TUGAS KIMIA ANALITIK

Hight performance liquid chromatography (HPLC) dan

gas Kromatografi (GC)
Oleh:
Kelompok VII
Afrianti Ramadhani
Dekna Asita
G!snilaati
Re"iana er"ita
Re#ki $ratama
%URUSAN KIMIA
&AKULTAS MAT'MATIKA DAN ILMU $'NG'TA(UAN ALAM
UNIV'RSITAS N'G'RI $ADANG
)*+*
KROMATOGRA&I
A. Pendahuluan
Kromato,rafi adalah s!at! metode pemisahan fisik- dimana komponen.
komponen /an, dipisahkan didistri0!sikan diantara d!a fasa- salah sat! fasa fasa
terse0!t adalah s!at! lapisan stasioner den,an perm!kaan /an, l!as- /an, lainn/a
se0a,ai fl!ida /an, men,alir lem0!t di sepan1an, landasan stasioner2
&asa stasioner 0isa 0er!pa padatan ma!p!m 3airan- sedan,kan fasa 0er,erak
0isa 0er!pa 3airan ma!p!n ,as2 %adi sem!a 1enis kromato,rafi /an, diketah!i
dior,anisir 1adi sat! dalam empat kate,ori /an, dit!n1!kakan dalam ta0el se0a,ai
0erik!t:
&asa stasioner padat 4air
&asa 0er,erak 4air ,as 3air Gas
4ontoh.3ontoh Kromato,rafi
asli
Tsett-den,an
lar!tan
petrole!meter
dan kolom
4a4O
5
-
Kromato,rafi
pert!karan ion
Kromato,rafi
,as.padat-
ata! GS4
Kromato,raf
i partisi pada
kolom silika
,el
Kromato,raf
i kertas
Kromato,ra
fi ,as.3air
ata! GL4
Sel!r!h 0ent!k kromato,rafi terdiri dari fase diam dan fase ,erak2 Dalam
sel!r!h 0ent!k kromato,rafi /an, lain- anda akan menem!i fase ,erak adalah 3airan2
Dalam kromato,rafi ,as.3air- fase ,erak adalah ,as seperti heli!m dan fase diam
adalah 3airan /an, memp!n/ai titik didih /an, tin,,i diserap pada padatan2
6a,aimana ke3epatan s!at! sen/aa tertent! 0er,erak melal!i mesin- akan
ter,ant!n, pada se0erapa lama akt! /an, diha0iskan !nt!k 0er,erak den,an ,as dan
se0alikn/a melekat pada 3airan den,an 1alan /an, sama2
Dalam sem!a teknik kromato,rafi- #at.#at terlar/t /an, dipisahkan 0ermi,rasi
sepan1an, kolom 7seperti dalam kromato,rafi kertas ata! lapisan tipis- eki"alen fisik
kolom8- dasar pemisahan terletak dalam la1! perpindahan /an, 0er0eda !nt!k lar!tan
0er0eda2 La1! perpindahan se0!ah #at terlar!t se0a,ai hasil dari d!a faktor- /an, sat!
3ender!n, men,,erakkan #at terlar!t it!- dan /an, lain menahann/a2 $er0edaan ke3il
antara d!a #at terlar!t dalam kek!atan adsor0si dan dalam interaksin/a dalam pelar!t
/an, 0er,erak men1adi dasar pemisahan 0ila #at molek!l.molek!l #at terlar!t it!
0er!lan,kali men/e0ar diantara d!a fasa kesel!r!h pan1an, kolom2 Ada 0e0erapa 3ara
!nt!k men,klasifikasi teknik kromato,rafi didasarkan atas tipe penamaan dari fasa
7fasa tetap dan fasa 0er,erak8 seperti ,as.3airan7GL48- ,as.padat 7GS48- 3airan.
3airan7LL48- dan 3airan.padat7LS482 Klasifikasi lain didasarkan pada teknik
pen,,!naan 3ontohn/a2
Teori kromato,rafi didasarkan pada kesetim0an,n distri0!si sampel antara
fasa /an, ditetapkan oleh konstanta kesetim0an,an K- dise0!t den,an koefisien
distri0!si2 Rata.rata konsentrasi men,ik!ti h!k!m distri0!si :
Dimana 4
s
adalah konsentrasi fasa stasioner dan 4
m
konsentrasi fasa 0er,erak2
La1! rata.rata perpindahan molek!l ditent!kan oleh :
+2 Ke3epatan molek!l pem0aa
)2 $er0andin,an "ol!me fasa stasioner den,an fasa 0er,erak
52 Koefisien distri0!s! dari #at terlar!t
1. Kromatografi Gas
Kromato,rafi ,as.3air 7GL48- ata! kromato,rafi ,as 7G48- mer!pakan 1enis
kromato,rafi /an, di,!nakan dalam kimia or,anik !nt!k pemisahan dan analisis2 G4
dapat di,!nakan !nt!k men,!1i kem!rnian dari 0ahan tertent!- ata! memisahkan
0er0a,ai komponen dari 3amp!ran2 Dalam 0e0erapa sit!asi- G4 dapat mem0ant!
