9/1/2015

MikrobiologiPraktikBlogArchiveMostProbableNumber(MPN)/AngkaPalingMungkin(APM)

MikrobiologiPraktik
SITUSPEMBELAJARANPERHITUNGANMIKROORGANISME
MostProbableNumber(MPN)/AngkaPalingMungkin(APM)
January26,2014Postedbyindrapradhika
1.SejarahperkembanganMPN
2.PrinsipmetodeMPN
3.CarakerjametodeMPN
3.1.Ujipendugaan
3.2.UjipenegasanuntukColiform
3.3.UjipenegasanuntukFecalColiform
3.4.UjipelengkapuntukE.coli
4.PemilihanjumlahseritabungMPN
5.PeluangdalammetodeMPN
6.Persyaratanpemilihankombinasitabungpositifdanpelaporannya
7.BatasbatasperhitungannilaiMPN
8.MenghitungMPNtanpatabel
9.AplikasilainMPNdalamperhitunganbakteri
10.PerhitunganMPNsecaraotomatis
11.HubunganMPNdanCFU
11.1.PerbandinganantaraMPNdanCFU
11.2.PerbedaanantaraMPNdanCFU
11.3.PengkonversiansatuanMPNkeCFU
12.KesalahanumumMPN
12.1.Kombinasiseritabungdiluartabel
12.2.Tabungnegatifpalsudanpositifpalsu
13.TabelMPN
Referensi
BabinimembahassecaradalambagaimanametodeMPN/APMtersebutbekerjasehinggadapatmenghitungmikroorganismedaridatapositifatau
negatif tanpa menghitung koloni yang tumbuh. Metode Angka Paling Mungkin (APM) disebut sebagai metode Most Probable Number (MPN)
dalampenamaanselanjutnyatanpamengabaikankaidahpenyerapandalambahasaIndonesia.
1.SejarahperkembanganMPN
Metode MPN muncul sekitar awal abad 20 sehingga dikenal sudah sangat lama di dalam ilmu mikrobiologi. Estimasi akurat dari tabel MPN di
publikasikan oleh Mc Crady pada tahun 1915 kemudian dasar statistik dari metode MPN dikemukakan oleh Halvorson dan Ziegler (1933),
EisenhartdanWilson(1943)danCochran(1950).Padatahun1957Woodwardmenyarankantentangpengabaianhasilpositif(banyaktabungpositif
padapengencerantinggidansebaliknya)yangdapatmeningkatkankesalahanlaboratoriumdalamtabelMPN.KemudianDeMannpadatahun1983
mempublikasikan tentang metode perhitungan tingkat kepercayaan (convidenceinterval) dalam tabel MPN. Sampai sekarang metode MPN telah
menjadisalahsatumetodestandarduntukmenghitungjenisColiform,FecalColiform,Escherichiacoli,danS.aureus.
2.PrinsipmetodeMPN
MPNadalahsuatumetodeperhitunganmikroorganismeberdasarkandatakualitatifhasilpertumbuhanmikroorganismepadamediumcairspesifik
dalam seri tabung untuk memperoleh kisaran data kuantitatif jumlah mikroorganisme tersebut (MPN/ml (g)). MPN merupakan suatu metode uji
pengenceran bertingkat (serial dilution) untuk mengukur konsentrasi mikroorganisme target dengan perkiraan. SNI 012332.1 (2006:7)
mendeskripsikan MPN sebagai metode untuk menghitung jumlah mikroba dengan menggunakan medium cair pada tabung reaksi yang pada
umumnyasetiappengenceranmenggunakan3atau5seritabungdanperhitunganyangdilakukanmerupakantahappendekatansecarastatistik.
Prinsiputamametode ini adalah mengencerkan sampelsampai tingkattertentusehinggadidapatkankonsentrasi mikroorganismeyangpas/sesuai
http://mikrobiologipraktik.com/mostprobablenumbermpnangkapalingmungkinapm/

1/18

9/1/2015

MikrobiologiPraktikBlogArchiveMostProbableNumber(MPN)/AngkaPalingMungkin(APM)

dan jika ditanam dalam tabung menghasilkaan frekensi pertumbuhan tabung positif kadangkadang tetapi tidak selalu. Semakin besar jumlah
sampelyangdimasukkan(semakinrendahpengenceranyangdilakukan)makasemakinseringtabungpositifyangmuncul.Semakinkeciljumlah
sampelyangdimasukkan(semakintinggipengenceranyangdilakukan)makasemakinjarangtabungpositifyangmuncul.Semuatabungpositif
yang dihasilkan sangat tergantung dengan probabilitas sel yang terambil oleh pipet saat memasukkannya ke dalam media. Oleh karena itu,
homogenisasisangatmempengaruhimetodeini.Kombinasikemunculanpositif(ya)ataunegatif(tidak)inimenggambarkanperkiraankonsentrasi
mikroorganisme pada sampel sebelum diencerkan. Perubahan dari data positif atau negatif sampai menghasilkan angka dilakukan dengan proses
perhitunganstatistik.JadinilaiMPNadalahsuatuangkayangmenggambarkanjumlahmikroorganismeyangmemilikikemungkinanpalingtinggi.

Gambar1.Kombinasitabungpositifyangdidapatadalah3tabungpositifdaripengenceran1/10,2tabungpositifdaripengenceran1/100dan1
tabungpositifdaripengenceran1/1000.AngkaMPNyangdihasilkansetelahdicocokkandengantabeladalah150MPN/g.
AsumsiyangditerapkandalammetodeMPNadalah:
Bakteriterdistribusisempurnadalamhomogenatsampel.
Selbakteriterpisahpisahsecaraindividual,tidakdalambentukrantaiataukumpulan(bakteriColiformtermasukE.coliterpisahsempurnatiap
selnyadantidakmembentukrantai).
Mediayangdipilihtelahsesuaiuntukpertumbuhanbakteritargetdalamsuhudanwaktuinkubasitertentusehinggaminimalsatuselhidupmampu
menghasilkantabungpositifselamamasainkubasipadamediatersebut.
Jumlahyangdidapatkanmenggambarkanbakteriyanghidup(viable)saja.Selyangterlukadantidakmampumenghasilkantabungpositiftidak
akanterdeteksi.
Setiapindividutabungmemilikidatayangberdirisendiri(independen).
MetodeMPNdinilaiberdasarkanperkiraanunittumbuh(GrowthUnit/GU)sepertiCFU,bukandariselindividu.MeskipunbegitubaiknilaiCFU
atauMPNdapatmenggambarkanseberapabanyakselindividuyangtersebardalamsampel.FDABAMappendix2(2001)menyatakanbahwajika
dalamMPNmenggunakantargetmikroorganismeyangdalampreparasisampeldanpengencerannyatetapmenunjukkanselyangtidakterpisahdan
berkelompok, maka nilai MPN sebaiknya dapat dinyatakan dalam perkiraan GU (Growth Units) atau CFU (Colony Forming Units). Namun
sebagianbesarmetodeMPNdigunakanuntukmenghitungmikroorganismetargetyangbenarbenarterpisahindividunyasepertiColiformdanE.
coli.
PemilihanmediasangatberpengaruhterhadapmetodeMPNyangdilakukan.Umumnyamediayangdigunakanmengandungbahannutrisikhusus
untukpertumbuhanbakteritertentu.MisalnyadalammendeteksikelompokColiformdapatmenggunakanmediaBrilliantGreenLactose2%Bile
(BGLB) broth. Di dalam media ini mengandung lactose dan garam empedu (bile salt) yang hanya mengizinkan untuk tumbuh. Jika terdapat
ketidaksesuaianjenismediadanbakteriyangdiinginkanmakametodeiniakanmenghitungbukanbakteriyangdituju.UntukmenghitungColiform
padatahappendugaanumumnyamenggunakanLaurylSulphateTryptose(LST)broth,sedangkanuntukmenghitungE.colipadatahapkonfirmasi
diperlukanmediaEC(Escherichiacoli)broth.
USDA/FSIS (2008:1) menyebutkan bahwa nilai MPN sangat berguna untuk menentukan jumlah mikroorganisme dengan konsentrasi rendah
(<100/g).Metodeiniumumnyadipakaiuntukmenganalisasusu,pangan,airatautanahyangdimanapadajenissampeliniterdapatkemungkinan
bahanpartikulatsampelmampumengganggupertumbuhankolonipadaagar.
Beberapa kelebihan metode MPN yang diambil berdasarkan Oblinger dan Korburger (1975:541) adalah (1) Akurasi dapat ditingkatkan dengan
memperbanyak tabung yang digunakan setiap pengencerannya. (2) Ukuran (volume) sampel yang cukup besar (dibanding plate count). (3)
Sensitivitasumumnyacenderunglebihbaikpadakonsentrasimikroorganismeyangsedikitdaripadaplatecount.(4)Recoveryumumnyalebihbaik
karenamenggunakanmediacair,tetapitetaptergantungpartikelsampelyangmungkindapatmengganggu.(5)Jikamediumspesifikyangsesuai
denganpertumbuhanbakteritargetdapatdibuatmakaperkiraanperhitunganMPNdapatdilakukanberdasarkanmediumtersebut.
3.CarakerjametodeMPN
MPNumumnyadilakukantidakhanyasampaimenghasilkantabungtabungpositifsaja,melainkandilanjutkandenganberbagaimacamujiuntuk
mengkonfirmasi tabung positif. Prosedur konfirmasi tersebut bertujuan untuk meyakinkan bahwa data positif tersebut memang ditimbulkan oleh
mikroorganisme target. Meskipun media awal yang dipakai di dalam tabung sudah berfungsi sebagai media selektif. Terdapat tiga tahap dalam
prosedurlengkapmetodeMPNyaituujipenduga(presumptivetest),ujipenegasan(confirmedtest)danujipelengkap(completedtest).Ujipenduga
dilakukanuntukmemperolehkombinasitabungpositifawal,kemudianujipenegasandigunakanuntukmemastikannya.Nilaiakhiryangdiambil
adalahdarihasilujipenegasandanpelengkapsehinggadimungkinkanmengubahkombinasitabungyangdiperolehpadaujipenduga.Umumnya
hanyaujiE.colisajayangsampaitahapujipelengkap.UjiE.coliyangsesuaistandarharusdilakukansampaitahapakhiryangmemerlukanwaktu
berharihari.JikaanalisatidakdilakukansampaiakhirmakabelumdapatdinyatakanpastibahwatabungpositiftersebutmengandungE.coli.
Berikut adalah Metode MPN Coliform, FecalColiform dan E. coli untuk analisa sampel pangan yang diinterpretasikan berdasarkan FDA BAM
Ch.4(2002).
3.1.Ujipenduga
BuatpelarutButterfieldsbufferedphosphatedenganmelarutkan34.0gKH2PO4dalam500mlH2OlaluaturpH7.2dengan1MNaOH.
http://mikrobiologipraktik.com/mostprobablenumbermpnangkapalingmungkinapm/

