Halaman 1

Kirim Pesanan dari Cetak ulang di reprints@benthamscience.net

120
Gene Therapy saat ini, 2013, 13, 120-132
Manusia Stem Sel pluripoten untuk Penyakit Pemodelan manusia Hati dan
Terapi sel
Noushin Dianat
1,2, #
, Clara Steichen
1,2, #
, Ludovic Vallier
3
, Anne Weber
1,2
dan
Anne Dubart-Kupperschmitt
1,2,
*
1
INSERM UMR-S972, Rumah Sakit Paul Brousse, Villejuif, F-94807, Prancis;
2
Universitas Paris-Sud, Orsay, F-91405,
Perancis;
3
Wellcome Trust-Medical Research Council di Cambridge Stem Cell Institute, Anne
McLaren Laboratorium Regeneratif Medicine, University of Cambridge, Cambridge, UK
Abstrak: Hati dipengaruhi oleh banyak jenis penyakit, termasuk gangguan
metabolisme dan gagal hati akut. Orto
transplantasi hati topik (OLT) saat ini satu-satunya pengobatan yang efektif untuk
penyakit hati yang mengancam jiwa tetapi transplantasi hepatosit alogenik kini telah menjadi alternatif karena kurang invasif
dibandingkan OLT dan dapat dilakukan repeatedly. Namun, pendekatan ini terhambat oleh kekurangan donor organ, dan
masalah-masalah yang berkaitan dengan isolasi
hepatosit dewasa kualitas tinggi, kriopreservasi dan ketidakhadiran mereka proliferasi
dalam budaya. Hati juga merupakan kunci ataugan untuk menilai farmakokinetik dan toksikologi dari xenobiotik dan untuk
penemuan obat, tapi sistemik kultur sel yang tepat
tems kurang. Semua masalah ini telah menyoroti kebutuhan untuk mengeksplorasi
sumber-sumber lain dari sel-sel seperti sel induk yang

dapat diisolasi, diperluas untuk menghasilkan populasi yang cukup besar dan
kemudian diinduksi untuk berdiferensiasi menjadi hepato fungsional
cytes. Kehadiran relung "fakultatif" progenitor dan batang sel di hati yang normal
baru-baru ini telah dikonfirmasi
tetapi mereka tidak menunjukkan aktivitas telomerase. Penemuan terbaru yang
manusia induced pluripotent stem sel dapat dihasilkan
dari sel somatik telah memperbaharui harapan untuk pengobatan regeneratif
dan dalam pemodelan penyakit vitro, karena sel-sel ini mudah
diakses. Kami meninjau sini kemajuan ini, batas dan tantangan bagi generasi hepatosit
fungsional dari
sel induk berpotensi majemuk manusia dalam pandangan penggunaan potensi mereka
dalam pengobatan regeneratif dan penemuan obat.
Kata kunci: Induced pluripotent stem cells, penyakit hati, diferensiasi hepatosit, obat
regeneratif, pemodelan penyakit.
PENGANTAR
Obat regeneratif adalah salah satu yang paling menarik dan
cepat bidang biologi modern maju, karena berfokus pada
pendekatan inovatif untuk memperbaiki dan mengganti sel-sel, JARINGAN dan
organ. Pentingnya fron- relatif baru ini
tingkat penelitian tercermin dalam kebutuhan belum pernah terjadi sebelumnya dari
pasien dari seluruh dunia: saat ini ada sekitar satu
kematian setiap 30 detik karena kegagalan organ, dan komplikasi
tions dan penolakan tetap masalah yang signifikan. Biaya dari
merawat individu yang mungkin manfaat dari pengobatan dengan
jaringan rekayasa atau organ telah diperkirakan mencapai miliaran $ 600
singa per tahun di Eropa.
Hati dipengaruhi oleh banyak jenis penyakit, termasuk
kelainan bawaan metabolisme (IMD) dan gagal hati akut.
Transplantasi hati orthotopic (OLT) saat ini hanya
pengobatan yang efektif untuk penyakit hati yang mengancam jiwa. Di
Eropa, penyakit metabolik yang diwariskan account untuk 26% dari
indikasi untuk OLT (Gbr. 1). Namun, jumlah papasien-sekarat sementara di daftar tunggu untuk transplantasi hati
telah meningkat dalam beberapa tahun terakhir karena kekurangan parah
organ (11%), dengan situasi ini mempengaruhi hingga 80% dari
pasien dengan gagal hati akut pada transplantasi tunggu
daftar (Eropa Transplantasi Hati Registry). ada juga
* Alamat korespondensi untuk penulis ini di INSERM U 972, Paul
Rumah Sakit Brousse, Villejuif, F-94807, Prancis; Tel: 33 1 45 59 51 38; Fax: 33
1 47 26 03 19; E-mail: anne.dubart@inserm.fr
#

Co-penulis
risiko substansial mortalitas dan morbiditas karena pasca
komplikasi bedah (penolakan sel, pembuluh darah dan empedu
obstruksi), dan imunosupresi (infeksi, kanker).
Komplikasi jangka panjang termasuk hipertensi, hyperlipidemia, diabetes dan obesitas. Di Eropa, tingkat kelangsungan hidup untuk
pasien dewasa adalah 62% setelah 10 tahun, menunjukkan bahwa lebih dari
30.000 pasien transplantasi meninggal dalam periode ini (Eropa
Transplantasi Hati Registry).
Terapi sel menargetkan hati, dengan hepato alogenik
cytes misalnya, memberikan alternatif untuk hati orthotopic
transplantasi untuk pengobatan metabolisme yang mengancam jiwa
gangguan, dengan tujuan mengganti en- kekurangan tunggal
zyme atau produknya. Prosedur kurang invasif dibandingkan OLT
dan dapat dilakukan berulang-ulang.
Di seluruh dunia, pengobatan lebih dari 30 pasien dalam
cara telah dilaporkan, sebagian besar anak-anak dengan siklus urea defects, tetapi juga pasien dengan tipe 1 sindrom Crigler-Najjar,
Kekurangan FVII, jenis I penyakit penyimpanan glikogen, infantil
Penyakit dan jenis progresif 2 intrahepatik keluarga Refsum ini
kolestasis. Pada anak-anak, hingga 10
8
/ kg berat badan hepato
cytes (segar atau cryopreserved), cocok untuk darah ABO
kelompok, telah ditransplantasikan, dengan tujuan menggantikan 5%
dari massa sel hati [1, 2].
Keamanan prosedur ini mapan dan
hasil yang diperoleh menggembirakan, dengan peningkatan transien
di beberapa fenotipe penyakit. Namun, pendekatan ini
tunduk pada beberapa keterbatasan utama. Selain-masalah yang
1875-5631 / 13 $ 58,00 + 0,00
2013 Bentham Ilmu Penerbit
Halaman 2

Manusia Stem Sel pluripoten untuk Penyakit Pemodelan manusia Hati

Saat Gene Therapy, 2013, Vol. 13, No. 2 121
lems timbul dari kekurangan donor organ, teknik-saat
teknik-untuk isolasi hepatosit dewasa menghasilkan sangat
nomor variabel yang layak, sel berkualitas tinggi [3] dan ada
ada prosedur standar untuk menilai kualitas sel
persiapan. Hepatosit sedang diisolasi dari terpakai

hati donor dan hati donor yang tidak cocok untuk

Transplantasi seluruh organ, yang mungkin steatotic [4, 5].
Selain itu, hepatosit dapat membagi hanya sekali atau dua kali dalam vitro, dengan adanya hepatosit Growth Factor, tanpa
perluasan lebih lanjut mungkin. Sel-sel ini juga sulit untuk
cryopreserve dan sangat rentan terhadap freeze-thaw terjadi kerusakan
usia [6].
Transplantasi sel alogenik juga terhambat oleh
fungsi transien sel ditransplantasikan, sebagian karena
rejimen imunosupresif dan ke sel-dimediasi kekebalan
respon, meskipun mekanisme nonspesifik lainnya, seperti
apoptosis [7] juga dapat menyebabkan hilangnya sel.
Transplantasi autologous dari dikoreksi genetik
sel dapat dipertimbangkan sebagai alternatif mengatasi ini
dua keterbatasan. Namun, pendekatan ini membutuhkan sebuah lobectomy sesuai dengan penghapusan sekitar 20% dari hati
untuk hepatosit isolasi, prosedur bukan tanpa risiko-pasien
pasien-dengan penyakit metabolik tertentu, seperti Familial
Hiperkolesterolemia.
Hati adalah organ penting dalam pengujian obat, di mana ia digunakan untuk
menilai farmakokinetik dan toksikologi dari xenobiotik,
namun hasil yang diperoleh pada model binatang sering misleading, karena perbedaan dalam tingkat dan spesifisitas substrat
enzim hati antara hewan dan manusia. Quences
berkala, clearance dan kimia profil hati diperoleh
untuk metabolit pada model binatang tidak benar mewakili
apa yang diamati pada manusia. Memang, toksisitas tak terduga dan
masalah farmakokinetik account untuk 40 sampai 50% dari semua fail
ures dalam pengembangan obat klinis. Sistem sel manusia, didaerah, termasuk budaya hepatosit manusia, diabadikan baris sel
dan mikrosom hati, berpotensi mengatasi limi- ini
sultasi, tapi tidak ada sistem sel yang tersedia telah belum terbukti
cocok. Ekspresi enzim hati kunci, seperti
CYP450, menurun dengan cepat setelah hepatosit isolasi, dan sel
baris, seperti seperti sel HEP-G2, yang sebagian besar berasal
dari tumor, memiliki tingkat kurang tinggi ekspresi
untuk transporter dan enzim hati kunci (Sitokrom P450,
konjugasi enzim) dan tidak memiliki morphol- benar
ogy dan polarisasi untuk transportasi obat vectorial dari
plasma untuk empedu. Sebuah garis sel hepatoma baru baru-baru ini
terbukti sangat berharga sebagai model untuk studi saya- obat

tabolism pada manusia. Namun, beberapa ac- Sitokrom P450

kegiatan-tetap rendah [8].
Semua keterbatasan ini untuk mengarahkan aplikasi terapi dan
penemuan obat telah menyoroti kebutuhan untuk mengeksplorasi lainnya
sumber sel. Sel induk yang dapat diisolasi, diperluas
untuk menghasilkan populasi klonal yang cukup besar dan kemudian didiproduksi untuk berdiferensiasi menjadi hepatosit yang berfungsi penuh di
vitro akan menjadi sumber ideal sel.
Sumber Hepatosit
Stem Sel endogen
Sel batang mesenchymal adalah sel asal ekstra-hati
dan memiliki aplikasi terapi yang potensial. Namun, baru-baru ini
laporan menunjukkan bahwa peran mereka dalam hati terluka adalah espokoknya akan memberikan dukungan trofik, dengan demikian menjaga enhepatosit dogenous hidup dan merangsang proliferasi mereka
tion. Dalam budaya, sel-sel ini memasuki fase senes- replikatif
cence setelah sejumlah doubling populasi [11/09].
Hati dewasa memiliki kapasitas luar biasa untuk Regenerasi
tion, yang dicapai melalui proliferasi matang
populasi sel yang membentuk organ utuh. Namun, jika
kapasitas regeneratif sel matang terganggu oleh liveragen merusak, sel progenitor hati diaktifkan dan
memperluas dalam parenkim hati. Berikut amplifica- mereka
tion selama transit, sel-sel progenitor ini dapat menghasilkan baru
hepatosit dan sel empedu untuk mengembalikan homeostasis hati
[12]. Progenitor hati merupakan populasi yang heterogen
tion mengekspresikan penanda kedua hepatosit dan saluran empedu
sel. Dalam hati manusia, sel-sel ini diaktifkan oleh berbagai
penyakit hati, termasuk hepatitis virus kronis, dan setelah
nekrosis hepatoseluler parah [13], seperti yang ditunjukkan oleh matian
Studi phological. Kehadiran ceruk progenitor dan
sel induk dalam hati yang normal baru-baru ini dikonfirmasi.
Sel-sel ini telah diperkirakan untuk memperhitungkan antara
0,01% dan 1% dari sel-sel hati pada neonatus dan, tidak seperti janin
sel progenitor hati, mereka tidak menunjukkan aktivitas telomerase
[14-16]. Relung sel induk intrahepatik adalah kanal-kanal
Hering di hati postnatal dan berasal dari piring duktal
di hati janin [17, 18]. Kami juga terisolasi hati janin
Ara. (1) Indikasi utama dari transplantasi hati pada pasien anak dari Eropa Registry
Transplantasi Hati (1968-2010)..

