PRAKTIKUM METODE PEMISAHAN BAHAN ALAM ISOLASI DAN IDENTIFIKASI ANTOSIANIN DARI KULIT MANGGIS (Garcinia mangostana L.

KELOMPOK PRAKTIKUM: 3 HARI/TGL PRAKTIKUM: SABTU/19 OKTOBER 2013 DISUSUN OLEH

M. Ifan Iswandi Ni Made Dwi Dianthy Maryadhi Angelia Putri Moeliono Dewa Ayu Adelia i!iandari Ni #ade$ %anti$a Dewi Ade 'udihendrawan Angelia %ita Diarini 'agus Nyo)an %ugiastana

1008505042 1008505044 1008505046 100850504" 100850504& 100850505( 1008505055 100850505"

Lab !a" !#$% Fa!%a& '( )# *a( F#" &#%#a +$!$)a( Fa!%a)# Fa&$,"a) Ma"-%a"#&a *a( I,%$ P-('-"a.$a( A,a% U(#/-!)#"a) U*a0a(a

Ta.$( 2013
DAFTAR ISI

DAFTAR ISI.................................................................................................................. ii DAFTAR TABEL........................................................................................................... iii DAFTAR GAMBAR....................................................................................................... iv BAB I........................................................................................................................... 1 PENDAHULUAN........................................................................................................... 1 1.1 Latar Belakang.................................................................................................. 1 1.2 Ru u!an Ma!ala"............................................................................................. 2 1.# M$%i&ika!i Se%er"ana 'ang Dita (ilkan............................................................2 BAB II.......................................................................................................................... # TIN)AUAN PUSTA*A..................................................................................................... # 2.1 Manggi! +Gar,inia ang$!tana L.-....................................................................#

2.2 Flav$n$i%........................................................................................................... # 2.# Ant$!ianin......................................................................................................... . 2.. Skrining Fit$ki ia.............................................................................................. / 2./ *r$ at$gra&i 0aku 1air.................................................................................. 2

2.2 *r$ at$gra&i La(i! Ti(i!.................................................................................... 2 2.3 *r$ at$gra&i La(i! Ti(i! Pre(arati&...................................................................3 2.4 S(ekt$&$t$ etri U050i!..................................................................................... 4 BAB III....................................................................................................................... 16 MET7DE.................................................................................................................... 16 #.1 Alat %an Ba"an................................................................................................ 16 #.2 Pr$!e%ur *er8a................................................................................................. 16 #.# Ske a *er8a.................................................................................................... 19

ii

DAFTAR PUSTA*A..................................................................................................... ##

DAFTAR TABEL

*a+el 2.1 #edudu$an Pita ,ada %,e$tru) Antosinidin dan Antosianin-------- 8 *a+el 2.2 Petun.u$ Pola /idro$silasi ,ada %,e$tru) Na0Me dan Al1l(............................. &

iii

DAFTAR GAMBAR 2a)+ar 2.1 %tru$tur Antosianidin------------------------. 4 2a)+ar 2.2 Alat #ro)atografi #olo) a$u) 1air..................................................................... 6

i!

BAB I PENDAHULUAN 1.1 La"a! B-,a&a(' 'er$e)+angnya industri ,engolahan ,angan dan ter+atasnya .u)lah dan )utu 3at ,ewarna ala)i )enye+a+$an ,enggunaan 3at warna sintesis )ening$at. %e.a$ dite)u$annya 3at ,ewarna sinteti$ ,enggunaan ,ig)en se+agai 3at warna ala)i se)a$in )enurun4 )es$i,un $e+eradaannya tida$ )enghilang sa)a se$ali 56inarno4 1&&27. %e8ara garis +esar ,ewarna di+eda$an )en.adi dua4 yaitu ,ewarna ala)i dan sintetis. #ele)ahan ,ewarna ala)i ini adalah warna ini tida$ ho)ogen sehingga sulit )enghasil$an warna yang sta+il serta $etersediannya yang ter+atas sedang$an $ele+ihannya adalah a)an di$onsu)si 5%yah4 20057. Pewarna sintesis )eru,a$an 3at $i)ia se+agai +ahan ta)+ahan ,ada )a$anan yang +isa sangat +er+ahaya +ila diguna$an +erle+ih dari dosis yang telah dian.ur$an 5/uta.ulu d$$4 20087. Penggunaan ,ewarna sinteti$ se+agai ,ewarna )a$anan atau )inu)an da,at +erda),a$ negatif yaitu )enye+a+$an to$si$ dan $arsinogeni$. 0leh $arena itu ,enggunaan ,ewarna ala)i ,erlu diting$at$an $e)+ali4 salah satunya dengan )e)anfaat$an $ulit +uah )anggis untu$ diolah )enghasil$an ,ewarna ala)i yang +er,otensi )engganti$an ,ewarna sinteti$ 5%etyaningru)4 20107. #ulit +uah )anggis )engandung antosianin se,erti cyaniding-3-sophoroside dan cyaniding-3-glucoside4 selain itu $ulit +uahnya )engandung senyawa ,e$tin4 tanin4 dan resin. Antosianin )eru,a$an salah satu 3at ,ewarna ala)i +erwarna $e)erah9)erahan yang larut air. Antosianin tergolong senyawa fla!onoid yang )e)ili$i fungsi se+agai antio$sidan ala)i. Antosianin )a),u )enghenti$an rea$si radi$al +e+as dengan )enyu)+ang$an hidrogen atau ele$tron ,ada radi$al +e+as dan )ensta+il$annya. %ifat antosianin se+agai antio$sidan di$arena$an terda,atnya dua 8in8in +en3ene yang dihu+ung$an dengan tiga ato) 1 dan dira,at$an oleh satu ato) 0 sehingga ter+entu$ 8in8in di antara dua 8in8in +en3ene ,ada antosianin 5%etyaningru)4 20107. 'erdasar$an ,enelitian 6iwin %u,iyanti d$$ ,ada tahun 20104 $adar rata9rata antosianin total ,ada

$ulit +uah )anggis 5Garcinia mangostana :.7 tia, 100 gra)nya +er$isar ,ada 5&4()g atau dengan ,ersentase 0405&(;. 'erdasar$an latar +ela$ang diatas )a$a ,erlu dila$u$an isolasi senyawa fla!onoid yaitu antosianin dari $ulit +uah )anggis 5Garcinia mangostana :.7. 1.2 R$%$)a( Ma)a,a. 'agai)ana isolasi4 ,e)isahan dan identifi$asi senyawa golongan fla!onoid4 yaitu antosianin dari e$stra$ $ulit +uah )anggis 5Garcinia mangostana :.7< 1.3 M *#1#&a)# S-*-!.a(a 0a(' D#"a%2#,&a( Modifi$asi sederhana dila$u$an ,ada taha, ,enyia,an sa),el dan )etode e$stra$si. 1.(.1 Penyia,an %a),el =urnal a8uan yang diguna$an +er.udul >.i A$ti!itas Antio$sidan dan Penentuan #andungan Antosianin *otal #ulit 'uah Manggis 5Garcinia mangostana :.7 5%u,iyanti4 20107. Modifi$asi ,ada taha, ,enyia,an sa),el dila$u$an ,ada ,roses ,engeringan sa),el. Pada .urnal a8uan ini ,enyia,an sa),el ,ada ,roses ,engeringan dila$u$an di+awah sinar )atahari langsung. Proses ,engeringan ini di)odifi$asi yang dila$u$an dengan 8ara diangin9 angin$an ,ada ruangan. 1.(.2 Metode ?$stra$si Pada taha, )etode e$stra$si ini )odifi$asi dila$u$an ,ada wa$tu dila$u$annnya )aserasi. Pada .urnal a8uan4 )aserasi dila$u$an sela)a 24 .a) tan,a dila$u$an re)aserasi dan ,ada ,ra$ti$u) ini )aserasi dila$u$an sela)a 24 .a) dengan dila$u$an re)aserasi sela)a 24 .a).

