REVIEW JURNAL FARMAKOG

Study on the Antiinflammatory Activity of Essential Oil from Leaves of

Cinnamomum osmophloeum
Anti-inflammation activities of essential oil and its constituents from indigenous
cinnamon (Cinnamomum osmophloeum) twigs

Oleh :
NAMA

: MARSALITA IRINE PRABANDARI

NIM

: 132210101002

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS JEMBER
2014

BAB I
PENDAHULUAN
Kayu manis (Cinnamomum osmophloeum) termasuk dalam famili
Lauraceae, merupakan pohon endemik yang tumbuh di hutan kayu alam Taiwan
pada ketinggian antara 400 dan 1500 m. Banyak penelitian menunjukkan
bioaktivitas produk industri kehutanan tersebut. Hal ini juga diketahui bahwa di
masa lalu, minyak esensial dari tanaman tersebut dapat digunakan dalam obat obatan, perasa makanan, untuk aroma dan beberapa fungsi bioaktifitasnya telah
diperiksa dan dikembangkan dalam beberapa tahun terakhir. Sebagian besar
kandungan kimia dari minyak atsiri ini memiliki senyawa terpenoid, termasuk
monoterpen, dan seskuiterpen.
Analisis fitokimia terbaru pada C. osmophloeum telah difokuskan pada
komponen minyak atsiri yang terdapat pada daun yang telah menunjukkan efek
yang sangat baik untuk penghambatan pada anti-bakteri, anti-rayap, anti-tungau,
anti-mildew, larva anti-nyamuk, dan anti-jamur serta menunjukkan aktivitas
larvasida nyamuk terkuat (chang et al, 2001;. Chang dan Cheng, 2002; Chen et al,
2002;. Chen dan Chang, 2002; Cheng et al., 2004, 2006).
Dalam beberapa tahun terakhir, terjadi kecenderungan untuk studi terapan
Minyak esensial yang difokuskan pada bioaktivitas antiinflamasi. Namun tidak
ada studi sebelumnya yang membahas kandugan minyak atsiri dari ranting C.
osmophloeum. Oleh karena itu penelitian juga dilakukan untuk mengidentifikasi
komposisi kimia minyak atsiri dengan destilasi air dan kegiatan anti inflamasi dari
ranting Cinnamomum osmophloeum untuk pertama kalinya.
Minyak atsiri dapat diisolasi dengan beberapa metode, namun yang paling
sering dilakukan adalah metode destlasi, salah satunya adalah destilasi air seperti
yang dilakukan dalam penelitian ini. Selanjutnya minyak atsiri dari daun
C.osmophloeum dianalisis dengan kromatografi spektrometri-gass massa (GCMS) untuk komposisi kimianya.

BAB II
HASIL DAN DISKUSI

2.1

Komposisi Kimia Minyak Atsiri

Komposisi Kimia Minyak Atsiri dari daun C. Osmophloeum
dengan destilasi air menghasilkan sekitar 0,55% (v/w) minyak esensial
berdasarkan berat kering. Tabel di bawah

merupakan Komposisi dari

minyak esensial menunjukkan bahwa terkandung 21 senyawa yang

diidentifikasi dalam minyak atsiri dari daun C. osmophloeum, termasuk
90,1% senyawa terpenoid. Konstituen utama minyak atsiri dari daun C.
osmophloeum adalah 1,8-cineole (17,0%), santolina triene (14,2%),
spathulenol (15,7%), dan oksida caryophyllene (11,2%).

