LAPORAN PRAKTIKUM KIMIA BAHAN ALAM

PERCOBAAN 3 DAN 4
ISOLASI GLIKOSIDA FLAVONOID DARI Manihot Utilissima FOLIUM
DAN IDENTIFIKASI DENGAN KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS
Disusun Oleh:
Golongan/Kelompok : IA/FLAVON
1. Nuke Paraswani !G1F"1#""1$
#. Asri Dea Nuripah !G1F"1#""%$
%. &aki'aul Firi'ah !G1F"1#""($
). Larasai Karika !G1F"1#""*$
(. Dewi Oka+iana !G1F"1#"",$
Asisen :
1. &a-' .apura
#. Glor'a ..
%. Na/ia Far0hunnisa
). 1. Fikarroalo
LABORATORIUM BIOLOGI FARMASI
JURUSAN FARMASI
FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU-ILMU KESEHATAN
UNIVERSITAS JENDERAL SOEDIRMAN
PURWOKERTO
2014
I.OLA.I GLIKO.IDA FLAVONOID DA2I Manihot utilissima FOLI31 DAN
ID4N5IFIKA.I D4NGAN K2O1A5OG2AFI LAPI. 5IPI.
A. 5363AN P2AK5IK31
1. 1emahami /an melakukan isolasi 7la+onoi/ /ari /aun keela pohon
!Manihot utilissima$.
#. 1elakukan analisis kualiai7 golongan sen'awa 7la+onoi/ /engan
meo/e kromaogra7i lapis ipis.
8. P4NDA93L3AN
Fla+onoi/ /alam :ahan 'ang /iisols :ersi7a polar sehingga /apa
/isari /engan air panas /an /ikrisalkan /engan peninhin; se/angkan
pemisahan aglikon /ari glikosi/an'a /apa /ilakukan /engan hi/rolilis asam
!1a:r'; e al.; 1,*"$. Kromaogra7i lapis ipis !KL5$ a/alah suau ehnik 'ang
se/erhana /an :an'ak /igunakan. 1eo/e ini menggunakan lempeng ka0a
aau lem:aran plasik 'ang /iuupi pen'erap unuk lapisan ipis /an kering
:enuk silika gel; alomina; selulosa /an poliani/a. 3nuk menoolkan laruan
0uplikan pa/a lempeng ka0a; pa/a /asarn'a /gunakan mikro pipe/ pipa
kapiler. .eelah iu; :agian :awah /ari lempeng /i0elup /alam laruan
pengulsi /i /alam wa/ah 'ang eruup !<ham:er$ !2u/i; #"1"$. Penenuan
=umlah komponen sen'awa /apa /i/eeksi /engan kromaogra7i lapis ipis
!KL5$ /engan menggunakan pla KL5 'ang su/ah siap pakai. 5er=a/in'a
pemisahan komponen>komponen pa/a KL5 /engan 27 erenu /apa
/i=a/ikan se:agai pan/uan unuk memisahkan komponen kimia erse:u
/engan menggunakan kolom kromaogra7i /an se:agai 7asa /iam /apa
/igunakan silika gel /an eluen 'ang /igunakan :er/asarkan :asil 'ang
/iperoleh /ari KL5 /an akan le:ih :aik kalau kepolaraan eluen pa/a kolom
kromaogra7i se/iki /i:awah kepolaran eluen pa/a KL5 !Lenn'; #""?$.
Pa/a hakekan'a KL5 merupakan meo/a kromaogra7i 0air 'ang
meli:akan /ua 7asa 'aiu 7asa /iam /an 7asa gerak. Fasa gerakn'a :erupa
0ampuran pelaru pengem:ang /an 7asa /iamn'a /apa :erupa ser:uk halus
'ang :er7ungsi se:agai permukaan pen'erap !kromaogra7i 0air>pa/a$ aau
:er7ungsi se:agai pen'angga unuk lapisan @a 0air !kromaogra7i 0air>0air$.
Fasa /iam pa/a KL5 sering /ise:u pen'erap walaupun :er7ungsi se:agai
pen'angga unuk @a 0air /i /alam sisem kromaogra7i 0air>0air. 9ampir
segala ma0am ser:uk /apa /ipakai se:agai pen'erap pa/a KL5; 0onohn'a
silika gel !asam silika$; alumina !aluminium oksi/a$; kiselgur !anah
/iaomae$ /an selulosa. .ilika gel merupakan pen'erap paling :an'ak /ipakai
/alam KL5 !2u/i; #"1"$.
<. ALA5 DAN 8A9AN
Ala>ala 'ang /igunakan pa/a prakikum kali ini a/alah pani0 in7usa;
0orong :esar; 4rlenme'er !(" /an #(" ml$; a:ung reaksi; 0orong pisah !#("
ml$; 0awan porselin; 7lakon !% :uah$; 0ham:er KL5; pipa kapiler; pinse; ala
pen'empro; o+en /an lampu 3V %?? nm.
8ahan>:ahan 'ang /igunakan pa/a prakikum kali ini a/alah a-ua/es;
eer; 9<l #N; Narium sul7a anhi/ra; lempeng selulosa aau keras
kromaogra7i; mehanol; ammonia; pereaksi sio:ora; /an 7ase aas /ari
0ampuran n>:uanol : asam asea : air !%:1:1$ +/+ se:agai eluen.
