1

LAPORAN PRAKTIK KERJA INDUSTRI

DI PT ANUGRAH ANALISIS SEMPURNA

Oleh
Muhammad Ariq Alwan Winata
NIS. 11.57.07079

KEMENTERIAN PERINDUSTRIAN REPUBLIK INDONESIA

Pusat Pendidikan dan Pelatihan Industri
Sekolah Menengah Kejuruan SMAK
Bogor
2015

LEMBAR PERSETUJUAN DAN PENGESAHAN

Disetujui dan disahkan oleh:

Disetujui oleh:

Slamet Tri Ariyanto, S.Si.

Nur Zamilah, S.Si.

NIP

NIP 19800919 200312 2 005

Pembimbing 1

Pembimbing 2

Disahkan oleh

Dra. Hadiati Agustine

NIP 19570817 198103 2 002
Kepala Sekolah SMK - SMAK Bogor

KATA PENGANTAR
Puji syukur kehadirat Allah SWT karena atas berkat rahmat-Nya berupa
kekuatan lahir maupun batin serta semangat pada penyusun sehingga dapat
menyelesaikan Laporan Praktik Kerja Industri ini tepat pada waktunya. Penyusun
menyajikan hasil seluruh kegiatan yang telah dilakukan selama masa kegiatan
Praktik Kerja Industri dan juga dilengkapi dengan sejarah singkat dari institusi
terkait.
Laporan yang berjudul Laporan Praktik Kerja Industri, merupakan salah satu
syarat kelulusan pada semester VIII tahun ajaran 2014/2015 Sekolah Menengah
Analis Kimia Bogor. Isi laporan ini meliputi kegiatan penyusun yang dilakukan di
laboratorium kimia PT Anugrah Analisis Sempurna Cimanggis Depok yang
dilaksanakan mulai tanggal 3 November 2014 sampai 28 Februari 2015. Selama
melakukan Praktik Kerja Industri, penyusun mendapatkan banyak sekali
pengalaman kerja. Akan tetapi, laporan ini lebih menekankan pada Analisis
Pengujian Residu Aflatoksin Total pada Kacang Tanah secara Kromatografi
Cair Kinerja Tinggi (KCKT).
Selama penulisan laporan, penulis mendapatkan bantuan dari berbagai
pihak. Atas selesainya laporan ini, penulis mengucapkan terima kasih kepada:
1. Ibu Hadiati Agustine, selaku Kepala Sekolah Menengah Kejuruan-SMAK
Bogor.
2. Ibu Annie Susilowati selaku Manager Puncak PT Anugrah Analisis Sempurna.
3. Ibu Amilia Sri Ghani selaku Wakil Kepala SMK-SMAK Bogor bidang Hubungan
Kerja Industri.
4. Bapak Sonly H. Saragih selaku Manajer Laboratorium PT Anugrah Analisis
Sempurna.
5. Bapak Slamet Tri Ariyanto selaku Penyelia Laboratorium Kimia PT Anugrah
Analisis Sempurna.
6. Ibu Nur Jamilah selaku pembimbing sekolah.
7. Kakak-kakak yang selalu memberikan arahan, masukan, dan ilmu saat di
laboratorium : Tama, Deris, Yuli, Weidha, Ilva, Putri, Hadi, Evita, Runni, Azzam,
Febri, Dita, Nurfaida, Dewi serta semua pihak PT Anugrah Analisis Sempurna
yang tidak bisa disebutkan satu per satu.
8. Staf dan guru SMK-SMAK Bogor.
9. Ayah, ibu, dan seluruh keluarga tercinta yang selalu memberikan dukungan,
bantuan, dan saran dalam segala bentuk, abstrak dan konkrit.

10. Teman-teman seperjuangan di PT Anugrah Analisis Sempurna. yaitu Fadlil,

Kania, dan Fifi
11. Sahabat Karib Farlan, Dhiya, Mutia, Faiz, Dede, Luki, Jenny, Dea, Icha,
Madhan, Yoga, Virgi, Udin.
12. Seluruh pihak yang sudah membantu dalam penyelesaian laporan ini.
Penyusun menyadari bahwa laporan ini masih sangat jauh dari
sempurna. Oleh karena itu, penyusun mengharapkan saran dan kritik yang
membangun dari semua pihak agar lebih baik lagi di masa yang akan datang.
Semoga laporan ini bermanfaat bagi siapapun yang membacanya. Amin.

Depok, Maret 2015

Penyusun,

DAFTAR ISI

KATA PENGANTAR.................................................................................... i
DAFTAR ISI............................................................................................. iii
DAFTAR TABEL........................................................................................ v
DAFTAR GAMBAR................................................................................... vi
BAB I...................................................................................................... 1
PENDAHULUAN....................................................................................... 1
A.

Latar Belakang............................................................................. 1

B.

Tujuan Prakerin............................................................................. 2

C.

Tujuan Penulisan Laporan.............................................................3

BAB II..................................................................................................... 5
INSTITUSI PRAKERIN...............................................................................5
A.

Sejarah Singkat PT AAS Laboratory..............................................5

B.

Gambaran Umum Perusahaan.....................................................5

C.

Visi, Misi dan Strategi...................................................................7

D.

Struktur Organisasi......................................................................7

E.

Disiplin Kerja.............................................................................. 15

F.

Administrasi Laboratorium.........................................................15

G.

Sistem Jaminan Mutu Laboratorium...........................................17

BAB III................................................................................................... 20
KEGIATAN DI LABORATORIUM...............................................................20
A.

Tinjauan Pustaka........................................................................20
1.

Kacang Tanah..........................................................................20

2.

Aflatoksin................................................................................. 23

3.

Sumber Aflatoksin...................................................................24

4.

Macam, Sifat, dan Struktur Aflatoksin.....................................26

5.

Daya Racun Aflatoksin.............................................................28

6.

Kromatograf............................................................................30

B.

Jaminan Mutu Pengujian.............................................................40

1.

Umum (ISO/IEC 17025)............................................................40

2.

Jaminan Mutu dan Pengendalian Mutu Pengujian....................40

C.

Metode Analisis..........................................................................44

1.

Dasar....................................................................................... 44

2.

Tujuan...................................................................................... 44

3.

Alat dan Bahan........................................................................44

4.

Cara Kerja................................................................................45

BAB IV.................................................................................................. 47
PEMBAHASAN....................................................................................... 47
A.

Hasil dan Data Analisis...............................................................47

B.

Pembahasan..............................................................................50

BAB V................................................................................................... 57
KESIMPULAN DAN SARAN.....................................................................57
A.

Kesimpulan................................................................................57

B.

Saran.......................................................................................... 58

DAFTAR PUSTAKA.................................................................................59
LAMPIRAN............................................................................................. 61

DAFTAR TABEL
Tabel 1. Persyaratan Kompetensi Lab Uji sesuai ISO/IEC 17025:2008...........18
Tabel 2. Gizi kacang tanah dalam 100 g......................................................22
Tabel 3. Beberapa sifat fisika aflatoksin......................................................28
Tabel 4. Nilai LD50 Aflatoksin B1, pada beberapa Spesies Hewan...................29
Tabel 5. Persyaratan nilai recovery Berdasarkan AOAC Peer Verified Method
Program................................................................................................. 43
Tabel 6. Hasil Uji Jangkauan Kerja Linear..............................................47
Tabel 7. Data Sampel............................................................................... 48
Tabel 8. Kadar Sampel............................................................................. 48
Tabel 9. Data Kontrol Sampel....................................................................49
Tabel 10. Hasil Koefisen Korelasi Standar Aflatoksin....................................51
Tabel 11. Nilai %RPD pada Kontrol Sampel.................................................52
Tabel 12. Nilai %RPD pada sampel............................................................52
Tabel 13. Nilai %Recovery pada Kontrol Sampel..........................................53
Tabel 14. Batas Toleransi Aflatoksin pada Pangan........................................55
Tabel 15. Komposisi Standar induk............Error! Bookmark not defined.
Tabel 16. Data konsentrasi (ppb) sampel kacang tanah.................................67

DAFTAR GAMBAR
Gambar 1. Logo PT Anugrah Analisis Sempurna............................................6
Gambar 2. Tumbuhan Kacang Tanah Varietas Holle dan Scheffer...................20
Gambar 3. Aspergillus flavus...............................................................25
Gambar 4. Struktur Aflatoksin B1, G1, B2, G2......................................26
Gambar 5. Struktur Bifuran dan Kumarin.............................................27
Gambar 6. Mekanisme Pemisahan pada KCKT......................................33
Gambar 7. Botol Fase Gerak.....................................................................35
Gambar 8. Skema Injeksi menggunakan Katup....................................37
Gambar 9. Kolom pada KCKT................................................................37
Gambar 10. Skema Detektor Fluoresense............................................39
Gambar 11. Skema Kromatograf Cair Kinerja Tinggi...........................39
Gambar 12. Grafik Pengawasan Mutu (Control Chart)..................................42
Gambar 13. Kurva Linearitas AFB1 dan AFB2.......................................47
Gambar 14. Kurva Linearitas AFG1 dan AFG2......................................47

