SKRIPSI
Diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar sarjana farmasi
Oleh :
FEBRIYATI
NIM : 106102003404
NAMA : FEBRIYATI
NIM
: 106102003404
Disetujui oleh :
Pembimbing I
Pembimbing II
NIP. 196908161994031003
NIP.195601061985101001
Mengetahui,
Ketua Program Studi Farmasi
Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan
Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta
........................
2. Pembimbing II
Penguji:
1. Ketua Penguji
2. Anggota Penguji I
........................
3. Anggota Penguji II
........................
........................
Mengetahui,
Dekan Fakultas Kedokteran Dan Ilmu Kesehatan
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
LEMBAR PERNYATAAN
Adalah karya saya sendiri dan belum pernah diajukan dalam bentuk apapun
kepada perguruan tinggi manapun. Sumber informasi yang berasal atau dikutip
dari karya yang diterbitkan maupun yang tidak diterbitkan dari penulis lain telah
disebutkan dalam teks dan dicantumkan dalam daftar pustaka.
Penulis,
Febriyati
KATA PENGANTAR
kerendahan hati, penulis berharap semoga hasil penelitian ini dapat bermanfaat
baik bagi kalangan akademis, khususnya bagi mahasiswa farmasi, masyarakat
pada umumnya dan bagi dunia ilmu pengetahuan.
Penulis
ABSTRAK
ANALISIS KOMPONEN KIMIA FRAKSI MINYAK ATSIRI DAUN SIRIH
(Piper bettle Linn.) DAN UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI TERHADAP
BEBERAPA JENIS BAKTERI GRAM POSITIF
Sirih (Piper betle Linn.) merupakan salah satu jenis tanaman dari famili
Piperaceae yang sering digunakan untuk menyirih. Fraksi minyak atsiri daun sirih
diperoleh dengan cara destilasi uap air dan difraksinasi berdasarkan perbedaan
waktu penyulingan. Kandungan relatif yang terdapat pada masing masing fraksi
secara berurutan adalah 0,061%, 0,034%, 0,027% dan 0,015%. Analisis fraksi
minyak atsiri dengan GC-MS dari fraksi jam ke 1, 2,4, dan 6 menunjukkan adanya
5 komponen kimia utama yang diduga berperan pada aktivitas antibakteri yaitu
kavibetol, kariofilen, pacouli alkohol,fenol,2-metoksi-4(1-profenil)-asetat dan 4alil-1,2-diasetoksibenzene. Fraksi minyak atsiri daun sirih telah diuji aktivitas
antibakteri dan mekanisme penghambatan terhadap beberapa jenis bakteri gram
positif. Aktivitas antibakteri minyak atsiri daun sirih menggunakan mikrodilusi
menunjukkan bahwa ke-4 fraksi minyak atsiri daun sirih aktif terhadap
Staphylococcus epidermidis dan Steptococcus mutan namun tidak menunjukkan
aktivitas terhadap Bacillus subtilis . Nilai MIC pada setiap fraksi terhadap
Staphylococcus epidermidis sebesar 0,25% sedangkan Steptococcus mutan
memilki aktivitas yang paling sensitif terhadap F4 pada nilai MIC 0,25%.
Mekanisme penghambatan pertumbuhan bakteri oleh fraksi minyak atsiri daun
sirih terjadi melalui pengerusakan dinding sel mikroba uji setelah perlakuan 1
MIC dan 2 MIC.
Kata kunci : Piper betle, minyak atsiri, fraksi, aktivitas antibakteri, bakteri gram
positif,.
ABSTRACT
ANALYSIS OF CHEMICAL COMPONENTS OF ESSENTIAL OIL
FRACTIONS OF BETLE LEAVES (Piper betle Linn.) AND ANTIBACTERIAL ACTIVITY TEST AGAINST SOME GRAM POSITIVE
BACTERIA.
Beetle (Piper betle Linn) is a plant belongs to Piperaceae that often used in
beetle chewing. Essential oils fractions of beetle leaves was given by steam and
water distilation and fractionated based on time periods. The result showed that
fraction yield of F1, F2, F3 and F4 were 0,061%, 0,034%, 0,027% and 0,015%.
respectively. Analysis of essential oils by GC-MS showed that 5 main chemical
components were chavibetol, caryophyllene, patchouli alcohol, phenol,2-metoksi4(1-prophenyl)-acetate and 4-allyl-1,2-diacetoxybenzene respectively. All of
these main chemical constituents were propose to responsible for its antibacterial
activity. The anti-bacterial activity of essential oils of beetle leaves was evaluate
with a microdilluton method. The results showed all of essential oil fractions
tested active against Staphylococcus epidermidis dan Steptococcus mutan but not
active to Bacillus subtilis. The MIC values of Staphylococcus epidermidis for all
of essential oil fractions were 0,25% While Steptococcus mutan were the most
sensitive to fourth fraction by 0.25%. Inhibition mechanism their activity was
indicated through microbial cell walls vandalism test after treatment 1 MIC and 2
MIC of the oils.
Key words: Piper betle,,essential oil, fractions, antibacterial activity, gram
positive bacteria
DAFTAR ISI
Hal
LEMBAR PERSETUJUAN SKRIPSI...............................................................
ii
iii
LEMBAR PERNYATAAN.................................................................................
iv
KATA PENGANTAR..........................................................................................
