I.

DATA PERCOBAAN
- Data absorbansi kolesterol
a. Standar = 0,3!
b. Sa"#el $ = 0,%&0
'. Sa"#el % = 0,%&(
d. Sa"#el 3 = 0,(()
- Per*it+n,an
a. -onsentrasi sa"#el
=
- $ = = $0,!3 ",.dl
- % = = $3,0& ",.dl
- 3 = = %(/,$) ",.dl
b. -onsentrasi rata-rata
=
= $!(,3 ",.dl
Re#likasi 0
d = 10-
d
%
$ $0,!3
$!(,3
33,% $$%3,/
% $3,0& 3$,%! /&!,((
3 %(/,$) )(,!$ (%00,33
)30%,3)
'. Pen'arian Nilai SD
SD =
=
= ),$3
d. Pen'arian nilai RSD
RSD =
=
= 30,(/2
3adi, kadar kolesterol total dala" dara* adala* $!(,3 4 30,(/ 2.
II. PE5BA6ASAN
Sala* sat+ 'ara #e"eriksaan kadar kolesterol adala* den,an "etode en7i"atik
C6OD-PAP 1Cholesterol Oksidase Phenol Aminoantipyrin8. Prinsi# "etode ini adala*
#en,+raian kolesterol dan estern9a "en:adi #eroksida den,an *idrolisis dan oksidasi
en7i"atik. Indikator k+inoni"in dibent+k dari *idro,en #roksida dan (-a"ino;enan7on
9an, berasal dari ;enol dan #eroksidase. Reaksi ak*ir akan "en+n:+kkan <arna "era*
"+da 9an, intensitasn9a di+k+r den,an ;oto"etrik. Pe"eriksaan kadar kolesterol
"elibatkan #roses bioki"ia karena "en,,+nakan reaksi en7i"atis se*in,,a ti"b+l
reaksi 9an, "en,*asilkan sen9a<a ak*ir 9an, da#at "en'er"inkan kadar kolesterol
dala" dara* dan da#at di+k+r.
Pada "etode ini, kolesterol dite"+kan setela* *idrolisa en7i"atik dan oksidasi.
Indikator =+inonei"ine terbent+k dari *9dro,en #eroksida dan ( a"inian9#9rine
den,an adan9a #*enol #eroksidase 1>i"anto, %0$08.
5etode ini 1en7i"atis8 "e"#erli*atkan linearitas 9an, baik sa"#ai den,an 00
",.dl. Sa"#le den,an nilai 9an, lebi* dari 00 ",.dl *ar+s dianalisis +lan, setela*
#en,en'eran den,an Natri+" klorida 1NaCl8. Ta*a# reaksi a<al "etode en7i"atis
adala* *idrolisis ester kolesterol +nt+k "e"bent+k kolesterol bebas. Ta*a# berik+tn9a
adala* ta*a# oksidasi 9an, "en,,+nakan oksi,en +nt+k "en,*asilkan *9dro,en
#eroksida 16
%
O
%
8, "elal+i #e"bent+kan oksidasi ber<arna 9an, dired+ksi. ?aktor 9an,
"en,,an,,+ #ada #e"eriksaan adala* #ada sa"#el 9an, ker+*, li#e"ik, ikterik, ata+
"en,ala"i *e"olisis. Billir+bin "en9ebabkan inter;erensi ne,ati@e dala" "etode
en7i"atis karena billir+bin bereaksi den,an 6
%
O
%
se*in,,a "en,+ran,i :+"la*
#eroksida 9an, tersedia +nt+k "e"bent+k ko"#lek ber<arna. Billir+bin :+,a
"eni"b+lkan ,an,,+an lan,s+n, karena #en9era#ann9a ada di sekitar 00 n".
Aan,,+an ini da#at dik+ran,i den,an "en,+k+r kons+"si oksi,en se'ara elektroki"ia
1>i"anto, %0$08.
Prinsi# #en,+:ian ini adala* den,an "ene"bakkan #an:an, ,elo"ban, tertent+
1#ada #er'obaan ini "en,,+nakan #an:an, ,elo"ban, ()n"8 #ada s+at+ sen9a<a.