dalam men,identifikasi se0!ah kompleks2
Dalam kromato,rafi ,as- fase /an, 0er,erak 7ata! 9mo0ile phase98 adalah
se0!ah operator ,as- /an, 0iasan/a ,as m!rni seperti heli!m ata! /an, tidak rea3ti"e
seperti ,as nitro,en2 Stationar/ ata! fasa diam mer!pakan tahap mikroskopis lapisan
3air ata! polimer /an, mend!k!n, ,as m!rni- di dalam 0a,ian dari sistem pipa.pipa
ka3a ata! lo,am /an, dise0!t kolom2 Instr!men /an, di,!nakan !nt!k melak!kan
kromato,rafi ,as dise0!t ,as 3hromato,raph 7ata! 9aero,raph9- 9,as pemisah982
sen/aa ,as /an, sedan, dianalisis 0erinteraksi den,an dindin, kolom /an,
dilapisi den,an 0er0a,ai tahapan stationar/2 Ini men/e0a0kan setiap kompleks ke
el!te di akt! /an, 0er0eda- /an, dikenal se0a,ai in,atan akt! /an, kompleks2
$er0andin,an dari in,atan kali /an, mem0erikan ke,!naan analisis G4.n/a2
Kromato,rafi ,as /an, pada prinsipn/a sama den,an kromato,rafi kolom
7serta /an, lainn/a 0ent!k kromato,rafi- seperti ($L4- TL48- tapi memiliki 0e0erapa
per0edaan pentin,2 $ertama- proses memisahkan 3ompo!nds dalam 3amp!ran
dilak!kan antara stationar/ fase 3air dan ,as fase 0er,erak- sedan,kan pada
kromato,rafi kolom /an, seim0an, adalah tahap /an, solid dan 0er,erak adalah fase
3air2 7%adi- nama len,kap prosed!r adalah 9kromato,rafi ,as.3air9- mer!1!k ke ponsel
dan stationar/ tahapan- masin,.masin,28 Ked!a- melal!i kolom /an, lolos tahap ,as
terletak di se0!ah o"en dimana temperat!r ,as /an, dapat dikontrol- sedan,kan
kromato,rafi kolom 70iasan/a8 tidak memiliki kontrol seperti s!h!2 Keti,a-
konsentrasi /an, ma1em!k dalam fase ,as adalah han/a salah sat! f!n,si dari tekanan
!ap dari ,as2
Kromato,rafi ,as 1!,a mirip den,an pe3ahan pen/!lin,an- karena ked!a
proses memisahkan komponen dari 3amp!ran ter!tama 0erdasarkan titik didih 7ata!
tekanan !ap8 per0edaan2 Nam!n- pe3ahan pen/!lin,an 0iasan/a di,!nakan !nt!k
memisahkan komponen 3amp!ran pada skala 0esar- sedan,kan G4 dapat di,!nakan
pada skala /an, le0ih ke3il 7/akni mi3ros3ale82
Kromato,rafi ,as terkadan, 1!,a dikenal se0a,ai !ap.tahap kromato,rafi
7V$48- ata! ,as.3air kromato,rafi partisi 7GL$482 Alternatif nama ini- serta masin,.
