ABSTRAK

Tujuan: Luka penentuan umur dalam kehidupan subyek penting dalam diagnosa
rutin forensik
obat. Deskripsi makroskopik luka untuk menentukan usia luka namun tidak
memadai. Itu
bertujuan dari penelitian ini adalah untuk menilai apakah itu akan layak untuk
menentukan usia luka melalui analisis
karakteristik morfologi dan protein matriks ekstraseluler di biopsi kulit pelajaran
hidup
dirujuk ke klinik rawat jalan forensik.
Metode: biopsi kulit (n = 101), mewakili daerah perbatasan luka, diambil dari kulit
cedera usia luka diketahui (kisaran: 4,5 h-25 hari) dalam mata pelajaran hidup.
Semua biopsi dianalisis selama 3
fitur morfologi (ulserasi, parakeratosis dan perdarahan) dan 3 spidol matriks
ekstraselular
(Kolagen III, kolagen IV dan-SMA). Untuk kuantifikasi, biopsi dibagi dalam 4 berbeda
kerangka waktu: 0,2-2 hari, 2-4 hari, 4-10 hari dan 10-25 hari luka lama.
Selanjutnya, probabilitas
Sistem penilaian dikembangkan.
Hasil: Untuk perdarahan, kolagen III, kolagen IV dan-SMA ekspresi tidak ada
hubungannya dengan usia luka itu
ditemukan. Ulserasi hanya ditemukan di luka lama 0,2-2, 2-4 dan 4-10 hari,
menyiratkan probabilitas thatthe
yang luka berusia lebih dari 10 hari dalam kasus ulkus adalah equalto 0%. Juga
parakeratosis hampir
hanya ditemukan pada luka lama 0,2-2, 2-4 dan 4-10 hari, kecuali untuk satu kasus
dengan usia luka 15
hari tua. Sistem probabilitas scoring dari semua penanda dianalisis, seperti yang
digambarkan di atas, namun dapat digunakan
untuk menghitung probabilitas usia luka individu dalam biopsi luka kulit pelajaran
hidup.
Kesimpulan: Kami telah mengembangkan sistem probabilitas scoring, menganalisis
karakteristik morfologi
dan protein matriks ekstraseluler di biopsi kulit dangkal luka di mata pelajaran
hidup yang dapat

diterapkan dalam kedokteran forensik untuk penentuan umur luka.

INTRODUCTION
Estimasi umur luka penting dalam kedokteran forensik. dalam
Belanda korban kekerasan atau penganiayaan dengan kulit hidup
cedera (misalnya, memar, lecet, dll) yang dirujuk ke forensik
dokter untuk penilaian cedera, termasuk perkiraan
dari luka usia. Sebagai reproduktifitas temuan makroskopik rendah
dan tidak cukup kuat untuk menahan di pengadilan, ada kebutuhan untuk
metode tambahan untuk menentukan usia luka dalam kehidupan subyek [14]. Dalam otopsi forensik beberapa penanda imunohistokimia adalah
diterapkan untuk menentukan usia luka lebih tepatnya, di samping
dengan karakteristik yang lebih tradisional histologis penyembuhan luka
[5-15]. Untuk tujuan ini excisions kulit dibuat di mana sebenarnya
kerusakan (misalnya perdarahan), sebagian besar di dermo-subkutan
persimpangan, dapat dinilai [1,16]. Namun, di mata pelajaran hidup itu
tidak etis untuk luka kulit cukai. Kami bertanya-tanya apakah
biopsi kulit dangkal di lokasi cedera, yang mewakili
daerah perbatasan luka, juga bisa digunakan untuk (immuno) analisis histokimia untuk menentukan usia luka. Di sini kami
dianalisis baik karakteristik morfologi dan ekstraseluler
protein matriks yang sudah diterapkan pada luka otopsi
[17-19].
Spidol histologis yang berbeda telah dijelaskan dalam luka
penyembuhan. Ulserasi pada epidermis dapat terjadi langsung pada saat itu
dari penderitaan, tergantung pada jenis induksi luka [20].
Parakeratosis dapat ditemukan sedini 24 jam setelah melukai dari

kulit pada orang yang hidup [21,22]. Sebuah fitur yang hampir konsisten dari
penting
luka adalah perdarahan, yang menyebabkan hematoma (memar yaitu a)
yang mungkin muncul hampir seketika atau mungkin mengambil 24-48 jam
setelah melukai sebelum extravasated darah meningkat ke permukaan untuk
menjadi makroskopik terlihat [23].
Dalam sebuah studi otopsi itu menunjukkan bahwa matriks ekstraselular
penanda alpha aktin otot polos (a-SMA) (myofibroblasts) adalah
terdeteksi pada luka kulit manusia sedini sekitar 5 hari
pasca luka penderitaan [24]. Kolagen III dan IV telah dipelajari di
luka kulit sebelumnya oleh Betz et al. [25,26], meskipun mereka tidak menganalisis
kolagen dalam pembuluh darah, seperti yang kita lakukan dalam penelitian ini [27].
Dalam studi ini kami telah menganalisis parameter yang disebutkan di atas
di biopsi kulit dangkal pelajaran hidup, untuk meningkatkan
luka penentuan umur.