2/18

9/1/2015

MikrobiologiPraktikBlogArchiveMostProbableNumber(MPN)/AngkaPalingMungkin(APM)

Larutkandenganakuadessampai1L,stokpelarutsimpandalamrefrigerator.Larutkan1,25mldaristokpelarutkedalam1LH2Olalusterilisasi
menggunakanautoklaf.
Cairkansampelbekupadasuhu25Cselama18jamatausuhu45Cselama15menitpadawaterbathdenganagitasi.Timbangsecaraaseptis
sebanyak50g.
Masukkan sampel ke dalam kontainer blender yang telah disterilisasi. Tambahkan 450 ml butterfieldphosphate diluent (dihitung pengenceran
pertama50:450atau1:9).Kemudianhancurkanselama2menit.Volumetotalyangterdapatpadawadahblenderharusmenutupipisaublender.
Jikasampeltersediakurangdari50g(x)makapengenceranpertamanyaadalahx.9ml.
Ambil1mlhomogenatsampel(pengenceran1/10)daripreparasisampellalumasukkanke9mldiluent(pengenceran1/100).Ambil1mldari
tabungpengenceran1/100untukdimasukkanke9mldiluent(pengenceran1/1000).Padasetiaptransfersampelyangdilakukan,tabungdikocok
berayun25kalidenganketinggianayunanpengocokan30cmatauvorteksselama7detik.
Siapkan3seritabungMPNberisimasingmasing10mlLaurylSulphateTryptose(LST)brothdengantabungdurhamdidalamnya(total9tabung
yangdibagimenjadi3seri).
Masukkan1mldaripengenceran1/10ke3tabungpertama,masukkan1mldaripengenceran1/100ke3tabungkedua,danmasukkan1mldari
pengenceran1/1000ke3tabungketiga.
Inkubasisemuatabungpadasuhu350,5 oC selama 242 jam. Amati terbentuknya gas pada tabung durham lalu catat hasilnya. Inkubasi lagi
menjadi483jamtabungyangtidakterbentukgas.
Interpretasihasilpositifjikamediakeruhdanterbentukgas(haruskeduaduanya)padainkubasi242jamatau483jam.Interpretasihasilnegatif
jika tidak terdapat pertumbuhan dan tidak terbentuk gas. Gas yang diproduksi dapat terjebak dalam tabung durham ataupun berbentuk buih
(effervescence)yangtimbulsaatdikocok.
PerkiraankonsentrasiberdasarkantabelyangdidapatadalahnilaidugaanadanyaColiform,FecalColiformatauE.coli.
3.2.UjipenegasanuntukColiform
Siapkantabungberisi10mlBrilliantGreenLactoseBile(BGLB)brothdengantabungdurhamdidalamnya.
MasukkansatuulasaninokulumdaritiaptabungLSTbrothyangmenghasilkanujipositifkedalamtiaptabungBGLBbroth.
Inkubasisemuatabungpadasuhu350,5oCselama483jam.
Interpretasihasilpositifjikamediakeruhdanterbentukgas(haruskeduaduanya).Interpretasihasilnegatifjikatidakterdapatpertumbuhandan
tidakterbentukgas.
TentukanjumlahColiform(MPN/gatauml)denganmenghitungtabungpositifkemudiancocokkandengantabelMPN(tabel10)berdasarkan
dariperhitunganujidugaan.PerkiraankonsentrasiberdasarkantabelyangdidapatadalahnilaipenegasanadanyaColiform.
3.3.UjipenegasanuntukFecalColiformdanE.coli
Siapkanberisimasingmasing10mlECbrothdengantabungdurhamdidalamnya
MasukkansatuulasaninokulumdaritiaptabungLSTbrothyangmenghasilkanujipositifkedalamtiaptabungECbroth.
Inkubasi semua tabung pada suhu 45,5 oC (Fecal Coliform untuk pangan dilakukan pada 45,50,2 oC, uji air, kerangkerangan 44,50,2 oC)
selama242jam.Amatiterbentuknyagaspadatabungdurhamlalucatathasilnya.Inkubasilagimenjadi482jamtabungyangtidakterbentukgas.
Interpretasihasilpositifjikamediakeruhdanterbentukgas(haruskeduaduanya).Interpretasihasilnegatifjikatidakterdapatpertumbuhandan
tidakterbentukgas.
Tentukan jumlah Fecal Coliform (MPN/g atau ml) dengan menghitung tabung positif kemudian cocokkan dengan tabel MPN (tabel 10)
berdasarkandariperhitunganujidugaan.PerkiraankonsentrasiyangdidapatberdasarkantabeladalahnilaipenegasanadanyaFecalColiformdanE.
coli.UntukmengetahuiapakahpadatabungECbrothadalahFecalColiformatauE.colimakadilanjutkanujipenegasanuntukE.coli.
3.4.UjipelengkapuntukE.coli
TabungpositifyangmengandunggasdariECbrothdikocokkemudianinokulasikankedalamcawanLEMBagardaninkubasipada350,5 oC
selama1824jam.
InterpretasikansebagaidugaanE.colijikamemilikiciricirikolonidatar,berwarnahitamditengahkolonidenganatautanpawarnakilatlogam
(metallic sheen). Inokulasikan sampai 5 koloni tersangka ke PCA dan inkubasi pada 350,5 oC selama 1824 jam untuk kultur uji penegasan
selanjutnya.
SatudarilimakoloniyangteridentifikasipositifE.colicukupuntukmenyatakanbahwatabungECbrothtersebutterkonfirmasipositifE.coli.
Ujikulturdugaandenganujipewarnaangramdanmorfologisel.Semuakulturyangmencirikangramnegatifdanselberbentukbatangpendek
selanjutnyadiujidengantahapselanjutnya.InokulasikankembalikulturdugaantersebutkemediaLSTlaluinkubasipada350,5 oCselama482
jamuntukmengkonfirmasiulangterbentuknyagas.KemudiankultursangkaanyangsamadilakukanujiIMViC.
UjiIMViC(ujiproduksiindole,ujiMethylRed,ujiVogesProskauer,ujipenggunaanCitrate).
oUjiproduksiindoleujiiniakanmembedakanbakteriyangmampuatautidakmampumemproduksiindoledariTryptone.
Inokulasikan kultur sangkaan ke Tryptone broth lalu inkubasi pada 350,5 oC selama 242 jam. Tambahkan 0,20,3 ml reagen Kovacs. Jika
http://mikrobiologipraktik.com/mostprobablenumbermpnangkapalingmungkinapm/

3/18

9/1/2015

MikrobiologiPraktikBlogArchiveMostProbableNumber(MPN)/AngkaPalingMungkin(APM)

terbentuk cincin merah pada bagian atas tabung maka bakteri dapat memproduksi indol (indol positif) dan bila terbentuk cincin kuning maka
disimpulkansebagaiindolnegatif.JikakulturdugaanadalahE.colimakaseharusnyamenunjukkanhasilpositifdanselberbentukbatangpendek.
oUjiVogesProskauerujiinidapatmembedakanbakteriyangmampumemproduksiacetylmethylcarbinolatautidak.Senyawatersebutdideteksi
denganpenambahanpotassiumhydroxideyangakanmembentukdiacetylyangbereaksidenganpeptonemenghasilkanwarnamerah.
Inokulasikankultur sangkaan ke MRVP broth lalu inkubasi pada350,5 oC selama 482 jam. Setelah waktu 24 jam pindahkan 1 ml ke dalam
tabungkosong(13100mm)lalutambahkan0,6mllarutanlarutannaphtholdan0.2ml40%KOH.Tambahkanbeberapakristalcreatine.Kocok
kemudianbiarkanselama2jam.UjiVPdinyatakanpositifbilawarnaberubahmenjadimerah.JikakulturdugaanadalahE.colimakaseharusnya
menunjukkanhasiltidakadaperubahanwarna/negatif.
oUjiMethylRedujiiniakanmembedakanbakteriyangmampumemproduksiasamdariglukosadanMethylRedsebagaiindikatorpenurunanpH.
Inkubasi kembali tabung MRVP pada 350,5 oC selama 482 jam. Tambahkan 5 tetes larutan Methyl Red ke dalam tabung MRVP broth.
Terbentuknyawarnamerahmenandakanhasilujipositif,sedangkangberwarnakuningmenunjukkanhasilnegatif.JikakulturdugaanadalahE.coli
makaseharusnyamenunjukkanhasilpositif.
oUjipenggunaanCitrateujiiniakanmembedakanbakteriyangmampumenggunakanCitratesebagaisumbernutrisinya.
Inokulasikan kultur sangkaan ke medium Kosers Citrate broth lalu inkubasi pada 350,5 oC selama 96 jam. Reaksi positif jika terdapat
pertumbuhanmediayangberwarnahijauberubahmenjadibiru,reaksinegatifjikatidakadapertumbuhandanmediatetaphijau.Jikakulturdugaan
adalahE.colimakaseharusnyamenunjukkanhasiltidakadaperubahanwarna/negatif.
InterpretasikanhasilujiIMViCdengantabelberikut.
Kriteria
Morfologidangram