D. .K41A K426A
-
Per!"##$ III
-
Diim:ang (" gram
-
Di masukkan /alam pani0 in7usa aas
-
Diam:ahkan ("" ml a-ua/es
-
-
Diisi /engan air :iasa /an /iunggu sampai men/i/ih !suhu pan0i
,"
o
<$
-
Di:iarkan selama 1( meni
-
Disaring melalui 0orong 8u0hner sehingga /iperoleh 7ilra 'ang
=ernih
-
Dipin/ahkan ke /alam 4rlenme'er #(" ml
-
Disimpan /alam lemari es selama 1 minggu sehinga er:enuk
Krisal amor7 puih
.er:uk
Pan0i in7usa :awah
<ampuran
9asil
Filra =ernih
-
Diuangkan /engan hai>hai
-
Disaring krisal pa/a /asar 4rlenme'er melalui keras saring
-
Di:ilas erlenme'er /engan air suling =ika masih a/a Krisal 'ang
eringgal
-
Di0u0i /engan 1" ml air es
-
Dikeringkan pa/a suhu ("
o
< selama %" meni
-
Diim:ang unuk memperoleh ren/emen
-
> /iam:il /engan u=ung spael ke0il
> /ilarukan /alam # ml 0ampuran mehanol>air sama :an'ak
-
Diam:il /an /imasukkan ke /alam a:ung reaksi
-
Diam:ah 1" ml 9<l #N
-
Diaruh 0orong ke0il :erisi kapas /iaas a:ung
-
Dilakukan re7luks pa/a penangas air men/i/ih selama 1 =am
-
Diam:ah ( ml a-ua/es 'ang panas =ika 0airan /alam a:ung
erlalu :an'ak 'ang menguap
-
Diuangkan 0airan hasil eer /an /iko0ok hai>hai
-
Dipisahkan ke/ua lapisan 'ang er:enuk
Laruan =ernih
Krisal
Keras saring A en/apan
Pa/aan pa/a keras
saring
.ari 1
.isa pa/aan
Lapisan air
asam
-
Diko0ok kem:ali /engan 1" ml /ieil eer 'ang :aru /alam
0orong
-
Dipisahkan /an 0ampur lapisan eer /engan 'ang perama
-
Disaring melalui keras saring 'ang :erisi 1 gram narium sul7a
anhi/ra ke /alam 0awan porselin
-
Diuapkan eern'a anpa pemanasan
-
Dilarukan resi/u 'ang /iperoleh /alam # ml mehanol
-
Diuapkan pa/a 0awan porselin /i aas penangas air /engan
hem:usan angina sehingga 0airan inggal kira>kira 1 ml
-
-
Dilakukan analisis kualiai7 /engan kromaogra7i lapis ipis pa/a
prakikum :erikun'a.
-
Per!"##$ IV
-
Disiapkan 7ase /iam ! selulosa$; 7ase gerak ! n>:uanol : asam
asea : air !% :1:1$ +/+
-
Disiapkan 0uplikan 'aiu sari I : II : III /an pem:an/ing laruan
ruin /alam mehanol (" B masing>masing ( oolan.
-
Digunakan sinar 3V %?? se:agai pen/eeksi; uap ammonia
/i:awah sinar ampak /an 3V
%??
-
Dipanaskan pereaksi sio:ora suhu 11"< selama (meni
-
Diamai /i:awah sinar 3V
%??
-
Dian/ai :er0ak 7la+onoi/ 'ang erliha seiap kali /eeksi /engan
se:uah iik /ise:elah kanan aau kiri
-
Di0aa nilai 27+/an warna 'ang er:enuk
.ari II
.ari eer
Lapisan air asam hasil
hi/rolisis
.ari III
.ari I; II; /an III
9asil
4luen
-
Di:an/ingkan /engan /aa 'ang a/a /alam pusaka
4. 9A.IL P4NGA1A5AN DAN P429I53NGAN
Daa Pengamaan Per0o:aan %
No Perlakuan 9asil
1 .e:an'ak )" gram ser:uk maniho
uilissima 7olium /iim:ang
8erwarna 0okela
# Dimasukkan ke/alam pan0i in7usa aas
/an /iam:ah air se:an'ak #(" mL
Laruan
% Diunggu sampai men/i/ih pan0i in7usa
:agian :awah /an suhu pan0i :agian aas
,"C<
Laruan men/i/ih
) Disaring/engan 0orong :u0hner Di/apa 7ilra
( Disimpan /alam lemar es selama 1
minggu
A/a krisal /alam
laruan
? Disaring laruan agar /i/apa krisal Krisal pa/a keras
saring
* Keras saring /an krisal /ikeringkan Krisal pa/a keras
saring
D Diim:ang
, Diam:il se/iki pa/aan /an /ilarukan
/engan # ml meanol /an air
.ari 1
1" .isa pa/aan /ilarukan /engan 1" ml
9<L # N
8erwarna agak kuning
11 Dire7luks /iaas penangas /engan
menaruh 0orong ke0il 'ang /i:eri kapas
1enguap
1# Diam:ahkan eer /an /iko0ok hingga
laruan erpisah
A/a # lapisan
Aas E eer
Nilai 27 /an warna
7luorosens
9asil
8awah E air
1) Laruan air /iko0ok kem:ali /engan
laruan eer 'ang :aru
Lap aas E eer
