia karakteristik yang berharga untuk identifikasi. Ini termasuk: fermentasi Gula dan profil asimilasi. Budaya murni diinkubasi dengan gula tertentu dan diperiksa untuk produksi asam dan gas atau keduanya.

0 Enzim profil. Organisme ini diinkubasi dengan Enz sesuai) rne substrat. Jika erinme yang disekresikan oleh organisme ini akan bereaksi dengan substrat dan menyebabkan perubahan warna. Selain itu, beberapa bakteri dapat diidentifikasi terutama oleh produksi enzim yang khas. Jadi, koagulase diproduksi oleh gumpalan Staphylococcus aureus (atau menggumpal) plasma dan merupakan enzim khusus untuk organisme ini. Contoh lain adalah lecithinase diproduksi oleh Clostridium perfringes (lihat Bab. 13).

Komersial identifikasi kit Identifikasi definitif organisme membutuhkan pengujian untuk spektrum enzim serta kemampuannya untuk fermentasi (pemecahan anaerob) atau mengasimilasikan (pemecahan aerobik) sejumlah karbohidrat. Hal ini difasilitasi oleh komersial (44)

kit yang tersedia, seperti API dan sistem AnIdent, perusahaan yang berbagai tessebelumnya (biasanya 20) dalam sistem kit tunggal (Gambar 6.6).

metode Sebuah budaya murni dari organisme genteng uji diinokulasi ke setiap sumur kecil (cupule) yang mengandung karbohidrat yang sesuai atau kimia dan diinkubasi semalam.Warna yang dihasilkan atau mengubah kekeruhan untuk setiap tes ini kemudiandibandingkan dengan grafik warna standar (yang disediakan oleh produsen genteng) dan mencetak. Profil numerik sehingga diperoleh untuk organisme dibandingkan dengan profil yang disusun dari budaya jenis, dan mdegree konkordansi antara profil dari duaorganisme memungkinkan identifikasi bakteri uji. Kadang-kadang proses identifikasi organisme harus diperpanjang lebih jauh darispesiasi (yaitu mengidentifikasi bakteri melebihi tingkat spesies) yang dijelaskan di atas,

ini disebut bakteri mengetik.

Mengetik bakteri Adalah penting untuk menyadari bahwa bakteri dari spesies yang sama mungkin memilikikarakteristik yang berbeda (hanya sebagai anggota individu dari Homo sapiens gentengspesies bervariasi dalam karakteristik seperti warna kulit, tinggi badan, dll). Hal initerutama penting ketika menelusuri

(45) penyebaran epidemi organisme baik di masyarakat atau di bangsal rumah sakit (seperti melacak penjahat pada populasi yang luas). Tracing seperti organisme dapat dilakukan oleh diferensiasi regangan menggunakan prosedur mengetik perintah berikut: serotipe: membedakan bakteri menurut antigen struktur biotyping: membedakan bakteri sesuai dengan bioreaktivitas kimia phagetyping: membedakan bakteri berdasarkan kerentanan terhadap sebuah panel yang dikenal bakteriofag (virus yang membunuh bakteri) bakteriosin mengetik: bakteriosin adalah protein ampuh bakteri yang menghambat pertumbuhan anggota lain dari spesies kelas yang sama, sebuah panel bakteriosin dapat digunakan untuk menguji kerentanan organisme uji, dan profil yang diperoleh digunakan untuk mengetik mengetik genetik: sejumlah novel metode mengetik genetik seperti yang dijelaskan dalam Bab 3 sekarang tersedia dan ini menghasilkan sangat akurat 'sidik jari' dari bakteri.

METODE imunologi Metode imunologi berguna dalam diagnostik mikrobiologi untuk mengidentifikasi organisme dan untuk mendeteksi antibodi dalam cairan tubuh pasien (misalnya serum, air liur), terutama ketika organisme tidak dapat dibiakkan dalam media laboratorium.