BAB II TIN+AUAN PUSTAKA 2.1 Ma(''#) (Garcinia mangostana L.) Di Indonesia4 )anggis dise+ut dengan +er+agai )a8a) na)a lo$al se,erti )anggu 5=awa 'arat74 )anggus 5:a),ung74 )anggusto 5%ulawesi >tara74 dan )anggista 5%u)atra +arat7. #lasifi$asi tana)an )anggis adalah se+agai +eri$ut@ Di!isi %u+ Di!isi #elas %u+ #elas 0rdo Aa)ily 2enus %,e8ies @ %,er)ato,hyta @ Angios,er)ae @ Di8otyledonae @ Ar8hiela)ida8ea @ Parietales @ 2uttiferae @ 2ar8inia @ Garcinia mangostana :inn. 5=uanda dan 1ahyono4 20007 'agian $ulit +uah )anggis da,at di)anfaat$an se+agai ,enghasil 3at warna ala)i yang da,at diguna$an se+agai ,ewarna )a$anan4 .uga da,at di)anfaat$an se+agai antio$sidan4 antidiare dan anti$an$er. %alah satu senyawa fla!onoid yang ter$andung dala) $ulit +uah )anggis adalah antosianin. %elain antosianin4 ,ada $ulit +uah )anggis .uga da,at dite)u$an4 Banthon4 alfa9)angostin dan tanin 5%u,iyanti4 20107. 2.2 F,a/ ( #* Ala!onoid adalah senyawa fenol ala) yang terda,at dala) ha),ir se)ua tu)+uhan. Di dala) tu)+uhan fla!onoid +iasanya +eri$atan dengan gula se+agai gli$osida. Mole$ul yang +eri$atan dengan gula tadi dise+ut agli$on. Agli$on fla!onoid terda,at dala) dala) +er+agai +entu$ stru$tur4 se)uanya )engandung 15 ato) $ar+on 517 dala) inti dasarnya yang tersusun dala) $onfigurasi 16 C 1( C 164 yaitu dua 8in8in aro)ati$ yang dihu+ung$an oleh satuan tiga $ar+on yang da,at atau tida$ da,at

)e)+entu$ 8in8in $etiga. #etiga 8in8in terse+ut di+eri tanda A4 '4 dan 1. Ato) $ar+on di+eri no)or )enurut siste) ,eno)oran yang )engguna$an ang$a +iasa untu$ 8in8in A dan 1 serta ang$a +era$sen untu$ 8in8in ' 5Mar$ha)4 1&887. %usunan ini )enghasil$an tiga .enis stru$tur senyawa fla!onoid yaitu fla!onoid atau 14( diaril,ro,ana4 isofla!onoid atau 142 diaril,ro,ana dan neofla!onoid atau 1419 diaril,ro,ana. Ala!on4 fla!onol4 antosianin adalah .enis yang +anya$ dite)u$an di ala) sehingga sering dise+ut fla!onoid uta)a 5:enny4 20067. 2.3 A(" )#a(#(

2a)+ar 2.1 %tru$tur Antosianidin 5Dai4 20107 %e8ara $i)ia4 se)ua antosianin )eru,a$an turunan dari $ation fla!iliu) 5(454"44D9 tetrahidro$sifla!ilu)7 yang )eru,a$an stru$tur dasar dari antosianidin 5/ar+orne dan 2rayer4 1&887. %e)ua antosianin )eru,a$an turunan suatu stru$tur aro)ati$ tunggal4 yaitu sianidin yang dengan ,ena)+ahan atau ,engurangan gugs hidro$sil4 )etilasi4 atau gli$osilasi )a$a .enis antosianin lain ter+entu$ 5/ar+orne dan 2rayer4 1&887. Manurut Mar$a$is 51&827 )ole$ul antosianin disusun dari se+uah agli$on 5antosianidin7 yang teresterifi$asi dengan salah satu atau le+ih gula 5gli$on7. Menurut /ar+orne dan 2rayer4 1&884 gula yang )enyusun antosianin terdiri dari )onosa$arida4 +iasanya glu$osa4 gala$tosa4 ara+inoseE disa$arida yang )eru,a$an dua +uah )onosa$arida dengan $o)+inasi dari e),at )onosa$arida diatas dan Bilosa4 se,erti rutinosaE trisa$arida4 )eru,a$an tiga +uah )onos$arida yang )engandung $o)+inasi dari gula9gula diatas dala) ,osisi linier )au,un 8a+ang Antosianin yang terda,at ,ada tana)an +er+entu$ gli$osida yaitu ester dengan satu )ole$ul )onosa$arida dise+ut )onoglu$osida4 dan +iosida atau diglu$osida .i$a

)e)ili$i dua )ole$ul gula 56inarno4 1&&"7. #eraga)an antosianin da,at ter.adi $arena ,er+edaan sifat gula4 .u)lah satuan gula4 dan leta$ i$atan gulanya. Mole$ul gula ini da,at )e)+eri$an da),a$ $esta+ilan ,ada )ole$ul antosianin. Pada )ole$ul gulanya sering ter.adi asilasi sehingga terda,at )ole$ul $e tiga yang +iasanya +eru,a asa) ferulat4 $ou)arat4 $aferat4 )aloni$4 atau asetat 5'ennion4 1&80E *ranggono4 1&&0E Aran8is4 20007. Pig)en antosianin di,engaruhi oleh +e+era,a fa$tor diantaranya adalah $andungan ,ig)en4 ,/4 suhu4 en3i)4 loga)4 dan $o,ig)entasi 5Aran8is4 1&827. 2li$olisasi dan )etilasi .uga turut )e),engaruhi warna ,ig)en terse+ut. Pena)+ahan gugus gli$osida atau ,ening$atan .u)lah gugus hidro$sil +e+as ,ada rantai $ar+on no)or 5 58in8in A7 da,at )ening$at$an warna $e+iruan4 sedang$an )etilasi da,at )ening$at$an warna $e)erahan 5Fo+inson4 1&&17. Pada ,/ rendah4 stru$tur $ation fla!iliu) do)inan4 sedang$an ,ada ,/ 496 +entu$ $ar+inol yang do)inan 5?l+e dan %8hwat34 1&&67. %e)a$in tinggi nilai ,/4 )a$a warna dari antosianin )en.adi se)a$in ,u8at dan a$hirnya tida$ +erwarna. %ehingga antosianin le+ih sta+il ,ada larutan yang +ersifat asa) 5,/ 2947 dari,ada larutan yang +ersifat netral atau +asa4 teruta)a $eadaan tan,a o$sigen 5'rouilard4 1&"27. Antosianin adalah ,ig)en yang sifatnya ,olar dan a$an larut dengan +ai$ dengan ,elarut 9,elarut ,olar. Gat warna yang didete$si dengan sinar ta),a$ +erwarna .ingga4 )erah atau )erah sendudu$ adalah antosianidin (9 gli$osida. 'erdasar$an 8iri s,e$tru)nya4 3at warna dengan ,an.ang gelo)+ang )a$si)u) 4"59 560 n) adalah antosianin 5/ar+orne4 1&&67. 2.3 S&!#(#(' F#" &#%#a Metode s$rining fito$i)ia )eru,a$an rea$si ,engu.ian warna dengan suatu ,erea$si warna. %$rining fito$i)ia )eru,a$an lang$ah awal yang da,at )e)+antu untu$ )e)+eri$an ga)+aran tentang golongan senyawa yang ter$andung dala) tana)an yang sedang diteliti. Metode yang diguna$an ,ada s$rining fito$i)ia harus )e)enuhi +e+era,a $riteria yaitu sederhana4 8e,at4 hanya )e)+utuh$an ,eralatan sederhana4 dan )e)ili$i +atas li)it dete$si yang 8u$u, le+ar 5da,at )endete$si $e+eradaan senyawa )es$i dala) $onsentrasi yang 8u$u, $e8il7. %etia, tana)an tentunya )e)ili$i $o),osisi $andungan yang +er+eda9+eda sehingga $elarutan suatu

senyawa .uga tida$ +isa ditentu$an se8ara ,asti. #esulitan lain ,ada ,roses s$rining fito$i)ia adalah adanya false-positive result dan false-negative result.. =adi $o),osisi 8a),uran senyawa yang ter$andung dala) tana)an da,at )e)+eri$an hasil ,ositif )es$i,un senyawa yang diu.i tida$ terda,at dala) tana)an terse+ut atau ,un )e)+eri$an hasil negati!e4 walu,un senyawa yang diteliti se+enarnya terda,at didala) sa),el 5Mar$ha)4 1&887. 2.4 K! %a" '!a1# 5a&$% 6a#! #ro)atografi !a$u) 8air )eru,a$an salah satu $ro)atografi $olo) $husus yang +iasanya .uga )engguna$an sili$a gel se+agai adsor+en 5+iasanya sili$a gel 604 6(9 200 )i$ro)eter7. Alat yang diguna$an adalah 1orong 'ugner +er$a8a )asir atau $olo) ,ende$ dengan dia)eter yang 8u$u, +esar. Pada $ro)atografi !a$u) 8air4 $olo) di$e)as $ering dala) $eadaan !a$u) agar di,eroleh $era,atan adsor+en yang )a$si)u). a$u) dihenti$an4 ,elarut yang ,aling non ,olar yang a$an di,a$ai dituang $e ,er)u$aan adsor+en $e)udian di !a$u) lagi. #olo) dihisa, sa),ai $ering dan sia, di,a$ai .i$a $olo) tida$ reta$ atau turunnya eluen sudah rata dengan $olo) 5#ristanti d$$.4 20087. Pada $ro)atografi !a$u) 8air4 fra$si9fra$si yang dita),ung +iasanya +er!olu)e .auh le+ih +esar di+anding$an dengan fra$si9fra$si yang di,eroleh dari $ro)atografi $olo) +iasa. :ang$ah ,e)isahan )engguna$an $ro)atografi !a$u) 8air +iasanya dila$u$an ,ada taha, awal ,e)isahan 5#ristanti d$$4 20087