ABSTRAK............................................................................................................
viii
ABSTRACT..........................................................................................................
ix
DAFTAR ISI.........................................................................................................
xiii
DAFTAR GAMBAR............................................................................................
xiv
DAFTAR LAMPIRAN........................................................................................
xv
BAB I
PENDAHULUAN.........................................................................
1.1.
Latar Belakang................................................................................
1.2.
Rumusan Masalah...........................................................................
1.3.
Hipotesa..........................................................................................
1.4.
Tujuan Penelitian............................................................................
1.5.
Manfaat Penelitian..........................................................................
TINJAUAN PUSTAKA................................................................
2.1.2.Nama Daerah.........................................................................
2.1.5. Khasiat..................................................................................
Minyak atsiri...................................................................................
BAB II
2.1.
2.2.
2.4.
Aktivitas Antibakteri.......................................................................
10
10
11
13
BAB III
KERANGKA KONSEP...............................................................
14
BAB IV
METODOLOGI PENELITIAN..................................................
15
4.1.
15
4.2.
Pengambilan Sampel.......................................................................
15
4.3.
Determinasi Tanaman.....................................................................
15
4.4.
Alat da Bahan..................................................................................
15
4.5.
Metode Penelitian...........................................................................
16
4.6.
Prosedur kerja
17
18
18
22
2+
BAB V
5.1.
+.
23
23
25
Hasil................................................................................................
25
25
29
31
31
32
5.2.
Pembahasan....................................................................................
33
43
6.1.
Kesimpulan.....................................................................................
43
6.2.
Saran...............................................................................................
44
DAFTAR PUSTAKA...........................................................................................
45
LAMPIRAN..........................................................................................................
48
BAB VI
DAFTAR TABEL
Hal
Tabel 1. Perbandingan komponen kimia antar fraksi minyak atsiri
daun Sirih ............................................................................................... 27
Tabel 2. Penggolongan komponen kimia antar fraksi minyak atsiri
daun Sirih ............................................................................................... 28
Tabel 3. Aktivitas fraksi minyak atsiri daun sirih terhadap 3 jenis bakteri
uji gram positif pada konsentrasi 50 %.................................................. 29
Tabel 4. Penentuan MIC fraksi minyak atsiri daun sirih terhadap bakteri
uji B. subtilis........................................................................................... 30
Tabel 5. Penentuan MIC fraksi minyak atsiri daun sirih terhadap bakteri uji
S.epidermidis dan S. mutan..................................................................... 30
DAFTAR GAMBAR
Hal
Gambar 1. Daun sirih........................................................................................... 25
Gambar 2. Perbandingan komatogram antar fraksi minyak atsiri daun sirih....... 30
Gambar 3. Nilai absorbansi asam nukleat dan protein fraksi jam ke-1
pada sel S. epidermidis...................................................................... 31
Gambar 4. Hasil pengukuran konsentrasi ion logam Ca2+ dan K+ fraksi
jam ke-1 pada supernatan biakan S.epidermidis konsentrasi
1 MIC dan 2 MIC.............................................................................. 36
Gambar 5. Morfologi sel S. epidermidis............................................................. 37
DAFTAR LAMPIRAN
Hal
Lampiran 1. Hasil determinasi daun sirih (Piper betle Linn.)............................. 48
Lampiran 2. Skema Kerja..................................................................................... 49
Lampiran 3. Hasil uji sensitivitas minyak atsiri daun sirih terhadap
ketiga jenis bakteri uji gram positif................................................ 56
Lampiran 4. Pertumbuhan bakteri uji terhadap fraksi minyak atsiri
daun sirih dengan metode plating...................................................... 57
Lampiran 5. Nilai absorbansi asam nukleat dan protein fraksi jam ke-1
pada sel S.epidermidis................................................................... 58
Lampiran 6. Hasil pengukuran konsentrasi ion logam Ca2+ dan K+ fraksi jam
ke-1 pada supernatan biakan bakteri S.epidermidis konsentrasi
1 MIC dan 2 MIC............................................................................ 58
Lampiran 7. Perhitungan konsentrasi MIC bakteri uji B. subtilis........................ 62
Lampiran 8. Perhitungan konsentrasi MIC bakteri uji S. epidermidis dan
S. mutan........................................................................................... 63
BAB I
PENDAHULUAN
pertanian dan bahan obat - obatan dengan nilai ekonomi yang tinggi (Sumarni
et al., 2009 ).
Minyak atsiri merupakan minyak yang mudah menguap yang akhirakhir ini menarik perhatian dunia, hal ini disebabkan minyak atsiri dari
beberapa tanaman bersifat aktif biologis sebagai antibakteri dan antijamur.
Kandungan minyak atsiri daun sirih dilaporkan memiliki daya antibakteri.
Kemampuan tersebut karena adanya kandungan 4,2% minyak atsiri yang
sebagian besar terdiri dari senyawa betelphenol yang merupakan isomer
eugenol, methil eugenol, kariofilen (siskuiterpen), kavikol, kavibekol,
estragol dan terpinen (Sastroamidjojo, 1997). Analisis komponen kimia
penyusun minyak atsiri Piper betle telah dilakukan juga oleh beberapa
peneliti dan diketahui bahwa sebagai komponen utama penyusun minyak
atsirinya antara lain kariofilena (30%), Isoeugenol (22%) dan -kubebena
(9%) (Agusta, 2000; Sulianti dan Chairul, 2002; Hertiani dan Purwantini,
2002).
