Artikel Penelitian

Imunohistokimia dan faktor prognostik lain dalam sel B non

Limfoma Hodgkin pasien, Kampala, Uganda

Abstrak
Latar Belakang: Non Hodgkin limfoma adalah limfoma yang paling umum di
Uganda. Studi baru-baru ini dari negara-negara maju telah menunjukkan perbedaan
dalam hidup untuk immunophenotypes berbeda. Seperti itu studi yang kurang di
Afrika di mana diagnosis sebagian besar tergantung pada morfologi saja. Kami
Laporan imunohistokimia dan faktor prognostik lainnya di B limfoma non
Hodgkin sel pasien di Kampala, Uganda.

Metode: Non Hodgkin limfoma blok jaringan dari arsip Departemen Patologi,

Makerere University College of Health Sciences, Kampala, Uganda, dari 1991-
2000, adalah sub diketik menggunakan hematoksilin dan eosin, Giemsa serta
imunohistokimia. Menggunakan jaringan mikro array, 119 biopsi yang dikenakan:
CD3, CD5, CD10, CD20, CD23, CD30, CD38, CD79a, CD138, Bcl-6, Bcl-2,
IRTA-1, MUM1/IRF4, Bcl-1/cyclin D1, TdT, ALKc, dan Ki-67/Mib1. Kasus
catatan yang diambil untuk: stadium penyakit, program kemoterapi menerima dan
menindaklanjuti retrospektif dilakukan untuk bertahan hidup.

Hasil: Non Hodgkin limfoma sel B terdiri dari Burkitt limfoma [BL] (95/119) sel
B besar difus limfoma (19/119), mantel limfoma sel (4 / 119) dan precursor
lymphoblastic limfoma B (1 / 119). Untuk limfoma Burkitt, prognosis baik
dikaitkan dengan menerima kemoterapi, jenis kelamin perempuan dan CD30
positif. Hanya menerima kemoterapi tetap signifikan setelah analisis regresi
Cox. Menyebarkan besar limfoma sel B diaktifkan dengan pusat germinal sel B
(GCB) pola (CD10 + / -, BCL-6 + / -, MUM + / -, CD138 + / -) memiliki hidup
yang lebih baik (98,4 bulan; 95% CI 89,5 -107,3) dari yang lain (57,3 bulan; 95%
CI 35,5-79,0) p = 0,027 (log rank test).

Kesimpulan: Diaktifkan GCB baur besar limfoma sel B memiliki prognosis yang

lebih baik dari yang lain. Untuk limfoma Burkitt, tidak menerima kemoterapi
membawa prognosis yang buruk. Ketersediaan kemoterapi di pengaturan sumber
daya yang terbatas ini sangat penting bagi kelangsungan hidup pasien limfoma.
yang memungkinkan penggunaan tak terbatas, distribusi, dan reproduksi dalam
medium apapun, asalkan karya asli benar dikutip.

