NAMA NIM KELAS

: NI KADEK OKI FEBRIANTI : 1105105055 :B

1. Pendahuluan Transfer gen adalah transfer gen dari satu molekul DNA ke molekul DNA lain. Transfer gen merupakan kemungkinan relatif pengobatan terbaru terhadap kelainan genetik langka dan penyakit multifaktorial dengan mengubah ekspresi gen seseorang ( Arat , 2001 ). Pada tahun 1928 , Griffith melaporkan bahwa strain pneumoccocus nonpathogenic bisa menjadi patogen ketika dicampur dengan sel-sel panas membunuh patogen pneumoccocus , yang mengisyaratkan bahwa materi genetik patogen bisa ditransformasikan dari pneumoccocus patogen panas dibunuh dengan strain patogenik ( Griffith , 1928) . Ini adalah laporan pertama untuk observasi transfer gen . Namun, substansi transformasi tidak teridentifikasi dalam percobaan ini . Sampai dengan tahun 1944, Avery dkk menunjukkan bahwa asam deoksiribonukleat ( DNA ) adalah substansi transformasi ( Avery, 1944). Pada tahun 1952, Hershey dan Chase menunjukkan bahwa DNA adalah satu-satunya bahan yang ditransfer selama infeksi bakteriofag , yang menunjukkan bahwa DNA adalah materi genetik ( Hershey, 1952). Teknik dasar untuk memperkenalkan DNA ke dalam E. coli telah menginspirasi prosedur untuk pengenalan DNA ke dalam sel dari berbagai organisme , termasuk sel mamalia . Rekayasa genetika makanan adalah ilmu yang melibatkan modifikasi yang disengaja dari bahan genetik dari tanaman atau hewan. Metode The transfer gen biasanya meliputi tiga kategori : 1. transfeksi dengan metode biokimia ; 2. transfeksi dengan metode fisik; 3. virus - mediately transduksi. Hasil transfer gen dapat transfeksi transien dan stabil . Terapi gen dapat didefinisikan sebagai transfer sengaja DNA untuk tujuan terapeutik. Banyak penyakit serius seperti cacat mental dan fisik tragis disebabkan oleh beberapa gangguan metabolisme genetik dapat disembuhkan oleh protokol transfer gen . Transfer gen merupakan salah satu faktor kunci dalam terapi gen ( Matsui, 2003) , dan itu adalah salah satu tujuan utama dari clone (Ma,2004). Transfer gen dapat ditargetkan untuk somatik (tubuh ) atau sel kuman ( telur dan sperma ). Dalam somatik transfer gen genom penerima berubah , tapi perubahan tidak akan diteruskan ke generasi berikutnya . Dalam transfer gen germline , telur indukan dan sel sperma berubah dengan tujuan menyampaikan perubahan kepada keturunannya . Transfer gen germline tidak sedang aktif diteliti , setidaknya pada hewan yang lebih besar dan manusia ( Bordignon , 2003; Umemoto , 2005) . 2. Transient dan Stabil Transfeksi

