LAPORAN RESMI

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI INDUSTRI

Materi :
ASAM SITRAT

Oleh :
Ruth Febrina Sondang Aritonang 21030112120009
Farhan Ramadhan

21030112130116

Intan Permata Sari Lumbanraja

21030112120030

LABORATORIUM MIKROBIOLOGI INDUSTRI

JURUSAN TEKNIK KIMIA FAKULTAS TEKNIK
UNIVERSITAS DIPONEGORO
SEMARANG
2014

Asam Sitrat
HALAMAN PENGESAHAN
Laporan resmi berjudul ASAM SITRAT yang disusun oleh :
Kelompok

Nama / NIM :

6 / Selasa
Ruth Febrina Sondang Aritonang

21030112120009

Farhan Ramadhan

21030112130116

Intan Permata Sari Lumbanraja

21030112120030

Telah diterima dan disetujui pada :

Hari

Tanggal

Laporan disusun sebagai syarat untuk mengikuti responsi dan seminar Laboratorium
Mikrobiologi Industri.
Semarang, Desember 2014
Mengetahui
Asisten Pembimbing

Laboran Laboratorium

Dosen Pembimbing

Mikrobiologi Industri

Ganang Setyabudi
NIM

Laboratorium Mikrobiologi Industri

Jufriyah, ST
NIP

Ir. Hantoro Satriadi, MT

NIP

ii

Asam Sitrat
RINGKASAN

Asam sitrat adalah asam organik lemah yang terdapat dalam daun dan
tumbuhan bergenus citrus.asam sitrat mudah larut dalam air dan alcohol.penggunaan
asam in sangat luas di dunia industry misalnya sebagi bahan tambahan di idustri
makanan juga sebagai bahan tambahan industry juga sebagai bahan pelarut aspiri dan
bahan multivitamin dalam industri farmasi
Asam sitrat dapat membentuk berbagai senyawa ester dan beebagai jenis
turunan lainya seperti aniline dan asam klorida. Aspergilus niger merupakanjamur
multiseluler yang membentuk suatu anyaman. Aspergillus niger merupakan jamur yang
digunakan untuk membentuk asam sitrat .Terdapat dua reaksi dalam pembuatan asam
sitrat yaitu reaksi pembentukan dan reaksi pemurnian
Bahan yang digunakan yaitu ampas buah nanas,sekam padi bekatul ,urea
,KH2PO4 ,Aspergillus niger Ca(OH2),H2SO,NaOH,dan aquadest dan alat yang kami
gunakan adalah beaker gelas, erlemeyer, cawan petri, gelas ukur, pipet tetes, buret,
klem, statif. Langkah-langkahnya adalah siapkan sumber karbohidrat timbang dan
tambahkan nutrient sesuai variabel tambahkan aquadest hingga lembab,lalu atur pH
tutup dengan aluminium foil dan sterilkan di autoclave biarkan hingga pada suhu kamar
lalu Tanami dengan spora.inkubasi selama 7 hari pada suhu 280c tambahkan aquadest,
saring dan ambil filtrat lakukan analisis hasil
Dari percobaan didapat bahwa ketiga variabel mengalami peningkatan
volume titrat khususnya variabel III ,pH dari ketiga variabel adalah fluktuatif
,peningkatan pH terjadi karena penambahan pH dan penuruna pH disebabkan karena
fermentasi yang sesuai,media yang cocok digunakan adalah ampas buah nanas pH 4
Kesimpulan dari percobaan ini adalah pH medium meningkatkan
kebutuhan titran,penurunan pH karena aktivitas fermentasi sesuai media ampas lebih
baik karena baik sebagai tempat hidup spora ,dan saran yang kami berikan adalah
pengukuran volume titran harus teliti.

Kata kunci: Asam, sitrat, aspergillus, fermentasi

Laboratorium Mikrobiologi Industri

iii

Asam Sitrat
SUMMARY

Citric acid is an organic acid found in the citrus genus. Citric acid is soluable in
water and alcohol. It is been used in the world of industry as a food additive as well as
aspirin and multivitamin ingredients in the pharmaceutical industry.
Citric acid can form various esters and other derivatives such as anilin.
Aspergillus niger is a fungus that is used to form citric acid .There are two reactions in
the manufacture of citric acid, formation and purification.
The materials used are the dregs of pineapple, rice husk bran, urea, KH2PO4,
Aspergillus niger Ca (OH2), H2SO4, NaOH, and distilled water. The tools are beaker
glass, erlemenyer, petri dish, measuring cup, pipette, burette , clamps, and stative. First
weigh carbohydrate source and add the appropriate variable nutrient add distilled water
until moist, adjust the pH. Cover with aluminum foil and sterilize in an autoclave. Then
let up at room temperature and plant with the spora. Incubate for 7 days at a
temperature 280C. Last, add distilled water, filtered and take the filtrate for the analysis.
From the experiment, we found that the three variables underage an increased
titrant volume particular variable, the pH of the three variables are fluctuative, ,
increased of the pH occurs because the addition of urea and decreased pH caused by
appropriate fermentation, suitable medium used was pineapple fruit pulp pH 4.
The conclusion of this experiment is the pH of the medium increases the need
titrant, a decrease in pH due to the activity of fermentation lees media better fit as well
as a place to live spores, and the advice we give is the measurement of the volume of
titrant to be careful.

Keyword: acid, citric, fermentation

Laboratorium Mikrobiologi Industri

iv

Asam Sitrat
PRAKATA

Puji syukur kami panjatkan kepada Tuhan Yang Maha Esa berkat rahmat dan
hidayahnya

sehingga

kami

dapat

menyelesaikan

Laporan

Resmi

Praktikum

Mikrobiologi Industri yang berjudul Asam Sitrat dengan lancar.