Halaman 3

122 Saat Gene Therapy, 2013, Vol. 13, No 2

Dianat dkk.
sel progenitor dan menunjukkan kemampuan mereka untuk menanamkan dalam
vivo [19], tetapi akses terbatas ke sel-sel ini dan mereka yang kecil
jumlahnya kelemahan utama.
Stem Sel pluripoten
Stem Sel embrio (ESCs)
Manusia sel induk embrionik (hESCs), yang berasal
dari massa sel bagian dalam blastokista manusia (5 hari
setelah pembuahan), pertama kali diisolasi kurang dari 15 tahun yang lalu
oleh kelompok Thomson di University of Wisconsin [20].
Asal embrio dari ESCs menganugerahkan dua tepat-penting
ikatan pada sel-sel ini: mereka dapat tumbuh tanpa batas in vitro sementara
mempertahankan pluripotency atau kapasitas untuk berdiferensiasi menjadi
jenis sel. Sel-sel ini tetap standar emas untuk semua
studi di bidang sel punca pluripotent, meskipun penggunaannya
telah dibatasi oleh kekhawatiran etis, dan dua uji klinis
telah diluncurkan oleh Advanced Cell Technology. Ini
uji coba bertujuan untuk menilai keamanan sel retina hESC diturunkan
untuk mengobati pasien dengan penyakit mata yang disebut Stargardt
Makula Dystrophy dan pasien dengan usia makula terkait
degenerasi. Awal menghasilkan empat bulan setelah uji coba
menunjukkan bahwa metode tersebut aman [21], [lihat juga artikel oleh
Cramer et al. Dalam edisi khusus ini Gene Therapy sekarang].
Diinduksi Stem Sel pluripoten (hiPSCs)
Penemuan terbaru yang manusia induced pluripotent
sel induk (IPSC) dapat dihasilkan oleh ekspresi paksa
dari faktor transkripsi beberapa di sel somatik telah memperbaharui
harapan untuk pengobatan regeneratif dan model- penyakit vitro
ling, karena sel-sel ini mudah diakses [22, 23], [lihat juga
Artikel oleh Bayart dkk. dalam edisi khusus ini Gene sekarang
Terapi]. IPSCs manusia mirip hESCs dalam hal
kapasitas pembaruan diri mereka dan kemampuan untuk berdiferensiasi menjadi
jenis sel yang berasal dari tiga lapisan kuman utama:
ectoderm, mesoderm dan endoderm. Oleh karena itu mereka menyediakan
kesempatan unik untuk mempelajari penyakit pasien-spesifik, sekali
kondisi yang diperlukan untuk menginduksi diferensiasi mereka ke dalam
Jenis diinginkan sel telah ditetapkan [24, 25]. Ini adalah parkhusus- penting bagi pasien dengan penyakit hati, yang bisatidak menjalani biopsi bedah untuk isolasi hepatosit

untuk transplantasi. Teknologi IPSC harus memungkinkan

untuk mengidentifikasi dampak mutasi pada diferensiasi yang
tion / proliferasi / fungsi sel. IPSCs pasien '
juga harus menjadi alat yang baik untuk skrining calon
molekul farmakologis.
Dua set berbeda aplikasi dapat dibayangkan, depending pada asal iPSCs:
IPSC-Berasal dari hepatosit Individu normal
Sel-sel ini dapat digunakan dalam pembentukan bank sel
untuk aplikasi dalam pengobatan regeneratif. Kemungkinan
hepatosit pembangkit IPSC-berasal dari orang dewasa yang dipilih
akan memfasilitasi pembangunan perpustakaan jalur sel dengan
genotipe dikenal, memberikan pasien dengan menutup
HLA / MHC pertandingan, sehingga meminimalkan kebutuhan untuk immunosuppression sebelum engraftment sel.
Sel-sel ini juga akan berguna untuk pemodelan susceptibility untuk penyakit menular, memberikan kesempatan untuk elucidate dasar genetik dari sel yang mendasari mekanisme
kerentanan atau ketahanan terhadap virus. Secara khusus, iPSChepatosit berasal merupakan sasaran yang tepat untuk mempelajari
interaksi antara host dan virus dengan tro- hati
pism. Infeksi sel hepatosit-seperti IPSC yang diturunkan
hepatitis virus C telah dilaporkan, dan permissiveness infeksi telah terbukti berkorelasi dengan
induksi dari-hati spesifik microRNA-122 dan modu- yang
lation faktor seluler yang mempengaruhi replikasi HCV [26-28].
Sel-sel ini mendukung seluruh siklus hidup HCV. Itu
Reseptor LDL, mutasi genetik yang telah terbukti
menyebabkan tipe IIA hiperkolesterolemia familial, merupakan salah satu
kofaktor diidentifikasi untuk masuk HCV, dan ada tumbuh-bukti
dence untuk menunjukkan bahwa hubungan antara HCV dan
LDL / VLDL penting bagi masuknya virus dan pelepasan dari
sel [29].
Dalam situasi akut, seperti stroke atau cedera hati akut,
kebutuhan untuk perawatan yang cepat akan menghalangi penggunaan
sel autologous, bahkan "off-the-shelf" iPSCs alogenik karena
untuk pencairan delay / budaya.
Namun, diferensiasi iPSCs normal menjadi hepatoma
tocytes dapat digunakan untuk membuat hati bio-buatan untuk
pengobatan sementara gagal hati akut. Replace- seperti

ment fungsi hati telah dicapai oleh constructing extracorporeal hati membantu perangkat baik dari primary
hepatosit babi atau garis sel hepatoma manusia. Bagaimanapernah, penggunaan sel babi dibatasi karena risiko
infeksi zoonosis yang ditimbulkan oleh retrovirus endogen babi
tidak diketahui [30]. Baris sel hepatoma manusia memiliki beberapa-beda
ferentiated fungsi dan ada kekhawatiran bahwa dengan demikian sel-sel tersebut
mungkin melarikan diri ke pasien tumor aliran darah dan menyebabkan
pengembangan. Baris sel hepatoma baru, seperti HepaRG,
telah terbukti efektif pada hewan model dari akut
gagal hati, namun pelaksanaan klinis bio sebuah
hati buatan dengan biocomponent proliferatif manusia
masih beberapa tahun lagi [31].
IPSC-Berasal dari hepatosit Individu yang sakit
Terapi gen / sel-pasien tertentu adalah cara yang ideal untuk pra
melampiaskan penolakan sel dan kebutuhan untuk imunosupresi di
situasi di mana hepatosit jangka panjang engraftment adalah ulang
quired, seperti dalam koreksi genetik hati diwariskan disorders. iPSCs tidak harus memerlukan risiko yang sama dari sys kekebalan
tem penolakan bila digunakan untuk pengobatan, karena mereka
sel autologous unik untuk pasien yang bersangkutan. Dengan demikian
diasumsikan bahwa sel-sel ini akan menghasilkan kemungkinan fungsi terbaik
Hasil nasional transplantasi: sel-sel yang berfungsi dalam mereka
lingkungan alam, tanpa memunculkan kronis kekebalan atau
reaksi inflamasi dan tanpa masalah yang terkait
dengan penggunaan obat imunosupresif [32].
Demonstrasi pertama dari terapi sel IPSC berbasis adalah
diterbitkan oleh Hanna dan rekan kerja di tahun 2007. IPSCs yang
berasal dari model tikus anemia sel sabit manusia.
Cacat genetik terkoreksi di iPSCs, yang
diizinkan untuk berdiferensiasi menjadi sel-sel hematopoietik dan
kemudian ditransplantasikan kembali ke dalam tikus syngeneic [33]. Sebuah
signifikan
perbaikan tidak bisa diamati pada gejala
tikus diobati.
Hati adalah organ utama yang bertanggung jawab untuk detoxification. Hepatosit demikian, IPSC-berasal dari individu- yang normal
als harus menemukan berbagai macam aplikasi dalam obat skrining
ing. Penggunaan model IPSC juga harus meningkatkan pemahaman kami
Halaman 4

Manusia Stem Sel pluripoten untuk Penyakit Pemodelan manusia Hati

Saat Gene Therapy, 2013, Vol. 13, No. 2 123
berdiri dari risiko untuk janin obat yang diambil oleh hamil
perempuan. Hepatosit Selanjutnya, dengan mendapatkan IPSC yang diturunkan
dengan berbagai genotipe, itu harus mungkin untuk mengidentifikasi baru
senyawa terapeutik, seperti sel-sel dari pasien dengan mewarisi
penyakit dapat digunakan untuk pengembangan tinggi
layar obat throughput.
Pluripotent sel Diferensiasi Menuju Hepatosit
Dalam beberapa tahun terakhir, sejumlah laboratorium telah melaporkan
spesifikasi hati sel endoderm dan selanjutnya mereka
diferensiasi menjadi hepatosit-seperti sel-sel janin [34-42] di
sistem budaya yang beragam. Namun, semua pendekatan ini adalah
berdasarkan media kultur yang mengandung serum, matriks kompleks
seperti Matrigel dan / atau penggunaan mouse fibro- embrio
ledakan sebagai sel pengumpan. Semua elemen ini adalah sumber
faktor yang tidak diketahui yang bisa mengaburkan-mekanisme molekuler
mekanisme-mengendalikan pembangunan hati manusia atau menjadikan
sehingga jaringan tidak kompatibel dengan applica- klinis masa depan
tions. Memang, paparan sel manusia untuk produk dari
asal hewan dapat meningkatkan risiko penularan patologis
gens yang biasanya tidak menginfeksi manusia, seperti transmissible ensefalopati spongiform, dan penolakan kekebalan tubuh
dari transplantasi sel. Ini disorot oleh Martin MJ et
al. [43], yang menunjukkan bahwa hESCs dibudidayakan dengan hewan
atau produk serum dipertahankan asam sialat non-manusia, yang
imunogenik ketika sel-sel tersebut ditransplantasikan ke asasi
mans. Selain itu, jumlah yang sangat kecil studi in vivo dari
Hepatosit ESC yang diturunkan dilakukan adalah baik difokuskan pada
sangat efek jangka pendek atau teratoma dilaporkan atau adenocarcinomas. Protokol identik yang diterapkan untuk iPSCs dan
dihasilkan sel dibedakan tidak menampilkan fungsi
hepatosit sepenuhnya matang.
Oleh karena itu kami fokus pada peningkatan diferensiasi
protokol tion atas dasar gagasan bahwa pemodelan
langkah awal perkembangan embrio in vitro mungkin
Cara terbaik untuk menghasilkan jenis sel dengan sifat asli. Ini
Pendekatan memerlukan identifikasi dan induksi berurutan
faktor perkembangan kunci, berpotensi menyerupai
Urutan normal pembangunan hati manusia. Sedikit adalah
diketahui tentang mekanisme molekuler yang mengatur proc- ini

ess, tapi pembangunan hati manusia dapat dibagi menjadi empat

besar, langkah-langkah berurutan: 1) Anterior endoderm diferensiasi
tion, 2) pembentukan foregut Ventral (endoderm definitif), 3)
Bud spesifikasi hati (hepatoblasts), dan 4) berbeda- The
entiation progenitor hati ke hepato janin dewasa
cytes dan hepatosit dewasa (Gbr. 2).
Menuju Sel Endoderm
The Activin / Nodal jalur sinyal telah terbukti
menginduksi diferensiasi endoderm selama perkembangan awal
ikan, amfibi dan mamalia [44]. Namun, kelompok kami dan
lain telah menunjukkan bahwa faktor pertumbuhan yang sama mempertahankan
Status pluripotent dari hESCs dan hiPSCs [45]. -Mekanisme yang
mekanisme-oleh yang jalur sinyal yang sama dapat memenuhi ini
fungsi bertentangan telah menjadi fokus utama bagi batang
sel lapangan selama 10 tahun terakhir. Pertama, berbagai sinyaljalur ling mengendalikan keputusan nasib sel awal
sel induk berpotensi majemuk, seperti yang melibatkan Aktivin, FGF
dan BMP, dianalisis. Analisis ini mengakibatkan bangan yang
ngunan dan validasi didefinisikan kimia-kondisi budaya
tions untuk mencapai spesifikasi embrio manusia
sel ke mesendoderm (tetapi juga ke neuroectoderm batang
dan jaringan ekstra-embrio) [45]. Kemudian genom analisi lebar
ses telah mengungkapkan bahwa Activin / Nodal sinyal dikendalikan
jaringan transkripsi yang berbeda di hESCs dan endoderm
sel dan bahwa efek dari Activin / Nodal sinyal pada pluripotensi dan diferensiasi didikte oleh jaringan-spesifik
mitra dari Smad2 / 3, seperti NANOG dan Eomesodermin
[46]. Model molekul pertama yang komprehensif menghubungkan
transisi dari pluripotency spesifikasi endoderm
selama pengembangan mamalia, melalui hirarki
faktor transkripsi yang mengatur spesifikasi endoderm, adalah
baru-baru ini dijelaskan oleh Teo et al. [47]. Kami menemukan bahwa
pluripotency faktor NANOG, OCT4, dan Sox2 memainkan
peran penting dalam jaringan ini, dengan secara aktif mengarahkan diferensiasi
tiation. Faktor-faktor ini mengendalikan produksi Eomesodermin (EOMES), yang menandai awal endoderm membuat spesifikasi
kation. Pada gilirannya, EOMES berinteraksi dengan Smad2 / 3, untuk memulai
jaringan transkripsi pembentukan endoderm pemerintahan
[47]. Akhirnya, studi terbaru menunjukkan bahwa PI3 Kinase
memblokir efek induktif Activin / Nodal pada endoderm
diferensiasi dengan mengendalikan aktivitas sinyal NTB