2.1 Transient transfeksi Dalam transfeksi transien , DNA transfected tidak terintegrasi ke kromosom inang . DNA ditransfer ke dalam sel penerima untuk mendapatkan sel sementara tetapi tingkat ekspresi gen target yang tinggi . 2.2 transfeksi Stabil Transfeksi stabil juga disebut transfeksi permanen. Pada transfeksi stabil , transfer DNA yang terintegrasi ( dimasukkan ) ke dalam DNA kromosom dan genetika sel penerima adalah dibuahi secara permanen. 3. Metode Transfeksi Secara umum, ada 9 cara untuk transfer gen : (1) metode Lipid - dimediasi , (2) Kalsium fosfat-med-iated , (3) DEAE-dekstran-dimediasi , (4) Elektroporasi , (5) Biolistics ; (6) vektor Viral ; (7) Polybrene , (8) La-transfeksi ser ; (9) Gene transfeksi peningkatan suhu (Sambrook , 2001) . 3.1 Metode Lipid-dimediasi Metode ini dapat digunakan untuk transfeksi transien baik dan stabil, dan dapat digunakan untuk sel patuh, baris sel primer, dan kultur suspensi. 3.2 Dimediasi Kalsium-Fosfat Untuk mendapatkan penjelasan yang lebih baik, protokol berikut ini menggunakan transfer interleukin-2 gen manusia ke dalam miosit tikus berbudaya seperti contohnya metode manual. 3.3 DEAE dekstran dimediasi DEAE - dekstran (diethylaminoethyloethyl-dekstran) digunakan untuk memperkenalkan RNA virus polio dan SV40 dan polyomavirus DNA ke dalam sel di 1960 ( Pagano , 1965; McCutchan , 1968; Warden , 1968). Ada tiga poin yang DEAE-dekstran dimediasi transfeksi berbeda dari kalsium fosfat kopresipitasi . (1) Hal ini digunakan untuk transfeksi transien. (2) Ia bekerja lebih efisien dengan garis sel dari BSC-1,CV-1 dan COS, dll (3) Hal ini lebih sensitif. 3.4 Elektroporasi Medan listrik Pulse bisa digunakan untuk memperkenalkan DNA ke dalam sel hewan, tumbuhan dan bakteri. Faktor-faktor yang mempengaruhi efisiensi transfeksi melalui elektroporasi: terapan kekuatan medan listrik, panjang pulsa listrik, suhu, konformasi DNA, konsentrasi DNA, dan komposisi ionik media transfeksi, dll 3.5 Polybrene Beberapa polycations, termasuk polybrene (1,5-dimetil-1,5-diazaundecamethylene poli methobromide) (Chaney,1986) dan poli-L-ornithine (nead ,1995), telah digunakan dalam transfeksi gen dengan peningkatan DMSO. 3.6 Virus Virus sangat disesuaikan dengan proses transfer gen. Vektor virus memiliki kemampuan untuk mentransfer DNA ke fraksi tinggi sel, tetapi menggunakan virus sebagai vektor

akan berpotensi menimbulkan kanker leukemia (Cavazzana-Calvo, 2004). Vektor yang umum digunakan untuk transfer gen dalam kultur sel yang berasal dari retrovirus. Adenovirus dan agen lain yang digunakan untuk pengiriman gen. 3.7 Biolistics (senapan Gene, atau disebut mikropartikel pemboman) Beberapa sel, jaringan dan organel intraseluler yang kedap DNA asing, terutama sel-sel tanaman. Biolistics, termasuk penembakan partikel, adalah metode yang umum digunakan untuk transformasi genetik tanaman dan organisme lain. Untuk mengatasi masalah ini dalam transfer gen, senjata gen dibuat oleh Klein di Cornell University pada tahun 1987 (Klein, 1987; Kikkert, 2005) . Pada teknik senjata gen, makalah Klein dan Sanford, dll, memperoleh hak paten dan membentuk sebuah perusahaan bernama Biolistics ( Klein , 1987 ) . senjata Gen merupakan bagian dari metode transfer gen yang disebut Biolistic (juga dikenal sebagai biobalistic atau penembakan partikel) metode . Dalam metode ini , DNA atau RNA mematuhi partikel lembam biologis ( seperti emas atau tungsten ). Dengan metode ini, kompleks DNA-partikel diletakkan pada lokasi atas jaringan target dalam kondisi vakum dan dipercepat oleh tembakan yang kuat ke jaringan, maka DNA akan efektif memperkenalkan ke dalam sel target . Partikel logam dilapisi juga bisa ditembak melalui larutan yang mengandung DNA yang mengelilingi sel sehingga mengambil materi genetik dan melanjutkan ke dalam sel hidup. Efisiensi transfer gen gun bisa bergantung pada faktor-faktor berikut : jenis sel, kondisi pertumbuhan sel, medium kultur, gen gun Jenis amunisi, pengaturan gen gun dan pengalaman eksperimental, dll 3.8 Laser transfeksi Sebagai contoh percobaan kami , UV laser excimer ( XeCl2 , 308 nm ) digunakan dalam transfeksi gen (5 menit dengan 0,7 0,9 , 1,4 atau 2,0 mm diameter serat dengan fluence 45 dan 60 mj/mm2 - nyata laser energi 2.3,5.9 , 13.1 , 32.0 mj / pulsa , 25 Hz ) ( CVX 300 Excimer Laser System, Spectranetics Corporation, Colorado Springs , CO , USA ) . Juga, kita digunakan untuk membuat percobaan dengan Nd : YAG , Ho : Yag di transfeksi gen . Semua metode excimer , Nd : YAG dan Ho : Yag Laser transfeksi efektif. 3.9 Transfeksi ditingkatkan dengan suhu tinggi Studi kami menunjukkan bahwa suhu tinggi meningkatkan transfeksi gen . Dalam percobaan kami, tikus sel otot jantung dikultur dalam medium 199 dengan 10 % FBS dan aorta sel otot polos manusia dikultur dalam medium F12K . Manusia interleukin-2 gen transfected ke sel-sel jantung tikus dan gen hormon pertumbuhan babi transfected ke sel otot polos aorta manusia dengan kalsium fosfat kopresipitasi pada berbagai suhu : 23 C , 37 C dan 43 C. Transfected interleukin - 2 dan babi ekspresi hormon pertumbuhan yang dideteksi dengan menggunakan ELISA tidak langsung . Miosit tikus berbudaya dipanaskan memiliki ekspresi signifikan lebih tinggi dari gen interleukin - 2 transfected . Ambient temperatur menimbulkan 43oC selama 30 menit disediakan transfeksi transien lebih besar dari gen interleukin - 2 bila dibandingkan dengan suhu lingkungan pada 37 oC dan 23oC ( p < 0,01 ) . Efek terbesar terjadi dalam 10 menit inkubasi dan bertahan