Penulis menyadari bahwa tanpa bantuan dan kerjasama dari berbagai pihak,
maka laporan ini tidak akan terselesaikan. Oleh karena itu dalam kesempatan ini penulis
mengucapkan terimakasih kepada :
1. Bapak selaku dosen pembimbing materi asam asetat.
2. Ganang Setyabudi selaku asisten pengampu materi asam sitrat.
3. Segenap teman-teman yang telah memberikan dukungan baik materil
maupun spiritual.
Penulis berharap makalah ini dapat bermanfaat dan menambah wawasan bagi
segenap pembaca umumnya. Penulis menyadari bahwa makalah ini masih jauh dari
sempurna, oleh karena itu kritik dan saran dari berbagai pihak sangat diharapkan untuk
menuju kesempurnaan makalah ini.

Semarang, Desember 2014

Penulis

Laboratorium Mikrobiologi Industri

Asam Sitrat
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL............................................................................................... i
HALAMAN PENGESAHAN ................................................................................. ii
RINGKASAN ......................................................................................................... iii
SUMMARY ............................................................................................................ iv
PRAKATA............................................................................................................... v
DAFTAR ISI ........................................................................................................... vi
DAFTAR TABEL.................................................................................................... viii
DAFTAR GAMBAR .............................................................................................. ix
BAB I PENDAHULUAN
I.1 Latar Belakang ............................................................................................ 1
I.2 Tujuan Percobaan ........................................................................................ 2
I.3 Manfaat Percobaan ...................................................................................... 2
BAB II TINJAUAN PUSTAKA
II.1 Pengertian Asam Sitrat ............................................................................... 3
II.2 Teori Aspergillus Niger .............................................................................. 3
II.3 Reaksi Pembuatan Asam Sitrat ................................................................... 4
II.4 Hal-Hal yang Berpengaruh Pada Fermentasi Asam Sitrat ......................... 4
II.5. Fungsi Reagen yang Digunakan ................................................................ 5
BAB III METODE PERCOBAAN
I.1 Bahan........................................................................................................... 10
I.2 Variabel ....................................................................................................... 10
I.3 Pengambilan Sampel ................................................................................... 10
I.4 Parameter yang Diamati .............................................................................. 11
I.5 Alat dan Bahan ............................................................................................ 11
I.6 Gambar Alat ................................................................................................ 12
I.7 Cara Kerja ................................................................................................... 12
BAB IV HASIL PERCOBAAN DAN PEMBAHASAN

Laboratorium Mikrobiologi Industri

vi

Asam Sitrat
I.1 Hasil Percobaan ........................................................................................... 14
I.2 Pembahasan ................................................................................................. 15
BAB V PENUTUP
I.1 Kesimpulan ................................................................................................. 18
I.2 Saran ............................................................................................................ 18
DAFTAR PUSTAKA .............................................................................................. 19
LAMPIRAN
A. LEMBAR PERHITUNGAN ....................................................................... A1
B. LAPORAN SEMENTARA ........................................................................ B1
C. KUANTITAS REAGEN ............................................................................. C1
D. REFERENSI
E. LEMBAR ASISTENSI

Laboratorium Mikrobiologi Industri

vii

Asam Sitrat
DAFTAR TABEL
Tabel 4.1 Analisa hasil percobaan
Tabel 4.2 . Berat endapan Cu Sitrat setelah di oven dan kebutuhan H2SO4

Laboratorium Mikrobiologi Industri

viii

Asam Sitrat
DAFTAR GAMBAR

Grafik IV.2.1 hubungan antara hari Vs volume titran

Grafik IV.2.2 hubungan antara hari vs pH
Grafik 4.3 perbandingan antara ampas nanans dengan sari buah nanas
Grafik 4.2.4 perbandingan antara ampas pH 3 dengan amapas pH 4

Laboratorium Mikrobiologi Industri

ix

Asam Sitrat
BAB I
PENDAHULUAN
I.1

Latar Belakang
Asam sitrat (2-dihidroxypane-1,2,3-tricarboxylic acid) merupakan asam organik

lemah yang ditemukan pada daun dan tumbuhan bergenus Citrus. Asam sitrat mudah
larut dalam air, alkohol, dan etanol. Asam sitrat tidak berbau dan terasa asam.
Penggunaan dari asam sitrat ini cukup luas di dunia industri, misalnya digunakan
sebagai bahan tambahan dalam industri makanan, juga digunakan

sebagai pelarut

aspirin dan bahan pengisi untuk multivitamin dalam industry farmasi. Asam sitrat ini
juga dapat digunakan sebagai bahan pengawet alami pada keju dan sirup.
Asam sitrat dapat dibuat melalui fermentasi dengan mengguakan Aspergillus
niger. Aspergillus niger mampu mensintesa asam sitrat dalam medium fermentasi
ekstraseluler dengan konsentrasi yang cukup tinggi, jika dibiakkan dalam media yang
kadar garamnya rendah dan mengandung gula sebagai sumber karbon.
I.2

Tujuan percobaan
1. Membuat asam sitrat dengan fermentasi menggunakan Aspergillus niger
2. Mengetahui bagaimana pengaruh waktu fermentasi tehadap pH.
3. Mengetahui perbandingan antara sumber karbohidrat ampas buah dan sari buah
nanas

I.3

Manfaat Percobaan
1. Mahasiswa mampu mengetahui cara membuat asam sitrat dengan fermentasi
menggunakan Aspergillus niger.
2. Mahasiswa dapat mengetahui pengaruh waktu fermentasi terhadap pH
3. Mahasiswa dapat mengetahui perbandingan antara sumber karbohidrat ampas
buah dan sari buah nanas

