HUBUNGAN MEROKOK ROKOK DAN MUTASI DARI p53 GENSKUAMOSA - KARSINOMA SEL KEPALA DAN LEHER abstrak Latar

Belakang . Meskipun studi epidemiologi memiliki panjang terkait tembakau dan alkohol dengan pengembangan karsinoma sel skuamosa kepala dan leher , target molekul ini memiliki karsinogen belum diidentifikasi . Kami melakukan analisis molekuler untuk menentukan pola mutasi pada gen p53 dalam neoplasma dari pasien dengan karsinoma sel skuamosa ma kepala dan leher dan sejarah tembakau atau alcohol gunakan . Metode . Analisis urutan dilestarikan re -gions dari gen p53 dilakukan pada sampel tumor dari 129 pasien dengan karsinoma sel skuamosa primer kepala dan leher . Kami kemudian menggunakan analisis statistik untuk mengidentifikasi karakteristik pasien yang berhubungan dengan mutasi tion dari gen p53 . Hasil . Kami menemukan mutasi p53 di 42 persen dari pasien ( 54 dari 129 ) . Lima puluh delapan persen dari pasien yang merokok dan menggunakan alkohol ( 37 dari 64 , 95 persen interval kepercayaan , 45 dengan 70 persen ) , 33 persen dari pasien yang merokok tetapi abstain dari alkohol ( 13 dari 39 , interval kepercayaan 95 persen , 19-50 per persen ) , dan 17 persen dari pasien yang tidak merokok

Data epidemiologi telah sangat terkait ciga rette merokok dan konsumsi alkohol ke de Pembangunan kanker tertentu .

1,2 Merokok adalah yang paling penyebab umum kematian terkait kanker di Amerika Amerika Serikat, dan penggunaan tembakau dan alkohol menyumbang satu sepertiga dari semua kematian terkait kanker . 1,2 Tembakau dan alcohol adalah agen etiologi penting dalam sel skuamosa karsinoma kepala dan leher . 3-6 Sebuah skala besar pro Studi perspektif menetapkan bahwa risiko relatif kematian akibat kanker di kalangan perokok yang lebih tua dari 35 tahun usia, dibandingkan dengan bukan perokok , adalah 27,5 untuk lisan dan kanker faring dan 10,5 untuk kanker laring . 7 Pemaparan berulang terhadap spesifik karsinogen dalam rokok asap dapat menyebabkan beberapa lesi neoplastik di mucosa dari Saluran pernafasan dan pencernaan ( bidang karsinogenesis ) . 8,9 The Saluran pernafasan dan pencernaan bagian atas , satu-satunya daerah di tubuh di mana saluran pencernaan dan saluran udara membentuk saluran umum , adalah situs yang ideal untuk mengevaluasi efek independen dan sinergis tembakau dan alkohol . Target molekul asap rokok dan alkohol atau minum alkohol ( 4 dari 24 , interval kepercayaan 95 persen , 5-37 persen) memiliki mutasi p53 ( P ? 0,001 ) . ( Dua pa -

tients digunakan alkohol tetapi tidak merokok , dan tidak memiliki p53 mutasi . ) Selain itu , 100 persen dari mutasi pada pasien yang tidak minum atau merokok terjadi pada situs yang berisi cytidine fosfat guanosin dinucle otides ( berpotensi mewakili mutasi endogen ) dalam gen p53 (5 dari 5 mutasi , 95 persen kerahasiaan Interval dence , 48-100 persen ) , sedangkan hanya 23 per persen dari mereka yang perokok terdiri dari seperti perubahan ( 12 dari 53 mutasi , 95 persen kepercayaan antar val , 12 sampai 36 persen; P ? 0,001 ) .