Beberapa hasil penelitian tentang daun sirih telah dilaporkan, misalnya
bahwa ekstrak daun sirih pada konsentrasi 2,5%, 5% dan 10% secara invitro
dapat menghambat pertumbuhan S. aureus dan E. coli (Hermawan, 2007).
Nalina dan Rahim (2007) melaporkan bahwa ekstrak air daun sirih memiliki
aktivitas antibakteri terhadap S. mutan. Telah dilaporkan pula bahwa minyak
atsiri pada daun sirih, rimpang temu kunci, rimpang lengkuas, dan kunyit
berperan dalam aktivitas sebagai antibakteri dan anti jamur. Diduga aktivitas
tersebut disebabkan adanya kandungan senyawa fenolik bermolekul rendah
yang banyak terdapat di dalam minyak atsiri tersebut (Parwata et al., 2008).
1.3. Hipotesa
Fraksi minyak atsiri daun sirih yang diperoleh pada jam ke-1, jam ke-2,
jam ke-4 dan jam ke-6 memiliki komponen kimia yang berbeda dan aktivitas
antibakteri terhadap bakteri gram positif B. subtilis, S. epidermidis dan S.
mutan dengan merusak membran sel.
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
: Spermatophyta
: Dicotyledoneae
Ordo
: Piperales
Family
: Piperaceae
Genus
: Piper
Spesies
2.1.4. Khasiat
Secara empiris tanaman sirih digunakan untuk obat batuk, asma,
hidung berdarah (mimisan), mulut berbau, kepala pusing, demam nifas
(daun), gusi bengkak (getah), dan minyak atsirinya untuk radang
tenggorokan (Pudjiastuti, 1996; Sudarsono et al., 1996).
atsiri adalah isoprenoid, karena molekul-molekulnya tersusun dari unitunit isopren. Beberapa sifat umum dari minyak atsiri antara lain
tersusun oleh bermacam-macam komponen senyawa, memiliki bau
khas, mempunyai rasa getir, menggigit tergantung dari jenis komponen
penyusunnya, dalam keadaan segar dan murni minyak atsiri umumnya
tidak berwarna, tidak stabil terhadap pengaruh lingkungan baik
pengaruh udara, sinar matahari dan panas, tidak dapat bercampur
dengan air dan larut dalam pelarut organik.
Minyak atsiri dapat terbentuk secara langsung oleh protoplasma
akibat adanya peruraian lapisan resin dari dinding sel atau oleh
hidrolisis dari glikosida tertentu. Minyak atsiri sendiri bagi tanaman
berguna untuk menarik serangga yang membantu proses penyerbukan
sebagai cadangan makanan, untuk mencegah kerusakan tanaman oleh
serangga atau hewan lain dan mempengaruhi proses transpirasi (Didik
dan Mulyani, 2004).
2.3. Bakteri
2.3.1. Deskripsi Bakteri
Bakteri merupakan kelompok sel prokariotik uniseluler. Salah satu
karakteristik utama sel bakteri adalah ukuran, bentuk, struktur dan
penataan selnya yang mencakup morfologi sel. Reproduksi terutama
dengan aseksual atau pembelahan biner. Ciri umum lainnya adalah
dimana
dinding
sel
mengandung
molekul
kompleks
disebut
: Protophyta
Class
: Schizomycetes
Ordo
: Eubacteriales
Family
: Bacillaceae
Genus
: Bacillus
Species
: Bacillus subtilis
endokarditis,
infeksi
mata
dan
lain-lainnya
: Ciano Cyanobacteria
Class
: Bakteria
Ordo
: Eubacterialees
Family
: Micrococcaceae
Genus
: Staphylococcus
Spesies
: Staphylococcus epidermidis
: Firmicutes
Class
: Diplococcic
Ordo
: Lactobacillales
Family
: Streptococcaceae
Genus
: Streprococcus
Spesies
: Streptococcus mutan
2.4. Antibakteri
2.4.1. Aktivitas Antibakteri
Antibakteri adalah obat pembasmi bakteri khususnya bakteri
yang merugikan manusia. Berdasarkan sifat toksisitas selektif, ada
bakteri
yang
bersifat
(bacteriostatic)
dan
(bactericidal).
Sulfonamid,
merupakan
antibiotik
ada
menghambat
yang
pertumbuhan
bakteri
membunuh
bakteri
bersifat
kloramfenikol,
yang bersifat
dan
bakteriostatik.
tetrasikiklin
Sedangkan
dinding
sel
atau
penghambatan
pada
yang
bekerja
langsung
pada
membran
sel
seperti
PABA,
sehingga
penggunaan
sulfonamida
mengenai
antibiotik
yang
kerentanan
diberikan.
mikroorganisme
Uji
dilakukan
tersebut
dengan
bakteri
dan
masing-masing
antibiotik
memungkinkan
BAB III
KERANGKA KONSEP
Determinasi Tanaman
Pengambilan fraksi
minyak atsiri
Analisa kimia dengan
GCMS
Penentuan MIC
hambat
Analisis Ion-Ion
Analisis SEM
BAB IV
METODOLOGI PENELITIAN
Cimanggu,
menghilangkan
kandungan
air.