BAB I
PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
Dalam dunia industri, ilmu kimia memiliki peranan penting. Selain sebagai
ilmu terapan di dunia industri, kimia juga digunakan dalam bidang analisis,
sehingga diharapkan dengan penerapan ilmu kimia dalam dunia industri, akan
berdampak langsung pada produk barang maupun jasa yang dapat
meningkatkan kualitas maupun kuantitasnya, karena ilmu kimia berperan
penting di dunia kerja maka tenaga kerja yang berperan khususnya di bidang
kimia sangat dibutuhkan. Terutama tenaga kerja yang memiliki keterampilan,
pengetahuan dan potensi akan mewujudkan harapan dunia industri saat ini.
Sekolah Menengah Kejuruan Sekolah Menengah Analis Kimia Bogor
merupakan salah satu sekolah SMK yang berada di bawah pembinaan
Kementerian Perindustrian Republik Indonesia, sehingga sebagai sekolah
kejuruan bidang analisis kimia, maka SMK-SMAK Bogor diharapkan dapat

menghasilkan lulusan analis kimia yang kompeten dan terampil dalam

memenuhi tuntutan dunia kerja dan industri.
Seperti halnya sekolah menengah kejuruan lainnya, Sekolah Menengah
Kejuruan SMAK Bogor mempunyai visi dan mengemban misi sebagai
berikut.
VISI
Menjadi Sekolah Menengah Kejuruan Analisis Kimia Nasional bertaraf
internasional yang menghasilkan lulusan profesional dan bermartabat.
MISI
a. Melaksanakan pendidikan kejuruan analisis kimia yang berkualitas
mampu memenuhi kebutuhan masyarakat dunia usaha dan dunia industri
baik tingkat nasional maupun internasional.
b. Meningkatkan kemitraan nasional dan membina kemitraaan internasional.
c. Membina dan menyelenggarakan fungsi sosial dan kemasyarakatan
Pendidikan kejuruan mempunyai orientasi mempersiapkan lulusannya
untuk menjadi tenaga kerja siap pakai dalam dunia industri atau instansi lain
yang berhubungan dengan bidangnya. Sehubungan dengan hal itu, maka
dunia pendidikan kejuruan mengadakan kerjasama dengan dunia industri
untuk memperkenalkan segala kegiatan dunia industri kepada setiap
siswanya melalui program Praktik Kerja Industri (Prakerin).
Kerjasama antara dunia industri dan sekolah perlu dijalin demi kebaikan
kedua belah pihak tersebut. Sebagai lembaga pendidikan, sekolah
menyediakan fasilitas belajar dengan teknologi dalam batas-batas tertentu.
Maka untuk mengatasi keterbatasan teknologi yang digunakan di sekolah,
perlu diadakan studi tentang teknologi di dunia kerja. Adapun bagi dunia
industri, karyawan yang telah terampil dan siap menghadapi tantangan dan
persaingan dalam dunia kerja sangat diharapkan. Sehingga suatu program
pelatihan kerja sangat dibutuhkan bagi sekolah maupun dunia industri. Dalam
hal ini, pelatihan kerja tersebut dikenal dengan Praktik Kerja Industri
(Prakerin).
Dalam

Program

ini

penyusun

mendapatkan

kesempatan

untuk

melaksanakan kegiatan Prakerin selama 4 bulan, yaitu terhitung mulai

tanggal 3 November 2014 hingga tanggal 28 Februari 2015 di PT Anugrah

Analisis Sempurna (AAS).
B. Tujuan Prakerin
Pengetahuan dan keterampilan yang menjurus pada satu bidang pekerjaan
yang diperoleh melalui pendidikan kejuruan secara khusus memerlukan
suatu media yang bersifat melatih. Salah satu bentuk nyata dari pelatihan
tersebut yaitu dengan kegiatan Praktik Kerja Industri (Prakerin).
SMK-SMAK Bogor sebagai salah satu unit pendidikan yang bernaung di
bawah

pembinaan

Kementerian

Perindustrian,

bertugas

untuk

menyelenggarakan pendidikan untuk menghasilkan tenaga menengah yang

terampil dalam bidang analisis kimia khususnya, sehingga diharapkan jika
siswa-siswi terjun ke masyarakat dan terjun pada bidang yang sesuai dengan
program studi kejuruannya, tidak lagi menemui kesulitan yang mendasar.
Secara umum Praktik Kerja Industri (Prakerin), dilaksanakan untuk
menerapkan pengetahuan yang diterima selama belajar di sekolah,
menambah pengetahuan serta pengenalan lingkungan kerja di industri.
Adapun tujuan yang harus dicapai dari kegiatan Prakerin ini
adalah:
1. Meningkatkan kemampuan dan memantapkan keterampilan siswa/i
sebagai bekal kerja yang sesuai dengan program studi kimia analisis.
2. Menumbuhkembangkan dan memantapkan sikap profesional siswa/i
dalam rangka memasuki lapangan kerja.
3. Meningkatkan wawasan siswa/i pada aspek-aspek yang potensial dalam
dunia kerja, antara lain: struktur organisasi, disiplin, lingkungan dalam
sistem kerja, tatakrama.
4. Meningkatkan pengetahuan siswa/i dalam hal penggunaan instrumen
kimia analisis yang lebih modern dan terbarukan, dibandingkan dengan
fasilitas yang tersedia di sekolah.
5. Memperoleh masukan dan umpan balik guna memperbaiki dan

mengembangkan

pendidikan

(SMAKBo).

di

SMK

Analis

Kimia

Bogor

C. Tujuan Penulisan Laporan

Sebagai tugas akhir dari Praktik Kerja Industri (Prakerin), siswa/i wajib
membuat suatu laporan akhir lengkap yang meliputi semua kegiatan selama
Praktik Kerja Industri (Prakerin). Laporan ini akan dipresentasikan pada saat
ujian lisan sebagai bahan pertanggungjawaban siswa/i selama kegiatan
tersebut. Berikut adalah beberapa tujuan pembuatan laporan.
1. Memantapkan siswa dalam pengembangan dan penerapan pelajaran dari
sekolah di institusi tempat Praktik Kerja Industri (Prakerin).
2. Siswa mampu mencari alternatif dalam pemecahan masalah analisis
secara mendalam (seperti yang terungkap dalam laporan Praktik Kerja
Industri yang dibuat).
3. Mengumpulkan data yang telah diperoleh sehingga dapat ditampilkan
dalam bentuk laporan dan memberikan simpulan dari data hasil analisis
tersebut.
4. Menambah koleksi pustaka di perpustakaan sekolah maupun di institusi
prakerin sehingga dapat menambah pengetahuan, baik bagi penulis
maupun para pembaca.

BAB II
INSTITUSI PRAKERIN

A. Sejarah Singkat PT AAS Laboratory

PT. Anugrah Analisis Sempurna (AAS) Laboratory merupakan salah satu
perusahaan yang tergabung dalam Saraswanti Group. PT. AAS Laboratory
merupakan laboratorium pengujian yang telah berdiri sejak tanggal 9
Desember 2009 di Jakarta, sesuai dengan Akta Notaris Nyoman Kamajaya,
SH No. 2 serta Keputusan Menteri Hukum dan Hak Asasi Manusia Republik
Indonesia No. AHU-62017.AH.01.01 Tahun 2009 tentang Pengesahan Badan
Hukum Perseroan dengan Daftar Perseroan nomor AHU-0084928.AH.01.09
Tahun 2009 tanggal 21 Desember 2009.

Sejak Berdiri pada tahun 2009 hingga tahun 2014 PT. AAS Laboratory
beralamat di Jl. RC. Veteran Raya No. 08 Bintaro, Jakarta Selatan. Mulai
Awal tahun 2015 hingga sekarang PT. AAS Laboratory beralamat di Jl. Raya
Jakarta Bogor KM. 37 RT 005/04 Kelurahan Suka maju, Kecamatan
Cilodong,

Depok.

manajemen

mutu

Dikelola
sesuai

dengan
dengan

menerapkan
ISO/SNI

sepenuhnya

17025:2008

dan

sistem
sudah

terakreditasi oleh KAN dengan nomor Laboratorium Penguji LP-565-IDN.

