Uji Aktivitas Daya Hambat Sediaan Kombinasi

Infus Daun Sirih (Piper betle Linn) Dan Daun

Salam (Shyzigium polyantha Wight) Terhadap
Pertumbuhan Staphylococcus Aureus ATCC 25923

In Vitro

Diajukan oleh
Adisti Yuliandini
I1A008069
UNIVERSITAS LAMBUNG MANGKURAT
FAKULTAS KEDOKTERAN
BANJARBARU
April, 2011

Infeksi
S. aureus

Daun Salam
(Shyzygium polyantha
Wight)

Tanaman
Obat
Indonesia
Daun Sirih
(Piper betle
Linn)

Bersifat Antibakteri terhadap

S. aureus

Tujuan umum
penelitian

Mengetahui ada tidaknya

perbedaan aktivitas sediaan
infus tunggal dan kombinasi

 Mengukur zona hambat pertumbuhan S. aureus

setelah diberikan infus daun sirih.
Mengukur zona hambat pertumbuhan S. aureus
setelah diberikan infus daun salam.
Mengukur zona hambat pertumbuhan S. aureus
setelah diberikan kombinasi infus daun sirih dan
daun salam.
Menganalisis perbedaan sediaan tunggal dan
kombinasi infus daun sirih dan daun salam dalam
menghambat pertumbuhan S.aureus

Masyarakat

Pengembangan
Ilmu
Pengetahuan

Wawasan sebagai
alternatif
pengobatan
tradisional untuk
infeksi S. aureus

Informasi ilmiah
mengenai efek
sinergistik daya
antibakteri

Daun Sirih
(Piper betle Linn)
Minyak Atsiri(kavikol),
flavanoid, tanin

Daun Salam

(Shyzigium polyantha Wight)

Minyak Atsiri(kavikol),
flavanoid, tanin

Kavikol: Gabungan gugus fenol dan terpena.

Mekanisme fenol
Mekanisme flavanoid
Sinergisme dalam
mengganggu proses
fungsional bakteri
Kematian bakteri

Staphylococcus
aureus

Kombinasi infus daun sirih dan infus daun salam

dapat meningkatkan efek antibakteri (sinergisme)
tanaman obat terhadap pertumbuhan S. aureus in
vitro dibandingkan dengan sediaan tunggal.

Penelitian Eksperimental

5 Perlakuan daun sirih

5 Perlakuan daun salam

3xPengulangan

25 Perlakuan infus
kombinasi

2 kontrol (+ dan -)

Bahan
Isolat Staphylococcus aureus ATCC 25923 dari
Laboratorium Mikrobiologi Fakultas
Kedokteran Universitas Lambung Mangkurat,
daun sirih, daun salam, media Muller Hinton
(MH), media Brain Heart Infusion (BHI), larutan
standar Mc.Farland, akuades steril, paper disk
kosong dan paper disk antibiotik.

Alat
Ose steril, cawan petri, tabung reaksi
(Pyrex), inkubator (Carbolite Shieffield S
30 2 RR England), labu Erlenmeyer, panci
infus, autoklaf (All America model No 1925
X), lampu bunsen, mikropipet 1000 l (WGermany), kapas lidi steril, meja kerja
laminary flow (Holten tipe Maxisafe 1,2),
neraca analitik (Ohaus), skalpel, pinset
steril, pipet steril, kertas saring, aluminium
foil, dan penggaris.

Variabel
Bebas

konsentrasi infus tunggal dan

kombinasi

Terikat

zona hambat dalam milimeter

(mm)

Pengganggu

faktor lingkungan: suhu dan

kelembaban, kontaminasi bakteri dan
jamur, faktor alat dan bahan penelitian

Obat tradisional.
Sinergistik
Infus

Daya hambat
Zona hambat

Determinasi Tanaman
Pembuatan Infus Tunggal
dan kombinasi
Uji daya Antibakteri Kirby
Bauer

Zona hambat masingmasing kultur

bakteri
ditabulasikan berdasarkan konsentrasi
infus daun sirih dan daun salam
nilai reratanya

 Uji normalitas Kolmogorov-Smirnov

Uji homogenitas Levene
Distribusi tidak normal & homogen

Transformasi Data
Distribusi tidak normal & homogen
- Kruskal-Wallis
- Mann-Whitney

Zona Hambat
Staphylococcus
aureus
Uji KruskalWallis

Uji Mann
Whitney

 Tempat
Laboratorium Mikrobiologi Fakultas
Kedokteran UNLAM
Waktu
November 2010-Agustus 2011