Kemudian
menentukan
4.6.3.2.Pembuatan Medium
a. Blood Agar Base (BAB)
Pada pembiakan bakteri S. mutan media yang digunakan
adalah Blood Agar Base sebanyak 40 gram dilarutkan dalam 1
liter aquadest, lalu disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121 C
selama 15 menit. Kemudian ditambahkan darah pada suhu 35-40
0
C sekitar 5%.
BAB V
HASIL DAN PEMBAHASAN
5.1. Hasil
5.1.1. Isolasi dan Penentuan Komponen Kimia Fraksi Minyak Atsiri
Daun Sirih
Tabel 1. Perbandingan komponen kimia antar fraksi minyak atsiri daun sirih
No
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
Waktu
Retensi
10,84
11,23
12,36
12,73
13,09
13,39
13,55
14,07
15,10
15,69
18,93
19,62
20,74
21,35
15
16
21,65
21,98
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
22,40
22,62
23,08
23,32
23,91
24,24
24,57
24,66
24,97
25,61
25,89
26,12
26,33
26,46
31
32
33
34
35
36
26,83
27,04
27,19
27,38
27,60
27,85
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
27,97
28,13
28,30
28,43
28,59
29,17
29,90
31,07
31,29
31,44
31,65
31,77
32,03
32,35
51
52
32,52
32,92
53
54
55
56
57
58
33,30
33,45
33,61
33,78
34,07
34,52
Nama Senyawa
Sabinen
2--pinen
-Terpinen
dl-Limonen
-Felandren
3-Karen
Tidak teridentifikasi
-Terpinen
-Humulen
Linalil Isobutirat
Origanol
-Terpinenil asetat
Estragol
Asam benzoat, 2-hidroksi,metil ester
-Kubeben
1-(1-Etil-2,3-dimetilsiklopen-2-enil)-etanon
-Bourbenen
-Kopaen
Kavikol
-Elemen
-Bergamot
Trans--Bergamot
Kariofilen
-Guaien
Aromadendren
Fenol 1,4-(2-profenil)-asetat
-Humulene
p-Eugenol
Valensen
Naptalen,1,2,3,4,4a,5,6,8aoktahidro-7-metil-4-metilen1-(1-metilethil)
Kavibetol
-Selinen
-Selinen
- Gurjunena
Bisiklogermakren
Benze,1,2-dimetoksi-4-(2propenil)
-Pacuelen
-Kadinena
(-)--Panasinsen
-Kadinena
Kadina-1,4-diena
-Himakalen
-Gurjunena
Veridiflorol
-Gurjunene poksid-(2)
-Guaien
Kariofilen oksida
(-)-Kariofilen oksida
Kubenol
2,3,3-Trimetil-2-(3-methilbuta-1,3-dienil)-sikloheksan
3-Alil-6-metoksipenil asetat
fenol,2-metoksi-4-(1profenil)-asetat
-Guaien
t-Kadinol
-Bisabolol
Toreyyol
Junipen
Agarospirol
48
Rumus
Molekul
C10H16
C10H16
C10H16
C10H16
C10H16
C10H16
C10H16
C15H24
C14H24O2
C10H18O
C12H20O2
C10H12O
C8H8O3
BM
136
136
136
136
136
136
136
204
224
154
196
148
152
F1
0,65
0,10
0,06
0,05
0,29
0,39
0,19
0,10
0,05
0,59
0,37
0,09
0,16
1,00
C15H24
C11H18O
204
166
0,20
0,06
0,29
0,14
0,24
0,17
0,29
0,15
C11H18O
C15H24
C9H10O
C15H24
C15H24
C15H24
C15H24
C15H24
C15H24
C11H12O2
C15H24
C10H12O2
C15H24
C15H24
166
204
134
204
204
204
204
204
204
176
204
164
204
204
0,05
0,31
1,61
2,85
0,16
0,06
4,82
1,21
0,20
10,34
3,82
0,59
0,50
1,01
0,13
0,69
1,44
4,41
0,31
0,12
8,70
2,63
0,55
0,02
4,97
1,09
1,28
0,17
0,80
1,90
3,94
0,37
0,14
8,54
3,56
0,73
0,03
4,97
1,39
1,46
0,13
0,71
1,47
4,33
0,32
0,12
8,61
2,65
0,55
0,02
4,85
1,09
1,30
C10H12O2
C15H24
C15H24
C15H24
C15H24
C11H14O2
164
164
204
204
204
204
10,61
0,78
1,60
1,74
3,11
0,12
9,60
2,97
2,58
3,83
4,11
0,07
10,50
3,64
3,02
4,63
3,16
0,09
9,90
2,88
2,63
3,78
4,08
0,08
C15H24
C15H24
C15H24
C15H24
C15H24
C15H26O
C15H24
C15H26O
C15H24O
C15H24
C15H24O
C15H24O
C15H26O
C14H22O
204
204
204
204
204
222
204
204
220
222
220
220
222
0,47
0,43
0,20
0,06
0,05
0,03
0,05
0,07
0,05
0,17
0,10
0,05
0,59
0,10
0,55
0,72
0,29
0,08
0,30
0,14
0,37
0,10
0,07
0,22
0,69
1,02
0,42
0,03
0,13
0,59
0,24
0,57
0,14
0,10
0,08
0,27
0,54
0,72
0,30
0,09
0,30
0,14
0,37
0,11
0,07
0,22
C12H14O3
C12H14O3