Kesimpulan . Dalam penelitian kami , sejarah tembakau dan alPenggunaan cohol dikaitkan dengan frekuensi tinggi p53 mutasi pada pasien dengan karsinoma sel skuamosa dari kepala dan leher . Bukti awal terkait rokok merokok untuk mutasi p53 pada mutasi nonendogenous situs . Temuan kami menunjukkan peran tembakau di mo perkembangan lecular karsinoma sel skuamosa dari kepala dan leher dan mendukung bukti epidemiologi bahwa berpantang dari merokok adalah penting untuk mencegah kanker kepala dan leher . ( N Engl J Med 1995 ; . 332:712-7 )

belum tegas diidentifikasi. Karsinogen dapat meninggalkan unik "sidik jari " dalam bentuk mutasi spesifik yang menyebabkan inisiasi atau perkembangan kanker . 10,11 Mutasi dari gen p53 , al - genetik yang paling umum

teration pada kanker manusia , telah dikaitkan dengan tembakau merokok pada karsinoma sel skuamosa kepala dan leher , serta esofagus , paru-paru , dan kandung kemih bisacer . 11,12 Namun, kesimpulan ini didasarkan pada studi volving sejumlah kecil pasien dan sering immuno evaluasi histokimia , 13-23 metode yang , karena tingkat tinggi palsu positif dan negatif palsu , tidak tidak selalu mengidentifikasi mutasi gen p53 . 24-27 Al meskipun secara teknis sulit dan memakan waktu , mo sequencing lecular adalah standar emas untuk mendeteksi mutasi p53 . Ini adalah satu-satunya cara untuk mengidentifikasi pola mutasi p53 yang mungkin timbul dari expo Pastikan untuk karsinogen . 11 Kami mengumpulkan sampel invasif karsinoma sel skuamosa kepala dan leher , se quenced gen p53 , dan berusaha untuk menentukan apakah karakteristik klinis setiap berkorelasi dengan mutasi gen .

METODE pasien Seratus empat puluh empat pasien berturut-turut dengan sel skuamosa karsinoma kepala dan leher yang tengah menjalani biopsi atau sur -

reseksi gical di Johns Hopkins lembaga medis yang Prospec tively mengadakan penelitian , yang telah disetujui oleh yang sesuai kelembagaan dewan peninjau . Enam puluh sembilan pasien ini telah menjadi bagian dari penelitian sebelumnya menyelidiki nilai p53 sebagai molekul penanda sel tumor okultisme dalam sampel patologis . 28 demografis

Data dikumpulkan dari grafik rumah sakit , registri kanker, dan wawancara dengan pasien dan dokter yang merawat seperlunya . Data demografi pada setiap pasien dikumpulkan oleh anggota staf yang tidak memiliki pengetahuan tentang status atau jenis p53 mutasi hadir dalam tumor pasien . Sejarah penggunaan tembakau dan alkohol adalah hati-hati dokumen ed . Bukan perokok dan bukan peminum didefinisikan sebagai pasien yang pernah digunakan , jarang digunakan , atau telah berhenti menggunakan tembakau dan alkohol , masing masing, lebih dari 20 tahun sebelum dirawat karena kepala dan leher kanker. Perokok dan peminum didefinisikan sebagai pasien dengan moderat atau berat penggunaan rokok (setidaknya 20 pack - tahun ) dan alkohol (satu atau lebih minuman per hari - satu minuman yang didefinisikan sebagai mengandung ap kira 10 gram alkohol , yang setara dengan 1 oz [ 30 ml ] dari 86 -bukti minuman keras , satu 3.6 - oz [ 108 ml ] segelas anggur mengandung 12 persen alkohol , atau satu 12 - oz [ 360 ml ] kaleng bir ) , masing-masing, selama 20 tahun sebelum pengobatan mereka untuk kanker kepala dan leher . 4 Kami di cenderung untuk stratifikasi pasien berdasarkan apakah mereka telah berhenti menggunakan tembakau atau alkohol lebih dari 15 , 10 , atau 5 tahun sebelum mengobati pemerintah atau masih menggunakan mereka pada saat penelitian kami . Data perioperatif termasuk simpul - tumor metastasis

stadium kanker kepala dan leher ( stadium I , II , III , atau IV sesuai dengan sistem pementasan dari American Komite Bersama Kanker 29 ), situs dari tumor primer , dan tingkat patologis dari neo plasma pada pemeriksaan mikroskopis cahaya . Semua pasien ditugaskan untuk subkelompok menurut apakah kanker itu baru didiagnosis atau berulang pada saat evaluasi gen p53 .