Lap :awah E air
1( Laruan eer perama /an ke/ua /i0ampur
1? .ari eer /isaring /engan keras saring
'ang :erisi narium sul7a anhi/ra /an
/iuapkan anpa pemanasan pa/a 0awan
porselen
Di/apa sari # !sari
meanol$
1* Lapisan air /iuapkan /engan pemanasan
/alam 0awan porselen
<airan F 1ml !sari %$
Daa Pengamaan Per0o:aan )
No Perlakuan 9asil
1 Disiapkan :ahan 'ang akan /igunakan
!selulosa E 7ase /iam; n>:uanol:asam
asea:air E 7ase gerak; /an 0uplikan
masing>masing sari$
# Disiapkan pla KL5
- Dipoong sesuai ukuran D 0m
- Di:ua garis sar /an garis 7ron Garis sar E ";( 0m
/ari :awah
Garis 7ron E 1;( /ari
aas
- Dian/ai unuk penoolan sampel Di:eri =arak 1 0m
masing>masing sampel
% Deeksi KL5
- Pla /i leakkan /i:awah sinar 3V
#()
- KL5 /iuapi amonia /an /i /eeksi
/i:awah 3V #()
- Disempro /engan pereaksi
siro:ora /an /ipanaskan pa/a
suhu 11"C< selama ( meni
) Di:an/ingkan hasil 27 /ari sari 1; #; %
/engan sarn/ar 'ang a/a
Perhiungan
1. 9asil /ari sinar 3V #() se:elum /iuapi amonia; seelah /iuapi amonia;
/an seelah /isempro pereaksi siro:ora
.ari I
6arak sari I E );( 0m
6arak ruin san/ar E );) 0m
27 sari I E E ";D1D
27 ruin san/ar E E ";D
.ari II
6arak sari II E (;% 0m
6arak kuersein san/ E (;1 0m
27 sari II E E ";,?
27 kuersein san/ E E ";,%
.ari III
6arak sari III E %;# 0m
27 sari III E E ";(D
#. 9asil sinar 3V %?? se:elum /iuapi amonia; seelah /iuapi amonia; /an
seelah /isempro pereaksi siro:ora
.ari I
6arak sari I E );( 0m
6arak ruin san/ar E );) 0m
27 sari I E E ";D1D
27 ruin san/ar E E ";D
.ari II
6arak sari II E (;% 0m
6arak kuersein san/ E (;1 0m
27 sari II E E ";,?
27 kuersein san/ E E ";,%
.ari III
6arak sari III E "
27 sari III E "
F. P418A9A.AN
Per0o:aan pa/a prakikum ini 'aiu mengisolasi glikosi/a 7la+onoi/
/ari Manihot utilissima 7olium /an kemu/ian /ilakukan i/eni7ikasi sen'awa
7la+onoi/ /engan meo/e kromaogra7i lapis ipis. 8eriku monogra7i masing>
masing :ahan 'ang /igunakan:
a. Manihot utilissima
Klasi7ikasi Ilmiah
King/om : Planae !um:uhan$
Di+isio : 1agnolioph'a
Kelas : 1agnoliopsi/a
Or/o : 4uphor:iales
Familia : 4uphor:ia0eae
Genus : 1aniho
.pesies : Manihot esculenta <ran@
5anaman ini le:ih /ikenal /engan nama Manihot utilissima <ran@.
5anaman 'ang i/ak :er0a:ang aau :er0a:ang se/iki /engan inggi #>*
m.8aang /engan an/a :erkas /aun 'ang :eron=olan. 3m:i akar :esar;
meman=ang; /engan kuli :erwarna 0okla suram. 5angkai /aun ?>%( 0m;
helaian /aun sampai /eka pangkal :er:agi men=ari %>, !/aun 'ang
eringgi kerapkali :erepi raa$. Daun penumpu ke0il; ronok. :unga
:eina; le:ih aas /engan :unga =anan.
:. 4er !<
)
9
1"
<$
Pemerian: 0airan ransparan i/ak :erwarna; :au khas; rasa manis /an
mem:akar; sangan mu/ah menguap; 0ampuran uapann'a /engan oksigen;
u/ara aau nirogen oksigen; pa/a ka/ar erenu /apa mele/ak.
Kelaruan : laru /alam 1" :agian air; /apa :er0ampur /engan eanol ,( B
Pen'impanan: /alam wa/ah eruup rapa !Depkes 2I; 1,*,$.
0. Air suling
Nama resmi : A-ua Desillaa
Nama lain : Air suling
Pemerian : <airan =ernihG i/ak :erwarnaG i/ak :er:au i/ak
mempun'ai rasa.
81 / 21 : 1D;"# / 9
#
O !Depkes 2I; 1,*,$.
/. Asam asea
Nama resmi : A0i/um Asea
Nama lain : Asam asea;0uka
Pemerian : <airan =ernih i/ak :erwarna; :au menusuk; rasa asam;
a=am
Kelaruan : Dapa 0ampur /engan air; /engan eanol !,(B$P; /an
/engan gliserol P
86 :1;")" g/ml>1;")# g/ml !Depkes 2I; 1,*,$.
e. 1ehanol !<9
%
O9$
Nama 2esmi : 1eil Alkohol
Nama lain : 1eanol; 9i/roksimeana; 1eil alkohol; 1eil hi/ra;
Alkohol ka'u; Kar:inol.