hingga 30 menit . Hasil ini menunjukkan bahwa bahkan beberapa derajat kenaikan suhu ambien secara signifikan dapat meningkatkan transfer gen ke dalam sel otot . Ini mungkin nilai bila menggunakan terapi gen dengan prosedur transfeksi ( Ma, 2004b, Ma, 2004c). 3.10 Tanaman transfer gen Pertanian dan pemuliaan tanaman hanya mengandalkan akumulasi pengalaman generasi petani dan peternak yaitu, pada perpindahan seksual gen antara spesies tanaman. Namun, perkembangan biologi molekuler tanaman dan genomik sekarang memberi kita akses ke pengetahuan dan pemahaman tentang genom tanaman dan kemungkinan memodifikasi mereka. Ada dua teknologi yang paling ampuh untuk mentransfer gen ke tanaman: transformasi Agrobacterium-dimediasi dan biolistics. Sebagai tanaman memiliki dinding sel, biolistics sangat berguna dalam transfer gen tanaman (Rasco-Gaunt, 2001). 4. Diskusi Abad ini akan membawa perubahan yang luar biasa bagi ilmu pengetahuan, teknologi, dan praktek kedokteran ( Lushai , 2002). Terapi gen adalah bagian dari bidang yang berkembang dalam kedokteran molekuler, yang akan mendapatkan posisi penting dalam pengobatan penyakit manusia (Gunther, 2005). Sebagai topik penting , transfeksi gen memberi harapan orang untuk mengobati banyak penyakit tetapi juga bisa menciptakan spesies berbahaya di bumi, sehingga menarik banyak perhatian oleh masyarakat manusia (Lanza, 2002). Ini berarti bahwa keberhasilan teknik transfer gen akan manfaat bagi peradaban, dan juga menciptakan bahaya bagi kehidupan di bumi baik ( Schiemann , 2003). Prosedur transfeksi gen digunakan dalam prosedur kritikus clone hewan ( Chesne , 2002; Heyman , 2002) , dan klon hewan ditantang oleh kelompok agama dan etnis ekstremis ( Houdebine , 2003) . Sebagai pandangan kita , tidak peduli seberapa besar tantangan dari apa pun aspek, transfeksi gen dan klon hewan akan berkembang dengan cepat. Dunia adalah tempat yang kompleks yang terdiri oleh orang yang berbeda. Untuk ilmu pengetahuan dan teknologi seperti transfer gen dan klon hewan, tidak ada negara dapat mencegah negara-negara lain mengejar. Kita perlu mengembangkan teknik bahkan jika teknik ini dapat digunakan dalam aksi bahaya , dan kita perlu mempertimbangkan dampak sosial dari teknik ketika kita mengembangkan itu baik. Pengembangan ilmu pengetahuan akan menguntungkan semua masyarakat manusia. Sebagai terapi gen berkembang, banyak penyakit lebih putus asa dapat disembuhkan dan banyak nafkah manusia bisa diselamatkan , seperti kehidupan Paus Yohanes Paulus II dan Terri SchiavoSchindler. Berharap bahwa teknik transfer gen yang dijelaskan dalam artikel ini dapat bermanfaat bagi penelitian di bidang terapi gen dan membantu untuk memajukan penelitian ilmu kehidupan.