206
206
0,34
13,89
0,51
12,95
0,38
10,77
0,52
13,01
C15H24
C15H26O
C15H26O
C15H26O
C15H24
C15H26O
204
222
222
222
222
222
0,12
0,05
0,05
0,12
0,45
0,12
0,17
0,08
0,04
0,18
0,89
0,39
0,21
0,12
0,04
0,20
1,52
0,80
0,17
0,08
0,04
0,17
0,90
0,40
F4
0,12
0,18
0,10
0,06
1,30
59
60
61
62
35,30
35,48
35,76
37,03
Pacouli Alkohol
Longiborneol
-Eudesmol
4-Alil-1,2-diasetoksibenzen
C15H26O
C15H26O
C15H24O
C13H14O4
222
222
220
234
4,95
0,00
0,07
27,31
10,23
14,53
12,62
0,12
6,32
10,08
14,64
63
64
38,62
38,77
C11H15NO2S
225
0,09
0,22
0,17
0,66
0,31
1,08
0,18
0,83
65
66
67
68
69
70
25,29
25,53
25,98
26,66
26,90
31,98
Tidak teridentifikasi
fenol,3,5-dimetil-4(metiltio)-metilkarbamat
-Pacuelen
Kavisil asetat
Seychellen
-Sedren
-Bisabol
4-Alil-1,2diasetoksibenzene
C15H24
C11H12O2
C15H24
C15H24
C10H12O2
C13H14O4
204
176
204
204
164
234
0,04
1,55
2,27
0,31
0,02
0,36
0,06
1,04
2,80
0,37
0,27
0,04
1,54
2,28
0,01
0,36
71
72
33,04
39,73
C15H26O
C15H22
222
202
0,04
0,10
0,06
0,13
0,04
0,08
73
74
75
76
77
78
79
24,09
30,10
30,77
30,87
32,59
34,37
34,67
C10H10O2
C15H24
C15H24
C15H24
C15H26O
C12H18O
162
204
204
204
222
178
0,04
0,33
0,17
0,04
0,33
0,03
0,10
80
81
82
34,76
35,01
36,09
C15H24
C7H6Cl2O
204
176
0,14
0,07
0,03
83
84
85
86
87
36,22
37,20
37,44
41,74
42,78
Epiglobulol
4,4-Dimetil-3-(3-metilbut-3eniliden)-2-metilen
bisiklo(4.1.0)heptan
Safrol
(-)--Selinen
Selina-3,7(11)diena
(-)-Kariofilen-(l1)
-Guaien
Tidak teridentifikasi
2-Propenol,3- (2,6,6 trimetil1-siklpheksen-1-yl)
Tidak teridentifikasi
-Selinen
Bisiklo(3.2.0)hept-2-en-6one,7,7-dikloro
Eudesm-7(11)-en-4-ol
4-Alil-1,2-diasetoksibenzen
Sedrenol
(+)--Siperone
Tidak teridentifikasi
C15H26O
C13H14O4
C15H24O
C15H22O
-
222
222
220
218
-
0,06
0,06
0,13
0,08
0,09
0,07
-
Tabel 2. Penggolongan komponen kimia antar fraksi minyak atsiri daun sirih
No
.
1.
2.
3.
4.
5
6
7
Golongan Senyawa
Monoterpena
Monoterpena Alkohol
Seskuiterpena
Seskuiterpena Alkohol
Turunan Fenil Propanoid
Lain - lain
Tidak teridentifikasi
Total
Keterangan: F1: Fraksi jam ke-1
F2: Fraksi jam ke-2
F3: Fraksi jam ke-4
F4: Fraksi jam ke-6
F1
1,63
0,37
24,49
6,00
66,07
1,16
0,28
100
Presentase (%)
F2
F3
0,12
0,09
0,10
0,06
44,36 49,21
11,26 15,15
42,54 32,83
1,45
2,09
0,17
0,57
100
100
F4
0,12
0,10
43,72
11,20
43,07
1,61
0,18
100
Bakteri uji
B. subtilis
S. epidermidis
S. mutan
Kontrol metanol
Tabel 4. Penentuan MIC fraksi minyak atsiri daun sirih terhadap bakteri uji
B. subtilis
Konsentrasi
MIC (%)
1
17,5
2
15,5
3
12,5
4
10
5
7,5
6
5
7
2,5
Kontrol pelarut*
No
F1
+
+
+
+
+
+
+
-
F4
+
+
+
+
+
+
+
-
Tabel 5. Penentuan MIC fraksi minyak atsiri daun sirih terhadap bakteri uji
S. epidermidis dan S. mutan
No
Konsentrasi
MIC (%)
Nilai MIC
Nilai MIC S.mutan
S.epidermidis
F1 F2 F3 F4 F1 F2 F3 F4
1
5
2
2,5
3
1
+
4
0,5
+
+
+
5
0,25
+
+
+
6
0,125
+
+
+
+
+
+
+
+
Kontrol pelarut*
Keterangan: F1: Fraksi jam ke-1
F2: Fraksi jam ke-2
F3: Fraksi jam ke-4
F4: Fraksi jam ke-6
-: tidak ada pertumbuhan bakteri
+ : ada pertumbuhan bakteri
*: 0,5% tween 80, 2% etanol absolut dan aquadest
Gambar 3. Nilai absorbansi asam nukleat dan protein fraksi jam ke-1
pada sel S .epidermidis
bakteri
S. epidermidis yang
Berlubang
(a)
(b)
(c)
Gambar 5. Morfologi sel S.epidermidis. (a) kontrol, (b) Sel
S.epidermidis setelah perlakuan 1 MIC, (c) Sel
S.epidermidis setelah perlakuan 2 MIC (perbesaran
10.000x). Tanda panah adalah terjadinya kebocoran.
