Asur
Asur
Tesis
untuk memenuhi sebagian persyaratan
mencapai derajat Sarjana S-2
Rosa Lelyana
G4A006003
PROGRAM PASCASARJANA
MAGISTER ILMU BIOMEDIK
UNIVERSITAS DI PONEGORO
SEMARANG
2008
TESIS
PENGARUH KOPI TERHADAP KADAR ASAM URAT
DARAH
Studi eksperimen pada tikus Rattus Norwegicus Galur Wistar
disusun oleh
Rosa Lelyana
G4A006003
akan dipertahankan di depan Tim Penguji
pada tanggal 25 Juli 2008
dan dinyatakan telah memenuhi syarat untuk diterima
Menyetujui,
Komisi Pembimbing
Pembimbing Utama
Pembimbing Kedua
Mengetahui,
Ketua Program Studi Magister Ilmu Biomedik
Program Pasca Sarjana Universitas Diponegoro
ii
RIWAYAT HIDUP
A. Identitas
Nama : dr. Rosa Lelyana
Tempat/Tanggal Lahir : Solo/ 3 Juni 1972
Agama : Islam
Nama Orang Tua : Bp. Prof. dr. Soebowo, SpPA (K)
Ibu Suryaningsih
Nama Saudara Kandung :
1. dr. Mada Gautama
2. Grama Wardhana, SH
3. dr. Ariawan Ditya Birawa, Msi. Med, SpOG
Nama Suami : dr. Puguh Riyanto SpKK
Nama Anak :
1. Vito Etenio Ade Laryan
iii
B. Riwayat Pendidikan
SD Kristen Gergaji Semarang 1979-1985
SMP Pangudi Luhur Domenico Savio Semarang 1985-1988
SMA Negeri 3 Semarang 1988-1991
Masuk FK UNDIP tahun 1991, lulus tahun 1997
Masuk Magister Biomedik FK Undip bulan September 2006
C. Riwayat Pekerjaan
Dokter PTT Puskesmas Ungaran II (Mapagan) tahun 1998-1999
Dokter PTT Puskesmas Ungaran I (Genuk) tahun 1999-2001
Praktek Swasta 1998-2007
Staf Pengajar Program Studi Ilmu Gizi FK Undip 2006 - sekarang
iv
KATA PENGANTAR
Allhamdullilahhirobilalamin, puji syukur kami panjatkan ke hadirat Allah
S.W.T atas segala karunia-Nya sehingga penyusunan makalah seminar hasil
penelitian ini dapat kami selesaikan dengan baik, walaupun masih ada beberapa
kekurangan dalam penulisan.
Ucapan terima kasih penulis sampaikan untuk :
1.
Prof. Dr.dr. Susilo Wibowo, Msc, SpAnd sebagai Rektor Undip dan sebagai
guru saat menempuh studi.
2.
3.
4.
dr. Soejoto, PAK, SpKK(K), Dekan FK UNDIP beserta jajarannya yang telah
memberikan kesempatan kepada penulis untuk menempuh pendidikan Program
Pasca Sarjana UNDIP serta mantan dekan FK UNDIP Prof.dr.Kabulrachman,
SpKK (K) atas kesempatan yang telah diberikan kepada penulis untuk
menempuh pendidikan Program Pasca Sarjana UNDIP
5.
Prof.dr. HM. Sulchan,Msc, D.Nutr,Sp.GK atas ijin beliau yang pada waktu
itu (tahun 2006) menjabat sebagai ketua Program Studi Ilmu Gizi FK Undip
dan Prof.Dr.dr. Hertanto, Msc, SpGK (saat itu menjabat sebagai Sekretaris
Bidang I Program Studi Ilmu Gizi FK Undip) serta dr.Yekti Wirawani (saat
itu sebagai Sekretaris Bidang II Program Studi Ilmu Gizi FK Undip) atas
diperkenankannya saya untuk melaksanakan studi S2 Biomedik di FK Undip.
6.
7.
Prof.dr. Siti Fatimah Moeis, SpGK selaku pembimbing I dan dr. Noor
Wijayahadi, Mkes, Ph.D selaku pembimbing II atas bimbingan, arahan dan
masukan yang diberikan hingga selesainya makalah seminar hasil dengan
baik.
8.
9.
dr. Puwanto AP, SpPK dan dr. Hardian sebagai narasumber atas arahan,
bimbingan, kesabaran, nasehat yang diberikan selama ini sehingga makalah
ini dapat terselesaikan dengan baik.
10. Semua staf pengajar di Program S2 Biomedik. Terima kasih atas ilmu yang
telah diberikan selama saya menempuh studi.
vi
11. Prof. dr. Soebowo, SpPA sebagai ayah dan guru atas bimbingan, nasehat,
arahan, juga kritikan yang diberikan selama menempuh studi. Juga ibu
Suryaningsih dan saudara-saudaraku semua atas doa yang diberikan selama
ini hingga selesainya penelitian dan studi saya.
12. Teman-teman dosen dan staf administasi Prodi Ilmu Gizi FK Undip terima
kasih atas bantuan, pengertian dan semua yang telah kalian berikan selama
saya menempuh studi.
13. Mbak Nata dan mas Dul yang telah banyak membantu dalam hal kelancaran
administrasi di Biomedik.
14. Teman-teman S2 Biomedik tahun 2006, eyang dr. HM Purnomo,
dr.Qatrunada (bu Kiki), dan Wiralis, STP (mbak Wir). Terima kasih atas
semua yang pernah diberikan selama menempuh studi yang tidak hanya
menganggap sebagai teman tetapi juga sebagai adik dan anak. Juga mbak dr.
Widyastuti, dr. Arifiana, dr. Peni terima kasih atas hiburan dan motivasinya.
15. Mbak Tika, Bp.Ngatiman, mas Solichin, mbak Fitri dari Laboratorium
Biologi MIPA, Unnes. Terima kasih atas semuanya.
16. Suami dr. Puguh Riyanto SpKK dan putra-putriku kak Vito, dik Raoul, dik
Rembun. Terima kasih atas kesabaran dan semua yang telah kalian berikan
selama ini.
17. Semua pihak yang telah banyak membantu selama menempuh studi ini,
semoga Allah S.W.T membalas semua kebaikan bapak/ibu dan teman-teman
semua yang telah memberikan sumbangsih selama saya menempuh studi.
vii
viii
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL.....................................................................................i
HALAMAN PENGESAHAN..........ii
RIWAYAT HIDUP.....................................................................................iii
KATA PENGANTAR..................................................................................v
DAFTAR ISI ..........ix
DAFTAR TABEL.......xi
DAFTAR GAMBAR......xi
DAFTAR LAMPIRAN.............................................................................xii
DAFTAR SINGKATAN..........................................................................xiii
ABSTRAK...............................................................................................xiv
Bab I. PENDAHULUAN....1
1.1
1.2
Perumusan Masalah....4
1.3
Tujuan Penelitian....4
1.4
Manfaat Penelitian..................................................................5
1.5
Keaslian Penelitian.................................................................5
Kopi........................................................................................7
2.1.1. Kafein...........................................................................8
2.1.2. Polyphenol..................................................................16
ix
DAFTAR TABEL
Tabel
Hal
18
xi
DAFTAR GAMBAR
Gambar
Hal
11
xanthine oxidase
4. Struktur kimia chlorogenic acid
19
27
29
30
33
oleh allopurinol
9. Perubahan struktur kimia pembentukan asam urat
xii
35
DAFTAR LAMPIRAN
xiii
DAFTAR SINGKATAN
AMP : adenosine monophosphate
CGA : Chlorogenic Acid
GMP : guanosine monophosphate
-GT : gamma-glutamyl transpeptidase
H2O2 : hidrogen peroksida
GPx : Glutathion Peroksidase
IMP : inosine monophosphate
LCS : Liquor Cerebro Spinalis
PRPP : phosphoribosyl pyrophosphate
XO : Xanthine Oxidase
xiv
ABSTRAK
Latar Belakang : Kopi merupakan salah satu minuman kegemaran masyarakat dunia. Masih
ada kontroversial dari efek kopi dimana kopi dapat meningkatkan atau menurunkan kadar
asam urat. Penelitian tentang pengaruh kopi terhadap kadar asam urat darah belum pernah
dilakukan di Indonesia.