Selain itu PT. AAS Laboratory telah mengikuti standar internasional dan lolos
uji profisiensi yang diselenggarakan oleh FAPAS di Inggris. Dengan demikian
hasil analisis PT. AAS Laboratory mempunyai ketelusuran yang baik dan
dapat dipertanggungjawabkan.
B. Gambaran Umum Perusahaan
PT. Anugrah Analisis Sempurna (AAS Laboratory) berdiri pada tanggal 9
Desember 2009 dan mulai beroperasi pada tanggal 5 juni 2010. Kantor AAS
Laboratory berdudukan di Depok dengan:

Alamat

: Jl. Raya Jakarta Bogor KM. 37, Depok

No.Telepon : 021-29629393/29629394/29629395
No. Faks

: 021-29629393/29629394/29629395

E-mail

: marketing@aaslaboratory.com

Website

: www.aaslaboratory.com

Gambar 1. Logo PT Anugrah Analisis Sempurna

PT Anugrah Analisis Sempurna atau AAS Laboratory, merupakan

laboratorium independen yang mempunyai fokus utama dalam bidang jasa
analisis untuk parameter-parameter: yaitu keamanan pangan (food safety),
validasi metode pengembangan produk farmasi atau sejenisnya, lingkungan,
dan kesehatan lingkungan kerja (industrial hygiene) serta biomonitoring.
Hal tersebut menjadikan AASLab sebagai One Line Laboratory Services
yang terintegrasi dalam satu pintu pelayanan dan sebagai salah satu
laboratorium yang dikenal dengan kredibilitas meyakinkan serta sungguhsungguh berorientasi memenuhi kebutuhan dan kepuasan pelanggan.
AASLab juga membangun jejaring dengan sesama laboratorium sejenis di
dalam negeri, baik yang dikelola oleh swasta nasional/internasional, maupun
laboratorium riset lembaga penelitian dan perguruan tinggi. Di samping itu,
AASLab juga membangun jejaring dengan Gabungan Asosiasi Perusahaan
Makanan & Minuman Indonesia (GAPMMI), Gabungan Perusahaan Farmasi
(GPF), dan Asosiasi Laboratorium Penguji Indonesia (ALPI) serta beberapa
asosiasi terkait.

Harapan ke depan adalah AASLab dapat menjalankan kompetensinya

dengan baik dan mampu menjalin kerjasama dengan berbagai pihak dari
berbagai latar yang beragam, guna membantu penyelesaian permasalahan
yang ada sesuai dengan kompetensi dari AAS Laboratory.
C. Visi, Misi dan Strategi
Visi dari PT. Anugrah Analisis Sempurna adalah menjadi Intergrated
Enviro-Food-Pharmacy Laboratory Services yang Independen, memiliki
Integritas dan Kredibilitas Tinggi serta Professional.
Misi dari PT. Anugrah Analisis Sempurna adalah :
1. Menjadi salah satu perusahaan penyedia Jasa Analisis Laboratorium
rujukan yang diakui secara Nasional dan Internasional.

2. Memberikan Nilai Lebih kepada mitra AASLab melalui hasil jasa analisis
yang berkualitas dan sumber daya manusia yang berkompeten
dibidangnya.
Strategi yang diterapkan oleh PT. Anugrah Analisis Sempurna antara lain:
1. Teliti: Memiliki Akurasi dan Presisi Tinggi dari Hasil analisis yang
dilakukan.
2. Pengukuran: Memakai Metode Analisis yang diakui secara Nasional dan
Internasional.
3. Intergritas: Memiliki Integritas tinggi bagi semua stakeholders AAS
Laboratory.
4. Tidak ada kompromi: Menyajikan hasil analisis tanpa pengaruh pihak
manapun.
D. Struktur Organisasi
Struktur organisasi adalah susunan hubungan antara karyawan dan
aktifitas satu sama lain serta terhadap keseluruhan, pertanggungjawaban,
wewenang, melalui tujuan perusahaan pada pencapaian sasarannya. Uraian
tugas dan fungsi serta tanggung jawab masing-masing bagian berdasarkan
struktur organisasi pada PT Anugrah Analisis Sempurna secara umum dapat
dilihat sebagai berikut:
1. Manajer Puncak
Manajer puncak merupakan pucuk pimpinan laboratorium PT Anugrah
Analisis Sempurna yang mempunyai tanggung jawab penuh terhadap semua
kegiatan laboratorium serta memimpin organisasi untuk mencapai tingkat
prestasi yang paling baik.
Kepemimpinan organisasi laboratorium, manajer puncak dibantu oleh para
manajer. Manajer puncak mempunyai wewenang membuat keputusan
terhadap kebijakan maupun sumber daya laboratorium untuk mencapai mutu
data pengujian sesuai kebutuhan dan kepuasan pelanggan. Manajer puncak
mempunyai tugas sebagai berikut:
a. Menetapkan dan mengesahkan panduan mutu laboratorium.

b. Menyelenggarakan kaji ulang sistem manajemen mutu laboratorium

minimal 12 bulan satu kali.
c. Membuat

perencanaan

pengembangan

bisnis

berkaitan

dengan

laboratorium.
d. Menjamin

implementasi,

pemeliharaan

dan

peningkatan

atau

penyempurnaan sistem manajemen mutu.

e. Mengidentifikasi kejadian penyimpangan dari sistem manajemen dan
memulai tindakan untuk mencegah dan meminimalkan penyimpangan
tersebut.
f.

Memberikan delegasi kepada manajer terkait, apabila berhalangan.

2. Manajer Mutu
Manajer mutu adalah personil yang mempunyai akses langsung ke
manajer puncak serta memiliki tanggung jawab dan kewenangan untuk
memastikan bahwa sistem manajemen mutu yang sesuai dengan ruang
lingkup kegiatan laboratorium dikomunikasikan, dimengerti, diterapkan dan
dipelihara

oleh

seluruh

personil

pada

semua

tingkatan

organisasi

laboratorium dalam setiap waktu. Manajer mutu mempunyai tugas sebagai

berikut:

a. Merencanakan, mengkoordinir dan mengevaluasi penyusunan serta

melakukan kaji ulang dokumentasi sistem manajemen mutu laboratorium.
b. Menetapkan dan mengesahkan dokumen sistem manajemen mutu
kecuali panduan mutu.
c. Merencanakan,

mengkoordinasi,

dan

mengevaluasi

pelaksanaan

program audit internal laboratorium terhadap semua elemen sistem

manajemen mutu termasuk kegiatan pengujian.
d. Apabila

diperlukan,

melaksanakan

kaji

ulang

terhadap

temuan

ketidaksesuaian dan rekomendasi tindakan perbaikan yang dilakukan

oleh Tim Audit Internal dalam pelaksanaan program audit internal.
e. Melaksanakan audit tindak lanjut untuk memverifikasi penerapan dan
efektifitas tindakan perbaikan yang dilakukan oleh audit, apabila
diperlukan.
f.

Memberikan delegasi kepada manajer terkait, apabila berhalangan.

3. Manajer Laboratorium
Manajer laboratorium bertanggung jawab kepada manajer puncak atas
semua aspek operasional teknis dan kelengkapan sumber daya yang
dibutuhkan untuk memastikan bahwa mutu data hasil pengujian tercapai
sesuai

kebutuhan

dan

kepuasan

pelanggan.

Manajer

laboratorium

mempunyai tugas, sebagai berikut:

a. Merencanakan mengkoordinir dan mengevaluasi kegiatan pengujian baik
di lapangan maupun di laboratorium.
b. Mengkoordinasi penerapan jaminan mutu dan pengendalian mutu
(QA/QC) untuk semua jenis pengujian.
c. Melakukan validasi data hasil pengujian.
d. Memilih dan menentukan subkontraktor laboratorium.
e. Menandatangani laporan hasil pengujian.
f.

Melakukan penelusuran terhadap pengaduan/keluhan dari pelanggan

yang berkaitan dengan mutu data hasil pengujian.

g. Melakukan kaji ulang permintaan,dan kontrak.

h. Melaksanakan pengawasan yang cukup terhadap penyelia maupun
analisis.
i.

Merencanakan, menyusun dan mengevaluasi program kalibrasi dan

perawatan peralatan laboratorium.

j.

Menentukan laboratorim kalibrasi yang kompeten untuk melaksanakan

kalibrasi peralatan.

k. Mengidentifikasi

kejadian

penyimpangan

dari

prosedur

untuk

melaksanakan pengujian dan memulai tindakan untuk mencegah atau

meminimalkan penyimpangan tersebut.
l.

Memberikan delegasi kepada penyelia laboratorium apabila berhalangan.

4. Manajer Umum
Manajer umum bertanggung jawab kepada Manajer puncak dalam hal
merencanakan, menerapkan dan mengevaluasi semua aspek yang berkaitan
dengan pengembangan personil serta pemeliharaan peralatan dan fasilitas
laboratorium.
Manajer umum mempunyai tugas, sebagai berikut:

a. Menjamin bahwa akomodasi dan kondisi lingkungan pengujian harus

memungkinkan untuk dapat melakukan pengujian dengan benar.
b. Berkoordinasi dengan personil terkait di laboratorium untuk menentukan
jenis pelatihan bagi seluruh personil laboratorium.
c. Menjamin bahwa semua personil mempunyai kualifikasi yang cukup untuk
melaksanakan tugas sesuai dengan uraian kerjanya.
d. Memelihara rekaman kualifikasi seluruh personil laboratorium.
e. Memberikan delegasi kepada personil yang menjadi tanggung jawabnya,
apabila berhalangan.
f.

