Perlakuan Pendahuluan Secara Kimiawi Ozonolisis Ozon dapat digunakan untuk mendegradasi lignin dan hemiselulose pada kebanyakan

n bahan-bahan biomassa seperti residu hasil pertanian, bagase, jerami, batang jagung, potongan kayu, dll. Metode ini meningkatkan kecepatan hidrolisis enzim. Walaupun proses ini mahal, proses sangat efektif menyisihkan lignin dan proses tidak menghasilkan residu beracun. Hidrolisis Asam Hidrolisis Alkali
Metode ini bertujuan mengurangi kandungan lignin dan hemiselulosa dalam biomass, meningkatkan luas permukaan, memberikan tekanan pada air agar dapat menembus lapisan dalam bahan, dan menghancurkan ikatan antara hemiselulosa dan lignin karbohidrat. Senyawa yang sering digunakan untuk pretreatment ini adalah sodium hidroksida dan AFEX. Kondisi proses untuk pretreatment menggunakan sodium hidroksida adalah relative ringan, akan tetapi membutuhkan waktu yang lama. Kondisi yang ringan ini bertujuan untuk mencegah kondensasi pada lignin, sehingga menghasilkan kandungan lignin terlarut yang tinggi. Metode ini cocok digunakan pada biomass dengan kandungan lignin yang rendah seperti rumput-rumputan. Selain itu, degradasi gula menjadi furfural, hidroximetilfurfural dan asam organik lainnya terbatas. Penambahan udara atau oksigen pada campuran reaksi dapat meningkatkan delignifikasi secara besar pada kandungan lignin yang tinggi (Chang & Holtzapple, 2000).