Flavonoid dari tunas dan akar repens Trifolium (putih semanggi) tumbuh dalam ada atau tidak adanya

arbuskula mikoriza Glomus jamur intraradices Putih semanggi (Trifolium repens) tanaman ditanam dengan adanya atau tidak adanyajamur mikoriza Glomus intraradices mikoriza. Flavones, 40,5,6,7,8-pentahydroxy-3-methoxyflavone dan 5,6,7,8tetrahidroksi-3-methoxyflavone, serta dua flavon 3,7-dihidroksi-40-methoxyflavone dan 5,6,7,8-tetrahidroksi-40methoxyflavone pernahdilaporkan sebelumnya pada tanaman, diisolasi. itu dikenal 3,5,6,7,8-pentahydroxy-40-methoxyflavone,20,30,40,50,60pentahydroxy-chalcone, 6-hydroxykaempferol,40,5,6,7,8-pentahydroxyflavone dan 3,40-dimethoxykaempferol juga diperoleh. Analisis ekstrak yang diperoleh dariakar dan tunas mengungkapkan bahwa komposisi campuran flavonoid bervariasi dengan kondisi pertumbuhan. Quercetin,acacetin dan rhamnetin terakumulasi dalam akar tanaman diinokulasi, sedangkan mereka tidak terdeteksi pada tanaman yang tidakdiinokulasi. 2004 Diterbitkan oleh Elsevier Ltd

Sebagai bagian dari proyek yang berkaitan dengan menentukan peran flavonoid dalam hubungan simbiosis dan parasit antara tanaman dan mikroba (Fracchia et al, 2000., 2003, 2004), kita diisolasi dan dikarakterisasi flavonoid Trifolium repens hadir dalam (putih semanggi). ini tanaman ditumbuhkan baik dengan adanya atau tidak adanya dengan mikoriza arbuskula (AM) jamur Glomus intraradices. Dalam tulisan ini, kami melaporkan isolasi dari tunas non-diinokulasi repens T. dari flavon baru, yaitu, 40,5,6,7,8-pentahydroxy-3-methoxyflavone (Gambar 1, 1a), serta dua flavon dari akarnya yang belum pernah sebelumnya telah diisolasi dari tanaman, yaitu, 3,7-dihidroksi-40-methoxyflavone (Gambar 1, 1d) dan 5,6,7, 8-tetrahidroksi-40-methoxyflavone (Gambar 1, 1e), bersama dengan flavon diketahui, 3,5,6,7,8-pentahydroxy-40-

methoxyflavone (Gambar 1, 1b), 20,30,40,50,60-pentahydroxychalcone (Gambar 2, 1c) dan 3,40,5,6,7-pentahydroxyflavone (6-hydroxykaempferol;. Gambar 1, 1f). Kami juga melaporkan isolasi, dari tunas dari AM dijajah T. repens, dari yang baru flavon, 5,6,7,8-tetrahidroksi-3-methoxyflavone (Gambar 1, 2a) dan dua flavon dikenal 40,5,6,7,8-pentahydroxyflavone (2b) dan 5,7-dihidroksi-3,40-dimethoxyflavone (3,40-dimethoxykaempferol, 2c). dari akar dari AM dijajah T. repens, flavonoid diketahui 3,30,40,5,7-pentahydroxyflavone (quercetin, 2d), 5,7-dihidroksi-40-methoxyflavone (acacetin, 2e) dan 2. Hasil dan diskusi Senyawa 1a (Rf 0:70) diisolasi dari tunas tidak diinokulasi repens T. sebagai padatan berwarna, menunjukkan [M] puncak pada m = z 332 dan pada m = z 332,0530 di EIMS nya dan HREIMS, masing-masing, konsisten dengan molekul rumus C16H12O8 (m = z Calc:. 332,0532) yang kemudian didukung oleh analisis spektrum 13C NMR yang (Tabel 1). Pita serapan IR pada 3500 (luas), 1630, 1602 dan 1492 cm 1, dan besi klorida positif tes menunjukkan bahwa 1a memiliki senyawa hidroksil bebas kelompok. Penyerapan UV maxima dari 1a dalam MeOH di 252 dan 300 nm yang khas turunan flavonoid (Mabry et al, 1970.). Penambahan NaOMe menyebabkan pergeseran dalam penyerapan maxima UV +68 nm dalam perjanjian dengan kehadiran kelompok HO sebagai substituen di C40 (Mabry et al., 1970). Para 1H NMR spektrum 1a menunjukkan khas dua para-coupled doublet dengan J 8:65 Hz pada d 7,76 dan 6,79, masing-masing untuk mengintegrasikan dua proton, yang ditugaskan untuk digabungkan H-20 dan H-60, dan H-30 dan H-50, masing-masing. Sebuah resonansi tiga proton tajam untuk kelompok satu methoxyl pada d 3,79 juga diamati. Para EIMS dari 1a memiliki dua retro-Diels-Alder fragmen fragmen pada m = z 184 (cincin A), 121 (HOC6H4CO, B2) dan 148 (CH3OC @ CC6H4OH, cincin-B) yang konsisten