Menjamin pengelolaan kerumah-tanggaan laboratorium dapat terlaksana

secara optimal.

5. Manajer Pemasaran
Manajer pemasaran bertanggung jawab kepada manajer puncak dalam
hal merencanakan, menerapkan dan mengevaluasi semua aspek yang
berkaitan dengan pemasaran, administrasi penerimaan contoh uji serta
laporan hasil pengujian. Manajer pemasaran mempunyai tugas, sebagai
berikut:
a. Mengembangkan dan menerapkan strategi pemasaran baik jangka
pendek maupun jangka panjang.
b. Merencanakan dan mengkoordinasikan kegiatan promosi.
c. Menyelesaikan semua administrasi yang dibutuhkan antara laboratorium
dengan pihak lain serta memelihara dokumen administrasi laboratorium.
d. Bertanggung jawab atas penerimaan contoh uji, pemindahan data hasil
pengujian ke dalam format laporan hasil pengujian dan menyampaikan
laporan hasil pengujian kepada pelanggan.
e. Melindungi kerahasiaan informasi dan hak kepemilikan pelanggan sesuai
prosedur pelaksanaan.
f.

Menerima pengaduan/keluhan termasuk keluhan umpan balik pelanggan

dan berkoordinasi dengan manajer terkait untuk menyelesaikannya.

g. Memberikan delegasi kepada personil yang menjadi tanggung jawabnya,

apabila berhalangan.
6. Manajer Keuangan

10

Manajer keuangan bertanggung jawab kepada manajer puncak dalam hal

merencanakan, menerapkan dan mengevaluasi semua aspek yang berkaitan
dengan keuangan. Manajer keuangan mempunyai tugas, sebagai berikut:
a. Menyelesaikan semua aspek yang berkaitan dengan keuangan baik
untuk pihak dalam maupun pihak luar termasuk sistem penggajian
personil laboratorium.
b. Membuat laporan keuangan tahunan.
c. Merencanakan dan melaksanakan pengadaan peralatan, instrumentasi,
bahan kimia, bahan habis pakai, serta perlengkapan laboratorium lainnya.
d. Bersama-sama dengan manajer laboratorium melakukan pemeriksaan
atau memverifikasi barang atau peralatan yang telah dibeli sebelum
digunakan.
e. Mengevaluasi dan memelihara rekaman pemasok yang digunakan.
f.

Memberikan delegasi kepada personil yang menjadi tanggung jawabnya,

apabila berhalangan.

7. Pengendali Dokumen
Pengendali dokumen bertanggung jawab kepada manajer mutu dalam hal
mengendalikan

seluruh

dokumentasi

sistem

manajemen

mutu

yang

diterapkan di laboratorium. Pengendali dokumen mempunyai tugas, sebagai

berikut:
a. Memelihara dan mengendalikan dokumentasi sistem manajemen mutu
baik dalam bentuk cetakan maupun elektronik serta mendistribusikannya
kepada personil laboratorium yang tepat.
b. Menjamin bahwa dokumen yang digunakan oleh seluruh personil
laboratorium adalah dokumen mutakhir.
c. Memusnahkan dokumen laboratorium yang sudah kadaluarsa.
d. Memelihara sistem computer yang meliputi perangkat keras dan
perangkat lunak yang digunakan di laboratorium termasuk sistem
keamanan, surat elektronik, dan cetakan.

11

8. Tim Audit Intenal

Tim audit internal bertanggung jawab kepada manajer mutu dalam hal
pelaksanaan audit internal laboratorium. Tim audit internal mempunyai tugas,
sebagai berikut:
a. Menyiapkan dokumen yang berhubungan dengan pelaksanaan Audit
Internal.
b. Melaksanakan audit internal laboratorium.
c. Melaporkan

hasil

kegiatan

audit

internal

termasuk

temuan

ketidaksesuaian ke manajer mutu.

9. Penyelia Laboratorium
Penyelia laboratorium bertanggung jawab kepada manajer laboratorium
dalam pelaksanaan pengujian di laboratorium. Penyelia laboratorium
mempunyai tugas sebagai berikut:
a. Mengkoordinasikan dan mengawasi penerapan jaminan mutu dan
pengendalian mutu (QA/QC) sesuai metode yang digunakan untuk semua
jenis pengujian yang dilakukan oleh analisis.
b. Melakukan verifikasi terhadap data hasil pengujian.
c. Meminimalisasi penyimpangan yang dapat mengakibatkan menurunnya
mutu data hasil pengujian di laboratorium dan melakukan tindakan
perbaikan apabila ditemukan ketidaksesuaian.
d. Bertanggung jawab melaksanakan pengujian ulang terhadap retained
sample jika ada keluhan dari pelanggan, apabila memungkinkan.
e. Melakukan penyelia yang memadai kepada maksimum 5 analis.
f.

Melakukan pelatihan dan mengembangkan profesionalisme analis

sehingga mempunyai kompetensi untuk melaksanakan tugas sesuai
urutan kerjanya.

g. Memantau, mengendalikan, dan merekam kondisi lingkungan pengujian.

h. Menunjuk analis senior yang menjadi tanggung jawabnya, apabila
berhalangan.

12

10. Penyelia Pengambil Contoh

Penyelia

pengambil

contoh

bertanggung

jawab

kepada

manajer

laboratorium dalam hal pelaksanaan pengambilan contoh uji. Penyelia

pengambil contoh mempunyai tugas sebagai berikut:
a. Membuat perencanaan pengambilan contoh uji dan melaksanakan Good
Sampling Practice.
b. Mengkoordinasikan dan mengawasi penerapan jaminan mutu dan
pengendalian mutu (QA/QC) di lapangan.
c. Meminimasi penyimpangan yang dapat mengakibatkan menurunnya
mutu data di lapangan dan tindakan perbaikan apabila ditemukan
ketidaksesuaian.
d. Melakukan penyelia yang memadai kepada maksimum lima petugas
pengambil contoh uji.
e. Mengadakan pelatihan dan mengembangkan profesionalisme petugas
pengambil

contoh

uji

sehingga

mempunyai

kompetensi

untuk

melaksanakan tugas sesuai urutan kerjanya.

f.

Menunjuk petugas pengambil contoh uji senior yang menjadi tanggung

jawabnya, apabila berhalangan.

11. Prosedur Sistem Berjalan

Prosedur pengolahan data uji laboratorium pada PT Anugrah Analisis
Sempurna adalah menyangkut tentang penerimaan sampel, pengujian
analisa/sampel, pembuatan laporan hasil uji, bagian keuangan. Beberapa
prosedur yang harus dijalankan adalah sebagai berikut:
a. Prosedur Penerimaan Sampel (kontrak uji)
Seorang customer membawa sampel, surat pengantar (lampiran) kepada
petugas penerimaan sampel dan mengisi Form Kontrak Pengujian (FKP)
FR.26.3/FPP yang diberikan oleh petugas penerimaan sampel mengisi Form
Spesifikasi Pengujian (FSP) FR.26.3/FPP dan Form Kendali Mutu (FKM)
FR.26.3/FPP untuk diberikan ke administrasi Lab dan diarsipkan.
b. Prosedur Penyelia

13

Setelah administrasi laboratorium menerima FSP, FKM dan sampel uji

maka dilakukan pemisahan sampel uji, lalu diberikan ke Penyelia
laboratorium untuk dicek sebelum diserahkan ke analis laboratorium.
c. Prosedur Pengujian Analisis sampel
Sampel uji FSP, FKM diberikan kepada analisis laboratorium untuk
dilakukan pengujian analisa/sampel, setelah mendapatkan Data Hasil
Analisis Sampel (DHAS) lalu diarsipkan dan diberikan kembali ke penyelia
laboratorium untuk diverifikasikan.
d. Prosedur Verifikasi Hasil analisis
Penyelia laboratorium memberikan DHAS acc beserta FSP, FKM ke
administrasi laboratorium, lalu Administrasi laboratorium membuatkan draft
hasil uji (DHU) dan akan diserahkan ke penyelia laboratorium untuk
diverifikasi ulang, setelah data-data tersebut telah disetujui oleh penyelia QC
maka dikembalikan lagi ke administrasi laboratorium dan diarsipkan.
e. Pembuatan LHP
Administrasi laboratorium memberikan DHU dan FKM ke petugas
pembuatan LHP untuk dibuatkan LHP lalu memberikannya ke pelanggan dan
mengarsipkannya.
E. Disiplin Kerja
Jam kerja karyawan yang bekerja di PT Anugrah Analisis Sempurna
Cimanggis Depok adalah sebagai berikut:
Senin-Jumat

: Pukul 08.00 s.d.17.00 WIB

Sabtu

: Libur

Jam istirahat

: Pukul 12.00 s.d. 13.00 WIB (hari Jumat pukul 11.30 s.d.
13.00).