8era 1olekul : %#.") g/mol
Pemerian : Pa/a Hkea/aan amos7erI ia :er:enuk 0airan 'ang ringan;
mu/ah menguap; i/ak :erwarna; mu/ah er:akar; /an
:era0un /engan :au 'ang khas !:er:au le:ih ringan
/aripa/a eanol$.
Kegunaan : se:agai :ahan pen/ingin ani :eku; pelaru; :ahan :akar
/an se:agai :ahan a//ii7 :agi eanol in/usri !Depkes
2I; 1,*,$.
7. 4il asea !<
#
9
)
O
#
$
Nama resmi : A0i/um a0ei0um
8era molekul : ?";"( g/mol
Pemerian : 0airan =ernihG i/ak :erwarna; :au menusuk; rasa
asam; a=am
Kelaruan : /apa 0ampur /engan air; /engan eanol !,(B$;
/an /engan gliserol !Depkes 2I; 1,*,$.
Pen'impanan : /alam wa/ah eruup rapa.
g. 8uanol
Nama 2esmi : 8uanol
Nama Lain : :uil alkohol
8era molekul : )?;"* g/mol
2umus 1olekul : <
)
9
,
O9.
Kegunaan : se:agai pelaru; se:agai peranara /alam sinesis
kimia; /an se:agai :ahan :akar !1arin;1,,%$.
h. Narium sul7a anhi/ra !Na
#
.O
)
$
Narium sul7a a/alah garam narium /ari asam sul7ur. Dalam :enuk an>
hi/ran'a; sen'awa ini :er:enuk pa/aan krisal puih /engan rumus kimia
Na
#
.O
)
; aau le:ih /ikenal /engan mineral enar/i.
Pemerian : pa/aan krisal puih; higroskopis
5iik le:ur : DD)"<
5iik /i/ih : 1)#, "<
Kelaruan : i/ak er0ampur /i eanol; er0ampur /alm gliserol /an
hi/rogen io/i/a !Anonim; #"1)$.
i. Amonia
Amonia a/alah sen'awa kimia /engan rumus N 9
%
. 8iasan'a sen'awa ini
/i/apai :erupa gas /engan :au a=am 'ang khas !/ise:u :au amonia$.
Jalaupun amonia memiliki sum:angan pening :agi
ke:era/aan nurisi /i :umi; amonia sen/iri a/alah sen'awa kausik /an
/apa merusak kesehaan.
Pemerian : gas ak :erwarna :er:au a=am
5iik le:ur : >**;*% "<
5iik /i/ih : > %%;%) "< !Anonim; #"1)$.
=. Pereaksi siro:ora
.iro:ora a/alah pereaksi unuk mengi/eni7ikasi se0ara kualiai7 a/an'a
7la+onoi/. 6ika posii7 maka akan :erwarna kuning /i sinar ampak /an
:erpen/ar /i 3V %??. Pa/a pla; i/ak a/a :er0ak 'ang :erwarna kuning;
eapi er/apa :er0ak 'ang :erpen/ar /i 3V %?? seelah /i sempro
siro:ora. 9al ini menun=ukkan :ahwa /imungkinkan a/an'a kan/ungan
7la+onoi/ pa/a 7raksi ini. Fraksi 'ang er/apa pa/a 7raksi ini /i/uga
merupakan 7la+onoi/ /alam :enuk :e:as /an :ukan /alam :enuk
glikosi/an'a karena ersari oleh 7ase gerak !.armoko; #"1"$.
Perlakuan perama pa/a per0o:aan ini 'aiu melakukan proses
maserasi /ari Manihot utilissima 7olium /engan meo/e in7u/asi. In7un/asi
a/alah eksraksi /engan 0ara pere:usan; /imana pelarun'a a/alah air pa/a
emperaur ,?>,DC< selama 1)>#" meni !Voig; 1,,($. In7un/asi merupakan
meo/e pen'arian /negan men'ari simplisia /alam air /engan suhu ,"
"
<
selama 1( meni. 1eo/e ini a/alah umum /ilakukan unuk men'ari
kan/ungan aki7 'ang laru /alam air /ari :ahan>:ahan na:ai. Pen'arian
/engan meo/e ini menghasilkan sari/eksrak 'ang i/ak sa:il /an mu/ah
er0emar oleh kuman /an kapang. Oleh se:a: iu; sari 'ang /iperoleh /engan
0ara ini i/ak :oleh /isimpan le:ih /ari #) =am !Ansel; 1,D,$. 3mumn'a
in7us selalu /i:ua /ari simplisia 'ang mempun'ai =aringan lunak; 'ang
mengan/ung min'ak asiri /an @a>@a 'ang i/ak ahan pemanasan lama
!Depkes 2I; 1,*,$. Keunungan /ari meo/e in7un/asi 'aiu uni ala 'ang
/ipakai se/erhana /an :ia'a operasionaln'a relai7 murah. .e/angkan
kerugian /ari meo/e ini 'aiu @a>@a 'ang erarik kemungkinan se:agian
akan mengen/ap kem:ali apa:ila kelaruann'a su/ah men/ingin /an
hilangn'a @a>@a asiri !Ansel; 1,D,$.