Tujuan : Membuktikan bahwa kopi mampu menurunkan kadar asam urat serum darah
pada tikus Wistar dengan hiperurikemia
Metode : Suatu studi eksperimen pre and post test design dilakukan pada 24 tikus Wistar
yang secara random dibagi menjadi 4 kelompok. Pada minggu pertama dan minggu ke-2
semua kelompok diberi pakan tinggi purin. Pada minggu ke-2 semua kelompok juga
diberikan larutan kopi. Pada kelompok perlakuan 1 diberikan larutan kopi 0,36 ml/hari,
sedangkan kelompok lainnya diberikan : 0,72 ml/hari ; 1,14 ml/hari dan 2,16 ml/hari. Kadar
asam urat darah diukur sebelum pemberian pakan tinggi purin, sebelum serta setelah
pemberian larutan kopi. Kadar asam urat darah diperiksa dengan menggunakan
spektrofotometri. Analisis data menggunakan uji t-berpasangan dan One Way Anova.
Hasil : Ada penurunan kadar asam urat setelah perlakuan pada kelompok yang memperoleh
larutan kopi 0,72ml/hari dan 2,16 ml/hari.
Kesimpulan : Larutan kopi dapat menurunkan kadar asam urat pada tikus percobaan.
xv
ABSTRACT
Background : Coffee is one of the several favorite drink in the world. There is still a
controversial effect of coffee, whether coffee could increase or decrease the blood uric acid
level. Study about the influence of coffee on the blood uric acid level has never been
conducted in Indonesia.
Objective : To prove that coffee could decrease blood uric acid level in the hyperuricemia
Rattus Norwegicus Wistar Strain Rat.
Method : A pre and post test design that has been done on 24 wistar strain rats that were
divided randomly into 4 groups. On the 1st week and 2nd week all groups were fed high purin
diet. On the 2nd week all group were given coffee,too. Group 1 were given 0.36 ml coffee
solution/ day and the other group were given 0.72 ml/ day; 1.14 ml/ day and 2.16 ml/ day.
Blood were drawn at the beginning before high purin diet were given, before and after coffee
treatment. The blood uric level were examined using spectrophotometry. Data were analyzed
using Pair- t test and One Way Anova.
Result : There were decreased blood uric acid level in the group receiving 0,72 ml /day and
2,16 ml coffee solution/day.
Conclusion : Coffee is able to reduce blood uric acid level in experimental rats.
Key Words : Coffee, Blood Uric Acid Level
xvi
BAB 1
PENDAHULUAN
1.Latar Belakang Penelitian
Kopi merupakan salah satu alternatif minuman pilihan yang
sangat digemari masyarakat Indonesia maupun negara lain selain teh.
Kegemaran mengkonsumsi kopi sudah dilakukan turun temurun sejak
jaman nenek moyang, bahkan dalam setiap jamuan makan baik acara
formal maupun non formal, sajian kopi hampir tidak pernah dilupakan.
Kondisi ini sama dengan di luar negeri, di Amerika misalnya, sebagian
besar masyarakat menyukai kopi, sehingga istilah coffe break sampai saat
ini masih digunakan dan menjadi ikon untuk menyatakan waktu istirahat
dan jam makan telah siap. 1
Sebagian orang mengkonsumsi kopi sebagai salah satu minuman
kegemaran, sedang sebagian orang tidak menyukai minum kopi karena
khawatir efek kopi terhadap kesehatan.2-4Menurut masyarakat awam,
kopi mampu menghilangkan rasa lelah dan terhindar dari rasa mengantuk,
sedang menurut hasil penelitian ilmiah, kopi mampu menurunkan risiko
diabetes mellitus,5,6penyakit kardiovaskuler,7-9kanker10 serta mampu
menurunkan kadar asam urat darah.11-13Hal tersebut karena kandungan
polyphenol yaitu chlorogenic acid di dalam kopi5-14, namun tetap perlu
diperhatikan berapa cangkir kopi perhari yang diminum agar aman dan
memberi efek baik bagi tubuh. 1-3,15-17
xvii
5,19-26
dalam
kopi
diantaranya
chlorogenic
acid14,19,24,30,31mampu
23,32
xviii
22
15,29,33
Asupan
kandungan
senyawa
polyphenolnya
xix
lebih
tinggi
xx
No
Nama Peneliti
Variabel
Judul Penelitian
tergantung
1
Kiyohara
C,
Desain
Variabel
Hasil Penelitian
Penelitian
bebas
Kohort
Minum
Peminum
Prospektif
Kopi
berhubungan
Kadar
Inverse
Kono S, Honjo
asam urat
ciation
S, Todoroki I,
serum
Between Coffee
Drinking
Sakurai
Y,
Nishiwaki M,et
al.,1999
11
Asso-
Serum
Acid
and
Uric
Concen-
tration
in
Middle
Age
Japanese
males.
xxi
kopi
No
Nama Peneliti
Variabel
Judul Penelitian
tergantung
2
Choi
HK,
Curhan
G,
200712
Desain
Variabel
Penelitian
bebas
Hasil Penelitian
Kadar
Coffee,Tea,Ca
Kohort
Konsumsi
asam urat
ffeine
Prospektif
kopi, teh
nurunkan
serum pria
Consumption
perkembangan gout
dewasa
and
dan
Serum
risiko
frekuensi
usia
di
hiperurikemia,
atas
20
Third National
tahun.
Health
and
Nutrition
Examination
Survey
3
Choi
Kadar
Coffe
Kohort
Kafein
HK,Willet W,
serum
consumption
Prospektif
pada
Curhan
asam urat
and
minuman
sumber
pria sehat
incident gout in
kopi dan
dan
tanpa gout
men
teh
tidak berhubungan
G,2007
13
risk
of
makanan
asupan
teh
xxii
BAB 2
TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Kopi
Kopi mulai dikenal sejak abad ke 7 dan telah tumbuh di dekat Laut Merah.
Pada abad ke 16 kopi ditemukan di daratan Afrika, yaitu di Yaman dan Ethiopia.
Tahun 1669, kopi mulai dikenalkan ke bangsa Eropa dan beberapa tahun
kemudian orang-orang Belanda memperkenalkan kopi ke pulau Jawa. Kopi
arabika dikenal sejak abad ke 13, sedang kopi robusta dikenal baru akhir abad ke
19.1
Secara taksonomi, kopi termasuk famili Rubiacaea, genus coffea.
Speciesnya ada 2 yaitu coffea arabica (arabika) dan coffea canephora (robusta).
Kopi robusta tumbuh di tempat yang berbeda dengan kopi arabika, yaitu didaerah
tropis dimana kopi arabika tidak bisa tumbuh. Harga kopi robusta lebih murah
daripada kopi arabika namun rasanya kurang enak/ lebih pahit bila dibanding kopi
arabika.2-4
Menurut beberapa hasil penelitian, mengkonsumsi kopi dapat menurunkan
insidens dari berbagai macam penyakit diantaranya diabetes mellitus tipe
25,6,kardiovaskuler,7-9kanker,10serta menurunkan kadar asam urat. 11-13
xxiii
Kandungan kopi
2.1.1. Kafein
Pengertian dan struktur kimia kafein
Kafein adalah suatu senyawa kimia yang banyak terdapat dalam minuman
seperti kopi, teh, soft drink dan makanan seperti chocolate. Warna senyawa
keputihan dan bila kehilangan hidrasi air akan mengalami pengkristalan dalam
jangka lama.1-4Struktur kimia kafein adalah 1,3,7 trimethylxanthin dan termasuk
dalam molekul xanthin. Gugus methylnya berikatan dengan ketiga hidrogen dan
nitrogen pada cincin xanthin.1-4
xxiv
1,3
lagi kafein. Kafein terkandung dalam 60 spesies tanaman termasuk biji kopi. 3,4
Tabel 1. Kadar Kafein yang terdapat dalam setiap cangkir kopi (berdasarkan cara
penyajian)3,4
Cara Penyajian Kopi Kadar standar kafein dalam
setiap cangkir kopi (mg)
Kopi ground
90
Kopi instant
65-100
Kopi decaffeinated
3-4
Kopi drip
110
Kopu brewed
8-135
xxv
Tempat pertumbuhan kopi dimana pada kopi robusta yang tumbuh di Indonesia
dan Afrika kadar caffein mencapai 2,2%, sedang pada kopi Arabica yang
tumbuh di Amerika Selatan mengandung sekitar 1,1% kafein.19
2.
16
Waktu paruh
methylxanyhin 0,7-1,2 jam pada hewan, sedang pada manusia 2,5-4,5 jam. 1,2,16,17
Absorpsi, distribusi dan metabolisme kafein
Setelah kopi dikonsumsi, akan didistribusikan ke seluruh tubuh oleh aliran
darah dari traktus gastro intestinal dalam waktu sekitar 5-15 menit.21
Kafein
dimetabolisir di liver oleh enzim cytokrom P450 menjadi 3,7 dimethyl- (theobromin)
dan monomethylxanthines, 1,3 dimethyl (theophillin)dan monomethyl uric acids,
trimethyl- and dimethylallantoin, serta uracil derivat.1,2,16 Absorpsi kafein dalam
saluran pencernaan mencapai kadar 99% kemudian kadarnya dalam aliran darah
akan mencapai puncak dalam waktu 45 - 60 menit setelah mengalami proses
xxvi
pencernaan. Waktu paruh kafein 5-6 jam pada orang dewasa, dan kadar kafein akan
berkurang dalam waktu 6 jam dengan sangat perlahan.