Biotipe1
Batangpendektidak
berspora
Sifatgram
Gramnegatiif
GaspadatabungLST +
Ujiindole
+
UjiMR
+
UjiVP

UjiCitrate

Biotipe2
Batangpendektidak
berspora
Gramnegatif
+

Tabel1.KarakteristikE.colipadaujimorfologisel,gram,produksigasdanIMViCuntukbiotipe1dan2.
Hasil yang mencirikan biotipe 1 dan biotipe 2 disimpulkan sebagai E.coli (positif). Tentukan jumlah E. coli (MPN/g atau ml) berdasarkan
tabungECpositifyangterkonfirmasidariujipenegasanberdasarkantabelMPN(tabel10).
UjiIMViCjugadapatdilakukanmenggunakantestkitsepertiAPI20E.
UjiMPNuntukColiformdanE.coliselengkapnyadapatmengaculangsungkeBAMdenganalamat:
(http://www.fda.gov/Food/FoodScienceResearch/LaboratoryMethods/ucm064948.htm)
4.PemilihanjumlahseritabungMPN
Telah diketahui bahwa MPN memiliki beberapa pilihan cara dalam perhitungannya berdasarkan jumlah tabung setiap serinya sesuai tabel yang
tersedia yaitu 3, 5, 8 dan 10 seri tabung. Inti dari metode MPN adalah mendapatkan tingkat pengenceran yang kadangkadang tapi tidak selalu
mengandungmikroorganismehidup.AlasaninilahyangsangatmempengaruhipemilihanjumlahseritabungpadametodeMPNtersebut.Menurut
ISO7218(2007:45)pemilihankonfigurasiseritabunginijugadipengaruhiolehjumlahmikroorganismeyangdiperkiraan,persyaratanperaturan
yangberlaku,presisiyangdibutuhkandanpertimbanganpraktiklainnya.
SistemmetodeMPNyangpalingbanyakdigunakanadalahSymmetricdilutionsystemyaitumetodeMPNyangmenggunakanbanyaktabungsecara
paralel setiap pengencerannya. Semakin banyak jumah tabung yang digunakan setiap serinya maka semakin presisi nilai yang dihasilkan.
Disarankanuntukmenggunakan5ataulebihtabungsetiapserinyajikamenginginkanpresisiyanglebihbaik(ISO7218,2007:45).FDABAMCh.4
(2002)menyatakanbahwa3seritabungumumnyadigunakanuntuksampelpangan,5seritabunguntuksampelairdankerang,sedangkan10seri
tabungdipakaiuntukmengujiairdalamkemasan(bottledwater) atau sampel lain yang diperkirakan jarang terkontaminasi (mengandung sedikit
mikroorganisme).
Untukpengujianairdalamkemasan(bottledwater)digunakanmetode10tabung.Diambil100mlsampelairdaninokulasikanmasingmasing10
mlsampelyangtidakdiencerkankedalam10tabung2xLST(doublestrength)dantiaptabungberisi10mlmedia.Tabungdiinkubasipada35C.
selama242jam.Jikahasilnegatifmakatabungdiinkubasilagiselama24jam.Semuatabungpositifdiujidengantahapkonfirmasiyaitudengan
menanamkannya pada BGLB menggunakan jarum inokulasi. Kemudian tabung diinkubasi pada 35C. selama 482 jam. Hasil MPN diketahui
menggunakantabelMPN10tabung(tabel14)(FDABAMCh.4,2002).
UNEP/WHO(1996:7)menyarankanjumlahsampelyangdiinokulasikandanjumlahseritabungyangdipakaiuntukanalisaberbagaijenissampel
airpadatabelberikut.

0,1
ml

0,01
ml

Jenissampel

50ml 10ml 1ml

Airminumolahan(treateddinkingwater)
Airminumolahansebagian(partiallytreateddinking
water)
Airyangdimungkinkanterjadinyakontaklangsung
(Recreationalwater)
Sumberairyangdilindungi(Protectedsourcewater)

http://mikrobiologipraktik.com/mostprobablenumbermpnangkapalingmungkinapm/

4/18

9/1/2015

MikrobiologiPraktikBlogArchiveMostProbableNumber(MPN)/AngkaPalingMungkin(APM)

Airpermukaan(Surfacewater)

Tabel2.TabelseritabungdanvolumesampelyangdigunakanuntukanalisaMPNberbagaijenissampelair(UNEP/WHO,1996:7)
MenurutUSDA/FSIS(2008:3)untukmengantisipasijikajumlahmikroorganismedalamsampel>10GrowthUnit/g(ml)makadisarankanmenanam
sampel10mlpada3seritabung,1mlpada3seritabunglaluselanjutnyadilakukanpengenceransampai1/104dantiappengenceranditanam1ml
pada3seritabung.

Gambar2.SkemapenanamanmetodeMPNyangdisarankanolehUSDA/FSIS(2008:3).Jikamengikutipetunjukinimakakemungkinan
memperolehtabungpositifyangkadangkadangtapitidakselalusemakinbesar.

BanyakmetodelainyangdapatdiacuuntukanalisaMPNColiformdanatauE.coli.Umumnyaterdiridaribeberapatahappengujian.Berikuttabel
perbandinganmetodeanalisaMPN.
Referensimetode
Uji
Matriks

Inokulasidanjumlahseritabung

AOACOM
966.24
Coliformdan
Coliform
E.coli
E.coli
Pangandanpakan Pangandanpakan Pangan
Padat:
Padat:
ISO4831:2006

ISO7251:2005

33seritabung:

33seritabung:

APHA,AWWA,
WEF9221
Coliformdan
E.coli
Air
Airminum:

110seritabung:
10mldari1/10
10mldari1/10
@10ml
33seritabung:
pada3seritabung pada3seritabung
15seritabung:
DS
DS
1mldari1/10
@20ml
pada3seritabung
1mldari1/10
1mldari1/10
pada3seritabung pada3seritabung 1mldari1/100 11seribotol:@
100ml
SS
SS
pada3seritabung
Bukanairminum
1mldari1/100
1mldari1/100
1mldari1/1000
pada3seritabung pada3seritabung pada3seritabung :
SS
SS
Sampel
diencerkan
Cair:
Cair:
terlebihdahulu.
Dari1,1/10,1/100 Dari1,1/10,1/100
LST(DS)
30/37oC242
jam

UjipendugaColiformdanE.coli

LST(SS)
30/37oC
24+242jam

LST(DS+SS)
37oC24+242
jam

LST(DS)
LST350,5oC 350,5oC
24+242jam
(242)+(243)
jam
BGLB350,5oC
483jam
atau

UjipenegasanColiform

BGLB30/37oC
()
24+242jam

BGLB350,5oC LESEndoAgar
482jam
McConkey
Pewarnaangram
LST

http://mikrobiologipraktik.com/mostprobablenumbermpnangkapalingmungkinapm/

5/18

9/1/2015

MikrobiologiPraktikBlogArchiveMostProbableNumber(MPN)/AngkaPalingMungkin(APM)

UjipenegasanFecalColiform

()

UjipelengkapE.coli

()

ECbroth
ECbroth44oC
45,50,02oC
24+242jam
482jam
Pewarnaan
Gram

Ujiindol:
peptonewater
44oC482jam

ECbroth
45,50,2oC242
jam

ECMUG
o
PenanamanLST 45,50,2 C242
jam
Ujiindol
atau
Ujimethylred
UjiGAD
(glutamate
UjiVoges
decarboxylase)
Proskauer
Ujipenggunaan UjiIndol
citrate

TabelMPN10
tabungdengan
TabelMPN3seri TabelMPN3seri
TabelMPN3seri inokulum10ml
tabungdengan
tabungdengan
tabungdengan
inokulum0,1g, inokulum0,1g,
inokulum0,1g, TabelMPN5
0,01g,dan0,001 0,01g,dan0,001
0,01g,dan0,001 tabungdengan
g.atau1g,0,1g g.atau1g,0,1g
inokulum20ml
g.
dan0,01g.
dan0,01g.
InterpretasiP/A.