Analisis molekuler Dengan persetujuan pasien , bagian dari tumor invasif dikumpulkan di ruang operasi dan segera dibekukan dalam cairan ni trogen . Spesimen beku microdissected untuk menghapus biasa jaringan (hanya contoh yang mengandung lebih dari 50 persen neoplastik sel dimasukkan dalam analisis ) , dan DNA diisolasi . 30 A 1.8 - kb fragmen dari gen p53 meliputi ekson 5 sampai 9 adalah am plified dari DNA primer tumor beku oleh berantai polimerase reaksi, 31 kloning , dan kemudian sequencing . 32 Hasil dikonfirmasi dengan amplifikasi berulang , kloning , dan sekuensing tumor DNA ( daftar lengkap mutasi p53 spesifik pada pasien ini tersedia berdasarkan permintaan ) .

Analisis Statistik Temuan klinis dan patologis dianalisis dengan hormat

mutasi p53 dengan menggunakan chi -square dan uji eksak Fisher . Hubungan beberapa karakteristik pasien dengan mutasi dari gen p53 juga diperiksa dengan regresi logistik . Kami menggunakan JMP 3.0 software statistik ( SAS Institute , Cary , N.C. ) .

HASIL Karakteristik Pasien Seratus empat puluh empat pasien berturut-turut dengan inmerajalela karsinoma sel skuamosa kepala dan leher yang terdaftar dalam penelitian ini . Tiga pasien RPMI ed karena kurangnya data demografis ( rumah sakit mereka grafik tidak bisa ditemukan ) , dan 12 pasien lainnya dikeluarkan karena rokok -rokok dan alkohol sejarah konsumsi yang tidak tersedia . Demo data grafis dianalisis secara terpisah untuk 102 pa pasien dengan kanker yang baru didiagnosis dan 27 pasien dengan kanker berulang ( Tabel 1 ) . Dari pasien yang baru didiagnosis sel skuamosa karsinoma kepala dan leher , 88 persen ( 90 dari 102 ) disajikan dengan canggih stadium III atau IV kanker , seperti khas di sebagian besar pusat kanker tersier . Yang paling com situs utama mon adalah laring , rongga mulut , dan orofaring . Pemeriksaan mikroskopis dari Light-

spesimen operasi , tersedia untuk 86 pasien , kembali vealed bahwa sekitar setengah neoplasma yang diferensiasi sedang , yang lain secara merata divid ed antara berdiferensiasi baik dan buruk differentiat kanker ed . Kebanyakan pasien dengan kanker yang baru didiagnosis rokok saat ini merokok ( 81 dari 102 , atau 79 persen )

atau telah merokok dalam 20 tahun terakhir ( sejarah di sedikitnya 20 pack - tahun ) . Lima puluh tujuh persen dari pa tients ( 58 dari 102 ) juga melaporkan sedang hingga berat Asupan alkohol dalam 20 tahun terakhir . sangat sedikit pasien telah berhenti menggunakan baik tembakau atau alkohol dalam 20 tahun terakhir , sehingga kami tidak subdi vide kelompok berdasarkan apakah mereka telah berhenti merokok atau minum alkohol 5 , 10 , atau 15 tahun sebelum penelitian dimulai .

