Abstrak

Curcumin, demetoxycurcumin dan xanthorrhizol merupakan senyawa

aktif yang terkandung dalam temulawak (Curcuma xanthorrhiza) yang
memiliki aktivitas dalam menghambat enzim tirosinase dan hormon melanosit stimulating (-MSH) pada in vitro. Simulasi docking dilakukan
untuk menentukan dan memvisualisasikan interaksi dari tiga senyawa
dengan enzim tirosinase dan -MSH. Hasil simulasi docking menunjukkan
bahwa tiga senyawa dapat berinteraksi secara spontan dengan enzim
tirosinase dan -MSH. Pada enzim tirosinase, xanthorrhizol berinteraksi
paling mudah melalui pembentukan ikatan hidrogen dengan Asn205.
Pada -MSH, demethoxycurcumin berinteraksi paling mudah melalui
pembentukan dua ikatan hidrogen dengan His3 dan Arg5. Dengan efek
penghambatan pada enzim tirosinase dan hormon -melanosit
stimulating (-MSH) berarti mencegah pembentukan kulit pewarnaan
pigmen melanin, menunjukkan bahwa tiga senyawa dipelajari dapat
diterapkan sebagai agen pemutih kulit.

BAHAN DAN METODE

Peralatan:
Hardware digunakan untuk perhitungan, model molekul, dan docking molekul
termasuk komputer pribadi (personal computer) yang dilengkapi dengan
prosesor Intel Core Duo T6500 2.1 GHz, 800 MHz FSB, sistem operasi Windows
Vista , hard disk 320 GB, dan memori degan RAM 2 GB.
Perangkat lunak yang digunakan dalam penelitian ini SwissPDBViewer v.4.01
(download dari http://www.expasy.org). ChemOffice 2004 software (oleh
Cambridge Soft Corporation 2003 download dari www.cambridgesoft.com).
Portabel HyperChem Rilis 8.0.7 (oleh Hypercube Incorporation download dari
http://www.hyper.com 2007). Ligan Explorer Aplikasi v.3.8 Viewer adalah data
yang on line dari (http://www.pdb.org/pdb/explore). Program v.4.0.1 ArgusLab
download dari http://www.arguslab.com dan AutoDockTools v.3.05 paket program
perangkat lunak dalam MGLTools v1.5.4 (Molecular Graphics Laboratorium, The
Scripps Research Institute pada tahun 2009 download dari http: // mgltools.
scripps.edu).
Bahan:
Struktur tiga-dimensi dari enzim tirosinase yang dikristalkan dengan asam kojik
dengan resolusi 2,3 (kode PDB: 3NQ1) oleh Sendovski et al. dan -MSH oleh
Giblin et al.(PDBcode: 1B0Q). Kedua struktur 3D diperoleh dari data base on line
Protein Data Bank (www.pdb.org). Struktur dua dan tiga dimensi dari kurkumin,
demethoxycurcumin, xanthorrizol dan asam kojik digambar menggunakan paket
Program ChemOffice ChemDraw Ultra 2004 Chem3D Ultra 8.0.3 dan 8.0.3.

Metode:
Penelitian ini dimulai dengan persiapan ER (kode PDB: 1A52) yang diperoleh
dari Protein Data Bank (www.pdb.org). Hal ini dilakukan dengan mendownload
data dari Protein Data Bank Er, pengurangan rantai ER ke dalam bentuk
monomer menggunakan SwissPDBViewer v4.01, analisis pengikatan oleh Ligan
Explorer Viewer bond pada Protein Data Bank (www.pdb.org) dan Q-SiteFinder,
analisis interaksi ligan-reseptor dengan Ligan Explorer Viewer pada Protein
Data Bank (www.pdb.org).
Selanjutnya, persiapan ligan kurkumin, demethoxycurcumin, xanthorrizol dan
asam Kojik dengan paket 3D ChemBio v.12.0.2 Free Trial dan HyperChem v8.0.
Professional Edition. Persiapan ini dilakukan dengan membuat struktur 2D dan
3D menggunakan program ChemBio Paket 3Ddengan v.12.0.2 Free Trial,
optimasi geometri dengan perangkat lunak HyperChem v8.0. Professional
Edition dan menganalisis sifat molekul dengan QSAR Properties pada v8.0
Program HyperChem. Profesional Edition. Untuk pastikan bahwa program
AutoDockVina yang digunakan adalah valid, struktur model yang dipasangkan
dengan ligan telah mengkristal menggunakan Program HyperChem v8.0.
Professional Edition, redocking ligan yang telah dikristalkan menjadi Er
kantong mengikat menggunakan program AutoDock Vina dan menganalisis
data
validasi.
Selanjutnya,
docking
kurkumin,
demethoxycurcumin,
xanthorrizol dan asam Kojik, enzim tirosinase, dan -MSH menggunakan
AutoDock Vina Program dan terakhir, interpretasi data yang diperoleh.