Seluruh karyawan harus mematuhi semua peraturan yang berlaku,

misalnya masuk tepat pada waktunya, keluar pada waktunya, makan pada
tempatnya, tidak merokok di area kerja, dan sebagainya.

14

Untuk menjaga keselamatan dan kesehatan kerja, saat berada di

laboratorium karyawan diharuskan menggunakan Alat Pelindung Diri (APD),
seperti jas lab, sepatu lab, sarung tangan, masker, serta pelindung mata.
F. Administrasi Laboratorium
Laboratorium umum ini digunakan untuk preparasi semua jenis sampel
yang akan dianalisis baik sampel makanan, minuman, sisa pestisida, limbah,
tanah, dan lain sebagainya. Disini juga dilakukan analisis konvensional
menggunakan alat-alat yang telah tersedia seperti, titrasi, soklet, evaporasi,
dan alat analisis konvensional lainnya.
1. Laboratorium Instrumentasi
Laboratorium ini digunakan untuk pengujian sampel yang telah dipreparasi
menggunakan alat instrumentasi (GC MS, HPLC, Spektrofotometri UV-Vis,
dan AAS). Pengujian didasarkan pada parameter-parameter yang telah ada.
Contoh pengujian yang dilakukan adalah pengujian kandungan logam pada
sampel menggunakan AAS atau pengukuran kadar suatu senyawa pada
sampel makanan menggunakan HPLC.
2. Laboratorium Mikrobiologi
Laboratorium ini digunakan untuk menguji dan menganalisa mikroba
dalam bahan makanan dan minuman serta produk lain yang sejenis untuk
mengetahui jumlah mikroba Kapang dan Khamir, Salmonella, E.coli, Coliform,
jamur, Legionella, dan berbagai jenis Bakteri.
3. Jasa laboratorium yang dilakukan di PT AAS Laboratory meliputi :
a. Parameter pengawasan makanan
1) Uji Proksimat (uji keadaan, kadar air, kadar abu, kadar lemak,
kadar protein, kadar serat kasar dan kadar karbohidrat)
2) Uji cemaran logam (Pb, Cd, Hg, As, Zn, Sn dan lain-lain)
3) Uji Aflatoksin
4) Uji jenis Pemanis dan Pengawet Makanan
5) Uji lain yang berkaitan seperti Asam Lemak, Asam Amino,
Vitamin, Antioksidan & Informasi Nilai Gizi

b. Residu Pestisida

15

1) Pengujian Residu Pestisida Golongan Organofosfat

2) Pengujian Residu Pestisida Golongan Organoklorin
3) Piretroid, Carbamat dan lainnya
c. Parameter Lingkungan Hidup
1) Parameter Pemantauan Udara Ambient (SO2, NO2, CO, O3,
NH3, H2S, Hidrokarbon, Debu dan lainnya)
2) Parameter Pemantauan Udara Emisi (Sumber Bergerak dan
Tidak Bergerak)
3) Parameter Pemantauan Air Limbah (Limbah Industri,
Domestik, dan lainnya)
4) Parameter Pemantauan Air Bersih dan Air Minum
5) Parameter Pemantauan Air Permukaan (Sungai, Danau, dan
Laut)
6) Parameter Pemantauan Kebisingan Lingkungan

d. Parameter Industrial Hygine

1) Parameter pemantauan udara lingkungan kerja (organik dan
an-organik)
2) Parameter pemantauan paparan kimia personal (organik dan
an-organik)
3) Pemantauan debu lingkungan kerja dan personal (inhalable
dan respirable)
4) Pemantauan mikrobiologi udara lingkungan kerja (bakteri,
Jamur Kapang, Legionella)
5) Pemantauan paparan fisika (heatstress, vibration (hand arm &
whole body), noise dose, lux meter, radiation, ergonomic
e. Parameter biomonitoring
1) Parameter an-organik (logam Pb dalam darah maupun urin)
2) Parameter organik (Benzena, Toluena, dan Xylena)
G. Sistem Jaminan Mutu Laboratorium
Salah satu cara membuktikan bahwa suatu laboratorium penguji
mempunyai kompetensi teknis dalam menghasilkan data hasil uji, maka
16

laboratorium tersebut sebaiknya menerapkan Sistem Manajemen Mutu

Laboratorium.

Laboratorium

Anugrah

Analisis

Sempurna

telah

mengimplementasikan Sistem Manajemen Mutu Laboratorium oleh Komite

Akreditasi Nasional (KAN) dan mendapatkan sertifikat ISO/SNI 17025:2008
dengan nomor

LP-565-IDN. Dengan demikian hasil analisis AASLab

mempunyai ketelusuran yang baik dan dapat dipertanggung jawabkan.

ISO/IEC

17025:2008

merupakan

persyaratan

umum

kompetensi

laboratorium pengujian dan laboratorium kalibrasi, yang berisi persyaratan

manajemen dan teknis yang harus dipenuhi oleh laboratorium penguji dan
kalibrasi yang ingin menerapkan sistem mutu. Syarat-syarat tersebut
diantaranya dapat dilihat pada Tabel.

Tabel 1. Persyaratan Kompetensi Lab Uji sesuai ISO/IEC 17025:2008

No

Persyaratan Manajemen

Persyaratan Teknis

1.

Organisasi

Umum

2.

Sistem manajemen

Personil

3.

Pengendalian dokumen

Kondisi akomodasi dan lingkungan

4.

Kaji ulang permintaan, tender dan

Metode pengujian, metode kalibrasi,

kontrak

dan validasi metode.

5.

Subkontrak pengujian dan kalibrasi

Peralatan

6.

Pembelian jasa dan perbekalan

Ketertelusuran pengukuran

7.

Pelayanan kepada customer

Pengambilam sampel

8.

Pengaduan

Penanganan barang yang diuji dan

kalibrasi.

9.

10.

Pengendalian pekerjaan pengujian dan

Jaminan mutu hasil pengujian dan

atau kalibrasi yang tidak sesuai

kalibrasi

Peningkatan

Pelaporan hasil

17

11.

Tindakan perbaikan

12.

Tindakan pencegahan

13.

Pengendalian rekaman

14.

Audit internal

15.

Kaji ulang manajemen

Pada praktik kerja industri kali ini penyusun ditempatkan di divisi makanan.
Analisis yang dilakukan meliputi :
1. Analisis logam dalam sampel makanan dengan menggunakan AAS.
2. Analisis kadar transfat dalam makanan dengan menggunakan GC-MS.
3. Analisis kadar aflatoksin dalam sampel kacang tanah dengan
menggunakan immuno affinity kolom dengan menggunakan HPLC.
4. Analisis Kadar Benzo(a)pirene dalam makanan menggunakan HPLC.
Pada praktik kerja industri kali ini penyusun menilik judul laporan Analisis
Pengujian

Residu

Aflatoksin

Total

pada

Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT).

18

Kacang

Tanah

secara

19

BAB III
KEGIATAN DI LABORATORIUM

A. Tinjauan Pustaka
1.

Kacang Tanah
Kacang tanah (Arachis hypogaea L.) merupakan tanaman berupa semak,

berasal dari benua Amerika, diperkirakan dari lereng pegunungan Andes,

dinegara Bolivia, Peru, dan Brazilia. Tanaman kacang tanah telah
dibudidayakan orang sejak tahun 1500 SM oleh orang-orang Indian di
Amerika Selatan. Kemudian pembudidayaan kacang tanah mengalami
perkembangan yang pesat di berbagai Negara setelah diketahui mempunyai
manfaat yang lebih banyak (tidak hanya sebagai bahan makanan saja).
Bermula dari benua Amerika, penyebaran kacang tanah berlanjut ke benua
Afrika, Eropa, lalu menyebar ke benua Asia.
Tanaman kacang tanah masuk ke Indonesia di perkirakan antara tahun
1521 hingga tahun 1529. Tanaman kacang tanah masuk ke Indonesia mulamula dibawa oleh pedagang-pedagang Spanyol yang melakukan pelayaan
dari Meksiko ke Provinsi Maluku, Sulawesi. Tanaman kacang tanah mulai
dibudidayakan di Indonesia pada awal abad ke-18 dan baru satu varietas tipe
menjalar yang dibudidayakan. Perkembangan selanjutnya pada tahun 1863
seorang bangsa asing bernama Holle membawa kacang tanah masuk ke
Indonesia dari Inggris. Sedangkan pada tahun 1864 seorang bernama
Scheffer membawa kacang tanah masuk ke Indonesia dari Mesir.

Gambar 2. Tumbuhan Kacang Tanah Varietas Holle dan Scheffer.