2a)+ar 2.2 Alat #ro)atografi #olo) a$u) 1air 2.7 K! %a" '!a1# La2#) T#2#) #ro)atografi la,is ti,is 5#:*7 )eru,a$an +entu$ $ro)atografi ,lanar selain $ro)atografi $ertas4 yang )ana fase dia)nya +eru,a la,isan yang seraga) 5 uniform7

,ada ,er)u$aan +idang datar yang didu$ung oleh le),eng $a8a4 ,lat alu)iniu)4 atau ,lat ,lasti$. Aase gera$ yang di$enal se+agai ,elarut ,enge)+ang a$an +ergera$ se,an.ang fase dia) $arena ,engaruh $a,iler ,ada ,enge)+angan se8ara )enai$ 5ascending7 atau $arena ,engaruh gra!itasi ,ada ,enge)+angan se8ara )enurun 5descending7 52and.ar dan Foh)an4 200"7. Para)eter ,ada #:* yang diguna$an untu$ identifi$asi adalah nilai Ff. Ff di$ara$terisasi dengan .ara$ )igrasi solut terhada, .ara$ u.ung fase gera$nya. Aa$tor retardasi solut 5Ff7 didefinisi$an se+agai@

52and.ar dan Foh)an4 200"7. Dua senyawa di$ata$an identi$ .i$a )e),unyai nilai Ff yang sa)a .i$a diu$ur ,ada $ondisi #:* yang sa)a. >ntu$ )eya$in$an identifi$asi da,at dila$u$an dengan )engguna$an le+ih dari 1 fase gera$ dan .enis ,erea$si se),rot 52and.ar dan Foh)an4 200"7. 2.8 K! %a" '!a1# La2#) T#2#) P!-2a!a"#1 #ro)atografi la,is ti,is ,re,aratif adalah )etode untu$ ,e)e$atan $onsentrasi sa),el dan ,e)urnian yang da,at diguna$an $eti$a )enganalisa sa),el yang $o),le$s dengan $onsentrasi rendah. %ering$ali4 ,roses e$stra$si dan ,e)e$atatan $onsentrasi harus didahului dengan #:* untu$ )enghilang$an ,engotor yang +er)igrasi +ersa)a analit atau )enganggu ,roses dete$si. 'agai)ana,un .uga4 $euntungan dari #:* adalah $e)a),uan untu$ )enganalisa sa),el crude sehingga da,at )engurangi taha, ,re,arasi sa),el $arena ,lat hanya diguna$an se$ali. %a),el yang tida$ terlalu )urni yang tida$ +isa diin.e$si $e dala) 21 atau /P:1 tan,a )enganggu ananlisis4 da,at dianalisis dengan #:* se,erti sa),el ter)asu$ sa),el dengan ,engotor yang )en.adi di.era, se8ara ire!ersi+el. #e+anya$an siste) fase gera$ dari #:* ,re,aratif )engandung ,elarut ,olar dan chromatographically dissimilar yang le+ih $urang ,olar. >ntu$ ,e)isahan dengan #:* ,re,aratif4 $e,olaran siste) gera$ harus diturun$an hingga nilai Ff )en.adi 0415 dan 04(5. Fentang Ff ini o,ti)al untu$ ,e)isahan dengan #:* ,re,aratif dala) hal sample

"

load4 resolusi4 wa$tu retensi dan ,enggunaan ,elarut 56a$s)und3$a9/a.nos and %her)a4 20117. 2.9 S2-&" 1 " %-"!# U5:5#) %,e$trofoto)etri > 9 is )eru,a$an )etode yang da,at diguna$an untu$ )enganalisis stru$tur fla!onoid dan )enentu$an ,ola o$sigenasi. Disa),ing itu4 $edudu$an gugus hidro$sil fenol +e+as ,ada inti fla!onoid da,at ditentu$an dengan )ena)+ah$an ,erea$si 5,erea$si geser7 $e dala) larutan 8u,li$an dan )enga)ati ,ergeseran ,un8a$ sera,an yang ter.adi. Dengan de)i$ian4 se8ara tida$ langsung 8ara ini +erguna untu$ )enentu$an $edudu$an gula atau )etil yang teri$at ,ada salah satu gugus hidro$si fenol 5Mar$ha)4 1&887. %,e$tru) fla!onoid +iasanya ditentu$an dala) larutan dengan ,elarut 5Me0/4 AF atau yang setara7 atau etanol 5?t0/74 )es$i ,erlu diingat +ahwa s,e8tru) yang dihasil$an dala) etanol $urang +ai$. >ntu$ antosianin di,erlu$an /1l 044M dala) )ethanol. #edudu$an ,ita I ,ada s,e$tru) 8hal$on4 auron dan antosianin terda,at ,ada ,an.ang gelo)+ang yang tinggi. *a+el 2.1 #edudu$an Pita ,ada %,e$tru) Antosinidin dan Antosianin Pita II 5n)7 2"09280 Pita I 5n)7 4659560 =enis fla!onoid Antosinidin dan antosianin 5Mar$ha)4 1&887

%,e$tru) Na0Me )eru,a$an s,e$tru) fla!onoid yang gugus hidro$sil fenolnya sa),ai +atas tertentu terionisasi. #arena itu s,e$tru) ini +iasanya )eru,a$an ,etun.u$ ,ola hidro$silasi dan .uga +er)anfaat untu$ )endete$si gugus hidro$sil yang le+ih asa) dan tida$ tersu+stitusi. Degradasi atau ,engurangan $e$uatan s,e$tru) setelah wa$tu tertentu )eru,a$an ,etun.u$ +ai$ a$an adanya gugus yang ,e$a terhada, +asa. %,e$tru) Al1l( dan Al1l(H/1l $arena )e)+entu$ $o),le$s tahan asa) antara gugus hidro$sil dan $eton yang +ertetangga dan )e)+entu$ $o),le$s ta$ tahan asa) dengan gugus orto9hidro$sil4 ,erea$si ini da,at diguna$an untu$ )endete$si $edua gugus terse+ut. =adi s,e$tru) Al1l( )eru,a$an ,en.u)lahan ,engaruh se)ua $o),le$s terhada, s,e$tru). %edang$an s,e$tru) Al1l(H/1l hanya )eru,a$an ,engaruh $o),le$s hidro$si9$eto 5Mar$ha)4 1&887.

*a+el 2.2 Petun.u$ Pola /idro$silasi ,ada %,e$tru) Na0Me dan Al1l( %,e$tru) =enis fla!onoid Na0Me Al1l( Antosianidin Antosianin Antosianidin Antosianin Pergeseran yang ta),a$ Pita I Pita II %e)uanya terurai $e8uali (9 deo$siantosianidin I25 sa),ai (5 n) 5,ada ,/ 29 47 Pergeseran le+ih +esar Petun.u$ ,enafsiran Nihil o9di0/ 'anya$ o9di0/ atau o9di0/ 5(9 deo$siantosianidin 5Mar$ha)4 1&887