masin, sin,katan- serin, ditem!kan dalam literat!r ilmiah2
Dia,ram alir kromato,rafi ,as.3air

e!anisme !er"a GC
#n"e!si sampel
Se1!mlah ke3il sampel /an, akan dianalisis diin1eksikan pada mesin
men,,!nakan semprit ke3il2 %ar!m semprit menem0!s lempen,an karet te0al
7Lempen,an karet ini dise0!t sept!m8 /an, mana akan men,!0ah 0ent!kn/a kem0ali
se3ara otomatis ketika semprit ditarik kel!ar dari lempen,an karet terse0!t2
In1ektor 0erada dalam o"en /an, mana temperat!rn/a dapat dikontrol2 O"en
terse0!t 3!k!p panas sehin,,a sampel dapat mendidih dan dian,k!t ke kolom oleh
,as pem0aa misaln/a heli!m ata! ,as lainn/a2
Ada d!a tipe !tama kolom dalam kromato,rafi ,as.3air2 Tipe pertama- t!0e
pan1an, dan tipis 0erisi material padatan: Tipe ked!a- le0ih tipis dan memiliki fase
diam /an, 0erikatan den,an pada 0a,ian terdalam perm!kaann/a2
Kolom 0iasan/a di0!at dari 0a1a tak 0erkarat den,an pan1an, antara + sampai
; meter- den,an diameter internal sampai ; mm2 Kolom di,!l!n, sehin,,a dapat
dises!akan den,an o"en /an, terkontrol se3ara termostatis2Kolom dipadatkan den,an
tanah diatomae- /an, mer!pakan 0at! /an, san,at 0erpori2 Tanah ini dilapisis den,an
3airan 0ertitik didih tin,,i- 0iasan/a polimer lilin2
Komponen dalam kromato,rafi ,as :
+2 Gas pem0aa dan pemas!kan sampel
&ase 0er,erak dalam kromato,rafi ini adalah ,as- /an, palin, la#im adalah
heli!m- hidro,en- ata! nitro,en2 Kompenen pilihan ,as spem0aa
ter!tama ter,ant!n, pada karakteristik detektor2 Kromato,rafi ,as
komersial 0iasan/a men/ediakan kat!p pen,at!r tam0ahan !nt!k
pen,endalian tekanan /an, 0aik pada inlet kolom2 Dekat inlet kolom ada
s!at! alat dimana sampel.sampel dapat dimas!!kan kedalam aliran ,as
pem0aa2 Sampel.sampel terse0!t 0isa 0er!pa ,as ata! 3airan /an, m!dah
men,!ap2 L!0an, in1eksi dipanaskan a,ar sampel 3air ter!apkan den,an
3epat2
)2 Kolom
Aliran ,as selan1!tn/a menem!i kolom /an, diletakkan dalam o"en
0ertemperat!r konstan2 Ini adalah 1ant!n, instr!men tese0!t- tempat
dimana proses kromart,rafi dasar 0erlan,s!n,2 Kolom memilki "ariasi
dalam hal !k!ran dan 0ahan isian2 Ta0!n, diisi den,an 0ahan padat hal!s
den,an l!as perm!kaan 0esar /an, relatif inert2 $adatan iit! se0enarn/a
han/a se0!ah pen/an,,a mekanik !nt!k 3airan- se0el!m diisi kedalam
kolom- padatan terse0!t diimpre,nasi den,an 3airan /an, diin,inkan /an,
0erpareran se0a,ai fasa stasioner ses!n,,!hn/a2 4airan ini har!s sta0il dan
nonfolatil pada temperat!r kolom- pemisahan dan har!s ses!ai !nt!k
pemisahan tertent!2
52 Detektor
Setelah m!n3!l dari kolom it!- aliran ,as leat melal!i sis lain detektor2
Maka el!si #at terlar!t dari kolom it! men,at!r ketidakseim0an,an
antarad!a sisi detektor /an, direkam se3ara elektrik2 La1! aliran ,as
pem0aa adalah hal /an, san,at pentin,- dan 0iasan/a pen,!k!r aliran
!nt!k it! tersedia2 Se3ara normal ,as.,as /an, m!n3!l dialirkan kel!ar
pada tekanan atmosfir2 Karena peker1a la0oratori!m se3ara ter!s mener!s
terpapar oleh !ap sen/aa.sen/aa /an, terkromato,afi /an, m!n,kin
tak 0aik ala!p!n kadarn/a 0iasan/a ke3il maka "entilasi pada kel!aran
instr!men har!s diperhatikan2 Ketent!an 0isa di0!at !nt!k men1e0ak #at
terlar!t /an, dipisahkan setelah m!n3!l dari kolom 1ika hal ini di0!t!hkan
!nt!k pen/elidikan le0ih lan1!t2
Penerapan !romatografi gas
+2 Unt!k identifikasi sen/aa
Den,an s!at! kolom tertent! dan den,an sem!a faria0eln/a seperti
temperat!r dan la1! alir- dikendalikan se3ara 3ermat- akt! retensi ata!
"ol!me retensi s!at! #at terlar!t mer!pakan s!at! 0esaran dari #at terlar!t
terse0!t- seperti haln/a titk didih ata! haln/a indek 0ias adalah 0esaran2 Ini
men!n1!kkan 0aha sifat retensi dapat di,!nakan !nt!k men,etah!i s!at!