5.2. Pembahasan
Sirih dikenal karena hampir semua bagian tanaman digunakan sebagai
obat, disamping sebagai ramuan makan sirih. Selain itu dianggap juga dapat
menguatkan gigi, mencegah gangguan perut, menambah ketahanan tubuh,
stimulan syaraf dan lain lain (Pudjiastuti, 1996). Pada penelitian ini telah
dilakukan isolasi fraksi minyak atsiri, identifikasi komponen kimia fraksi, dan
uji aktivitas antibakteri dari daun sirih dalam bentuk fraksi minyak atsiri
untuk mendapatkan alternatif antibakteri. Daun sirih yang digunakan dalam
penelitian ini merupakan daun sirih segar yang berasal dari Balitro,
Cimanggu, Bogor dan telah dideterminasi di Herbarium Bogoriense, Bidang
Botani, Puslit Biologi LIPI seperti yang tertera pada lampiran 1.
Metode yang digunakan untuk proses pemisahan komponen fraksi
minyak atsiri daun sirih adalah metode distilasi uap dan air (Sugiastuti, 2002;
Sulianti dan Chairul, 2002). Sebelum proses distilasi, daun sirih terlebih
dahulu disortasi dan dicuci untuk memisahkan dan menghilangkan pengotor
(13,89%)
dan
4-alil-1,2-diasetoksibenzen
sebagian komponen
pada aktivitas fraksi minyak atsiri terhadap bakteri yang diuji (Chamber,
2007). Semakin luas diameter hambatan tersebut menunjukkan semakin besar
daya antibakteri fraksi minyak atsiri daun sirih.
Dari hasil pengujian difusi cakram menunjukkan bahwa konsentrasi
50% masing masing fraksi minyak atsiri daun sirih dapat menghambat
pertumbuhan ketiga bakteri uji. Antara lain B. subtilis, S. mutan dan S.
epidermidis. Diameter penghambatan yang terbentuk antar tiap fraksi dan
bakteri berbeda. Fraksi 2 dan Fraksi 4 merupakan fraksi yang memiliki
sensivitas tertinggi terhadap ketiga bakteri uji (tabel 3). Hal ini dapat dilihat
dari besarnya zona bening yang terbentuk disekililing cakram uji .Sedangkan
bakteri yang memiliki sensitiviyas tertinggi terhadap semua fraksi minyak
atsiri daun sirih adalah S. mutan (Tabel 3). Aktivitas penghambatan yang
tinggi dari fraksi 2 dan fraksi 4 diduga karena kedua fraksi ini memiliki
kandungan senyawa minor (<5%) asam benzoat,2-hidroksi-,metil ester; kubeben; 3-alil-6-metoksifenil asetat dan 4-alil-1,2-diasetoksibenzen dengan
kandungan yang lebih tinggi daripada fraksi 1 dan 3 (tabel 1.)
Penentuan MIC menggunakan metode mikrodilusi (Maan dan
Markham, 1998; Taguri et al., 2006). Yaitu metode seri pengenceran dengan
penurunan kadar secara bertahap. Nilai MIC merupakan nilai terendah suatu
senyawa, dalam hal ini senyawa fraksi minyak atsiri yang dapat menghambat
pertumbuhan bakteri setelah inkubasi 24 jam (Chamber, 2007). Pada bakteri
B. subtilis dan S. epidermidis, hasil MIC masing masing fraksi tidak ada
perbedaan secara bermakna. Hasil pengujian mikrodilusi didapatkan nilai
MIC Fraksi 1 4 minyak atsiri sirih pada B. subtilis adalah > 17.5% (v/v),
4-alil-1,2-diasetoksibenzen,
asetat). Menurut
fenol,2-metoksi-4-1(1-propfenil)-
menduga
senyawa yang berperan sebagai antibakteri dalam minyak atsiri daun sirih
adalah isoeugenol dan p-allifen . Senyawa fenolik dapat berfungsi sebagai
antimikroba karena adanya gugus OH yang bersifat racun terhadap mikroba
dan semakin banyak gugus OH yang ada pada senyawa tersebut maka
senyawa tersebut semakin beracun bagi mikroba (Cowan, 1999).
Perubahan atau kerusakan pada sel bakteri oleh senyawa bakteri
umumnya dapat di amati dalam bentuk kebocoran sel. Kerusakan sel bakteri
merupakan hasil interaksi senyawa antibakteri dengan bagian sel tertentu.