[48]. Oleh karena itu, penghambatan jalur ini secara signifikan immembuktikan diferensiasi endoderm dari hPSCs [49].
Menuju Hepatoblasts
Pengembangan hati janin dimulai ketika foregut ventral
tunas endoderm off dan menimbulkan epitelium hati awal
lium dalam menanggapi sinyal dari kedua mesoderm jantung
dan septum transversum [50, 51]. Pada manusia, tunas ini
bentuk pada minggu ke 4 kehamilan. Selama proses ini, hati
nenek moyang timbul dari pematangan suatu belum diketahui,
sel induk multipoten. Progenitor hati yang bipotent pro
sel genitor yang dapat berdiferensiasi menjadi baik hepato janin
cytes atau, jika kontak dengan mesenkim portal, empedu
sel. Mereka mengekspresikan penanda dari kedua garis keturunan.
Sel progenitor dari tikus hati janin telah purified oleh aliran cytometry berbasis seleksi positif [52]. Klonal
populasi diri memperbaharui sel-sel induk murine dapat differentiate ke dalam sel dari berbagai garis keturunan, seperti yang ditemukan dalam
hati, pankreas, usus dan perut. Setelah transplantasi,
mereka terisi kembali populasi hepatosit dan saluran empedu, pan
Creas (sel duktus pankreas) dan usus-epitel tismenggugat. Namun, sel-sel induk ini jarang, bahkan pada tikus foetal hati, dan kelimpahan mereka tampaknya menurun lebih lanjut dengan
penuaan. Progenitor janin tersebut telah diisolasi dari huPria hati janin di akhir (18-22 minggu) [53, 54] dan awal
[19] tahap pembangunan. Kami juga telah menunjukkan bahwa progenitors / hepatosit berasal dari hati janin manusia memiliki
sifat molekul tertentu berbeda dengan orang dewasa
hepatosit, memungkinkan mereka untuk menanamkan dan bermigrasi dalam
penerima parenkim hati yang lebih efisien daripada hepatoma dewasa
tocytes setelah transplantasi [19, 55, 56].
Setelah generasi sel endoderm dari pluriposel tenda, kami dihasilkan hepatoblasts, yang ditampilkan phe
penanda notypic sel janin, seperti A1AT, AFP, CK19.
Setelah diferensiasi lanjut, hepatosit janin dan lebih
sel matang yang dihasilkan dari kedua ESCs dan iPSCs, dan
sel-sel ini ditampilkan fungsi hati, seperti albumin pro
Halaman 5

124 Saat Gene Therapy, 2013, Vol. 13, No 2

Dianat dkk.
duction dan sekresi, ekskresi urea, CYP3A7 kemudian

Ekspresi CYP3A4 [57].

Menuju Hepatosit Sepenuhnya Differentiated
Meskipun kemajuan terbaru, diferensiasi manusia
ESCs dan iPSCs sangat bervariasi, tergantung sel-line dan
menghasilkan sel dewasa berbeda dari yang ditemukan di maorgan mendatang in vivo. Hal ini juga berlaku untuk jenis sel lain (misalnya
untuk neuron [58]).
Hal ini penting untuk menjaga sel hati dibedakan stabil
fungsi dalam budaya, hepatosit terutama jika hiPSC diturunkan
yang akan digunakan untuk pemodelan penyakit, penilaian obat
toksisitas atau bahkan sebagai hati bio-buatan.
Perbedaan dalam kapasitas diferensiasi telah dilaporkan
antara ESC dan garis IPSC, yang memerlukan pengujian
protokol didefinisikan pada baris yang berbeda. Yamanaka dan copekerja baru saja menganalisis perbedaan diferensiasi hati
tion antara 28 baris hiPSC [59]. Garis sel berasal
dari berbagai sel somatik (sel darah perifer, kulit
fibroblas) dan dihasilkan dengan retrovirus, Sendai
virus atau episom plasmid. Perbedaan diferensiasi hati
tiation sebagian besar disebabkan perbedaan antara donor
daripada perbedaan dalam jenis sel awalnya digunakan,
meskipun klon IPSC berasal dari limfosit darah perifer
phocytes (PBL) secara konsisten dibedakan lebih efisien
daripada yang berasal dari fibroblas dermal.
Dalam hati, interaksi sel heterotypic antara parensel chymal dan tetangga non-parenkim mereka menghasilkan
regulasi diferensiasi dan proliferasi jaringan dalam
tiga dimensi (3D) mikro.
In vitro, hepatosit kelangsungan hidup dan fungsi-hati khusus
yang stabil selama beberapa minggu oleh kokultur dengan sel lainnya
jenis, oleh budaya dengan komponen matriks ekstraseluler atau dengan
menggunakan bioreaktor 3D [60]. Dalam kondisi lain, sel-sel RAP
iseng dedifferentiate dan menampilkan inducibility obat miskin. ECM
dan kokultur dengan sel non-parenkim telah ditunjukkan
memodulasi diferensiasi ESC [38, 61].
Sinyal parakrin yang diproduksi oleh subpopula- berbeda
tions sel mesenchymal hati yang diturunkan, dimurnikan dengan imteknologi munoselection, telah diidentifikasi dan ditampilkan
untuk menginduksi diferensiasi sel induk hati manusia menjadi
sel parenkim sepenuhnya matang dan fungsional [62]. Dengan demikian,
satu gol dari in vitro sistem sel adalah untuk menyusun kembali sel mikro

lingkungan yang sesuai untuk diferensiasi sel, dan 3D sistem

sedang dikembangkan untuk tujuan ini. Sebuah matriks poliuretan
baru-baru ini telah ditunjukkan untuk mempromosikan obat-diinduksi hepatosit
metabolisme dan fungsi [63].
Fungsi yang paling penting yang dibutuhkan dari matang
hepatosit adalah ekspresi terpolarisasi kesenjangan dan patuh
protein persimpangan, seperti connexin 32, Zona occludens proTein 1 dan Integrin, semua yang terlibat dalam en- sel
graftment, dan transporter membran, seperti multidrug
protein perlawanan dan transporter asam empedu. Untuk efektif
detoksifikasi, sel-sel harus menghasilkan sejumlah besar narkoba
metabolisme enzim, sitokrom P450, seperti CYP
3A4, UDP-glucuronosyltransferase dan glutathione S transferase. Sitokrom P450 hati yang khususnya untuk para
larly penting karena mereka terlibat dalam pemeliharaan
homeostasis lipid (kolesterol, vitamin D, dan oxysterol
asam empedu metabolisme) dan dalam detoksifikasi endogeSenyawa nous (misalnya asam empedu) dan xenochemicals (obat).
Dalam Vivo Assay
Sel manusia yang spesifik dibedakan in vitro harus
ditransplantasikan ke tikus model untuk menunjukkan fungsi mereka
tionality. Namun, masalah berikut harus diambil
memperhitungkan: penolakan sel manusia, dan tingkat rendah
dari engraftment sel ditransplantasikan, yang tidak berkembang biak
dalam kondisi normal di hati tikus [64]. IPSC yang diturunkan
hepatosit dapat ditransplantasikan ke tikus imunodefisiensi
atau ke tikus imunosupresi sebagai model penyakit. Alternatif-masing, sebagai repopulation hati oleh hepatosit donor
telah ditunjukkan pada model binatang yang transhepatosit ditanam menampilkan keunggulan pertumbuhan selektif
lebih hepatosit endogen, model tersebut dapat digunakan.
Ara. (2). Tahap Sequential diferensiasi hepatosit untuk aplikasi terapeutik.
Halaman 6

Manusia Stem Sel pluripoten untuk Penyakit Pemodelan manusia Hati

Saat Gene Therapy, 2013, Vol. 13, No. 2 125
Sebagai contoh, dalam beberapa model, kelangsungan hidup dan / atau proliferasi
tion hepatosit asli terganggu oleh genetik atau inherketidakmampuan ited untuk menumbuhkan, seperti dalam fumarylacetoacetate hidro
lase (FAH) tikus -deficient dan urokinase (alb-uPA) transtikus genic, [65, 66]. Kedua jenis model tikus memiliki

telah menyeberang dengan tikus imunodefisiensi dengan berbeda

latar belakang genetik.
Sampai saat ini, sangat sedikit penelitian yang menilai fungsi
ESC / IPSC yang diturunkan sel hepatosit-seperti in vivo. HESCsel hepatosit-seperti berasal baru-baru ini disuntikkan ke dalam
limpa cedera akut NOD / SCID (IL-2R) tikus -null dan
kegigihan dan fungsi sel-sel ini ditunjukkan
sampai tiga bulan setelah transplantasi. Namun, semua
tikus penerima dikembangkan limpa dan hati tumor besar,
menunjukkan sel-sel yang ada mungkin telah dibedakan dalam
populasi sel diresapi [67]. Kami ditransplantasikan ESCberasal GFP-hepatoblasts dan IPSC diturunkan hepatosit-seperti
sel ke uPAxRag2gammac
-/tikus. Tiga bulan kemudian,
beberapa kelompok sel GFP-mengekspresikan dan persentase kecil
usia hepatosit IPSC diturunkan ditemukan memiliki endicangkokkan dalam parenkim tuan rumah [57, 68]. Namun,
hepatosit yang dihasilkan dari pluripotent stem atau multipoten
sel saat terisi kembali hati ditransplantasikan kurang efisien
dari hepatosit manusia dewasa (hingga 80%) [69], tetapi mereka bisa
digunakan untuk mengembangkan dalam model vivo infeksi sel manusia di
tikus dengan hati chimeric [70].
Pemodelan Penyakit Manusia
Pemodelan penyakit menggunakan iPSCs dicapai untuk variabel a
Ety penyakit genetik, [71], [lihat juga artikel oleh Sille et
al. dalam edisi khusus ini Gene Therapy sekarang]. Pertama
Model dicapai untuk atrofi otot tulang belakang, terkemuka
mewarisi penyakit genetik yang sering menyebabkan kematian pada bayi.
IPSCs tersebut dibedakan menjadi neuron motorik, yang
ditampilkan defisit selektif sehubungan dengan motor neuron
dihasilkan dari seorang individu tidak terpengaruh oleh otot tulang belakang
atrofi [72, 73].
Sekitar 50 model penyakit berbasis pemrograman ulang memiliki
sejak diterbitkan dan telah menjadi subyek dari baru-baru ini
review artikel [74-76]. Sebagian besar penyakit yang ditargetkan adalah
gangguan neurodegenerative, karena kesulitan obtaining neuron dari pasien dan kurangnya penyakit yang tepat
model. Mereka termasuk penyakit Huntington, Alzheimer
Penyakit dan penyakit Parkinson [77, 78]. Penyakit lain memiliki
telah ditargetkan, termasuk diabetes tipe 1, yang dihasilkan dari