Menurut

klasifikasi kami sebelumnya, minyak penting dari daun C. osmophloeum

diklasifikasikan sebagai tipe campuran karena kurangnya senyawa yang
dominan.
Komposisi minyak esensial dari ranting C.osmophloeum Destilasi
air menghasilkan 0,08% (b/b) minyak esensial sesuai dengan berat kering.
Sebanyak 24 senyawa diidentifikasi dalam minyak esensial ranting, yang
mewakili 97,62% dari total minyak esensial. Konstituen utama dalam
minyak esensial dari ranting yang diukur untuk menjadi L-bornyl asetat
(15.89%), caryophyllene oksida (12,98%), c-eudesmol (8.03%), b
caryophyllene-(6.60%), T-cadinol (5,49%) , d-cadinene (4,79%), trans-belemenone (4,25%), cadalene (4,19%), dan trans-cinnamaldehyde (4,07%)
sesuai dengan hasil yang diperoleh dari analisis GC-MS. Di sisi lain,
minyak esensial dari ranting sebagian besar adalah konstituen yang
sesquiterpen. Dalam penelitian ini, 35.63% dari konstituen diidentifikasi
sebagai oksigen sesquiterpene, diikuti oleh hidrokarbon sesquiterpene
(29,31%), monoterpene oksigen (23,15%), dan lain-lain (9,53%).

2.2

Aktivitas Anti-inflamasi dari Essensial Oil

Anti inflamasi dari Essential Oil pada daun C. osmophloeum
Telah ditemukan bahwa beberapa minyak esensial mengandung
konstituen utama yang sama dengan kandungan minyak dari daun C.
osmophloeum, serta memiliki sejumlah bioaktifitas lainnya. Meskipun
oksida linalool adalah komponen minor (5,9%) dalam minyak esensial ini,
telah terbukti sebagai antimikroba dan bioaktivitas sebagai antiinflamasi.
Peana et al. juga menunjukkan bahwa linalool tidak hanya bisa
menyebabkan penurunan yang signifikan dari induksi asam tetapi juga
memiliki aktivitas antiinflamasi pada tikus. Dengan demikian, aktivitas
antiinflamasi minyak esensial daun dari C.osmophloeum layak untuk
diselidiki.
Hal ini juga diketahui bahwa makrofag berperan penting dalam
mengatur respon imun pada rantarai sel. Selain fungsi endositosis, makrofag
dapat didorong untuk mengeluarkan serai sitokin seperti IL-1, IL-6, dan
TNF-, yang berkontribusi untuk perlawanan terhadap agen infeksi dan selsel tumor. Dalam penelitian ini, kami menggunakan J774A.1 sel dengan
perantara (hewan uji) tikus untuk mengamati kemampuan antiinflamasi dari
minyak atsiri daun dari C. osmophloeum dalam sel perangsangan LPS.
Untuk menyelidiki apakah minyak esensial dari daun C.
osmophloeum menunjukkan aktivitas immuno modulation pada makrofag,
maka sebelumnya sel J774A.1 diobati dengan konsentrasi yang ditunjukkan
minyak esensial selama 30 menit dengan LPS selama 6 jam. Seperti
ditunjukkan dalam gambar berikut, bioaktif protein TNF- yang
disekresikan dari sel J774A.1 di tantangan LPS yang diukur dengan ELISA.

Keterangan : Minyak atsiri dari daun C. osmophloeum menghambat

ekspresi protein TNF- dalam makrofag rangsangan LPS. Sel J774A.1 yang
diobati sebelumnya dengan konsentrasi yang ditunjukkan minyak esensial
selama 30 menit sebelum diinkubasi dengan 1 g / mL LPS selama 6 jam.
Media kultur diuji dengan menggunakan ELISA spesifik.
Selain itu, minyak esensial juga mengakibatkan turunnya regulasi induksi
LPS sekresi protein IL-1; sel pra-perawatan dengan minyak esensial
selama 30 menit, diikuti oleh LPS tantangan selama 24 jam. Seperti
ditunjukkan dalam gamabar berikut :

Keterangan : Minyak atsiri dari daun C. osmophloeum menghambat ekspresi

protein IL-1 dalam

makrofag LPS-stimulated. Sel J774A.1 diobati

sebelumnya dengan konsentrasi yang ditunjukkan minyak esensial selama

30 menit sebelum diinkubasi dengan 1 g / mL LPS selama 24 jam. Media
kultur diuji dengan menggunakan ELISA spesifik.