Latar belakang
Non Hodgkin limfoma sel B yang heterogen dalam morfologi, imunofenotipe dan
respons terhadap termometer itu atau APY. Penelitian terbaru telah menunjukkan
perbedaan dalam kelangsungan hidup berdasarkan profil molekul mereka [ 1] .
Di negara-negara berkembang, klinis agresif subtipe seperti Burkitt dan
menyebarkan sel limfoma B besar pra- mendominasi dan, sayangnya,
menghasilkan hasil yang buruk [ 2] . Faktor-faktor yang mempengaruhi
kelangsungan hidup di non-Hodgkin lympho mas dalam pengaturan sumber daya
sosial ekonomi miskin termasuk status, tahap penyakit pada presentasi dan
mendapatkan penuh pengobatan. Di Uganda, beberapa penelitian klinis dijelaskan
faktor yang terkait dengan hasil Burkitt limfoma [3 , 4]. Di negara-negara maju,
beberapa metode termasuk gen profiling dan imunohistokimia telah digunakan
untuk memprediksi prognosis [ 5 , 6]. Menggunakan ekspresi gen profil Sion B
pusat germinal dan sel B diaktifkan, DIF- sekering besar limfoma sel B (DLBCL)
dibagi menjadi 3 prognosis kelompok. Namun, ada beberapa menarik
punggung profil ekspresi gen terutama dalam sumber daya dibatasi negara-negara
seperti Uganda. Hal ini membutuhkan menggunakan secara optimal cryopreserved
atau jaringan segar serta DNA array teknologi mikro yang lebih mahal dari immu-
nohistochemistry pada bagian parafin. Baru-baru ini, beberapa pekerja telah
menggunakan pusat germinal dan imunohistokimia diaktifkan penanda sel B pada
paraf- sirip blok jaringan tertanam untuk mengklasifikasikan DLBCL menjadi tiga
prognosis kelompok [ 7, 8]. Ini termasuk: (a) non GCB diaktifkan (CD10-, Bcl-6-,
MUM1/IRF4 ±, CD138 +), (b) GCB diaktifkan (CD10 +, Bcl- 6 +, MUM1/IRF4 ±,
CD138 +), dan (c) GCB non aktif (CD10 +, Bcl-6 +, MUM1/IRF4-,
CD138-). Mereka menunjukkan bahwa pasien dengan profil sel germinal B pusat
memiliki
prognosis lebih baik dibandingkan dengan sel B diaktifkan jenis. studi seperti ini
sampai sekarang belum dilaksanakan di Uganda. Kami melaporkan
imunohistokimia dan lainnya faktor prognosis dalam sel B limfoma non Hodgkin
pasien di Kampala, Uganda

Metode
Studi desain dan sampling
Sebuah deskriptif cross sectional digunakan untuk lym- phoma diagnosis dan
Imunofenotipe, sementara ret- kohort rospective digunakan untuk menentukan
kelangsungan hidup. Untuk cross sectional studi, hematoksilin dan eosin dan
Giemsa pewarnaan dilakukan di Departemen Patologi, Makerere Universitas dan
imunohistokimia di Unit Hematopathology, Institut Hematologi dan Onkologi
Klinik "L. & A. Seràgnoli", Universitas Bologna School of Medicine, Bologna,
Italia. Seratus sembilan pasien biopsi dua puluh didiagnosis antara tahun 1991 -
2000 sebagai limfoma non Hodgkin dari sub diketik menggunakan jaringan
microarray (TMA) dan imunohistokimia dengan CD3, CD5, CD10, CD20, CD23,
CD30, CD38, CD79a, CD138, Bcl-6, Bcl-2, IRTA-1, MUM1/IRF4, Bcl-1/cyclin
D1, TdT, ALKc, dan Ki-67/Mib1. Untuk studi kohort retrospektif pasien kami
diambil ' catatan kasus dari Uganda Cancer Institute untuk mendapatkan rincian
'penyakit tahap pasien tersebut, jenis-Kimia otherapy, jumlah program yang
diterima, apakah mati atau hidup, waktu mati. Data registry juga digunakan Kanker
ketika alamat pasien jatuh dalam Kyadondo County, wilayah yang tercakup dalam
Kampala Kanker Registry. Salah satu dari kami (LKT) dan dua asisten peneliti
ditindaklanjuti pasien yang bertahan hidup status tidak jelas. Tindak lanjut
terlibat melacak pasien ke rumah mereka (distrik, sub- wilayah, paroki dan desa) di
daerah yang berbeda Uganda. Para pasien telah dirawat di Uganda Kanker Insti-
tute yang merupakan unit tertua untuk pengobatan kanker di negara. Ini dimulai
sebagai pusat untuk pengobatan Burkitt pasien limfoma di tahun 1960 dan
memiliki dua unit yaitu tumor padat unit perawatan dan pengobatan limfoma
pusat. Mereka dengan limfoma Burkitt menerima COM [ 9 ] (Cyclophosphamide,
vincristine, intratekal methotrex- makan), sedangkan mereka yang lain limfoma
non Hodgkin menerima CHOP (cyclophosphamide, adriamycin, vincris- angga dan
prednisolone).

