Abstrak:

Mempelajari Sifat biokimia invertase terperangkap dalam gel alginat .Parameter kinetik ditentukan untuk
intervase amobil dan bebas . Nilai Michaelis konstan Km dari invertase amobil (139,19 mM) lebih besar
dibandingkan dengan invertase bebas (93,19 mM), sedangkan, Vmax lebih kecil untuk enzim amobil.
imobilisasi mengesankan meningkatkan stabilitas termal dan penyimpanan invertase. Nilai paruh amobil
dan enzim bebas di 60oC adalah 28 menit dan 8 menit, masing-masing. Dalam 0,1 M dapar asetat (pH
4,5) pada 2 - 4oC, aktivitas invertase amobil ditemukan cukup stabil setelah 40 hari.
PENDAHULUAN
Invertase, juga dikenal sebagai -fructofuranoside fructohydrolase (EC 3.2.1.26) adalah katalis untuk
hidrolisis sukrosa gula invert unggul. Balikkan gula telah digunakan untuk sebagian besar dalam
makanan industry seperti dalam minuman dan
produk permen. Gula invert dapat dihasilkan oleh proses kimia (menggunakan asam sebagai katalis) atau
proses biokimia (menggunakan invertase sebagai katalis). Saat ini, Proses biokimia lebih disukai sebagai
produk yang dihasilkan mengandung produk sampingan kurang berwarna dan garam (Bergamasco et al,
2000.; Akgol et al, 2001.; Bayramolu et al., 2003).
Selain itu, proses ini membutuhkan energi yang lebih sedikit dari proses kimia. Namun, proses enzimatik
lebih mahal dari hidrolisis asam, karena biaya intervase yang relatif tinggi . Untuk mengurangi biaya
produk akhir, penerapan enzim invertase telah dianggap sebagai solusi yang tepat. enzim amobil memiliki
banyak keuntungan karena
(1) itu dapat digunakan kembali berkali-kali dan masih tetap aktif,
(2) imobilisasi melindungi aktivitas enzim dari kondisi yang tidak menguntungkan,
(3) pemisahan dan pemulihan enzim mudah dan nyaman,
(4) dapat digunakan dalam sistem kontinyu untuk produksi invert sirup dari larutan sukrosa,
(5) penerapan enzim amobil menyediakan pengurangan yang signifikan pada biaya operasi
Banyak penelitian yang berfokus pada dukungan untuk imobilisasi invertase dalam berbagai aspek yaitu
polivinilalkohol (Agkol et al., 2001), poliakrilamida (Abdellah et al, 1992;. Mansour dan Dawoud, 2003),
kitosan (Hseih et al., 2000), ayam-telur putih dan diethylaminoethylcellulose (Abdellah et al., 1992).

Dalam penelitian ini, kalsium alginat gel dipilih sebagai pembawa untuk enzim jebakan karena nontoksisitas, tinggi stabilitas mekanik, porositas tinggi untuk substrat dan difusi produk dan di atas semua
sederhana persyaratan prosedural untuk imobilisasi (Bucke, 1987). Beberapa sifat enzim invertase dalam
gel alginat seperti kinetika, stabilitas termal dan penyimpanan yang diselidiki. bahan Invertase Komersial
(b-D-fructofuranoside fructohydrolase, E 3.2.1.26) yang dihasilkan dari tukang roti ragi, Saccharomces
cerevisiae, adalah diperoleh dari Sigma Chemical Company (USA). Alginat dari Sargassum telah
diperoleh dari Pusat Bioteknologi - Nha Trang University of Marine Products. Powder alginat
mengandung 21.88% kelembaban dengan viskositas (1,5% (b / v) larutan alginat): 720 cp. Saccharose
dibeli dari Bienhoa Perusahaan Gula. Isinya 99,8% (db) sukrosa. Ini memiliki 0,05% kelembaban dan
0.03% gula pereduksi. Bahan kimia analitis lainnya diperoleh dari Merck AG (Jerman) dan Shantou
Xilong Pabrik Kimia Guangdong Prosedur invertase Imobilisasi di Alginat gel Larutan natrium alginat
2,5% (b / v) dan solusi invertase 1.33% (b / v) dicampur dalam rasio 1: 1 (v / v) ke homogenisasi. The
Campuran disahkan penurunan bijaksana menjadi 2% (b / v) Solusi CaCl2. Manik-manik yang terbentuk
adalah dipertahankan dalam larutan CaCl2 yang diaduk (menggunakan pengaduk magnetik) setidaknya
selama 2 jam untuk gel Pengerasan. Manik-manik invertase-alginat memiliki 3-4 mm. Akhirnya, manikmanik yang dipisahkan dan dicuci dengan air suling 3 kali. Sebelum menggunakan, manik-manik
direndam dalam 0,1 M buffer asetat pH 4.5 (Le et al., 2003). Tes Kegiatan Bebas dan Imobilisasi
invertase Kegiatan invertase diuji sebagai berikut:
Sepuluh cm3 manik-manik invertase amobil atau 5 ml larutan invertase bebas (1,005% (b / v)) adalah
ditambahkan ke dalam 100 ml larutan sukrosa (200 g / L di dapar asetat, pH 4,5) dan diinkubasi selama
15 menit pada 50oC. Reaksi enzimatik adalah menghidrolisis sukrosa 1,0 mmol per menit di bawah
kondisi assay. Gula pereduksi diproduksi oleh hidrolisis sukrosa diukur dengan metode spektrofotometri
menggunakan 3,5 Asam dinitrosalisilat reagen (Miller, 1959). Penentuan invertase Imobilisasi Yield
Hasil dari imobilisasi invertase Y adalah dihitung dengan persamaan berikut (Abdellah et al., 1992).
Y = [(A - B) / A] x 100, di mana:
A adalah jumlah total enzim (mg) ditambahkan ke dalam larutan imobilisasi.
B adalah jumlah enzim sisa dalam Solusi CaCl2 dan dalam larutan cuci dari manik-manik gel di
imobilisasi prosedur.
Kedua A dan B dievaluasi dari Jumlah gula pereduksi yang dihasilkan enzimatis dalam solusi yang
sesuai.