HASIL PENELITIAN

Hasil Penelitian

Rerata Zona Hambat (mm) untuk Sediaan Tunggal dan Kombinasi

Infus Daun Sirih dan kombinasinya terhadap S. aureus ATCC
25923 in vitro

Chart Title
AKUADES, 0
AMPISILIN, 21
Si30Sa70, 18.8
Si30Sa60, 12.9
Si30Sa50, 18.1
Si30Sa40, 22.7
Si30Sa30, 15.56
Si25Sa70, 13.46
Si25Sa60, 16.9
Si25Sa50, 11.9
Si25Sa40, 16.67
Si25Sa30, 17.3
Si20Sa70, 17.76
Si20Sa60, 15.3
Si20Sa50, 16.3
Si20Sa40, 12
Si20Sa30, 15.1
Si15Sa70, 15.67
Si15Sa60, 16.76
Si15Sa50, 15.8
Si15Sa40, 13.13
Si15Sa30, 15.46
Si10Sa70, 12.67
Si10Sa60, 14.76
Si10Sa50, 15.3
Si10Sa40, 14.67
Si10Sa30, 13.13

Sediaan Infus

Si30, 8.37
Si25, 9.47
Si20, 9.56
Si15, 8.65
Si10, 8.67
0

10

15
Zona Hambat (mm)

20

25

Rerata Zona Hambat (mm) untuk Sediaan Tunggal dan Kombinasi

Infus
InfusDaun
DaunSirih
Salam
danterhadap
kombinasinya
S. aureus
terhadap
ATCC S.
25923
aureus
in vitro
ATCC
25923 in vitro

Chart Title
AKUADES, 0
AMPISILIN, 21
Si30Sa70, 18.8
Si30Sa60, 12.9
Si30Sa50, 18.1
Si30Sa40, 22.7
Si30Sa30, 15.56
Si25Sa70, 13.46
Si25Sa60, 16.9
Si25Sa50, 11.9
Si25Sa40, 16.67
Si25Sa30, 17.3
Si20Sa70, 17.76
Si20Sa60, 15.3
Si20Sa50, 16.3
Si20Sa40, 12
Si20Sa30, 15.1
Si15Sa70, 15.67
Si15Sa60, 16.76
Si15Sa50, 15.8
Si15Sa40, 13.13
Si15Sa30, 15.46
Si10Sa70, 12.67
Si10Sa60, 14.76
Si10Sa50, 15.3
Si10Sa40, 14.67
Si10Sa30, 13.13

Sediaan Infus

Sa70, 20.76
Sa60, 15.9
Sa50, 14.53
Sa40, 16.56
Sa30, 13.76
0

10

15
Zona Hambat (mm)

20

25

Analisis Statistik Uji Kruskall Wallis

P < 0,05

Terdapat Perbedaan yang

Bermakna antar Perlakuan

Analistik Statistik Uji Mann Whitney

Si10Sa30
Si10Sa40
Si10Sa50
Si10Sa60
Si10Sa70
Si15Sa30
Si15Sa40
Si15Sa50
Si15Sa60
Si15Sa70
Si20Sa30
Si20Sa40
Si20Sa50
Si20Sa60
Si20Sa70
Si25Sa30
Si25Sa40
Si25Sa50
Si25Sa60
Si25Sa70
Si30Sa30
Si30Sa40
Si30Sa50
Si30Sa60
Si30Sa70
positif
negatif

Si10
0.049
0.049
0.046
0.049
TB(0.127)
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.046)
BB(0.049)
BB(0.049)
TB(0.275)
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.046)
BB(0.049)
BB(0.049)
TB(0.275)
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.046)
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.037)

Si15
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.046)
BB(0.049)
TB(0.077)
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.046)
BB(0.049)
BB(0.049)
TB(0.376)
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.046)
BB(0.049)
BB(0.049)
TB(0.275)
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.046)
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.037)

Si20
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.046)
BB(0.049)
TB(0.275)
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.046)
BB(0.049)
BB(0.049)
TB(0.376)
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.046)
BB(0.049)
BB(0.049)
TB(0.275)
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.046)
TB(0.077)
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.037)

Si25
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.046)
BB(0.049)
TB(0.184)
BB(0.049)
TB(0.127)
BB(0.049)
BB(0.046)
BB(0.049)
BB(0.049)
TB(0.275)
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.046)
BB(0.049)
BB(0.049)
TB(0.275)
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.046)
TB(0.127)
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.037)