Dua puluh satu persen dari pasien ( 27 dari 129 ) pra sented dengan sebelumnya dirawat sel skuamosa berulang karsinoma kepala dan leher ( Tabel 1 ) . Delapan puluh satu persen dari pasien tersebut ( 21 dari 26 ) telah diklasifikasikan sebagai memiliki stadium I atau II lesi ketika asli diag nosis dibuat ( pada 1 pasien tidak ada dokumentasi tion tahap awal ) . Tahap berulang neoplasma tidak direvisi untuk mencerminkan terjadinya tumor lebih maju , meskipun pasien tipikal Cally disajikan dengan penyakit locoregional luas . Situs utama dari berulang dan baru didiagnosis neoplasma adalah serupa , dan derajat histologis diferensiasi ( tersedia untuk 127 pasien ) juga serupa. Di antara pasien dengan kanker berulang , 82

PEMBAHASAN Pola mutasi telah dikaitkan dengan cer tain karsinogen lingkungan .

10,11,37-39 Kami sequencing gen p53 dalam spesimen tumor dari pasien 129 dengan karsinoma sel skuamosa kepala dan leher dan menemukan bahwa mutasi gen berkorelasi kuat ly dengan merokok , baik sendiri atau dalam kombinasi tion dengan konsumsi alkohol . Mutasi ini adalah 3,5 kali lebih umum di antara pasien yang baik merokok dan minum alkohol dari kalangan pa tients yang tidak merokok atau minum . Sebuah minoritas yang signifikan dari pasien ( 19 persen ) tidak merokok atau minum , dan 30 persen merokok tapi abstain dari alkohol . Dengan demikian kita bisa menganalisis tembakau dan penggunaan alkohol sebagai faktor risiko independen untuk mutasi tion dari gen p53 . Karena hanya dua pasien minum alcohol tapi tidak merokok , kita tidak bisa mengevaluasi ef Pengaruh dari alkohol tanpa adanya merokok . Data link awal mutasi gen p53 dengan merokok pada pasien dengan karsinoma paru . 17-20 Sebagian besar penelitian telah menggunakan imunohistokimia analisis untuk mengevaluasi protein p53 , metode ini memiliki harga negatif yang besar positif palsu dan palsu dibandingkan dengan mereka untuk sequencing molekul . 24-27,40 di pasien kami , 28 persen dari mutasi p53 bisa memiliki menghasilkan protein p53 terpotong , yang tidak akan noda dengan label antibodi anti - p53 . studi lain menghubungkan paparan karsinogen dengan mutasi p53

menemukan 14 mutasi , yang sebagian besar adalah GC TA . 17 Para penulis menyarankan bahwa benzo [ sebuah ] pyrene dalam tembakau asap khusus menyebabkan GC TA mutasi pada p53 gen . 17 Pada kanker kerongkongan , neoplasma lain relat ed untuk merokok dan konsumsi alkohol , berbagai mutasi p53 telah ditemukan , yang paling umum GC AT dan GC TA . 15,16 Mutasi dari gen p53 pada pasien dengan kanker kandung kemih yang merokok biasanya terdiri dari GC CG dan AT GC . 22,41 Ini mutasi

tions mungkin hasil dari amina aromatik dan N -[4-(5nitro - 2 - furil ) - 2 - thiaxolyl ] formamida , yang keduanya hadir pada peningkatan kadar dalam sel urothelial di ciga rette perokok . Semua pasien dalam studi sebelumnya adalah perokok rokok , dan kanker mereka memiliki lebar spektrum perubahan pasangan basa pada gen p53 , mirip dengan pasien kami dengan karsinoma sel skuamosa kepala dan leher yang menggunakan tembakau dan alkohol (Gambar 3 ) . Karena mutagen baik endogen dan eksogen