.e:an'ak )" gram ser:uk :ahan /imasukkan /alam pan0i in7usa
!aas$ /an /iam:ahkan #)" ml a-ua/es. Pan0i in7usa :agian :awah /iisi
/engan air :iasa /an /iunggu sampai men/i/ih aau suhu /i pan0i aas
men0apai ,"C< :aru /i:iarkan 1( meni unuk men/apakan in7usa. .eelah
1( meni; 0ampuran hasil in7usa /isaring menggunakan 0orong 8u0hner
sehingga /iperoleh 7ilra 'ang =ernih anpa ser:uk kemu/ian 7ilra erse:u
/ipin/ahkan ke /alam erlenme'er #(" ml 'ang :ersih. Filra /alam
erlenme'er erse:u /isimpan selama 1 minggu /i /alam lemari es sehingga
er:enuk krisal amor7 puih kekuningan. 9asil krisal 'ang /i/apa i/ak
opimal karena pen'impanann'a mele:ihi 1 minggu sehingga krisal 'ang
/iperoleh erkonaminasi =amur.
.e:elum melan=ukan perlakuan; erle:ih /ahulu =amur 'ang :era/a
/alam erlenme'er /ipisahkan. .eelah iu se:agian :esar laruan =ernih
/iuangkan ke empa lain /engan hai>hai agar krisaln'a i/ak iku eruang.
Krisal 'ang er/apa /alam erlenme'er erse:u kemu/ian /isaring melalui
keras saring 'ang elah /iim:ang. 6ika masih er/apa krisal pa/a /asar
erlenme'er. 4rlenme'er /i:ilas /engan air suling /an uangkan kem:ali pa/a
keras saring. Kemu/ian; 0u0i krisal /alam keras saring erse:u /engan air
es se:an'ak 1" ml. 9asil pen'aringan 'ang /iperoleh kemu/ian /ikeringkan
/i /alam o+en pa/a suhu ("C< selama %" meni sampai kering sehingga air
'ang er/apa /alam keras saring i/ak mempengaruhi penim:angan. .eelah
kering; im:ang seras saring 'ang er/apa en/apan krisal sehingga
/iperoleh ran/emenn'a. 2an/emen 'ang /iperoleh /ari pe0o:aan ini 'aiu
";D#B.
9asil pen'aringan 'ang er/apa krisal erse:u kemu/ian /iam:il
se/iki /engan u=ung spael ke0il /an /isimpan /alam 7lakon; se:an'ak # ml
0ampuran meanol>air sama :an'ak /iam:ahkan saa akan /ilakukan analisis
KL5 unuk menghin/ari konaminasi =amur. Krisal 'ang /iam:il /alam
7lakon erse:u merupakan sari 1 /imana /alam krisal erse:u er/apa ruin
se:agai glikosi/a /alam Manihot utilissima 7olium.
.isa pa/aan krisal 'ang ersapa pa/a keras saring kemu/ian /iam:il
semuan'a /an /imasukkan ke /alam a:ung reaksi kemu/ian /iam:ahkan
9<l # N se:an'ak 1" ml. Di mulu a:ung reaksi /iaruh 0orong ke0il :erisi
kapas unuk mengurangi penguapan. Proses /ari penam:ahan asam erse:u
merupakan hi/rolisis asam. 1enuru 1arkham !1,DD$ unuk memuuskan
gula /ari aglikon 7la+onoi/ /engan menggunakan hi/rolisis asam.
Penam:ahan 9<l :eru=uan unuk proses hi/rolisis 'ang /imaksu/kan
agar glikosi/a 7la+onoi/ ruin erhi/rolisis sehingga aglikon 7la+onoi/
erpisah /engan molekul gulan'a. Kuersein ini ermasuk aglikon 7la+onoi/
!@a :ukan gula$ 'ang :er/asarkan srukurn'a /apa /igolongkan men=a/i
7la+onol.
.elan=un'a; /ilakukan re7luks pa/a penangas air men/i/ih selama 1
=am. 6ika 0airan /alam a:ung erlalu :an'ak 'ang menguap; /iam:ahkan (
ml a-ua/es 'ang panas ke /alamn'a. .eelah /ilakukan re7luks; masukkan
0airan asam ke /alam 0orong pisah /an /iam:ahkan eer se:an'ak 1" ml
kemu/ian /iko0ok sam:il sesekali 0orong :agian 0orong pisah /i:uka unuk
mengeluarkan gas. .eelah iu /iamkan sampai erpisah men=a/i /ua 7ase;
7ase aas merupakan eer /an 7ase :awah a/alah air asam. 8era =enis eer
le:ih :esar /ari air sehingga :era/a /i lapisan aas. Lapisan air asam
/ikeluarkan :egiu =uga /engan lapisan eern'a /i empa 'ang erpisah. Fase
air asam erse:u /iko0ok kem:ali /engan 1" ml eer 'ang :aru /alam 0orong
pisah kemu/ian /ipisahkan kem:ali 7ase eer /an air asam seperi perlakuan
perama.