Studi kami menemukan bahwa 60 g / mL minyak esensial dapat

menghambat sekitar 65% dari IL-6 ekspresi protein, dibandingkan dengan
makrofag dimediasi hanya dengan LP .

Keterangan: Minyak atsiri dari daun C. osmophloeum menghambat IL-6

ekspresi protein dalam makrofag LPS-dirangsang. Sel J774A.1 yang diobati
sebelumnya dengan konsentrasi yang ditunjukkan minyak esensial selama
30 menit sebelum diinkubasi dengan 1 g / mL LPS selama 6 jam. Media
kultur diuji dengan menggunakan ELISA spesifik.
Anti inflamasi dari Essential Oil pada ranting C. osmophloeum
Untuk mengetahui aktivitas anti-inflamasi minyak esensial dari
ranting C. osmophloeum, maka diperiksa NO dan PGE2 produksi di LPSstimulated sel RAW 264,7. Pengaruh minyak esensial dan konstituen pada
produksi NO yang merupakan spesies radikal bebas endogen yang
disintesis dari L-arginin dengan oksida nitrat sintase (NOS) di berbagai sel
hewan dan jaringan. Sejumlah kecil NO regulator penting dari homeostasis
fisik, sedangkan jumlah besar NO telah berkorelasi erat dengan
patofisiologi berbagai penyakit dan peradangan. Lipopolisakarida (LPS)
dari bakteri Gram-negatif, NOS (iNOS) dapat diinduksi dalam berbagai
sel, seperti makrofag, sel Kupffer, sel-sel otot polos, dan hepatosit, untuk
memicu sitotoksisitas, kerusakan jaringan, inflamasi sepsis, dan stroke
(Marletta, 1993;. Jiang et al, 2006). Dengan demikian, mengukur produksi

NO dapat menjadi metode untuk menilai efek anti-inflamasi dari ekstrak

tumbuhan. Adapun efek penghambatan minyak esensial pada NO
menunjukkan bahwa minyak atsiri dari ranting C. osmophloeum sangat
baik sebagai efek penghambatan. 25 g/ml minyak esensial dapat
menghambat

produksi NO sebesar

68,8%. Selain itu, uji MTT

menunjukkan bahwa konsentrasi hingga 50 g / ml menghasilkan efek

sitotoksik yang signifikan pada sel diperlakukan dengan minyak esensial.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa minyak atsiri C. osmophloeum
ranting memiliki kinerja yang baik menghambat produksi NO.
Efek minyak esensial dan konstituennya pada produksi PGE 2 di
LPS-stimulated RAW 264,7 sel

meliputi aktivasi makrofag yang

memainkan peranan penting dalam proses inflamasi dengan melepaskan

berbagai mediator inflamasi (Hwang et al., 2002). Selain produksi NO,
PGE2 juga merupakan mediator inflamasi penting yang terlibat dalam
patogenesis (Surh et al., 2001). Dengan demikian, selain mengukur NO
produksi, menentukan efek penghambatan pada akumulasi abnormal PGE2
adalah metode lain dimana efek anti-inflamasi dari ekstrak tumbuhan
dapat dinilai. Pada konsentrasi 10 g/ml, minyak atsiri ranting

C.

osmophloeum signifikan menurun hampir 65% dari produksi PGE2 di

LPS-induksi RAW 264,7 sel, sementara indometasin dipamerkan 98%
penghambatan produksi PGE2.
Dalam uji anti-inflamasi, minyak atsiri ranting C. osmophloeum
menunjukkan efek penghambatan yang sangat baik pada PGE2, tapi
sayangnya, konstituen utama seperti caryophyllene oksida dan L-bornyl
asetat, tidak bertanggung jawab untuk menekan produksi PGE2. Temuan
ini menunjukkan bahwa kinerja yang sangat baik dari minyak esensial
ranting yang disebabkan oleh efek dari konstituen minor atau sinergis efek
antara konstituen. Untuk mengetahui elemen yang bertanggung jawab
untuk menekan produksi PGE2 dan untuk memperjelas mekanisme yang
terlibat, diperlukan penelitian lebih lanjut.