Laboratorium Mikrobiologi Industri

Asam Sitrat
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
II.1 Pengertian Asam Sitrat
Asam sitrat adalah asam organik yang secara alami terdapat pada buahbuahan seperti jeruk, nenas dan pear. Asam sitrat pertama kali diekstraksi dan
dikristalisasi dari buah jeruk, sehingga asam sitrat hasil ektraksi dari buah-buahan ini
dikenal sebagai asam sitrat alami. Asam sitrat merupakan asam organik yang
polifungsional, dimana dalam satu molekulnya terdapat satu gugus hidroksil dan tiga
gugus karboksil sehingga digolongkan sebagai asam hidroksi yang berbasa tinggi
(Othmer, 1967)
Asam sitrat dapat membentuk berbagai jenis senyawa ester dan berbagai
jenis turunan lainnya seperti amida dan asil klorida. Beberapa jenis senyawa ester
adalah trimetil sitrat, trietil sitrat, dan lain-lain. Sebagai suatu alkohol, gugus
hidroksil pada asam sitrat sukar mengalami esterifikasi secara langsung dengan asam
karboksilat dengan katalis asam anorganik (esterifikasi Fischer). Tetapi esterifikasi
dapat dilakukan dengan jalan mengubah asam karboksilat menjadi derivatnya,
misalnya asil klorida, anhidrida, atau dengan jalur esterifikasi yang lain (Holleman,
1970)
II.2 Teori Aspergillus Niger
Aspergillus niger merupakan jamur multiseluler (mempunyai inti lebih dari
satu) yang membentuk benang-benang hifa/filament. Kumpulan dari hifa disebut
miselium yang membentuk suatu anyaman. Hifa yang dibentuk ada yang bersekat
ataupun tidak bersekat. Hifa yang berada diatas permukaan disebut hifa aerial yang
berfungsi sebagai alat perkembangbiakan. Tidak mempunyai klorofil dan hidup
heterotrof (Fardiaz, 1989 dalam Dewi 2012). Aspergillus niger memilki bulu dasar
berwarna putih atau kuning denganlapisan konidiospora tebal berwarna coklat gelap

Laboratorium Mikrobiologi Industri

Asam Sitrat
sampai hitam. Kepala konidia berwarna hitam, bulat, cenderung memisah menjadi
bagian-bagian yang lebih longgar dengan bertambahnya umur. Konidiospora
memiliki dinding yang halus, hialin juga berwarna coklat.

II.3 Reaksi Pembuatan Asam Sitrat

1. Reaksi Pembentukan
(C6H10O5)n(5) + n(H2O)(l) (C12H22O11)(s)
Karbohidrat

sukrosa

(C12H22O11)(s) + (H2O)(l) (C6H12O6)(s) + (C6H12O5)(s)

Glukosa

fruktosa

(C6H12O6)(s) + O2 (g) (C6H8O7)(s) + 2 (H2O)(l)

Asam sitrat
2. Reaksi Pemurnian
(C6H8O7)(s) + 3(Ca(OH)2)(l) (Ca3(C6H5O7)(2))(s) + 6(H2O)(l)
Ca. Sitrat
(Ca3(C6H5O7)(2))(s) + 3(H2SO4)(l) 3(CaSO4)(s) + 2 (C6H8O7)(s)
Ca. Sulfat

As. Sitrat

(C6H8O7)(s) + 3(NaOH)(l) (Na3(C6H8O7))(s) + 3 (H2O)(l)

II.4 Hal-Hal yang Berpengaruh Pada Fermentasi Asam Sitrat

a) Waktu 7 hari adalah optimum, bila kurang dari 7 hari, bahan baku belum
terfermentasi semua. Bila lebih mungkin asam sitrat berubah menjadi asam
oksalat.
b) Mikroba
Pada percobaan ini digunakan jamur Aspergillus Niger. Keuntungan dari
penggunaan jamur ini adalah penanganannya mudah, dapat digunakan bahan
baku yang murah, yield tinggi dan konsisten, serta ekonomis.

Laboratorium Mikrobiologi Industri

Asam Sitrat
c) Jangan menaruh petri dalam keadaan keadaan terbalik, karena percobaan dalam
surface culture.
d) Konsentrasi gula awal
Konsentrasi gula awal menentukan yield asam sitrat dan asam organik lain.
Untuk Aspergillus Niger adalah 15-18%, jika lebih dari 18% tidak ekonomis dan
jika kurang dari 15% terbentuk asam oksalat.
e) pH
Pengaturan pH sangat penting dalam fermentasi. Ini disebabkan pada pH tertentu,
strerilisasi mudah dilakukan. Sterilisasi mula-mula dilakukan pada pH 2,2 atau
lebih rendah. Sebagai pengatur digunakan asam klorida. Sedang pH yang baik
3,4 - 4,5. Pada pH tinggi dihasilkan asam oksalat. Untuk kondisi tertentu (misal
percobaan) kadang akan menghasilkan enzim yang hanya berfungsi mengubah
karbohidrat menjadi asam sitrat. Untuk kondisi lain akan dihasilkan enzim yang
lain pula.
f) Pemberian Oksigen
Pemberian oksigen yang terlalu banyak menimbulkan efek merugikan bagi hasil
asam sitrat. Sebaliknya, bila pemberian oksigen terlalu sedikit akan kurang
menguntungkan.
g) Suhu
Suhu yang baik adalah 26 28oC. Jika lebih dari 30oC, keasaman naik dan
akibatnya ada asam oksalat.
h) Komposisi Media Fermentasi
Komponen

