PROSES FERMENTASI

Iman rusmana Departemen Biologi FMIPA IPB

Industri/Bioteknologi
Sel & syw metabolit mikrob 2 proses penting : 1. Produksi Fermentasi 2. Hilir ekstraksi & purifikasi Pd fermentasi : Mikrob jadi objek utama Produk yg diinginkan

Produksi optimal
optimasi media kontrol : - O2 - kondisi lainnya Kontrol terbaik: online control

Kinetika pertumbuhan mikrob Perlu dimengerti

Tergantung tipe proses fermentasinya !

3 Tipe Proses Fermentasi

Batch Fed-Batch Kontinu Kinetika & Kondisi berbeda

1. Fermentasi Batch
Sistem tertutup tidak ada penambahan media baru ada + : - O2 aerasi - antifoam - asam/basa kontrol pH -Komposisi media -[biomasa] -[metabolit]

Berbeda

Kondisi fisiologi/metabolisme sel

4 Fase Pertumbuhan
Fase Lag Fase Log Fase Stasioner Fase Kematian Kondisi fisiologi/ metabolisme sel Beda

Fase Lag:
Mikrob beradaftasi ling. Baru -pH berubah -Nutrien meningkat -[inhibitor] turun Lamanya Tergantung kondisi fisiologi inokulum - Inokulum fase log cepat/tidak ada - inokulum fase stasiner lebih lama
*kinetika pembentukan produk tidak tergantung lamanya fase lag

Fase Log:
Mikrob telah beradaftasi sel tumbuh: jumlah sel/biomasa laju pertumbuhan konstan: - tidak tergantung [substrat] berlebih - tergantung: laju pertumbuhan spesifik() [biomasa] (X) dX/dt = X atau dN/dt = N

Plot semilogaritmik biomasa dg waktu garis lurus Disebut Fase Log

Laju pertumbuhan spesifik ( ): fungsi 3 parameter: -[substrat] pembatas (S) -Laju pertumbuhan maksimum (m) -Konstanta spesifik substrat (Ks) Lamanya Tergantung kondisi fisiologi inokulum S = m ________ Ks + S
*persamaan Monod Jacques Monod

Pada kondisi =

Ks = S
*Ks = Konstanta Michaelis-Menten kinetika enzim

Pada kondisi substrat tidak terbatas Fase log

Ks <<< S
S = m
________

= m

Ks + S

m penting di industri produksi

Tergantung: - jenis mikrob - kondisi fermentasi - jenis substrat: C sederhana C komplek
*Bila substrat 1 habis, substrat 2 tersedia fase log 2 m 2 Pd substrat komplek (2): 2 fase log dipisah fase lag 2

DIAUXY

Fase Stasioner :
substrat banyak digunakan syw toksik terakumulasi
Laju pertumbuhan melambat/terhenti Biomasa konstan

Beberapa metabolit penting disintesis pada Fase stasioner

Fase Kematian :
sel kehabisan energi lamanya waktu dari stasioner ke kematian tergantung mikrob & prosesnya

Aplikasi di industri tidak sampai fase ini

Setelah fase log Sebelum fase kematian

Proses dihentikan

Tgt produk diproduksi di fase mana ?

2. Fermentasi Fed-Batch
pengembangan sistem batch ada penambahan media baru tidak ada kultur yg keluar Yield lebih tinggi dari batch -Memperpanjang fase log or stasioner -Menghindari represi krn [substrat] tinggi Kapan penambahan [substrat] Monitor proses

3. Fermentasi Kontinu
sistem terbuka ada penambahan media baru ada kultur yg keluar volume tetap fase fisiologi sel konstan -Ada 2 tipe sistem: 1. Homogenously mixed bioreactor 2. Plug flow reactor

Homogenously mixed bioreactor

Ada 2 macam: a. Chemostat: Steady state faktor pembatas salah satu nutrien pertumbuhan sel terkontrol b. Turbidostat: Steady state monitor turbiditas biomasa

Plug flow reactor

Kultur dialirkan dlm reaktor berbentuk tabung Tanpa percampuran balik Sel harus ditambahkan dg subtrat baru -komposisi nutrien -Jumlah sel -[O2] -produktivitas

Beda-beda

Tiap lokasi reaktor

Kondisi steady state :

Sel tercuci/hilang = pertumbuhan sel D= D= dilution rate = (1/X) (dX/dt) Laju pertumbuhan [sel] di bioreaktor

Dg persamaan Monod & konstanta Yield (Ys): biomasa Ys = ------------------------konsumsi substrat D Ks S = -----------m D

D Ks X = Ys (So - -------------- ) m D

So = [substrat] awal

Pd flow rate rendah substrat hampir terpakai semua: S~0 X = Ys .So Jika D meningkat X turun perlahan sampai pd D = m Pencucian tercapai Dm X ~ 0 m So Dm = -------------Ks + So So ----------- ~ 1 Ks + So D m = m

Jika D > Dm kondisi steady state tidak akan tercapai sel akan tercuci !!!! Jika D sedikit lebih rendah dari Dm sistem sensitif thd pengaruh luar Pengembangan fermentasi kontinu untuk produksi: protein sel tunggal antibiotik pelarut organik kultur starter dekomposisi selulosa pengolahan limbah cair beer glukosa isomerase etanol

Kendala aplikasi di skala industri:

Harus stabil untuk paling tidak 500 1000 jam skala lab: 20 200 jam Sulit menjaga sterilitas dalam jangka waktu lama Komposisi media harus selalu sama Timbulnya mutan yg produktivitasnya rendah dg pertumbuhan lebih cepat

Kelebihan fermentasi kontinu:

1. 2. 3. 4. Bioreaktor lebih kecil utk produksi jumlah sama Batch perlu peralatan besar, juga utk proses selanjutnya Tidak ada waktu istirahat dalam produksi Taraf fisiologi MO sama

Fermentasi Batch vs Fed-Batch

E. Coli rekombinan produksi protein asing: 1. Pd fase stasioner produk didegradasi segera 2. Fed-batch: ada perpanjangan fase log

Kembali

m beberapa fungi dg substrat glukosa

Organisme Aspergilus niger Aspergilus nidulans T (oC) 30 20 25 30 37 25 25 25 30 25 25 m(h-1) 0.20 0.090 0.148 0.215 0.360 0.123 0.17 0.18 0.28 0.24 0.41
Waktu doubling (h)

Penicillium chrysogenum Mucor hiemalis Fusarium avanaceum Fusarium graminearum Verticillium agaricinum Geotricum candidum

3.46 7.72 4.68 3.23 1.96 5.65 4.1 3.8 2.48 2.9 1.7

kembali

m Fusarium graminearum (glukosa, 30 C)

Substrat Jumlah glukosa (unit) 1 2 3 m(h-1)
Waktu doubling (h)

Glukosa Maltosa Maltotriosa

0.28 0.22 0.18

2.48 3.15 3.85

kembali