kehancuran autoimun sel beta pankreas [24],

distrofi otot dan hati penyakit. Baru-baru ini sukses
penyelamatan iPSCs sakit oleh skrining obat menyoroti
potensi pendekatan ini untuk mengidentifikasi obat calon
pengobatan yang potensial. Neuron motorik telah dihasilkan dari
yang iPSCs pasien dengan familial scle- lateral yang amyotrophic
Rosis. ALS adalah akhir-onset, gangguan yang fatal di mana motor
neuron merosot, karena mutasi dari gen pengkodean
Tar DNA-binding protein-43. Dalam tes dari sejumlah chemisenyawa kal, seorang histon acetyltransferase inhibitor, anacasam ardic, ditemukan untuk menyelamatkan ALS motorik abnormal
neuron fenotipe. Dalam laporan lain, prekursor neural crest
berasal dari iPSCs yang dihasilkan dari individu dengan
dysautonomia familial (FD), kelainan genetik yang fatal terkena dampaknya
ing garis keturunan neural crest. Dari 6912 molekul kecil
diuji, delapan ditemukan untuk menyelamatkan ekspresi IKBKAP,
gen yang bertanggung jawab untuk FD. Salah satu molekul kecil juga
diselamatkan hilangnya penyakit-spesifik saraf otonom
ekspresi penanda [79].
Pemodelan Warisan Penyakit Hati Metabolik
Gangguan hati mewarisi dapat diklasifikasikan menjadi dua categoRies:
1) Cacat genetik yang mempengaruhi fungsi hati tertentu
dengan gejala hati tambahan, seperti Crigler Najjar
(CN), Familial Hiperkolesterolemia (FH) pembekuan-faktor
kekurangan tor. Hepatosit normal dan dapat proliferate.
2) Penyakit yang hepatosit terluka karena
akumulasi produk beracun, seperti alpha1 anti
tripsin (A1AT), atau tembaga pada penyakit Wilson, dan bisatidak berkembang biak.
Kami telah berfokus pada gangguan metabolik yang diwariskan disebabkan
oleh mutasi genetik pada protein kunci. Kami pertama kali melakukan
Penelitian yang iPSCs yang dihasilkan dari pasien dengan sevgangguan eral, termasuk A1AT dan FH, dan dibedakan
ke dalam sel hepatosit-seperti. Sel-sel ini ditunjukkan untuk menampilkan
fenotip penyakit [68]. Kedua penyakit, bersama-sama
dengan hemofilia B (HB), telah terpilih sebagai paradigma
Kekurangan hati dari reseptor permukaan sel (FH), dan secreted (HB dan A1AT) protein. Hilangnya hepatosit pro
hasil kegiatan Tein dalam berbagai manifestasi hilir

khusus untuk jalur metabolisme terkait: ekstraseluler

serapan lipid dimediasi oleh reseptor kekurangan, gangguan
sekresi dan akumulasi beracun dari protein bermutasi dan
tergantung enzim-gangguan koagulasi cascade.
1- Jenis IIa Familial Hiperkolesterolemia (FH)
Penyakit kardiovaskular merupakan-masalah kesehatan utama
lem di Eropa. Hiperkolesterolemia familial adalah salah satu seperti
penyakit, yang tidak ada pengobatan kuratif. FH adalah
kelainan genetik yang disebabkan oleh mutasi dari gen pengkodean
low-density lipoprotein reseptor (LDLR) yang menghasilkan
tingkat abnormal beredar kolesterol terkonjugasi untuk
Partikel LDL (LDLC). Pada individu normal, LDLC dapat
diambil dan terdegradasi hanya oleh hepatosit, melalui LDLR tersebut.
Pasien heterozigot (prevalensi 1: 500) diperlakukan dengan
kombinasi obat, termasuk statin, namun khasiat
pengobatan adalah variabel dan pasien ini sering hadir
penyakit kardiovaskular prematur dari usia 40 tahun
[80, 81]. Pasien homozigot (prevalensi 01:10
6
) Memiliki se
vere penyakit kardiovaskular dari masa kanak-kanak. Apheresis LDL
adalah pengobatan yang paling efektif saat ini tersedia untuk di hilir
ing kadar kolesterol serum pada pasien ini, tapi sangat
agresif. Namun demikian, pasien bahkan diperlakukan mati dari mobilpenyakit diovascular sekitar 50 tahun [82, 83]. Mengingat
kesulitan dalam memperoleh sampel biopsi hati dari pasien
dengan FH untuk isolasi hepatosit primer, ada
Saat ini tidak ada in vitro Model seluler penyakit ini. Lima-pasien
pasien-dengan homozigot familial hypercholesterolemia ulang
hepatosit autologus Perangkat ini mendapat ditransduksi ex vivo dengan
vektor retroviral yang membawa gen reseptor LDL manusia [84],
di pertama ex vivo terapi sel / gen percobaan, dilaporkan lebih dari
15 tahun yang lalu. Perawatan ini secara sementara menurun lev- LDL
els di beberapa pasien dan percobaan menunjukkan pendekatan ini
Halaman 7

126 Saat Gene Therapy, 2013, Vol. 13, No 2

Dianat dkk.
Supaya aman. Namun, pendekatan ini tidak kemudian
diulang karena kompleksitas dari prosedur yang didilibatkan penghapusan lobus kiri pasien untuk perfu-

sion, budaya dan transduksi retroviral dari hepato yang

cytes dan infus mereka ke pasien. Selanjutnya, masa depan
perkembangan dari pendekatan ini dibatasi oleh jumlah
hepatosit diisolasi dan tingkat transduksi non
membagi sel dengan vektor retroviral. Untuk memotong ini
keterbatasan dan untuk mengembangkan relevan in vitro model untuk obat
screening, kami telah menghasilkan garis IPSC baru dari pasien
homozigot untuk mutasi menyebabkan FH. Dihasilkan ini
sel ditampilkan fitur morfologi dan penanda
sel induk berpotensi majemuk (Gambar. 3) dan sekali dibedakan menjadi
hepatosit diinternalisasi ligan LDLR buruk, menunjukkan
bahwa mereka mereproduksi fenotipe yang sakit.
2- Hemofilia B (HB)
HB disebabkan oleh mutasi gen yang mengkode clot- yang
ting faktor IX (FIX) yang terletak pada kromosom X. HB adalah
Penyakit hemoragik (kejadian: 1: 30.000 laki-laki). Hepato
cytes mengeluarkan sejumlah besar FIX, dalam bentuk tidak aktif, ke
aliran darah. Tingkat keparahan penyakit ini berbanding terbalik cor
terkait dengan aktivitas FIX residual, dan sesedikit 5% lebih
Kegiatan FIX cukup untuk mengubah hidup-parah
mengancam penyakit hemofilia ringan dalam dengan jauh lebih baik
kualitas hidup. Pengobatan substitusi dengan FIX rekombinan
atau dengan FIX dimurnikan dari donor plasma tersedia, tetapi
mahal, karena terbatasnya pasokan. Namun, pengobatan ini
tidak tanpa efek samping, termasuk produksi neutrofil
tralising antibodi anti-FIX. Beberapa percobaan dari gen manusia
terapi, sebagai pengobatan alternatif, telah dilakukan
meskipun produksi stabil koagulasi terapi
protein belum tercapai. Ini tetap tetap
daerah penyelidikan intens [85, 86]. Sebuah gen yang berhasil
percobaan terapi baru-baru ini dilaporkan di mana serotype- sebuah
8-pseudotyped, self-pelengkap adenovirus terkait
virus (AAV) digunakan [87]. Infus dosis tunggal
manusia vektor faktor IX mengakibatkan pro AAV-dimediasi
duction dari FIX dalam jumlah yang sesuai dengan 2-11% yang normal
tingkat. Ini sudah cukup untuk meningkatkan fenotipe perdarahan
ketik enam peserta, dengan hanya beberapa efek samping. Begitu
jauh, penyakit ini belum dimodelkan menggunakan hiPSCs dan
sehingga tetap menjadi fokus utama untuk pengembangan obat baru
Platform skrining. Oleh karena itu, telah dibuktikan
yang ESC- dan hepatosit IPSC diturunkan ekspres FIX [88,

89].
3- Alpha-1-Anti-Trypsin
1 antitrypsin (A1AT) defisiensi (A1ATD) adalah salah satu
paling IMDS umum (1: 2000 North Caucasian) yang associated dengan manifestasi klinis yang berat. The A1AT proTein, dikodekan oleh SERPINA1 gen, biasanya disekresikan
dari hepatosit sebagai glikoprotein dari 52 kDa serum. A1AT
bertindak sebagai inhibitor neutrofil elastase di paru-paru. Dis
kemudahan terutama muncul dari warisan homozigot dari Z
alel, yang terdiri dari titik mutasi pada ekson lalu
(Glu342Lys, Z) dari SERPINA1 gen. The ZZ genotipe
hasil dalam cacat yang ditandai di A1AT lipat, dan
Ara. (3). Pluripotent stem sel induced berasal dari fibroblas dari homozigot pasien
untuk Familial Hiperkolesterolemia dan ekspresi
penanda pluripotency.
Halaman 8

Manusia Stem Sel pluripoten untuk Penyakit Pemodelan manusia Hati

Saat Gene Therapy, 2013, Vol. 13, No. 2 127
kecenderungan untuk pembentukan polimer protein oleh loop-the
Mekanisme lembar penyisipan [90]. Retensi berikutnya Z
A1AT dalam hepatosit menyebabkan kelebihan protein yang
bermanifestasi sebagai asam periodik Schiff (PAS) inklusi-positif
terkait dengan hepatitis neonatal, sirosis, dan hepatocellukarsinoma lar. Selain itu, sebagai kadar plasma A1AT di ZZ
homozigot jatuh hanya 10-15% dari tingkat normal,
paru-paru yang tersisa terkena kerusakan enzimatik oleh neutrofil
elastase dan dengan demikian cenderung untuk onset awal panlobular
emfisema [91]. Pengobatan kuratif untuk gangguan ini adalah skr
rently kurang, meninggalkan peneliti mengejar thera- berbeda
strategi peutic termasuk terapi gen. Sampai saat dua Tahap I
uji klinis telah dilakukan untuk menyelidiki terdistribusikan dengan
keampuhan dari augmentasi gen dari situs ektopik seperti skeletal
otot sebagai sarana untuk mengobati penyakit paru-paru A1AT [92]. Seperti itu
strategi tidak namun mampu menjawab berdasarkan hatikomplikasi yang dihasilkan dari intra-hepatocytic polimer acpenumpukan. Bukannya transplantasi dikoreksi genetik
hepatosit ke dalam hati dari pasien yang terkena dapat memfasilitasi
koreksi lengkap dari semua aspek dari penyakit. Seperti
Pendekatan sudah membawa diutamakan dalam-praktek klinis
Praktisnya setidaknya sejak dua pasien yang dirawat untuk 1-antitrypsin

Kekurangan [93]. Perawatan ini telah sayangnya menghasilkan

keberhasilan klinis jangka panjang terbatas karena terbatasnya jumlah
dan rendahnya kualitas sel donor hati digunakan, serta
kebutuhan terus-menerus obat imunosupresan untuk pramelampiaskan penolakan sel alogenik. Baru-baru ini, kelompok kami
telah menunjukkan bahwa hiPSC dapat digunakan untuk model 1antitrypsin in vitro dan budaya yang dihasilkan
sistem bisa berlaku untuk skrining obat skala besar.
Gen Koreksi
Terapi gen / sel dipersonalisasi gangguan genetik menggunakan
hiPSCs akan menghindari penolakan sel dan kebutuhan untuk immunopenekanan. Namun, pendekatan terapi tersebut akan ulang
quire teknologi baru untuk memperbaiki anomali genetik Induc
ing penyakit. Terapi gen hepatosit berasal dari
hiPSCs merupakan alternatif pertama untuk mencapai ini besar
tujuan. Memang, sejak persidangan dilakukan pada pasien FH, sigkemajuan nifikan telah dibuat dengan vektor terapi
dan, khususnya, vektor lentiviral telah dirancang dan
protokol dikembangkan untuk transduksi efisien manusia
hepatosit (> 80%, dibandingkan 20-25% dengan vektor retroviral)
[94, 95]. Karya ini memungkinkan untuk memperbaiki hepatosit
diisolasi dari pasien dengan tipe 1 sindrom Crigler-Najjar
[96]. Strategi ini didasarkan pada modifikasi genetik
sel autologous dari pasien akhirnya bisa diterapkan
untuk banyak penyakit metabolik lain yang mempengaruhi hati, termasuking sindrom Crigler-Najjar, A1ATD, gangguan siklus urea
dan gangguan koagulasi lainnya. Namun, penelitian memiliki
menunjukkan bahwa penggunaan vektor integratif seperti retrovirus
bisa menimbulkan risiko termasuk vektor imunogenisitas, hati
toksisitas dan induksi mutasi genetik yang berbahaya [97]. Buluthermore, ekspresi terus menerus vec- non-integratif
tor seperti AAV seringkali sulit untuk dicapai. Bahkan,
proliferasi konstan hepatosit mungkin membatasi terdistribusikan
siensi sistem viral episom di jangka panjang dalam hati
[98]. Yang paling penting, IMD sering melibatkan gen yang mantan
pression perlu dikontrol ketat dan / atau diatur
melalui mekanisme fisiologis kompleks yang tidak bisa
direplikasi oleh promotor ubiquitously aktif umumnya ditemukan
di vektor terapi gen. Penyebaran vektor dan dengan demikian gen
Ekspresi juga sulit untuk mengontrol dan meskipun memanfaatkan- yang
Kemampuan promotor-jaringan tertentu, efek potensi

integrasi sistemik merupakan perangkap lain dari terapi tersebut.