-arena 'a*a9a 9an, dite"bakkan "en,and+n, ener,i, *al ini akan "e"b+at elektron
dari sen9a<a terseb+t akan tereksitasi ke orbital 9an, lebi* tin,,i. Setela* "en,ala"i
eksitasi, elektron terseb+t akan t+r+n ke"bali ke ground state 1keadaan dasar8, sa"bil
"elea#skan e"isi 9an, ke"+dian da#at di+k+r ole* Microlab-200. Sala* sat+ 9an,
"e"e,an, #eran dala" #en,+:ian ini adala* ,+,+san kro"o;or 1ikatan ran,ka#
terkon:+,asi8 9a, da#at "enan,ka# #an:an, ,elo"ban, tertent+ 1>i"anto, %0$08.
- 5ono,ra;i Ba*an
$. ?enol
?enol ata+ asa" karbolat ata+ ben7enol adala* 7at kristal tak ber<arna 9an,
"e"iliki ba+ k*as. R+"+s ki"ian9a adala* C
)
6

O6 dan str+kt+rn9a "e"iliki

,+,+s *idroksil 1-O68 9an, berikatan den,an 'in'in ;enil. ?enol "e"iliki
kelar+tan terbatas dala" air, 9akni !,3 ,ra".$00 "l. ?enol "e"iliki si;at 9an,
'ender+n, asa", artin9a ia da#at "ele#askan ion 6
B
dari ,+,+s
*idroksiln9a.Pen,el+aran ion terseb+t "en:adikan anion ;enoksida C
)
6

O
C
9an,
da#at dilar+tkan dala" air. Dibandin,kan den,an alko*ol ali;atik lainn9a, ;enol
bersi;at lebi* asa". 6al ini dib+ktikan den,an "ereaksikan ;enol den,an
NaO6, di "ana;enol da#at "ele#askan 6
B
. Pada keadaan 9an, sa"a, alko*ol
ali;atik lainn9a tidak da#at bereaksi se#erti it+. Pele#asan ini diakibatkan
#elen,ka#an orbital antara sat+-sat+n9a #asan,an oksi,en dan siste" aro"atik,
9an, "endelokalisasi beban ne,ati; "elal+i 'in'in terseb+t dan "enstabilkan
anionn9a.
%. (-a"inoanti#9rine
(-a"inoanti#9rine "e"#+n9ai r+"+s str+kt+r C$$6$3N3O den,an B5 %03,
%(0(%. Pena"#ilanD -+nin, #+'at -ristal. Titik leb+r $0)-$0/ C, #6 &,0-!,0 .
Stabilitas ki"iaD Biasan9a stabilEsensiti; +nt+k 'a*a9a. -etidakses+aian den,an
ba*an lainD #enin,katan risiko kebakaran dan ledakan den,an oksidator k+at.
da#at bereaksi keras ata+ *ebat den,an asa" k+at, asa" klorida, asa"
an*idrida. Reakti;itasD 6indari #anas, se"+a s+"ber #en,a#ian, #a#aran
kele"baban ata+ 'a*a9a, ,enerasi deb+. 5+da* terbakar :ika san,at di#anaskan.
(-A"inoanti#9rine da#at di,+nakan seba,ai #erantara +nt+k sintesis obat-
obatan ter+ta"a obat anti#iretik dan anal,esik. 6al ini :+,a di,+nakan dala"
#enent+an kolori"etri dari ;enol 16+di9ono, $//!8.
3. AoodFs b+;;er
AoodFs b+;;er "er+#akan kelo"#ok b+;;er 9an, tela* didiskri#sikan ole* Dr.
Nor"an Aood #ada ta*+n $/)). B+;;er terseb+t selekti; sebab da#at
"en+n:+kkan karakteristik 9an, +t+* dari #enelitian biolo,i dan bioki"ia.