Tabelyangdigunakan

Catatan:
SS:singlestrength
DS:doublestrength
P/A:presence/absence
Tabel3.TabelperbandinganmetodeMPNuntukColiformdanatauE.coliberdasarkanbeberapastandardinternasional(ISO4831(2006),ISO7251
(2005),AOACOM966.24(2005)danAPHA,AWWA,WEF9221(2006)).
Jika pengujian Coliform dan E.coli dilakukan sesuai standar baku maka memang diperlukan tahap konfirmasi yang bertingkat dan seringkali
membutuhkan waktu yang panjang. akir et al. (2002:1049) membuktikan bahwa tidak perlunya dilakukan beberapa uji konfirmasi saat
perhitunganColiformdanE.coli.KonfirmasiyangdapatdiabaikanadalahujipadaBGLBuntukmengkonfirmasiColiformsetelahujiLSTdanuji
indoluntukmengkonfirmasiE.colisetelahujiMUG.Ujikonfirmasiinitidakmemberikandampakyangsignifikanterhadaphasilakhirhitungan.
5.PeluangdalammetodeMPN
Brown(2001:224)memberipermisalanpembacaantabungpositifuntukkombinasi310.KombinasiinimenghasilkanindeksMPNsebesar4,3.
Angkainimenunjukkansampelmemilikiperkiraan4,3organismepergramdengan95%kemungkinankeberadaannyadenganrentang0,9sampai
18,1organismedenganmenggunakantabelMPN3seri.Angka4,3hanyalahnilaikemungkinansecarastatistik.

Gambar3.BagandistribusinormalsalahsatunilaiMPN.
FDABAMappendiks2(2001)memberikaninformasibahwahasildarimetodeMPNmemilikiderajatkepercayaankarenaprosesperhitungannya
merupakan hasil dari peluang. Arti dari 95% confidence intervals dalam tabel MPN adalah kemungkinan paling tidak 95% rentang derajat
kepercayaan dari hasil akhir adalah sesuai dengan konsentrasi yang sebenarnya. Di dalam tabel MPN terdapat kolom derajat kepercayaan
(confidenceinterval)95%denganbatasbawah(lowerlimit)danbatasatas(upperlimit).Angkainimenunjukkanbatasderajatkepercayaantersebut.
NilaiindeksMPNdanderajatkepercayaandalamtabeldinyatakandalamduadigitsignifikan,misalnyanilai400adalahhasilpembulatanantara
395 dan 405. Tidak diberikannya batas nilai MPN untuk semua tabung positif (333) yang ditandai dengan tanda > adalah menggambarkan
konsentrasilebihdarinilaiMPNuntukkombinasipalingtidakadasatutabungnegatifpadapengencerantertinggi(332).Ketidakpastianinijuga
dijumpaipadaindeksMPNuntuksemuakombinasitabungnegatif.
(+)
0,1
5

(+)
0,01
3

(+)
0,001
0

MPN/ml
79

Conf.limit
Batasbawah
22

Conf.limit
Batasatas
220

5
5
5
5

3
3
3
3

1
2
3
4

110
140
180
210

34
52
70
70

250
400
400
400

http://mikrobiologipraktik.com/mostprobablenumbermpnangkapalingmungkinapm/

6/18

9/1/2015

MikrobiologiPraktikBlogArchiveMostProbableNumber(MPN)/AngkaPalingMungkin(APM)

Tabel4.ContohpotongantabelMPN5seritabungdenganinokulum0,1g(ml),0,01g(ml)dan0,001g(ml).
Untukmemahamiperananpeluangdalammendistribusikanselsehinggamenghasilkantabungpositifmakajumlahtabungpositif(531)padatabel
dicoba untuk dirunut dan diilustrasikan kembali dalam proses penanamannya pada gambar berikut (dianggap bahwa nilai MPN/ml sama dengan
sel/ml(GU/ml)).Namunperludiingat,jumlahselyangterambiltidakselalusepertiitu,semuanyaadalahpeluangdanangkayangdidapatadalah
angkayangkemungkinannyapalingbesar.

Gambar4.IlustrasipeluangsaatpenanamandanpengenceranpadametodeMPN.Satutitikmenggambarkansatuselataugrowthunit.
6.Persyaratanpemilihankombinasitabungpositifdanpelaporannya
Seperti metode hitungan cawan, di dalam MPN juga memiliki konsep pemilihan jumlah yang masuk dalam kisaran hitung yaitu berdasarkan
frekuensi kemunculan tabung positif yang sebaiknya kadangkadang tapi tidak selalu. Kombinasi tersebut dipilih dari tiga tingkat pengenceran
tertentuyangdisebuttigatingkatpengenceranyangsignifikan.Syaratumumyangdipakaidalampemilihantabungpositifadalah:
Pilihpengenceranyangmemilikikombinasitabungkategori1,jikatidakadamakapilihkombinasidarikategoriberikutnyayanglebihrendah
berturutturut(2dan3)(tabel9).
Ataudenganketentuan:
Pilihpengenceranterendahyangtidaksemuatabungmenghasilkantabungpositif.
Pilihpengencerantertinggiyangpalingtidakmemilikisatutabungpositif.
Pilihsemuapengencerandiantaranya.
Kalikansetiapseritabungyangdipilihdenganpengenceranyangdiambil.
Misalnya:dariinokulum1,0,1,0,01,0,001dan0,0001menghasilkankombinasitabungpositif54310makadipilih54310bukan54310
ataubukan54310sehinggadidapatnilaiMPN33/g.
1g

0,1g

0,01g

0,001g

0,0001g

Kombinasitabung
NilaiMPN/g
positif
431
33

Tabel5.Tabelcontohpemilihantabungpositifberdasarkansyaratyangberlaku.

Gambar5.Baganpemilihantabunguntukkombinasitabung54310.
Tidaksemuakeadaanmenggambarkankondisisepertidiatas.Dimungkinkanjugamendapatkansemuaseritabungmenghasilkantabungpositifdan
tidaksemuapengenceranmenghasilkantabungpositif.
Berikut contoh penentuan tabung positif pada beberapa kasus tertentu berdasarkan interpretasi peraturan SNI 012332.1 (2006:8) dan ISO 7218
(2007:48).

http://mikrobiologipraktik.com/mostprobablenumbermpnangkapalingmungkinapm/

7/18

9/1/2015

MikrobiologiPraktikBlogArchiveMostProbableNumber(MPN)/AngkaPalingMungkin(APM)

Gambar6.BaganpemilihantabunguntukcontohA.Dipilihkombinasitabung5(1/10)1(1/100)0(1/1000).
Jikaterdapatlebihdarisatuseripengenceranyangmemilikiseluruhnyatabungpositif,makapilihpengencerantertinggiyangmenghasilkanseluruh
tabungpositifdanduapengenceranberikutnya.
ContohA:55100.
Jikapadapengencerantertentumemilikitabungpositifseluruhnyadanpengenceransebelumnyatidakmemilikiseluruhtabungpositif,makadipilih
pengenceranyangmemilikisemuatabungpositifdanduapengenceranberikutnya.
ContohB:45100.Bukandiambil451karenapadapengenceran1/1tidaksemuatabungpositif.
Jikapadatingkatpengenceranyanglebihtinggi(dariduapengenceranberikutnyasetelahpengenceranyangmemilikisemuatabungpositif)masih
menghasilkan tabung positif maka yang dijadikan pengenceran paling tinggi yang diambil adalah tingkat pengenceran tertinggi tersebut dan dua
pengenceransebelumnya.
ContohC:54410.Bukandipilih410karenapada1/101tidakseluruhtabungpositif.Bukandipilih544karenapada1/103masihterdapatsatu
tabungpositif.
Jikapadatingkatpengencerantertentusemuamenghasilkantabungnegatiftetapipengenceranselanjutnyamasihterdapattabungpositif,makayang
dinyatakantabungpositif(daripengenceranselanjutnyatersebut)adalahtingkatpengenceransebelumnya(tabungpositifbergeserkepengenceran
sebelumnya).
ContohD.54401.
Jikapadatingkatpengencerantertinggiyangdilakukanmasihterdapattabungpositif,makapilihpengencerantersebutdanduatingkatpengenceran
sebelumnya.
ContohE.55552.
Jika tingkat pengenceran tertentu menghasilkan tabung positif sedangkan pengenceran sebelumnya tidak, maka pilih dua tingkat pengenceran
sebelumnyadaripengenceranyangmemilikitabungpositiftersebut.
ContohF.00100.
Jikapadapengenceranyanglebihtinggidaripengencerantertinggiyangditentukanmasihmenghasilkantabungpositif,makatambahkantabung
positiftersebutketingkatpengenceransebelumnya(bergesermenambahkanjumlahtabungpositifpengenceransebelumnya).
ContohG.44110dipilihmenjadi442.
Pelaporan MPN/g didapat dari angka indeks MPN yang harus disesuaikan dengan seri tabung dari mana tingkat pengenceran tersebut diambil.
MisalnyapadacontohEangkaindeksMPNuntukkombinasi552(inokulum0,1,0,01dan0,001)adalah540tetapikarenadiambilpengenceran
signifikan0,01,0,001dan0,0001makanilaiharusdikalikan10.BegitupulasebaliknyauntukcontohGyangdiambildaripengenceransignifikan1,
0,1dan0,01makanilai47harusdibagi10menjadi4,7.