Sementara menarik, terapi gen untuk IMDS akan membutuhkan lebih lanjut
pengembangan untuk terapi pribadi dari penyakit hati.
Editing genom merupakan alternatif yang menarik dan
beberapa publikasi telah melaporkan mutasi genetik yang efisien
Koreksi di hiPSCs [99-101]. Rekombinasi homolog
(HR) merupakan pendekatan yang paling umum digunakan untuk menargetkan
situs tertentu dari genom mamalia. Namun, ini ap
proach sejauh ini telah terbukti waktu prohibitively dan sumber daya
mengkonsumsi di hESCs dan hiPSCs. Ini juga membutuhkan penggunaan
enzim rekombinase berpotensi beracun Cre dan daun
belakang sisa "loxP" urutan [102]. Keterbatasan tersebut
membuat HR pantas untuk koreksi genetik hiPSC
garis yang pada akhirnya akan menghasilkan turunan yang ke
akan kembali diperkenalkan kembali ke dalam tubuh manusia. Munculnya baru
teknologi berdasarkan Zinc Finger nucleases (ZFNs) dan transkripsi aktivator seperti nucleases efektor (Talens) memiliki
terbukti sangat meningkatkan efisiensi gen sasaran dari
ing dalam sel induk berpotensi majemuk manusia [103, 104]. Baru saja,
ZFNs dalam kombinasi dengan sistem transposon piggyBac
(Teknologi Z-Pig) telah digunakan untuk memperbaiki titik mutasi
tion di 1a serpin bertanggung jawab A1ATD [105]. Ap ini
proach memungkinkan koreksi dari kedua alel normal Simultaneously dan produksi sepenuhnya dikoreksi hiPSC
baris dalam waktu kurang dari 4 bulan. Selanjutnya, piggyBac yang
transposon tidak memerlukan Cre / loxP teknologi dan
sehingga memungkinkan koreksi gen tanpa meninggalkan buatan
urutan genom. Yang penting, kelemahan utama dari
ZFNs bisa kurangnya kekhususan (yaitu mereka bisa menargetkan
sejumlah luas situs samar dalam genom) yang bisa
mengakibatkan jumlah luas kelainan genetik [106]. Bagaimanapernah, seluruh genom sekuensing menunjukkan bahwa koreksi gen
menggunakan ZFNs tidak menyebabkan perubahan genetik tambahan di
hiPSCs [105]. Secara bersama-sama, data ini menunjukkan
efisiensi Z-babi untuk mengedit mutasi titik di mammal- yang
ian genom yang merupakan langkah penting menuju
penggunaan hiPSCs untuk terapi berbasis sel dalam konteks mono
gangguan genic.
Pentingnya Studi praklinis di Besar-hewan models untuk Regenerative Medicine
Sebelum terapi sel autologus atau alogenik dapat ap-

disuplai ke pasien manusia, penilaian praklinis menyeluruh

iPSCs dalam model besar-hewan yang cocok diperlukan, untuk memastikan
bahwa perlakuan yang diusulkan dengan sel IPSC yang diturunkan adalah baik
aman dan efektif. Sekarang mapan yang non-manusia
primata merupakan model terbaik untuk uji coba tersebut, karena
mereka adalah binatang yang paling dekat dengan manusia dan memiliki
fisiologi yang sama, terutama karena menyangkut hati [107]
dan sistem saraf pusat. Jangka panjang tindak lanjut dari
sel transplantasi, yang tidak mungkin pada hewan pengerat, dapat
dilakukan pada monyet. The iPSCs pertama berasal dari
monyet rhesus, seperti dilansir Liu et al. 2008 [108].
Sel-sel pluripoten memunculkan tiga garis keturunan. iPSCs
juga telah diperoleh dari pigtailed dan cynomolgus macaques, marmoset dan latihan [108-110].
Halaman 9

128 Saat Gene Therapy, 2013, Vol. 13, No 2

Dianat dkk.
Blin et al. Melaporkan isolasi dan karakterisasi dari
kelompok mesoderm sel progenitor kardiovaskular awal,
diinduksi oleh BMP2 dan mengekspresikan protein permukaan sel
-tahap tertentu embrio antigen 1 (SSEA-1). BMP2diinduksi SSEA-1
+
Sel-sel dimurnikan dari iPSCs dan mereka
diferensiasi menjadi cardiomyocytes, sel endotel dan
sel otot polos diinduksi oleh pengobatan dengan didefinisikan
sitokin dan molekul sinyal. Dimurnikan SSEA
+
progenisel tor dari sel-sel ES monyet rhesus yang engrafted ke
hati primata non-manusia, di mana mereka dibedakan menjadi
sel jantung dan dilarutkan 20% dari jaringan parut tanpa
membentuk teratoma. Primata menerima cangkok dari un
populasi dimurnikan dari sel jantung-berkomitmen, termasuk
SSEA-1
sel, dikembangkan teratoma di jaringan parut [111].
Salah satu rintangan utama disorot oleh hepatosit transplantation adalah rendahnya efisiensi donor hepatosit engraftment
ke dalam parenkim tuan rumah. Banyak studi pada berbagai hewan pengerat

model telah menunjukkan bahwa, setelah dimasukkan ke hati,

hepatosit tetap terperangkap di ruang portal dan sinusoids (hingga 70%), menyebabkan hipertensi portal dan ischeCedera mia-reperfusi. Sebagian besar sel-sel ini kemudian dibersihkan
oleh sistem kekebalan tubuh bawaan, termasuk sel-sel Kupffer dan
granulosit. Ini dapat menjelaskan kurangnya jangka panjang
perbaikan klinis pada pasien yang menjalani transplantasi
[112].
Dalam upaya untuk meningkatkan engraftment sel dalam model transposable untuk praktek klinis, kami telah mengembangkan asli
Pendekatan untuk transplantasi hepatosit autologus ke mahati caque. Kami telah menunjukkan bahwa sementara sebagian Portal embolization meningkatkan engraftment sel, sehingga en- yang
graftment dari 7% dari hepatosit ditransplantasikan, dibandingkan hanya
0,5-1% pada hewan non embolised. Sebelum transplantasi,
hepatosit terisolasi yang ditransduksi dengan vektor lentiviral
di mana gen GFP ditempatkan di bawah kendali
promotor-hati khusus dari manusia Apolipoprotein A-II
(ApoA-II) gen. Hal ini menyebabkan deteksi GFP in vivo 12
minggu setelah transplantasi, menunjukkan bahwa apoA-II
promotor fungsional dalam jangka panjang di hati dan
dapat digunakan untuk koreksi gen dalam sakit IPSC yang diturunkan
hepatosit [113-115].
Studi-studi ini membuka jalan untuk eksperimen dengan
iPSCs kera yang diturunkan dan transplantasi iPSChepatosit berasal ke kera hati autologus.
Tantangan
1) Model muncul untuk mereproduksi phe penyakit manusia
notype untuk penyakit monogenik sekarang telah bangan
oped, termasuk beberapa untuk gangguan hati, tetapi sebagian besar
model ini didasarkan pada hanya beberapa pasien. Menggunakan
angka yang lebih besar dari donor akan diperlukan untuk model
setia pentingnya keragaman genetik di-individu
variabilitas individual.
2) Genome perbandingan lebar telah mengungkapkan beberapa divergence antara hiPSCs dan hESCs yang tetap
standar emas untuk aplikasi klinis. Seluruh genom
profil metilasi DNA pada resolusi tunggal-basis
di lima baris IPSC manusia telah dilaporkan, bersama-sama
dengan methylomes dari ESCs, sel somatik, diferensiasi
diciptakan iPSCs dan ESCs. iPSCs menampilkan variabilitas yang signifikan

ity dari pemrograman ulang, termasuk dari gota somatik

ory, dan menyimpang pemrograman ulang dari metilasi DNA
dan perbedaan dalam CG metilasi dan histon fi kasi
kation. Akhirnya, diferensiasi iPSCs ke trosel phoblastic mengungkapkan bahwa kesalahan dalam reprogram- yang
ming dari CG metilasi ditransmisikan pada fre- tinggi
quency, menyediakan pemrograman ulang tanda tangan IPSC
yang dipertahankan setelah diferensiasi. Epigenetik ini
Variasi dapat dipertanggungjawabkan oleh di- lingkungan
yang diinduksi dan perubahan epigenetik stochastic yang terkumpul
akhir dari waktu ke waktu di epigenome individu [116119]. Selain itu, konsekuensi biologis ini
Perbedaan tetap dipahami jika seseorang ingin menggunakan
hiPSC untuk engraftment jangka panjang pada pasien. Akhirnya,
telah untuk diingat bahwa penyakit-spesifik ESC garis
dari embrio yang diperoleh berikut praimplantasi gediagnosis netic mungkin lebih tepat daripada IPSC
baris untuk studi tertentu. Contoh disediakan oleh
sindrom X rapuh (FX), di mana gen FMR1 adalah
tidak tepat dibungkam selama pengembangan. FX-iPSCs
tidak mengekspresikan gen FMR1 karena kegagalan untuk reactiswasta lokus mutan selama pemrograman ulang [120]. Demikian
FX-iPSCs dapat menimbulkan neuron FMR-kekurangan
[121], tetapi mereka tidak dapat digunakan untuk studi-mekanisme yang
mekanisme-oleh yang membungkam gen patologis terjadi durpengembangan ing.
3) ketidakstabilan genetik tetap menjadi masalah besar bagi pluripotent
sel batang. Memang, hiPSCs sebagai orang lain sel primer,
terakumulasi mutasi somatik selama ekstensif in vitro
budaya [122, 123]. Yang penting, laporan terbaru juga nyarankangest bahwa anomali genetik diamati pada hiPSCs bisa ulang
memantulkan keragaman genetik dari sel-sel somatik reprodiprogram [124] dan dengan demikian menggarisbawahi pentingnya untuk
memahami relevansi biologis mutasi ini
untuk aplikasi terapeutik.
4) Status pluripotent dari hiPSCs membebankan pada mereka sebuah
identitas embrio. Sementara karakteristik ini advantageous untuk studi biologi perkembangan dasar, itu juga
merupakan kelemahan utama untuk produksi penuh
sel fungsional. Memang, ini menunjukkan bahwa metode
diferensiasi harus rekapitulasi in vitro seluruh de-