MATERIAL AND METHOD

101 biopsi kulit manusia (1 biopsi per luka) dikumpulkan
dari pasien yang dirujuk ke dokter forensik dari Public
Layanan kesehatan di Amsterdam dari Mei 2008 sampai November
2009. Pasien dengan luka kulit usia dikenal ditanya
izin untuk mendapatkan biopsi luka. Usia rata-rata dari
populasi adalah 37 tahun (rentang: 17-80 tahun), yang terdiri dari 52
laki-laki (51%) dan 49 perempuan (49%). Berarti luka usia, seperti dilansir
oleh korban, adalah 5,4 hari (kisaran: 4,5 h-25 hari). luka-luka
diidentifikasi makroskopik. Berbagai jenis luka
yang memar (69%), lecet (19%), gigitan (3%), menusuk (2%),
goresan (2%), tidak diketahui (3%) dan kembang api (1%). izin
penelitian ini diberikan oleh Komisi Etika Medis (METC)
dari VUmc.

2.1. (Immuno) histokimia

Biopsi kulit yang semalam tetap dalam larutan formalin 4%
dan ditanam dalam parafin. Untuk analisis histokimia, 4 mm-tebal
bagian jaringan diwarnai dengan standar Hematoxylin / Eosin
(H & E) pewarnaan. Untuk imunohistokimia, jaringan yang dewaxed
dan direhidrasi dan diinkubasi dalam metanol / hidrogen peroksida
(H2O2) (0,3%) solusi selama 30 menit untuk memblokir peroksidase endogen.
Antigen pengambilan dilakukan oleh salah satu slide mendidih di sitrat sebuah
pH 6,0 penyangga (kolagen IV) atau dengan inkubasi dengan pepsin /
asam klorida (HCl) (0,1%) (kolagen III) selama 30 menit pada 37 8C.
Bagian diinkubasi dengan baik kelinci anti-manusia

kolagen III (1: 1000, Acris Antibodi, San Diego, Amerika Serikat), mouse
kolagen IV anti-manusia (1:50, Dako, Glostrup, Denmark), atau mouse
anti-manusia a-halus aktin otot (1: 200, Dako, Glostrup,
Denmark) antibodi selama 1 jam pada suhu kamar (RT). Berikutnya, slide
diinkubasi dengan anti-mouse / kelinci Envision (Dako, Glostrup,
Denmark) selama 30 menit pada RT. Pewarnaan divisualisasikan menggunakan 3,30
diaminobenzidin (0,1 mg / ml, 0,02% H2O2). Bagian yang kemudian
counterstained dengan hematoxylin, dehidrasi dan tertutup. Sebagai
kontrol, prosedur pewarnaan yang sama digunakan, tapi kemudian
monoklonal antibodi poliklonal primer atau digantikan oleh fosfat buffered saline.
Slide jaringan ini adalah negatif (tidak
ditampilkan).

2.2. (Immuno) analisis histokimia

Slide dievaluasi dengan mikroskop cahaya. biopsi
tercermin daerah zona perbatasan dangkal luka, yang mengandung
epidermis dan dermis superfisial. Secara total 6 variabel yang
mencetak sebagai berikut:
* Morfologi:
- Ulserasi: ya / tidak;
- Parakeratosis: ya / tidak;
- Perdarahan: persentase daerah biopsi (0-100%).
* Ekstraselular matriks:
- Kolagen pembuluh III-positif (kolagen pembuluh sekitarnya):
persentase dari total jumlah kapal (0-100%);
- Kolagen IV-positif kapal (kolagen pembuluh sekitarnya):
persentase dari total jumlah kapal (0-100%);
- A-SMA-positif myofibroblast (s) dalam dermis (1): ya / tidak.

2.3. Analisis statistik

Analisis statistik dilakukan dengan SPSS (Windows versi
20, IBM Corp., Armonk, NY). Ciri-ciri morfologi dan ekstraseluler
penanda matriks kelompok usia yang berbeda luka yang
dibandingkan dengan uji chi-square (parameter dikotomi) atau
uji Kruskal-Wallis (parameter kontinu non-normal). Pvalues
<0,05 dianggap signifikan.

2.4. Skor probabilitas

Untuk kuantifikasi, usia luka dibagi menjadi empat kelompok: 0.22 hari tua, berusia 2-4 hari, lama 4-10 hari dan 10-25 hari. Untuk menghitung
skor probabilitas, persentase perdarahan, kolagen III
dan kolagen IV pertama harus binned menjadi beberapa kelompok
ukuran kira-kira sama. Perdarahan itu binned in3 kelompok (1%,
2-5% or6%), dan kelompok collagenIII collagenIVin4 (10%, 10-40%,
40-80% dan> 80% atau 50%, 50-75%, 75-90% dan> 90%, masing-masing).
Kemudian, analisis regresi ordinal yang diterapkan untuk menghitung
probabilitas parameter thatthe memiliki nilai tertentu (misalnya tidak ulserasi
atau persentase dari perdarahan dari 2-5%) dengan usia luka sebagai faktor.
Akhirnya, dengan aturan Bayes ', probabilitas ini dapat terbalik untuk mendapatkan
probabilitas bahwa luka memiliki usia tertentu diberikan nilai
parameter, yaitu nilai probabilitas.