Jaringan konstruksi array mikro (TMA)

Hematoksilin dan eosin (H & E) slide ternoda digunakan untuk mengidentifikasi
bidang tumor perwakilan yang ditandai dan oleh diidentifikasi pada jaringan
blok. Jaringan silinder diameter 1 mm yang menekan dari yang bertanda masing-
masing daerah di blok dan dimasukkan ke dalam parafin blok penerima
menggunakan instrumen presisi, yang jaringan arrayer (Beecher Instrumen, Silver
Spring, Mary- tanah, USA). Untuk cukup sampling spesimen masing-masing
diwakili dalam rangkap menggunakan 1 mm core di penerima blok. Tiga TMA
blok penerima dibuat; dua ini memiliki 48 setiap pukulan limfoma Burkitt
sedangkan satu lagi telah 33 pukulan non-Hodgkin lympho mas.

Imunohistokimia
Empat-μm tebal bagian dipotong dari TMAS, dilapisi bermuatan listrik slide,
kembali cairan, dan disampaikan kepada pengambilan antigen dalam diamina
etilen asam asetat tetra (EDTA) 1 mM (pH 8,0) dengan mikro-gelombang dua kali
selama 5 minutes baik di 750 atau 900 W, yang sangat efisien sesuai- ing untuk
pengalaman sebelumnya [ 10] .

immunostainer dan diinkubasi selama 30 menit di kamar suhu dengan antibodi

terhadap CD3, CD5, CD10, CD20, CD23, CD30, CD38, CD79a, CD138, Bcl-6,
Bcl-2,
IRTA-1, MUM1/IRF4, Bcl-1/cyclin D1, TdT, ALKc, dan Ki- 67/Mib1. Rincian
pada antibodi, sumber, pengenceran dan pengambilan antigen tercantum pada
Tabel 1 . Antibodi terdeteksi baik oleh alkali phos- phatase alkaline phosphatase
anti immunocomplexes (APAAP) teknik atau Bayangkan + teknik [ 11] .

Pengelolaan data, analisis dan statistik masalah

Untuk cross sectional deskriptif, ukuran sampel 112 dihitung menggunakan
formula oleh Kish dan Les- berbaring [12 ]. Dalam perhitungan ini diasumsikan
bahwa prevalensi sel limfoma non Hodgkin's B dalam total populasi- sanaan-
Hodgkin limfoma non 92,1% menurut sebuah studi Uganda [2 ] dengan presisi 5%
dan 95% con- fidence interval.
Untuk desain kohort retrospektif, ukuran sampel dari 52 dihitung dengan
menggunakan rumus dengan Fleiss dengan 80% daya dan 95% confidence
interval [12 ]. Kami diasumsikan hasil yang diharapkan antara pasien dengan NHL
dari germinal Asal pusat akan 86% dan hasil yang diharapkan antara pasien dengan
NHL pusat germinal asal non akan menjadi 63%. Data dikumpulkan dan
dimasukkan ke komputer menggunakan EPI INFO software (disediakan oleh CDC
dan WHO) untuk stor- usia dan analisis awal. Analisis lebih lanjut dilakukan
dengan menggunakan

Tabel 1: antibodi primer yang digunakan untuk penelitian. Antibodi Klon

Sumber Pengambilan antigen Pengenceran

Software SPSS. Untuk variabel kontinu, relevan ukuran tendensi sentral (berarti

untuk normal distrib- didistribusikan data dan median dan kuartil rentang antar
untuk data miring) digunakan untuk mengeksplorasi data. Kurva Kaplan-Meier dan
uji peringkat log digunakan untuk menentukan kelangsungan hidup. Untuk
menentukan faktor yang terkait denganm kelangsungan hidup secara keseluruhan,
univariat dan multivariat Cox bahaya Analisis regresi dilakukan. Nilai p kurang
dari0,05 dianggap signifikan.

Isu etika
Izin untuk melaksanakan studi diperoleh dari Makerere Universitas Fakultas
Kedokteran dan RisetKomite Etika.