Interaksi senyawa antibakteri tersebut dapat menyebabkan sejumlah
perubahan atau kerusakan pada sel bakteri yang berpengaruh pada mekanisme
inaktivasi bakteri. Pada dosis yang tidak mematikan, bakteri mengalami luka
(injury), terjadi sejumlah perubahan dan kerusakan struktur sel bakteri yang
akhirnya dapat mempengaruhi fungsi metabolisme sel, sedangkan pada
kerusakan yang parah dapat menyebabkan kematian sel.
UV-Vis
(Carson
et
al.,
2002).
Menurut
Burt
(2004) yang dikutip oleh Miksusanti (2009), Asam nukleat yang terdeteksi
pada panjang gelombang
dengan
pada panjang
disebabkan oleh adanya ikatan hidrogen, hidrofobik dan kation Mg2+ dan
Ca2+ bersama fosfolipida.
Seperti yang terjadi pada kebocoran sel, makin tinggi konsentrasi MIC
fraksi jam ke-1 (F1) minyak atsiri daun sirih yang digunakan, maka morfologi
sel bakteri juga semakin mengalami perubahan dibandingkan sel normal.
Kerusakan morfologi sel bakteri diamati dengan menggunakan SEM
(Fathillah et al., 2009 ). Pada S. epidermidis perbesaran 10.000 kali
menunjukkan dalam keadaan normal berbentuk bulat dengan permukaan yang
licin seperti yang terlihat pada gambar 4.a. Dengan adanya perlakuan
pemberian F1 minyak atsiri daun sirih 1 MIC, terjadi perubahan morfologi
pada membran sel nya yaitu sel menjadi berlubang dengan permukaan yang
masih rata (gambar 4.b). Sedangkan perlakuan pada konsentrasi 2 MIC, sel
berlubang dan permukaannya menjadi mengkerut dan kasar (gambar 4.c).
Dari hasil penelitian ini terlihat bahwa pada perlakuan konsentrasi 1 MIC F1
minyak atsiri daun sirih, belum menyebabkan sel bakteri rusak berat
dibandingkan dengan perlakuan 2 MIC. Walaupun terjadi kerusakan struktur
sel dan sel kehilangan isinya (ion Ca2+ dan K+), namun keseluruhan bentuk
sel masih dapat diamati.
BAB VI
KESIMPULAN DAN SARAN
6.1. Kesimpulan
1. Fraksi minyak atsiri daun sirih yang berasal dari Balitro, Cimanggu. Bogor
memiliki presentase kadar yang dihasilkan secara berurutan untuk fraksi
1,2,3 dan 4 sebesar 0,061%; 0,034%; 0,027% dan 0,015%. dan memiliki
komponen kimia
6.2. Saran
1. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut secara invivo untuk mengetahui
efektifitas dan toksisitasnya.
2. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut terhadap bakteri patogen lain untuk
mengetahui aktivitas antibakterinya.
DAFTAR PUSTAKA
Hertiani,T., dan Purwantini, A.2002. Hasil distilasi ekstrak etanol daun sirih
(Piper betle L) dari beberapa daerah di Yogyakarta dan aktivitas antijamur
terhadap Candida albicans.Majalah Farmasi Indonesia 13 (4) : 193-199.
Jawetz, E., Melnick, J.L., Adelberg, E.A. 1995. Medical Microbiology,
Mikrobiologi Kedokteran Edisi 20. Alih Bahasa: Edi Nugroho dan RF
Maulany. EGC, Jakarta
Mann, C.M dan Markham, J.L. 1998. A new method for determining the
minimum inhibitory concentration of essential oils. Journal of Applied
Microbiology 84. 538-544.
Miksusanti. 2009. Aktivitas dan mekanisme minyak atsiri Temu Kunci
(Kaempheria pandurata Roxb) serta inkoporasinya dalam pati sagu sebagai
film edibel antibakteri. Disertasi. IPB
Nalina, T., and Rahim, Z.H.A. 2007. The Crude Aqueos Extract of Piper betle L.
and its Antibacterial Effect Toward Streptococcus mutans. American
Journal of Biotechnology and Biochemistry 3(1). 2007. 10-15.
Novalny, D. 2006. Pengaruh ukuran rajangan daun dan lama penyulingan
terhadap rendemen dan karakteristik minyak sirih (Piper betle Linn.).
Skripsi. IPB
Parwata, I.O.A.M., Rita, WS., Yoga, R. 2009. Isolasi dan uji antiradikal bebas
minyak atsiri pada Daun sirih (Piper betle Linn.) secara spektroskopi ultra
violet-tampak. Jurnal kimia 3 (1), Januari 2009 : 7-13
Pratiwi, S.T. 2008. Mikrobiologi Farmasi. Jakarta : Erlangga
Pelczar, M.J., dan E.C.S, Chan. 1998. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Jilid 1. UI
Press. Jakarta.
Pudjiastuti, 1996. Tinjauan Hasil Penelitian Tanaman Obat di Berbagai Instituti.
Jilid 111. Departemen Kesehatan. Jakarta..
Rachmat, M., Hartati, M.S., dan Wahyuono, S., 2000. Aktivitas Antibakteri dan
Sediaan Obat Kumur Beriisi Minyak Atsiri daun Sirih (Piper betle Linn.)
dan Analisis komposisi Minyak Atsirinya. Majalah Farmasi Indonesia
Vol.II, N0.4, 2000 , 235-240.