0
0
0
1
2
0

Kombinasi
tabungpositif
510
510
441
441
552
001

Angka
indeksMPN
33
33
40
40
540
1,8

Nilai
MPN/g
33
33
40
40
5400
0,18

442

47

4,7

contoh

1g

0,1g

0,01g

0,001g

0,0001g

A
B
C
D
E
F

5
4
5
5
5
0

5
5
4
4
5
0

1
1
4
4
5
1

0
0
1
0
5
0

Tabel6.Tabelcontohpemilihantabungpositifpadabeberapakasusberdasarkansyaratyangberlaku.AngkaindeksMPNdiambildaritabelMPN5
seritabungdenganinokulum0,1g,0,01g,dan0,001g(SNI012332.1,2006:8).
Sedangkancontohpemilihantabungpositifuntuk3seritabungdapatdilihatpadatabelberikut.
contoh 1g

0,1g 0,01g 0,001g 0,0001g

A
B
C
D

3
3
2
3

3
3
2
3

2
3
1
0

1
0
1
0

0
0

Kombinasi
tabungpositif
332
330
110
330

Angka
indeksMPN
110
24
0,74
24

http://mikrobiologipraktik.com/mostprobablenumbermpnangkapalingmungkinapm/

Nilai
MPN/g
110
240
74
24
8/18

9/1/2015

MikrobiologiPraktikBlogArchiveMostProbableNumber(MPN)/AngkaPalingMungkin(APM)

220

2,1

2,1

Tabel7.Tabelcontohpemilihantabungpositifpadabeberapakasusberdasarkansyaratyangberlaku.AngkaindeksMPNdiambildaritabelMPN3
seritabungdenganinokulum1g,0,1g,dan0,01g(ISO7218,2007:49).
7.BatasbatasperhitungannilaiMPN
Batas batas perhitungan MPN ditentukan untuk menghasilkan data yang dapat dipercaya dan presisi. Presisi dari metode MPN dipengaruhi oleh
jumlahtabungparaleltiappengencerandankoefisienpengencerannya.
Batas praktik bawah dan atas dari prosedur MPN adalah jika hanya satu tabung dalam set deteksi (jumlah seri tabung, jumlah tabung,
pengencerannya dll.) adalah positif atau negatif. Kisaran nyata dari 3 x 5 seri tabung adalah 1,8 sampai 1600 partikel / unit volume (dengan
inokulum0,1g,0,01g,dan0,001gtabel11).Padakonsentrasipartikelyangsangatrendahsuatumetodekuantitatifakanmenjadisepertimetode
presence/absenceyangmenghasilkandatayaatautidaksajaISO1348(2011:25).
Batas atas metode MPN dilampaui jika semua tabung dari semua pengenceran, misalnya 333 menghasilkan >1100. Namun ini tidak
menggambarkan batas atas dari metode itu sendiri karena hanya kesalahan tingkat pengenceran yang dilakukan. Pengenceran yang cocok dapat
disesuaikan (digeser). Oleh karena itu tidak ada batas atas yang dapat diatur karena alasan statistik sebab presisi tidak tergantung pada jumlah
partikel (sel) yang dimasukkan ke dalam set deteksi. Hal ini merupakan karakteristik prosedur MPN yaitu presisinya dapat ditingkatkan dengan
mengubahkonfigurasisetdeteksi(ISO13483,2011:20).
8.MenghitungMPNtanpatabel
MetodeyangtelahdijelaskansebelumnyaadalahmetodepenentuannilaiMPNberdasarkantabel.Selainmenggunakantabel,FDABAMapendiks2
(2010)danISO7218(2007:46)menyatakanbahwanilaiMPNdapatdicaridenganrumusberikut(Thomasformula):

MPN/g=(gj)/(tjmj(tjgj)mj)()
gj:jumlahtabungpositifpadapengenceranyangdipilih
tjmj:jumlah(g/ml)darisampeldalamsemuatabungpadapengenceranyangdipilih
(tjgj)mj:jumlah(g/ml)darisampeldalamtabungnegatifpadapengenceranyangdipilih
Contoh1:
Didapatkanhasilkombinasitabung(10/10,10/10,4/10,2/10,0/10)dari10seritabungdenganinkokulum0,1,0,01,dan0,001.
Jikadigunakantabelmakadipilih(10/10,10/10,4/10,2/10,0/10)yaitukombinasi1042=70MPN/g.
Namundalamperhitunganhanyagunakan(10/10,10/10,4/10,2/10,0/10).

Gambar7.Bagantabungpositifdannegatif10seritabunguntukcontoh1.
gj=6
6didapatkandari4tabungpositif+2tabungpositif
tjmj=(10x0,01)+(10x0,001)=0,11
10adalahjumlahseritabung
0,01dan0,001adalahsampelyangdimasukkan(g)
(tjgj)mj=(6x0,01)+(8x0,001)=0,068
6adalahjumlahtabungnegatifpadapengenceran0,01
8adalahjumlahtabungnegatifpadapengenceran0,001
MPN/g=6/(0,068x0,11)
=6/0,086
=70/g

http://mikrobiologipraktik.com/mostprobablenumbermpnangkapalingmungkinapm/

9/18

9/1/2015

MikrobiologiPraktikBlogArchiveMostProbableNumber(MPN)/AngkaPalingMungkin(APM)

Contoh2:
Didapatkanhasilkombinasitabung(5/5,3/5,1/5,0/5)dari5seritabungdenganinkokulum0,1,0,01,dan0,001.
Jikadigunakantabelmakadipilih(5/5,3/5,1/5,0/5)yaitukombinasi531=110/g.
Namundalamperhitunganhanyagunakan(5/5,3/5,1/5,0/5).
DengancarayangsamamakaMPN/g.
=4/(0,024x0,055)1/2
=4/0,0363
=110/g
9.AplikasilainMPNdalamperhitunganbakteri
PrinsipMPNumumnyadikenaldiberbagaimetodestandaradalahsebagaimetodefermentasitabungseribertingkat.Selainyangtelahdisebutkan
diatas konsep MPN juga diterapkan dalam perhitungan bakteri dengan nama Simplate (BioControl Systems). Metode Simplate menggunakan
binarydetectiontechnologyuntukmenghitungmikroorganismeberdasarkanpertumbuhannyapadasumuran(wells)padapermukaancawanplastik
khusus yang telah disediakan. Kisaran perhitungan normal menggunakan 84 sumuran. Sebagian volume sampel (10 ml) yang disebarkan pada
cawan akan mengisi sumuran sedangkan sisa volume sampel dapat disingkirkan di kapas penyerap yang terletak di bagian pinggir cawan.
Pertumbuhan yang terdapat di sumuran yang diindikasikan perubahan warna (tergantung media spesifik yang digunakan) akan menggambarkan
jumlahmikroorganismepadasampel.Hasilyangdiperolehadalahadanyasumurpositifataunegatif.Jumlahangkapositifkemudiandibandingkan
dengantabelsehinggadiperolehnilaiCFU/g(ml)sampel.PadaprinsipnyametodeinitetapmengadopsiperhitungankemungkinandarimetodeMPN
yaitupositifataunegatifnyasetiapunitfermentasi.Peningkatanjumlahunit(sumuran)tersebuttentudapatmempertinggiakurasidanpresisimetode
ini. Data akhir juga bukan dilaporkan sebagai MPN/ml(g) tapi diubah menjadi CFU/ml(g) walaupun dalam praktiknya tidak akan dijumpai
perhitungankolonipadacawan.Penggunaanmetodeinitelahdivalidasi,contohsalahsatunyatedapatdiAOACOM2005.03(AOAC,2005Ch.17,
p.36)DetectionandConfirmedQuantitationofColiformandE.coliinFoods.SimPlateColiformandE.coliColorIndicator.
Selainitu,TEMPO(bioMrieux)jugamenggunakanMPNdalammemperolehhasilperhitungannya.MPNterotomatisasiiniterdiridarivialyang
mengandungmediumpadasebuahkartu.Kartumengandungtigaseri(set)sumuran(wells/vial)yaitukecil,menengahdanbesarmasingmasing16
sumurandansemuaberjumlahtotal48sumuran.Setiapseridiinokulasikansampeldenganperbedaansetiapsetnya1/10,sepertihalnyametode3
seritabung.Artinyametodeinimenggunakanseritabunglebihbanyakyaitu161616yangtentunyadapatmeningkatkanakurasidanpresisihasil
perhitungannya.
10.PerhitunganMPNsecaraotomatis
NilaiMPNjikadihitungsecaramanualakansangatmerepotkan.OlehkarenaitudibangunsuatuperhitunganMPNyangtelahdiprogrampadasuatu
perangkat lunak. Food and Drug Administration (FDA) menyediakan file perhitungan MPN yang dapat diunduh di:
(http://www.fda.gov/Food/FoodScienceResearch/LaboratoryMethods/ucm109656.htm). Beberapa pehitungan otomatis lainnya dengan nama MPN
Calculatorjugadapatditemuidialamat:(http://www.i2workout.com/mcuriale/mpn/).EnvironmentalProtectionAgency(EPA)jugamembangun
software untuk perhitungan MPN (MPN Calculator Version 3.0) dengan mempelajari manual pengoperasian dan instalasinya di alamat :
(http://www.epa.gov/microbes/MPN_User_Manualvs3.pdf)
.
PerhitunganMPNotomatisinitentudapatmeniadakanpenggunaantabeldankombinasitabungyangtidakterdapatpadatabel(kombinasijarang,
misalnya103)jugadapatdiketahuimelaluiperhitunganini.NamunperludiketahuibahwasebagianbesarmetodestandarumumMPN(misalnya,
FDABAM,AOAC,ISO,SNI)sampaisekarangmasihmenggunakantabelMPNdalamtahapprosedurnya.