1,16,17
diabsorpsi secara lengkap, namun absorpsinya kurang lengkap bila dikonsumsi dalam
bentuk kopi. Kafein sangat efektif bekerja dalam tubuh sehingga memberikan efek
yang bermacam macam bagi tubuh. Efek toksik kopi akan mucul bila dikonsumsi
sangat banyak dimana LD50 pada hewan percobaan tikus sekitar 200 mg/kg. 1,16
xxvii
Pada tubuh xanthin merupakan hasil pemecahan produk adenin dan guanin,
yaitu 2 basa purin yang merupakan kunci utama dari DNA dan RNA. Adenin juga
basa purin dalam simpanan energi molekul ATP dan second messenger cAMP.
4,18
Adenin dapat dideaminasi menjadi hipoxanthin, lalu teroksidasi menjadi xanthin dan
teroksidasi lagi menjadi asam urat untuk diekskresikan. Hipoxanthin dapat direcycle
lagi untuk membentuk AMP, GMP, atau asam nukleat. 1,4,18
Adenosin merupakan molekul adenin yang menempel pada molekul gula
ribose atau deoxyribose. Adanya kemiripan struktur kimia antara adenin dari
adenosin dengan senyawa kafein merupakan kunci bagaimana kafein bekerja, dimana
kemiripan struktur kafein akan berkompetisi dengan adenin sebagai sustrat untuk
menempati enzym adenosin reseptor. 1 Semua sel tubuh termasuk neuron mempunyai
reseptor adenosin.
1,3,4
xxviii
cAMP. Efek ini hanya terjadi di dalam tubuh karena kebutuhan untuk mencapai efek
yang bermakna akan lebih besar dari kadar plasma kafein yang dicapai oleh peminum
kopi, karena itu dibutuhkan 20 kali kafein yang lebih banyak untuk menghambat
phosphodiesterase. Empat puluh kali kafein yang lebih banyak untuk menghambat
reseptor GABA. Seratus kali kafein yang lebih banyak untuk memobilisasi kalsium
intraseluler seperti yang dibutuhkan untuk menghambat reseptor adenosin. 1,4,23,24
Adenosin merupakan neuromodulator bukan neurotransmiter. Adenosin tidak
disimpan di vesikel tidak juga sebagai bolus dalam respon terhadap depolarisasi
membran presinaptik. Adenosin terakumulasi di cairan ekstraseluler sebagai hasil
fisiologi sel karena itu dikeluarkan dari neuron maupun sel glial. 1,23
Adenosin diproduksi sebagai hasil produk penggunaan ATP (sebagai sumber
energi untuk metabolisme seluler).Adenosin bekerja pada reseptor adenosin untuk
menghambat pengeluaran neurotransmiter. Reseptor adenosin diklasifikasikan
sebagai A1,A2A,A2B dan A3, walaupun hanya A1, dan A2A yang bermakna sebagai
neurotransmitter, sedang A2b dan A3 terdapat pada jaringan perifer di luar otak. 2-4
Efek farmakologi kafein sangat bervariasi. 1,16,17 Hambatan pada enzim akan
meningkatkan kadar second messenger dan cyclic AMP di dalam sel. Kafein mampu
menembus barier darah otak orang dewasa dan hewan. Pada ginjal kafein bekerja
sebagai diuretik ringan. Pada bayi baru lahir kadar kafein antara plasma darah dan
LCS sama, jadi tak ada placental barier untuk kafein. 2,16 Kadar kafein yang tinggi
terdapat pada bayi prematur dengan ibu yang mengkonsumsi kafein dalam jumlah
xxix
banyak. Kadar kafein pada saliva merupakan indeks nyata dari kadar kafein pada
plasma, yang mencapai 65 - 85% dari kadar plasma. 16
Kadar puncak kafein sekitar 0,25 - 2 mg/l bila dosis kafein pada secangkir
kopi yaitu 0,4 2,5 mg/kg. Untuk dosis lebih rendah dari 10 mg/kg, kafein
mempunyai waktu paruh berkisar dari 0,7 1,2 jam pada tikus/ rat dan mencit
/mouse, 3 - 5 jam pada monyet dan 2,5 4,5 jam pada manusia. 1,16,17 Waktu paruh
kafein pada neonatal meningkat karena rendahnya aktivitas sitokrom P450 dan belum
matangnya jalur demethylasi dan jalur acetylasi. Waktu paruh kafein sekitar
80 23 jam pada bayi baru lahir yang mature dan mencapai 100 jam pada bayi
premature. Waktu paruh kafein menurun 2,6 jam pada bayi usia 3- 5 dan 5-6 bulan. 1
Clearance kafein rendah pada bayi usia 1 bulan sampai bayi yang lebih besar
(31 ml/kg/jam), pada usia 5 6 bulan clearence kafein menjadi 331 ml/kg/jam dan
pada orang dewasa 155 ml/kg/jam. 1-3
Pada tikus, 40% dari hasil metabolit kafein adalah derifat trimethyl sedang
pada manusia kurang dari 6%. Methyl demethylasi menyebabkan pembentukan
paraxanthine. Beberapa metabolit
aktivitas biologi yang harus dipertimbangkan saat mengkonsumsi kopi, demikian juga
1,3-dimethylxanthine (theophylline) dan1,7-dimethylxanthine (paraxanthine). Pada
rodent, paraxanthine merupakan metabolit utama dalam plasma.2,3
xxx
xxxi
16
Kombinasi kafein dengan obat obat lain akan meningkatkan efektivitas obat,
misalnya : 16
1. Kombinasi dengan alkohol menyebabkan gangguan gastrointestinal (nausea
dan vomitus) 3,16,28
2. Kombinasi dengan besi, akan menghambat absorpsi besi sehingga suplemen
besi sebaiknya dikonsumsi satu jam sebelum atau dua jam sesudah
mengkonsumsi kafein. 3
3. Kombinasi dengan dekongestan phenylpropanolamine, meningkatkan tekanan
darah.
22,16
xxxii
26 %, sedangkan buah berry 25%, teh 23%, anggur 13% dan sayuran 6% dari
seluruh total antioksidan.19,24-27,30
Aktivitas antioksidan total dari kopi juga lebih besar dibandingkan
aktivitas antioksidan dari beta-carotene (0,1 %), alpha-tocopherol (0,3%), dan
vitamin C (8,5%) serta antioksidan lain. 5,8-10,14,30
Kopi merupakan golongan tanaman fitokimia disebut juga plant
phenols (Flavonoid polyphenolics).9 Plant phenols adalah senyawa kimia
yang berasal dari tanaman dan mengandung antioksidan yaitu cinnamic acids,
benzoic acids, flavonoids, proanthocyanidins, stilbenes, coumarins, lignans,
lignins serta chlorogenic acid. Diantara senyawa tersebut yang paling banyak
terdapat di dalam kopi adalah chlorogenic acid.5,9,28 Senyawa phenol
mempunyai aktivitas biologi sebagai antioksidan yang poten secara in vitro
sehingga mampu melindungi DNA, lipid dan protein dengan melawan radikal
bebas yang merusak secara in vivo, sehingga mampu mengurangi risiko
terjadinya penyakit kronik.
21-23
xxxiii
Asam hydroxycinamic
Asam gallic
Asam koumarik, asam kafeik, asam ferulik
Metairesinol secoisolariciresinol
B. Senyawa Flavonoid
1. Flavanol
2. Isoflavon
Chatechin, gallocatechin
Glycitein
xxxiv
xxxv
acid akan meningkat sampai buah kopi matang. Kadar chlorogenic acid pada
materi dasar kering bervariasi dari 4 8,4 % untuk kopi arabika, dan 7 - 14.4
% untuk kopi robusta.5,14,31
2. Pada kopi immature kandungan total 8.7 % CGA (materi kering) berasal dari
biji hijau gelap, sedang biji kopi yang terlalu matang kadar CGA turun sampai
1.3 %. Hal tersebut terjadi karena buah yang belum matang lebih mudah
teroksidasi sedangkan pada buah matang kurang mudah teroksidasi karena
mekanisme pertahanan melawan stress oksidasi pada buah matang lebih
efisien. 31
3. Perbedaan metodologi analisis kandungan chlorogenic acid juga faktor
perbedaan variasi dari high resolution chromatographic methods. 31
4. Genotype kopi/ genetik/ spesies . 14,31
5. Kondisi geografi (berhubungan dengan faktor genetik, cuaca, iklim, jenis
tanah dan daerah perkebunan) Cuaca dingin, kondisi stress akibat banyak
sinar matahari dan banyak air akan meningkatkan kandungan senyawa
phenolik tidak hanya pada tanaman kopi namun juga pada tanaman lain.