Rodriguez-Tudela J.L., Barchiesi, F., Bille, J., Chryssanthou, E., Cuence, M.,
Denning, D., Donelly, J.P., Dupont, B., Fegeler, W., Moore, C., Richardson,
M., Verwiej, P.E. 2002. Method for The Determination of Minimum
Inhibitory Concentration (MIC) by Broth Dilution of Fermentative Yeasts.
EUCAST. E.Dis 7.1
Sastroamidjojo S., 1997. Obat Asli Indonesia. Dian Rakyat. Jakarta.
LAMPIRAN
Diperoleh distilat
Ditambahkan NaSO4
anhidrat
Dihitung presentase
kadarnya
Lampiran 2. Lanjutan
2.2 . Pembuatan Stok dan Suspensi Bakteri Uji
Bakteri uji
Lampiran 2. Lanjutan
2.3. Penentuan Diameter Daerah Hambat Bakteri
Lampiran 2. Lanjutan
2.4. Pengenceran suspensi bakteri (Pengenceran 3 kali)
Suspensi bakteri yang telah
diinkubasi shaker 18 jam
1 ml Suspensi bakteri + 9 ml
aquadest
101
1 ml Suspensi bakteri + 9 ml
aquadest
102
1 ml Suspensi bakteri + 9 ml
aquadest
103
Lampiran 2. Lanjutan
2.5. Penentuan MIC
Kontrol
Penentuan MIC
Ditambah suspensi
bakteri
Media
Media+Inokulum
Media+pelarut
Media+Inokulum
+Pelarut
Lampiran 2. Lanjutan
2.6. Analisis Kebocoran Protein, Asam Nukleat dan Ion Logam
10 ml Suspensi bakteri
Lampiran 2. Lanjutan
2.7. Analisis perubahan morfologi sel
Pelet bakteri dari analisis sebelumnya direndam dalam
glutaraldehid 2,5% selama 4 jam dan disentrifus
Lampiran 3. Hasil uji sensitivitas minyak atsiri daun sirih terhadap ketiga jenis
bakteri uji gram positif
No
Bakteri uji
Bacillus subtilis
Staphylococcus
epidermidis
Streptococcus
mutan
Ket : F1: Fraksi jam ke-1 F2: Fraksi jam ke-2 F3: Fraksi jam ke-4
F4: Fraksi jam ke-6 K : Kontrol metanol
Lampiran 4. Pertumbuhan bakteri uji terhadap fraksi minyak atsiri daun sirih
dengan metode plating
No Bakteri uji
1
B.subtilis
2
S.epidermidis
3
S.mutan
Keterangan:
: Media
: Media + Pelarut
: Media + Inokulum
: Media + Inokulum + Pelarut
: Fraksi jam ke-1 (F1)
: Fraksi jam ke-2 (F2)
: Fraksi jam ke-4 (F3)
: Fraksi jam ke-6 (F4)
Hasil MIC
Lampiran 5. Nilai absorbansi asam nukleat dan protein fraksi jam ke-1 pada sel
S. epidermidis
Konsentrasi
Kontrol
1MIC
2MIC
Nilai Absorban
260 nm
280 nm
0.423
0.437
1.539
1.680
2.498
3.010
Lampiran 6. Hasil pengukuran konsentrasi ion logam Ca2+ dan K+ fraksi jam ke-1
pada supernatan biakan S.epidermidis konsentrasi 1 MIC dan 2 MIC
b. Larutan induk
: 17,5% X 5 = 87,5%
: 250 l
Konsentrasi 17,5%
87,5% = 5
250 = 50 l Lar. uji, 10 l Media dan 100 l inokulum
17,5%
5
Konsentrasi 15%
87,5% = 5,83
250 = 42,9 l Lar. uji,107,1 l Media dan 100 l inokulum
15%
5,83
Konsentrasi 12,5%
87,5% = 7
250 = 35,7 l Lar. uji, 117,3 l Media dan 100 l inokulum
12,5%
7
Konsentrasi 10%
87,5% = 8,75
250 = 28,6 l Lar. uji, 121,4 l Media dan 100 l inokulum
10%
8,75
Konsentrasi 7,5%
87,5% = 11,67
250 = 21,4 l Lar. uji, 128,6 l Media dan 100 l inokulum
7,5%
11,67
Konsentrasi 5%
87,5% = 17,5
5%
Konsentrasi 2,5%
87,5% = 35
250 = 7,1 l Lar. uji, 142,9 l Media dan 100 l inokulum
2,5%
35
b. Larutan induk
: 5% X 5 = 25%
: 250 l
Konsentrasi 5%
25% = 5
5%
Konsentrasi 2,5%
25% = 10
250 = 25 l Lar. uji,125 l Media dan 100 l inokulum
2,5%
10
Konsentrasi 1%
25% = 25
1%
Konsentrasi 0,5%
25% = 50
0,5%
Konsentrasi 0,25%
25% = 100
250 = 2,5 l Lar. uji, 147,5 l Media dan 100 l inokulum
0,25%
100
Konsentrasi 0,125%
25% = 200
250 = 1,3 l Lar. uji, 148,7 l Media dan 100 l inokulum
0,125%
200