Studi keterbatasan
Ini merupakan retrospektif daripada calon studi sehingga sulit untuk mendapatkan
yang baik sosio-demografis infor- informasi. Prediksi hasil klinis seperti Interna-
Indeks prognostik nasional tidak lengkap. Laktat dehidrogenase tidak rutin
dilakukan pada pasien.

Hasil
Latar Belakang Karakteristik
Usia rata-rata adalah 9,0 (rentang antar kuartil-6-15,5) tahun. Termuda pasien
adalah 2 tahun dan tertua 64 tahun. Usia rata-rata adalah 15,7 (SD 15,5) tahun.
Seperti yang diharapkan, 79,8% dari pasien limfoma Burkitt, diikuti oleh diffuse
besar limfoma sel B (16,0%), man- TLE sel limfoma (3,4%), dan precursor B
lymphoblastic limfoma (0,8%) (Tabel 2 )

Burkitt limfoma hidup

Para pasien laki-laki memiliki hidup rata-rata 3,3 (CI 95% 0,81-5,8) bulan
sedangkan betina memiliki hidup berarti 17,7 (95%) bulan CI 8,3-27,0, p =
0,028. The CD30 pasien negatif memiliki hidup rata-rata sebesar 6,8 (95% CI 0,0 -
14,7) sedangkan positif CD30 memiliki hidup rata-rata
,3 (95% CI 7,3 - 17,3), p = 0,0169. Hanya kemoterapi tetap signifikan setelah
menerima Analisis regresi Cox (Tabel 3 )

Limfoma Burkitt hidup oleh EBER status

Secara keseluruhan 97,3% telah EBER positif. Survival informasi tersedia pada 25
pasien yang hasilnya EBER tersedia. Dari jumlah tersebut, 24 (96%) adalah EBER
positif. Itu berarti hidup untuk 24 adalah 9,28 (95% CI 3,27-15,29 bulan). Namun
hanya ada satu EBER negatif pasien yang bertahan hidup adalah 1,2 bulan.

Burkitt limfoma: status EBER dan positif CD30

Sebanyak 55 kasus telah baik CD30 dan hasil EBER. Dari 24 CD30 positif, 23
(95,8%) adalah EBER positif. Dari 31 CD30 negatif, 30 (96,8%) adalah EBER
positif. Perbedaannya tidak bermakna secara statistik (p = 0,83); dan karena ini,
hasil EBER tidak mengadakan Analisis regresi Cox.

Diffuse besar sel B lymphoma hidup

Diffuse limfoma sel B besar dengan diaktifkan germinal B pusat sel (GCB) pola
(CD10 + / -, BCL-6 + / -, MUM + / - CD138 + / -) memiliki hidup yang lebih baik
(98,4 bulan; 95% CI 89,5 -107,3) dari yang lain (57,3 bulan; 95% CI 35,5 - 79,0) p
= 0,027 (log rank test) (Gambar 1 )

Tabel 2: Distribusi non Hodgkin limfoma sel B oleh diagnosis dan

imunofenotipe Diagnosa Marker Burkitt Limfoma (Positif%) Diffuse besar
sel limfoma B (Positif%) Prekursor B lymphoblastic Limfoma Limfoma sel
mantel CD1074/79 (93,7)

Diskusi
Tujuan makalah ini adalah untuk mengklasifikasikan sel B non Hodgkin limfoma
di Uganda menggunakan imunohistokimia spidol dan berkorelasi ini dan faktor-
faktor lainnya untuk pasien keluar-datang. Dalam studi saat ini, B sel non Hodgkin
limfoma tampaknya akan mempengaruhi anak muda terutama, dengan usia rata-
rata 9 tahun. Usia rata-rata adalah 15,7 tahun konsisten dengan hasil penelitian
serupa sebelumnya dari Uganda [ 2] , tetapi jauh lebih rendah daripada yang
dilaporkan dari Kenya oleh Cool dan
Bitter [ 13 ].
Tabel 3: Hasil analisis regresi Cox untuk kelangsungan hidup, Burkitt
limfoma kasus, Uganda
Variabel
Hazard's rasio (95,0% CI)
p value
Diterima kemoterapi