Identifikasi organisme menggunakan teknik imunologi Pengelompokan Slide aglutinasi. Antibodi terhadap serritypes spesifik dari organisme (misalnya Salmonella dan Shigella spesies) dapat digunakan dalam identifikasi. Ketika suspensi organisme dan beberapa tetes antibodi spesifik dicampur pada slide kaca, terlihat aglutinasi (penggumpalan) dari organisme indicatcs reaksi positif. Aglutinasi lateks. Di sini aglutinasi lateks manik-manik dilapisi dengan antibodi spesifik ditujukan terhadap organisme diketahui digunakan, seperti di atas (misalnya Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae, ragi Cryptococcus neoformans) (Gambar 6.7). Imunofluoresensi Jika organisme terkena antibodi spesifik ditandai dengan pewarna fluoresen, maka organisme mengikat antibodi dan dapat divisualisasikan melalui mikroskop ultraviolet.Asas langsung (satu langkah) dan tidak langsung (dua langkah) teknik imunofluoresensi ditunjukkan pada Gambar 6.8. Enzyme-linked immunosorbent assay Uji enzyme-linked immunosorbent (ELISA) adalah modifikasi dari tes di atas di mana pewarna fluoresen antibodi ditandai untuk digantikan oleh enzim. Organisme mengikat antibodi dan enzim tag, dan jumlah enzim yang terikat kemudian dapat ditunjukkan oleh reaksi dengan substrat enzim. Ini adalah tes yang sangat populer.

Deteksi antibodi dalam serum pasien Sebuah contoh dari teknik ini adalah tes serologis untuk sifilis. Agen sifilis, Treponema pallidum, tidak tumbuh dalam media laboratorium. Oleh karena itu tes serologis yang berguna. Ini adalah: Tes (non-treponemal) VDRL, di mana sebuah cardiolipin, lesitin dan kolesterol campuran digunakan sebagai antigen. Cardiolipin penggumpalan terjadi dengan adanya antibodi, untuk T palliduni. (Catatan:. Ini adalah tes non-spesifik, dan, jika positif, tes konfirmasi harus dilakukan)

 Tes treponermal, di mana non-T pallidum layak digunakan sebagai antigen (misalnya tes antibodi treponema neon diserap, FTA-ABS) (lihat Bab. 18).

PEMERIKSAAN LABORATORIUM UNTUK BERHUBUNGAN terapi antimikroba Setelah diduga patogen telah diidentifikasi dari spesimen sensitivitas antimikroba yang dapat diprediksi dengan beberapa tingkat akurasi, berdasarkan pengalaman sebelumnya dan memanfaatkan

(46)

Data yang tersedia. Resep dengan cara ini disebut terapi empiris (misalnya berdasarkan pada kepekaan staphylococci untuk flukloksasilin). Namun, adalah penting untuk dasar terapi rasional pada hasil tes laboratorium antibiotik dilakukan pada patogen terisolasi. Kerentanan organisme terhadap agen antimikroba Secara klinis mikrobiologi mikroba dianggap sensitif (atau sussceptible) untuk agen antimikroba jika dihambat oleh konsentrasi obat biasanya diperoleh pada jaringan manusia setelah dosis terapi standar. Sebaliknya adalah benar untuk organisme resisten. Organisme dianggap kerentanan menengah jika konsentrasi menghambat agen antimikroba sedikit lebih tinggi dari yang diperoleh dengan dosis terapeutik. Pengujian laboratorium untuk sensitivitas antimikroba Aksi obat antimikroba terhadap organisme dapat diukur: kualitatif (disc tes difusi) kuantitatif

(konsentrasi penghambatan minimum atau minimal konsentrasi bakterisida tes). Sebuah teknik yang disebut semikuantitatif tes break-point tidak dijelaskan di sini. Ini tes in vitro menunjukkan apakah konsentrasi terapeutik yang diharapkan dari obat yang diberikan dalam dosis standar menghambat pertumbuhan organisme diberikan dalam vivo. Hasil laboratorium hanya dapat memberikan indikasi aktivitas obat in vitro, dan efeknya secara in vivo tergantung pada faktor-faktor seperti kemampuan obat untuk mencapai tempat infeksi dan status kekebalan dari tuan rumah. Sebuah respon host yang kuat pertahanan dapat memberikan kesan terapi 'sukses' obat, meskipun organisme penyebab infeksi adalah 'tahan' terhadap obat tertentu ketika tes laboratorium yang digunakan. Disc uji difusi Uji difusi disk adalah metode yang paling umum digunakan untuk menguji sensitivitas mikroorganisme untuk agen antimikroba. Di sini, mengisolasi yang akan diuji adalah diunggulkan atas seluruh permukaan pelat agar dan obat-diresapi cakram kertas filter diterapkan. Setelah inkubasi semalam di 37C, zona inhibisi pertumbuhan diamati di sekitar masing-masing disk, bergantung pada sensitivitas organisme tersebut. (Figs 6.9 and 6. 10).