sen/aa2
)2 Analisis k!antitatif
Den,an G4 ter,ant!n, pada h!0!n,an antara 1!mlah s!at! #at terlar!t dan
!k!ran dari pita el!si /an, dihasilkan2 Se3ara !m!m den,an detektor
diferensial- !k!ran 1!mlah #at terlar!t /an, palin, 0aik adalah l!as
di0aah pita el!si2 %!mlah #at terlar!t < faktor kali0rasi = l!as di0aah
pita el!si2
Keter0asan G4 adalah "olatilitas sampel it! har!s memp!n/ai tekanan !ap
/an, 3!k!p pada temperat!r kolom terse0!t- dan ini se,era men,hilan,kan 0an/ak
1enis sampel2 S!at! perhit!n,an /an, akt!al tidak m!n,kin dilak!kan tetapi har!s
diperkirakan 0aha sekitar )*> sen/aa kimia /an, diketah!i k!ran, 3!k!p
"olatil2ke0an/akan sampel or,anik tidak 3!k!p "olatil !nt!k mem!n,kinkan
penerapan lan,s!n, dari G42
$emperatur !olom
Temperat!r kolom dapat 0er"ariasi antara ?* o4 sampai )?* o42 Temperat!r
kolom le0ih rendah daripada ,er0an, in1eksi pada o"en- sehin,,a 0e0erapa komponen
3amp!ran dapat 0erkondensasi pada aal kolom2 Kolom mem!lai pada temperat!r
rendah dan kem!dian ter!s mener!s men1adi le0ih panas di0aah pen,aasan
komp!ter saat analisis 0erlan,s!n,2
Proses pemisahan pada !olom
Ada ti,a hal /an, dapat 0erlan,s!n, pada molek!l tertent! dalam 3amp!ran
/an, diin1eksikan pada kolom:
Molek!l dapat 0erkondensasi pada fase diam2
Molek!l dapat lar!t dalam 3airan pada perm!kaan fase diam
Molek!l dapat tetap pada fase ,as
Dari keti,a kem!n,kinan it!- tak sat!p!n /an, 0ersifat permanen2Sen/aa /an,
memp!n/ai titik didih /an, le0ih tin,,i dari temperat!r kolom se3ara 1elas 3ender!n,
akan 0erkondensasi pada 0a,ian aal kolom2 Nam!n- 0e0erapa 0a,ian dari sen/aa
terse0!t akan men,!ap kem0ali den,an den,an 1alan /an, sama seperti air /an,
men,!ap saat !dara panas- meskip!n temperat!r di0aah +**
*
42 $el!an,n/a akan
0erkondensasi le0ih sedikit selama 0erada didalam kolom2
Sama haln/a !nt!k 0e0erapa molek!l dapat lar!t dalam fase diam 3air2
6e0erapa sen/aa akan le0ih m!dah lar!t dalam 3airan di0andin, /an, lainn/a2
Sen/aa /an, le0ih m!dah lar!t akan men,ha0iskan akt!n/a !nt!k diserap pada
fase diam: sedan,kan sen/aa /an, s!ka lar!t akan men,ha0iskan akt!n/a le0ih
0an/ak dalam fase ,as2
$roses dimana #at mem0a,i dirin/a men1adi d!a pelar!t /an, tidak
0er3amp!rkan karena per0edaan kelar!tan- dimana kelar!tan dalam sat! pelar!t sat!
le0ih m!dah di0andin, den,an pelar!t lainn/a dise0!t se0a,ai partisi2 Sekaran,- anda
0isa 0eralasan !nt!k memperde0atkan 0aha ,as seperti heli!m tidak dapat
di1elaskan se0a,ai pelar!t2 Tetapi- istilah partisi masih dapat di,!nakan dalam
kromato,rafi ,as.3air2
S!0stansi antara fase diam 3air dan ,as2 6e0erapa molek!l dalam s!0stansi
men,ha0iskan akt! !nt!k lar!t dalam 3airan dan 0e0erapa lainn/a men,ha0iskan
akt! !nt!k 0er,erak 0ersama.sama den,an ,as2
%a!tu retensi
@akt! /an, di,!nakan oleh sen/aa tertent! !nt!k 0er,erak melal!i kolom
men!1! ke detektor dise0!t se0a,i akt! retensi2 @akt! ini di!k!r 0erdasarkan akt!
dari saat sampel diin1eksikan pada titik dimana tampilan men!n!1!kkan tin,,i p!n3ak
maksim!m !nt!k sen/aa it!2
Setiap sen/aa memiliki akt! retensi /an, 0er0eda2 Unt!k sen/aa tertent!-
akt! retensi san,at 0er"ariasi dan 0er,ant!n, pada: Titik didih sen/aa2 Sen/aa
/an, mendidih pada temperat!r /an, le0ih tin,,i daripada temperat!r kolom- akan
men,ha0iskan hampir sel!r!h akt!n/a !nt!k 0erkondensasi se0a,ai 3airan pada
aal kolom2 Den,an demikian- titik didih /an, tin,,i akan memiliki akt! retensi
/an, lama2
Kelar!tan dalam fase 3air2 Sen/aa /an, le0ih m!dah lar!t dalam fase 3air-
akan memp!n/ai akt! le0ih sin,kat !nt!k di0aa oleh ,as pem0aa22 Kelar!tan
/an, tin,,i dalam fase 3air 0erarti memiiki akt! retensi /an, lama2
Temperat!r kolom2 Temperat!r tin,,i men/e0akan per,erakan molek!l.