Penentuan Parameter Kinetik Km dan Vmax nilai-nilai bebas dan amobil invertase ditentukan oleh
Lineweaver-Burk Metode menggunakan berbagai konsentrasi substrat (0,029-0,29 M) dalam buffer asetat
(0,1 M, pH 4,5) pada suhu 55oC. Stabilitas termal dari Panduan dan Imobilisasi invertase. Stabilitas
termal yang bebas dan enzim invertase ditentukan oleh mengukur aktivitas sisa enzim terkena tiga
temperatur yang berbeda (50, 55 dan 60oC) dalam buffer asetat (0,1 M, pH 4,5) untuk 160 menit. Setelah
setiap 20 menit, sampel diambil dan diuji untuk aktivitas enzimatik. Konstanta laju inaktivasi, k, dan
halflife, t1 / 2, dihitung dengan berikut Persamaan (Bailey et al, 1986;. Bayramolu et al,. 2003).
[A] = [Ao] .e-kt
k: rateconstants Inaktivasi (min-1).berhenti dengan mencoret enzim invertase
Ao: Kegiatan awal (U / mg protein enzim).
J: Aktivitas setelah t waktu (U / mg enzim protein).
Penyimpanan Stabilitas Bebas dan Imobilisasi invertase
Penelitian ini dilakukan untuk menentukan stabilitas bebas dan amobil invertase selama penyimpanan
dalam air suling dan penyangga asetat (0,1 M, pH 4,5) pada 2 - 4oC selama 40 hari. Kegiatan residu
tersebut diukur dengan prosedur uji yang dijelaskan sebelumnya. The aktivitas enzim bebas dan amobil
dinyatakan sebagai persentase dari yang sisa kegiatan dibandingkan dengan kegiatan awal. The Tingkat
inaktivasi konstanta k dan paruh t1 / 2 juga dihitung seperti yang dijelaskan sebelumnya. Hasil dari
invertase Imobilisasi Hasil penelitian menunjukkan bahwa hasil invertase imobilisasi dalam gel alginat
adalah 79,34 3.48%. Ini berarti bahwa enzim yang digunakan dalam imobilisasi tidak benar-benar
termasuk dalam matriks gel. Beberapa molekul invertase didistribusikan pada permukaan alginat
menyebar ke dalam larutan CaCl2 selama gel pembentukan manik-manik. Pengamatan ini berada di
Sesuai dengan studi sebelumnya dilaporkan di mana hasil imobilisasi enzim dalam alginat gel bervariasi
50-85%. (Das et al, 1998.; Arruda et al, 1999.; Le et al., 2004). Parameter kinetik Parameter kinetik dari
hidrolitik yang Reaksi sukrosa dengan menggunakan bebas dan enzim invertase ditentukan.
Gambar 1 menyajikan hubungan antara awal Tingkat dan konsentrasi substrat untuk bebas dan enzim
invertase. menggunakan Lineweaver- Metode Burk (Gambar 2), yang jelas Michaelis konstanta Km dan
Vmax dari bebas invertase adalah 93,19 mM dan 35,84 mM min-1, masing-masing. Untuk invertase
amobil dalam gel alginat, konstanta Michaelis jelas, Km dan Vmax, adalah 139,19 mM dan 5,97 mM

Gambar 1: Michaelis Menten-plot yang bebas dan

enzim invertase. (?) Invertase bebas, (?)
enzim invertase dalam gel alginate

Gambar 2: Lineweaver-Burk plot yang bebas dan

enzim invertase. (?) Invertase bebas, (?)
enzim invertase dalam gel alginate
min-1, masing-masing. Oleh karena itu, Km dari enzim invertase adalah sekitar 1,5-kali lipat lebih tinggi
dibandingkan dengan invertase bebas, sementara Vmax adalah 6 kali lipat lebih rendah. Ketika enzim

diamobilisasi dalam matriks gel seperti alginat gel, yang Km enzim amobil meningkat, sementara Vmax
menurun. Ini berarti bahwa afinitas enzim untuk substrat nya dan kecepatan reaksi enzimatik menurun. ini
adalah karena aksesibilitas yang lebih rendah dari substrat ke situs aktif dari amobil invertase dan
transportasi yang lebih rendah dari substrat dan produk ke dalam dan keluar gel manik-manik (Bailey et
al, 1986;. Akgol et al, 2001.; Bayramolu et al., 2003).
Stabilitas termal dari Panduan dan Imobilisasi invertase Enzim bebas dan amobil yang diinkubasi dengan
tidak adanya substrat pada tiga temperatur yang berbeda (50, 55 dan 60oC).
Gambar 3 menunjukkan kurva inaktivasi panas bebas dan enzim invertase. Di 50oC,
aktivitas invertase amobil dan enzim bebas mempertahankan kegiatan mereka sekitar 90 dan 75%,
masing-masing setelah 160 menit untuk Masa inkubasi yang sama. Di 55oC, kegiatan enzim amobil dan
bebas yang dipertahankan pada tingkat 93 dan 45%, masing-masing. Bentuk amobil tidak aktif di tingkat
jauh lebih lambat dibandingkan bentuk asli. pada 60oC, enzim bebas kehilangan aktivitas awal mereka
setelah 120 menit sedangkan enzim amobil mempertahankan aktivitasnya sekitar 25% setelah 160 menit.
Nilai paruh dan inaktivasi termal konstanta laju untuk bebas dan amobil enzim disajikan pada Tabel 1
Semakin tinggi suhu, semakin rendah nilai paruh, t1 / 2, dan semakin tinggi inaktivasi termal menilai
konstan k untuk kedua bergerak dan invertase bebas. Namun, pada saat yang sama suhu, nilai paruh, t1 /
2, dari tetap enzim jauh lebih tinggi dibandingkan dengan bebas enzim. Stabilitas termal dari amobil
invertase meningkat pesat sebagai akibat dari imobilisasi dalam gel alginat. enzim stabilisasi oleh
imobilisasi juga mungkin disebabkan oleh keberadaan lingkungan lokal untuk enzim amobil yang kurang
merusak dari kondisi solusi massal (Bailey et al., 1986). Penyimpanan Stabilitas Bebas dan Imobilisasi
invertase Secara umum, enzim tidak stabil selama penyimpanan dalam larutan dan kegiatan mereka
secara bertahap berkurang atau hilang melalui waktu. Gambar 4 menunjukkan evolusi aktivitas bebas dan
amobil invertases di gel alginate