Kuantitas

Sukrosa

125-150

Amonium Nitrat

2,0-2,5

Potassium Dihidrogen Pospat

0,75-1,0

Laboratorium Mikrobiologi Industri

Asam Sitrat
Magnesium Sulfat
HCl

0,2-0,25
Untuk pengaturan pH

II.5. Fungsi Reagen yang Digunakan

A. Fungsi Penambahan Bekatul dan Sekam

Penambahan sekam dalam proses fermentasi asam sitrat berfungsi untuk
membentuk rongga udara dalam media fermentasi. Pada proses fermentasi asam sitrat
yang menggunakan Aspergillus niger bersifat aerobik dimana proses fementasi
membutuhkan oksigen. Hal ini berarti pertumbuhan Aspergillus niger akan semakin
baik jika oksigen di dalam media fermentasi semakin banyak . Adanya sekam maka
rongga udara pada media fermentasi semakin banyak dan merata ke semua bagian
maka oksigen juga semakin banyak dan merata. Hal ini berpengaruh dengan
pertumbuhan Aspergillus niger yang semakin baik dengan adanya oksigen yang
banyak dan merata maka asam sitrat yang dihasilkan semakin banyak. Sedangkan
penambahan nutrient nitrogen dari senyawa urea yang semakin banyak maka
dihasilkan asam sitrat yang terbaik. Hal ini disebabkan nitrogen merupakan unsur
makromolekul yang paling banyak dibutuhkan bagi pertumbuhan Aspergillus niger.
Semakin banyak nutrisi nitrogen maka laju pertumbuhan mikroba meningkat dan
mengakibatkan jumlah pertumbuhan mikroba meningkat dan mengakibatkan jumlah
gula terkonversi menjadi asam sitrat semakin bertambah. Selain itu penambahan
nutrien nitrogen dari senyawa urea dapat berfungsi untuk menurunkan pH media
fermentasi karena pada proses fermentasi asam sitrat dibutuhkan pH yang rendah.
Jadi dengan pH yang rendah dapat dihasilkan asam sitrat dengan lebih optimal.
(Madona ,2009)

Laboratorium Mikrobiologi Industri

Asam Sitrat
B. Fungsi Penambahan KH2PO4, MgSO4, dan Urea
Urea mengandung unsur nitrogen yang merupakan unsur makromolekul
yang paling banyak dibutuhkan bagi pertumbuhan Aspergillus niger. Semakin
banyak nutrisi nitrogen maka laju pertumbuhan mikroba meningkat dan
mengakibatkan jumlah pertumbuhan mikroba meningkat dan mengakibatkan
jumlah gula terkonversi menjadi asam sitrat semakin bertambah. Selain itu
penambahan nutrien nitrogen dari senyawa ammonium nitrat dapat berfungsi
untuk menurunkan pH media fermentasi karena pada proses fermentasi asam
sitrat dibutuhkan pH yang rendah. Jadi dengan pH yang rendah dapat dihasilkan
asam sitrat dengan lebih optimal (Madona, 2009).
Penambahan nutrien magnesium dari senyawa magnesium sulfat yang
semakin banyak maka dihasilkan asam sitrat yang baik juga setelah penambahan
nutrien nitrogen dari senyawa ammonium nitrat. Hal ini disebabkan magnesium
dapat mengubah glukosa menjadi asam piruvat yang menyebabkan pembentukan
asam sitrat menjadi lebih cepat. Sedangkan pada penambahan nutrien phospat
dari senyawa kalium phospat yang semakin banyak maka dihasilkan asam
sitrat yang kurang optimal. Hal ini disebabkan penambahan phospat yang terlalu
banyak akan mengakibatkan

pembentukan asam-asam lain selain asam sitrat

sehingga asam sitrat yang dihasilkan kurang optimal (Madona, 2009).

Laboratorium Mikrobiologi Industri

Asam Sitrat
BAB III
METODOLOGI PERCOBAAN
3.1 Bahan
1.

Bonggol Nanas @ 15

7.

MgSO4. 7H2O (2gr, 2gr, 2gr)

gram
2.

Bekatul (10gr, 10gr, 10gr)

8.

Ca(OH)2

3.

Urea (1.5gr, 1.5gr, 1.5gr)

9.

H2SO4

4.

Sekam

10. NaOH (0.1 N)

Padi(10gr,10gr,

10gr)
5.

KH2PO4 (1gr, 1gr, 1gr)

6.

Aspergillus

niger

11. Aquadest

(1ml

diencerkan 3ml)
3.2 Alat
1.

Erlenmeyer

6.

Beaker glass

2.

Buret, statif, klem

7.

Pipet

3.

Gelas ukur

8.

Autoclave

4.

Petridish

9.

Oven

5.

Inkubator untuk fase cair

2.6 Gambar Alat

1.

2.

Laboratorium Mikrobiologi Industri

3.

4.

Asam Sitrat

5.

6.

7.

8.

9.
III.4 Variabel Operasi
Variabel 1

Variabel 2

Variabel 3

KH2PO4

1 gr

1 gr

MgSO4

2 gr

2 gr

2 gr

Urea

1 gr

1.5 gr

1.5 gr

Bekatul

10 gr

10 gr

10 gr

Sekam

10 gr

10 gr

10 gr

PH awal

Hari

gr

III.5 Cara kerja

1. Pembuatan biakan kapang/starter/suspense spora

Siapkan media untuk pembiakan kapang (mold).

Buat biakan Aspergillus Niger pada media tersebut.

Inkubasikan pada 28o C atau 30o C selama 2-4 hari.

Larutkan spora hasil pembiakan di atas dengan air steril.