8,14,31,35
xxxvi
hydrolysis
enzim
glucose-6-phosphate
secara
suatu
hormon
hyperglyceminant.5,6
Studi
tersebut
juga
sayur-sayuran,
kacang-kacangan
atau
polong-
xxxvii
ekspresi
gen,
hepatoprotektif,
hypoglikemik,
aktivitas
percangkir sekitar 15-325 mg, sedang pada kopi brewed by drip filtering
kadarnya 200mg per cangkir.9 Kandungan antioksidan dalam secangkir kopi
200 ml adalah 95,84,6mg chlorogenic acid (5-caffeoylquinic acid). 30
Faktor genetik, fisiologi dan faktor lingkungan saat prosesing
mempengaruhi komposisi kimia kandungan biji kopi. Artinya, aktivitas
antioksidan akan meningkat dengan adanya pemanggangan biji kopi selama
10 menit (medium roasted coffee) sehingga akan memproduksi kopi dengan
xxxviii
30,36
muncul
dalam
urin
sebagai
hipuric
acid.
Metabolisme
ini
xxxix
30,36
30
coffee pulp, namun tidak ditemukan pada pemrosesan biji kopi cara basah.
Tannin merupakan senyawa phenolik utama pada buah kopi , sedang pada biji
kopi tannin terutama sebagai keluarga ester yang terbentuk antara
hydroxycinnamic acids dan quinic acid, secara bersama-sama disebut
chlorogenic acid. 30,36,37
4.
Anthocyanidin 30
Anthocyanidin seperti cyanidin, pelargonidin dan 1- peonidin
diidentifikasi pada biji kopi arabika 1 % phenolic glycosides.
xl
5.
Lignan 38
Termasuk senyawa ini adalah secoisolariciresinol, lariciresinol,
matairesinol dan pinoresinol. Lignan merupakan antioksidan larut lemak
seperti sesamolinol dan sesamolin. Perannya mencegah terbentuknya radikal
bebas, dan membersihkan radikal bebas yang telah siap terbentuk. Lignan
merupakan phytoestrogen dengan estrogenik. Lignan ditemukan dalam
berbagai sumber bahan makanan, termasuk kopi. Senyawa phenolik seperti
lignan dan anthocyanins terdapat pada biji kopi dalam jumlah kecil.
Kopi hijau dan hitam mengandung antioksidan total sebanyak 15,9 dan
22,6 mmol dalam 100gr. Perbedaan antara biji kopi hijau dan hitam menurut
data yang ada sebelumnya bahwa beberapa antioksidan cenderung rusak saat
proses roasting namun terbentuk reaksi lain yaitu Maillard reactions (the
browning reaction) dimana reaksi ini juga menimbulkan antioksidan.3941
Selama
xli
Kadar asam urat diketahui melalui hasil pemeriksaan darah dan urin.
Nilai rujukan kadar asam urat normal dalam darah pria adalah 2,1-7 mg/dL
dan pada perempuan adalah 2,0-6 mg/dL. Kadarnya akan meningkat pada
xlii
orangtua, sedang nilai rujukan kadar asam urat normal pada urin adalah 250750 mg/24 jam.29,43 Menurut American Medical Association, kadar asam urat
normal antara 3,6 mg/dL 8,3 mgdL (1 mg/dL = 59,48 mol/L)42,43
2.2.2. Sifat dan struktur kimia asam urat
Asam urat merupakan asam lemah organik dengan pKa 5,8.33,34 Pada
ph dibawah pKa akan membentuk molekul nonionized sehingga sulit larut air.
Dalam bentuk ion akan lebih mudah larut air daripada dalam bentuk molekul
nonionized. Ion urat terutama terbentuk pada pH 7,4. Ion urat difiltrasi di
glomerulus.42-46
Asam urat berwarna putih, berbau busuk dan merupakan substansi
yang terbentuk dari hasil degradasi purin pada manusia, primata, dalmatian,
burung, ular dan cicak serta dapat dihilangkan dari tubuh dalam bentuk dry
powder.43
xliii
ribose 5-
PRPP
(phosphoribosyl
xliv
pyrophosphate)
dan
kemudian
uric
xlv
2.
xlvi
dapat membentuk kristal asam urat/ batu ginjal yang akan membentuk
sumbatan pada ureter.
3. Penyakit tertentu seperti gout, Lesch-Nyhan syndrome, endogenous
nucleic acid metabolism, kanker, kadar abnormal eritrosit dalam darah
karena destruksi sel darah merah, polisitemia, anemia pernisiosa,
leukemia, gangguan genetik metabolisme purin, gangguan metabolik
asam urat bawaan (peningkatan sintesis asam urat endogen),
alkoholisme yang meningkatkan laktikasidemia, hipertrigliseridemia,
gangguan pada fungsi ginjal dan obesitas, asidosis ketotik, asidosis
laktat, ketoacidosis, lacticidosis, dan psoriasis.45
4. Pemakaian obat-obatan diuretik seperti tiazid atau furosemid akan
meningkatkan ekskresi cairan tubuh, namun menurunkan eksresi asam
urat pada tubulus ginjal sehingga terjadi peningkatan kadar asam urat
dalam darah.16
5. Pada
pemakaian
hormonal
untuk
terapi
seperti
hormon
xlvii
protein sehingga inti sel akan mengalami pemecahan lebih cepat dan
terjadilah peningkatan kadar asam urat dalam darah.45
Kegagalan fungsi tubulus ginjal dalam melakukan reabsorpsi asam urat dari
tubulus ginjal, sehingga ekskresi asam urat melalui ginjal akan ditingkatkan
dan kadar asam urat dalam darah akan turun. Kegagalan fungsi ginjal untuk
berfungsi secara normal akan menyebabkan terjadinya retensi produk buangan
dari metabolisme protein, sehingga terjadi penumpukan asam urat, urea, serta
senyawa nitrogen seperti kreatinin.
2.
3.
4.
xlviii
oxidase. Jadi di sini, fungsi allopurinol sebagai analog sustrat akan menempati
sisi
aktif
enzim
xanthine
oxidase,
yang
biasa
ditempati
oleh
sehingga menghambat
xanthin
oxidase
terhadap
xlix
18,47,49
terjadi
deposit
sodium
hydrogen
urate
monohydrate
Hypoxanthine
Xanthine
Uric acid
Gambar 9. Perubahan sruktur kimia dari reaksi di atas sehingga
terbentuk asam urat 49
center
terjadi
melalui
penambahan
air.
Molybdenum
li
terdiri dari enzim dan senyawa dengan berat molekul rendah (diantaranya
flavonoid, senyawa fenolik dan alkaloid ).18,26,51,52Dalam melakukan tugasnya,
antioksidan akan mencegah akumulasi oksidan berlebihan, mencegah
terjadinya radikal hidroksil dan mencegah berlanjutnya reaksi rantai oksidan
atau radikal bebas dengan jalan memutus rantai.18,51 Antioksidan akan
melindungi jaringan dari efek negatif radikal bebas. Menurut cara kerjanya
antioksidan terdiri atas : 18,51
1. Primary Antioksidant Defence
Antioksidan akan mengurangi efek negatif dari radikal bebas yang sudah ada,
contoh antioksidan akan merubah O2
lii
antioksidan.52-54Bila
tubuh
mengkonsumsi
makanan
dengan
36,54,56
liii
Reaction
menghasilkan
mellanoidin
yang
poten
sebagai
liv
BAB 3
KERANGKA TEORI, KERANGKA KONSEP DAN HIPOTESIS
PENELITIAN
3.1 Kerangka Teori
Berdasarkan teori dari berbagai pustaka, maka disusun kerangka teori sebagai berikut
:
Jenis
kelamin
Umur
Penyakit
Genetik
Diet
Protein
Kopi
Karbohidrat
Kafein
Phenolik
Asam
Amino
Urea
DNA
Purin
Hipoxanthin
Xanthin
Oxidase
Xanthin
Kadar
Asam urat
lv
Kopi
3.3 Hipotesis
3.3.1 Hipotesis mayor :
Kopi menurunkan kadar asam urat serum darah tikus hiperurikemia
3.3.2 Hipotesis minor :
1. Kadar asam urat serum darah hewan coba Rattus Norwegicus
Galur Wistar yang mendapat pakan tinggi purin dan kopi
selama 7 hari setelah pemberian kopi lebih rendah dibanding
sebelum pemberian kopi
2. Penurunan kadar asam urat serum darah hewan coba Rattus
Norwegicus Galur Wistar yang diberi kopi dosis lebih tingggi
lebih besar dibanding kelompok yang diberi kopi dosis lebih
rendah
lvi
BAB 4
METODE PENELITIAN
P
o
P1
O1
O2
O3
P2
O1
O2
O3
P3
O1
O2
O3
P4
O1
O2
O3
Keterangan :
P=Populasi
R=Randomisasi
P=Perlakuan
P1 = pakan tinggi purin, pemberian 0,36ml larutan kopi/hari
P2 = pakan tinggi purin + pemberian 0,72ml larutan kopi/hari
P3 = pakan tinggi purin + pemberian 1,44ml larutan kopi/hari
P4 = pakan tinggi purin + pemberian 2,16ml larutan kopi/hari
lvii
lviii
Kopi
Skala
dengan
ordinal
21-23
Satuan Skala
bebagai
dosis
perhari.