HASIL DAN PEMBAHASAN

Hasil Pembuatan Ligan Kurkumin, Demethoxycurcumin, Xanthorrizol dan Asam

kojik dengan perangkat lunak ChemOffice 2004 dan Portable HyperChem Rilis 8.0.7:

Hasil analisis Ligan

Aturan Lipinski digunakan sebagai referensi untuk menentukan

efektivitas teoritis dan bioavaibilitas dari obat oral yang digunakan.
Berdasarkan tabel diatas empat senyawa pada penelitian ini sesuai
dengan aturan Lipinski, dimana:
Massa yang dimiliki oleh kurkumin, demethoxycurcumin, xanthorrizol
dan asam kojik telah memenuhi kriteria sebagai obat oral yang dapat
menghasilkan efek karena massa yang dimiliki senyawa-senyawa tsb
< 500 Dalton.
Koefisien partisi, kurkumin, demethoxycurcumin, xanthorrizol dan
asam kojik yang berada di bawah 5 dan kurang dari minus 2.
keempat senyawa ini masuk ke dalam tempat aktif pada resptor
hanya sebagian.

Hasil Preparat Enzim Tirosinase (Kode PDB: 3NQ1) dan alphamelanocyte stimulating hormone (-MSH) (kode PDB:1B0Q) yang
diperoleh dari Bank Data Protein( Protein Data Bank)
Data enzim yang telah diperoleh dari Protein Data Bank dikurangi menjadi satu rantai. Rantai yang digunakan
adalah rantai dari tirosinase enzim. Ligand Explorer Viewer digunakan untuk menganalisis asam amino yang
membentuk tempat aktif enzim tirosinase dan -MSH. Analisis dilakukan dengan mencatat asam amino yang
terletak di sekitar asam kojik dan atom Renium selama kristalisasi. Dalam enzim tirosinase, terdapat 6 asam
amino yang berada disekitar asam kojik, yaitu Gly196, Phe197, Gly200, Pro201, Asn205, Arg209, sedangkan
pada -MSH berisi empat asam amino, yaitu Cys1, Arg5, Trp6, dan Cys7.
Untuk melihat lebih tepatnya daerah aktif pada reseptor, menggunakan aplikasi Q Site Finder. Tempat aktif
enzim tirosinase pada daerah biru muda (situs 1) pada 320 dimana semua penyusun asam amino dalam
kantung aktif

enzim tirosinase yang termuat di

exploler ligand for Q Site Finder (Table 2). (Tabel 2). Sama

halnya dengan enzim tirosinase , kantung aktif -melanosit stimulating hormone (-MSH) berada di Daerah biru
muda (situs 1) dengan volume 43 . Semua asam amino yang membentuk tempat aktif -MSH exploler ligand
for Q Site Finder (Table 3).

Hasil Validasi Program v3.05 AutoDockTools pada Paket Program MGLTools

v1.5.2 dengan Re-Docking Inhibitor yang mengkristalkan kantung enzim
tirosinase

Untuk validasi ,Proses awalnya dibuat dua dan tiga dimensi dari struktur
asam kojik. Struktur Tiga dimensi kemudian mengoptimasi geometri dengan
metode AM1 dan PM3. Metode AM1 lebih baik digunakan daripada PM3.
Nilai RMSD menunjukkan kesamaan dengan struktur model crystalliser.
Penyusunan metode AM1 menghasilkan model struktur asam kojik yang
mirip dengan struktur kristal asam kojik. Artinya, asam kojik dapat
digunakan untuk mem-validasi Model Program AutoDockTools v3.05.
Nilai RMSD (Root Mean Square Deviation) re-docking asam kojik pada
tirosinase senilai 1:30 . Karena nilai hasil re-docking RMSD kurang dari 2 ,
maka software AutoDock v.3.05 yang digunakan dalam penelitian ini telah
terbukti valid.

Hasil simulasi Docking Curcumin, Demethoxycurcumin,

Xanthorrizol dan Asam kojik Menggunakan Program
AutoDockTools v3.05 dan Hasil Interpretasi Data

Curcumin, demethoxycurcumin, dan xanthorrizol

memiliki energi interaksi lebih kecil daripada asam
kojik yang merupakan senyawa sintesis. Sehingga
dapat dikatakan bahwa ketiga senyawa ini memiliki
afinitas yang tinggi untuk berikatan dengan asam
amino yang membentuk tempat aktif enzim
tirosinase dan -MSH. Ketiga senyawa ini mampu
berinteraksi sebagai inhibitor yang nantinya bisa
menekan produksi melanin. Hal ini menunjukkan
bahwa ketiga senyawa tsb dapat memberikan efek
farmakologis sebagai agen pemutih kulit sebagai
alternatif terhadap penggunaan asam kojik yang
memiliki efek karsinogenik.