20

Di Republik Rakyat Cina, kacang tanah merupakan hasil komoditas utama

terbesar di dunia, disusul India sebagai penghasil terbesar kedua. Kacang
tanah menempati urutan keempat setelah padi, jagung, dan kedelai di
Indonesia, sehingga banyak petani yang membudidayakan tumbuhan
tersebut. Tumbuhan ini dapat ditanam di lahan kering atau di sawah irigasi
saat musim kemarau. Kacang tanah dapat dimanfaatkan secara luas, baik
untuk diolah lebih lanjut atau dikonsumsi secara langsung.
Di Indonesia, pusat produksi kacang tanah terdapat di Jawa Timur, Jawa
Tengah, Jawa Barat, D.I. Yogyakarta,

Sumatera Utara, Sumatera Barat,

Sumatera Selatan, Bali, Flores, Kalimantan Selatan, dan Sulawesi Selatan.

Di Jawa Timur, Tuban merupakan penghasil utamanya. Sedangkan di Jawa
Tengah, Jepara merupakan penghasil utamanya. (Cahyono, 2007)
Kacang tanah adalah hasil tanaman kacang tanah (Arachis hypogaea L.)
berupa polong (gelondongan) dan atau biji (wose) yang telah dikupas dan
dibersihkan dari kulit polongnya. Kacang tanah polong (gelondong) adalah
kacang tanah berupa polong, dimana biji-biji masih berada didalam kulit
polong dan tidak pecah atau rusak, sedangkan kacang tanah biji (wose)
adalah hasil tanaman kacang tanah yang telah kering, dilepaskan dan
dibersihkan dari kulit polongnya (SNI, 1995).
Kacang tanah (Arachis hypogaea L.) merupakan anggota famili
Papilionidae, sub famili leguminosa, genus Arachis, dan spesies Arachis
hypogaea. Genus Arachis merupakan tanaman herba, daunnya terdiri dari
3-4 helai, memiliki daun penumpu, bunganya berbentuk kupu-kupu dengan
tabung hipantium, dan buah atau polongnya tumbuh didalam tanah
(Sumarno, 1993 dalam Ramdani, 2004).

Nilai gizi kacang tanah untuk setiap 100 gram bahan yang dapat dimakan
dapat dilihat pada Tabel.

21

Tabel 2. Gizi kacang tanah dalam 100 g

Kandungan

Kacang goreng

Mentega

Kacang mentah

Kalori (kal)

585

589

687

Protein (g)

26

25,2

9,2

Lemak (g)

49,8

50,6

71,2

Karbohidrat (g)

18,8

18,8

14,6

Serat (g)

2,4

1,8

2,3

Abu (g)

3,8

3,7

1,6

Kalsium (mg)

74

59

73

Vit.A (SI)

130

Besi (mg)

2,1

1,9

2,4

Fosfor (mg)

401

380

289

Tiamin (mg)

0,32

0,12

0,86

Riboflamin (mg)

0,32

0,12

0,13

Niasin (mg)

17,2

14,7

Sumber : Anonim, 1973 dalam Suprapto, 1998

Kacang tanah (Arachis hypogaea L.) merupakan salah satu sumber

protein nabati yang cukup penting pada menu makanan masyarakat
Indonesia. Biji kacang tanah banyak mengandung protein (17-29%) dan
lemak (44-56%). Dari komposisi gizi tersebut, kacang tanah merupakan
sumber lemak. Namun, lemak yang terkandung, 80% merupakan asam
lemak tidak jenuh. Asam lemak tidak jenuh merupakan lemak baik karena
dapat membantu menurunkan kadar kolesterol LDL darah (kolesterol jahat),
tanpa memengaruhi kolesterol HDL (kolesterol baik).
Kacang tanah dapat diolah menjadi berbagai produk, diantaranya selai
kacang, kacang asin, permen kacang, minyak kacang, bermacam aneka
makanan, dapat digunakan sebagai bahan pembuat minyak goreng. Di
bidang industri, digunakan sebagai bahan untuk membuat keju, mentega,
sabun dan minyak goreng. Hasil sampingan dari minyak dapat dibuat bungkil
(ampas kacang yang sudah diambil minyaknya) dan dibuat oncom melalui
fermentasi jamur. Ampas kacang ataupun daunnya digunakan sebagai pupuk

22

hijau dan sebagai bahan pangan dan pakan ternak yang bergizi tinggi
(Somaatmadja, 1993).
Namun kebutuhan kacang tanah, terutama bagi pabrik besar, tidak dapat
dipenuhi dari petani Indonesia sehingga Indonesia mengimpor kacang tanah
(Hartono, 2011). Hal tersebut disebabkan kandungan aflatoksin kacang tanah
dalam negeri yang masih melebihi batas maksimal yang dipersyaratkan,
yakni kurang dari 20 ppb (Badan Pengawas Obat dan Makanan RI tahun
2004).
Teknologi pascapanen yang belum maju dan iklim yang mendukung
pertumbuhan jamur menjadikan Indonesia negara yang mempunyai resiko
tinggi terkontaminasi jamur, termasuk kontaminasi oleh jamur penghasil
aflatoksin. Menurut Carlile et al. (2001) di Negara-negara yang tidak memiliki
fasilitas memadai untuk memanen tanaman dengan kerusakan minimum,
atau untuk penyimpanan yang baik tanaman panen tersebut, dan dimana
suhu lingkungan dan kelembaban mendukung pertumbuhan jamur. Sebagai
contoh, setumpuk kacang tanah, banyak dengan kulit ari rusak, disimpan
dibawah kain terpal akan membentuk lahan pertumbuhan ideal bagi jamur.

Jamur yang tumbuh pada kacang tanah diantaranya adalah Aspergillus

flavus

dan

Aspergillus

parasiticus,

keduanya

adalah

jamur

yang

menghasilkan aflatoksin. Menurut Wagacha et al. (2013), 73% isolate A.

flavus dan A. parasiticus memproduksi paling tidak satu dari berbagai jenis
aflatoksin. Aflatoksin B1 (AFB1) telah diklasifikasi oleh International Agency
for Research on Cancer sebagai karsinogen pada manusia (grup 1 A) (IARC,
1993).

2. Aflatoksin
Menurut Dr. Ir Deddy Muctadi, pada tahun 1960 di Inggris terjadi kasus
100.000 ekor ayam kalkun mengalami kematian yang tidak diketahui
penyebabnya, penyakit ini mempunyai gejala hilangnya nafsu makan,
kelesuan dan kelemahan sayap. Sehingga pada waktu itu dinamakan Turkey
X Disease. Penyakit ini tidak hanya menyerang ayam kalkun di Inggris, tetapi

23

juga pada itik dan hewan-hewan lain di Kenya dan Uganda yang mati dengan
gejala serupa. Akhirnya penyakit tersebut dapat diketahui yaitu sejenis racun
yang terdapat di dalam kacang tanah pada pakan ternak (Goldbatt, 1969).
Toksin penyebab Turkey X Disease dihasilkan oleh suatu zat hasil
metabolit kapang (jamur) Aspergillus flavus yang tumbuh pada kacang tanah
yang diimpor dari Brasil. Kacang tanah yang dikenal dengan nama "Rossetti
meal" (diambil dari nama kapal yang mengangkutnya) ini terbukti bersifat
toksik dan karsinogenik. Para peneliti kemudian mengekstrak toksin tersebut
dan diberi nama Aflatoksin yang diambil dari singkatan nama genus
(Aspergillus) dan spesies (flavus). Sejak itu Aflatoksin mendapat perhatian
yang cukup besar karena toksisitasnya yang tinggi dan dapat menimbulkan
kelainan hati pada binatang sehingga diduga manusia juga tidak kebal
terhadap Aflatoksin.
Aflatoksin adalah senyawa racun atau toksin yang dihasilkan oleh
metabolit

sekunder

kapang

atau

jamur Aspergillus

flavus.

Aflatoksin

merupakan segolongan mikotoksin (racun atau toksin yang berasal dari

fungi/kapang/jamur) yang sangat mematikan dan karsinogenik (pemicu
kanker) bagi manusia dan hewan. Tingginya kandungan aflatoksin pada
makanan atau pakan akan berbuntut keracunan dan berakibat kematian.
Indonesia memiliki iklim tropis, hal ini membuat tingkat kelembaban yang
tinggi sehingga kondisi tersebut sangat cocok untuk pertumbuhan kapang
atau jamur. Kapang ini biasanya ditemukan pada bahan pangan atau pakan
yang mengalami proses pelapukan (Diener dan Davis 1969), antara biji
kacang-kacangan (kedelai, kacang tanah, dan bunga matahari), rempahrempah (seperti ketumbar, lada, jahe, serta kunyit) dan serealia (seperti padi,
gandum, sorgum dan jagung).
3. Sumber Aflatoksin
Aspergillus flavus merupakan jamur yang berasal dari genus Aspergillus
yang dikenal sebagai produsen Aflatoksin terbesar. Jamur ini hidup secara
bebas sebagai cemaran pada berbagai macam bahan makanan, biji-bijian,
palawija, dan komoditi pertanian. Jamur ini menghasilkan metabolit toksin

24

(mikotoksin) yang sangat berbahaya untuk manusia dan hewan bila jamur
ini mencemari makanan.
Keterangan:
1.