BAB III
BAHAN DAN METODE

2.1 Bahan
Daun C. osmophloeum yang telah berusia 13 tahun dikumpulkan
pada Agustus 2003, dari yang Haw-Lin Experimental Forest yang terletak
di negara Taipei. Spesies ini diidentifikasi oleh Yen-Ray Hsui dari Taiwan
Kehutanan Research Institute, dan spesimen voucher diendapkan di
laboratorium kimia kayu, di Sekolah Kehutanan dan Konservasi
Sumberdaya, Universitas Nasional Taiwan.
Ranting yang telah berusia 13 tahun dari C.osmophloeum
dikumpulkan pada akhir Juli 2004 dari Taiwan Perusahaan Gula Pusat
Penelitian terletak di Nantou County pada Taiwan tengah. Diameter
ranting yang dipilih adalah di bawah 1,5 cm. Spesies ini dikonfirmasi oleh
Dr.Yen-Ray Hsui dari Taiwan Kehutanan Research Institute dan voucher
spesimen disimpan di laboratorium kayu kimia (Sekolah Kehutanan dan
Konservasi Sumberdaya, Universitas Nasional Taiwan).
2.2 Metode
Adapun metode yang digunakan pada penelitian-penelitian ini
secara umum sama, yaitu dengan sistem destilasi yang kemudian dianalisis
dengan menggunakan spektrometri GC-MS untuk mengetahui komposisi
kimianya yang penjelasannya akan dijabarkan seperti berikut :
Minyak segar dari daun atau ranting C. osmophloeum diperoleh
dengan menggunakan destilasi air selama 6 jam, dan selanjutnya untuk
konstituennya ditentukan oleh GC-MS. Spektrometer massa yang
dilengkapi dengan Polaris Q massa, yaitu detektor selektif dalam modus

ionisasi dampak elektron (70eV). Kromatografi gas digunakan dan

dioperasikan dalam kondisi sebagai berikut:
RTx-5 kolom kapiler (30m-0,25 mm, ketebalan film 0,25 m),
perlakuannya pada suhu

80C selama 1 menit, kemudian dinaikkan

menjadi 200C dengan kecepatan suhu 4C/menit, dan ditunggu selama 5

menit. Suhu injektor 250C Pembawa helium dengan laju alir 10 mL
/menit dengan rasio split 1 : 10. Sampel encer (1,0 l, 1/100, v/v, dalam
etil asetat) yang disuntikkan secara manual dalam modus pisah.
Identifikasi

komponen

utama

minyak

dari

daun

atau

ranting

C.osmophloeum dibandingkan dengan standar, dengan spiking dan atas

dasar fragmentasi spektral massa menggunakan pustaka dari Wiley GCMS. Jumlah senyawa diperoleh dengan mengintegrasikan daerah puncak
spektogram.
Untuk meneliti efek penghambatan pada minyak atsiri dari daun C.
Osmophloeum dilakukan beberapa uji sebagai berikut :
Enzim-Linked Immunosorbent Assay (ELISA).
Untuk meneliti efek penghambatan minyak esensial dari daun C.
osmophloeum pada TNF-, IL-, dan produksi protein IL-1 dari LPSstimulated Sel J774A.1 dengan minyak esensial (0-60 g / mL) selama 30
menit pada suhu 37 C, diikuti oleh LPS (1 g / mL) pengobatan dilakukan
selama 6 atau 24 jam.
Sitokin sekresi dalam sel J774A.1 diukur sesuai protokol dari R & D tikus
TNF-, IL-1, dan IL-6 ELISA System (R & D Systems, Inc). Secara
singkat, sel-sel diinkubasi dengan minyak esensial pada waktu yang
ditunjukkan, dan media kultur sel dikumpulkan. Untuk pengujian, 50 IL
terbiotinilasi antibodi reagen ditambahkan ke anti-tikus TNF-, IL-1, dan
IL-6 dengan 50 l supernatan dari sampel yang diuji dan diinkubasi pada
suhu kamar selama 2 jam.