Gambar 3: Pengaruh suhu pada

stabilitas invertase bebas dan amobil. Invertase amobil, .... invertase Bebas, (?)
50oC, (?) 55oC, (?) 60oC
selama penyimpanan dalam air suling dan asetat penyangga (0,1 M, pH 4,5) pada 2 - 4oC. Setelah 40
hari, dalam buffer asetat, enzim amobil diawetkan aktivitas, sementara, enzim bebas mereka
mempertahankan aktivitas awal pada tingkat 69%. dalam air suling, yang bergerak dan bebas
enzim ditahan 90% dan 59% dari awal mereka kegiatan, masing-masing. Nilai paruh dan konstanta laju
inaktivasi untuk bebas dan enzim amobil ditunjukkan pada Tabel 2. Selama penyimpanan dalam air
suling atau asetat
penyangga, nilai-nilai paruh amobil
invertase yang 5 atau 10 kali lipat lebih tinggi daripada
enzim bebas, masing-masing; dan
konstanta laju inaktivasi juga 5 atau 10 kali lipat
lebih rendah, masing-masing. Di sisi lain,
Hasil pada Tabel 2 juga menunjukkan bahwa penyimpanan
stabilitas enzim invertase bila disimpan

di buffer asetat adalah 3 kali lipat lebih tinggi dibandingkan saat

disimpan dalam air suling. Amaya et al. (2006)
kesimpulan yang sama dilaporkan pada mereka
penyelidikan tentang invertase amobil pada
nilon-6 microbeads.
Secara umum, hasil ini menunjukkan bahwa enzim
imobilisasi dalam gel alginat dapat mengurangi
penonaktifan enzim. Pertama, dengan memegang
enzim dalam posisi yang relatif tetap,

imobilisasi mengurangi interaksi antara

molekul enzim yang memberikan kontribusi untuk
deaktivasi oleh agregasi dan autolisis oleh
enzim proteolitik. Kedua, stabilitas dramatis
tambahan telah dilaporkan berdasarkan
strategi ini di mana gel jebakan itu
diterapkan untuk mencoba untuk membentuk dukungan lokal
mikro melengkapi enzim
permukaan. Demikian pula, penonaktifan disebabkan oleh
disosiasi protein oligomer seperti
invertase dapat dikurangi dengan imobilisasi
yang stabil aktif, struktur multiunit

(Bailey et al, 1986;. Esmon et al, 1987.;

Bayramolu et al., 2003). Singkatnya, alginat
gel menyediakan lingkungan yang stabil dan
mencegah hilangnya aktivitas selama penyimpanan
enzim dalam larutan.
KESIMPULAN
Dalam studi ini, alginat yang digunakan sebagai pendukung
untuk imobilisasi invertase. Umumnya,
imobilisasi invertase dalam gel alginat
menunjukkan peningkatan yang ditandai di Km dan tajam
penurunan Vmax. Namun, stabilitas termal
dari invertase amobil jauh lebih tinggi
dibandingkan dengan enzim bebas. Tingkat
inaktivasi termal dari amobil
enzim menurun karena terperangkap dalam gel
matriks. Selain itu, aktivitas
enzim invertase lebih stabil di
retensi daripada enzim bebas selama
penyimpanan dalam larutan. Meskipun
aktivitas enzim amobil lebih rendah
dibandingkan dengan enzim bebas,
peningkatan stabilitas termal dan penyimpanan

menyoroti nilai gel alginat sebagai pendukung

untuk imobilisasi enzim. Sebuah stabil
sistem bergerak dan kehidupan penyimpanan panjang
nyaman untuk aplikasi yang tidak akan
layak dengan sistem enzim larut. untuk
Misalnya, enzim invertase dapat digunakan
sukses dalam sistem kontinyu untuk
produksi sirup invert dari sukrosa
solusi.