Koni
dia

2.

Steri
gmata

3.

Vesik
ula

4.

Koni
diofor

5.
Gambar 3. Aspergillus flavus

Sel
kaki

6.

Misel

Jamur Aspergillus flavus tergolong dalam genus Aspergillus, famili

Aspergillaceae,

ordo

Aspergillales,

klas

Ascomyceres,

dan

divisio

Thallophyta (Hawksworth et al., 1995 dalam Tutu Romdoni, 2005). Jamur ini
dikenal sebagai jamur yang berwarna kuning kehijauan. Ciri-ciri spesifik yaitu
mempunyai hifa bersepta dan miselium bercabang, koloni kompak,
konidiofora kasar, berbentuk bulat serta relatif panjang. Konidia membentuk
rantai berwarna hijau, coklat, atau hitam, muncul dari sterigmata yang pendek
serta mempunyai sel kaki.
Beberapa faktor yang mempengaruhi pertumbuhan jamur pada pakan
adalah aktivitas air, konsentrasi ion hidrogen, suhu, konsistensi yakni padat
atau cair, status nutrien, dan adanya bahan pengawet. Aspergillus flavus
umumnya terdapat dimana-mana, di udara, air, tanah, dan dapat tumbuh
pada bahan pangan maupun pakan seperti jagung, beras, dan biji kapas.
Batas pertumbuhan optimum Aspergillus flavus yakni pada kelembaban
relatif (relative humidity/RH) 82 - 85 % dan suhu 30-32 C, dan kondisi
optimum untuk menghasilkan Aflatoksin adalah pada suhu 25 30 C, RH 85
%, dan kadar air 15-30 %. Kemampuan kapang membentuk dan menimbun
Aflatoksin tergantung beberapa faktor, yaitu potensial genetik kapang,
persyaratan-persyaratan lingkungan (substrat, kelembaban, suhu, pH) dan
lamanya kontak antara kapang dengan substrat.

25

4. Macam, Sifat, dan Struktur Aflatoksin

Aflatoksin diberi nama sesuai dengan penampakan fluoresensnya pada
lempeng kromatografi dengan silika gel yang disinari dengan sinar ultra
violet. Ada empat jenis senyawa aflatoksin, yaitu Aflatoksin B 1, B2, G1, dan
G2 (AFB1, AFB2, AFG1 dan AFG2). Keempat jenis Aflatoksin tersebut
merupakan Aflatoksin induk yang telah dikenal secara alami dan sering
dijumpai di alam (Rachmawati, 2004).
Pada gambar berikut akan ditunjukkan rumus struktur dari
aflatoksin golongan utama (B1, G1, B2, G2):

Gambar 4. Struktur Aflatoksin B1, G1, B2, G2

Apabila penampakan fluoresensnya biru maka diberi kode B (blue),

sedangkan bila hijau maka diberi kode G (green). Dari sifat ini dapat
digunakan untuk menentukan Aflatoksin secara kualitatif dan kuantitatif.
Kedua jenis Aflatoksin dibagi menjadi empat macam yaitu B1, B2, G1, dan G2.
Selain itu dikenal juga Aflatoksin jenis M (milk) yang berasal dari susu
sapi, yakni M1 dan M2, masing-masing dianggap sebagai turunan dari
Aflatoksin jenis B1 dan B2 yang dihasilkan lewat metabolisme sapi. AFM1 dan
AFM2 pertama kali diisolasi dari susu yang dihasilkan oleh sapi yang diberi

26

pakan yang terkontaminasi aflatoksin. Pada urin domba yang mengkonsumsi

Aflatoksin juga mengandung Aflatoksin M1 dan M2 (Goldblatt,1969)
Struktur kimia semua jenis Aflatoksin induk terdiri dari cincin bifuran dan
kumarin seperti pada gambar di bawah ini.

Gambar 5. Struktur Bifuran dan Kumarin

Molekul Aflatoksin induk memiliki inti kumarin yang berikatan dengan

bifuran

atau

pentanon

seperti

pada

AFB1

dan

AFB2

(difurokumarosiklopentanon), atau lakton seperti pada AFG1 dan turunannya

AFG2 (difurokumarolakton). Hingga saat ini telah diketahui ada 18 jenis
Aflatoksin yang berhasil diidentifikasi. Berikut adalah struktur dari beberapa
jenis Aflatoksin.
Berdasarkan strukturnya, Aflatoksin merupakan senyawa kimia yang
berupa sebuah gugus heterosiklik, suatu jenis mikotoksin (toksin dari kapang)
yang mengandung oksigen dan memiliki cincin bisdifurano (Zulhadi, 2008).
Tidak seperti racun yang dihasilkan oleh bakteri, racun yang dihasilkan
oleh jamur ini relatif stabil terhadap pemanasan. Aflatoksin memiliki stabilitas
yang tinggi bahkan dengan pemanasan sampai suhu 200 C tidak rusak.

27

Tabel 3. Beberapa sifat fisika aflatoksin

Aflatoksin

Rumus Senyawa

Bobot Molekul Titik Lebur (oC)

B1

C17H12O6

312

268-269

B2

C17H14O6

314

286-289

G1

C17H12O7

328

244-246

G2

C17H14O7

330

237-240

M1

C17H12O7

328

299

M2

C17H14O7

330

293

B2A

C17H12O7

328

240

G2A

C17H14O7

346

190

Aflatoksin murni tidak larut dalam petroleum hidrokarbon dan memiliki

kelarutan yang sangat rendah dalam air (10-20 g/ml), tetapi larut dalam
pelarut dengan tingkat kepolaran sedang seperti metanol, etanol, kloroform
dan benzene. Reaksi dengan asam dan basa serta oksidasi dapat
mengurangi toksisitas Aflatoksin.
Aflatoksin bila dalam larutan basa akan mengalami hidrolisis pada
sebagian lakton. Kehadiran asam-asam mineral bisa menyebabkan
perubahan struktur Aflatoksin B1 dan G1. Pengasaman akan mengkatalisis
penambahan air yang menyerang ikatan rangkap pada cincin furan.
5. Daya Racun Aflatoksin
Efek toksik Aflatoksin pada ternak dan manusia disebut aflatoksikosis.
Tingkat daya meracuni (toksisitas) Aflatoksin sangat bervariasi bergantung
pada jenis dan umur ternak, serta pada jenis Aflatoksin yang dikonsumsi.
Batas maksimum kandungan Aflatoksin yang diperbolehkan menurut FDA
(Food and Drug Administration) di Amerika Serikat yakni 20 ppb untuk pakan
ternak dan 15 ppb untuk bahan pangan konsumsi manusia, sedangkan di
Australia 15 ppb untuk bahan dari kacang tanah dan 5 ppb untuk bahan yang
bukan dari kacang tanah. Untuk menangani masalah kelemahan kalori dan
protein di daerah miskin, FAO/WHO mengizinkan sampai batas maksimum

28

20 ppb bagi bahan yang diberikan sebagai bahan makan campuran

(Winarno, 1997).
Aflatoksin dapat menyebabkan toksigenik (menimbulkan keracunan),
karsinogenik (menimbulkan kanker pada jaringan) mutagenik (menimbulkan
mutasi) dan teratogenik (menimbulkan penghambatan pada pertumbuhan
janin). Efek toksik sangat bervariasi dalam sifat, organ sasaran, maupun
mekanisme kerjanya. Semua efek toksik terjadi karena interaksi biokimiawi
antara toksikan dan atau metabolitnya dengan struktur reseptor tertentu
didalam tubuh. (Lu, 1995). Jenis Aflatoksin yang paling berbahaya adalah
B1. Urutan toksisitas dari jenis-jenis Aflatoksin adalah B 1>B2>G1>G2.
Aflatoksin akan masuk kedalam tubuh penderita bersama makanan dan
sesuai dengan sistem peredaran akan tersebar di bagian-bagian tertentu
tubuh. Hati merupakan target organ Aflatoksin sehingga Aflatoksin disebut
sebagai mikotoksin hepatatoksik (Makfoeld, 1993). Hati merupakan pusat
organ metabolisme kimiawi dan akan menerima mikotoksin khususnya
Aflatoksin B1 yang terkonsentrasi setelah zat tersebut masuk. Akumulasi
Aflatoksin dalam hati dapat menyebabkan gangguan, diantaranya adalah
nekrosis hepatoseluler (kematian sel hati), pendarahan, dan infiltrasi lemak.
Dosis mematikan (LD50) Aflatoksin B1 adalah 0,73 mg/kg berat badan
(Ramdoni, 2005).
Tabel 4. Nilai LD50 Aflatoksin B1, pada beberapa Spesies Hewan
Spesies hewan

LD50, bobot badan

Kelinci

1,00

Kucing

1,38

Babi

1,55

Anjing

2,50

Domba

5,00

Monyet

5,50

Ayam

8,80

Tikus

29,30

Sumber: Sri Rachmawati (2004).