molek!l dalam fase ,as: 0aik karena molek!l.molek!l le0ih m!dah men,!ap- ata!
karena ener,i atraksi /an, tin,,i 3airan dan oleh karena it! tidak lama tertam0atkan2
Temperat!r kolom /an, tin,,i mempersin,kat akt! retensi !nt!k se,ala ses!at!n/a
di dalam kolom2
Unt!k mem0erikan sampel dan kolom- tidak ada 0an/ak /an, 0isa diker1akan
men,,!nakan titik didih sen/aa ata! kelar!tann/a dalam fase 3air- tetapi anda dapat
memp!n/ai pen,at!r temperat!r2
Semakin rendah temperat!r kolom semakin 0aik pemisahan /an, akan anda
dapatkan- tetapi akan memakan akt! /an, lama !nt!k mendapatkan sen/aa karena
kondensasi /an, lama pada 0a,ian aal kolom2
Den,an kata lain- men,,!nakan temperat!r tin,,i- se,ala ses!at!n/a akan
melal!i kolom le0ih 3epat- tetapi pemisihann/a k!ran, 0aik2 %ika se,ala ses!at!n/a
melal!i kolom dalam akt! /an, san,at sin,kat- tidak akan terdapat 1arak antara
p!n3ak.p!n3ak dalam kromato,ram2
%aa0ann/a dim!lai den,an kolom den,an s!h! /an, rendah kem!dian
perlahan.lahan se3ara terat!r temperat!rn/a dinaikkan2
$ada aaln/a- sen/aa /an, men,ha0iskan le0ih 0an/ak akt!n/a dalam fase ,as
akan melal!i kolom se3ara 3epat dan dapat dideteksi2 Den,an adan/a sedikit
pertam0ahan temperat!r akan memper1elas perlekatan sen/aa2 $enin,katan
temperat!r masih dapat le0ih AmelekatanA molek!l.molek!l fase diam melal!i kolom2
&ete!tor
Ada 0e0erapa tipe detektor /an, 0iasa di,!nakan2 Detektor ionisasi n/ala
di1elaskan pada 0a,ian 0aah pen1elasan ini- mer!pakan detektor /an, !m!m dan
le0ih m!dah !nt!k di1elaskan daripada detektor alternatif lainn/a2
Detektor ionisasi n/ala
Dalam mekanisme reaksi- pem0akaran sen/aa or,anik mer!pakan hal /an,
san,at kompleks2 Selama proses- se1!mlah ion.ion dan elektron.elektron dihasilkan
dalam n/ala2 Kehadiran ion dan elektron dapat dideteksi2
Sel!r!h detektor dit!t!p dalam o"en /an, le0ih panas di0andin, den,an
temperat!r kolom2 (al it! men,hentikan kondensasi dalam detektor2
%ika tidak terdapat sen/aa or,anik datan, dari kolom- anda han/a memiliki n/ala
hidro,en /an, ter0akar dalam air2 Sekaran,- an,,aplah 0aha sat! sen/aa dalam
3amp!ran anda analisa m!lai mas!k ke dalam detektor2
Ketika di0akar- it! akan men,hasilkan se1!mlah ion.ion dan elektron.elektron
dalam n/ala2 Ion positif akan 0eratraksi pada katoda silinder2 Ion.ion ne,atif dan
elektron.elektron akan 0eratraksi pan3arann/a masin,.masin, /an, mana mer!pakan
anoda2(al ini ser!pa den,an apa /an, ter1adi selama elektrolisis normal2
$ada katoda- ion positif akan mendatan,i elektron.elektron dari katoda dan
men1adi netral2 $ada anoda- 0e0erapa elektron dalam n/ala akan dipindahkan pada
elektroda positif: ion.ion ne,atif akan mem0erikan elektron.elektronn/a pada
elektroda dan men1adi netral2
Kehilan,am elektron.elektron dari sat! elektroda dan perolehan dari elektroda
lain- akan men,hasilkan aliran elektron.elektron dalam sirk!it eksternal dari anoda ke
katoda2 Den,an kata lain- anda akan memperoleh ar!s listrik2