-arakteristik terseb+t berkaitan den,an adan9a Aoods b+;;er it+ sendiri D nilai
#-a antara ),0 *in,,a !,0, sol+bilitas tin,,i, tidak toksik, e;ek 9an, terbatas
ter*ada# reaksi bioki"ia, san,at renda* absorban antara %(0 n" *in,,a &00 n",
stabil dala" reaksi en7i"atik dan *idrolisis, interaksi 9an, "ini"al den,an
kation "ineral, e;ek "ini"al ter*ada# ko"#osisi ioni' ata+ ,ara" dala"
lar+tan dan "ini"al #er"eabilitas #ada "e"brane biolo,is 1Aood et al, $/))8.
(. A=+a P+ri;i'ata ata+ ak+ades 16
%
O8
B5 D $!,0%.
Air "+rni 16%O8 adala* air 9an, di"+rnikan 9an, di#erole* den,an destilasi,
#erlak+an "en,,+nakan #en+kar ion, os"osis balik ata+ #roses lain 9an,
ses+ai. Dib+at dari air 9an, "e"en+*i #ers9aratan air "in+" dan tidak
"en,and+n, 7at ta"ba*an lain. 6%O "e"iliki berat "olek+l $!,0% ,."ol
den,an #6 ,0-&,0. Sen9a<a ini "er+#akan 'airan :erni*, tidak ber<arna, tidak
berba+. Densitasn9a 0,//! ,.'"G dala" ;ase 'airan dan 0,/% ,.'"G dala" ;ase
#adatan. Titik leb+rn9a 0 HC 1%&3,$ -8 13% I?8 dan titik didi*n9a $00 HC
13&3.$ -8 1%$% I?8. Sebaikn9a disi"#an dala" <ada* tert+t+# ra#at 1Anoni",
$//8.
. En7i" #eroksidase
En7i" #eroksidase "er+#akan kelo"#ok en7i" oksidored+ktase 9an, "a"#+
"en,katalisis reaksi oksidasi ole* *idro,en #eroksida dari se:+"la* s+bstrat
9an, "er+#akan donor *9dro,en se#erti ;enol, aniline dan lain seba,ain9a.
En7i" #eroksidase dala" or,anis"e *id+# da#at "en,katalisis sen9a<a
s+bstratn9a 16+di9ono, $//!8.
III. DIS-JSI
$. A#aka* ke#entin,an #eneta#an kadar kolesterol #ada analisis klinikK
-e#entin,an #eneta#an kolesterol #ada analisis klinik adala*
Jnt+k "en,eta*+i ,an,,+an "etabolis"e li#id
Jnt+k "en,eta*+i kadar kolesterol #ada #enderita diabetes "elit+s
Jnt+k "en,eta*+i kadar kolesterol dan *+b+n,ann9a den,an #en9akit :ant+n,
%. Ba,ai"ana str+kt+r kolesterolK A#a 9an, di"aks+d den,an kolesterol totalK
Str+kt+r kolesterol
Lan, di"aks+d den,an kolesterol total adala* :+"la* dari kolesterol ester den,an
kolesterol bebas
3. A#a kele"a*an "etode >ieber"ann B+r'*ard #ada #eneta#an kadar kolesterol
totalK
-elebi*an dari "etode >ieber"ann B+r'*ard #ada #eneta#an kadar kolesterol total
adala*
Sensiti; 1 den,an "endeteksi kolesterol #ada kadar 9an, renda* 8
Pereaksin9a stabil
Reaksin9a 'e#at
Tidak di#en,ar+*i ole* sen9a<a steroid
(. T+liskan reaksi #ada no"or 3M
Reaksi 9an, ter:adi #ada "etode >ieber"ann B+r'*ard adala*
. 5en,a#a absorbansi diba'a #ada N )0n"K
Absorban diba'a #ada #an:an, ,elo"ban, )0 n" karena sen9a<a kolesterol
"e"#+n9ai *ar,a sera#an 9an, stabil #ada #an:an, ,elo"ban, terseb+t
). A#a ;+n,si "asin,-"asin, #erekasi #ada "etode >ieber"ann B+r'*ardK
?+n,si "asin,-"asin, #ereaksi #ada "etode >ieber"ann B+r'*ard
Asa" s+l;at #ekat D +nt+k "e"bent+k ikatan ran,ka# terkon:+n,asi 1 <arna
*i:a+bir+ intens8 9an, terbent+k akibat #oli"erasi *idrokarbon tak :en+*
Asa" asetat an*idrida D "en,ikat 6%O ata+ "en:a"in "edi+" bebas dari 6%O,
"en,ekstrasikan kolesterol, dan "en,enda#kan #rotein.