.ari eer 'ang /iperoleh kemu/ian /isaring /alam keras saring 'ang
:erisi 1 gram narium sul7a anhi/ra /an /iempaakan ke /alam 0awan
porselen. Penam:ahan narium sul7a anhi/ra ini unuk menarik molekul air
'ang ersapa /alam sari eer. .eelah /isaring; sari eer /iuapkan anpa
pemanasan sampai eern'a ha:is. Kemu/ian resi/u /alam 0awan porselen
/ilarukan /engan meanol se:an'ak # ml. 2esi/u 'ang /ilarukan /alam
meanol erse:u merupakan sari #; /imana /alam sari # erse:u mengan/ung
kuersein 'ang merupakan aglikon /ari glikosi/a /alam Manihot utilissima
7olium.
Air asam hasil hi/rolisis a/i /iempakan /alam 0awan porselen /i
aas penangas air /engan hem:usan angin sampai 0airan :erkurang kira>kira 1
ml. .isa 0airan erse:u merupakan sari %; /imana /alam sari % erse:u
er/apa glukosa aau ramnosa se:agai glikon /ari glikosi/a /alam Manihot
utilissima 7olium. .eelah /i/apa sari 1; # /an % kemu/ian /ilakukan analisis
kualiai7 /engan kromaogra7i lapis ipis.
Pen'iapan 7ase /iam /an 7ase gerak /ilakukan se:elum melakukan
analisis /engan KL5. Fase /iam 'ang /igunakan :erupa selulosa 'ang su/ah
erse/ia /i la:oraorium /alam :enuk lempeng KL5. Dengan ukuran seperi
pa/a gam:ar :eriku.
";( 0m
D 0m
1;( 0m
.e:elum lempeng KL5 /igunakan; erle:ih /ahulu /ilakukan
pengaki7an /engan 0ara /ilakukan pengeringan /alam o+en /engan suhu
*"C< selama 1" meni. Pengaki7an ini /ilakukan agar lempeng KL5 'ang
/igunakan i/ak :an'ak mengan/ung air 'ang se:elumnn'a /iserap /ari
u/ara.
Fase gerak 'ang /igunakan 'aiu n>:uanol; asam asea; /an air
/engan per:an/ingan ):1:( +/+. Alasan /igunakan 7ase gerak erse:u a/alah
karena 7ase gerak 8AJ !n>8uanol; Asam asea; /an Jaer$ /engan
per:an/ingan ):1:( :isa /igunakan unuk i/eni7ikasi 7la+onoi/ !1arkham;
1,DD$. Pen'iapan 7ase gerak erse:u /ilakukan sau hari se:elum prakikum;
pem:uaann'a /engan men0ampur n>:uanol>asam asea>air /engan
per:an/ingan ):1:( +/+ /alam 0orong pisah kemu/ian /i/iamkan sampai
er=a/i /ua lapisan. Dari ke/ua lapisan 'ang /iperoleh; 'ang /igunakan
se:agai 7ase gerak a/alah lapisan aas. Dikarenakan sehari se:elum prakikum
prakikan i/ak men'iapkna 7ase gerak erse:u; maka 7ase gerak 'ang
/igunakan :er:e/a /engan apa 'ang /iulis /alam /ika prakikum. Pelaru
7ase gerak 'ang /igunakan se:enarn'a sama eapi /engan per:an/ingan 'ang
:er:e/a 'aiu n>:uanol; asam asea; /an air /engan per:an/ingan %:1:% +/+
/engan i/ak /ilakukan pemisahan men=a/i lapisan aas /an :awah eapi
langsung /igunakan /ari 0ampuran keiga pelaru erse:u.
Pen'iapan 0uplikan kemu/ian /ilakukan seelah pen'iapan 7ase /iam
/an 7ase gerak. <uplikan er/iri /ari sari 1; # /an % /engan pem:an/ing
san/ar ruin /an kuersein /alam meanol ("B. <uplikan /ioolkan masing>
masing 1" oolan. 5oolan selan=un'a /ari penoolan 0uplikan harus
menunggu oolan se:elumn'a kering unuk menghin/ari iik awal 0uplikan
'ang erlalu le:ar.
.eelah semua persiapan selesai kemu/ian /ilakukan kromaogra7i
/engan erle:ih /ahulu /ilakukan pen=enuhan 7ase gerak /alam 0ham:er.
Pen=enuhan ini /ilakukan unuk mem:ua 7ase gerak /alam 0ham:er
men=enuhi semua :agian ruang 0ham:er sehingga saa proses kromaogra7i
7ase gerak han'a mengelusi sen'awa /alam KL5; pa/a saa kon/isi erse:u
7ase gerak le:ih e7eki7 /an /apa menghin/ari 7ase gerak men0apai garis
7inish i/ak :ersamaan anar sau 0uplikan /engan 0uplikan lain. .eelah
=enuh kemu/ian /ilakukan proses kromaogra7i. Dalam prose kromaogra7i
perlu /iperhaikan inggin'a 7ase gerak /alam 0ham:er =angan sampai
men0apai garis sra /alam lempeng KL5 'ang er/apa oolan 0uplikan; hal
erse:u /apa men'e:a:kan hasil /ari kromaogra7i men=a/i i/ak :agus.