Biomarker untuk diagnosis kanker paru-paru dan kemajuan mereka dalam

proteomik
Lebih dari satu dekade lalu, ketertarikan telah difokuskan pada biomarker Penemuan dan penggunaan
klinis mereka. Bunga ini dipercepat dengan selesainya proyek genom manusia dan kemajuan teknik di
proteomik. Terutama, biomarker kanker Penemuan ini terkemuka di bidang ini karena yang diantisipasi
peran penting dalam diagnosis dini, bimbingan terapi, dan prognosis pemantauan kanker. Di antara
kanker, kanker paru-paru, salah satu tiga kanker utama, adalah salah satu yang menunjukkan kematian
tertinggi karena kegagalan dalam diagnosis dini. banyak potensi Biomarker DNA seperti
hypermethylations dari promotor dan mutasi K-ras, p53, dan biomarker protein; Carcinoembryonic
antigen (CEA), CYFRA21-1, kallikrein plasma B1 (KLKB1), enolase Neuron-spesifik, dll telah
ditemukan sebagai biomarker kanker paru-paru. Meskipun studi ekstensif sejauh ini, sedikit yang ternyata
berguna dalam klinik. Bahkan yang digunakan dalam klinik tidak menunjukkan sensitivitas yang cukup,
spesifisitas dan reproduktifitas untuk penggunaan umum. Ulasan ini menjelaskan apa kanker biomarker
yang untuk, berbagai jenis biomarker kanker paru-paru ditemukan pada saat ini dan diperkirakan muka
masa depan kanker paru-paru Penemuan biomarker dengan teknologi proteomik. [BMB laporan 2008; 41
(9): 615-625] biomarker kanker Biomarker disebut segala cara alat untuk diukur pengukuran homeostasis
biologis, yang membedakan apa yang normal dari apa yang normal (1). Dengan demikian, yang paling
sederhana yang definisi biomarker dalam cara yang lebih berlaku adalah molekul yang menunjukkan
perubahan dalam fisiologi dari normal. A definisi yang lebih praktis biomarker akan memerlukan klinis
utilitas molekul ini (2). Biomarker kanker memberikan bimbingan yang baik pada banyak bidang biologi
kanker. Mereka tidak hanya berguna diagnosis dini kanker tetapi juga memberikan informasi penting
dalam terapi kanker seperti, verifikasi pementasan kanker pementasan, respon terhadap terapi, oleh
karena itu, bimbingan pada terapi, dan titik akhir klinis atau titik akhir pengganti. biomarker kanker
berkontribusi pada kemajuan dalam memahami pementasan kanker. Saat ini, didirikan konvensi
pementasan kanker anatomis yang TNM berbasis (tumor, node, metastasis) sistem, yang dikembangkan di
Prancis pada 1940-an oleh Pierre Denoix. biomarker kanker akan memberikan lebih banyak pengetahuan
di banyak bidang biologi, dimana sistem TNM tidak bisa. Informasi klinis yang diberikan oleh biomarker
kanker signifikan dalam pemilihan pengobatan yang tepat mengarah ke pribadi terapi kanker. Saat ini,
sejumlah terapi kanker dilakukan berdasarkan pada biomarker kanker tertentu. kronis leukemia
myelogenous (CML) pengobatan dengan 'imatinib mesylate' pasien translokasi di BCR-ABL (3),
'rituximab' untuk CD20 positif limfoma (4), dan 'trastuzumab' untuk HER2 / neu pasien kanker payudara
positif adalah contoh biomarker target obat (5), yang karena itu terapi mengarahkan. menunjukkan ini

manfaat diantisipasi biomarker juga sebagai pedoman terapi dan identifikasi target baru pada kanker
pengobatan. Jenis biomarker kanker Ada beberapa jenis yang berbeda dari biomarker kanker berdasarkan
daerah yang berbeda: genetika, epigenetika, proteomik, metabolomik, teknologi pencitraan, dan teknik
fisik umum. Geneticsbased biomarker kanker menggunakan array DNA, polymerase chain reaction
(PCR), reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR), sekuensing DNA, neon di hibridisasi
in situ (FISH) dll untuk mendeteksi perubahan genetik yang terjadi di kanker negara. Di sisi lain,
perkembangan terakhir epigenetik Analisis modifikasi juga menyediakan alat sebagai biomarker kanker.
Modifikasi epigenetik biasanya terjadi pada pulau CpG dari gen peraturan daerah, yang mengakibatkan
down-regulasi dari ekspresi gen. Perubahan ini dapat menghindari sel dari kontrol siklus sel normal
mereka, dan dengan demikian menyebabkan kanker pembentukan sel-sel (6, 7). Teknik proteomik
termasuk massa spektrometri (MS), ELISA, dan imunohistokimia dll, dan menggunakan alat ini untuk
menemukan biomarker kanker baru dan memvalidasi mereka dalam uji klinis. Selain menggunakan
makromolekul seperti protein dan DNA, metabolomik berkaitan dengan studi molekul berat molekul
rendah atau metabolit seperti asam amino, peptida, lipid, dan karbohidrat. metabolome The diyakini
hanya mewakili sekitar 2.500 mole- kecil Cules dan dapat memberikan wawasan untuk biomarker kanker.
Secara teknik pencitraan yang digunakan seperti Positron Emission Tomography (PET), Computed
tomografi (CT) scan dan Magnetic Resonance Imaging (MRI) masih sarana utama diagnosis kankerdan
memiliki kemampuan yang berbeda untuk melokalisasi kanker yang molekul biomarker berbasis tidak
bisa. Penerapan biomarker kanker pada diagnosis kanker dan terapi Tidak seperti keseragaman sistem
TNM lama berdiri, biomarker kanker dianggap lebih cocok untuk heterogen sifat kanker. Dalam kasus
kanker paru-paru, meskipun dikategorikan pada kanker sel kecil paru-paru (SCLC) atau sel non-kecil
kanker paru-paru (NSCLC) oleh karakter histologis, bisa ada kriteria lainnya membagi subtipe kanker
paru-paru misalnya, Kanker paru-paru yang disebabkan mutasi EGFR. Bandara sub-kategori tidak dapat
ditentukan tanpa tes jaringan dibiopsi invasif dan karena itu jenis kanker biomarker tertentu akan berguna
dalam diagnosis kanker lebih akurat. Dengan demikian, kemungkinan akurat diagnosis kanker dengan
biomarker diharapkan untuk membawa beberapa manfaat dalam perawatan pasien kanker berbasis
molekuler. Pertama, dengan potensi untuk memprediksi kemungkinan untuk maju ke statusnya kanker,
biomarker dapat mencegah kanker pada orang yang memiliki resiko tinggi (1). Biomarker kanker
diharapkan tidak hanya memprediksi cenderung Faktor tetapi juga mendiagnosa pasien kanker di awal
mereka panggung. Ini akan sangat meningkatkan peluang untuk mengobati kanker dan mengurangi
mortalitas. Biomarker kedua akan bimbingan untuk terapi kanker. Beberapa biomarker perubahan tingkat
ekspresi menanggapi pengobatan. Perubahan ini akan menunjukkan respon terapi dan akan memberitahu
titik akhir klinis yang penting atau pengganti