Microculture Tetrazolium (MTT) Assay untuk Cell Viabilitas.

Sitotoksisitas minyak esensial dari daun C. osmophloeum dinilai
menggunakan uji MTT. Setelah dikultur dengan baik selama 24 jam, selsel dicuci sebanyak dua kali dan diinkubasi dengan 100 l dari 1 mg / mL
MTT selama 2 jam pada suhu 37 C.
Media dibuang, kemudian ditambahkan 100 L buffer. Setelah 30 menit
diinkubasi, absorbansi (A550-A690) diukur dengan spektrofotometri. Analisis
Statistik persen kematian ditentukan dan diubah menjadi arcsine nilai akar
kuadrat untuk analisis varians. Perbedaan signifikan (P <0,05) ditentukan
dengan uji Scheffe.
Untuk meneliti lebih lanjut minyak atsiri dari ranting C. Osmophloeum
dilakukan beberapa uji sebagai berikut :
Sitotoksisitas uji pada sel tumor (assay MTT)
Pengujian ini dilakukan sesuai dengan prosedur yang dilaporkan oleh
Mossmann pada tahun 1983 dengan sedikit modifikasi. Untuk mengukur
sitotoksisitas minyak esensial, oksida caryophyllene, dan L-bornyl asetat
dalam proliferasi sel, sel-sel HepG2 (1 x 10 4) yang unggul dengan plate
dalam rangkap tiga dan diinkubasi selama 3 jam.
Pertama, 100 l media segar yang mengandung berbagai konsentrasi
sampel uji diinkubasi pada suhu 37C selama 72 jam dan dilembabkan
pada udara yang mengandung 5% CO2. Setelah penghapusan medium dari
sumur, kemudian ditambahkan 100 l tetrazolium larutan garam (1 ml
MTT dalam 10 ml DMEM). Setelah 4 jam diinkubasi pada suhu 37C dan
ditambahkan 100 l DMSO untuk melarutkan kristal formazan.
Absorbansi diukur dalam immunosorbent assay enzim-linked (ELISA)
reader pada 570 nm.

Uji aktivitas anti-inflamasi

Untuk mengetahui aktivitas anti-inflamasi minyak esensial dari ranting C.
osmophloeum, maka diperiksa NO dan PGE2 produksi di LPS-stimulated
sel RAW 264,7. Untuk penentuan NO, sel RAW 246,7 unggulan di plate
dengan kepadatan 2x105 sel / baik dan tumbuh selama 2 jam. Sel-sel
diperlakukan dengan sampel uji selama 1 jam dan kemudian diinkubasi
selama 24 jam dalam DMEM segar dengan atau tanpa 1 g / ml LPS.
Konsentrasi nitrit dalam media kultur diukur sebagai indikator produksi
NO sesuai dengan reaksi Griess (Kim et al., 1999). Secara singkat, 100 l
kultur sel supernatan direaksikan dengan 100 l Griess reagen (1: 1
campuran 0,1% N- (1-naftil) etilen diamin-dihidroklorida dalam air dan
1% sulfanilamide dalam asam fosfat 5%) dalam piring 96-baik, dan
absorbansi pada 540 nm direkam menggunakan pembaca ELISA.
Untuk penentuan PGE2, RAW 264,7 sel unggulan di plate dengan
kepadatan 1x104 sel / baik dan diinkubasi selama 18 jam. Sel praperawatan dengan 500 m aspirin selama 3 jam untuk menonaktifkan
endogen cyclooxygenase-1 (COX-1) sesuai dengan metode yang
dilaporkan oleh Hwang et al. (2002).
Kemudian, sel-sel dicuci sebanyak dua kali dengan saline fosfat buffer
(PBS) dan selanjutnya diinkubasi selama 16 jam pada pendingin DMEM
dengan atau tanpa 1 g / ml LPS dalam tidak adanya atau kehdiran sampel
uji. Setelah inkubasi, supernatannya dikumpulkan untuk mengukur
konsentrasi PGE2 dengan antibodi
sebagaimana ditentukan oleh produsen.