Variasi
dosis
kopi
bertingkat.
Dosis pemberian kopi:
Kelompok P1:0,36 mL larutan kopi
Kelompok P2:0,72 mL larutan kopi
Kelompok P3: 1,44 mL larutan kopi
Kelompok P4: 2,16 mL larutan kopi
Kadar
Asam
Urat
lix
Rasio
Variabel
Awal:
Kadar
asam
Satuan Skala
urat
setelah
dosis
kopi
dengan
menggunakan
tabel
lx
7,2ml; sedang untuk 4 cangkir kopi setara dengan 14,4ml; dan untuk
6 cangkir kopi setara dengan 21,6ml.
Pada penelitian ini dibuat larutan 100g bubuk kopi
(konsentrasi 10 kali) yang diseduh dalam 200ml. Banyaknya volume
air
yang
boleh
diberikan
pada
tikus
maksimal
adalah
lxi
lxii
dikelompokkan
secara
acak
menjadi
kelompok, tiap kelompok terdiri dari 6 ekor lalu kadar asam urat
awal setelah pemberian pakan standar diukur sebagai data standar
(observasi pertama). Setelah itu diberikan diet tinggi purin selama
7 hari dan diperiksa kembali kadar asam uratnya (observasi
kedua). Selanjutnya diberikan larutan berbagai dosis kopi dan
kemudian diukur kadar asam urat akhir
lxiii
Pengambilan
sampel darah
ke-1 / hari ke
0
Pengambilan
sampel darah
ke-2 / hari ke
7
Pengambilan
sample darah
ke-3/hari ke
14
P1
P2
P3
P4
Pakan tingi
purin 7
hari
P11
P21
P3
P41
P12
P22
P32
P42
Pakan tinggi
purin dan
Pemberian
berbagai
dosis kopi
selama 7
Analisis data
Keterangan :
P1 = pakan tinggi purin, pemberian 0,36ml larutan kopi/hari + aqua sehingga menjadi larutan 3ml.
P2 = pakan tinggi purin + pemberian 0,72ml larutan kopi/hari + aqua sehingga menjadi larutan 3ml .
P3 = pakan
purin
+ pemberian
1,44ml larutan kopi/hari + aqua sehingga menjadi larutan 3ml .
4.9.tinggi
Waktu
dan
Tempat Penelitian
P4 = pakan tinggi purin + pemberian 2,16ml larutan kopi/hari + aqua sehingga menjadi larutan 3ml .
Penelitian dilakukan selama 14 hari. Pada hari ke-1, ke-7, dan ke-14 diperiksa kadar asam urat dalam
darah.
lxiv
lxv
lxvi
lxvii
lxviii
lxix
lxx
lxxi
lxxii
lxxiii
lxxiv
lxxv
lxxvi
lxxvii
lxxviii
lxxix
lxxx
lxxxi
lxxxii
lxxxiii
lxxxiv
lxxxv
lxxxvi
lxxxvii
lxxxviii
lxxxix
xc
xci
xcii
xciii
xciv
xcv
xcvi
xcvii
xcviii
xcix
ci
cii
ciii
civ
cv
cvi
cvii
cviii
cix
cx
cxi
cxii
cxiii
cxiv
cxv
cxvi
cxvii
cxviii
cxix
cxx
cxxi
cxxii
cxxiii
cxxiv
cxxv
cxxvi
cxxvii
cxxviii
cxxix
cxxx
cxxxi
cxxxii
cxxxiii
cxxxiv
cxxxv
cxxxvi
cxxxvii
cxxxviii
cxxxix
cxl
cxli
cxlii
cxliii
cxliv
cxlv
cxlvi
cxlvii
cxlviii
cxlix
cl
cli
clii
cliii
cliv
clv
clvi
clvii
clviii
clix
clx
clxi
clxii
clxiii
clxiv
clxv
clxvi
clxvii
clxviii
clxix
clxx
clxxi
clxxii
clxxiii
clxxiv
clxxv
clxxvi
clxxvii
clxxviii
clxxix
clxxx
clxxxi
clxxxii
clxxxiii
clxxxiv
clxxxv
clxxxvi
clxxxvii
clxxxviii
clxxxix
cxc
cxci
cxcii
cxciii
cxciv
cxcv
cxcvi
cxcvii
cxcviii
cxcix
cc
cci
ccii
cciii
cciv
ccv
ccvi
ccvii
ccviii
ccix
ccx
ccxi
ccxii
ccxiii
ccxiv
ccxv
ccxvi
ccxvii
ccxviii
ccxix
ccxx
ccxxi
ccxxii
ccxxiii
ccxxiv
ccxxv
ccxxvi
ccxxvii
ccxxviii
ccxxix
ccxxx
ccxxxi
ccxxxii
ccxxxiii
ccxxxiv
ccxxxv
ccxxxvi
ccxxxvii
ccxxxviii
ccxxxix
ccxl
ccxli
ccxlii
ccxliii
ccxliv
ccxlv
ccxlvi
ccxlvii
ccxlviii
ccxlix
ccl
ccli
cclii
ccliii
ccliv
cclv
cclvi
cclvii
cclviii
cclix
cclx
cclxi
cclxii
cclxiii
cclxiv
cclxv
cclxvi
cclxvii
cclxviii
cclxix
cclxx
cclxxi
cclxxii
cclxxiii
cclxxiv
cclxxv
cclxxvi
cclxxvii
cclxxviii
cclxxix
cclxxx
cclxxxi
cclxxxii
cclxxxiii
cclxxxiv
cclxxxv
cclxxxvi
cclxxxvii
cclxxxviii
cclxxxix
ccxc
ccxci
ccxcii
ccxciii
ccxciv
ccxcv
ccxcvi
ccxcvii
ccxcviii
ccxcix
ccc
ccci
cccii
ccciii
ccciv
cccv
cccvi
cccvii
cccviii
cccix
cccx
cccxi
cccxii
cccxiii
cccxiv
cccxv
cccxvi
cccxvii
cccxviii
cccxix
cccxx
cccxxi
cccxxii
cccxxiii
cccxxiv
cccxxv
cccxxvi
cccxxvii
cccxxviii
cccxxix
cccxxx
cccxxxi
cccxxxii
cccxxxiii
cccxxxiv
cccxxxv
cccxxxvi
cccxxxvii
cccxxxviii
cccxxxix
cccxl
cccxli
cccxlii
cccxliii
cccxliv
cccxlv
cccxlvi
cccxlvii
cccxlviii
cccxlix
cccl
cccli
ccclii
cccliii
cccliv
ccclv
ccclvi
ccclvii
ccclviii
ccclix
ccclx
ccclxi
ccclxii
ccclxiii
ccclxiv
ccclxv
ccclxvi
ccclxvii
ccclxviii
ccclxix
ccclxx
ccclxxi
ccclxxii
ccclxxiii
ccclxxiv
ccclxxv
ccclxxvi
ccclxxvii
ccclxxviii
ccclxxix
ccclxxx
ccclxxxi
ccclxxxii
ccclxxxiii
ccclxxxiv
ccclxxxv
ccclxxxvi
ccclxxxvii
ccclxxxviii
ccclxxxix
cccxc
cccxci
cccxcii
cccxciii
cccxciv
cccxcv
cccxcvi
cccxcvii
cccxcviii
cccxcix
cd
cdi
cdii
cdiii
cdiv
cdv
cdvi
cdvii
cdviii
cdix
cdx
cdxi
cdxii
cdxiii
cdxiv
cdxv
cdxvi