dengan kehadiran sekelompok methoxyl pada C-3 posisi di ring-A. Senyawa 1d, Rf 0:87, diperoleh dari akar tidak diinokulasi repens T.. Ini memberi sebuah ion molekuler [MTH] pada m = 284 z pada spektrum massa EI dan pada m = z 284,0683 di HREIMS, sesuai dengan rumus molekul C16H12O5 (Calc.: 284,0685). Para EIMS dari 1d ditampilkan dua retro-Diels-Alder fragmentations, pada m = z 135 [CH3OC6H4C @ O] dan pada m = z 136 [HOC6H3OCO], menunjukkan kehadiran kelompok methoxyl di cincin-B. itu tidak adanya sinyal pada m = z 148 [HOC @ CC6H4OCH3] setuju dengan adanya gugus hidroksil pada C-3 di cincin-A (yaitu, EIMS dari 3-hydroxyflavones di The Wiley Registry Data spektral Massa, 1996). positif uji klorida menunjukkan bahwa senyawa 1d harus bebas hidroksil kelompok. Struktur 1d demikian disimpulkan seperti yang ditunjukkan. Senyawa 1e (Rf 0:62) diisolasi dari akar tidak diinokulasi repens T. sebagai padatan berwarna. IR penyerapan band di 3300-3500 (luas), 1625, 1601 dan 1490 cm 1,? Dan uji klorida besi positif menunjukkan bahwa senyawa 1e memiliki gugus hidroksil bebas. Ini memberi [M] puncak pada m = z 316 dan pada m = z 316,0581 di EIMS nya dan HREIMS, masing-masing, konsisten dengan molekul rumus C16H12O7 (Calc.: 316,0583) lebih lanjut sup- porting oleh adanya 16 sinyal karbon 13C nya NMR (Tabel 1). Para 1H NMR spektrum 1e menunjukkan sinyal untuk dua para-coupled doublet dengan J 8:5 Hz pada d 7,85 dan 6,92, masing-masing mengintegrasikan selama dua proton, yang ditugaskan untuk digabungkan H-20 dan H-60, dan H-30 dan H-50, masing-masing. Sebuah oneproton tajam puncak pada d 6,61, ditugaskan untuk H-3, dan lain tajam tiga proton singlet pada d 3,78 ditugaskan ke salah satu methoxyl kelompok C-40 juga diamati. Para EIMS dari 1e memiliki dua retro-Diels-Alder fragmen pada m = z 184