Ar!s /an, diperoleh tidak 0esar- tetapi dapat diperk!at2 %ika sen/aa.sen/aa
or,anik le0ih 0an/ak dalam n/ala- maka akan 0an/ak 1!,a dihasilkan ion.ion- dan
den,an demikian akan ter1adi ar!s listrik /an, le0ih k!at2 Ini adalah pendekatan /an,
0eralasan- kh!s!sn/a 1ka anda 0er0i3ara tentan, sen/aa.sen/aa /an, ser!pa- ar!s
/an, anda !k!r se0andin, den,an 1!mlah sen/aa dalam n/ala2
Kek!ran,an !tama dari detektor ini adalah pen,r!sakan setiap hasil /an,
kel!ar dari kolom se0a,aimana /an, terdeteksi2 %ika anda akan men,rimkan hasil ke
spektrometer massa- misaln/a !nt!k analisa lan1!t- anda tidak dapat men,,!nakan
detektor tipe ini2
Pener"emahan hasil dari dete!tor
(asil akan direkam se0a,ai !r!tan p!n3ak.p!n3ak: setiap p!n3ak meakili
sat! sen/aa dalam 3amp!ran /an, melal!i detektor2 Sepan1an, anda men,ontrol
se3ara hati.hati kondisi dalam kolom- anda dapat men,,!nakan akt! retensi !nt!k
mem0ant! men,identifikasi sen/aa /an, tampak.tent! sa1a anda ata! seseoran, lain
telah men,analisa sen/aa m!rni dari 0er0a,ai sen/aa pada kondisi /an, sama2
Area di0aah p!n3ak se0andin, den,an 1!mlah setiap sen/aa /an, telah
meleati detektor- dan area ini dapat dihit!n, se3ara otomatis melal!i komp!ter /an,
dih!0!n,kan den,an monitor2 Area /an, akan di!k!r tampak se0a,ai 0a,ian /an,
0erarna hi1a! dalam ,am0ar /an, disederhanakan2
$erl! di3atat 0aha tin,,i p!n3ak tidak mer!pakan masalah- tetapi total area
di0aah p!n3ak2 Dalam 0e0erapa 3ontoh tertent!- 0a,ian kiri ,am0ar adalah p!n3ak
tertin,,i dan memiliki area /an, palin, l!as2 (al ini tidak selal! mer!pakan hal
sehar!sn/a22
M!n,kin sa1a se1!mlah 0esar sat! sen/aa dapat tampak- tetapi dapat ter0!kti
dari kolom dalam 1!mlah relatif sedikit melal!i 1!mlah /an, lama2 $en,!k!ran area
selain tin,,i p!n3ak dapat diper,!nakan dalam hal ini2
Perang!aian !romatogram gas pada spe!trometer massa
(al ini tidak dapat dillak!kan men,,!nakan detektor ionisasi n/ala- karena
detektor dapat mer!sak sen/aa /an, melal!in/a2 An,,aplah anda men,,!nakan
detektor /an, tidak mer!sak2 Sen/aa-
Ketika detektor men!n1!kkan p!n3ak- 0e0erapa diantaran/a melal!i detektor
dan pada akt! it! dapat di0elokkan pada spektrometer massa2 (al ini akan
mem0erikan pola fra,mentasi /an, dapat di0andin,kan den,an data dasar sen/aa
/an, telah diketah!i se0el!mn/a pada komp!ter2 It! 0erarti 0aha identitas sen/aa.
sen/aa dalam 1!mlah 0esar dapat dihasilkan tanpa har!s men,etah!i akt!
retensin/a2
). HPLC( Hight Performance Liquid Chromatography)
($L4 se3ara mendasar mer!pakan perkem0an,an tin,kat tin,,i dari
kromato,rafi kolom2 Selain dari pelar!t /an, menetes melal!i kolom di0aah
,rafitasi- did!k!n, melal!i tekanan tin,,i sampai den,an ;** atm2 Ini mem0!atn/a
le0ih 3epat2
($L4 memper0olehkan pen,,!naan partikel /an, 0er!k!ran san,at ke3il
!nt!k material terpadatkan dalam kolom /an, mana akan mem0eri l!as perm!kaan
/an, le0ih 0esar 0erinteraksi antara fase diam dan molek!l.molek!l /an,
melintasin/a2 (al ini mem!n,kinkan pemisahan /an, le0ih 0aik dari komponen.