&

BAB III METODE 3.1 A,a" *a( Ba.a( 3.1.1 A,a" Alat9alat gelas4 nera8a analiti$4 chamber4 ,enye),rot4 ,o),a !a$u)4 alat s,e$trofoto)eter4 cutter4 rotary vacuum evaporator. 3.1.2 Ba.a( (.2.1 'ahan *ana)an #ulit 'uah Manggis 5Garcinia mangostana :7 (.2.2 'ahan Penun.ang Analisis Plat sili$a gel 2A2544 $ain hita)4 $ertas saring4 )etanol4 /1l 1;4 asa) asetat anhidrat4 Na0/ 2 M4 /1l 2 M4 Mayer :P4 'ou8hardat :P4 a)onia ,e$at P4 eter P4 $lorofor) P4 natriu) sulfat anhidrat P4 aseton P4 ser+u$ halus asa) +orat P4 air4 ,erea$si +esi 5III7 $lorida 1;4 etanol 5&5;7 P4 ti)+al 5II7 asetat 044 M4 $lorofor) P4 iso,ro,anol P4 )olish :P4 +utanol@asa) asetat@air 5'AA7 54@1@5 !H!74 loga) Na 4 P?4 n9he$sana4 Al1l( 3.2 P! )-*$! K-!;a 3.2.1 P-(0#a2a( Sa%2-, #ulit +uah Manggis 5Garcinia mangostana :7 di,eroleh dari daerah *a+anan4 'ali. #ulit +uah )anggis di8u8i dengan air )engalir sa),ai +ersih4 ditiris$an4 dan di,otong $e8il9$e8il. %elan.utnya $ulit )anggis yang telah di,otong $e8il9$e8il di$ering$an dengan 8ara diangin9angin$an4 $e)udian dihalus$an dengan +lender hingga di,eroleh ser+u$. %er+u$ yang di,eroleh disi),an ,ada wadah gela, tertutu, ra,at dan $ering. 3.2.2 M-" *- E&)"!a&)# (Ma)-!a)#) %e+anya$ 20 gra) ser+u$ $ulit +uah )anggis4 dita)+ah$an dengan 100 ): )etanol yang )engandung /1l 1; 5&@174 $e)udian di)aserasi sela)a 24 .a) di dala) to,les $a8a yang dila,isi alu)iniu) foil dan ditutu, dengan $ain hita).

10

#e)udian dila$u$an re)aserasi sela)a 24 .a) dengan )etanol yang )engandung /1l 1; 5&@17 se+anya$ 50 ):. %etelah dire)aserasi sela)a 24 .a)4 sari diser$ai4 a),as di,eras. ?$stra$ yang di,eroleh diua,$an sa),ai di,eroleh e$stra$ $ental. 3.2.3 S&!#(#(' F#" &#%#a K$,#" B$a. Ma(''#) (Garcinia mangostana L) 3.2.3.1 I*-("#1#&a)# a,&a, #* Fea$si Pengenda,an@ :arutan ,er8o+aan untu$ ,engenda,an al$aloid di+agi dala) 4 golongan se+agai +eri$ut@ 9 2olongan I @ larutan ,er8o+aan dengan al$aloid )e)+entu$ gara) yang tida$ larut@ asa) sili$owolfra)at :P4 asa) fosfo)oli+dat :P dan asa) fosfowolfra)at :P. 9 2olongan II 6agner :P. 9 2olongan III @ larutan ,er8o+aan yang dengan al$aloid )e)+entu$ senyawa adisi yang tida$ larut@ Mayer :P4 Dragendorff :P4 dan Mar)e :P. 9 2olongan I 1ara Per8o+aan@ *i)+ang 500 )g ser+u$ si),lisia4 ta)+ah$an 1 ): asa) $lorida 2N dan & ): Mayer :P4 ,anas$an diatas tangas air sela)a 2 )enit4 dingin$an dan saring. Pindah$an ( tetes filtrat ,ada $a8a arlo.i4 ta)+ah$an 2 tetes 'ou8hardat :P. =i$a ,ada $edua ,er8o+aan tida$ ter.adi enda,an4 )a$a ser+u$ tida$ )engandung al$aloid. =i$a dengan Mayer :P ter+entu$ enda,an )enggu),al +erwarna ,utih atau $uning yang larut dala) )etanol P dan dengan 'ou8hardat :P @ larutan ,er8o+aan yang dengan al$aloid )e)+entu$ i$atan asa) organi$ dengan al$aloid@ /ager :P. @ larutan ,er8o+aan dengan al$aloid )e)+entu$ senyawa $o),le$s +e+as4 $e)udian )e)+entu$ enda,an@ 'ou8hardat :P dan

11

ter+entu$ enda,an +erwarna 8o$lat sa),ai hita)4 )a$a ada $e)ung$inan terda,at al$aloid. :an.ut$an ,er8o+aan dengan )engo8o$ sisa filtrat dengan ( )l a)onia ,e$at P dan 10)l 8a),uran ( +agian !olu)e eter P dan 1 +agian !olu)e $lorofor) P. A)+il fase organi$4 ta)+ah$an natriu) sulfa anhidrat P4 saring. >a,$an filtrat diatas tangas air4 larut$an sisa dala) sedi$it asa) $lorida 2N. :a$u$an ,er8o+aan dengan $ee),at golongan larutan ,er8o+aan4 ser+u$ )engandung al$aloid .i$a se$urang9$urangnya ter+entu$ enda,an dengan )engguna$an dua golongan larutan ,er8o+aan yang diguna$an 5De,$es FI4 1&&57. 3.2.3.2 I*-("#1#&a)# 1,a/ ( #* :arutan Per8o+aan %ari 045 g ser+u$ yang di,eri$sa atau sisa $ering 10 ): sediaan +er+entu$ 8airan4 dengan 10)l )etanol P4 )engguuna$an alat ,endingin +ali$ sela)a 10 )enit. %aring ,anas )elalui ertas saring $e8il +erli,at4 en8er$an filtrat dengan 10 ): air. %etelah dingin ta)+ah$an 5 ): eter )inya$ tanah P4 $o8o$ hati9hati4 dia)$an. A)+il la,isan )etanol4 ua,$an ,ada suhu 401 di+awah te$anan. %isa dilarut$an dala) 5 ): etil asetat P4 saring. 1ara Per8o+aan >a,$an hingga $ering 1 ): larutan ,er8o+aan4 +asah$an sisa dengan aseton P4 ta)+ah$an sedi$it ser+u$ halus asa) +orat P dan ser+u$ halus asa) o$salat P4 ,anas$an hati9hati diatas tangas air dan hindari ,e)anasan +erle+ihan. 1a),ur sisa yang di,eroleh dengan 10 ): eter P. A)ati dengan sinar ultra!iolet (66 n)E larutan +erfluoresensi $uning intensif4 )enun.u$$an adanya fla!onoid 5De,$es FI4 1&&57. 3.2.3.3 I*-("#1#&a)# "a(#( ?$stra$ diti)+ang se+anya$ 10 )g4 dilarut$an dengan 2 ): air dita)+ah$an dengan 192 tetes ,erea$si +esi 5III7 $lorida 1;. =i$a ter.adi warna +iru $ehita)an atau hi.au $ehita)an )enun.u$$an adanya tanin.

12

3.2.3.3 I*-("#1#&a)# ',#& )#*a :arutan Per8o+aan %ari ( g ser+u$ si),lisia dengan (0 ): 8a),uran " +agian !olu)e etanol 5&5;7 P dan ( +agian air dala) alat ,endingin alir +ali$ sela)a 10 )enit4 dingin$an4 saring. Pada 20 ): filtrat ta)+ah$an 25 ): air dan 25 ): ti)+al 5II7 asetat 044 M4 $o8o$4 dia)$an sela)a 5 )enit4 saring. %ari filtrat ( $ali4 tia, $ali dengan 20 ): 8a),uran ( +agian !olu)e $lorofor) P dan 2 +agian !olu)e iso,ro,anol P. Pada $u),ulan sari ta)+ah$an natriu) sulfat anhidrat P4 saring4 dan ua,$an ,ada suhu tida$ le+ih dari 50J. Dilarut$an sisa dengan 2 ): )etanol P 5De,$es FI4 1&&57. 1ara Per8o+aan >)u) *erhada, 2li$osida 9 Diua,$an 041 ): larutan ,er8o+aan diatas tangas air4 larut$an sisa dala) 5 ): asa) asetat anhidrat P. *a)+ah$an 10 tetes asa) sulfat PE ter.adi warna +iru atau hi.au4 )enun.u$an adanya gli$osida 5re$asi :ie+er)ann9'ur8hard7. 9 Di)asu$$an 041 ): larutan ,er8o+aan dala) ta+ung rea$si4 ua,$an diatas tangas air. Pada sisa ta)+ah$an 2 ): air dan 5 tetes )olish :P. Dita)+ah$an hati9hati 2 ): asa) sulfat PE ter+entu$ 8in8in +erwarna ungu ,ada +atas 8airan4 )enun.u$$an adanya i$atan gula 5rea$si Molish7 5De,$es FI4 1&&57. 3.2.3.4 I*-("#1#&a)# )a2 (#( Masu$$an 045 g ser+u$ yang di,eri$sa $e dala) ta+ung re$asi4 ta)+ah$an 10 ): air ,anas4 dingin$an dan $e)udian $o8o$ $uat9$uat sela)a 10 deti$. 5=i$a 3at yang di,eri$sa +eru,a sediaan 8air4 dien8er$an 1 ): sediaan yang di,eri$sa dengan 10 ): air dan $o8o$ $uat9$uat sela)a 10 )enit7E ter+entu$ +uih yang )anta, sela)a tida$ $urang dari 10 )enit4 setinggi 1 8) sa),ai 10 8). Pada ,ena)+ahan 1 tetes asa) $lorida 2 N4 +uih tida$ hilang 5De,$es FI4 1&&57. 3.2.3.7 I*-("#1#&a)# )"-! #* *a( "!#"-!2-( #*