cdxvii
cdxviii
cdxix
cdxx
cdxxi
cdxxii
cdxxiii
cdxxiv
cdxxv
cdxxvi
cdxxvii
cdxxviii
cdxxix
cdxxx
cdxxxi
cdxxxii
cdxxxiii
cdxxxiv
cdxxxv
cdxxxvi
cdxxxvii
cdxxxviii
cdxxxix
cdxl
cdxli
cdxlii
cdxliii
cdxliv
cdxlv
cdxlvi
cdxlvii
cdxlviii
cdxlix
cdl
cdli
cdlii
cdliii
cdliv
cdlv
cdlvi
cdlvii
cdlviii
cdlix
cdlx
cdlxi
cdlxii
cdlxiii
cdlxiv
cdlxv
cdlxvi
cdlxvii
cdlxviii
cdlxix
cdlxx
cdlxxi
cdlxxii
cdlxxiii
cdlxxiv
cdlxxv
cdlxxvi
cdlxxvii
cdlxxviii
cdlxxix
cdlxxx
cdlxxxi
cdlxxxii
cdlxxxiii
cdlxxxiv
cdlxxxv
cdlxxxvi
cdlxxxvii
cdlxxxviii
cdlxxxix
cdxc
cdxci
cdxcii
cdxciii
cdxciv
cdxcv
cdxcvi
cdxcvii
cdxcviii
cdxcix
di
dii
diii
div
dv
dvi
dvii
dviii
dix
dx
dxi
dxii
dxiii
dxiv
dxv
dxvi
dxvii
dxviii
dxix
dxx
dxxi
dxxii
dxxiii
dxxiv
dxxv
dxxvi
dxxvii
dxxviii
dxxix
dxxx
dxxxi
dxxxii
dxxxiii
dxxxiv
dxxxv
dxxxvi
dxxxvii
dxxxviii
dxxxix
dxl
dxli
dxlii
dxliii
dxliv
dxlv
dxlvi
dxlvii
dxlviii
dxlix
dl
dli
dlii
dliii
dliv
dlv
dlvi
dlvii
dlviii
dlix
dlx
dlxi
dlxii
dlxiii
dlxiv
dlxv
dlxvi
dlxvii
dlxviii
dlxix
dlxx
dlxxi
dlxxii
dlxxiii
dlxxiv
dlxxv
dlxxvi
dlxxvii
dlxxviii
dlxxix
dlxxx
dlxxxi
dlxxxii
dlxxxiii
dlxxxiv
dlxxxv
dlxxxvi
dlxxxvii
dlxxxviii
dlxxxix
dxc
dxci
dxcii
dxciii
dxciv
dxcv
dxcvi
dxcvii
dxcviii
dxcix
dc
dci
dcii
dciii
dciv
dcv
dcvi
dcvii
dcviii
dcix
dcx
dcxi
dcxii
dcxiii
dcxiv
dcxv
dcxvi
dcxvii
dcxviii
dcxix
dcxx
dcxxi
dcxxii
dcxxiii
dcxxiv
dcxxv
dcxxvi
dcxxvii
dcxxviii
dcxxix
dcxxx
dcxxxi
dcxxxii
dcxxxiii
dcxxxiv
dcxxxv
dcxxxvi
dcxxxvii
dcxxxviii
dcxxxix
dcxl
dcxli
dcxlii
dcxliii
dcxliv
dcxlv
dcxlvi
dcxlvii
dcxlviii
dcxlix
dcl
dcli
dclii
dcliii
dcliv
dclv
dclvi
dclvii
dclviii
dclix
dclx
dclxi
dclxii
dclxiii
dclxiv
dclxv
dclxvi
dclxvii
dclxviii
dclxix
dclxx
dclxxi
dclxxii
dclxxiii
dclxxiv
dclxxv
dclxxvi
dclxxvii
dclxxviii
dclxxix
dclxxx
dclxxxi
dclxxxii
dclxxxiii
dclxxxiv
dclxxxv
dclxxxvi
dclxxxvii
dclxxxviii
dclxxxix
dcxc
dcxci
dcxcii
dcxciii
dcxciv
dcxcv
dcxcvi
dcxcvii
dcxcviii
dcxcix
dcc
dcci
dccii
dcciii
dcciv
dccv
dccvi
dccvii
dccviii
dccix
dccx
dccxi
dccxii
dccxiii
dccxiv
dccxv
dccxvi
dccxvii
dccxviii
dccxix
dccxx
dccxxi
dccxxii
dccxxiii
dccxxiv
dccxxv
dccxxvi
dccxxvii
dccxxviii
dccxxix
dccxxx
dccxxxi
dccxxxii
dccxxxiii
dccxxxiv
dccxxxv
dccxxxvi
dccxxxvii
dccxxxviii
dccxxxix
dccxl
dccxli
dccxlii
dccxliii
dccxliv
dccxlv
dccxlvi
dccxlvii
dccxlviii
dccxlix
dccl
dccli
dcclii
dccliii
dccliv
dcclv
dcclvi
dcclvii
dcclviii
dcclix
dcclx
dcclxi
dcclxii
dcclxiii
dcclxiv
dcclxv
dcclxvi
dcclxvii
dcclxviii
dcclxix
dcclxx
dcclxxi
dcclxxii
dcclxxiii
dcclxxiv
dcclxxv
dcclxxvi
dcclxxvii
dcclxxviii
dcclxxix
dcclxxx
dcclxxxi
dcclxxxii
dcclxxxiii
dcclxxxiv
dcclxxxv
dcclxxxvi
dcclxxxvii
dcclxxxviii
dcclxxxix
dccxc
dccxci
dccxcii
dccxciii
dccxciv
dccxcv
dccxcvi
dccxcvii
dccxcviii
dccxcix
dccc
dccci
dcccii
dccciii
dccciv
dcccv
dcccvi
dcccvii
dcccviii
dcccix
dcccx
dcccxi
dcccxii
dcccxiii
dcccxiv
dcccxv
dcccxvi
dcccxvii
dcccxviii
dcccxix
dcccxx
dcccxxi
dcccxxii
dcccxxiii
dcccxxiv
dcccxxv
dcccxxvi
dcccxxvii
dcccxxviii
dcccxxix
dcccxxx
dcccxxxi
dcccxxxii
dcccxxxiii
dcccxxxiv
dcccxxxv
dcccxxxvi
dcccxxxvii
dcccxxxviii
dcccxxxix
dcccxl
dcccxli
dcccxlii
dcccxliii
dcccxliv
dcccxlv
dcccxlvi
dcccxlvii
dcccxlviii
dcccxlix
dcccl
dcccli
dccclii
dcccliii
dcccliv
dccclv
dccclvi
dccclvii
dccclviii
dccclix
dccclx
dccclxi
dccclxii
dccclxiii
dccclxiv
dccclxv
dccclxvi
dccclxvii
dccclxviii
dccclxix
dccclxx
dccclxxi
dccclxxii
dccclxxiii
dccclxxiv
dccclxxv
dccclxxvi
dccclxxvii
dccclxxviii
dccclxxix
dccclxxx
dccclxxxi
dccclxxxii
dccclxxxiii
dccclxxxiv
dccclxxxv
dccclxxxvi
dccclxxxvii
dccclxxxviii
dccclxxxix
dcccxc
dcccxci
dcccxcii
dcccxciii
dcccxciv
dcccxcv
dcccxcvi
dcccxcvii
dcccxcviii
dcccxcix
cm
cmi
cmii
cmiii
cmiv
cmv
cmvi
cmvii
cmviii
cmix
cmx
cmxi
cmxii
cmxiii
cmxiv
cmxv
cmxvi
cmxvii
cmxviii
cmxix
cmxx
cmxxi
cmxxii
cmxxiii
cmxxiv
cmxxv
cmxxvi
cmxxvii
cmxxviii
cmxxix
cmxxx
cmxxxi
cmxxxii
cmxxxiii
cmxxxiv
cmxxxv
cmxxxvi
cmxxxvii
cmxxxviii
cmxxxix
cmxl
cmxli
cmxlii
cmxliii
cmxliv
cmxlv
cmxlvi
cmxlvii
cmxlviii
cmxlix
cml
cmli
cmlii
cmliii
cmliv
cmlv
cmlvi
cmlvii
cmlviii
cmlix
cmlx
cmlxi
cmlxii
cmlxiii
cmlxiv
cmlxv
cmlxvi
cmlxvii
cmlxviii
cmlxix
cmlxx
cmlxxi
cmlxxii
cmlxxiii
cmlxxiv
cmlxxv
cmlxxvi
cmlxxvii
cmlxxviii
cmlxxix
cmlxxx
cmlxxxi
cmlxxxii
cmlxxxiii
cmlxxxiv