menghasilkan jenis tertentu substitusi pangkalan di pra situs ditransfer , spektrum mutasi p53 pada tumor dapat memberikan informasi tentang perjuangan mereka . 38,39,42 itu pola mutasi p53 pada pasien kami adalah penting dalam dua hal . Pertama , insiden tertinggi mutasitions dikaitkan dengan paparan tembakau dan alkohol . Pada pasien di Papua Nugini yang memiliki karsinoma sel skuamosa kepala dan leher pra dominan terkait dengan mengunyah sirih , 43 itu kejadian mutasi p53 jauh lebih rendah ( 10 per persen ) , menunjukkan bahwa tembakau ( dan mungkin alkohol ) dapat menghasilkan karsinogen yang meningkatkan frekuensi mutasi tersebut . Kedua , lokasi perubahan

dalam gen p53 sehubungan dengan situs CpG juga terkait dengan paparan tembakau rokok dan alcohol . Perubahan ini pada situs CpG telah diimplikasikan kasikan sebagai endogen mutasi " hot spot " yang dihasilkan dari metilasi dan deaminasi sitosin oleh cel proses enzimatik lular . 42,44 Akibatnya , lebih tinggi persentase perubahan pada situs CpG akan diharapkan

pada pasien mutasi yang terjadi tanpa substansial paparan esensial ke lingkungan karsinogen . dalam usus besar kanker, neoplasma tidak terkait dengan merokok, frekuensi mutasi p53 juga tinggi , namun sebagian besar musultasi terjadi pada situs CpG endogen . 42 Dalam kelompok pasien yang tidak merokok atau minum , kami juga terdeteksi dominasi mutasi pada situs CpG . Namun, sejumlah kecil mata pelajaran dalam kelompok ini berarti bahwa temuan ini harus dianggap sebagai pendahuluan inary . Penelitian kritis telah menunjukkan bahwa hilangnya pro protektif mekanisme sel p53 memungkinkan evolusi populasi klonal sel dengan pertumbuhan selektif adpandang yang akhirnya dapat mengakibatkan perkembangan kanker. 45,46 Selain itu , inaktivasi gen p53 dapat menjadi langkah penting dalam perkembangan preinvasive

lesi kepala dan leher . 23 jenis perubahan pasangan basa pada karsinoma sel skuamosa dari kepala dan leher menunjukkan keterlibatan banyak racun tembakau sejauh ini diidentifikasi , meskipun pengalamanKASIH pada hewan telah menunjukkan bahwa tembakau -spesifik nitrosamine yang berasal dari nikotin mungkin utama culprit.1 Hasil kami juga menunjukkan bahwa alkohol mungkin Agustus ment efek tembakau dengan lebih meningkatkan frekuensi mutasi p53 . Para peneliti telah menyarankan ed bahwa alkohol dapat menyebabkan cedera mukosa dan meningkatkan penyerapan racun mutagenik hadir di ciga rette smoke.3 Konsumsi alkohol dapat juga langsung menyebabkan karsinogenesis dengan menginduksi enzim mikrosomal terlibat dalam metabolisme karsinogen oleh kontributor uting kekurangan nutrisi , dan dengan memperkenalkan mobil kotoran cinogenic yang mungkin telah terkontaminasi alco holic beverages.3 Kami telah menunjukkan bahwa merokok dan konsumsi alkohol meningkatkan frekuensi p53 mu sultasi . Meskipun mutasi tersebut juga terjadi pada kanker yang tidak berhubungan dengan merokok , temuan kami memberikan bukti lebih lanjut bahwa mutasi tersebut umumnya re dibatasi pada endogen hot spot pada perokok dan bahwa asap rokok mungkin memiliki kecenderungan untuk inacti swasta gen p53 . Karena inaktivasi gen ap pir penting untuk perkembangan banyak kepala dan kanker leher , data molekuler kami sangat mendukung epidemiologi bukti bahwa berpantang dari merokok penting untuk pencegahan kanker tersebut . lebih -

lebih , hubungan antara paparan tembakau dan p53 mu sultasi pada karsinoma sel skuamosa kepala dan leher menimbulkan kemungkinan bahwa karsinogenik tertentu eksposur dapat berfungsi sebagai agen etiologi dalam tertentu kanker pasien .