komponen dalam 3amp!ran2
$erkem0an,an /an, le0ih l!as melal!i kromato,rafi kolom
mempertim0an,kan metode pendeteksian /an, dapat di,!nakan2 Metode.metode ini
san,at otomatis dan san,at peka2
Ada d!a fase ($L4:
'ase normal HPLC
Kolom diisi den,an partikel silika /an, san,at ke3il dan pelar!t non polar
misaln/a heksan2 Se0!ah kolom sederhana memiliki diameter internal ;2B mm 7dan
m!n,kin k!ran, dari nilai ini8 den,an pan1an, +?* sampai )?* mm2
Sen/aa.sen/aa polar dalam 3amp!ran melal!i kolom akan melekat le0ih
lama pada silika /an, polar di0andin, de,an sen/aa.sen/aa non polar2 Oleh
karena it!- sen/aa /an, non polar kem!dian akan le0ih 3epat meleati kolom2
'ase (ali! HPLC
Dalam kas!s ini- !k!ran kolom sama- tetapi silika dimodifikasi men1adi non
polar melal!i pelekatan rantai.rantai hidrokar0on pan1an, pada perm!kaann/a se3ara
sederhana 0aik 0er!pa atom kar0on C ata! +C2 Se0a,ai 3ontoh- pelar!t polar
di,!nakan 0er!pa 3amp!ran air dan alkohol seperti metanol2
Dalam kas!s ini- akan terdapat atraksi /an, k!at antara pelar!t polar dan
molek!l polar dalam 3amp!ran /an, melal!i kolom2 Atraksi /an, ter1adi tidak akan
sek!at atraksi antara rantai.rantai hidrokar0on /an, 0erlekatan pada silika 7fase diam8
dan molek!l.molek!l polar dalam lar!tan2 Oleh karena it!- molek!l.molek!l polar
dalam 3amp!ran akan men,ha0iskan akt!n/a !nt!k 0er,erak 0ersama den,an
pelar!t2
Sen/aa.sen/aa non polar dalam 3amp!ran akan 3ender!n, mem0ent!k
atraksi den,an ,!,!s hidrokar0on karena adan/a dispersi ,a/a "an der @aals2
Sen/aa.sen/aa ini 1!,a akan k!ran, lar!t dalam pelar!t karena mem0!t!hkan
pem!t!san ikatan h/dro,en se0a,aimana haln/a sen/aa.sen/aa terse0!t 0erada
dalam molek!l.molek!l air ata! metanol misaln/a2 Oleh karenan/a- sen/aa.
sen/aa ini akan men,ha0iskan akt! dalam lar!tan dan akan 0er,erak lam0at dalam
kolom2Ini 0erarti 0aha molek!l.molek!l polar akan 0er,erak le0ih 3epat melal!i
kolom2 &ase 0alik ($L4 adalah 0ent!k /an, 0iasa di,!nakan dalam ($L42Melihat
sel!r!h proses
&iagram alir HPLC
#n"e!si sampel
In1eksi sample sel!r!hn/a otomatis dan anda tidak akan men,harapkan
0a,aimana men,etah!i apa /an, ter1adi pada tin,kat dasar2 Karena proses ini melip!ti
tekanan- tidak sama haln/a den,an kromato,rafi ,as 71ika anda telah
mempela1arin/a82
%a!tu retensi
@akt! /an, di0!t!hkan oleh sen/aa !nt!k 0er,erak melal!i kolom men!1!
detektor dise0!t se0a,ai akt! retensi2 @akt! retensi di!k!r 0erdasarkan akt!
dimana sampel diin1eksikan sampai sampel men!n1!kkan ketin,,ian p!n3ak /an,
maksim!m dari sen/aa it!2
Sen/aa.sen/aa /an, 0er0eda memiliki akt! retensi /an, 0er0eda2 Unt!k
0e0erapa sen/aa- akt! retensi akan san,at 0er"ariasi dan 0er,ant!n, pada:
Tekanan /an, di,!nakan 7karena it! akan 0erpen,ar!h pada la1! alir dari
pelar!t8
Kondisi dari fase diam 7tidak han/a ter0!at dari material apa- tetapi 1!,a pada
!k!ran partikel8
Komposisi /an, tepat dari pelar!t
Temperat!r pada kolom
It! 0erarti 0aha kondisi har!s dikontrol se3ara hati.hati- 1ika anda men,,!nakan
akt! retensi se0a,ai sarana !nt!k men,identifikasi sen/aa.sen/aa2
&ete!tor
Ada 0e0erapa 3ara !nt!k mendeteksi s!0stansi /an, telah meleati kolom2
Metode !m!m /an, m!dah dipakai !nt!k men1elaskan /ait! pen,,!naan serapan
!ltra."iolet2
6an/ak sen/aa.sen/aa or,anik men/erap sinar UV dari 0e0erapa pan1an,
,elom0an,2 %ika anda men/inarkan sinar UV pada lar!tan /an, kel!ar melal!i kolom
dan se0!ah detektor pada sisi /an, 0erlaanan- anda akan mendapatkan pem0a3aan
lan,s!n, 0erapa 0esar sinar /an, diserap2
%!mlah 3aha/a /an, diserap akan 0er,ant!n, pada 1!mlah sen/aa tertent!