Pembangunan untuk menghasilkan sel-sel dewasa, yang sangat

kompleks jika tidak mustahil dengan kultur sel konvensional
sistem. Oleh karena itu, sebagian besar jenis sel yang dihasilkan dari
hiPSCs memiliki identitas janin dan telah membatasi fungsi
karakteristik nasional.
Pemrograman Ulang langsung Sebagai Sebuah Alternatif
Strategi pemrograman ulang langsung - konversi langsung
dari satu jenis sel yang lain, perkembangan non permisif,
-garis keturunan spesifik jenis sel - melibatkan penggunaan transkripsi
faktor atau gen atau miRNAs lainnya, yang dipilih atas dasar
peran kunci mereka dalam spesifikasi nasib sel di bangan embrio
ngunan. Beberapa jenis sel sudah pernah berhasil
dihasilkan dari fibroblast, termasuk neuron, kardiomiopati
cytes, nenek moyang darah, makrofag dan hepatosit (Untuk
Ulasan [125-128]).
Huang et al. Menunjukkan induksi langsung dari fungsi
nasional (iHep) sel-sel dari tikus ekor-tip fibro- seperti hepatositledakan dengan transduksi Gata4, Hnf1 dan Foxa3, dan
Halaman 10

Manusia Stem Sel pluripoten untuk Penyakit Pemodelan manusia Hati

Saat Gene Therapy, 2013, Vol. 13, No. 2 129
inaktivasi p19
Arf
. sel iHep memiliki epitel khas
morfologi, menyatakan gen hati dan diperoleh hepato
fungsi monosit. Secara khusus, sel-sel iHep ditransplantasikan adalah
mampu terisi kembali hati dari fumarylacetoacetate hidro
lase-kekurangan (Fah
/
) Tikus cukup untuk mengembalikan fungsi hati
tion dan untuk menyelamatkan 40% dari tikus penerima dari kematian [129].
Kelompok lain mengidentifikasi tiga kombinasi spesifik
dua faktor transkripsi - Hnf4 ditambah Foxa1, Foxa2 atau
Foxa3 - yang dikonversi embrio tikus dan dewasa fibroledakan ke dalam sel sangat mirip hepatosit in vitro.
Mereka menyarankan bahwa HNF4a dan Foxa3 dapat didefinisikan sebagai
set minimal gen yang diperlukan untuk generasi iHep,
meskipun Foxa3 tidak dapat mengkompensasi kekurangan dari kedua
Foxa1 dan Foxa2 dalam pembangunan hati tikus. Dalam repopulapercobaan tion di fah yang

-/Model gagal hati, sur- yang

vival dari 40% dari hewan transplantasi meningkat [130].
Namun, dalam kedua studi, perbedaan besar dalam gen diekspresikan
sion yang diamati antara sel iHep dan hepato primer
cytes, sehingga menyelamatkan sebagian hewan ditransplantasikan.
Masih harus ditentukan apakah kombinasi- berbeda
tions faktor mendorong generasi hepatosit di asasi
mans.
Melton dan rekan kerja menemukan bahwa kombinasi dari
set didefinisikan faktor transkripsi (Ngn3, Pdx1 dan Mafa)
adalah cukup untuk mengubah sel eksokrin pankreas ke dalam fungsi
nasional insulin-sel mensekresi beta-seperti in vivo, dengan tinggi
efisiensi. Teknik ini mungkin telah memungkinkan sel untuk develop dalam relung mereka, dan untuk menanggapi sinyal pankreas
[131].
Pendekatan ini dapat digunakan untuk produksi cepat
model "penyakit dalam piring" manusia, tanpa perlu
produksi sel pluripotent, sehingga menghindari potensi-masalah
lems terkait dengan memakan waktu dan pekerjaGenerasi intensif garis hiPSC. Strategi ini mungkin ultikira lebih menarik untuk terapi berbasis sel dan akan
mungkin kurang tumorigenic, disediakan integration- yang
metode pengiriman gen bebas digunakan. Namun, sejumlah
pertanyaan yang diajukan oleh Vierbuchen T [127] tetap unanswered, termasuk:
1) Bagaimana faktor transkripsi transkripsi yang downregulate
Program nasional dari sel awal?
2) Bagaimana faktor transkripsi menemukan situs mereka mengikat dalam
jenis sel dengan pola kromatin modifikasi-beda
ferent dari yang biasanya dihadapi?
3) Mengapa pemrograman ulang langsung lebih sulit dengan manusia
sel daripada dengan sel-sel tikus?
KESIMPULAN
IPSCs manusia memiliki dampak langsung, melalui
generasi penyakit berbasis sel manusia baru dan obatan
model farmakologi manfaat potensi besar untuk
pengembangan pengobatan penyakit baru. -Tantangan yang signifikan
tantangan-dan hambatan untuk penggunaan teknologi IPSC di perterapi sonalized, termasuk isu-isu keselamatan (in vivo fenotipe
stabilitas typic dan tidak adanya teratoma / karsinoma) tetap,

namun diharapkan hambatan tersebut bisa diatasi, membuat

memungkinkan iPSCs untuk memiliki im- asli dan substansial
pakta pada kehidupan pasien.
KONFLIK KEPENTINGAN
Penulis menyatakan tidak memiliki potensi bersaing keuangan
bunga.
UCAPAN TERIMA KASIH
Pekerjaan kami didukung oleh Eropa Komisi
Ketujuh Kerangka Program (ND, CS, AW, LV, ADK)
(hibah perjanjian N 223.317 (LIV-ES), dan N 278.152 (INPUT
NOVALIV), oleh PPA (RFC Liv-iPS), Agence de la
Biomdecine (ND, CS, AW, ADK), oleh Fondation pour la
Recherche Mdicale (ND, ADK, AW) oleh Rgion Ile de
Prancis DIM STEM KUTUB (ND), oleh Asosiasi Franaise contre les miopati (CS), oleh Medical Research
Dewan beasiswa senior yang non-klinis (LV) dan oleh
Cambridge Rumah Sakit Institut Nasional untuk Penelitian Kesehatan
Biomedical Research Center (LV).
PERSETUJUAN PASIEN
Menyatakan tidak ada.
SINGKATAN
hESCs
=
Manusia Sel Stem embrio
hiPSCs
=
Manusia induced pluripotent stem
Sel
FH
=
Familial Hiperkolesterolemia
HB
=
Hemofilia B
MEMPERBAIKI
=
Pembekuan Faktor IX
CN
=
Crigler-Najjar
IMD

=
Penyakit Metabolik mewarisi
A1AT
=
Alpha1-Antitrypsin
A1ATD
=
Alpha1-Antitrypsin Penyakit
AFP
=
Alpha Foetoprotein
CK19
=
Cytokeratin 19
CYP3A7, CYP3A4 =
Sitokrom P450 3A7, 3A4.
LDLR
=
Reseptor LDL
REFERENSI
[1]
Dhawan A, Puppi J, Hughes RD, Mitry RR. Hepatosit manusia
transplantasi: pengalaman saat ini dan tantangan masa depan. Nat Rev
Gastroenterol Hepatol 2010; 7: 288-98.
[2]
Ribes-Koninckx C, Ibars EP, Agrasot MA, et al. Hasil klinis
transplantasi hepatosit dalam empat pasien anak dengan inherpenyakit metabolik ited. Transplantasi Sel 2012; 21: 2267-82.
[3]
Kawahara T, Toso C, Douglas DN, et al. Faktor yang mempengaruhi hepato
isolasi monosit, engraftment, dan replikasi dalam in vivo model yang.
Hati Transpl 2010; 16: 974-82.
[4]
Hughes RD, Mitry RR, status Dhawan A. Saat hepatosit
transplantasi. Transplantasi 2012; 93: 342-7.
[5]
Puppi J, Strom SC, Hughes RD, et al. Meningkatkan teknik untuk
transplantasi hepatosit manusia: laporan dari pertemuan konsensus
di London. Transplantasi Sel 2012; 21: 1-10.
[6]
Terry C, Dhawan A, Mitry RR, et al. Optimalisasi cryopre- yang

konservasi dan pencairan protokol untuk hepatosit manusia untuk digunakan dalam
Transplantasi sel. Hati Transpl 2010; 16: 229-37.
[7]
Najimi M, Smets F, Sokal E. Hepatocyte apoptosis. Metode Mol
Biol 2009; 481: 59-74.
Halaman 11

130 Saat Gene Therapy, 2013, Vol. 13, No 2

Dianat dkk.
[8]
Antherieu S, Chesne C, Li R, et al. Optimasi HepaRG
Model sel untuk metabolisme obat dan toksisitas studi. Toxicol Dalam VItro 2012; 26: 1278-1285.
[9]
Popp FC, Slowik P, Eggenhofer E, et al. Tidak ada kontribusi mulsel stroma tipotent mesenchymal untuk regenerasi hati pada tikus
Model cedera hati berkepanjangan. Stem Sel 2007; 25: 639-45.
[10]
Kuo TK, Hung SP, Chuang CH, et al. Stem terapi sel untuk hati
Penyakit: parameter yang mengatur keberhasilan menggunakan sumsum tulang
sel induk mesenchymal. Gastroenterologi 2008; 134: 2111-21,
2121 e1-3.
[11]
Tsai PC, Fu TW, Chen YM, et al. Potensi terapeutik
sel batang mesenchymal pusar manusia dari jelly Wharton di
pengobatan fibrosis hati tikus. Hati Transpl 2009; 15: 484-95.
[12]
Fausto N, Campbell JS. Peran hepatosit dan sel oval di
regenerasi hati dan re-populasi. Mech Dev 2003; 120: 117-30.
[13]
Roskams TA, Libbrecht L, Desmet VJ. Sel progenitor di sakit
hati manusia. Semin Liver Dis 2003; 23: 385-96.
[14]
Schmelzer E, Zhang L, Bruce A, et al. Manusia sel induk hati
dari donor janin dan postnatal. J Exp Med 2007; 204: 1973-1987.
[15]
Zhang C, Guo X, Jiang G, et al. CpG pulau methylator fenotipe
asosiasi dengan aktivitas telomerase diregulasi di hepatoseluler
karsinoma. Int J Kanker 2008; 123: 998-1004.
[16]
Schmelzer E, Reid LM. Aktivitas telomerase manusia, telomerase dan

ekspresi Template telomeric di sel induk hati dan di hati

dari donor janin dan postnatal. Eur J Gastroenterol Hepatol 2009;
21: 1191-8.
[17]
Turner R, Lozoya O, Wang Y, et al. Manusia sel induk hati dan
pematangan biologi keturunan hati. Hepatologi 2011; 53: 1035-1045.
[18]
Lemaigre F. [keputusan nasib Lineage di normal dan regenerasi
hati]. Med Sci (Paris) 2012; 28: 958-62.
[19]
Mahieu-Caputo D, Allain JE, Branger J, et al. Repopulation dari
athymic hati mouse dengan cryopreserved awal hepatoma janin manusia
toblasts. Hum Gene Ther 2004; 15: 1219-1228.
[20]
Thomson JA, Itskovitz-Eldor J, Shapiro SS, et al. Induk embrio
baris sel yang berasal dari blastocyst manusia. Ilmu 1998; 282: 11457.
[21]
Schwartz SD, Hubschman JP, Heilwell G, et al. Induk embrio
uji sel untuk degenerasi makula: laporan awal. Lanset
2012; 379: 713-20.
[22]
Takahashi K, Tanabe K, Ohnuki M, et al. Induksi pluripotent
sel dari fibroblast manusia dewasa oleh faktor didefinisikan batang. Sel
2007; 131: 861-72.
[23]
Taman IH, Zhao R, West JA, et al. Pemrograman Ulang dari jadi- manusia
sel matic untuk pluripotency dengan faktor didefinisikan. Nature 2008;
451: 141-6.
[24]
Maehr R, Chen S, M Snitow, et al. Generasi induk berpotensi majemuk
sel dari pasien dengan diabetes tipe 1. Proc Natl Acad Sci USA
2009; 106: 15.768-73.
[25]
Soldner F, Hockemeyer D, Beard C, et al. Penyakit Parkinson
pluripotent stem cells pasien yang diturunkan disebabkan bebas dari virus reprofaktor pemrograman. Sel 2009; 136: 964-77.
[26]
Yoshida T, Takayama K, Kondoh M, et al. Penggunaan hepato manusia
sel monosit-seperti yang berasal dari induksi sel induk berpotensi majemuk sebagai
model untuk hepatosit pada infeksi virus hepatitis C. Biochem Bio

Phys Res Commun 2011; 416: 119-24.