endpoint. Dalam aspek lain dari kontribusi biomarker untuk terapi kanker adalah penemuan sasaran obat.
Dengan kata lain, jaringan biomarker berasal dapat digunakan untuk target obat yang potensial serta
pencitraan biomarker diagnostik. Aminopeptidase-p dan Annexin A1 ditemukan pada permukaan endotel
paru tikus Model kanker paru-paru (8) dan kompleks protein coatomer, subunit gamma (COPG),
thymopoietin (TMPO) dan peroxiredoxin 4 (PRDA 4) ditemukan oleh kelompok kami dari sel endotel di
paru-paru manusia jaringan kanker adalah contoh yang baik dari biomarker peran dalam target obat (9).
Akhirnya, dalam kasus kanker berbasis molekuler biomarker, mereka akan membantu untuk menemukan
molekul target obat baru untuk terapi kanker pribadi. Kanker paru-paru dan biomarker yang saat ini
Kanker paru-paru adalah salah satu yang paling prevalently terjadi dan kebanyakan neoplasia mengancam
jiwa di sebagian besar dunia. memiliki kejadian 1,2 juta orang di seluruh dunia, dan dicatat sekitar 25%
dari semua kematian akibat kanker (10, 11). Di Korea, kejadian dan kematian yang terkait dengan kanker
paru-paru diperkirakan terus meningkat. Hal ini terutama disebabkan oleh diagnosis pada stadium akhir.
Beberapa alat diagnostik yang sedang berlangsung di klinik termasuk CT scan, bronkoskopi dan analisis
dahak, tidak ada yang ternyata efektif dalam diagnosis dini kanker paru-paru. Sebagai deteksi awal IA
stadium kanker paru-paru dapat meningkatkan kelangsungan hidup 5 tahun 80%, dibandingkan dengan
15% dari keseluruhan kanker non-kecil paru-paru sel (NSCLC) (12). Oleh karena itu, penemuan kanker
paru-paru baru biomarker tertentu muncul sebagai penting Platform terhadap deteksi dini dan terapi yang
ditargetkan. Biomarker kanker paru berbasis DNA Kanker diperkirakan muncul dengan perubahan
genetik, lingkungan faktor dan gabungan keduanya. Meskipun kurang dari 10% kanker dianggap terkait
dengan pewarisan Mendel sifat genetik (13), genetika berhubungan erat dengan sifat kanker. Setelah
pembangunan di genomik, kemajuan mendasar dalam DNA- atau kanker berbasis RNA biomarker telah
dibawa ke penggunaan klinis. Serupa dengan kanker lainnya, karsinogenesis paru juga multi langkah
proses yang dihasilkan dari akumulasi molekul diubah dihasilkan dari kelainan genetik dan epigenetik
gen yang terlibat dalam siklus sel, penuaan, apoptosis, perbaikan, diferensiasi, dan kontrol migrasi sel
(14-16). Pertumbuhan sel yang tidak terkendali berasal dari salah aktivasi onkogen atau gen penekan
tumor (TSG) inaktivasi, dengan demikian, genetics-biomarker kanker berbasis closelely terkait dengan ini
gen (14, 17). Menimbang bahwa hubungan dekat ada antara perubahan genetik dan transformasi maligna
dari paru-paru kanker, jelas bahwa genomik juga akan memberikan potensi biomarker kanker paru-paru.
Perubahan A. kromosom Inaktivasi gen supresor tumor selama pembelahan sel merupakan salah satu
faktor kunci yang mendorong sel-sel klonal kanker ke pertumbuhan tidak terkendali, migrasi dan
metastasis (18). di banyak kasus inaktivasi ini disebabkan oleh hilangnya DNA atau kromosom penataan
ulang sengaja terjadi selama seluler divisi. Paling terkenal kelainan yang sering terjadi adalah
penghapusan lengan pendek kromosom 3 (3p) di mana beberapa TSG hadir (Tabel 1) (19-22).
Kehilanganbahan kromosom juga telah dilaporkan terdeteksi pada epitel metaplastic jaringan perokok

