Bioteknologi

By : Laida Neti Mulyani, M.Si

Kehadiran
Kuis
Tugas
UAS

10 %
20 %
30 %
40%

Kontrak kuliah

1. Pendahuluan
2. Materi Genetik

Kromosom
DNA
RNA
Gen

4. Rekayasa Genetika
5. Genetika Mikroba
6. Mutagenesis dan produk
mutagenesis
7. DNA Rekombinan
Produk dan teknik

3. Teknik Dasar Biotek

Isolasi DNA
PCR
Elisa

Silabus periode UTS

1.
2.
3.
4.
5.
6.

Fusi protoplas
Bioteknologi Diagnostik
Protein Teuraptik
Terapi Gen dan Antisense
Antibodi monoklonal dan Vaksin Rekombinan
Bioteknologi Lingkungan
Biodegradasi
Bioremidiasi

7. Dampak Bioteknologi (HKI)

Silabus periode UAS

 Mengubah susunan gen untuk mengubah sifat

mikroorganisme sehingga memiliki kemampuan yang
diinginkan

Rekayasa genetika

Kultur jaringan: adalah isolasi

bagia tanaman seperti jaringan,
organ, maupun embrio lalu
dikultur pada medium buatan yang
steril sehingga bagian-bagian
tanaman
tersebut
mampu
beregenarasi dan berdiferensiasi
menjadi tanaman lengkap

Jaringan : kalus, sel, protoplas

Organ : Pucuk, bunga, daun dan
akar

Fusi Protoplasma
(Pada Kultur jaringann)

 Totipotensi
Kemampuan sel/ jaringan untuk berdiferensiasi
membentuk individu baru

Kalus
Massa Sel yang berdiferensiasi dan tumbuh dari
proliferasi sel-sel yang tidak terorganisasi akibat
perlukaan dan pengaturan zat tumbuh.

Organogenesis
Proses perkembangan pucuk,daun atau akar adventif dari
dalam masa sel kalus

Terminologi

Karakteristik sel tumbuhan dinding Sel

Melindungi membran plasma serta bagian dalam sel
Pendukung mekanik jaringan tanaman
Kompleks dan tinggi diferensiasi

Protoplas sel hidup yang dihilangkan dinding selnya

pembatas dengan lingkungan luar hanya membran
mengalami perubahan tekanan osmotik

Isolasi Protoplas

 Eksplan yang digunakan? jaringan masih muda

dinding selbaru sampai penebalan primer
Bagaimana isolasinya? mekanis dan enzimatis
Enzim yang digunakan? selulase, pektinase,
heiselulase atau kombinasi keduanya
Syaratnya protoplas harus mampu bereproduksi
membentuk dinding selnya kembali eksplan yang
bagus
Note : penggunaan enzim secara kombinasi pada isolasi,
apakah setiap enzimpunya fungsi berbeda?

Isolasi Protoplas

 Organ atau jaringan apa aja? jaringan parenkim

primer, daun, organ lain atau kalus hasil budidaya
Yang paling baik digunakan? mesofil daun kenapa?
sel mesofil daun mengandung plastida (kloropast)
protoplast mudah diidentifikasi, letak sel renggang,
penetrasi enzim mudah
Beda protoplas dari daun dan dari kalus??
Cara isolasinya ?
Inkubasi eksplan dengan enzim purifikasi dr enzim uji
viabilitas budi daya

Isolasi Protoplas

 Protoplast dalam bioteknologi??

Fusi protoplast sel somatik dari jenis tanaman berbeda
Introduksi DNA asing, partikel bakteri tau virus
Variasi tanaman variasi somaklonal

Protoplast padi setelah pemurnian

Isolasi Protoplast

 Proses peleburan 2 protoplasma atau lebih dengan yang

diikuti dengan penggabungan sitoplasma dan diharapkan
terjadi penggabungan dua inti heterokaryon

Fusi protoplas

Fusi
protoplast

Fusi
protoplast

 Fusi Spontan
Fusi antara protoplast dari jaringan yang sama ,
Mekanisme?? Degradasi dinding sel permukaan
membran plasmodesmata bermuatan negatif
menarik
plasmodesmata lain yang ada di dekatnya kontak
membran pembentukan jebatan penghubung terjadi
penggabungnan sitoplasma

Fusi Induksi
Fusi disebabkan/diinduksi oleh fusogen kimia atau dengan
menggunakan medan listrik

Fusi protoplast

 Fusogen kimia : NaNO3, Ca2+ pada pH tinggi, PEG

Menurunkan viabilitas protoplast
Sulit diamati fusi berlangsung saat pencucan fusogen
imia dengan sentrifugasi

Induksi Fusogen Kimia

 Tahapan Fusi protoplast

A) two separate protoplasts, (B) agglutination of two
protoplasts, (C and D) Membrane fusion at localized site,
and (E and F) development of spherical heterokaryon.

Fusi induksi

 Berlangsung dua tahap

Induksi arus listrik dua arah (AC) (dielektroforesis)
Protoplas terkumpul pada permukaan elektroda membentuk
ranatai protoplast kontak erat pada membran plasma yang
berdekatan

Induksi arus listrik searah fusi protoplast pada dua

elektroda
Pulsa DC konduktivitas sel tinggi arus melewati sel >>
medium membran bocor (elctrical breakdown)pada kontak
membran protoplast fusi >> pemisahan
Membran bocordifusi molekul lipida orientasi menjadi acak
lokal pd bilayer terbentuk pori proses pemulihan struktur
membran saluran antara 2 membran (untuk aliran plasma)
sebagian dari isi sel bercampur Fusi

induksi medan listrik

 Homokaryon: nukleus dari genotip yang sama.

Heterokaryon : nukleus dari genotip yang
berbeda.
Hibrid, jika nukleus dari kedua spesies tersebut
betul-betul mengalami fusi (menyatu)
Cybrid (cytoplasmid hybrid ataru heteroplast), jika
hanya sitoplasma yang mengalami fusi sedangkan
informasi genetik dari salah satu induknya hilang
Donor-akseptor (protoplast-sitoplasma)

Jenis Hasil Fusi

Skema Fusi heterokaryon

 Keuntungan
Menambah diversitas genetik (kreasi hybrid)
Memungkinkna silangan tanaman yang muda
Membuat hybrid dari tanaman yang hanya bisa diperbanyak
secara vegetatif pisang
Lahan baru dalam bidang genetika, pemuliaan dan botani
Pemindahan informasi genetik

Kerugian

Metode belum benar benar efisien

Ketidaksesuaian hasi ( tidak viabel dan tidak stabil)
Ini tidak melebur dan sel membelah sendiri kimerik
Hasil regenerasi bervariasi (eliminasi kromosom, translokasi,
variasi somaklonal, pemisahan organella)

Keuntungan dan kerugian