[27]
Roelandt P, S Obeid, Paeshuyse J, et al. Manusia induk berpotensi majemuk
hepatosit sel yang diturunkan mendukung replikasi lengkap hepatitis C
virus. J Hepatol 2012; 57: 246-51.
[28]
Schwartz RE, Trehan K, Andrus L, et al. Modeling hepatitis C
infeksi virus menggunakan manusia induced pluripotent stem sel. Proc
Natl Acad Sci USA 2012; 109: 2544-8.
[29]
Tao W, Xu C, Ding Q, et al. Sebuah titik mutasi tunggal di E2 enhances virus hepatitis C infektivitas dan mengubah lipoprotein asosiasi
tion dari partikel virus. Virologi 2009; 395: 67-76.
[30]
Martin U, Winkler ME, Id M, et al. Infeksi Produktif primer
sel endotel manusia dengan babi retrovirus endogen (PERV).
Xenotransplantasi 2000; 7: 138-42.
[31]
Nibourg GA, Chamuleau RA, van Gulik TM, Hoekstra R. Prolifsumber sel manusia erative diterapkan sebagai biocomponent di bioartificial
hati: review. Ahli Opin Biol Ther 2012; 12: 905-21.
[32]
Zhang S, Chen S, Li W, et al. Penyelamatan fungsi ATP7B di hepatoma
sel tocyte-seperti dari Wilson penyakit induced pluripotent stem
Sel menggunakan terapi gen atau kurkumin obat pendamping. Hum Mol
Genet 2011; 20: 3176-87.
[33]
Hanna J, Wernig M, Markoulaki S, et al. Pengobatan sel sabit
model tikus anemia dengan sel iPS yang dihasilkan dari autologus
kulit. Ilmu 2007; 318: 1920-3.
[34]
Lavon N, O Yanuka, Benvenisty N. Diferensiasi dan isolasi
sel hati-seperti dari sel induk embrionik manusia. Diferensiasi
2004; 72: 230-8.
[35]
Schwartz RE, Linehan JL, Painschab MS, et al. Kondisi Ditetapkan
untuk perkembangan sel-sel hati fungsional dari embrio manusia
sel batang. Stem Sel Dev 2005; 14: 643-55.
[36]
Duan Y, Catana A, Meng Y, et al. Diferensiasi dan pengayaan
sel hepatosit-seperti dari sel induk embrio manusia in vitro

dan in vivo. Stem Sel 2007; 25: 3058-68.

[37]
Cai J, Zhao Y, Liu Y, et al. Diferensiasi Disutradarai dari em- manusia
sel induk bryonic menjadi sel hati fungsional. Hepatologi 2007;
45: 1229-1239.
[38]
Soto-Gutierrez A, Navarro-Alvarez N, Zhao D, et al. Diferensiasi
tion sel batang embrio tikus ke sel hepatosit-seperti oleh co
budaya dengan hati manusia garis sel nonparenchymal. Nat Protoc
2007; 2: 347-56.
[39]
Hay DC, Fletcher J, Payne C, et al. Diferensiasi Sangat efisien
dari hESCs untuk endoderm hati fungsional membutuhkan ActivinA dan
Wnt3a signaling. Proc Natl Acad Sci USA 2008; 105: 12301-6.
[40]
Basma H, Soto-Gutierrez A, Yannam GR, et al. Diferensiasi dan
transplantasi hepatosit sel yang diturunkan induk embrio manusia.
Gastroenterologi 2009; 136: 990-9.
[41]
Brolen G, Sivertsson L, Bjorquist P, et al. Sel hepatosit-seperti
berasal dari sel induk embrio manusia secara khusus melalui definisi yang
endoderm tive dan tahap nenek moyang. J Biotechnol 2010; 145: 28494.
[42]
Si-Tayeb K, Noto FK, Nagaoka M, et al. Genera Sangat efisien
tion sel hepatosit-seperti manusia dari induced pluripotent stem
sel. Hepatologi 2010; 51: 297-305.
[43]
Martin MJ, Muotri A, Gage F, Varki A. Manusia batang embrio
sel mengekspresikan asam sialat bukan manusia imunogenik. Nat Med
2005; 11: 228-32.
[44]
Wu MY, Bukit CS. TGF-beta superfamili sinyal di embrio
pengembangan dan homeostasis. Dev Sel 2009; 16: 329-43.
[45]
Vallier L, Touboul T, Brown S, et al. Signaling jalur controlling pluripotency dan nasib sel awal keputusan yang disebabkan manusia
sel induk berpotensi majemuk. Stem Sel 2009; 27: 2655-66.
[46]
Brown S, Teo A, Pauklin S, et al. Activin / Nodal kontrol sinyal
jaringan transkripsi yang berbeda dalam sel induk embrionik manusia

dan di progenitor endoderm. Stem Sel 2011; 29: 1176-1185.

[47]
Teo AK, Arnold SJ, Trotter MW, et al. Faktor kemajemukan regularisasi
akhir definitif spesifikasi endoderm melalui eomesodermin.
Gen Dev 2011; 25: 238-50.
[48]
Singh AM, Reynolds D, Cliff T, et al. Crosstalk jaringan Signaling
dalam sel pluripotent manusia: saklar Smad2 / 3-diatur bahwa conTrols keseimbangan antara pembaruan diri dan diferensiasi. Sel
Stem Cell 2012; 10: 312-26.
[49]
McLean AB, D'Amour KA, Jones KL, et al. Aktivin secara efisien
menentukan endoderm definitif dari sel induk embrionik manusia
hanya bila phosphatidylinositol 3-kinase signaling ditekan.
Stem Sel 2007; 25: 29-38.
[50]
Lemaigre F, Zaret KS. Pengembangan hati update: embrio baru
model, kontrol keturunan sel, dan morfogenesis. Curr Opin Genet
Dev 2004; 14: 582-90.
[51]
Si-Tayeb K, Lemaigre FP, Duncan SA. Organogenesis dan bangan
ngunan hati. Dev Sel 2010; 18: 175-89.
[52]
Suzuki A, Zheng YW, Kaneko S, et al. Identifikasi klon dan
karakterisasi sel induk berpotensi majemuk diri memperbaharui di de- yang
veloping hati. J sel Biol 2002; 156: 173-84.
[53]
Dan YY, Riehle KJ, Lazaro C, et al. Isolasi pro multipoten
sel genitor dari hati janin manusia mampu membedakan ke
hati dan mesenchymal garis keturunan. Proc Natl Acad Sci USA 2006;
103: 9912-7.
[54]
Malhi H, Irani AN, Gagandeep S, Gupta S. Isolasi manusia
sel epitel progenitor hati dengan kapasitas replikasi yang luas
dan diferensiasi menjadi hepatosit dewasa. J Sel Sci 2002;
115: 2679-88.
[55]
Allain JE, Dagher saya, Mahieu-Caputo D, et al. Mengekalkan dari
primata bipotent hati epitel sel induk. Proc Natl Acad Sci AS
A 2002; 99: 3639-44.

Halaman 12

Manusia Stem Sel pluripoten untuk Penyakit Pemodelan manusia Hati

Saat Gene Therapy, 2013, Vol. 13, No. 2 131
[56]
Delgado JP, Vanneaux V, Branger J, et al. Peran HGF pada
sifat invasif dan potensi repopulation dari dia- janin manusia
sel progenitor patic. Exp Sel Res 2009; 315: 3396-405.
[57]
Touboul T, Hannan NR, Corbineau S, et al. Generasi fungsi
hepatosit nasional dari sel induk embrio manusia di bawah chemiCally didefinisikan kondisi yang rekapitulasi perkembangan hati. Hepatoma
tology 2010; 51: 1754-1765.
[58]
Hu BY, Weick JP, Yu J, et al. Diferensiasi Neural manusia
diinduksi sel induk berpotensi majemuk mengikuti prinsip-prinsip perkembangan
tetapi
dengan potensi variabel. Proc Natl Acad Sci USA 2010; 107: 433540.
[59]
Kajiwara M, Aoi T, Okita K, et al. Variasi tergantung Donor di
diferensiasi hati dari pluripotent sel induk manusia yang disebabkan.
Proc Natl Acad Sci USA 2012; 109: 12.538-43.
[60]
Khetani SR, Bhatia SN. Budaya mikro dari sel-sel hati manusia untuk
pengembangan obat. Nat Biotechnol 2008; 26: 120-6.
[61]
Flaim CJ, Chien S, Bhatia SN. Matriks ekstraselular microarray
untuk menyelidik diferensiasi selular. Nat Metode 2005; 2: 119-25.
[62]
Wang Y, Yao HL, Cui CB, et al. Sinyal parakrin dari mesenpopulasi sel chymal mengatur ekspansi dan diferensiasi
sel induk manusia hati takdir hati dewasa. Hepatologi 2010;
52: 1443-1454.
[63]
Hay DC, Pernagallo S, Diaz-Mochon JJ, et al. Screening Rekomendasi
perpustakaan polimer untuk menentukan substrat baru untuk hepatoma fungsional
tocytes dengan metabolisme obat diinduksi. Stem Cell Res 2011; 6: 92102.
[64]
Weber A, Groyer-Picard MT, Franco D, Dagher I. Hepatocyte
transplantasi pada hewan model. Hati Transpl 2009; 15: 7-14.

[65]
Rhim JA, sandgren EP, Palmiter RD, Brinster RL. Re- lengkap
konstitusi hati tikus dengan hepatosit xenogeneic. Proc Natl
Acad Sci USA 1995; 92: 4942-6.
[66]
Meuleman P, Libbrecht L, De Vos R, et al. Morfologi dan
karakterisasi biokimia dari hati manusia dalam uPA-SCID
tikus chimera. Hepatologi 2005; 41: 847-56.
[67]
Payne CM, Samuel K, Pryde A, et al. Kegigihan fungsional
sel hepatosit-seperti pada tikus kekebalan dikompromikan. Hati Int
2011; 31: 254-62.
[68]
Rashid ST, Corbineau S, Hannan N, et al. Modeling mewarisi
gangguan metabolisme hati menggunakan manusia induced pluripotent
sel batang. J Clin Invest 2010; 120: 3127-36.
[69]
Azuma H, Paulk N, Ranade A, et al. Ekspansi Kuat manusia
hepatosit di Fah - / - / Rag2 - / - / Il2rg - / - tikus. Nat Biotechnol 2007;
25: 903-10.
[70]
Vaughan AM, Mikolajczak SA, Wilson EM, et al. Lengkapi Plasmodium pengembangan hati-tahap falciparum dalam hati-chimeric
tikus. J Clin Invest 2012; 122: 3618-28.
[71]
Taman IH, Arora N, Huo H, et al. Pluripo- diinduksi penyakit-spesifik
sel tenda induk. Sel 2008; 134: 877-86.
[72]
Dimos JT, Rodolfa KT, Niakan KK, et al. Induced pluripotent stem
sel yang dihasilkan dari pasien dengan ALS dapat dibedakan menjadi
neuron motorik. Ilmu 2008; 321: 1218-1221.
[73]
Ebert AD, Yu J, Rose FF, Jr., et al. Induced pluripotent stem sel
dari pasien atrofi otot tulang belakang. Nature 2009; 457: 277-80.
[74]
Grskovic M, Javaherian A, B Strulovici, Daley GQ. Induced plurisel induk ampuh - peluang untuk pemodelan penyakit dan dis obat
covery. Nat Rev Obat Discov 2011; 10: 915-29.
[75]
Tiscornia G, Vivas EL, Izpisua Belmonte JC. Penyakit dalam sebuah piring:
pemodelan kelainan genetik manusia menggunakan sel pluripotent diinduksi.

Nat Med 2011; 17: 1570-6.