Asa" asetat ,lasial D "elar+tkan kolesterol
Natri+" asetat an*idrida D "enstabilkan *asil reaksi
Asa" %, di"etilben7ens+l;onat D "edis#ersiskan #rotein
&. A#a kele"a*an "etode >ieber"ann B+r'*ardK
-ele"a*an "etode >ieber"ann B+r'*ard adala*
Tidak s#esi;ik, karena den,an "etode ini :+,a "endeteksi de"osterol 1 #rek+rsor
kolesterol8
Intensitas 'a*a9a ter,ant+n, #ada D
a8 -onsentrasi asa" s+l;at #ekat
b8 3+"la* air dala" #ereaksi
'8 Sela <akt+ antara #ena"ba*an #ereaksi den,an #e"ba'aan absorbansi 1 O
"enit8
d8 Il+"inasi ata+ #en'a*a9aan
!. 3elaskan #rinsi# "etode en7i"atikM
Prinsi# "etode en7i"atik adala* sa"#el direaksikan den,an rea,en.-IT ke"+dian
diink+basi dala" <ater bat* #ada 3&HC dan diba'a absorbansin9a #ada #an:an,
,elo"ban, )0 n". Reaksin9a seba,ai berik+t D
/. Seb+tkan kelebi*an dan kek+ran,an "etode en7i"atikM
-elebi*an dari "etode en7i"atik adala* D
Praktis
Sensiti;
"+da* dilak+kan
-ek+ran,an "etode en7i"atik adala* D
Tidak s#esi;ik karena P-*9dro09 sterol dan sterol ti"in reakti;.
5a*al
5e"erl+kan teknik tertent+ 1 #e"ba'aan absorbansi *ar+s 'e#at dan te#at8
$0. A#aka* 9an, di"aks+d den,an 6D>, >D>, dan TATK Bera#a ran,e nor"aln9aK
Lan, di"aks+d den,an D
6D> D sala* sat+ kelo"#ok li#o#rotein 9an, ber;+n,si +nt+k "en,an,k+t
kelebi*an kolesterol dari sel ke li@er. -adar nor"al 6D> +nt+k #ria Q(0 ",.d>
dan +nt+k <anita Q0 ",.d>. -adar )0 ",.d> "as+k dala" kate,ori tin,,i
>D> D ti#e li#o#rotein 9an, ber;+n,si "en,an,k+t kolesterol dari li@er ke sel.
-adar nor"al tertin,,i dari >D> adala* $30-$/ ",.d>
TA D s+at+ "olek+l 9an, +:+n, kiri ber+#a ,liserol dan +:+n, kanan ber+#a asa"
#al"itat dan asa" oleat, ber;+n,si seba,ai s+"ber ener,i karena a#abila ada
kelebi*an "akanan akan disi"#an dala" bent+k tri,liserida. -adar nor"al dari
tri,liserida adala* Q$0 ",.d>
Da;tar P+staka
Anoni". $//. Farmakope Indonesia Edisi I. De#arte"en -ese*atan Re#+blik Indonesia.
3akarta.
Aood, N.E., et al. $/)). !ydrogen Ion "u##ers #or "iological $esearch. Bio'*e"istr9 1%8.
()&-(&&.
6+di9ono, PRS. S. $//!. %eori &asar En'im( 3+r+san -i"ia ?5IPA JI. De#ok.
>i"anto, -.R. %0$0. Penentuan )adar )olesterol dengan Metode C!O&-PAP.
*tt#D..<<<.s'ribd.'o".do'.3%&)/)3$.PENENTJAN--ADAR--O>ESTERO>-
DENAAN-5ETODE-C6OD-PAP. Akses 3+ni %0$(.