Laboratorium Mikrobiologi Industri

Asam Sitrat
Agar selalu dapat dipertahankan perccobaan dalam keadaan aseptic,
lakukanlah pembuatan suspense spora diatas dalam keadaan aseptic.
2. Penyiapan media
Fermentasi pada media semi padat
1. Siapkan sumber karbohidrat yang akan digunakan. Bila sumber karbohidrat
berupa buah, buah dikupas lalu dihaluskan dan airnya dibuang/dituang
dengan cara diperas sampai sedikit kering.
2. Setelah agak kering, timbang sumber karbohidrat sesuai variabel dan
kedalamnya ditambahkan nutrient nutrient (urea, sekam padi, bekatul,
MgSO4 , KH2PO4 ) sesuai variabel. Aduk sampai homogen di dalam
beakerglass.
3. Tambahkan aquadest hingga media menjadi lembab (sampai becek).
4. Atur pH sesuai variabel.
5. Tutup beaker glass dengan alumunium foil dan bungkus dengan kertas koran,
sterilkan dengan autoclave pada suhu 1200C - 1210C.
6. Biarkan dingin pada suhu kamar. Setelah dingin tanami media dengan
suspensi spora di dalam lemari aseptik sebanyak 5 mL. Aduk yang baik agar
suspense spora dapat tersebar merata dalam media, lalu tutup kembali dengan
alumunium foil.
7. Inkubasikan selama x hari pada 280 300C (dalam incubator untuk media
semipadat).
8. Setelah selesai inkubasi, tambahkan aquadest ke dalam beaker glass sedikit
demi sedikit dan lumat semua isi beaker glass hingga tercampur merata.
Volume aquadest yang ditambahkan maksimal 50 mL .

Laboratorium Mikrobiologi Industri

Asam Sitrat
9. Saring dengan kertas saring atau pompa vakum dan filtratnya ditest untuk
asam sitratnya.
Analisa hasil
1. Panaskan filtrate yang diperoleh dari percobaan di atas sampai 70oC.
Tambahkan larutan Ca(OH)2 sebanyak 10 mL. Buat larutan Ca(OH)2 dengan
melarutkan 5gr Ca(OH)2 dengan aquadest sampai 50 mL (jaga temperature
konstan).
2. Endapan yang timbul cepat-cepat disaring (dalam keadaan panas 70oC),
kemudian dicuci dengan air panas 70oC. Endapan tersebut adalah kalsium
sitrat.
3. Keringkan endapan di oven kemudian timbang beratnya.Catat beratnya.
4. Endapan tersebut dilarutkan dengan H2SO4 encer, sesuai perhitungan, saring
dengan kertas saring. Filtratnya merupakan asam sitrat dan endapannya
adalah kalsium sitrat.
5. Untuk mengetahui berat asam sitrat yang diperoleh pada percobaan,titrasi
filtrate tersebut dengan NaOH 0,1 N. Catat kebutuhan titran.
6. Menghitung kebutuhan H2SO4 encer
Ca3(C6H3O7)2 (s) + 3H2SO4 (l) 3CaSO4 (s) + 2C6H8O7 (s)
Amol

3A mol

Buat larutan H2SO4 dengan melarutkan 5 mL H2SO4 pekat menjadi 100 mL.
gr H2SO4 = vol H2SO4 . H2SO4 . kadar H2SO4
= 5 mL. 1,84 gr/cm3 . 100/98
= 9,39 gr
Molar H2SO4

Laboratorium Mikrobiologi Industri

10

Asam Sitrat
=

= 0,958 M
Molar H2SO4

0,958 M

= ..L = ..mL

Laboratorium Mikrobiologi Industri

11

Asam Sitrat
BAB IV
HASIL PERCOBAAN DAN PEMBAHASAN

IV.1 Hasil Percobaan

Tabel 4.1 Analisa hasil percobaan
Variabel

Parameter yang di

Hari 1

Hari 2

Hari 3

Hari 4

Hari 5

pH

2.67

2.698

2.284

2.268

2.11

Volume titran

2.6

3.2

3.3

3.6

7.5

pH

2.25

2.26

2.27

2.678

2.94

3.8

2.7

2.5

16

2.432

2.83

2.389

2.3

2.89

1.7

1.9

20

ukur

Ampas
pH 3

Sari Buah

Volume titran

pH 3
pH
Ampas

Volume titran

pH 4

Tabel 4.2 . Berat endapan Cu Sitrat setelah di oven dan kebutuhan H2SO4
Variabel

Berat (gram)

H2SO4 (ml)

Ampas pH 3

5.05

31.75

Sari buah pH 3

8.03

50.10

Ampas pH 4

4.99

31

Laboratorium Mikrobiologi Industri

12

Asam Sitrat
IV. 2. Pembahasan

Volume NaOH

IV.2.1. Hubungan antara waktu vs volume titran

25
20
15
10
5
0

Variabel 1 ampas pH 3
variabel 2 sari buah
pH 3
0

variabel 3 Ampas pH 4

Hari

Grafik IV.2.1 hubungan antara hari Vs volume titran

Berdasarkan grafik diatas,dapat diketahui bahwa ketiga variabel mengalami
peningkatan kadar asam sitrat yang ditandai dengan peningkatan volume titran.pada
variabel I diperoleh volume titran yaitu 2,6 ml;3,2 ml ;3,3 ml ;3,6 ml ;7.5 ml, pada
variabel II diperoleh volume titran 4 ml;3,8 ml;2,7 ml;2,5 ml;16 ml dan pada variabel III
diperoleh volume titran 1,7 ml;1,9 ml;2 ml;3 ml;20 ml
Dari grafik tersebut dapat dilihat juga bahwa pada hari terakhir variabel III yaitu
ampas buah dengan pH 4 mengalami peningkatan volume titran yang signifikan.hal ini
karena pH medium sangat penting dalam proses fermentasi sebab merupakan awal spora
mulai terbentuk untuk memulai germinasi. proses fermentasi asam sitrat dibantu oleh
Aspergillus niger yang bias hidup di pH 2,8 8,8 ,maka variabel III lebih cocok untuk
pertumbuhan Aspergillus niger karena berada pada pH medium.