atau exsmokers. Hilangnya satu alel atau kehilangan herterozygosity (LOH) menunjukkan predisposisi
potensi untuk kanker paru-paru, juga (23, 24). B. Gene hypermethylation Hypermethylation berubah,
metilasi dari sitosin fosfat daerah yang kaya guanosin (pulau CpG) dari berbagai promotor daerah, adalah
perubahan epigenetik perwakilan di sel dan dapat menyebabkan pembungkaman gen. Sebagai mekanisme
alternatif untuk menonaktifkan TSGs, hypermethylation umumnya ditemukan di sebagian besar tumor,
termasuk kanker paru-paru (15, 25-31). Dengan demikian, beberapa Status metilasi pada gen dapat
biomakers di paru-paru kanker khususnya di TSGs. Misalnya, hypermethylation yang dari inaktivasi p16,
p15, glutathione transferase 1, O (6) -methylguanine- Methyltransferse DNA (O6-MGMT), inhibitor
jaringan dari metaloprotease (TIMP) -3 dan kematian terkait protein (DAP) -kinase mengikuti
hypermethylation promotor mereka C. perubahan genetik onkogen Dalam tindakan berlawanan dengan
pembungkaman gen sebelumnya, aktivasi gen yang terlibat faktor-faktor pertumbuhan, reseptor mereka,
utusan mereka atau siklus sel aktivator oleh mutasi juga memainkan kunci peran dalam karsinogenesis
dan cancerization. Mutasi dari ras, a utusan kedua memberikan sinyal proliferasi ke inti, adalah
ditemukan untuk juga terlibat dalam kanker paru-paru. Kebanyakan ras mutasi ditemukan pada pasien
kanker paru-paru muncul di kodon 12 K-ras dan diketahui terkait dengan kondisi pra-kanker dari kanker
paru-paru (32, 33). gen p53-retinoblastoma (Rb) jalur dapat mengakibatkan stres genotoksik setelah
diaktifkan. p53 mutasi kehilangan kontrol fosforilasi Rb dan penangkapan G1 menuju Pertumbuhan yang
tidak terkendali dari sel-sel tumor (34-36). Dengan demikian, mutasi atau perubahan dari protoonkogen,
yang menyebabkan hiperaktivitas dari siklus sel, dapat biomarker yang baik dalam kanker paru-paru
(Tabel 1). biomarker protein Meskipun kemajuan signifikan dalam genomics- dan geneticsbased
penemuan biomarker, masih belum ada kanker baru yang spesifik biomarker dalam penggunaan klinis.
Biomarker berbasis DNA, dijelaskan sebelumnya, diketahui memiliki potensi sebagai biomarker kanker
paru-paru tapi tidak ada biomarker memiliki kepekaan yang memadai, spesifisitas dan reproduktifitas. Hal
ini disebabkan fakta bahwa tingkat mRNA yang tidak selalu terkait langsung dengan tingkat protein,
molekul yang benar-benar melakukan fungsi biologis (41). Saat ini, manusia genom diketahui
mengandung 20.488 gen (42). Protein, bagaimanapun, memberikan lebih banyak varietas karena alternatif
varian sambatan, perpecahan protease, dan modifikasi translasi pasca seperti glikosilasi, fosforilasi,
ubikuitinasi, metilasi, asetilasi dan sebagainya. Ini berarti biomarker protein dapat lebih spesifik untuk
jenis kanker dan status. Biomarker kanker paru-paru Protein dapat diklasifikasikan oleh sumber protein ke
dalam tiga kategori: biomarker serum, biomarker jaringan, dan dahak biomarker (Gbr. 1) (43). Dalam
sputum, kanker sel terpisah dari situs kanker adalah sumber protein utama. dalam dibiopsi jaringan paruparu, sel-sel kanker tidak hanya tetapi juga molekul lain yang terlibat membela diri dari tubuh manusia
seperti, sel-sel kekebalan tubuh, sitokin dan turunannya dari respon imun atau inflamasi

dapat ditemukan. Dalam darah, bagaimanapun, biomarker lebih potensial ada

dan ini termasuk biomarker ditemukan dalam jaringan kanker dibiopsi
dan banyak fragmen beredar protein yang dihasilkan dalam sakit
mikro jaringan atau dengan mengedarkan protein dan
Sel-sel yang berasal dari jaringan yang sakit. Karena tujuan akhir
dari biomarker spesifik, dini dan diagnosis non-invasif dan
pemantauan pasca-terapi kanker, darah telah berpikir sebagai
bahan biologis yang sesuai. Dengan demikian, banyak penemuan biomarker
dilakukan dengan strategi berbasis darah (44, 45) dan
sebagian besar biomarker kanker paru-paru yang tercantum di bawah dan sudah dipelajari
adalah biomarker sebagian besar serum.
A. Lung protein kanker biomarker: saat ini tersedia
Beberapa biomarker kanker paru-paru secara klinis tersedia meskipun
penggunaan yang tidak dianjurkan dalam diagnosis klinis (Tabel
2). Sebuah protein oncofetal, antigen Carcinoembryonic (CEA) konsentrasi
meningkat pada pasien kanker paru-paru terutama di adenocarcinoma
dan kanker paru-paru sel besar (LCLC) (46-48). CEA
sendiri memiliki batas untuk diagnosis dan sebaiknya digunakan dalam kombinasi
dengan CYFRA. Sebagai indikator pemantauan respon terapi,
CEA digunakan untuk NSCLC stadium lanjut dan adenokarsinoma (49, 50).
Namun, CEA dan CYFRA telah juga ditemukan terkait
dengan jenis kanker lainnya seperti kanker kolorektal (51, 52).

Dengan demikian mereka tidak dianggap biomarker kanker tertentu paru-paru,

tapi biomarker kanker umum lainnya.
Protein CYFRA 21-1 adalah indikator tingkat peningkatan cytokeratin
19 fragements yang menyiratkan adanya kanker paru-paru
(46, 47, 53, 54) dan memiliki respon pengobatan pemantauan potensi
pasien NSCLC stadium lanjut. Tidak seperti CYFRA21-1, jaringan
polipeptida antigen (TPA) mengukur cytokeratin 8, 18 dan 19 mendeteksi NSCLC (55). Progastrinreleasing peptide (ProGRP),
cukup stabil protein, diproduksi oleh jaringan nueroendocrine
dari saluran pencernaan dan pernapasan dan juga tersedia
paru biomarker kanker untuk SCLC (47, 54, 56). Neuron-spesifik
enolase (NSE) adalah enzim glikolitik diproduksi di pusat
dan neuron perifer (57). Namun, NSE juga meningkat pada
SCLC dan tingkat tinggi yang menunjukkan potensi besar untuk menjadi monitoring
alat untuk pasca-terapi. Sekali lagi, ini biomarker protein
biasanya kurang spesifik kanker paru mereka dalam hal penggunaan mereka
sebagai biomarker.