Gambar8.TampilanperhitunganMPNsecaraotomatisSpreadsheetMPNFDABAM,SpreadsheetMPNCalculator,dansoftwareMPNCalculator
(VB6version).Contohperhitungan3seritabung(inokulum0,1,0,01dan0,001)dengankombinasi321.
http://mikrobiologipraktik.com/mostprobablenumbermpnangkapalingmungkinapm/

10/18

9/1/2015

MikrobiologiPraktikBlogArchiveMostProbableNumber(MPN)/AngkaPalingMungkin(APM)

11.HubunganMPNdanCFU
CFUdanMPNadalahsatuanyangasalnyaperhitungannyaterpisahwalaupunmenggambarkantujuanyangsamayaitumemperkirakanjumlahsel
sebenarnya.Keduasatuaninitidakberhubunganlangsung,yangartinyatidakselaluxCFU/mladalahxMPN/mlwalaupundataantaraCFU/mldan
MPN/mlmenunjukkankorelasipositif.
11.1.PerbandinganantaraMPNdanCFU
Berikutadalahbeberapahasilperbandinganantarametodehitungancawan(spread/pourplatepadamediaagarselektifataumembranfiltrasi)dan
metodefermentasitabungberseri/MPNyangdiambildaribeberapapublikasipenelitiansebelumnya.
Hildebrandt dan Schott (2001:453) melaporkan bahwa metode MPN menghasilkan data positif Listeria spp. dan L.monocytgenes lebih banyak
dibandingkan dengan metode hitungan cawan sehingga dapat disimpulkan bahwa MPN lebih sensitif dibanding CFU dalam uji Listeria. Namun
metode hitungan cawan lebih dipilih digunakan secara rutin karena memiliki produktivitas yang sedikit lebih baik dan variasi hasil lebih kecil.
meskipun begitu metode MPN dapat dipilih untuk studi epidemiologi karena memiliki detection limit (LOD) yang jauh lebih rendah dibanding
hitungancawanyaitusekitar66%daribatasdeteksihitungancawan.
Paulsenetal.(2008:376)menyatakanbahwametodeMPN(terotomatisasi)menghasilkandatarataratalebihrendahdibandingkanhitungancawan
dengan metode yang bersumber dari ISO dan hitungan cawan dengan petrifilm untuk menghitung kelompok Enterobacteiaceae. Jadi dapat
disimpulkanbahwametodehitungancawanlebihbanyakmendeteksiEnterobacteiaceae(lebihsensitif)daripadaMPN.
Cho et al. (2010:846) menyebutkan bahwa hasil perhitungan E.coli dalam menentukan kualitas air menggunakan metode MPN menghasilkan
konsentrasilebihbesardibandinghitungancawan.NamunberbedadenganperhitunganEnterococciyangmenghasilkanmetodeMPNlebihrendah
daripadahitungancawan.
Kodakaetal.(2006:115)telahmembuktikanbahwametodehitungancawandenganpenanamanpadadryrehydratablefilmmedia(CompactDry)
tidak memiliki variasi/perbedaan yang signifikan jika dibandingkan dengan metode MPN yang bersumber dari AOAC untuk menguji bakteri
Coliformpadadagingmentah.
Curialeetal.(1991:635)menyatakanbahwametodepenanamanpadadryrehydratablefilmmempunyaitingkatreprodusibilitasdanrepeatabilitas
yangsamaataulebihbaikjikadibandingkandenganmetodeMPNyangbersumberdariAOACuntukmenghitungColiformdanE.coli.Penelitian
inidilakukanpadaberbagaisampelpanganyangdiujioleh14laboratoriumdalamrangkastudikolaboratifuntukmengadopsimetodeinimenjadi
metoderesmiAOAC.
ProsedurMPNmempunyaitingkatkeberagaman(variable)datalebihbesardibandingkandenganhitungancawanmenggunakanmembranfiltrasi
untukmenganalisajumlahColiformsehinggametodeMPNmenghasilkanjumlahratarataColiformlebihbesardaripadametodehitungancawan.
Keberagaman tersebut tidak ditentukan oleh kesalahan analis (human error) tetapi lebih dipengaruhi oleh dasar perhitungan metode MPN yaitu
probabilitas(GronewolddanWolpert,2010:3327).
Padaanalisaperhitunganbakterirumendidapatkandatarataratajumlahbakterirumen(pemfermentasixylane,starchdanpectin)cenderungsama
antarametodeCFUmaupunMPN.Namunmetodehitungancawanmemberikanvariabelyanglebihkecilyaituantara45kalidarimetodeMPN
sehingganilaiCFUmemberikanpresisidatayanglebihbaik(Kajikawaetal.1990:810).
Wohlsenetal.(2006:350)telahmelakukanperbandinganberbagaimetoderesmiuntukmengevaluasisetiapmetodenya.Metodemetodeyangdiuji
adalahspreaddanpourplate(standardplatecount),filtrasimembran,MPN,danpetrifilmuntukmenghitungE.colidanColiformlain.Daristudi
tersebut dihasilkan metode yang paling baik dan konsisten adalah metode pour plate dan metode petrifilm. Metode lainnya mengindikasikan
tingginyakeberagamandataantarperulangandanrendahnyarecovery.
Beberapa literatur diatas menyebutkan hitungan cawan (CFU) menghasilkan data yang lebih presisi (Kajikawa etal.(1990:810), Wohlsen et al.
(2006:350) dan Gronewold dan Wolpert (2010:3327)). Kemungkinan kurangnya presisi pada MPN ini disebabkan oleh terkumpulnya hasil pada
tabel MPN dengan pembulatan (dua angka signifikan) yang cukup besar dibandingkan perhitungan koloni. Variabilitas data metode MPN yang
lebihbesardapatdiperparahjikakehomogenansampeltidakdiperhatikandenganbaik(seltargetmasihmenggeromboldalampartikelbesarsampel)
atauadanyatabungpositifpalsu.

Gambar9.GrafikdiatasdapatmenjelaskanbahwametodeMPNmemilikikeberagamandatayanglebihbesardanhasilratarataMPNlebihtinggi
dibandingCFUsehinggamenjadikanpresisimetodeMPNlebihrendah.GrafikAadalahdatahasilmetodeMPN(MPN/100ml)yangdibandingkan
dengandatajumlahmikroorganismetargetyangsebenarnyasedangkangrafikBadalahuntukmetodefiltrasimembran(CFU/100ml)(Gronewold
danWolpert,2008:3329).
11.2PerbedaanantaraMPNdanCFU
http://mikrobiologipraktik.com/mostprobablenumbermpnangkapalingmungkinapm/

11/18

9/1/2015

MikrobiologiPraktikBlogArchiveMostProbableNumber(MPN)/AngkaPalingMungkin(APM)

PerbedaanantaraCFUdanMPNdapatdiringkaspadatabelberikut.
Pembeda
Objekyangdihitung
Jenismetode
Metodeyangdilingkupi

MPN
Tabungpositif
Semikuantitatif
MetodeMPN:3seri,5seri,8
seri,atau10seritabung.Metode
MPNterotomatisasi.

Dasarperhitungan

Teoriprobabilitasberdasarkan
positifnegatif.
Presisikurang.

CFU(hitungancawan)
Setiapkoloni
Kuantitatif
Spread/pourplatepada
mediaagar,membran
filtrasi,penanamanpada
dryrehydratablefilm,
spiralplatecount.
Satukoloni
menggambarkansatusel
(unittumbuh).
Lebihpresisi.

Dasarpemilihan
pengenceran
Mediapertumbuhan

Mikroorganismetarget

Frekuensitabungpositifyang
kadangkadangtetapitidak
selalu.
Broth/cairpadatabung.

Kisaranjumlahkoloniyang
memenuhisyaratstatistik
(25250,30300,<150dll.)
Agar/padatpadacawan.

lebihbanyakmembutuhkan
media.

lebihsedikitmembutuhkan
media.

Selbersifatterpisahseperti
Coliform,E.coli,enterococci,
S.aureusdanListeria.

Semuajenis
mikroorganismetergantung
mediaselektifyang
dipakai.

Mikroorganismetargetyang
terlukadapatlebihterrecovery

Penyebabkesalahanatau Bakterinontargetyangmemiliki Kolonitidakterhitungatau

positifpalsu
cirimetabolismeyangsama.
terhitungganda,
antagonisme,kompetisi.
Inokulum
10ml(doublestrength),
1ml(pourplate),
1ml(singlestrength)

0,1ml(spreadplate)
100ml(membranefilter)