(Haryati,2011)

Laboratorium Mikrobiologi Industri

13

Asam Sitrat
IV.2.2. Hubungan antara waktu VS pH
4

variabel 1 ampas
pH 3

pH

variabel 2 sari buah

pH 3

2
1

variabel 3 ampas
pH 4

0
0

hari

Grafik IV.2.2 hubungan antara hari vs pH

Berdasarkan grafik diatas dapat dilihat bahwa ketiga variabel memiliki pH yang
fluktuatif .pada variabel I di dapat pH 2.67 ml;2.69 ml;2.28 ml;2.26 ml;2.11 ml,dan pada
variabel II didapat pH 2.25 ml;2.26 ml;2.27 ml;2.68 ml;2.94 ml dan pada variabel III
didapat pH 2.432 ml ; 2.83 ml 2.389 ml 2.3 ml ;2.89 ml .pada hari terakhir variabel I
mengalami penurunan pH sedangkan variabel II dan III mengalami peningkatan pH.
Penurunan pH terjadi karena aktivitas fermentasi yang sesuai dengan
pertumbuhan Aspergillus niger pada pH akibat penurunan fermentasi asam sitrat karena
penambahan urea.urea teruarai menjadi NH3+ dan CO2. NH3 bereaksi dengan air
membentuk NH4OH yang bersifat basa
(emmanuella,2010)

Laboratorium Mikrobiologi Industri

14

Asam Sitrat
Perbandingan

pH

IV.2.3.

antara

ampas

nanas

3.5
3
2.5
2
1.5
1
0.5
0

dengan

sari

buah

nanas

variabel 1 ampas nanas pH

3
variabel 2 sari buah pH 3

hari

Grafik 4.3 perbandingan antara ampas nanans dengan sari buah

nanas

Dari grafik didapat bahwa variabel I mengalami penurunan pH sedangkan

variabel II mengalami kenaikan pH. dari referensi diketahui bahwa Aspergillus nuger
hidup dalam bentuk spora dimana Aspergillus niger memiliki hifa bersekat yang akan
menempel pada substrat.dari percobaan menggunakan ampas dan sari buah ,Aspergillus
niger bekerja lebih baik dalam substrat ampas karena hofa Aspergillus niger dapat
menempel dengan lebih baik.menempelnya hifa pada substrat padat akan membuat
konversi menjadi asam sitrat lebih optimum an menghasilkan yield yang lebih besar

(vigilogu,2006)

Laboratorium Mikrobiologi Industri

15

Asam Sitrat
IV.2.4. Perbandingan antara ampas nanas pH 3 dengan sari buah nanas pH 4

pH

4
3

variabel I ampas pH 3

variabel 3 ampas pH 4

1
0
0

Hari

Grafik 4.2.4 perbandingan antara ampas pH 3 dengan amapas pH 4

Dari grafik dapat dilihat bahwa penurunan pH terjadi pada media ampas pH 3
daan pH 4 hal ini terjadi penurunan pH disetiap fermentasi pada fermentasi hari 1 hari
ke 5 pH semakin berkurang pH terakhir dari pH 3 adalah 2,10 dan pH 4 adalah 2.19.hal
ini menunjukan konversi yang terakumulasi mejadi asam sitrat .pada hal ini menunjukan
bahwa yang paling baik digunakan dalam media pertumbuhan Aspergillus niger adalah
ampas dengan pH 3 karena terakumulasi dengan baik.

Laboratorium Mikrobiologi Industri

16

Asam Sitrat
BAB IV
PENUTUP

V.I Kesimpulan
1. Ketiga variabel mengalami peningkatan volume titran namun variabel III (ampas
pH 4) yang paling signifikan karena berada pada pH medium.
2. Ketiga variabel mengalami peningkat pH yang fluktuatif peningkatan pH karena
penambahan urea, penurunan pH terjadi karena aktivitas fermentasi yang sesuai.
3. Ampas buah nanas lebih baik daripada sari buah pada pembuatan asam sitrat
karena spora Aspergillus lebih optimal mengahasilkan yield yang lebih tinggi.
4. Media pertumbuhan Aspergillus niger lebih baik dari pH 3 karena konversi yang
terakumulasi menjadi asam sitrat lebih banyak.

V.2. Saran
1. Pengukuran untuk setiap variabel harus tepat
2. Pastikan aerasi berjalan dengan tepat
3. Sterilkan bahan dalam autoclave secara teliti dan tepat pada 1200c

Laboratorium Mikrobiologi Industri

17

Asam Sitrat
DAFTAR PUSTAKA

Currie. 1917 dalam Rusmana I. 2005. Petunjuk Praktikum Bioteknologi Mikrobia.

