PEWARNAAN GRAM DAN

TAHAN ASAM

I NYOMAN SURYA ARI WAHYUDI

G0011111

Pewarnaan bakteri

Tanpa pewarnaan, bakteri terlalu transparan

sehingga sulit dilihat secara langsung pada
mikroskop.
Untuk membantu pengamatan morfologi dan
sifat-sifat bakteri.
Membantu identifikasi bakteri.

Pewarnaan Bakteri
Jenis-jenis pewarnaan bakteri yang dikenal
adalah:
1. Pewarnaan sederhana;
- Carbol fuchsin
- Gentian violet
- Methylen blue
2. Pewarnaan diferensial;
- Pewarnaan Gram
- Perwarnaan tahan asam

PEWARNAAN GRAM

CAT GRAM

A: Crystal Violet [pewarna 1]

B: Iodium, Kalium Iodida [ Mordant]
C: Alkohol, Aseton [Decolorizer]
D: Safranin [pewarna 2]

Bakteri yang tahan terhadap peluntur

akan mempertahankan pewarna
pertama Berwarna ungu (CV) ->
Gram positif

Bakteri yang tidak tahan terhadap

peluntur akan menyerap pewarna
kedua Berwarna merah (safranin)->
Gram negatif

Prinsip Pewarnaan Gram

Pewarna Pertama:
Crystal violet
Mordant:
Kalium Iodida
Peluntur: Alkohol
90%
Pewarna Kedua:
Safranin

Dinding Sel Bakteri Gram (+)

dan (-)
Bakteri Gram positif:
Dinding selnya terdiri dari lapisan
peptidoglikan (disebut juga mucopeptide
atau murein) yang lebih tebal (50-90%)
Bakteri Gram negatif:
Dinding selnya terdiri dari lapisan
peptidoglikan yang tipis (10%)
Bakteri Gram (+) memiliki lipid < bakteri Gram
(-)

Teori permeabilitas dinding sel

Gram positif:
Dinding kompak, peptidoglikan

tebal, permeabilitas dinding sel

kurang dan kompleks CV-I tidak
dapat keluar
Gram negatif:
Dinding tidak kompak,
Peptidoglikan tipis, permeabilitas
dinding sel lebih besar sehingga
memungkinkan lepasnya kompleks

Contoh bakteri gram positif

-Bentuk coccus: Streptococcus, Staphylococcus,
Pneumococcus, Peptococcus
-Bentuk batang: Corynobacterium, Bacillus,
Clostridia

Contoh bakteri gram negatif

Bentuk coccus: Neisseria, Veilonella
Bentuk batang: E. coli, Shigella, Salmonella,
Klebsiella, Hemophillus, Pasteurella,
Fusobacterium, Brucella

Beberapa bakteri setelah dicat gram menunjukkan pola gram-variable

dimana tampak campuran pink dan ungu.

Actinomyces, Arthrobacter, Corynebacterium, dan

Propionibacterium dinding selnya mudah rusak saat pembelahan
sehingga yang seharusnya gram positif tercat negatif

Bacillus,

Butyrivibrio, dan Clostridium mengalami penurunan

ketebalan peptidoglikan selama pertumbuhannya
bertepatan dengan itu jumlah yang tercat negatif bertambah
Usia kultur memiliki kaitan dengan hasil pengecatan
pada metode gram

>>Acinetobacter adalah coccus gram

negatif yang tahan terhadap
decolorization pada pewarnaan
gram. Sehingga Acinetobacter spp.
Sering tampak sebagai gram positif saat
pewarnaan gram

Hasil Pewarnaan Gram

Staphylococcus sp.

N. gonorrhoeae

PEWARNAAN TAHAN ASAM

( acid-fast staining )

Contoh bakteri tahan asam:

Mycobacterium tuberculosis
Mycobacterium leprae
Nocardia sp
Actinomyces sp

Terdapat tiga metode umum dalam

pengecatan tahan asam, yakni ZiehlNeelsen (hot), Kinyoun (cold), and
Auramine-Rhodamine Fluorochrome
(Truant method).

To view these cells in samples staining

requires higher concentrations of
the dye solution and/or a heating period

Dinding Sel Bakteri Tahan Asam

Dinding sel
bakteri tahan
asam terdiri dari
peptidoglikan,
arabinogalaktan,
dan lipid (lapisan
lilin).
50% dari lapisan
lipid ini adalah
asam mikolat

Lapisan lilin tebal (asam mikolat) dari

mycobacterium berperan sebagai barrier
dan membuatnya sulit terwarna.

Cat zn

A: Fuschin Basis [pewarna 1]

B: HCl, Alkohol [peluntur]
C: Methlyen Blue [pewarna 2]

Pewarnaan Tahan Asam

Kandungan lilin yang tinggi->sukar
diwarnai
Supaya dapat mewarnai bakteri tahan
asam perlu menghilangkan lapisan lilin
pada dinding sel: pemanasan (Ziehl
Neelsen)
Metode Ziehl Neelsen:
Zat warna pertama (carbol fuchsin) +
pemanasan-> peluntur (HCl dan Alcohol)> zat warna kedua (methylen blue)

Setelah terwarnai Bakteri tahan asam akan

mempertahankan pewarna pertama/ fuschin
basis (merah) dengan sangat kuat dan
tahan terhadap asam dan alkohol
Bakteri tidak tahan asam akan melepaskan
pewarna pertama dan mengikat pewarna
kedua/ methylen blue (biru)
Sehingga bakteri terbagi menjadi:
Bakteri tahan asam->Merah
Bakteri tidak tahan asam->Biru

Prosedur Pewarnaan Tahan Asam

ZIEHL NIELSEN
Pewarna
pertama:
Fuchsin basis
Menghilangkan
lipid : pemanasan
Peluntur: Alcohol
& HCl
Pewarna kedua:
Methylen
Blue

Hasil Pewarnaan Bakteri Tahan

Asam Metode Ziehl Neelsen

Sumber
1.
2.
3.
4.
5.

6.

http://www.microbelibrary.org/component/resource/l
aboratory-test/2870-acid-fast-stain-protocols
http://www.csun.edu/~hcbio027/biotechnology/lec4
a/gram.html
http://amrita.vlab.co.in/?sub=3&brch=73&sim=208
&cnt=1
http://www.microbelibrary.org/component/resource
/gram-stain/2886-gram-stain-protocols
Gillespie, Stephen and Kathleen Bamford. At a
glance medical microbiology and infection 3rd
Edition.
Maryani, Suryawati B. 2011. Buku Praktikum Gram

Terima kasih