cmlxxxv
cmlxxxvi
cmlxxxvii
cmlxxxviii
cmlxxxix
cmxc
cmxci
cmxcii
cmxciii
cmxciv
cmxcv
cmxcvi
cmxcvii
cmxcviii
cmxcix
mi
mii
miii
miv
mv
mvi
mvii
mviii
mix
mx
mxi
mxii
mxiii
mxiv
mxv
mxvi
mxvii
mxviii
mxix
mxx
mxxi
mxxii
mxxiii
mxxiv
mxxv
mxxvi
mxxvii
mxxviii
mxxix
mxxx
mxxxi
mxxxii
mxxxiii
mxxxiv
mxxxv
mxxxvi
mxxxvii
mxxxviii
mxxxix
mxl
mxli
mxlii
mxliii
mxliv
mxlv
mxlvi
mxlvii
mxlviii
mxlix
ml
mli
mlii
mliii
mliv
mlv
mlvi
mlvii
mlviii
mlix
mlx
mlxi
mlxii
mlxiii
mlxiv
mlxv
mlxvi
mlxvii
mlxviii
mlxix
mlxx
mlxxi
mlxxii
mlxxiii
mlxxiv
mlxxv
mlxxvi
mlxxvii
mlxxviii
mlxxix
mlxxx
mlxxxi
mlxxxii
mlxxxiii
mlxxxiv
mlxxxv
mlxxxvi
mlxxxvii
mlxxxviii
mlxxxix
mxc
mxci
mxcii
mxciii
mxciv
mxcv
mxcvi
mxcvii
mxcviii
mxcix
mc
mci
mcii
mciii
mciv
mcv
mcvi
mcvii
mcviii
mcix
mcx
mcxi
mcxii
mcxiii
mcxiv
mcxv
mcxvi
mcxvii
mcxviii
mcxix
mcxx
mcxxi
mcxxii
mcxxiii
mcxxiv
mcxxv
mcxxvi
mcxxvii
mcxxviii
mcxxix
mcxxx
mcxxxi
mcxxxii
mcxxxiii
mcxxxiv
mcxxxv
mcxxxvi
mcxxxvii
mcxxxviii
mcxxxix
mcxl
mcxli
mcxlii
mcxliii
mcxliv
mcxlv
mcxlvi
mcxlvii
mcxlviii
mcxlix
mcl
mcli
mclii
mcliii
mcliv
mclv
mclvi
mclvii
mclviii
mclix
mclx
mclxi
mclxii
mclxiii
mclxiv
mclxv
mclxvi
mclxvii
mclxviii
mclxix
mclxx
mclxxi
mclxxii
mclxxiii
mclxxiv
mclxxv
mclxxvi
mclxxvii
mclxxviii
mclxxix
mclxxx
mclxxxi
mclxxxii
mclxxxiii
mclxxxiv
mclxxxv
mclxxxvi
mclxxxvii
mclxxxviii
mclxxxix
mcxc
mcxci
mcxcii
mcxciii
mcxciv
mcxcv
mcxcvi
mcxcvii
mcxcviii
mcxcix
mcc
mcci
mccii
mcciii
mcciv
mccv
mccvi
mccvii
mccviii
mccix
mccx
mccxi
mccxii
mccxiii
mccxiv
mccxv
mccxvi
mccxvii
mccxviii
mccxix
mccxx
mccxxi
mccxxii
mccxxiii
mccxxiv
mccxxv
mccxxvi
mccxxvii
mccxxviii
mccxxix
mccxxx
mccxxxi
mccxxxii
mccxxxiii
mccxxxiv
mccxxxv
mccxxxvi
mccxxxvii
mccxxxviii
mccxxxix
mccxl
mccxli
mccxlii
mccxliii
mccxliv
mccxlv
mccxlvi
mccxlvii
mccxlviii
mccxlix
mccl
mccli
mcclii
mccliii
mccliv
mcclv
mcclvi
mcclvii
mcclviii
mcclix
mcclx
mcclxi
mcclxii
mcclxiii
mcclxiv
mcclxv
mcclxvi
mcclxvii
mcclxviii
mcclxix
mcclxx
mcclxxi
mcclxxii
mcclxxiii
mcclxxiv
mcclxxv
mcclxxvi
mcclxxvii
mcclxxviii
mcclxxix
mcclxxx
mcclxxxi
mcclxxxii
mcclxxxiii
mcclxxxiv
mcclxxxv
mcclxxxvi
mcclxxxvii
mcclxxxviii
mcclxxxix
mccxc
mccxci
mccxcii
mccxciii
mccxciv
mccxcv
mccxcvi
mccxcvii
mccxcviii
mccxcix
mccc
mccci
mcccii
mccciii
mccciv
mcccv
mcccvi
mcccvii
mcccviii
mcccix
mcccx
mcccxi
mcccxii
mcccxiii
mcccxiv
mcccxv
mcccxvi
mcccxvii
mcccxviii
mcccxix
mcccxx
mcccxxi
mcccxxii
mcccxxiii
mcccxxiv
mcccxxv
mcccxxvi
mcccxxvii
mcccxxviii
mcccxxix
mcccxxx
mcccxxxi
mcccxxxii
mcccxxxiii
mcccxxxiv
mcccxxxv
mcccxxxvi
mcccxxxvii
mcccxxxviii
mcccxxxix
mcccxl
mcccxli
mcccxlii
mcccxliii
mcccxliv
mcccxlv
mcccxlvi
mcccxlvii
mcccxlviii
mcccxlix
mcccl
mcccli
mccclii
mcccliii
mcccliv
mccclv
mccclvi
mccclvii
mccclviii
mccclix
mccclx
mccclxi
mccclxii
mccclxiii
mccclxiv
mccclxv
mccclxvi
mccclxvii
mccclxviii
mccclxix
mccclxx
mccclxxi
mccclxxii
mccclxxiii
mccclxxiv
mccclxxv
mccclxxvi
mccclxxvii
mccclxxviii
mccclxxix
mccclxxx
mccclxxxi
mccclxxxii
mccclxxxiii
mccclxxxiv
mccclxxxv
mccclxxxvi
mccclxxxvii
mccclxxxviii
mccclxxxix
mcccxc
mcccxci
mcccxcii
mcccxciii
mcccxciv
mcccxcv
mcccxcvi
mcccxcvii
mcccxcviii
mcccxcix
mcd
mcdi
mcdii
mcdiii
mcdiv
mcdv
mcdvi
mcdvii
mcdviii
mcdix
mcdx
mcdxi
mcdxii
mcdxiii
mcdxiv
mcdxv
mcdxvi
mcdxvii
mcdxviii
mcdxix
mcdxx
mcdxxi
mcdxxii
mcdxxiii
mcdxxiv
mcdxxv
mcdxxvi
mcdxxvii
mcdxxviii
mcdxxix
mcdxxx
mcdxxxi
mcdxxxii
mcdxxxiii
mcdxxxiv
mcdxxxv
mcdxxxvi
mcdxxxvii
mcdxxxviii
mcdxxxix
mcdxl
mcdxli
mcdxlii
mcdxliii
mcdxliv
mcdxlv
mcdxlvi
mcdxlvii
mcdxlviii
mcdxlix
mcdl
mcdli
mcdlii
mcdliii
mcdliv
mcdlv
mcdlvi
mcdlvii
mcdlviii
mcdlix
mcdlx
mcdlxi
mcdlxii
mcdlxiii
mcdlxiv
mcdlxv
mcdlxvi
mcdlxvii
mcdlxviii
mcdlxix
mcdlxx
mcdlxxi
mcdlxxii
mcdlxxiii
mcdlxxiv
mcdlxxv
mcdlxxvi
mcdlxxvii
mcdlxxviii
mcdlxxix
mcdlxxx
mcdlxxxi
mcdlxxxii
mcdlxxxiii
mcdlxxxiv
mcdlxxxv
mcdlxxxvi
mcdlxxxvii
mcdlxxxviii
mcdlxxxix
mcdxc
mcdxci
mcdxcii
mcdxciii
mcdxciv
mcdxcv
mcdxcvi
mcdxcvii
mcdxcviii
mcdxcix
md
mdi
mdii
mdiii
mdiv
mdv
mdvi
mdvii
mdviii
mdix
mdx
mdxi
mdxii
mdxiii
mdxiv
mdxv
mdxvi
mdxvii
mdxviii
mdxix
mdxx
mdxxi
mdxxii
mdxxiii
mdxxiv
mdxxv
mdxxvi
mdxxvii
mdxxviii
mdxxix
mdxxx
mdxxxi
mdxxxii
mdxxxiii
mdxxxiv
mdxxxv
mdxxxvi
mdxxxvii
mdxxxviii
mdxxxix
mdxl
mdxli
mdxlii