[76]
Trounson A, Shepard KA, DeWitt ND. Pemodelan penyakit manusia
dengan induksi sel induk berpotensi majemuk. Curr Opin Genet Dev 2012;
22: 509-16.
[77]
Perrier A, Peschanski M. Bagaimana pluripotent stem manusia sel
membantu menguraikan dan menyembuhkan penyakit Huntington? Cell Stem cell
2012;
11: 153-61.
[78]
Seibler P, Graziotto J, Jeong H, et al. Mitokondria Parkin ulang
cruitment terganggu pada neuron yang berasal dari mutan PINK1 diyang diinduksi sel induk berpotensi majemuk. J Neurosci 2011; 31: 5970-6.
[79]
Egawa N, S Kitaoka, Tsukita K, et al. Skrining obat untuk ALS
menggunakan induced pluripotent stem sel-pasien tertentu. Sci transl
Med 2012; 4: 145ra104.
[80]
Brown MS, Goldstein JL. Biomedis. Menurunkan LDL - tidak hanya
bagaimana rendah, tapi berapa lama? Ilmu 2006; 311: 1721-3.
[81]
Bruckert E. terapi-memodifikasi lipid Baru. Ahli Opin Investig
Obat 2003; 12: 325-35.
[82]
Hudgins LC, Kleinman B, Scheuer A, et al. Jangka panjang keamanan dan
khasiat low-density lipoprotein apheresis di masa kecil untuk homozygous hiperkolesterolemia familial. Am J Cardiol 2008;
102: 1199-204.
[83]
Huijgen R, Kindt saya, Verhoeven SB, et al. Dua tahun setelah molekul
diagnosis hiperkolesterolemia familial: mayoritas pada cholesTerol penurun pengobatan tetapi minoritas mencapai tujuan pengobatan.
PLoS One 2010; 5: e9220.
[84]
Grossman M, Rader DJ, Muller DW, et al. Sebuah studi pilot ex vivo
terapi gen untuk homozigot hiperkolesterolemia familial. Nat
Med 1995; 1: 1148-1154.
[85]
Petrus I, Chuah M, strategi terapi VandenDriessche T. Gene untuk
hemofilia: keuntungan versus risiko. J Gene Med 2010; 12: 797-809.

[86]
Wu YM, Kao CY, Huang YJ, et al. Modifikasi genetik dari donor
hepatosit meningkatkan efikasi terapi untuk hemofilia B di
tikus. Transplantasi Sel 2010; 19: 1169-1180.
[87]
Nathwani AC, Tuddenham EG, Rangarajan S, et al. Adenovirusterkait virus vektor-dimediasi transfer gen pada hemofilia B. N
Engl J Med 2011; 365: 2357-65.
[88]
Kasuda S, Tatsumi K, Sakurai Y, et al. Ekspresi koagulasi
faktor dari murine diinduksi sel yang diturunkan hati induk berpotensi majemuk
sel. Darah Coagul Fibrinolisis 2011; 22: 271-9.
[89]
Cao J, Shang CZ, Lu LH, et al. Diferensiasi batang embrio
sel ke dalam hepatosit yang coexpress faktor koagulasi VIII dan
IX. Acta Pharmacol Sin 2010; 31: 1478-1486.
[90]
Lomas DA, Evans DL, Finch JT, Carrell RW. Mekanisme Z
alpha akumulasi 1-antitrypsin di hati. Nature 1992;
357: 605-7.
[91]
Gooptu B, Ekeowa UI, Lomas DA. Mekanisme emfisema di
defisiensi antitrypsin alpha1-: wawasan molekuler dan seluler. Euro
Respir J 2009; 34: 475-88.
[92]
Griesenbach U, Geddes DM, Alton EW. Kemajuan dalam fibro- cystic
terapi gen sis. Curr Opin Pulm Med 2004; 10: 542-6.
[93]
Fisher RA, Strom SC. Transplantasi hepatosit manusia: duniaHasil lebar. Transplantasi 2006; 82: 441-9.
[94]
Nguyen TH, Birraux J, Wildhaber B, et al. Ex vivo lentivirus
transduksi dan transplantasi segera hepato berbudaya
cytes untuk mengobati hyperbilirubinemic Gunn tikus. Transplantasi
2006; 82: 794-803.
[95]
Nguyen TH, Mainot S, Lainas P, et al. Gen hati-diarahkan Ex vivo
Terapi untuk pengobatan penyakit metabolik: kemajuan dalam hepatoma
transplantasi tocyte dan vektor retroviral. Curr Gene Ther 2009;
9: 136-49.
[96]

Birraux J, Menzel O, Wildhaber B, et al. Sebuah langkah menuju gen hati

Terapi: koreksi efisien dari cacat genetik hepatosit
diisolasi dari pasien dengan sindrom Crigler-Najjar tipe 1 dengan
vektor lentiviral. Transplantasi 2009; 87: 1006-1012.
[97]
Hacein-Bey Abina S, Garrigue A, Wang GP, et al. Insersional
onkogenesis di 4 pasien setelah terapi gen retrovirus-dimediasi
SCID-X1. J Clin Invest 2008; 118: 3132-42.
[98]
Connelly S. Adenoviral vektor untuk terapi gen hati-diarahkan.
Curr Opin Mol Ther 1999; 1: 565-72.
[99]
Howden SE, Gore A, Li Z, et al. Koreksi genetik dan analisis
diinduksi sel induk berpotensi majemuk dari pasien dengan atrofi berkisar.
Proc Natl Acad Sci USA 2011; 108: 6537-42.
[100]
Li H, Haurigot V, Doyon Y, et al. In vivo genom mengembalikan editing
hemostasis dalam model tikus dari hemofilia. Nature 2011;
475: 217-21.
[101]
Liu GH, Suzuki K, Qu J, et al. Koreksi gen Target dari
mutasi LMNA laminopathy terkait pada pasien-spesifik
iPSCs. Cell Stem cell 2011; 8: 688-94.
[102]
Vallier L, Alexander M, Pedersen R. ekspresi gen Bersyarat
dalam sel induk embrionik manusia. Stem Sel 2007; 25: 1490-7.
[103]
Urnov FD, Rebar EJ, Holmes MC, et al. Editing Genome dengan
nucleases zinc finger direkayasa. Nat Rev Genet 2010; 11: 636-46.
[104]
Hockemeyer D, Wang H, Kiani S, et al. Rekayasa genetika dari
sel pluripotent manusia menggunakan nucleases TALE. Nat Biotechnol
2011; 29: 731-4.
[105]
Yusa K, Rashid ST, Strick-Marchand H, et al. Cor gen Target
rection defisiensi antitrypsin alpha1-di diinduksi induk berpotensi majemuk
sel. Nature 2011; 478: 391-4.
Halaman 13

132 Saat Gene Therapy, 2013, Vol. 13, No 2

Dianat dkk.

[106]
Gupta A, Meng X, Zhu LJ, et al. Jari Zinc protein-dependen dan
kontribusi -independent ke in vivo aktivitas off-target seng
nucleases jari. Asam nukleat Res 2011; 39: 381-92.
[107]
Vons C, Beaudoin S, Helmy N, et al. Deskripsi Pertama surgi- yang
cal anatomi hati cynomolgus monyet. Am J Primatol 2009;
71: 400-8.
[108]
Liu H, Zhu F, Yong J, et al. Generasi induced pluripotent stem
sel dari orang dewasa fibroblas monyet rhesus. Cell Stem cell 2008;
3: 587-90.
[109]
Okahara-Narita J, Umeda R, Nakamura S, et al. Induksi plurisel induk ampuh dari janin dan dewasa cynomolgus monyet fibroledakan menggunakan empat faktor transkripsi manusia. Primata 2012;
53: 205-13.
[110]
Wu Y, A Mishra, Qiu Z, et al. Primata selain manusia yang disebabkan pluriposel tenda induk dalam pengobatan regeneratif. Stem Sel Int 2012;
2012: 767.195.
[111]
Blin G, Nury D, Stefanovic S, et al. Sebuah populasi dimurnikan dari mulprogenitor kardiovaskular tipotent berasal dari pluripo- primata
tenda batang sel engrafts di miokard primer bukan manusia infark
pasangan. J Clin Invest 2010; 120: 1125-1139.
[112]
Joseph B, Malhi H, Bhargava KK, et al. Sel Kupffer berpartisipasi dalam
pembersihan awal hepatosit syngeneic ditransplantasikan pada tikus
hati. Gastroenterologi 2002; 123: 1677-1685.
[113]
Dagher saya, Boudechiche L, Branger J, et al. Hepatosit Efisien
engraftment dalam model primata nonmanusia setelah parsial vena portal
embolisasi. Transplantasi 2006; 82: 1067-1073.
[114]
Lainas P, Boudechiche L, Osorio A, et al. Regenerasi hati dan
waktu rekanalisasi kursus berikut reversibel vena portal embolilisasi. J Hepatol 2008; 49: 354-62.
[115]
Dagher saya, Nguyen TH, Groyer-Picard MT, et al. Hepato Efisien
monosit engraftment dan ekspresi transgen jangka panjang setelah reversi-

ble Portal embolisasi pada primata bukan manusia. Hepatologi 2009;

49: 950-9.
[116]
Lister R, Pelizzola M, Kida YS, et al. Hotspot dari epige- menyimpang
pemrograman ulang eko- pada manusia induced pluripotent stem sel.
Nature 2011; 471: 68-73.
[117]
Mekhoubad S, Bock C, de Boer AS, et al. Erosi dosis comdampak pensation pemodelan penyakit IPSC manusia. Sel Stem Cell
2012; 10: 595-609.
[118]
Ohi Y, Qin H, Hong C, et al. DNA lengkap metilasi memahami
terletak memori transkripsi sel somatik dalam sel iPS manusia.
Sel Biol Nat 2011; 13: 541-9.
[119]
Ruiz S, Diep D, Gore A, et al. Identifikasi dari repro- tertentu
pemrograman terkait tanda tangan epigenetik pada manusia yang disebabkan plurisel induk ampuh. Proc Natl Acad Sci USA 2012; 109: 16196-201.
[120]
Urbach A, Bar-Nur O, Daley GQ, Benvenisty N. Differential modeling dari rapuh X syndrome oleh sel induk embrionik manusia dan
diinduksi sel induk berpotensi majemuk. Cell Stem cell 2010; 6: 407-11.
[121]
Sheridan SD, Theriault KM, Reis SA, et al. Characteri- epigenetik
lisasi dari gen FMR1 dan perkembangan saraf pada manusia menyimpang
diinduksi model sel induk berpotensi majemuk dari sindrom X rapuh. PLoS
Satu 2011; 6: e26203.
[122]
Gore A, Li Z, Fung HL, et al. Somatik coding mutasi pada manusia
diinduksi sel induk berpotensi majemuk. Nature 2011; 471: 63-7.
[123]
Ji J, Ng SH, Sharma V, et al. Peningkatan coding tingkat mutasi selama
pemrograman ulang sel-sel somatik manusia menjadi induced pluripotent
sel batang. Stem Sel 2012; 30: 435-40.
[124]
Abyzov A, Mariani J, Palejev D, et al. Copy somatik jumlah mosaicism di kulit manusia diungkapkan oleh induksi sel induk berpotensi majemuk.
Nature 2012; 492: 438-42.
[125]
Nie B, Wang H, Laurent T, pemrograman ulang Ding S. Seluler: a
perspektif molekul kecil. Curr Opin sel Biol 2012; 24: 784-92.

[126]
Pournasr B, Khaloughi K, Salekdeh GH, et al. Ulasan Ringkas:
alkimia biologi: menghasilkan jenis sel yang diinginkan dari berlimpah
dan sel diakses. Stem Sel 2011; 29: 1933-1941.
[127]
Vierbuchen T, Wernig M. konversi keturunan langsung: tidak alami tetapi
berguna? Nat Biotechnol 2011; 29: 892-907.
[128]
Xie H, Ye M, Feng R, Graf T. Stepwise pemrograman ulang sel B
menjadi makrofag. Sel 2004; 117: 663-76.
[129]
Huang P, Dia Z, Ji S, et al. Induksi fungsional hepatosit-seperti
sel fibroblast tikus dari oleh faktor didefinisikan. Nature 2011;
475: 386-9.
[130]
Sekiya S, Suzuki A. konversi langsung dari fibroblas mouse untuk
sel hepatosit-seperti oleh faktor didefinisikan. Nature 2011; 475: 390-3.
[131]
Zhou Q, Brown J, Kanarek A, et al. In vivo pemrograman ulang dari orang dewasa
sel eksokrin pankreas to-sel beta. Nature 2008; 455: 627-32.
Diterima: 24 Januari 2013
Revisi: 30 Januari 2013
Diterima: 5 Februari 2013