Pengaruhwaktuinkubasi Tidakmengubahhasiljika
Kolonidapatterustumbuh
diinkubasimelebihiwaktuyang jikaterlalulamadiinkubasi.
ditentukan.
Tabel8.RingkasanperbedaanMPNdanhitungancawan(CFU).
11.3PengkonversiansatuanMPNkeCFU
Apakah nilai MPN dapat diubah menjadi CFU? Cukup sulit untuk menjawab pertanyaan tersebut karena terbatasnya sumber. Berikut adalah
penjelasanyangdiperolehdaribeberapareferensi.
Choetal.(2010:846)telahmempelajaridanmengevaluasimengenaikorelasimetodeMPN(colilertdanenterolert)danCFU(mEagardanmTEC
agar) untuk analisa E.coli dan Enterococci yang diukur pada setiap musim yang berbeda dengan membuat persamaan regresi linier. Hasil uji
perhitungan kemudian dianalisa dan dikelompokkan berdasarkan musim pengambilan sampel. Bentuk persamaan dasar tersebut adalah
MPNestimates=a+bxCFUestimates,ataubentukpersamaanlainnyayaituMPNestimates=a+CFUbestimatesdimanaadanbadalahkoefisienregresi.
Hasil pengolahan data menunjukkan bahwa MPN dan CFU mempunyai korelasi positif dengan nilai a dan b berbedabeda di setiap musimnya.
Begitu pula dengan nilai r2 masingmasing persamaan di setiap musimnya. Namun studi ini tidak menjelaskan mengenai suatu rumus universal
untukmengubahsatuanMPNkeCFU.
Pada metode AOAC 983.25 (2005:40) untuk uji total Coliform, Fecal Coliform dan E. coli di pangan menggunakan metode filtrasi membran
(Hydrophobic Grid Membrane Filter) disebutkan bahwa hasil akhir jumlah transek membran filter yang ditumbuhi koloni target dapat diubah
menjadiMPNdenganrumusMPN={Nloge[N/(Nx)]},dimanaNadalahjumahtotaltransek(kotak)padamembranfilterdanxadalahjumlah
transek yang terdapat koloni bakteri target (transek positif). Cara ini mengindikasikan bahwa dari sebaran koloni pada transek membran yang
seharusnyadinyatakansebagaiCFU/mldapatdiubahkeMPN/ml.NamunrumusinihanyatelahtervalidasiuntukmetodeHGMFsesuairujukan
referensitersebut.SelainituditemukanjugarumusyangsamadengandiatasdandilengkapitabelpengkonversinyapadaapendiksCuntukmetode
penghitunganColiformmenggunakanmetodeHGMF(MFHPB17)yangditerbitkanbadankesehatandanpangankanada(HealthProductandFood
Branch,Canada).
3M (2004) merilis tabel dan rumus konversi untuk data yang diperoleh menggunakan petrifilm EC plate dalam analisa E.coli dan Coliform.
DisebutkanbahwasatuanMPNdapatdiubahkeCFUatausebaliknyadenganrumus(logCFU)=0,37+0,9x(logMPN).Namunrumusinijuga
tidakdapatmerepresentasikansemuakeadaandanjenissampel,dandiperlukanverifikasilebihlanjutuntukaplikasiyanglebihspesifik.Rumusini
diperolehsaatstudiprekolaboratifAOACdenganmenggunakansampelpangan.Sedangkanmetodepenggunaanpetrifilm(CFU)inisendiritelah
tervalidasiolehAOAC(AOAC,OM991.14)yangdigunakansebagairujukanpengenalanmetodedalamrumustersebut.Namunsamasekalitidak
dicantumkan rumus konversi ini dalam metode resmi AOAC 991.14 yang telah diterbitkan, begitu pula dengan jurnal sumber metode tersebut
(J.AOACvol.74,p.635).Jadirumuskonversidiatastidakvalidjikadigunakanuntuksemuasampeldansemuakondisi.
Jadi disarankan untuk tidak mengubah satuan dari CFU ke MPN jika tidak menemukan metode resmi internasional yang mengatur mengenai
http://mikrobiologipraktik.com/mostprobablenumbermpnangkapalingmungkinapm/

12/18

9/1/2015

MikrobiologiPraktikBlogArchiveMostProbableNumber(MPN)/AngkaPalingMungkin(APM)

perubahanitudengansuaturumusyangtelahtervalidasi.JikamemangantaraCFUdanMPNdapatdiubahdenganhasilyangpasti,makaakandapat
ditemukanrumuspengkonversinyadenganmudahdireferensimetoderesmiinternasional.BaikMPNatauCFUsebaiknyadiperolehsecaraterpisah
sesuai metodenya masingmasing. Seperti analogi menembak dengan busur panah tidak dapat disamakan dan diubah seperti menembak dengan
pistolmengenaitingkatakurasidanpresisinya,karenasetiapcaramemilikikelebihandankekurangannyasendiri.
12.KesalahanumumMPN
12.1.Kombinasiseritabungdiluartabel
Berdasarkan prinsip pengenceran pada MPN maka seharusnya atau sebaiknya jumlah tabung positif pada pengenceran lebih pekat akan semakin
banyak(1/10>1/100>1/1000),misalnya531.Halinidikarenakansetiappengenceraanmengurangijumlahmikroorgansimetargetdanakibatnya
semakin kecil kesempatannya untuk membuat tabung menjadi positif. Namun seringkali hasil yang didapat tidak sesuai dengan logika peluang,
sepertikombinasi534yangmenghasilkannilai210.Bisasajabanyakseltidaksengajaterambildanmemperbanyaktabungpositifdipengenceran
selanjutnyaatauhomogenisasitidakberlangsungsempurna.USDA/FSIS(2008:2)menyarankanuntukmengulangianalisajikadiperolehkombinasi
tabungyangtidakterdapatdalamtabel(misalnyauntuk3seritabung:023,123,213dll.).Diasumsikanbahwahasiltersebutmencurigakan
karenakontaminasiataukesalahanpraktiklainnya.
Dalam tabel MPN dalam metode MPN yang diterbitkan AOAC (AOAC OM 966.24, 2005:Ch.17,p5) mengenai kombinasi tabung seperti ini
diberikan catatan khusus. Misalnya untuk kombinasi 012, 132, 203 dll. Catatan ini menyarankan bahwa terdapat aspek ketidakemungkinan
yangtinggijikamendapatkankombinasiiniyangmengindikasikanbahwanilaiMPNyangdiperolehdapatlebihrendahdibandingkankonsentrasi
sebenarnya.
ISO7218(2007:61)menjabarkantentangpembagiankategorikemungkinannilaiMPNberdasarkankombinasitabungpositifdaritabelMPN.Nilai
MPNyangdiperolehdibagimenjadiempatkategoriyaitukategori1,kategori2,kategori3dankategori0.Kategori1memilikikemungkinanpaling
tinggi untuk diperoleh, berturutturut menurun sampai kategori 0. Disarankan untuk ditentukan terlebih dahulu kategori mana yang dinyatakan
diterima (acceptable), misalnya hanya kategori 1, 1 dan 2 atau 1,2,dan 3. Jika hasil MPN digunakan untuk menentukan keputusan yang lebih
pentingmakasebaiknyadipakaikategori1atau1dan2sajasebagaibataskeberterimaan.Sedangkankategori0dapatdipertimbangkansebagainilai
yangmencurigakan.Tedapatpolamengenaikombinasitabungdanpengelompokankategorinya.SemakinbaikkategorinilaiMPNmakakombinasi
tabungpositifyangterjadiakansemakinlogis(mendekatikenyataan).
12.2.Tabungnegatifpalsudanpositifpalsu
Tabungnegatifpalsumungkinterjadijikamikroorganismetargetyangterdapatpadatabunggagalmenghasilkanindikasiyangdisyaratkanmetode
untukdinyatakansebagaitabungpositif.Beberapasebabyangdapatdiidentifikasidiantaranyaadalah:(1)Terdapatbahanyangdapatmematikan
danmenghambatmikroorganismeatauberinterferensidenganmedia,misalnyaChlorinepadaair.(2)Gagalnyaujipenegasdanpelengkapdalam
mengidentifikasi mikroorganisme terkait karena tidak semua (100%) strain mampu dideteksi metabolismenya dengan prosedur tertentu sehingga
tabung penduga yang semula positif dinyatakan menjadi negatif, misalnya pada metode ISO 7251: 2005 terdapat catatan bahwa strain patogen
E.colitidakmamputumbuhpadasuhu44CsaatdikonfirmasidenganpadaECbroth.(3)Tabungdurhamdilingkupiatautenggelamolehsubstrat
sampel padat dari homogenat sampel sehingga gas tidak mampu terperangkap. Disarankan tetap melihat pembentukan gas dengan menggoyang
tabungsehinggatimbulbuih(effervescence).
Sedangkantabungpositifpalsudapatdisebabkanoleh(1)Terjadinyatabungpositifolehmikroorganismenontarget,misalnyamenurutHussonget
al. (1981:35) beberapa strain Bacillus spp. dan Aeromonas spp. mampu pada membentuk gas pada tahap penduga. Oleh karena itu pellicle
(substansilengketbakterifilm)tidakbolehterambilsaatdiinokulasikanlagipadatahappenegasdanColiformumumnyatidakmembentukpellicle.
(2) Kontaminasi oleh bakteri lain termasuk oleh isolat kontrol uji, sehingga disarankan penanaman isolat kontrol dilakukan setelah analisa. (3)
Kontaminasisilangdaritabungyanglain.Olehkarenaitulebihtepatmenggunakaninoculationsticksekalibuangsaatujipenegasjikapembakaran
jaruminokulumberkalikalidirasakurangmenjaminsterilisasi.(4)Masihterdapatnyaudarapadatabungdurhamkarenakesalahanpreparasimedia.
Jikaterdapatudarapadadurhamdantidaktimbulbuihmakaumumnyaadalahreaksinegatif.
13.TabelMPN
TabelMPNberbagaiseritabungdapatdilihatpadatautanberikut:http://mikrobiologipraktik.com/tabelmpn/