[MTH) CH3OPhC @ CH], 135 [CH3OPhC @ O] dan 132 [CH3OPhC @ CH] konsisten, bersama dengan analisis dengan 1H NMR spektral data, dengan adanya methoxyl kelompok pada posisi C-40 di B cincin. Dengan demikian, dari studi spektral atas struktur senyawa 1e didirikan sebagai 5,6,7,8-tetrahidroksi-40methoxyflavone (Gambar 1). 2a Senyawa (Rf 0:85) diisolasi dari tunas dari diinokulasi repens T. sebagai padatan berwarna. Ini memberikan molekul ion [MTH] pada m = 316 z pada spektrum massa EI dan pada m = z 316.0581 (Calc.: 316,0583) di HREIMS konsisten dengan rumus molekul C16H12O7, yang selanjutnya didukung oleh kehadiran karbon 16 sinyal dalam spektrum 13C NMR (Tabel 1). IR penyerapan band di 3500 (luas), 1629, 1603 dan 1491 1 cm,? dan tes positif klorida besi menunjukkan bahwa 2a senyawa memiliki gugus hidroksil bebas. Para 1H NMR spektrum 2a menunjukkan dua khas multiplet-sinyal antara 7,74-7,71 dan 7,69-7,65 d selama dua aromatik proton, yang sesuai mantan dua aromatik proton, H-20 dan H-60 dan yang terakhir, untuk tiga aromatik proton, H-30, H-40 dan H-50. Sebuah threeproton tajam singlet pada d 3,94 juga ditugaskan untuk methoxyl kelompok di C-30. Para EIMS dari 2a ditampilkan dua retro-Diels-Alder fragmen pada m = z 184 [MTH) PhC? @ COCH3], 132 [PhC @ COCH3] dan 105 [PhC @ O], yang bersama-sama dengan analisis spektroskopi NMR 1H data, menunjukkan adanya kelompok methoxyl pada C-3 pada cincin-A; struktur menyimpulkan ditunjukkan pada Gambar. 1. Struktur senyawa yang dikenal 1b (Ponce et al, 2004, disampaikan.), 1c (Ponce et al., 2004, disampaikan), 1f (Horie et al, 1995;.. Hattori dkk, 1992), 2b (Wagner et al, 1965.), 2c (Zhu et al, 2000;.. Ma et al, 1999), 2d-2f (Agrawal, 1989; Registry dari Wiley Data spektral massa, 1996) didirikan oleh perbandingan

dengan data literatur. Senyawa 1d dan 1e adalah pernah dilaporkan sebelumnya pada tanaman dan hanya sintesis dan karakterisasi parsial 1d sebelumnya telah dilaporkan (1d, Bellini dan Venturella, 1958; Jerzmanowska dan Michalska, 1961; 1e, Miyahara et al, 1993.) sedangkan senyawa 1e hanya disebutkan dalam HKSA studi (Miyahara et al., 1993). Kebanyakan studi fitokimia pada tanaman yang AM host telah dilakukan dengan bahan yang dikumpulkan dari bidang dan mereka dijajah oleh jamur liar AM
penduduk. Studi tentang pengaruh simbiosis AM pada fisiologi tanaman telah difokuskan pada perubahan yang dihasilkan dalam akar tapi tidak dalam tunas. Tidak jelas dari literatur jika jamur AM menginduksi kualitatif dan / atau kuantitatif perubahan komposisi dari flavonoid dalam tanaman. Jadi, ini adalah studi komparatif pertama dari tunas dan akar flavonoid isi tanaman semanggi putih (T. repens) tumbuh dengan dan tanpa jamur mikoriza (G. intraradices). Dari tunas dan akar tanaman tumbuh di bawah kondisi yang terakhir, flavon pernah sebelumnya diisolasi dari tanaman diperoleh (1a, 1d, dan 1e) bersama dengan 1b, 1c dan 1f. Senyawa 1b dan 1c adalah baru-baru ini terisolasi dari Brassica alba (Ponce et al., 2004, diajukan). Peran 1a-1e di pabrik fisiologi dan di pabrik-mikroba interaksi masih belum diketahui. Senyawa 1f sebelumnya terisolasi dari berbagai tanaman bahan (Hattori dkk, 1992;. Wollenweber et al,. 1986, 1998). Untuk yang terbaik dari pengetahuan kita belum ada penelitian tentang pengaruh 1f pada jamur AM telah dilaporkan. Dari tunas dan akar tanaman tumbuh dengan AM jamur, flavonoid 2b-2f terisolasi diketahui senyawa. Sejauh yang kami tahu, belum ada penelitian tentang efek dari 2b, 2c, 2e dan 2f pada jamur AM telah dilaporkan. Quercetin (2d) telah menunjukkan efek positif terhadap perkecambahan atau hifa panjang spora AM berbeda (Poulin et al, 1993.), dan bersama-sama dengan acacetin (2e) dan rhamnetin (2f) telah digambarkan sebagai inhibitor dari eukariotik topoisomerase I (Boege et al., 1996). Acacetin juga menunjukkan aktivitas bakteriostatik (Fawe et al., 1998)