9asil kromaogra7i kemu/ian /iamai /i :awah sinar 3V
%??
/an 3V
#().
Kemu/ian lempeng KL5 /iuapi amonia; hal erse:u /ilakukan unuk
men/eeksi :er0ak hi/roksi 7enolik. .elan=un'a /iamai kem:ali /i :awah
sinar 3V
%??
/an 3V
#().
.eelah /iuapi amonia; :er0ak pa/a lempeng KL5
kem:ali seperi semula karena hasil /ari penguapan oleh amonia :ersi7a
re+ersi:el. .eelah iu lempeng KL5 /i sempro /engan pereaksi siro:ora;
kemu/ian /ipanaskan /engan o+en pa/a suhu 11"C< selama ( meni se:elum
/iamai /i sinar 3V
%??
/an 3V
#().
Penam:ahan peraksi siro:ora ini unuk
memperlihakan :er0ak glikosi/a saponin. Pa/a /asarn'a; penam:ahan uap
amonia /an pereaksi siro:ora a/alah unuk memper=elas :er0ak. .eelah
/iamai /i :awah sinar 3V
%??
/an 3V
#();
maka nilai 27 /ari masing>masing
0uplikan /apa /ihiung unuk kemu/ian /i:an/ingkan /engan lieraur.
Nilai 27 /igunakan se:agai nilai per:an/ingan relai7 anar sampel.
Nilai 27 =uga men'aakan /era=a reensi suau komponen /alam 7ase /iam
sehingga nilai 27 sering =uga /ise:u 7akor reensi. Fakor reensi !27$ a/alah
=arak 'ang /iempuh oleh komponen /i:agi /engan =arak 'ang /iempuh oleh
eluen. 9arga 27 mengukur ke0epaan :ergerakn'a @ona relai7 erha/ap garis
/epan pengem:ang !Khopkar;1,,"$.
8er/asarkan hasil per0o:aan; /i/apa nilai 27 'ang /iperoleh /engan
melakukan pengukuran hasil /eeksi /i:awah sinar 3V /engan lam/a #()
/an %?? nm. Nilai 27 hasil pengukuran :er0ak 7la+onoi/ keiga sari
/i:an/ingkan /engan sen'awa san/ar. Nilai 27 'ang i/enik unuk suau
sen'awa 'ang /ikeahui /an 'ang i/ak /ikeahui /engan menggunakan
:e:erapa s'sem pelaru :er:e/a mem:erikan :uki 'ang kua :ahwa nilai
unuk ke/ua sen'awa erse:u a/alah i/enik; eruama =ika sen'awa erse:u
/i=alankan se0ara :er/ampingan /i sepan=ang pia lapis ipis !KL5$ 'ang sama
!Da' /an 3n/erwoo/; #""1$. 8er/asarkan pusaka erse:u; /apa
/isimpulkan :ahwa nilai 27 'ang :aik /i/apa =ika nilai iu men/ekai nilai 27
san/ar.
Dalam prakikum ini han'a /ise/ikan laruan san/ar unuk ruin /an
kuersein; se/angkan laruan san/ar glukosa !san/ar sari %$ i/ak
/ise/iakan. 9asil pa/a sari 1 nilai 27 n'a ";D1D; se:agai pem:an/ing /ari
ruin memiliki nilai 27 ";D; hasil ini /apa /ikaakan hampir i/enik /ari
pem:an/ingn'a. .e/angkan pa/a sari # /iperoleh nilai 27 n'a ";,?; se:agai
pem:an/ing /ari kuersin niali 27 san/arn'a ";,%; hasil ini hampir men/ekai
san/ar. .ehingga pa/a sari 1 /an # /imungkinkan merupakan kan/ungan /ari
ruin /an kuersein. Dari hasil 'ang /iperoleh se0ara umum /apa /ikaakan
:ahwa hasil 'ang /i/apa elah sesuai /engan lieraur; :ahwa nilai 27 /ari
ke/ua sari memiliki nilai 'ang i/enik /engan nilai 27 laruan san/ar ruin
/an kuersein; meskipun er/apa selisih nilai eapi i/ak erlalu =auh.
A/apun keunungan /ari meo/e kromaogra7i lapis ipis; anara lain
!Gan/=ar; #""*$:
1. KL5 le:ih murah /an mu/ah /alam pelaksanaan'a /is:an/ing
kromaogra7i kolom
#. Peralaan 'ang /igunakan le:ih se/erhana; /igunakan unuk u=uan
analisis.
%. Dapa /ilakukan /ilakukan elusi se0ara menaik !as0en/ing$; menurun
!/es0en/ing$ aau /engan 0ara elusi /ua /imensi.
). I/eni7ikasi pemisahan komponen /apa /ilakukan /engan pereaksi warna;
7luoresensi aau ra/iasi /engan menggunakan sinar ulra+iole.
8ila KL5 /i:an/ingkan /engan KK; kele:ihan khas KL5 ialah
keser:agunaan; ke0epaan; /an kepekaann'a. Keser:agunaan KL5
/ise:a:kanoleh ken'aaan :ahwa /i samping selulosa; se=umlah pen=erap
'ang :er:e/a>:e/a /apa /isapukan pa/a pla ka0a aau pen'angga lain /an
/igunakan unuk kromaogra7i. .au kekurangan KL5 'ang asli ialah ker=a
pen'apuann'a; pela ka0a /engan pen=erap. Ker=a ini kemu/ian agak
/iringankan /engan a/an'a pen'apu oomais. 1eskipun :egiu; /engan
menggunakan ala iu pun eap /iperlukan in/akan pen0egahan erenu
!9ar:orne; 1,D*$.