Gambar. 1 alur kerja Skema kanker paru-paru

penemuan biomarker. biomaterial
dari tiga untuk penemuan biomarker protein,
paru-paru cairan jaringan, dahak, dan tubuh,
biasanya digunakan. Dalam sputum, kanker
sel terpisah dari situs kanker yang seharusnya
untuk dideteksi. Dalam paru-paru dibiopsi
jaringan, tidak hanya sel-sel kanker tetapi juga
molekul lain yang terlibat dalam pertahanan diri
mekanisme tubuh manusia seperti, kekebalan
sel, sitokin dan turunannya
dari respon imun atau peradangan
dapat ditemukan. Dalam cairan tubuh, meskipun
cairan pleura, ascite, urine dll dapat
digunakan, darah yang paling umum digunakan dalam
Studi biomarker untuk keuntungan dari
Akses mudah dan kimia darah rutin
pengukuran pada pasien. Dalam darah,
Namun, biomarker lebih potensial ada
dan ini termasuk banyak biomarker
ditemukan dalam jaringan kanker dibiopsi dan
banyak fragmen protein yang dihasilkan beredar
dalam lingkungan mikro jaringan yang sakit
atau dengan mengedarkan protein yang berasal
dari jaringan yang sakit. setelah

persiapan matang setiap protein dapat

dianalisis dengan prosedur yang sama dengan
identifikasi, verifikasi, dan validasi.
Untuk identifikasi protein, disiapkan sampel
dianalisis dengan spektrometri massa.
LC-ESI-MS / MS dan MALDI-TOF / MS adalah
paling sering digunakan platform. potensi
biomarker, tinggi atau menurun
tingkat ekspresi mereka, sudah dikonfirmasi oleh
Western blot, ELISA atau dengan perkembangan terbaru
pemantauan reaksi berganda.
Reseptor faktor pertumbuhan epidermal (EGFR) mutasi adalah novel
biomarker untuk diagnosis EGFR mutasi induksi NSCLC
yaitu, biomarker prediktif yang kuat untuk protein EGFR bertarget
tirosin kinase inhibitor (58). Sebagai konsekuensi dari biomarker ini
penemuan, molekul yang menargetkan jalur ini (misalnya, erlotinib,
gefitinib, cetuximab, panitumumab) saat ini digunakan
untuk tujuan tertentu terapi kanker (59).
B. Lung protein kanker biomarker: potensi
Ada juga banyak molekul potensial biomarker kanker paru-paru,
meskipun belum tersedia dalam penggunaan klinis seperti yang tercantum di atas
(Tabel 3). Potensi serum amyloid A (95), haptoglobin-alpha2
(96), dan fragmen dari apolipoprotein A-1 (97) untuk biomarker kanker paru-paru disebutkan dalam
beberapa penelitian dan membutuhkan lebih banyak
validasi klinis akan tersedia di klinik-klinik. Dalam proses serum
analisis glikoprotein pada pasien kanker paru-paru, kelompok kami memiliki

diidentifikasi kallikrein plasma B1 (KLKB1) fragmen berpotensi

biomarker berguna dalam diagnosis adenokarsinoma paru (98).
KLKB1 memiliki homologi protein dari serin protease-tripsin
keluarga dan berhubungan dengan bergantung permukaan-procoagulation, fibrinolisis,
generasi kinin, dan peradangan. Hal ini juga homologi
untuk KLK3, yang produk protein yang dikenal sebagai prostat
specific antigen (PSA). Sekitar 18 kDa fragmen KLKB1, mungkin
mengandung H4 domain itu, menunjukkan de terutama tinggi

Gambar. 2 Sebuah diagram yang menunjukkan generasi kallikrein plasma (KLKB1)fragmen. Sebuah
KLKB1 memiliki homologi dengan protein serin protease-tripsin keluarga dan oleh aksi Faktor XIIa, KLKB1
dipecah menjadi dua rantai utama: rantai berat yang mengandung empat domain dengan prokoagulan
aktivitas dan rantai ringan, domain katalitik aktif, dengan tripsin seperti aktivitas. Sebuah fragmen
termasuk domain H4 dari KLKB1 diproduksi di sera pasien kanker paru-paru, yang dapat menjadi
biomarker potensial, sedangkan itu tidak atau minimal diproduksi di populasi normal. proteksi dalam
adenocarcinoma paru-paru (Gbr. 2). Temuan KLKB1 fragmen mendukung ide-ide baru-baru ini
peptidomes serum biomarker sebagai besar diagnostik potensial dalam diagnosis kanker (99), dan ini
berat molekul protein fragmen rendah juga menyiratkan bahwa bahwa akan ada biomarker kanker