1(

Pe)eri$saan steroid dan triter,enoid dila$u$an dengan rea$si :ie+er)ann9'ur8hard. %e+anya$ 2 ): larutan u.i diua,$an dala) 8awan ,engua,. Fesidu dilarut$an dengan 045 ): $lorofor)4 $e)udian dita)+ah$an 045 ): asa) asetat anhidrat. %elan.utnya dita)+ah$an 2 ): asa) sulfat ,e$at )elalui dinding ta+ung. *er+entu$nya 8in8in $e8o$latan atau !iolet ,ada ,er+atasan larutan )enun.u$$an adanya triter,enoid4 sedang$an +ila )un8ul 8in8in +iru $ehi.auan )enun.u$$an adanya steroid 5De,$es FI4 1&&57. 3.2.3.8 I*-("#1#&a)# a(" )#a(#(. a. %a),el di,anas$an dengan 10 ): /1l 2 M ,ada suhu 100K1 sela)a 5 )enit. *er+entu$nya warna )erah tua yang sta+il )e)+eri$an hasil yang ,ositif adanya antosianin 5%u,iyanti4 20107. +. %a),el dita)+ah$an dengan Na0/ 2 M tetes de)i tetes. 6arna hi.au yang ter+entu$ )enun.u$$an adanya antosianin 5%u,iyanti4 20107. 3.2.3 K! %a" '!a1# La2#) T#2#) *a( I*-("#1#&a)# *-('a( P-!-a&)# <a!(a a. Pen8u8ian dan A$ti!asi Plat Aase dia) diguna$an ,lat sili$a gel 2A254 dengan u$uran 5 B 10 8) dengan .ara$ ,enge)+angan 8 8) dan .ara$ antar totolan 1 8). Aase dia) di8u8i dengan )etanol sa),ai tanda +atas dan dia$ti!asi dala) o!en ,ada suhu 110o1 sela)a (0 )enit. +. Penyia,an ?luen Aase gera$ yang diguna$an untu$ ,e)isahan adalah 8a),uran larutan +utanol@asa) asetat@air 5'AA7 dengan ,er+andingan 4@1@5 !H! se+anya$ 10 ):. ?luen yang telah disia,$an di)asu$$an $e dala) chamber ,e)isahan untu$ ,en.enuhan. #e.enuhan chamber ditandai dengan ter+asahinya $ertas saring di dala)nya. 8. Penotolan dan ?lusi dengan #:*

14

?$stra$ $ental hasil )aserasi diti)+ang 10 )g dan dire$onstitusi dengan 1 ): )etanol. *ia, fra$si ditotol$an se+anya$ 2 L: ,ada s,ot yang +er+eda dengan .ara$ antar ,enotolan 1 8). #e)udian fase dia) dielusi dengan fase gera$ 'AA dengan .ara$ ,enge)+angan 8 8). %etelah dielusi4 ,lat dihilang$an sisa ,elarutnya di udara ter+u$a. d. Identifi$asi dengan %inar > dan Perea$si Plat #:* dilihat di+awah sinar > sedang$an ,ada > 254 dan (66. Dia)ati ,eru+ahan 254 s,ot +erwarna gela, warna yang ter.adi dan di8atat hasilnya. Pada >

(66 s,ot +erwarna $uning $ehi.auan. %,ot yang

)engandung antosianin a$an +erwarna hi.au +iru yang )e)udar ,erlahan9 lahan .i$a dita)+ah$an dengan larutan Na0/ 2 M 5%u,iyanti4 d$$.4 2010E /ar+orne4 1&8"7. Dihitung nilai Ff dari )asing9)asing s,ot. Nilai Ff senyawa antosianin dengan fase dia) sili$a gel 2A254 dan fase gera$ +utanol @ asa) asetat @ air adalah 0425 5%u,iyanti4 d$$.4 20107. 3.2.4 K! %a" '!a1# 5a&$% 6a#! ?$stra$ $ental $ulit +uah )anggis yang telah di$etahui +o+otnya dita)+ah$an dengan sedi$it )etanol dan dita)+ah$an dengan sili$a sa)a +anya$ dengan .u)lah e$stra$. Penyia,an $olo) dila$u$an dengan di)asu$$annya sili$a dengan .u)lah ,er+adingan fase dia) @ e$stra$ 510 @ 174 di8atat .u)lah dan tinggi fase dia) yang diguna$an. #olo) die$uili+rasi dengan 20 ): fase gera$ +utanol @ asa) asetat @ air 54 @ 5 @ 1 !H!7. %elan.utnya dila$u$an eluasi4 e$stra$ dita+ur$an di atas $olo) yang telah di$e)as dieluasi dengan )asing9)asing 20 ): fase gera$ +utanol @ asa) asetat @ air 5(@5@24 4@5@14 5@5@0 !H!7. *ia, fra$si dita),ung dan diua,$an ,elarutnya.

15

3.2.7 KLT Ha)#, F!a&)#(a)# a. Pen8u8ian dan A$ti!asi Plat Aase dia) diguna$an ,lat sili$a gel 2A254 dengan u$uran 5 B 10 8) dengan .ara$ ,enge)+angan (45 8). Aase dia) di8u8i dengan )etanol sa),ai tanda +atas dan dia$ti!asi dala) o!en ,ada suhu 110o1 sela)a (0 )enit. +. Penyia,an ?luen Aase gera$ yang diguna$an untu$ ,e)isahan adalah 8a),uran larutan +utanol@asa) asetat@air 5'AA7 dengan ,er+andingan 4@1@5 !H! se+anya$ 10 ):. ?luen yang telah disia,$an di)asu$$an $e dala) chamber ,e)isahan untu$ ,en.enuhan. #e.enuhan chamber ditandai dengan ter+asahinya $ertas saring di dala)nya. 8. Penotolan Ara$si dan ?lusi dengan #:* Ara$si9fra$si ,e)isahan $ro)atografi !a$u) 8air diti)+ang 10 )g dan dire$onstitusi dengan 1 ): )etanol. *ia, fra$si ditotol$an se+anya$ 2 L: ,ada s,ot yang +er+eda dengan .ara$ antar ,enotolan 1 8). #e)udian fase dia) dielusi dengan fase gera$ 'AA dengan .ara$ ,enge)+angan 8 8). %etelah dielusi4 ,lat dihilang$an sisa ,elarutnya di udara ter+u$a. d. Identifi$asi dengan sinar > dan ,erea$si Plat #:* dilihat di+awah sinar > sedang$an ,ada > 254 dan (66. Dia)ati ,eru+ahan 254 s,ot +erwarna gela, warna yang ter.adi dan di8atat hasilnya. Pada >

(66 s,ot +erwarna $uning $ehi.auan. %,ot yang

)engandung antosianin a$an +erwarna hi.au +iru yang )e)udar ,erlahan9 lahan .i$a dita)+ah$an dengan larutan Na0/ 2 M 5%u,iyanti4 d$$.4 2010E /ar+orne4 1&8"7. Dihitung nilai Ff dari )asing9)asing s,ot. Nilai Ff senyawa antosianin dengan fase dia) sili$a gel 2A254 dan fase gera$ +utanol @ asa) asetat @ air adalah 0425 5%u,iyanti4 d$$.4 20107.