.au kekurangan kromaogra7i lapis ipis ialah ker=a pen'apuan pela
ka0a /engan pen=erap. Ker=a ini kemu/ian agak /iringankan /engan a/an'a
pen'apu oomais. 1enggunakan ala iu eap /iperlukan in/akan
pen0egahan erenu. Pela ka0a harus /i:ersihkan hai>hai /engan aseon
unuk menghilangkan lemak. Kele:ihan penggunaan kromaogra7i lapis ipis
/i:an/ingkan /engan kromaogra7i keras ialah karena /apa /ihasilkann'a
pemisahan 'ang le:ih sempurna; kepekaan 'ang le:ih inggi; /an /apa
/ilaksanakan /engan le:ih 0epa. 8an'ak pemisahan 'ang memakan waku
:er=am>=am :ila /iker=akan /engan kromaogra7i keras eapi /apa
/ilaksanakan han'a :e:erapa meni sa=a :ila /iker=akan /engan 5L< !A/nan;
1,,*$.
Ke0epaan gerak sen'awa>sen'awa ke aas !ke0epaan elusi$ pa/a
lempengan erganung pa/a !9a-i-i; #""D$:
- 8agaimana kelaruan sen'awa /alam pelaru ; 9al ini :erganung pa/a
:agaimana :esar araksi anara molekul>molekul sen'awa /engan pelaru.
- 8agaimana sen'awa meleka pa/a 7ase /iam ; misaln'a gel silika. 9al ini
erganung pa/a :agaimana :esar araksi anara sen'awa /engan gel silika.
.e/angkan menuru .asrohami/=o=o !1,D($; 7akor>7akor 'ang
mempengaruhi gerakan no/a /alam kromaogra7i lapisan ipis 'ang =uga
mempengaruhi harga 27 a/alah:
1. .rukur kimia /ari sen'awa 'ang se/ang /ipisahkan.
#. .i7a /ari pen'erap /an /era=a aki7iasn'a.
8iasan'a aki7ias /i0apai /engan pemanasan /alam o+en; hal ini akan
mengeringkan molekul>molekul air 'ang menempai pusa>pusa serapan
/ari pen'erap. Per:e/aan pen'erap akan mem:erikan per:e/aan 'ang
:esar erha/ap harga 27 meskipun menggunakan 7ase :ergerak /an @a
erlaru 'ang sama eapi hasil akan /apa /iulang /engan hasil 'ang sama;
=ika menggunakan pen'erap 'ang sama; ukuran parikel eap /an =ika
pengika !kalau a/a$ /i0ampur hingga homogen.
%. 5e:al /an keraaan /ari lapisan pen'erap.
Perlu /iusahakan e:al lapisan 'ang raa. Kei/akraaan akan
men'e:a:kan aliran pelaru men=a/i ak raa pula /alam /aerah 'ang ke0il
/ari pla.
). Pelaru !/an /era=a kemurniann'a$ 7ase :ergerak.
Kemurnian /ari pelaru 'ang /igunakan se:agai 7ase :ergerak /alam
kromaogra7i lapisan ipis a/alah sanga pening /an :ila 0ampuran pelaru
/igunakan maka per:an/ingan 'ang /ipakai harus :eul>:eul
/iperhaikan.
(. Dera=a ke=enuhan /an uap /alam :e=ana pengem:angan 'ang /igunakan.
?. 5eknik per0o:aan.
*. 6umlah 0uplikan 'ang /igunakan.
Peneesan 0uplikan /alam =umlah 'ang :erle:ihan mem:erikan hasil
pen'e:aran no/a>no/a /engan kemungkinan er:enukn'a ekor /an e7ek
ak keseim:angan lainn'a; hingga akan mengaki:akan kesalahan>
kesalahan pa/a harga>harga 27.
D. .uhu.
,. Keseim:angan.
G. K4.I1P3LAN
1$ Per0o:aan isolasi glikosi/a 7la+onoi/ /ari Manihot utilissima 7olium
menghasilkan sari 1; #; /an % 'ang masing>masing merupakan ruin
!glikon>aglikon$; kuersein !aglikon$; /an glukosa ramnosa !glikon$.
#$ Pemisahan aglikon /ari glikosi/an'a /apa /ilakukan /engan hi/rolisis
asam.
%$ I/eni7ikasi 7la+onoi/ /engan kromaogra7i lapis ipis /iperoleh hasil pa/a
sari 1 nilai 27 n'a ";D1D; se:agai pem:an/ing /ari ruin memiliki nilai 27
";D. .e/angkan pa/a sari # /iperoleh nilai 27 n'a ";,?; se:agai
pem:an/ing /ari kuersin niali 27 san/arn'a ";,%. 9asil erse:u
memper=elas :ahwa sari 1 /an # masing>masing merupakan ruin /an
kuersein karena nilai 27>n'a men/ekai san/ar.