mdxliii
mdxliv
mdxlv
mdxlvi
mdxlvii
mdxlviii
mdxlix
mdl
mdli
mdlii
mdliii
mdliv
mdlv
mdlvi
mdlvii
mdlviii
mdlix
mdlx
mdlxi
mdlxii
mdlxiii
mdlxiv
mdlxv
mdlxvi
mdlxvii
mdlxviii
mdlxix
mdlxx
mdlxxi
mdlxxii
mdlxxiii
mdlxxiv
mdlxxv
mdlxxvi
mdlxxvii
mdlxxviii
mdlxxix
mdlxxx
mdlxxxi
mdlxxxii
mdlxxxiii
mdlxxxiv
mdlxxxv
mdlxxxvi
mdlxxxvii
mdlxxxviii
mdlxxxix
mdxc
mdxci
mdxcii
mdxciii
mdxciv
mdxcv
mdxcvi
mdxcvii
mdxcviii
mdxcix
mdc
mdci
mdcii
mdciii
mdciv
mdcv
mdcvi
mdcvii
mdcviii
mdcix
mdcx
mdcxi
mdcxii
mdcxiii
mdcxiv
mdcxv
mdcxvi
mdcxvii
mdcxviii
mdcxix
mdcxx
mdcxxi
mdcxxii
mdcxxiii
mdcxxiv
mdcxxv
mdcxxvi
mdcxxvii
mdcxxviii
mdcxxix
mdcxxx
mdcxxxi
mdcxxxii
mdcxxxiii
mdcxxxiv
mdcxxxv
mdcxxxvi
mdcxxxvii
mdcxxxviii
mdcxxxix
mdcxl
mdcxli
mdcxlii
mdcxliii
mdcxliv
mdcxlv
mdcxlvi
mdcxlvii
mdcxlviii
mdcxlix
mdcl
mdcli
mdclii
mdcliii
mdcliv
mdclv
mdclvi
mdclvii
mdclviii
mdclix
mdclx
mdclxi
mdclxii
mdclxiii
mdclxiv
mdclxv
mdclxvi
mdclxvii
mdclxviii
mdclxix
mdclxx
mdclxxi
mdclxxii
mdclxxiii
mdclxxiv
mdclxxv
mdclxxvi
mdclxxvii
mdclxxviii
mdclxxix
mdclxxx
mdclxxxi
mdclxxxii
mdclxxxiii
mdclxxxiv
mdclxxxv
mdclxxxvi
mdclxxxvii
mdclxxxviii
mdclxxxix
mdcxc
mdcxci
mdcxcii
mdcxciii
mdcxciv
mdcxcv
mdcxcvi
mdcxcvii
mdcxcviii
mdcxcix
mdcc
mdcci
mdccii
mdcciii
mdcciv
mdccv
mdccvi
mdccvii
mdccviii
mdccix
mdccx
mdccxi
mdccxii
mdccxiii
mdccxiv
mdccxv
mdccxvi
mdccxvii
mdccxviii
mdccxix
mdccxx
mdccxxi
mdccxxii
mdccxxiii
mdccxxiv
mdccxxv
mdccxxvi
mdccxxvii
mdccxxviii
mdccxxix
mdccxxx
mdccxxxi
mdccxxxii
mdccxxxiii
mdccxxxiv
mdccxxxv
mdccxxxvi
mdccxxxvii
mdccxxxviii
mdccxxxix
mdccxl
mdccxli
mdccxlii
mdccxliii
mdccxliv
mdccxlv
mdccxlvi
mdccxlvii
mdccxlviii
mdccxlix
mdccl
mdccli
mdcclii
mdccliii
mdccliv
mdcclv
mdcclvi
mdcclvii
mdcclviii
mdcclix
mdcclx
mdcclxi
mdcclxii
mdcclxiii
mdcclxiv
mdcclxv
mdcclxvi
mdcclxvii
mdcclxviii
mdcclxix
mdcclxx
mdcclxxi
mdcclxxii
mdcclxxiii
mdcclxxiv
mdcclxxv
mdcclxxvi
mdcclxxvii
mdcclxxviii
mdcclxxix
mdcclxxx
mdcclxxxi
mdcclxxxii
mdcclxxxiii
mdcclxxxiv
mdcclxxxv
mdcclxxxvi
mdcclxxxvii
mdcclxxxviii
mdcclxxxix
mdccxc
mdccxci
mdccxcii
mdccxciii
mdccxciv
mdccxcv
mdccxcvi
mdccxcvii
mdccxcviii
mdccxcix
mdccc
mdccci
mdcccii
mdccciii
mdccciv
mdcccv
mdcccvi
mdcccvii
mdcccviii
mdcccix
mdcccx
mdcccxi
mdcccxii
mdcccxiii
mdcccxiv
mdcccxv
mdcccxvi
mdcccxvii
mdcccxviii
mdcccxix
mdcccxx
mdcccxxi
mdcccxxii
mdcccxxiii
mdcccxxiv
mdcccxxv
mdcccxxvi
mdcccxxvii
mdcccxxviii
mdcccxxix
mdcccxxx
mdcccxxxi
mdcccxxxii
mdcccxxxiii
mdcccxxxiv
mdcccxxxv
mdcccxxxvi
mdcccxxxvii
mdcccxxxviii
mdcccxxxix
mdcccxl
mdcccxli
mdcccxlii
mdcccxliii
mdcccxliv
mdcccxlv
mdcccxlvi
mdcccxlvii
mdcccxlviii
mdcccxlix
mdcccl
mdcccli
mdccclii
mdcccliii
mdcccliv
mdccclv
mdccclvi
mdccclvii
mdccclviii
mdccclix
mdccclx
mdccclxi
mdccclxii
mdccclxiii
mdccclxiv
mdccclxv
mdccclxvi
mdccclxvii
mdccclxviii
mdccclxix
mdccclxx
mdccclxxi
mdccclxxii
mdccclxxiii
mdccclxxiv
mdccclxxv
mdccclxxvi
mdccclxxvii
mdccclxxviii
mdccclxxix
mdccclxxx
mdccclxxxi
mdccclxxxii
mdccclxxxiii
mdccclxxxiv
mdccclxxxv
mdccclxxxvi
mdccclxxxvii
mdccclxxxviii
mdccclxxxix
mdcccxc
mdcccxci
mdcccxcii
mdcccxciii
mdcccxciv
mdcccxcv
mdcccxcvi
mdcccxcvii
mdcccxcviii
mdcccxcix
mcm
mcmi
mcmii
mcmiii
mcmiv
mcmv
mcmvi
mcmvii
mcmviii
mcmix
mcmx
mcmxi
mcmxii
mcmxiii
mcmxiv
mcmxv
mcmxvi
mcmxvii
mcmxviii
mcmxix
mcmxx
mcmxxi
mcmxxii
mcmxxiii
mcmxxiv
mcmxxv
mcmxxvi
mcmxxvii
mcmxxviii
mcmxxix
mcmxxx
mcmxxxi
mcmxxxii
mcmxxxiii
mcmxxxiv
mcmxxxv
mcmxxxvi
mcmxxxvii
mcmxxxviii
mcmxxxix
mcmxl
mcmxli
mcmxlii
mcmxliii
mcmxliv
mcmxlv
mcmxlvi
mcmxlvii
mcmxlviii
mcmxlix
mcml
mcmli
mcmlii
mcmliii
mcmliv
mcmlv
mcmlvi
mcmlvii
mcmlviii
mcmlix
mcmlx
mcmlxi
mcmlxii
mcmlxiii
mcmlxiv
mcmlxv
mcmlxvi
mcmlxvii
mcmlxviii
mcmlxix
mcmlxx
mcmlxxi
mcmlxxii
mcmlxxiii
mcmlxxiv
mcmlxxv
mcmlxxvi
mcmlxxvii
mcmlxxviii
mcmlxxix
mcmlxxx
mcmlxxxi
mcmlxxxii
mcmlxxxiii
mcmlxxxiv
mcmlxxxv
mcmlxxxvi
mcmlxxxvii
mcmlxxxviii
mcmlxxxix
mcmxc
mcmxci
mcmxcii
mcmxciii
mcmxciv
mcmxcv
mcmxcvi
mcmxcvii
mcmxcviii
mcmxcix
mm
mmi
mmii
mmiii
mmiv
mmv
mmvi
mmvii
mmviii
mmix
mmx
mmxi
mmxii
mmxiii
mmxiv
mmxv
mmxvi
mmxvii
mmxviii
mmxix
mmxx
mmxxi
mmxxii
mmxxiii
mmxxiv
mmxxv
mmxxvi
mmxxvii
mmxxviii
mmxxix
mmxxx
mmxxxi
mmxxxii
mmxxxiii
mmxxxiv
mmxxxv
mmxxxvi
mmxxxvii
mmxxxviii
mmxxxix
mmxl
mmxli
mmxlii