16

3.3.8 KLT P!-2a!a"#1 a. Pen8u8ian dan A$ti!asi Plat Aase dia) diguna$an ,lat sili$a gel 2A 254 dengan u$uran 10 B 10 8). Di+eri tanda +atas +awah 1 8) dan +atas atas 045 8). Aase dia) di8u8i dengan )etanol sa),ai tanda +atas dan dia$ti!asi dala) o!en ,ada suhu 110o1 sela)a (0 )enit. +. Penyia,an ?luen Aase gera$ yang diguna$an untu$ ,e)isahan adalah 8a),uran larutan +utanol@asa) asetat@air 5'AA7 dengan ,er+andingan 4@1@5 !H! se+anya$ 10 ):. ?luen yang telah disia,$an di)asu$$an $e dala) chamber ,e)isahan untu$ ,en.enuhan. #e.enuhan chamber ditandai dengan ter+asahinya $ertas saring di dala)nya. 8. Penotolan dan ?lusi dengan #:* Ara$si yang diduga ter$andung senyawa antosianin ,ada identifi$asi #:* se+elu)nya se+anya$ 10 )g dire$onstitusi dengan 1 ): )etanol. Ara$si ditotol$an dengan +entu$ ,ita se,an.ang +atas ,enotolan ,ada fase dia) dengan )engguna$an ,i,et. #e)udian fase dia) di)asu$$an $e dala) chamber dan dielusi dengan fase gera$ 'AA dengan .ara$ ,enge)+angan 845 8). %etelah dielusi4 ,lat dihilang$an sisa ,elarutnya dengan 8ara diangin9angin$an. d. Identifi$asi dengan sinar > dan ,erea$si Plat #:* dilihat di+awah sinar > ,ada > 254 dan (66. Dia)ati ,eru+ahan warna 254 s,ot +erwarna gela, sedang$an yang ter.adi dan di8atat hasilnya. Pada >

(66 s,ot +erwarna $uning $ehi.auan. %,ot yang )engandung antosianin

a$an +erwarna hi.au +iru yang )e)udar ,erlahan9lahan .i$a dita)+ah$an dengan larutan Na0/ 2 M 5%u,iyanti4 d$$.4 2010E /ar+orne4 1&8"7.'er8a$ yang ,ositif antosianin di$ero$.

1"

3.2.9 KLT Ha)#, S$b1!a&)# a. Pen8u8ian dan A$ti!asi Plat Aase dia) diguna$an ,lat sili$a gel 2A 254 dengan u$uran 5 B 5 8) Di+eri tanda +atas +awah 1 8) dan +atas atas 045 8). Aase dia) di8u8i dengan )etanol sa),ai tanda +atas dan dia$ti!asi dala) o!en ,ada suhu 110o1 sela)a (0 )enit. +. Penyia,an ?luen Aase gera$ yang diguna$an untu$ ,e)isahan adalah 8a),uran larutan +utanol@asa) asetat@air 5'AA7 dengan ,er+andingan 4@1@5 !H! se+anya$ 10 ):. ?luen yang telah disia,$an di)asu$$an $e dala) chamber ,e)isahan untu$ ,en.enuhan. #e.enuhan chamber ditandai dengan ter+asahinya $ertas saring di dala)nya. 8. Penotolan dan ?lusi dengan #:* %u+fra$si hasil ,e)isahan $ro)atografi ,re,aratif diti)+ang se+anya$ 10 )g dan dire$onstitusi dengan 1 ): )etanol. *ia, fra$si ditotol$an se+anya$ 2 L: ,ada s,ot yang +er+eda dengan .ara$ antar ,enotolan 1 8). #e)udian fase dia) di)asu$$an $e dala) chamber dan dielusi dengan fase gera$ 'AA dengan .ara$ ,enge)+angan (45 8). %etelah dielusi4 ,lat dihilang$an sisa ,elarutnya dengan 8ara diangin9angin$an. d. Identifi$asi dengan sinar > dan ,erea$si Plat Plat #:* dilihat di+awah sinar > 254 dan (66. Dia)ati ,eru+ahan 254 s,ot +erwarna gela, warna yang ter.adi dan di8atat hasilnya. Pada >

sedang$an ,ada > (66 s,ot +erwarna $uning $ehi.auan. %,ot yang )engandung antosianin a$an +erwarna hi.au +iru yang )e)udar ,erlahan9lahan .i$a dita)+ah$an dengan larutan Na0/ 2 M 5%u,iyanti4 d$$.4 2010E /ar+orne4 1&8"7. Dihitung nilai Ff dari )asing9)asing s,ot. Nilai Ff senyawa antosianin dengan fase dia) sili$a gel 2A254 dan fase gera$ +utanol @ asa) asetat @ air adalah 0425 5%u,iyanti4 d$$.4 20107.

18

3.2.9 I*-("#1#&a)# *-('a( G-)-!a( S2-&"!$% a. Pe)+uatan Perea$si 2eser@ Na0Me @ 245 gra) loga) Na 5le+ih +ai$ ditangani dan diti)+ang dala) $edaan terenda) dala) P?Hn9he$san74 di,otong $e8il9$e8il dan dita)+ah$an $e dala) 100 ): Me0/ dengan hati9hati. Perea$si ,engganti yang 8o8o$ adalah Na0/ 2 M dala) air. Al1l( @ 5 g Al1l( segar dan $ering 5+ila di)asu$$an $e dala) air harus +erdesis7 dita)+ah$an dengan hati9hati $e dala) 100 ): Me0/. +. Pe)+uatan %,e$tru) Me0/ @ 041 )g isolate dilarut$an dala) 2 ): Me0/4 di)asu$$an dala) $u!et 1 ): dan dia)ati dengan s,e$trofoto)eter. 1u,li$an da,at dien8er$an sehingga rentang sera,an +erada dala) $isaran 042 C 048. 8. Pe)+uatan %,e$tru) Na0Me @ 1u,li$an ,ada ,oin 2 dita)+ah$an dengan ( tetes Na0MeHNa0/4 di8a),ur dan dia)ati dengan s,e$trofoto)eter segera setelah dita)+ah$an Na0MeHNa0/ dan selang wa$tu 5 )enit +eri$utnya. d. Pe)+uatan %,e$tru) Al1l(H/1l @ 1u,li$an ,ada no.2 dita)+ah$an dengan 6 tetes Al1l( di8a),ur dan dia)ati dengan s,e$trofoto)eter segera setelah dita)+ah$an Al1l( dan selang wa$tu 5 )enit +eri$utnya. %elan.utnya4 dita)+ah$an ( tetes /1l4 di8a),ur dan dia)ati dengan s,e$trofoto)eter segera setelah dita)+ah$an /1l dan selang wa$tu 5 )enit +eri$utnya. e. 'anding$an s,e$tru) yang di,eroleh dengan ,usta$a.

3.3 S&-%a K-!;a 3.3.1 P-(0#a2a( Sa%2-, #ulit +uah )anggis di8u8i4 ditiris$an4 dan di,otong $e8il9$e8il

Potongan $e8il $ulit +uah )anggis di$ering$an dengan 8ara diangin9angin$an

1&

Potongan $ulit )anggis yang telah $ering dihalus$an dengan

%er+u$ disi),an ,ada wadah gela, tertutu, ra,at dan $ering

3.3.2 M-" *- E&)"!a&)# (Ma)-!a)#) 20 gra) ser+u$ $ulit +uah )anggis 100 ): )ethanol @/1l 1; ,e$at 5&@17

*o,les $a8a

Diadu$ dan dila,isi alu)iniu) foil dan ditutu, dengan $ain hita). Di+iar$an sela)a 24 .a)

Di+iar$an sela)a 1 hari Disaring 50 ): )ethanol @ /1l 1; ,e$at 5&@17

Maserat

A),as Diadu$ Di+iar$an sela)a 24 .a)

Di+iar$an sela)a 1 hari 20

Disaring Maserat

Diua,$an

3.3.3 S&!#(#(' F#" &#%#a K$,#" B$a. Ma(''#) (Garcinia mangostana L) a. Identifi$asi Al$aloid Diti)+ang 500 )g ser+u$ si),lisia4 dita)+ah$an 1 ): /1l 2 N dan & ):4 di,anas$an sela)a 2 )enit4 dingin$an dan saring

Pindah$an ( tetes filtrat ,ada $a8a arlo.i4 dita)+ah$an 2 tetes 'ou8hardat :PE .i$a tida$ ada enda,an )a$a tida$ )engandung al$aloid

=i$a dengan )ayer :P ter+entu$ enda,an ,utihH$uning yang larut dala) )etanol4 dan dengan 'ou8hardat :P ter+entu$ enda,an +erwarna 8o$lat sa),ai hita)4 )a$a ada $e)ung$inan terda,at al$aloid +. Identifi$asi Ala!onoid ?$stra$ dilarut$an di+asah$an dengan aseton P4 dita)+ah$an ser+u$ asa) +orat P dan asa) o$salat P

Panas$an dengan hati9hati diatas ,enangas air

21

Dita)+ah$an 10 ): eter P4 dia)ati di+awah sinar > (66 n)E adanya fla!onoid ditandai dengan warna $uning intensif

8. Identifi$asi *anin 10 )g e$stra$ dilarut$an dengan 2 ): air

Dita)+ah$an 192 tetes ,erea$si 'esi 5III7 $lorida 1 ;

/asil ,ositif ditun.u$$an warna +ru $ehita)an atau hi.au $ehita)an d. Identifi$asi 2li$osida Diua,$an 041 ): larutan ,er8o+aan diatas tangas air4 larut$an sisa dala) 5 ): asa) asetat anhidrat P