RESULT
3.1. spidol histologis
Ulserasi (Gbr. 1A / Gambar. 2A) hanya ditemukan di 11 dari 86 kasus
luka kulit tua 0,2-2, 2-4 dan 4-10 hari, meskipun tidak di
luka lebih tua dari 5 hari. Tidak ada perbedaan yang signifikan antara
kelompok umur ditemukan (p = 0.247). Parakeratosis (Gambar. 1B / Gambar. 2B)
ditemukan pada 23 dari 86 kasus di kelompok usia ini, kecuali satu
pasien dengan usia luka 15 hari tua. Tidak ada perbedaan yang signifikan
antara kelompok usia yang ditemukan baik (p = 0.276). pendarahan
(Gambar 1C / Gambar. 2C.) Ditemukan pada 51% dari luka dan dalam semua luka
kelompok usia, meskipun terbatas (rata-rata adalah <5% dari luas permukaan).
tidak
perbedaan signifikan yang ditemukan antara luka yang berbeda
kelompok umur (p = 0.900)
Skor probabilitas (Tabel 1) - Ketika ulserasi hadir dalam
probabilitas bahwa luka berumur 0,2-2 hari adalah 45%. Itu
probabilitas bahwa luka itu 0,2-4 hari tua atau berusia 0,2-10 hari
adalah 81% dan 100%, masing-masing. Dalam kasus tidak ada ulserasi, ini
probabilitas yang lebih kecil, 24%, 53% dan 84%, masing-masing.
Rata probabilitas lebih atau kurang sebanding antara
luka dengan / tanpa parakeratosis, yaitu 21/29% di 0,2-2 hari
luka lama, 59/56% di 0,2-4 hari luka lama dan 97/83% di 0.210 hari luka lama.
Persentase perdarahan itu binned menjadi 3 kelompok, yaitu
1%, 2-5% atau 6% dari perdarahan, dan probabilitas yang
sama dalam kelompok-kelompok ini. Probabilitas bahwa cedera adalah 0,2-2
hari tua adalah 30%, 24% dan 23% masing-masing ketika 1%, 2-5% dan
6% perdarahan ditemukan. Probabilitas bahwa cedera adalah
0,2-4 hari tua adalah 56%, 56% dan 57%, masing-masing, dan bahwa

Cedera adalah 0,2-10 hari tua adalah 85%, 85% dan 86%, masing-masing.
3.2. Protein matriks ekstraselular
Persentase pembuluh darah kolagen tipe III-positif
(Gambar. 1D / Gambar. 3A) atau jenis kolagen pembuluh darah IV-positif (Gambar.
1E /
Gambar. 3B) tidak berbeda secara signifikan antara berbeda
kelompok umur luka (p = 0,152 untuk kolagen III dan p = 0,975 untuk
kolagen IV). Myofibroblasts Selain itu, a-SMA-positif (Gambar. 1F /
Gambar. 3C) ditemukan pada semua kelompok umur 4 luka dan tidak
diskriminatif antara kelompok usia 4 luka (p = 0,348).
Skor probabilitas (Tabel 1) - untuk kolagen III kumulatif
probabilitas meningkat dengan persentase peningkatan positif
pembuluh darah. Probabilitas bahwa luka berumur 0,2-2 hari itu
25% dalam kasus 10% kolagen III positif, 29% dalam kasus 10-40%
kolagen positif III, 31% dalam kasus 40-80% dan 33% untuk> 80%
kolagen III positif. Probabilitas bahwa luka itu 0,2-4
hari tua yang 47, 56, 63 dan 69%, masing-masing, dan yang luka
berumur 0,2-10 hari 81, 85, 88 dan 90%. Untuk kolagen IV terendah
probabilitas ditemukan ketika positif pembuluh darah adalah 50%:
25% yang luka berumur 0,2-2 hari, 48% yang luka adalah 0,2-4
hari tua dan 81% yang luka berusia 0,2-10 hari. Dalam hal 50-75,
75-90 dan> 90% kolagen pembuluh darah IV-positif ditemukan,
probabilitas lebih tinggi 35/36/38% yang luka adalah 0,2-2 hari
lama 70/73/77% yang luka berumur 0,2-4 hari dan 93/94 / 95%
yang luka berusia 0,2-10 hari, masing-masing.
Ketika myofibroblasts a-SMA-positif yang hadir probabilitas
bahwa luka berumur 0,2-2 hari adalah 15%, yang luka itu
0,2-4 hari tua adalah 50% dan yang luka berusia 0,2-10 hari itu