FMIPA IPB. Bogor
Haryani, Kristinah .2011. STUDI KINETIKA PERTUMBUHAN ASPERGILLUS
NIGER PADA FERMENTASI ASAM SITRAT DARI KULIT NANAS
DALAM REAKTOR AIR-LIFT EXTERNAL LOOP . FT UNDIP
SEMARANG
Papagianni, M. 2007. Advances in Citric Acid Fermentation by Aspergillus niger:
Biochemical Aspects, Membrane Transport and Modeling. Journal
Biotechnology Advances 25: 244-263. Aristotle University of Thessaloniki.
Greece
Sumo, Sumantri, Subono, 1993, Prinsip Bioteknologi, PT. Gramedia Pustaka Utama,
Jakarta.
Wehner. 1893 dalam Rusmana I. 2005. Petunjuk Praktikum Bioteknologi Mikrobia.
FMIPA IPB. Bogor

Laboratorium Mikrobiologi Industri

18

Asam Sitrat
LEMBAR PERHITUNGAN
Menghitung Kebutuhan H2SO4

Variabel I:

Ca3(C6H8O7) + H2SO4 3CaSO4 + 2C6H8O7

Hari ke 0 pH = 3
Hari ke 1 v=4 ml

Variabel I , berat endapan = 5.05 gr

5.05
489

0.0103

30.0103
1000
0.958

8.03 gr
0.016mol
489

1.8105 1.4

3.80.11
10
103

2.29

1.043

1.8105 1.043

2.10

Hari ke 3 v=2.7 ml

3x0.016
x1000 50.10 ml
0.958
Variabel III , berat endapan = 4.99 gr

2.70.11
10
103

0.01472

30.01472
1000
0.958

1.4

Hari ke 2 v=3.8 ml

31.75

Variabel II , berat endapan = 8.03 gr

4.99
489

40.11
10
103

1.043

1.8105 1.043

2.08

Hari ke 4 v=2.5 ml
31

2.50.11
10
103

Menghitung pH

1.043

1.8105 1.043

2.05

meqNaOH = meq asam sitrat

V1.M1. ekivalensi = V2.M2. ekivalensi
1. 1.

2.

Variabel II:
Hari ke 0 pH = 3

Hari ke 1 v=2.6 ml
2.60.11
10
103

Laboratorium Mikrobiologi Industri

1.05

1.8105 1.05

2.34

A-1

Asam Sitrat
Hari ke 2 v=3.2 ml

Hari ke 4 v=3 ml

3.20.11
10
103

30.11
10
103

2.35

1.8105 1.043

2.36

1.043

1.8105 1.043

2.9

Hari ke 3 v=3.3 ml
3.30.11
10
103

Perhitungan Berat Asam Sitrat

1.043

1.8105 1.043

2.3

Variabel I

Hari ke 4 v=3.6ml
3.60.11
10
103

x 10 = 0.6167

1.043
W = 0.6167 x 192 x

1.8105 1.043

2.5

Hari ke 0 pH = 4

1.70.11
10
103

4.7

x 10 = 0.49

W = 0.49 x 192 x

Hari ke 1 v=1.7 ml

= 9.408 gr

Variabel III

1.043

1.8105 1.043

= 11.84 gr

Variabel II
M=

Variabel III:

.5

M=

M=
2.4

x 10 = 0.2967

W = 0.2967 x 192 x

= 5.312g

Hari ke 2 v=1.9 ml
1.90.11
10
103

1.043

1.8105 1.043

2.7

Hari ke 3 v=2 ml
20.11
10
103

1.043

1.8105 1.043

2.8

Laboratorium Mikrobiologi Industri

A-2

Asam Sitrat

LAPORAN SEMENTARA
PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI INDUSTRI
Materi :
Asam Sitrat

Group

Rekan Kerja :

6 / Selasa
Ruth Febrina Sondang Aritonang
Farhan Ramadhan
Intan Permata Sari Lumbanraja

LABORATORIUM MIKROBIOLOGI INDUSTRI

TEKNIK KIMIA FAKULTAS TEKNIK
UNIVERSITAS DIPONEGORO
SEMARANG

Laboratorium Mikrobiologi Industri

B-1

Asam Sitrat
I.

TUJUAN PERCOBAAN

1. Membuat asam sitrat dengan fermentasi menggunakan Aspergillus niger

2. Mengetahui bagaimana pengaruh waktu fermentasi tehadap pH.
3. Mengetahui perbandingan antara sumber karbohidrat ampas buah dan sari buah nanas

II.

PERCOBAAN
2.1 Bahan yang Digunakan

1..

Bonggol Nanas @ 15 gram

7.

MgSO4. 7H2O (2gr, 2gr, 2gr)

2.

Bekatul (10gr, 10gr, 10gr)

8.

Ca(OH)2

3.

Urea (1.5gr, 1.5gr, 1.5gr)

9.

H2SO4

4.

Sekam Padi(10gr,10gr, 10gr)

10.

NaOH (0.1 N)

5.

KH2PO4 (1gr, 1gr, 1gr)

11.

Aquadest

6.

Aspergillus

niger

(1ml

diencerkan 3ml)

2.2 Alat yang Dipakai

1.

Erlenmeyer

6.

Beaker glass

2.

Buret, statif, klem

7.

Pipet

3.

Gelas ukur

8.

Autoclave

4.

Petridish

9.

Oven

5.

Inkubator untuk fase cair

2.3 Cara Kerja

A Pembuatan biakan kapang/starter/suspense spora

Siapkan media untuk pembiakan kapang (mold).

Buat biakan Aspergillus Niger pada media tersebut.

Inkubasikan pada 28o C atau 30o C selama 2-4 hari.

Larutkan spora hasil pembiakan di atas dengan air steril.

Agar selalu dapat dipertahankan perccobaan dalam keadaan aseptic, lakukanlah
pembuatan suspense spora diatas dalam keadaan aseptic.