*a)+ah$an 10 tetes asa) sulfat P

Adanya warna +iru atau hi.au )enun.u$$an adanya gli$osida e. Identifi$asi %a,onin 1 ):?$stra$ di)asu$$an dala) ta+ung rea$si dan dita)+ah$an 10 ): air ,anas4 didingin$an dan di$o8o$ $uat sela)a 10 deti$

22

*er+entu$ +uih )anta, tida$ $urang dari 10 )enit setinggi 19 10 8) )enun.u$$an adanya sa,onin. 'uih tida$ hilang dengan 1 tetes /1l 2 N f. Identifi$asi *riter,enoid dan %teroid 2 ): e$stra$ diua,$an dala) 8awan ,engua,4 residu dita)+ah$an 045 ): $lorofor) $e)udian dita)+ah$an 045 ): asa) asetat anhidrat

Dita)+ah 2 ): asa) sulfat ,e$at )elalui dinding ta+ung

*er+entu$nya 8in8in $e8o$latan atau !iolet ,ada ,er+atasan larutan )enun.u$$an adanya triter,enoid4 sedang$an +ila )un8ul 8in8in +iru $ehi.auan )enun.u$$an adanya steroid

g. >.i Antosianin ?$stra$ di,anas$an dengan 10 ): /1: 2 M ,ada suhu suhu 100K1 sela)a 5 )enit

*er+entu$nya warna )erah tua sta+il )enun.u$$an hasil ,ositif antosianin

%a),el dita)+ah$an dengan Na0/ 2 M tetes de)i tetes

6arna hi.au yang ter+entu$ )enun.u$$an adanya antosianin.

2(

3.3.3 K! %a" '!a1# La2#) T#2#) *a( I*-("#1#&a)# *-('a( P-!-a&)# <a!(a
Plat Al %ili$a gel 2A254 di,otong dengan u$uran 5 B 10 8)

Di+eri tanda +atas +awah 1 8) dan +atas atas 1 8)

Aase dia) di8u8i dengan )etanol sa),ai tanda +atas dan dia$ti!asi dala) o!en ,ada suhu 110o1 sela)a (0 )enit

Di+uat fase gera$ +utanol@asa) asetat@air

5'AA7 dengan ,er+andingan 4@5@1 !H! se+anya$ 10 ):

Ara$si hasil e$stra$si diti)+ang se+anya$ 10 )g dan dire$onstitusi dengan 1 ): )etanol

*ia, fra$si ditotol$an se+anya$ 2 L: ,ada s,ot yang +er+eda dengan .ara$ antar ,enotolan 1 8)

Chamber di.enuh$an dala) fase gera$. #e.enuhan

chamber ditandai dengan ter+asahinya se)ua +agian $ertas saring

Plat di)asu$$an $e dala) chamber dan dielusi hingga +atas .ara$ ,enge)+angan 8 8)

24

Plat yang telah dielusi dihilang$an sisa ,elarutnya dengan 8ara diangin9angin$an

Plat yang telah dielusi dia)ati di+awah sinar > 254 n) dan (66 n)

> 254 s,ot +erwarna gela, sedang$an ,ada > (66 s,ot +erwarna $uning $ehi.auan. %,ot yang )engandung antosianin a$an +erwarna hi.au +iru yang )e)udar ,erlahan9lahan .i$a dita)+ah$an dengan larutan Na0/ 2 M.

Dia)ati s,ot yang ,ositif )engandung antosianin. Pada

Dihitung nilai Ff dari )asing9)asing s,ot. Nilai Ff senyawa antosianin dengan fase dia) sili$a gel 2A254 dan fase gera$ +utanol @ asa) asetat @ air adalah 0425.

3.3.4 K! %a" '!a1# 5a&$% 6a#! Penyia,an $olo) dila$u$an dengan di)asu$$annya sili8a dengan .u)lah ,er+andingan fase dia)@e$stra$ 510@174 di8atat +erat dan tinggi fase dia) dari dasar $olo) yang telah di+eri $ertas saring

#olo) die$uili+rasi dengan 15 ): fase gera$ +utanol @ asa) asetat @ air 54 @ 5 @ 1 !H!7.

?$stra$ dita+ur$an di atas $olo) yang telah di$e)as

25

Dieluasi dengan )asing9)asing 20 ): fase gera$ +utanol @ asa) asetat @ air 5(@5@24 4@5@14 5@5@0 !H!7

*ia, fra$si dita),ung dan diua,$an

3.3.7 KLT Ha)#, F!a&)#(a)#

Plat Al %ili$a gel 2A254 di,otong dengan u$uran 5 B 10 8)

Di+eri tanda +atas +awah 1 8) dan +atas atas 1 8)

Aase dia) di8u8i dengan )etanol sa),ai tanda +atas dan dia$ti!asi dala) o!en ,ada suhu 110o1 sela)a (0 )enit

Di+uat fase gera$ +utanol@asa) asetat@air

5'AA7 dengan ,er+andingan 4@5@1 !H! se+anya$ 10 ):

Ara$si9fra$si hasil $ro)atografi !a$u) 8air diti)+ang se+anya$ 10 )g dan dire$onstitusi dengan 1 ): )etanol

*ia, fra$si ditotol$an se+anya$ 2 L: ,ada s,ot yang +er+eda dengan .ara$ antar ,enotolan 1 8)

Chamber di.enuh$an dala) fase gera$. #e.enuhan

chamber ditandai dengan ter+asahinya se)ua +agian $ertas saring 26

Plat di)asu$$an $e dala) chamber dan dielusi hingga +atas .ara$ ,enge)+angan 8 8)

Plat yang telah dielusi dihilang$an sisa ,elarutnya dengan 8ara diangin9angin$an

Plat yang telah dielusi dia)ati di+awah sinar > 254 n) dan (66 n)

> 254 s,ot +erwarna gela, sedang$an ,ada > (66 s,ot +erwarna $uning $ehi.auan. %,ot yang )engandung antosianin a$an +erwarna hi.au +iru yang )e)udar ,erlahan9lahan .i$a dita)+ah$an dengan larutan Na0/ 2 M.

Dia)ati s,ot yang ,ositif )engandung antosianin. Pada

Dihitung nilai Ff dari )asing9)asing s,ot. Nilai Ff senyawa antosianin dengan fase dia) sili$a gel 2A254 dan fase gera$ +utanol @ asa) asetat @ air adalah 0425. 3.2.8 KLT P!-2a!a"#1
Plat Al %ili$a gel 2A254 di,otong dengan u$uran 10 B 10 8)

Di+eri tanda +atas +awah 1 8) dan +atas atas 045 8)

2"

Aase dia) di8u8i dengan )etanol sa),ai tanda +atas dan dia$ti!asi dala) o!en ,ada suhu 110o1 sela)a (0 )enit

Di+uat fase gera$ +utanol@asa) asetat@air

5'AA7 dengan ,er+andingan 4@5@1 !H! se+anya$ 10 ):

Ara$si yang diduga ter$andung senyawa antosianin ,ada identifi$asi #:* se+elu)nya se+anya$ 10 )g dire$onstitusi dengan 1 ): )etanol

Ara$si ditotol$an ,ada ,lat dengan +antuan ,i,et dala) +entu$ ,ita

Chamber di.enuh$an dala) fase gera$. #e.enuhan

chamber ditandai dengan ter+asahinya se)ua +agian $ertas saring

Plat di)asu$$an $e dala) chamber dan dielusi hingga +atas .ara$ ,enge)+angan 845 8)

Plat yang telah dielusi dihilang$an sisa ,elarutnya dengan 8ara diangin9angin$an

Plat yang telah dielusi dia)ati di+awah sinar > 254 n) dan (66 n)

254 s,ot +erwarna gela, sedang$an ,ada > (66 s,ot +erwarna $uning $ehi.auan. %,ot yang )engandung antosianin a$an +erwarna hi.au +iru yang )e)udar ,erlahan9lahan .i$a dita)+ah$an dengan larutan Na0/ 2 M. 28

Dia)ati +er8a$ yang ,ositif )engandung antosianin. Pada >

'er8a$ yang ,ositif antosianin di$ero$

3.2.9 KLT Ha)#, S$b1!a&)#

Plat Al %ili$a gel 2A254 di,otong dengan u$uran 5 B 5 8)

Di+eri tanda +atas +awah 1 8) dan +atas atas 045 8)

Aase dia) di8u8i dengan )etanol sa),ai tanda +atas dan dia$ti!asi dala) o!en ,ada suhu 110o1 sela)a (0 )enit

Di+uat fase gera$ +utanol@asa) asetat@air

5'AA7 dengan ,er+andingan 4@5@1 !H! se+anya$ 10 ):

%u+fra$si hasil ,e)isahan $ro)atografi ,re,aratif diti)+ang se+anya$ 10 )g dan dire$onstitusi dengan 1 ): )etanol

*ia, fra$si ditotol$an se+anya$ 2 L: ,ada s,ot yang +er+eda dengan .ara$ antar ,enotolan 1 8)

Chamber di.enuh$an dala) fase gera$. #e.enuhan

chamber ditandai dengan ter+asahinya se)ua +agian $ertas saring

2&

Plat di)asu$$an $e dala) chamber dan dielusi hingga +atas .ara$ ,enge)+angan (45 8)

Plat yang telah dielusi dihilang$an sisa ,elarutnya dengan 8ara diangin9angin$an

Plat yang telah dielusi dia)ati di+awah sinar > 254 n) dan (66 n)

> 254 s,ot +erwarna gela, sedang$an ,ada > (66 s,ot +erwarna $uning $ehi.auan. %,ot yang )engandung antosianin a$an +erwarna hi.au +iru yang )e)udar ,erlahan9lahan .i$a dita)+ah$an dengan larutan Na0/ 2 M.