Tes kepekaan antimikrobial dapat dibagi menjadi dua, primer & sekunder. Tes primer dilakukan dengan menginokulasi langsung, misalnya pus, langsung ke wadah. Keuntungan dari tes ini rata-rata

Gambar 6.9

Gambar 6.10 (47)

Gambar 6.11 sensitivitas organisme hasil untuk hadir dalam Nanah akan tersedia setelah inkubasi 24-48 jam (lihat Gambar. 6.2). Hal ini sangat berguna ketika merawat pasien dengan infeksi akut lemah seperti abses dentoalveolar. Namun, karena ini adalah perkiraan kasar, tes sensitivitas sekunder karena itu dilakukan pada kultur murni dari organisme terisolasi, tetapi

hasilnya tidak tersedia untuk setidaknya 2-4 hari setelah pengambilan sampel. Penilaian MIC dan MBC Menentukan konsentrasi penghambatan minimum (MIC dan konsentrasi bakterisida minimum (MBC) memberikan penilaian kuantitatif potensi antibiotik. (Gambar 6.11). Metode. Berbagai pengenceran dua kali lipat dari agen antimikroba dapat dimasukkan ke dalam kaldu yang cocok dalam serangkaian tabung (tabung teknik dilusi). Kaldu ini diinokulasi dengan suspensi standar Dari organisme uji dan diinkubasi selama 18 jam.Konsentrasi minimum dari obat yang menghambat pertumbuhan organisme uji dalam tabung dicatat sebagai MIC yaitu konsentrasi terendah yang akan menghambat pertumbuhan in vitro terlihat. Selanjutnya, inokulum standar dari masing-masing tabung di mana pertumbuhan tidak terjadi dapat disubkultur pada agar darah untuk menentukan konsentrasi minimum dari drugrequired untuk membunuh organisme (MBC). MBC didefinisikan sebagai konsentrasi minimum obat yang membunuh 99,9% dari mikroorganisme uji dalam inokulum asli. Tes ini tidak rutin dilakukan tetapi sangat berguna pada pasien dengan infeksi serius dimana terapi antimikroba yang optimal sangat penting, misalnya untuk membangun sensitivitas screptococci diisolasi dari kultur darah dari pasien dengan endokarditis infektif, dan bakteri menyebabkan septicaernia pada pasien imunosupresi. TEPAT FOSIL DI Medical Microbiology SeeTable 6.3.

Sesuai spesimen untuk infeksi oral Sampling untuk patogen dalam lingkungan mulut menimbulkan banyak masalah karena banyak flora komensal adat yang berkembang di rongga mulut. Selanjutnya, banyak patogen endogen berasal dan menyebabkan penyakit ketika kesempatan muncul (patogen oportunistik). Selain itu, memperoleh sampel tidak tercemar dari situs seperti kedalaman kantong-kantong periodontal dimana penyakit aktivitas dan karenanya jumlah periodontopathogens yang cenderung tinggi sangat sulit. Untuk alasan ini, teknik sampling peradilan dan tepat harus digunakan ketika mendiagnosis infeksi oral (Tabel 6.4). Spesimen dikirimkan ke laboratorv mikrobiologi oral dapat dikategorikan sebagai orang yang berguna untuk pengelolaan infeksi purulen, infeksi mukosa, dan infeksi periodontal dan karies. Purulen infetctions Spesimen yang tepat adalah sampel disedot nanah, jika mungkin. Berhati-hatilah untuk menghindari luka jarum suntik ketika kembali selubung tutup jarum, drainase nanah residual