Si30
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.046)
BB(0.049)
TB(0.077)
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.046)
BB(0.049)
BB(0.049)
TB(0.275)
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.046)
BB(0.049)
BB(0.049)
TB(0.127)
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.046)
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.037)

positif
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.046)
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.046)
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.049)
TB(0.127)
BB(0.049)
BB(0.046)
TB(0.127)
TB(0.077)
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.049)
TB(0.376)
BB(0.049)
BB(0.046)
BB(0.049)
TB(0.184)
BB(0.037)

negatif
BB(0.037)
BB(0.034)
BB(0.037)
BB(0.037)
BB(0.037)
BB(0.037)
BB(0.037)
BB(0.034)
BB(0.037)
BB(0.037)
BB(0.037)
BB(0.037)
BB(0.037)
BB(0.034)
BB(0.037)
BB(0.037)
BB(0.037)
BB(0.037)
BB(0.037)
BB(0.037)
BB(0.037)
BB(0.037)
BB(0.034)
BB(0.037)
BB(0.037)
BB(0.037)

Si10Sa30
Si10Sa40
Si10Sa50
Si10Sa60
Si10Sa70
Si15Sa30
Si15Sa40
Si15Sa50
Si15Sa60
Si15Sa70
Si20Sa30
Si20Sa40
Si20Sa50
Si20Sa60
Si20Sa70
Si25Sa30
Si25Sa40
Si25Sa50
Si25Sa60
Si25Sa70
Si30Sa30
Si30Sa40
Si30Sa50
Si30Sa60
Si30Sa70
positif
negatif

Sa30
TB(0.513)
TB(0.513)
TB(0.105)
TB(0.513)
TB(0.827)
TB(0.376)
TB(0.827)
TB(0.376)
BB(0.046)
TB(0.127)
TB(0.822)
TB(0.513)
TB(0.376)
TB(0.275)
BB(0.046)
TB(0.275)
TB(0.275)
TB(0.376)
TB(0.127)
TB(0.658)
TB(0.827)
BB(0.049)
BB(0.046)
TB(0.827)
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.037)

Sa40
TB(0.127)
TB(0.513)
TB(0.825)
TB(0.513)
TB(0.275)
TB(0.513)
TB(0.184)
TB(0.658)
TB(0.507)
TB(0.827)
TB(0.275)
TB(0.275)
TB(0.827)
TB(0.658)
TB(0.507)
TB(0.827)
TB(0.827)
TB(0.077)
TB(0.827)
BB(0.049)
TB(0.513)
BB(0.049)
TB(0.369)
TB(0.127)
TB(0.184)
BB(0.049)
BB(0.037)

Sa50
TB(0.376)
TB(0.827)
TB(0.507)
TB(0.827)
TB(0.275)
TB(0.513)
TB(0.275)
TB(0.827)
TB(0.072)
TB(0.376)
TB(0.827)
TB(0.275)
TB(0.827)
TB(0.513)
BB(0.046)
TB(0.376)
TB(0.376)
TB(0.184)
TB(0.127)
TB(0.275)
TB(0.658)
BB(0.049)
BB(0.046)
TB(0.275)
TB(0.127)
BB(0.049)
BB(0.037)

Sa60
TB(0.184)
TB(0.376)
TB(0.507)
TB(0.513)
TB(0.127)
TB(0.827)
TB(0.127)
TB(0.827)
TB(0.825)
TB(0.513)
TB(0.827)
TB(0.127)
TB(0.827)
TB(0.827)
TB(0.178)
TB(0.658)
TB(0.658)
TB(0.127)
TB(0.513)
TB(0.275)
TB(0.658)
BB(0.049)
TB(0.268)
TB(0.127)
TB(0.275)
BB(0.049)
BB(0.037)

Sa70
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.046)
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.049)
TB(0.127)
BB(0.046)
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.049)
TB(0.275)
BB(0.049)
BB(0.046)
TB(0.275)
TB(0.127)
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.049)
TB(0.275)
TB(0.127)
TB(0.121)
BB(0.049)
TB(0.513)
TB(0.827)
BB(0.037)

positif
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.046)
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.046)
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.049)
TB(0.127)
BB(0.049)
BB(0.046)
TB(0.127)
TB(0.077)
BB(0.049)
BB(0.049)
BB(0.049)
TB(0.376)
BB(0.049)
BB(0.046)
BB(0.049)
TB(0.184)
BB(0.037)

negatif
BB(0.037)
BB(0.034)
BB(0.037)
BB(0.037)
BB(0.037)
BB(0.037)
BB(0.037)
BB(0.034)
BB(0.037)
BB(0.037)
BB(0.037)
BB(0.037)
BB(0.037)
BB(0.034)
BB(0.037)
BB(0.037)
BB(0.037)
BB(0.037)
BB(0.037)
BB(0.037)
BB(0.037)
BB(0.037)
BB(0.034)
BB(0.037)
BB(0.037)
BB(0.037)

nilai P
Jika P < 0,05

BB = Berbeda Bermakna

Sediaan kombinasi memiliki daya hambat yang

lebih besar atau lebih kecil secara bermakna
daripada sediaan tunggal dalam menghambat
S.aureus