Dia)ati s,ot yang ,ositif )engandung antosianin. Pada

Dihitung nilai Ff dari )asing9)asing s,ot. Nilai Ff senyawa antosianin dengan fase dia) sili$a gel 2A254 dan fase gera$ +utanol @ asa) asetat @ air adalah 0425.

3.3.9 I*-("#1#&a)# *-('a( G-)-!a( S2-&"!$% a. P-%b$a"a( P-!-a&)# G-)-! P-!-a&)# NaOMDiti)+ang 245 gra) loga) Na 5le+ih +ai$ ditangani dan diti)+ang dala) $edaan terenda) dala) P?Hn9he$san74 di,otong $e8il9$e8il

(0

Dita)+ah$an $e dala) 100 ): Me0/ dengan hati9hati. Perea$si ,engganti yang 8o8o$ adalah Na0/ 2 M dala) air

P-!-a&)# A,6,3 Diti)+ang 5 gra) Al1l( Dita)+ah$an dengan hati C hati $edala) 100 ): )etanol

b. P-%b$a"a( S2-&"!$% M-OH Diti)+ang 041 )g isolat Dilarut$an dala) 2): Me0/

Di)asu$an dala) $u!et 1 ):

Dia)ati dengan s,e$trofoto)eter > 9 I% 8 1u,li$an da,at dien8er$an hingga rentang sera,an +er$isar ,ada 042 C 048 =. P-%b$a"a( S2-&"!$% A,6,3 / H6, 1u,li$an isolat dengan Me0/ dita)+ah$an dengan 6 tetes Al1l(

Di8a),ur$an dan dia)ati ,ada s,e$trofoto)eter > C I% segera setelah ,ena)+ahan Al1l( dan 5 )enit setelahnya

(1

Dita)+ah$an ( tetes /1l

Di8a),ur dan dia)ati ,ada s,e$trofoto)eter > 9 I% segera setelah ,ena)+ahan /1l dan 5 )enit setelahnya.

Di+anding$an s,e$tru) yang di,eroleh dengan ,usta$a

*. P-%b$a"a( S2-&"!$% NaOM- / NaOH 1u,li$an isolat dengan Me0/ dita)+ah$an dengan ( tetes Na0Me H Na0/

Di8a),ur$an dan dia)ati ,ada s,e$trofoto)eter > C I% segera setelah ,ena)+ahan Na0MeHNa0/ dan 5 )enit setelahnya

Di+anding$an s,e$tru) yang dida,at dengan ,usta$a

(2

DAFTAR PUSTAKA 'ennion4 M. 1&80. The Science of Food. New Mor$@6iley dan %ons 1o 'rouillard4 F. 1&82. Chemical Structure of Anthocyanin as Food Colors. New Mor$ @ A8ade)i8 Press Dai4 =. dan F. =. Mu),er. 2010. Plant Phenoli8s@ ?Btra8tion4 Analysis and *heir AntioBidant and Anti8an8er Pro,erties. Mole8ules4 ol. 15. ,@ "(1(9"(52 Aran8is4 A.=. 1&82. Analysis of Anthocyanins as Food Clolors. New Mor$ @ A8ade)i8 Press Aran8is4 A.=. 2000. Anthocyanins and Betalains. 1o),osition and A,,li8ation 1ereal Aood 6orld 45557@ 208921( 2and.ar4 I.2. dan A. Foh)an. 200". imia Farmasi Analisis. Mogya$arta@ Pusta$a Pela.ar /ar+orne4=.'. 1&&6.Metode Aito$i)ia@ Penuntun 1ara Modern Menganalisis *u)+uhan.*er+itan $edua. Pener+ir I*'. 'andung. /ar+orne4 =.'. 1&8". !etode Fito"imia. 'andung@ Pener+it I*' /ar+orne4 =.'. dan 1ha),)an /uta.ulu4 A./.4 %u+ag.a dan /artanto4 ?.%. 2008. Proses ?$stra$si Gat 6ana /i.au #hlorofil Ala)i >ntu$ Pangan Dan #ara$terisasinya. #urnal $iset %ndustri &an 'erdagangan. ol 2. No.1. 'ogor. /al. 44955. =uanda4 dan 1ahyono. 2000. !anggis Budidaya dan Analisis (saha Tan i. #anisius @ Mogya$arta #i)+all4 =.6. 1&&(. Biologi. =a$arta @ ?rlangga #ristanti4 A. N.4 N. %. A)inah.4 M. *an.ung4 dan '. #urniadi. 2008. Bu"u A)ar Fito"imia. %ura+aya@ =urusan #i)ia9:a+oratoriu) #i)ia 0rgani$ Aa$ultas Mate)ati$a dan Il)u Pengetahuan Ala) >ni!ersitas Airlangga. #us)ardiyani4 %. dan A. Nawawi. 1&&2. >ni!ersitas 'idang Il)u /ayati. :enny4 %. 2006. Senya*a Flavonoida+ Fenil 'ropanoida+ dan Al"aloida . Medan @ AMIPA >ni!ersitas %u)atera >tara Mar$ha)4 #.F. 1&88. Cara !engidentifi"asi Flavonoid. 'andung@ Pener+it I*' imia Bahan Alam. =a$arta@ Pusat Antar 2rayer4 F. =. 1&88. The anthocyanins. *he Ala!onoids.:ondon @

((

Putra4 I.N.#. 2010. A$ti!itas Anti+a$teri ?$stra$ #ulit 'uah Manggis 5 Garcinia mangostana :.7 %erta #andungan %enyawa A$tifnya. #. Te"nologi dan %ndustri 'angan. ol. 11 517@ 195 Nue!au!iller4 P.4 ?. A. Maier and 2rie,in$4 '. 1&&5. ,uality Assurance for -nvironmental Analysis. Netherlands@ ?lse!ier %8ien8e4 In8. Fo+inson4 *. 1&&1. andungan .rgani" Tumbuhan Tinggi. 'andung @ I*' %etyaningru)4 ?.N. 2010. -fe"tivitas 'enggunaan #enis Asam &alam 'roses -"stra"si 'igmen Antosianin ulit !anggis /Garcinia mangostana 0.1 dengan 'enambahan Aseton 234. %ura$arta @ Pertanian %e+elas Maret %her)a4 =. 200(. 5andboo" of Thin 0ayer Chromatography. New Mor$@ Mar8el De$$er4 In8 %u,iyanti4 6. d$$.4 2010. >.i A$ti!itas Antio$sidan dan Penentuan #andungan Antosianin *otal #ulit 'uah Manggis 5Garcinia mangostana :..7. !a)alah obat Tradisional+ 15527@ 649"0 %yah4 D. 2005. !anfaat dan Bahan Tambahan !a"anan. 'ogor @ Pertanian 'ogor *ho)as4 1.?. 200&. %ntroduction to 'rocess Technology. 1anada@ 1engage :earning *ranggono. 1&&0. Bahan Tambahan 'angan /Food Additives1 'angan dan Gi6i . Mogya$arta @ >ni!ersitas 2a.ah Mada 6a$s)und3$a9/a.nos4 M. and =. %her)a. 2011. 5igh 'erformance 0i7uid Chromatography in 'hytochemical Analysis. olu)e 102. >%A@ 1F1 Press 6inarno4 A.2. 1&&". imia 'angan dan Gi6i. =a$arta@ P*. 2ra)edia

(4

(5