Energi interaksi atau energi bebas adalah energi yang diperlukan

untuk ligan dapat mengikat dan berinteraksi dengan reseptor. Tanda
negatif menunjukkan bahwa tiga senyawa kurkumin dan yang lain
dapat berinteraksi secara spontan dengan enzim tirosinase. Curcumin
dapat berinteraksi dengan enzim tirosinase melalui ikatan hidrogen dan
van der Waals. kurkumin memiliki konstanta inhibisi (Ki) dari 1.520 m.
Nilai ini lebih kecil dari nilai (Ki) asam kojik, hal ini menunjukkan bahwa
kekuatan ikatan antara kurkumin dengan enzim tirosinase lebih kuat
dari asam kojik. Hal ini terbukti dari nilai Ki asam kojik, nilai tersebut
mungkin disebabkan software AutoDockTools software v3.0 yang
digunakan tidak mampu mendeteksi besar nilai Ki. Berbeda dengan
kurkumin, demethoxycurcumin berinteraksi dengan enzim tirosinase
hanya melalui ikatan van der Waals. Tidak adanya ikatan hidrogen
dalam
interaksi
menunjukkan
bahwa
kemampuan
mengikat
demethoxycurcumin untuk tirosinase lebih kecil dari kurkumin. Hal ini
dapat dilihat dari energi interaksi demethoxycurcumin lebih besar dari
kurkumin. Demethoxycurcumin memiliki nilai Ki 5650 m nilai ini lebih
besar dari Ki kurkumin. Konstanta inhibisi menunjukkan afinitas ikatan
ligan-reseptor. Nilai Ki rendah menunjukkan bahwa ligan memiliki
kekuatan yang lebih tinggi daripada nilai Ki lebih tinggi (kekuatan
ikatan lemah).

Pada protein -MSH, kurkumin berinteraksi melalui 3 ikatan hidrogen dan

interaksi Van der Waals. Ikatan hidrogen antara atom O terkandung
dalam kurkumin dengan atom H yang terkandung dalam asam amino
Cys1 (1,986 ), His3 (1,733 ), dan Arg5 (2,204 ). Curcumin membuat
tiga ikatan hidrogen yang memiliki afinitas yang cukup tinggi untuk
mengikat - MSH. Hal ini dapat dilihat dari energi interaksi -5,49 Kkal /
mol. Jumlah ikatan hidrogen terbentuk dalam interaksi antara liganreseptor tergantung pada kehadiran atom H, O, N, atau S. Ligand yang
berada di sekitar atom H bertindak sebagai donor ikatan hidrogen,
sedangkan atom O, N, dan S bertindakan sebagai akseptor ikatan
hidrogen. Menurut Bohm dan Schneider [13], kisaran jarak atom hidrogen
adalah docking yang baik Hasil simulasi 1,72-2,85 . Empat Senyawa
memiliki jarak ikatan dalam kisaran, Dengan kata lain bahwa empat
senyawa memiliki Jarak ikatan hidrogen yang sesuai persyaratan
sehingga mereka bisa berinteraksi dengan baik enzim tirosinase melalui
ikatan hidrogen. Kurkumin terbentuk van der Waals ikatan dengan asam
amino dalam -MSH dengan DPN4 (4645 ) dan Cys7 (4571 ).

Curcumin, demethoxycurcumin, dan xanthorrizol memiliki

energi interaksi lebih kecil dari asam kojik yang
merupakan sintesis senyawa. Jadi dapat dikatakan bahwa
ketiga senyawa ini memiliki tinggi afinitas untuk mengikat
dengan asam amino yang membentuk tas enzim
tirosinase aktif dan -MSH. Ketiga senyawa ini mampu
berinteraksi dengan inhibitor yang nantinya bisa menekan
produksi melanin. Hal ini menunjukkan bahwa ketiga
senyawa dapat memberikan efek farmakologis kulit
whitening agent sebagai alternatif penggunaan asam
kojik, yang memiliki efek karsinogenik. Karya serupa kami
pada indikasi efek farmakologis berdasarkan docking
Prosedur telah diterbitkan di tempat lain

KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian dapat disimpulkan bahwa kurkumin,
demethoxycurcumin, dan xanthorrizol secara spontan berinteraksi dengan
asam amino dalam kantung aktif enzim tirosinase dan -MSH. Pada enzim
tirosinase, interaksi termudah terjadi pada xanthorrizol karena energi
interaksi rendah. Xanthorrizol berinteraksi melalui melalui pembentukan
ikatan hidrogen dengan asam amino Asn205 dan interaksi van der Waals
dengan asam amino Glu158, Phe197, Gly200, Pro201, dan Arg209. Pada MSH, demethoxycurcumin paling mudah
berinteraksi karena energi
interaksi rendah melalui pembentukan dua ikatan hidrogen dengan amino
Asam His3, dan Arg5 dan membentuk interaksi van der Waals dengan asam
amino Cys1, Glu2, DPN4, dan Cys7. Hal ini menunjukkan bahwa senyawa ini
berpotensi tinggi untuk digunakan sebagai calon agen pemutihan
(whitening agent) sebagai alternatif terhadap penggunaan asam kojik yang
memiliki efek karsinogenik.
Dalam penelitian, peneliti menyarankan untuk melakukan penelitian in-vivo
lebih lanjut pada kurkumin, demethoxycurcumin dan xanthorrizol untuk
mengetahui senyawa terbaik yang memiliki dosis yang lebih rendah dengan
aktivitas tertinggi sebagai zat pemutih kulit (skin whitening agent).