dan rhamnetin antifungic aktivitas (Serra-Bonvehi et al. 1994). Senyawa 2b, yang disebut ponkanetin, sebelumnya terisolasi dari berbagai bahan tanaman (Bellini et al, 1962.; Chaliha et al, 1965.) Dan antineoplastik kegiatannya, sitotoksisitas (Edwards et al, 1979.) Dan Mutagenisitas (Nagao et al, 1981.) Juga telah dijelaskan. Senyawa 2c sebelumnya diisolasi dari daun dan daun eksudat tanaman yang berbeda (Wollenweber dan Doerr, 1995; Valant-Vetschera dan Wollenweber, 1996; Wollenweber et al, 1997;. Stevens et al, 1999) dan antipoliovirus nya. tindakan (Robin et al., 2001), hepatoprotektif dan anti-Helicobacter pylori aktivitas (Banskota et al. 2001) telah dijelaskan. Sebagai kesimpulan, komposisi yang berbeda dari flavonoid yang diekstrak dari tunas dan akar putih semanggi (T. repens) tumbuh dengan dan tanpa AM jamur jelas menunjukkan bahwa metabolisme molekul-molekul sangat dipengaruhi ketika tanaman ini AM terjajah. Data yang disajikan menunjukkan adanya hubungan yang jelas dari AM jamur dengan pengaturan metabolisme flavonoid dalam tunas dan akar putih semanggi dijajah oleh G. intraradices dengan efek sistemik pada tanaman. Namun, apakah perubahan dalam komposisi flavonoid baik yang merupakan gejala atau penyebab penjajahan masih harus diselidiki.

Spektrum UV (Shimadzu UV-1203) dicatat dalam MeOH, sedangkan spektrum IR (Nicolet 510P FT-IR) adalah diperoleh sebagai sebuah film disk yang KBr. 1H NMR (Bruker AM500.500 MHz) dan 13C NMR (Bruker AC-200, 75 MHz) spektrum diperoleh pada DMSO-D6 dengan TMS sebagai internal standar, sedangkan EIMS (Shimadzu QP-5000/Gc17A/DI-50) dan HREIMS (VG-Zab-VSEQ) adalah tercatat sebesar 70 eV (potensial ionisasi) menggunakan inlet langsung sistem. Sampel dari quercetin, crysin, dan rutin adalah dibeli dari Aldrich. Luteolin, kaempferol dan apigenin yang dibeli dari Sigma. Morin adalah diperoleh dari sumber alami. 3.3. Ekstraksi dan isolasi Bahan tanaman yang dikeringkan hancur dan diekstraksi

mendalam dengan EtOH pada suhu kamar selama 4 hari (1,5 l EtOH per setiap gram bahan kering). itu ekstrak etanol yang diperoleh dari tunas dan akar T. repens Mica dan T. repens Mic disaring dan diuapkan sampai kering (sirup, 3 g dari akar dan 15 g dari tunas), kemudian disuspensikan dalam air (150 ml). setiap suspensi berair kemudian diekstraksi berturut-turut dengan pelarut organik (3 50 ml). The gabungan organik fraksi diperoleh untuk setiap pelarut: heksana (defatting), EtOAc dan CH2Cl2 pecahan, diuapkan sampai kering dan residu individual dianalisis dengan KLT. KLT dilakukan pada silika gel 60F254 precoated lembaran aluminium (0,2 mm ketebalan, Merck) dielusi dengan EtOAc "CH2Cl2 " HCO2H (08:12:01). kromatogram divisualisasikan setelah pengeringan (i) oleh sinar UV dan (ii) oleh penyemprotan dengan larutan yang mengandung 6 g vanili dan 3 ml H2SO4 di 197 ml MeOH. Rf nilai untuk TLC analisis sampel otentik menggunakan pelarut di atas sistem adalah: rutin (0), Morin (0,45), luteolin (0,63),
kuersetin (0,67), crysin (0,88), apigenin (0,77), kaempferol (0.83) isorhamnetin (0,88). Komponen dari ekstrak EtOAc (500 mg dari tunas dan 150 mg dari akar) yang dipisahkan oleh kromatografi lapis preparatif pada silika precoated gel 60F254 aluminium lembaran (0,2 mm ketebalan, Merck) (jumlah sampel diterapkan <25 mg; EtOAc "CH2Cl2 " HCO2H 08:12:01 campuran sebagai eluen). setelah pembangunan senyawa tersebut divisualisasikan seperti di atas menggunakan analisis TLC, kemudian pulih dengan memperlakukan setiap bagian dari adsorben mendalam dengan EtOAc, EtOAc "EtOH dan EtOH (3 50 ml), masing-masing. Setelah penguapan fraksi organik digabungkan, senyawa (1a) "(1f), (2a) " (2f), diperoleh (Gambar 1 dan 2).