monoklonal dengan ELISA

BAB IV
KESIMPULAN

Minyak esensial dari daun kayu manis (Cinnamomum osmophloeum)

diidentifikasi dengan menggunakan gas kromatografi-mass spektrometri, dan 21
senyawa diidentifikasi. Kandungan utama dari minyak atsiri dari daun
Cinnamomum osmophelum adalah monoterpen 1,8-cineole (17,0%), santolina
triene (14,2%), sesquiterpenes spathulenol (15,7%), caryophyllene oksida
(11,2%). Uji aktivitas antiinflamasi menunjukkan bahwa minyak esensial
memiliki kapasitas yang lebih tinggi untuk menghambat proIL-1 ekspresi protein
yang diinduksi oleh LPS-diperlakukan J774A.1 makrofag murine. Pada dosis 60
g/mL, minyak esensial jelas menghambat proIL-1 ekspresi protein. Selain itu,
dosis 60 g/mL minyak esensial secara efektif menghambat untuk IL-1 dan IL-6
produksi tetapi tidak untuk TNF-, menunjukkan bahwa minyak esensial adalah
bioaktif dalam antiinflamasi in vitro.
Kandungan kimia dari minyak atsiri dari ranting yang dianalisa lebih
lanjut oleh GC-MS yakni L-bornyl asetat (15.89%), caryophyllene oksida
(12,98%), c-eudesmol (8.03%), b caryophyllene-(6.60 %), T-cadinol (5,49%), dcadinene (4,79%), trans-b-elemenone (4,25%), cadalene (4,19%), dan transcinnamaldehyde (4,07%). Efek dari minyak esensial pada oksida nitrat (NO) dan
prostaglandin E2 (PGE2) produksi lipopolisakarida (LPS)-activated RAW 264,7
makrofag juga diperiksa. Hasil tes menunjukkan bahwa oksida nitrat ranting
minyak

esensial

dan

konstituen

utama

seperti

trans-cinnamaldehyde,

caryophyllene oksida, L-borneol, L-bornyl asetat, eugenol, b-caryophyllene, Enerolidol, dan cinnamyl asetat memiliki aktivitas yang sangat baik. Temuan ini
menunjukkan bahwa minyak atsiri dari ranting C. osmophloeum memiliki
kegiatan anti-inflamasi yang sangat baik dan dengan demikian memiliki potensi
besar untuk digunakan sebagai sumber untuk produk kesehatan alami.

DAFTAR PUSTAKA

Chang, S. T.; Chen, P. F.; Chang, S. C. Antibacterial activity of leaf essential oils
and

their

constituents

from

Cinnamomum

osmophloeum.

J.

Ethnopharmacol. 2001, 77, 123-127.

Chang, S. T.; Cheng, S. S. Antitermitic activity of leaf essential oils and
components from Cinnamomum osmophloeum. J. Agric. Food Chem.
2002, 50, 1389-1392.
Gayathri, B., Manjula, N., Vinaykumar, K.S., Lakshmi, B.S., Balakrishnan, A.,
2007. Pure compound from Boswellia serrata extract exhibits antiinflammatory property in human PBMCs and mouse macrophages
through inhibition of TNFa, IL-1b, NO and MAP kinases. Int.
Immunopharmacol. 7, 473482.
Sylvester, J.; Liacini, A.; Li, W. O.; Dehnade, F.; Zafarullah, M. Tripterygium
wilfordii Hook F extract suppresses proinflammatory cytokine-induced
expression of matrix metalloproteinase genes in articular chondrocytes
by inhibiting activating protein-1 and nuclear factor-_B activities. Mol.
Pharmacol. 2001, 59, 1196-1205.