paru-paru jauh lebih kuat berasal dari kanker jenis tertentu kerusakan enzimatik (100). Proteomik dan
biomarker kanker paru-paru di muka Teknologi proteomik saat ini Setelah selesainya proyek genom
manusia, proteomik telah muncul sebagai daerah baru studi. proteomik berarti karakterisasi skala besar
protein termasuk lebih rumit fitur; isoform, modifikasi, interaksi, fungsional struktur, dll (102). Kemajuan
dramatis teknologi proteomik seperti, pemisahan protein, kuantifikasi, dan identifikasi memungkinkan
untuk mencari protein yang lebih intensif dan untuk memahami fungsi mereka lebih dalam (103, 104).
Oleh karena itu gambaran sistemik seluruh protein diekspresikan menjadi mungkin dan ini terkait
dengan peningkatan terapi kanker di diagnosis, pengobatan dan pemantauan prognosis. Proteomika
telah mendekati dalam bidang biomarker kanker dalam dua aspek; satu adalah profil seluruh ekspresi
protein dan lain adalah identifikasi protein individu tertentu yang ampuh sebagai biomarker. Mantan
memungkinkan gambaran sistemik neoplasia dan akhirnya peningkatan dalam diagnosis kanker dan
Terapi dan yang terakhir membawa penemuan spesifik kanker baru biomarker dan diagnosis dini (57,
105). proteomik mempekerjakan spektrometri massa, microarray protein, dan elektroforesis sebagai
alat analisis untuk mengidentifikasi protein (106). microarray menggunakan beberapa antibody
menangkap adalah metode yang efisien untuk mendeteksi Kehadiran banyak protein cepat, dan
elektroforesis adalah sangat berguna dalam memisahkan protein dengan berat molekul dan / atau pKa.
Teknik-teknik utama yang fundamental didukung penemuan biomarker kanker adalah spektrometri
massa yang dapat menentukan massa yang tepat dan bertanggung jawab atas protein, sehingga
identitas protein prekursor yang sebenarnya. Dalam arti keterbatasan teknologi proteomik saat ini,
spektrometri berbasis massa terutama, secara umum diterima bahwa Analisis subproteome penting
untuk mencari proteomes lebih dalam dan protein berlimpah rendah lebih spesifik. Hal ini terutama
karena rentang dinamis yang tinggi, lebih dari 1.011 pesanan besarnya, protein hadir dalam serum;
protein tertinggi albumin sekitar 40 mg / ml untuk Interleukin-6, salah satu protein terendah, sekitar 10
pg / ml (107). Dengan demikian, sebelum mencari protein biomarker dalam cairan tubuh, proteomes
dalam cairan tubuh perlu dipisahkan dengan karakteristiknya; misalnya dengan glycoproteome atau
pengkayaan phosphoproteome, biaya ion, hidrofobik atau hidrofilisitas oleh SCX / SAX, fase terbalik atau
normal kromatografi fase, atau dengan berat molekul mereka dll Analisis Glycoproteome dalam cairan
tubuh memiliki keuntungan besar di bidang penemuan biomarker kanker. Sekitar setengah dari protein
serum yang diketahui glikosilasi dan glikosilasi yang status pada glikoprotein, derajat dan bentuk
mereka, adalah juga diubah oleh kondisi penyakit tertentu termasuk kanker. Juga, berbagai biomarker
dikenal ditemukan untuk menjadi glikoprotein; seperti biomarker kanker payudara CA-125 dan ErbB.
Teknologi proteomik depan dan biomarker di masa depanSejak penemuan biomarker kanker telah

dimulai secara ekstensif dengan kemajuan teknologi proteomik, banyak molekul protein telah
diindikasikan sebagai biomarker kanker potensial. ada beberapa rintangan yang telah bertindak sebagai
penyebab utama kanker biomarker ketidakberhasilan. Pertama, kurangnya reagen analitik, terutama
antibodi untuk validasi data massal spektrometri atau untuk uji klinis memiliki hambatan besar.
Kurangnya komersial antibodi spesifik yang tersedia membuat lebih lambat untuk memvalidasi calon
biomarker kanker melalui analisis imunoblot atau tes immunaborbent enzyme-linked (ELISA). kedua,
sebagian besar penelitian yang diterbitkan sebelumnya memiliki keterbatasan teknis; sensitivitas cukup,
ketidakmampuan untuk mendeteksi rendah berlimpah protein dll Teknik proteomik secara bertahap
meningkatkan dalam sampel langkah persiapan dan juga langkah-langkah analisis. Peningkatan dalam
sampel alat-alat persiapan akan mengurangi keterbatasan intrinsik dalam biologi sampel, seperti variasi
antara individu, perbedaan di genetik make-up, dan perubahan nonspesifik (108) dan kemajuan dalam
teknik analitik akan meningkatkan sensitivitas untuk mendeteksi kelimpahan rendah atau molekul
protein dengan berat molekul rendah. Baru-baru ini, luar biasa orthogonal uji klinis MS berbasis baru
(multiple-reaksi-monitoring, MRM-MS (109, 110) diharapkan untuk mempercepat penemuan biomarker
kanker, verifikasi dari biomarker, dan juga terjemahan klinis mereka. Modifikasi alat ini menggunakan
capture antibodi isotop-kodeteknologi (111) atau dengan fraksinasi multi-dimensi (112), sensitivitas
akan meningkat ke tingkat ml / ng yang dapat memungkinkan untuk mendiagnosis sampel biologis
langsung menargetkan spesifik biomarker kanker. kesimpulan Telah ada kemajuan besar dalam
penemuan dan pengembangan biomarker kanker paru-paru di perusahaan dengan pengembangan
genomik dan teknologi proteomik. Pada kanker terapi, terutama dalam kasus kanker paru-paru,
diagnosis dini pada tahap sangat penting untuk pengobatan yang efektif. Meskipun, saat ini biomarker
kanker paru-paru yang tersedia atau berpotensi tidak sensitif atau cukup spesifik untuk digunakan
secara klinis dalam diagnosis, stratifikasi, prognosis, atau obat tanggapan, kita dapat membayangkan
bahwa ini akan sangat meningkat di masa depan. Untuk pengembangan biomarker kanker paru-paru
yang berguna, kita berpikir tiga aspek perlu dipertimbangkan. Pertama, kita perlu menganalisis saat ini
biomarker tersedia atau potensial dalam set besar sampel klinis termasuk jenis kanker lain dan kondisi
penyakit lain, terutama penyakit inflamasi. Ini akan mengungkapkan kegunaan biomarker ini. Kedua,
dengan perbaikan lebih lanjut teknologi, kita perlu mencari lebih spesifik dan rendah biomarker kanker
paru-paru berlimpah terfokus pada subtipe tertentu kanker paru-paru. Ketiga, salah satu biomarker
tertentu mungkin tidak cukup untuk memprediksi atau memonitor kanker paru-paru, dengan demikian,
beberapa biomarker yang baik harus digabungkan, dengan informasi kuantitatif, harus benar-benar
berguna dalam tujuan klinis.