Penyiapan media

Laboratorium Mikrobiologi Industri

B-2

Asam Sitrat
Fermentasi pada media semi padat

Siapkan sumber karbohidrat yang akan digunakan. Bila sumber karbohidrat berupa buah,
buah dikupas lalu dihaluskan dan airnya dibuang/dituang dengan cara diperas sampai sedikit
kering.

Setelah agak kering, timbang sumber karbohidrat sesuai variabel dan kedalamnya
ditambahkan nutrient nutrient (urea, sekam padi, bekatul, MgSO4 , KH2PO4 ) sesuai
variabel. Aduk sampai homogen di dalam beakerglass.

Tambahkan aquadest hingga media menjadi lembab (sampai becek).

Atur pH sesuai variabel.

Tutup beaker glass dengan alumunium foil dan bungkus dengan kertas koran, sterilkan
dengan autoclave pada suhu 1200C - 1210C.

Biarkan dingin pada suhu kamar. Setelah dingin tanami media dengan suspensi spora di
dalam lemari aseptik sebanyak 5 mL. Aduk yang baik agar suspense spora dapat tersebar
merata dalam media, lalu tutup kembali dengan alumunium foil.

Inkubasikan selama x hari pada 280 300C (dalam incubator untuk media semipadat).

Setelah selesai inkubasi, tambahkan aquadest ke dalam beaker glass sedikit demi sedikit dan
lumat semua isi beaker glass hingga tercampur merata. Volume aquadest yang ditambahkan
maksimal 50 mL .
Saring dengan kertas saring atau pompa vakum dan filtratnya ditest untuk asam sitratnya.

Analisa hasil
7. Panaskan filtrate yang diperoleh dari percobaan di atas sampai 70oC. Tambahkan larutan
Ca(OH)2 sebanyak 10 mL. Buat larutan Ca(OH)2 dengan melarutkan 5gr Ca(OH)2
dengan aquadest sampai 50 mL (jaga temperature konstan).
8. Endapan yang timbul cepat-cepat disaring (dalam keadaan panas 70oC), kemudian
dicuci dengan air panas 70oC. Endapan tersebut adalah kalsium sitrat.
9. Keringkan endapan di oven kemudian timbang beratnya.Catat beratnya.
10. Endapan tersebut dilarutkan dengan H2SO4 encer, sesuai perhitungan, saring dengan
kertas saring. Filtratnya merupakan asam sitrat dan endapannya adalah kalsium sitrat.
11. Untuk mengetahui berat asam sitrat yang diperoleh pada percobaan,titrasi filtrate
tersebut dengan NaOH 0,1 N. Catat kebutuhan titran.
12. Menghitung kebutuhan H2SO4 encer

Laboratorium Mikrobiologi Industri

B-3

Asam Sitrat
Ca3(C6H3O7)2 (s) + 3H2SO4 (l) 3CaSO4 (s) + 2C6H8O7 (s)
Amol

3A mol

Buat larutan H2SO4 dengan melarutkan 5 mL H2SO4 pekat menjadi 100 mL.
gr H2SO4 = vol H2SO4 . H2SO4 . kadar H2SO4
= 5 mL. 1,84 gr/cm3 . 100/98
= 9,39 gr
Molar H2SO4

=
=

= 0,958 M
Molar H2SO4

0,958 M

= ..L = ..m

2.4 Hasil Percobaan

Analisa hasil percobaan
Variabel

Ampas pH

Parameter yang di ukur

Hari 1

Hari 2

Hari 3

Hari 4

Hari 5

pH

2.67

2.698

2.284

2.268

2.11

Volume titran

2.6

3.2

3.3

3.6

7.5

pH

2.25

2.26

2.27

2.678

2.94

3.8

2.7

2.5

16

2.432

2.83

2.389

2.3

2.89

Sari Buah

Volume titran

pH 3
pH

Laboratorium Mikrobiologi Industri

B-4

Asam Sitrat
Ampas pH

Volume titran

1.7

1.9

20

. Berat endapan Cu Sitrat setelah di oven dan kebutuhan H2SO4

Variabel

Berat (gram)

H2SO4 (ml)

Ampas pH 3

5.05

31.75

Sari buah pH 3

8.03

50.10

Ampas pH 4

4.99

31

MENGETAHUI
PRAKTIKAN

Ruth Febrina, Farhan R, Intan PSL

Laboratorium Mikrobiologi Industri

ASISTEN

Ganang Setyabudi

B-5

LEMBAR KUANTITAS REAGEN

LABORATORIUM MIKROBIOLOGI INDUSTRI
TEKNIK KIMIA UNIVERSITAS DIPONEGORO
PRAKTIKUM KE
MATERI
HARI
TANGGAL
KELOMPOK
NAMA

ASISTEN

:2
: Asam Sitrat
: Selasa
: 14 Oktober 2014
:6
: Ruth Febrina Aritonang
Farhan Ramadhan
Intan PSL
: Ganang Setyabudi

KUANTITAS REAGEN
Variabel 1

MgSO4

KH2PO4

Urea

Sekam

Bekatul

pH

hari

2 gr

1 gr

1.5 gr

10 gr

10 gr

2 gr

1 gr

1.5 gr

10 gr

10 gr

2 gr

2 gr

1.5 gr

10 gr

10 gr

(ampas buah
nanas ph 3)

Variabel 2
(sari buah
nanas ph 3)

Variabel 3
(ampas buah
nanas ph 4)

TUGAS TAMBAHAN

Semarang, 14 Oktober 2014

ASISTEN

Ganang Setyabudi

Laboratorium Mikrobiologi Industri

C-1

Asam Asetat
LEMBAR ASISTENSI

DIPERIKSA
NO. TANGGAL

KETERANGAN

Laboratorium Mikrobiologi Industri

TANDATANGAN