Lebih baik diberikan dalam sediaan kombinasi,

jika zona hambat kombinasi lebih besar
daripada zona hambat tunggal

nilai P
Jika P > 0,05

TB = Tidak Bermakna

Sediaan kombinasi tidak memiliki daya

hambat yang lebih besar atau lebih kecil
secara bermakna daripada sediaan tunggal
dalam menghambat S.aureus

Lebih baik diberikan dalam sediaan tunggal

Simpulan
Zona hambat hambat infus daun sirih
- terkecil pada konsentrasi 30% = 8,36 mm
- tertinggi pada konsentrasi 20% = 9,6 mm,
Zona hambat infus daun salam
terkecil pada konsentrasi 30% = 13,76 mm
tertinggi pada konsentrasi 70% = 20,76 mm,
Zona hambat kombinasi
terkecil pada konsentrasi daun sirih 25% dan daun salam 50%
=11,9 mm
tertinggi pada konsentrasi kombinasi daun sirih 30% dan daun
salam 40% = 22,7 mm,

Simpulan
terdapat perbedaan yang bermakna antara
sediaan tunggal infus daun sirih dan sediaan
kombinasi infus daun sirih dengan daun salam
(p=0,000) juga terdapat perbedaan yang
bermakna antara sediaan tunggal infus daun
salam dan sediaan kombinasi infus daun sirih
dengan daun salam (p=0,001).

Penutup(Saran)
mengetahui mekanisme dan potensi
kombinasi infus daun sirih dan daun salam
antibakteri terhadap S. aureus

Dilakukan penelitian lanjutan menemukan

zat aktif yang diduga memiliki sifat antibakteri
mencegah interaksi zat lain.

Terima Kasih

Prosedur Penelitian
1. Tahap Pembuatan infus
a. Infus daun sirih: 30 gram daun
sirihdiirisdimasukkan ke dalam 100ml
akuades diperoleh konsentrasi 30% b/v
(berat/volume)
b. Infus daun Salam: 70 gram daun
Salamdiirisdimasukkan ke dalam 100ml
akuades diperoleh konsentrasi 70% b/v
(berat/volume)

Prosedur Penelitian
Bahan tanaman obat dan akuades dimasukkan ke
dalam panci infus.
Dibuat sediaan tunggal infus Daun Sirih dibuat
pengenceran 10%,15%, 20%, dan 25%.
Dibuat sediaan tunggal infus Daun Salam dibuat
pengenceran 30%, 40%, 50%, 60%, 70%
c. Infus kombinasi: diambil 1 ml dari masing-masing
infus daun sirih dan daun salam campur ke
tabung reaksi

Aturan kombinasi :
Infus daun sirih 10% dikombinasikan dengan infus
daun salam (10%-30%, 10%-40%, 10%-50%, 10%60%, 10%-70%)
Infus daun sirih 15% dikombinasikan dengan infus
daun salam (15%-30%, 15%-40%, 15%-50%, 15%60%, 15%-70%)
Infus daun sirih 20% dikombinasikan dengan infus
daun salam (20%-30%, 20%-40%, 20%-50%, 20%60%, 20%-70%)

 Infus daun sirih 25% dikombinasikan dengan infus

daun salam (25%-30%, 25%-40%, 25%-50%, 25%60%, 25%-70%)
Infus daun sirih 30% dikombinasikan dengan infus
daun salam (30%-30%, 30%-40%, 30%-50%, 30%60%, 30%-70%)

Prosedur Penelitian
2. Uji daya antibakteri metode Kirby Bauer
Diambil beberapa koloni bakteri dari pertumbuhan 24 jam
pada agar
disuspensikan ke dalam 0,5 ml BHI cair
diinkubasikan 5-8 jam pada suhu 370C
suspensi tersebut ditambah aquadest steril hingga
kekeruhan tertentu sesuai standar konsentrasi kuman 108
CFU per ml.
kapas lidi steril dicelupkan ke dalam suspensi bakteri lalu
ditekan pada dinding tabung hingga kapasnya tidak terlalu
basah
kemudian dioleskan pada permukaan media agar hingga
rata.

2. Pembuatan Paper disk

Paper disk kosong dimasukkan ke dalam
konsentrasi infus tunggal dan kombinasi
direndam selama 3 jam paper disk diletakkan
diatas media agar yang telah ditanam S.aureus

Hasil data

non parametrik

parametrik
transformasi data

Kruskal-Wallis

Uji F
- hipotesis komparatif
- variabel numerik
- tidak berpasangan
- > dari 2 kelompok