/an, meleati melal!i 0erkas pada akt! it!2 Anda akan heran men,apa pelar!t /an,
di,!nakan tidak men,a0sor0si sinar UV2 $elar!t men/erapn/aD Tetapi 0er0eda-
sen/aa.sen/aa akan men/erap den,an san,at k!at 0a,ian.0a,ian /an, 0er0eda
dari spe3ktr!m UV2
Misaln/a- metanol- men/erap pada pan1an, ,elom0an, di0aah )*? nm dan
air pada ,elom0an, di0aah +E* nm2 %ika anda men,,!nakan 3amp!ran metanol.air
se0a,ai pelar!t- anda se0aikn/a men,,!nakan pan1an, ,elom0an, /an, le0ih 0esar
dari )*? nm !nt!k men3e,ah pem0a3aan /an, salah dari pelar!t2
#nterpretasi output dari dete!tor
O!tp!t akan direkam se0a,ai ran,kaian p!n3ak.p!n3ak- dimana masin,.
masin, p!n3ak meakili sat! sen/aa dalam 3amp!ran /an, melal!i detektor dan
menerap sinar UV2 Sepan1an, anda men,ontrol kondisi kolom- anda dapat
men,,!nakan akt! retensi !nt!k mem0ant! men,identifikasi sen/aa /an,
diperoleh- tent!n/a- anda 7ata! oran, lain8 s!dah men,!k!r sen/aa.sen/aa
m!rnin/a dari 0er0a,ai sen/aa pada kondisi /an, sama2
Anda 1!,a dapat men,,!nakan p!n3ak se0a,ai 1alan !nt!k men,!k!r
k!antitas dari sen/aa /an, dihasilkan2 Mari 0eran,,apan 0aha tertarik dalam
sen/aa tertent!- F2
%ika anda men,in1eksi s!at! lar!tan /an, men,and!n, sen/aa m!rni F /an,
telah diketah!i 1!mlahn/a pada instr!men- anda tidak han/a dapat merekam akt!
retensi dari sen/aa terse0!t- tetapi anda 1!,a dapat men,h!0!n,kan 1!mlah dari
sen/aa F den,an p!n3ak dari sen/aa /an, dihasilkan2
Area /an, 0erada di0aah p!n3ak se0andin, den,an 1!mlah F /an, melal!i
detektor- dan area ini dapat dihit!n, se3ara otomatis melal!i la/ar komp!ter2 Area
dihit!n, se0a,ai 0a,ian /an, 0erarna hi1a! dalam ,am0ar 7san,at sederhana82
%ika lar!tan F k!ran, pekat- area di0aah p!n3ak akan 0erk!ran, meskip!n
akt! retensi akan sama2 Misaln/a-
Ini 0erarti dim!n,kinkan men,kali0rasi instr!men sehin,,a dapat di,!nakan
!nt!k men,etah! 0erapa 1!mlah s!0stansi /an, dihasilkan meskip!n dalam 1!mlah
ke3il2
Meskip!n demikian- har!s 0erhati.hati2 %ika anda memp!n/ai d!a s!0stansi
/an, 0er0eda dalam se0!ah 3amp!ran 7F dan G8- dapatkah anda men,atakan 1!mlah
relatifn/aH Anda tidak dapat men,atakann/a 1ika anda men,,!nakan serapan UV
se0a,ai metode pendeteksin/a2
Dalam ,am0ar- area di 0aah p!n3ak G le0ih ke3il di0andin, den,an area
di0aah p!n3ak F2 Ini m!n,kin dise0a0kan oleh karena G le0ih sedikit dari F- tetapi
dapat sama karena G men,a0sor0si sinar UV pada pan1an, ,elom0an, le0ih sedikit
di0andin, den,an F2 Ini m!n,kin ada 1!mlah 0esar G /an, tampak- tetapi 1ika diserap
lemah- ini akan han/a mem0erikan p!n3ak /an, ke3il2
An ($L42 &rom left to ri,ht: A p!mpin, de"i3e ,eneratin, a ,radient of to different
sol"ents- a steel enfor3ed 3ol!mn and an apparat!s for meas!rin, the a0sor0an3e2
Picture of an HPLC instrument
Gam0ar peralatan ($L4










DA&TAR $USTAKA
R2A2Da/ dan Underood2)**). Analisis kimia kuantitatif2 %akarta: 'rlan,,a
$e3sok and LD Shields2+EIB2 Modern Methods of Chemical Analysis2USA
2ikipedia2or, - diakses + maret )*+*
Http)**+++.edu,---.org*portal*inde.. dia!ses 1 maret ,-1-
http:JJ2o3.praktik!m2deJidJarKromato,rafi 7($L482diakses +* maret )*+*
http)**+++.chem/is/try.org*materi0!imia*instrumen0analisis*!romat.dia!ses +*
maret )*+*