dengan sayatan, setelah pengambilan sampel aspirasi, adalah wajib. Langkah-langkah laboratorium dalam diagnosis infeksi bernanah yang ditunjukkan pada Gambar 6.2. Infeksi mukosa Sebuah infeksi umum mukosa oral kandidiasis oral. Di sini, lesi adalah sampel dengan swab kering, dan Pap yang diambil (48) Jaringan atau sistem kulit Spesimen Menyeka Menggores Vesikel cairan Serum kultur darah Keterangan memeriksa untuk bakteri dan ragi memeriksa untuk jamur memeriksa untuk virus (mikroskop elektron dan budaya) Serologi virus pencegahan steril diperlukan. Beberapa spesimen yang diperlukan

blood (bacteraemi a and septicamia) saluran gastrointest inal

Feses

Saluran urinari

saluran per nafasan atas Saluran pernapasan bawah

Serum spesimen urin midstream / supr apubik aspirat / kateter urin spes imen (bukan dari kantongmengumpulkan) pernasal, usap tenggorokan dan hidung; cucian tenggorokan air liur atau hidung dan tenggorokan aspirasi Sputum

budaya untuk bakteri dan virus; deteksi toksin untuk Clostridium difficile; misroscopy ketat untuk parasit dan protozoa; mikroskop elektron untukvirus tes serologis untuk demam enterik untuk bakteriologi kuantitatif dan kualitatif

Saluran kelamin

abses

Serum penyeka dalam 'Amies atau yang stuart media transportasi penyeka di klamidia dan media transportasi virus Pap debit Serum Nanah Nanah atau penyeka Jaringan

culture for bordella pertusis. culture for Bhaemolytic streatococci, other bacteria and viruses culture and immunoflourescent for virus budaya untuk bakteri, virus, dan jamur; mikroskop untuk banyak virus,mycobacterium tuberkulosis dan legio nella spp Viral dan serologi virus for bacteria and yeast culture and microscopy for gonococci and tricomonas spp. (wet film) budaya klamidia dan virus

untuk mendeteksi gonokokus

tes serologi syphlilis aspirasi untuk kultur dan identifikasi menghindari kontaminasi dari kulit; nanah disukai kirim sampel kecil dalam wadah steril kering untuk homogenisasi, budaya dan mikroskop menghindari kontaminasi dengan flora

Lesi

Penyeka

mucosal

Smear Serum

normal. menggunakan media transportasi jika perlu;budaya untuk bakteri, jamur, dan virus neon mikroskop; berguna untuk gonokokus dan ragi tes serologi untuk infeksi stafilokokus dan streptokokus dan virus

Dimodifikasi dari Ross PW, Holibrook WP. Klinis dan mikrobiologi lisan. Oxford; Blackwell,1984

mediately sesudahnya (lihat bagian tentang infeksi candida rendah). ketika mengevaluasi kereta lisan ragi (atau organisme lain seperti Enterobacteriaceae) kemudian bilas lisan harus dikumpulkan. ini memerlukan meminta pasien untuk membilassoulth selama 60 detik dengan 10 ml phosphate buffered saline tehn espectorating bilasanke dalam wadah, yang diangkut ke laboratorium untuk kuantifikasi pertumbuhan ragi (dalam hal CFUs)

infeksi periodontal
nilai sampling mikrobiologi untuk diagnosis karies dan penyakit periodontal adalahterbatas. Dalam kasus karies gigi ludah lactobacili dan streptokokus mutans dapat digunakan, dan untuk tujuan ini sampel air liur harus dikumpulkan (Bab 32) diagnosis penyakit periodontal dengan cara mikrobiologis yang bermasalah. Pap gingivadalam adalah berguna untuk diagnosis akut gingivitis ulseratif nekrosis, sementara kertassampel titik muncul berguna untuk analisis DNA bakteri periodontophatic. Namun, yang terakhir ini bukan tes konklusif.

ISOLASI DAN IDENTIFIKASI LABORATORIUM DARI VIRUS

Teknik-teknik untuk isolasi dan identifikasi virus secara signifikan berbeda dari teknikbakteriologi. Laboratorium prosedur untuk diagnosis infeksi virus dari empat jenis utama.