Disusunoleh:IndraPradhika,2014
Referensi:
AOAC (Asociation of Official Analytical Chemistry). 2005. AOAC OM 966.24. Coliform Group and Escherichia coli Microbiological (MPN)
Method.AOACOfficialMethodofAnalysisMicrobiologicalMethodsCh.17:5.
AOAC. 2005. AOAC OM 983.25. Total Coliforms, Fecal Coliforms and E. coli in Foods, Hydrophobic Grid Membrane Filter Method. AOAC
OfficialMethodofAnalysisMicrobiologicalMethodsCh.17:40.
AOAC.2005.AOACOM991.14.ColiformandEscherichiacoliCountinFood,DryRehydratableFilm(PetrifilmTME.coli/ColiformCountPlate
TMandPetrifilmTMColiformCountPlateTM)Methods.AOACOfficialMethodofAnalysisMicrobiologicalMethodsCh.17:32.
AOAC.2005.AOACOM2005.03.DetectionandConfirmedQuantitationofColiformandE.coliinFoods.SimPlateColiformandE.coliColor
Indicator.AOACOfficialMethodofAnalysisMicrobiologicalMethodsCh.17:36.
APHA (American Public Health Association), AWWA (American Water Works Association) dan WEF (Water Environtment Federation). 2006.
StandardMethodforExaminationofWaterandWastewater9221:MultipletubefermentationtechniqueformembersoftheColiformgroup.
Brown, AE, 2001. Benson : Microbiological Application, Laboratory Manual in General Microbiology, Ed ke8. New York: Mc Graw Hill
Companies.
BSN(BadanStandardisasiNasional),2006.SNI012332.12006,Caraujimikrobiologibagian1:penentuanColiformdanEscherichiacoli pada
http://mikrobiologipraktik.com/mostprobablenumbermpnangkapalingmungkinapm/

13/18

9/1/2015

MikrobiologiPraktikBlogArchiveMostProbableNumber(MPN)/AngkaPalingMungkin(APM)

produkperikanan.
akir,I,HBDoan,EBapinar,FKiven,danAKHalkman.2002.TheneedforconfirmationinColiformandE.colienumerationinfood.TurkJ
Vet&AniSci26:10491053.
Cho, KH, Han D, Park Y, Lee SW, Cha SM, Kang JH, dan Kim JH. 2010. Evaluation of the relationship between two different methods for
enumerationfecalindicatorbacteria:colonyformingunitandmostprobablenumber.JEnvSci(China)22(6):846850.
Curiale,MS,TSons,DMcIver,JSMcCallister,BHasley,DRoblee,danTCFox.1991.DryrehydratablefilmforenumerationtotalColiformand
Escherichiacoliinfoods:collaborativestudy.JAOACIntl74(4):635648.
FDA(FoodandDrugAdministration).2001.BacteriologicalAnalyticalManualAppendix2:Mostprobablenumberfromserialdilution.
FDA.2002.BacteriologicalAnalyticalManualChapter4:EnumerationofEscherichiacoliandtheColiformbacteria.
Hildebrandt, G dan W Schott. 2001. Comparison of direct colony count methods and the MPNmethod for quantitative detection of Listeria in
modelandfieldconditions.BerlinerundMnchenertierrztlicheWochenschrift114(1112):45364.
Hussong,D,JMDamar,RMWeiner,danRRColwell.1981.BacteriaassociatedwithfalsepositivemostprobablenumberColiformtestresults
forshellfishandestuaries.ApplEnvironMicrobiol41(1):3545.
ISO(InternationalStandardOrganization).2001.ISO/TR13843:2001.Waterqualityguidanceonvalidationofmicrobiologicalmethods.
ISO.2005.ISO7251:2005.Microbiologyoffoodandanimalfeedingstuffshorizontalmethodsforthedetectionandenumerationofpresumptive
Escherichiacolimostprobablenumbertechniques.
ISO.2006.ISO4831:2006.MicrobiologyoffoodandanimalfeedingstuffshorizontalmethodsforthedetectionandenumerationofColiforms
mostprobablenumbertechniques.
ISO. 2007. ISO 7218:2007(E) Microbiology of food and animal feeding stuffs general requirements and guidance for microbiological
examinations.
Gronewold,ADdanRLWolpert.2008.Modelingtherelationshipbetweenmostprobablenumber(MPN)andcolonyformingunit(CFU)estimates
offecalcoliformconcentration.WaterRes42(13):33273334.
Kajikawa,H,YNagasakidanAAbe.1990.Comparisonbetweencolonycountingmethodandmostprobablenumbermethodinenumerationof
rumenbacteriafermentingspecificsubstrates.Jpn.JournalZootech.Sci61(9):810814.
Kodaka, H, H Teramura, T Nirazuka, S Mizuochi. 2006. Comparison of the compact dry CF with the most probable number method (AOAC
OfficialMethod966.24)forenumerationofColiformbacteriainrawmeats.JAOACIntl89(1):115126.
OblingerJLdanJAKoburger.1975.Understandingandteachingthemostprobablenumbertechnique.JMilkFoodTechnol38(9):540545.
Paulsen, P, C Borgetti, E Schopf, dan FJM Smulders. 2008. Enumeration of Enterobacteriaceae in various foods with a new automated most
probablenumbermethodcomparedwithpetrifilmandinternationalorganizationforstandardizationprocedures.JFoodProt71(2):376.
Sutton,
Scott.
2006.
Counting
Colonies.
Pharmaceutical
http://www.microbiol.org/white.papers/WP.count.colony.htm.[2Oktober2009].

Microbiology

Forum

Newsletter.

12(9).

UNEP(UnitedNationsEnvironmentProgramme)/WHO(WorldHealthOrganization).1996Waterqualitymonitoringapracticalguidetothe
designandimplementationoffreshwaterqualitystudiesandmonitoringprogrammes,Chapter10Microbiologicalanalyses.
USDA(UnitedStatesDepartementofAgriculture)/FSIS(FoodSafetyandInspectionService).2008.Mostprobablenumberprocedureandtables.
Wohlsen, T, J Bates, G Vesey, WA Robinson dan M Katouli. 2006. Evaluation of the methods for enumerating coliform bacteria from water
samplesusingprecisereferencestandards.Jcompilation2006TheSocietyforAppMicrobiol,LettersinAppMicrobiol42:350356.
3M. 2004. 3M petrifilm E. coli count plate results from most probable number (MPN) results conversion table.
http://www.microlabscr.com/resources/MPN+to+PEC+Conversion+Table+Dec03.pdf.[3Januari2013].

Aboutindrapradhika
beginnermicrobiologist
Viewallpostsbyindrapradhika
Tags:Notags
Categories:MostProbableNumber
Youcanleavearesponse,ortrackbackfromyourownsite.

LeaveaReply
Youremailaddresswillnotbepublished.
Name
Email
Website
UjiTuringPublikTerotomatisasiPenuhuntukmembedakanKomputerdanManusia*
http://mikrobiologipraktik.com/mostprobablenumbermpnangkapalingmungkinapm/

14/18

9/1/2015

MikrobiologiPraktikBlogArchiveMostProbableNumber(MPN)/AngkaPalingMungkin(APM)

two

=2

Comment
YoumayusetheseHTMLtagsandattributes:<ahref=""title=""><abbrtitle=""><acronymtitle=""><b><blockquotecite=""><cite>
<code><deldatetime=""><em><i><qcite=""><strike><strong>

PostComment

MesinPencari

UntukPembaca
SitusinididedikasikanuntukmempermudahpendidikandiIndonesiadalambidangilmumikrobiologidanditujukanuntukmahasiswa,analis
danprofesiterkaitlainnya.
Situsinidibangunsecaraprofesionaldanberisimateriyanglengkapdanvalidsehinggadapatmeningkatkankepercayaanpembacaterhadap
kontenyangdisuguhkan.
Jikaterdapatpertanyaan,dapatdiajukandikolomkomentar.
Diharapkanuntukparaahlidapatmemberisaranjikamenemukankesalahanpadawebini.
Semogabermanfaat.
email:pradhikaindra86@gmail.com

DaftarIsiSitus
KataPengantar
TentangPenulis
Sterilisasi
MediaPertumbuhanMikroorganisme
MostProbableNumber(MPN)
TabelMPN

KomentarTerbaru
indrapradhikaonTabelMPN
adeonTabelMPN
puspaonSterilisasi
indrapradhikaonTabelMPN
geoonTabelMPN

survey
ApakahlatarbelakangAnda?
Biologiumum
Bakteriologi
Bioteknologi/Genetika
Farmasi
Pertanian
Peternakan
Teknologipangan
Kedokteran/Kesehatan
kimia
lainnya
Vote

ViewResults
ApakahprofesiAnda?
pelajar
mahasiswasarjana
mahasiswapascasarjana
guru/dosen
peneliti/asistenpeneliti
analis/laboran
QA/QCoperator
http://mikrobiologipraktik.com/mostprobablenumbermpnangkapalingmungkinapm/

15/18

9/1/2015

MikrobiologiPraktikBlogArchiveMostProbableNumber(MPN)/AngkaPalingMungkin(APM)

lainnya
Vote

ViewResults

tautanMetodeStandardMikrobiologi
FDABAMmicrobiologymethods
ISO/TC147/SC4Microbiologicalmethods
ISO/TC34/SC9Microbiology
OfficialMethodsofAnalysisofAOACINTERNATIONAL
StandardMethodsAPHAAWWAWEF

tautansitusbidangilmulain
chemistry.org
sicencebiotech.net

histat

kamimengucapkan:

ataskunjungananda

http://mikrobiologipraktik.com/mostprobablenumbermpnangkapalingmungkinapm/

16/18

9/1/2015

MikrobiologiPraktikBlogArchiveMostProbableNumber(MPN)/AngkaPalingMungkin(APM)

http://mikrobiologipraktik.com/mostprobablenumbermpnangkapalingmungkinapm/

17/18

9/1/2015

MikrobiologiPraktikBlogArchiveMostProbableNumber(MPN)/AngkaPalingMungkin(APM)

MikrobiologiPraktik
ThemebyW3blog
Copyright2015mikrobiologipraktik.com.AllRightsReserved.PremiumWPPlugins

http://mikrobiologipraktik.com/mostprobablenumbermpnangkapalingmungkinapm/

18/18