29

Flatoksikosis pada ternak yang paling tinggi terjadi pada itik karena itik
merupakan hewan yang paling peka, sehingga sering digunakan sebagai
hewan uji. Ramdoni (2005) mengemukakan bahwa Aflatoksin dapat
menurunkan pertambahan bobot badan itik, kalkun, angsa, burung, dan
ayam. LD50 dari Aflatoksin terhadap anak itik adalah B1: 0,36 mg/kg berat
badan; G1: 0,78 mg/kg; B2: 1,70 mg/kg; G2; 2,45 mg/kg.
6. Kromatograf
a. Sejarah
Kromatografi adalah suatu istilah umum yang digunakan untuk
bermacam-macam teknik pemisahan yang didasarkan atas partisi contoh
diantara suatu fase gerak yang bisa berupa gas ataupun cair dan fase diam
yang juga bisa berupa cairan ataupun suatu padatan, yang diperkenalkan
oleh ahli biologi dari Rusia Michael Tswett pada tahun 1906 yang
membuktikan bahwa klorofl daun tidak hanya terdiri dari satu
macam warna saja dengan menggunakan suatu kolom yang berisi
kapur (CaSO4).
Warna tersebut terdiri dari tiga macam warna utama yaitu hijau
kekuningan, kuning, dan merah sindur. Caranya adalah dengan
melarutkan cairan hijau dari daun perasan daun segar dalam
pelarut organik seperti kloroform, heksana, diklorometana, atau
yang lainnya lalu dituangkan larutan tersebut ke dalam kolom.
Cairan hijau daun akan terpisah menjadi tiga macam warna yang
terpisah membentuk pita-pita warna. Warna tersebut mengilhami
Tswett menggunakan proses pemisahan tersebut dengan istilah
kromatograf. Kromatograf berasal dari gabungaan kata chroma
(warna) dan graphein (menuliskan). Kemudian banyak penemuanpenemuan lain yang menggunakan dasar kromatograf. Misalnya
Reighstein dari Jerman pada tahun 1938 menemukan Flowing
Chromatogram yaitu jenis kromatograf

berdasarkan aliran cairan

fasa gerak. Pada tahun 1941 Martin dan Synge menemukan

kromatograf partisi.

30

Perkembangan tentang kromatografi agak lambat untuk beberapa tahun

sampai digunakan suatu teknik dalam bentuk kromatografi padatan cair.
Kemudian pada akhir tahun 1930-an dan permulaan tahun 1940-an,
kromatografi mulai berkembang. Dasar Kromatografi Lapis Tipis (KLT)
diletakkan pada tahun 1938 oleh Izmailov dan Schreiber, dan kemudian
diperhalus oleh Stahl pada tahun 1958. Hasil karya yang baik sekali dari
Martin dan Synge pada tahun 1941 (untuk ini mereka memenangkan Nobel)
tidak hanya mengubah dengan cepat kromatografi cair tetapi seperangkat
langkah untuk pengembangan kromatografi gas dan kromatografi kertas.
Pada tahun 1952, Martin dan James mempublikasikan makalah pertama
mengenai kromatografi gas. Antara tahun 1952 dan akhir tahun 1960-an
kromatografi gas dikembangkan menjadi suatu teknik analisis yang canggih.
Semakin banyak usaha dilakukan untuk pengembangan kromatografi cair.
Dalam praktiknya, kromatografi cair ditampilkan dalam kolom gelas
berdiameter besar, pada dasarnya dibawah kondisi atmosfer. Waktu analisis
lama dan segala prosedur biasanya sangat membosankan. Pada akhir tahun
1960 an, sebagai suatu teknik mengimbangi kromatografi gas, High
Performance Liquid Chromatography (HPLC) atau Kromatografi Cair Kinerja
Tinggi (KCKT) telah berhasil dikembangkan dari usaha ini.
b. Dasar Kromatograf
Dalam menganalisa suatu zat kimia, maka langkah pertama ialah
memisahkan komponen-komponen dari campurannya. Salah satu
caranya adalah dengan menggunakan kromatograf. Kromatograf
adalah suatu teknik pemisahan molekul berdasarkan perbedaan
pola

pergerakan

memisahkan

antara

komponen

fase

gerak

dan

fase

(berupa molekul) yang

diam

untuk

berada pada

larutan. Fase gerak dalam kromatograf dapat berupa cairan

ataupun berupan gas. Fase diamnya berupa sejenis pasir silikat.
c. Kromatograf Cair Kinerja Tinggi (KCKT)
Kromatograf cair kinerja tinggi merupakan jenis kromatograf
kolom yang lebih baik jika dibandingkan dengan kromatograf kolom
lainnya. Hal ini terutama disebabkan karena bentuk dan ukuran
partikel penyusun kolom yang sedemikian kecil, sehingga kolom

31

menjadi lebih padat dan difusi menjadi berkurang. Karena padatnya

kolom sehingga menyebabkan diperlukannya tekanan supaya fase
gerak dapat mengalir melaluinya. Jadi pada kromatograf cair
kinerja tinggi tekanan jauh lebih besar dari kromatograf kolom
biasa dan kemampuan mencapai keseimbangan antara fase diam
dan fase gerak lebih besar pula.
Fase diam yang digunakan adalah zat padat seperti silica gel,
alumina, serta arang aktif yang dimampatkan. Bahan tersebut
terikat pada polimer berpori yang terdapat di dalam kolom baja
tahan karat bergaris tengah kecil. Fasa gerak yang digunakan
adalah pelarut organik yang dapat bercampur seperti air, metal
klorida, n-heksana, asam asetat glasial, asetonitril, dan metanol.
Prinsip kerja KCKT yaitu: dengan bantuan pompa, fase gerak cair dialirkan
melalui kolom ke detektor. Cuplikan dimasukkan ke dalam fase gerak melalui
penyuntikan. Di dalam kolom terjadi pemisahan komponen-komponen
campuran. Karena perbedaan kekuatan interaksi antara molekul yang terlarut
dalam fase gerak terhadap fase diam maka terjadilah pemisahan. Komponen
yang lemah interaksinya dengan fase diam akan lebih dulu keluar dari kolom.
Setiap komponen campuran yang keluar dari kolom akan dideteksi oleh
detektor,

kemudian

puncak/peak

direkam

menyatakan

dalam

jumlah

bentuk

komponen,

kromatogram.
sedangkan

luas

Jumlah
peak

menyatakan konsentrasi komponen dalam campuran.

KCKT dapat menganalisis cuplikan yang mudah terurai oleh pemanasan,
karena analisis dengan KCKT dilakukan pada suhu kamar. Analisis secara
KCKT tidak terbatas untuk senyawa organik saja, tetapi juga dapat
menganalisis cuplikan yang berasal dari senyawa anorganik. Keuntungan lain
dibandingkan dengan kromatografi gas, KCKT dapat menganalisis cuplikan
yang mempunyai berat molekul yang tinggi seperti polimer.
Teknik pemisahan dapat dilakukan seacra teknik isokratik dan
teknik elusi gradien. Teknik isokratik merupakan teknik pemisahan
dimana selama analisis komposisi fase gerak tidak berubah,
sedangkan teknik elusi gradien merupakan teknik pemisahan

32

dimana selama analisis komposisi fasa gerak berubah secara

periodik.
d. Mekanisme Pemisahan dalam Kromatograf Cair Kinerja Tinggi
Dalam instrumen Kromatograf Cair Kinerja Tinggi memiliki empat
jenis

mekanisme

pemisahan.

Mekanisme

pemisahan

tersebut

ditentukan oleh jenis kolom yang digunakan dalam analisis.

Beberapa mekanisme pemisahan tersebut ialah adsorpsi, partisi,
pertukaran ion, serta eksklusi.

Gambar 6. Mekanisme Pemisahan pada KCKT

1) Kromatografi Adsorbsi
Prinsip kromatografi adsorpsi telah diketahui sebagaimana dalam
kromatografi

kolom

dan kromatografi

lapis tipis.

Pemisahan

kromatografi adsorbsi biasanya menggunakan fase normal dengan

menggunakan fase diam silika gel dan alumina, meskipun demikian
sekitar 90% kromatografi ini memakai silika sebagai fase diamnya.
Pada silika dan alumina terdapat gugus hidroksi yang akan
berinteraksi dengan solut. Gugus silanol pada silika mempunyai
reaktifitas yang berbeda, karenanya solut dapat terikat secara kuat
sehingga dapat menyebabkan puncak yang berekor.
2) Kromatografi fase terikat
Kebanyakan fase diam kromatografi ini adalah silika yang
dimodifikasi secara kimiawi atau fase terikat. Sejauh ini yang

33

digunakan untuk memodifikasi silika adalah hidrokarbon-hidrokarbon

non-polar seperti dengan oktadesilsilana, oktasilana, atau dengan
fenil. Fase diam yang paling populer digunakan adalah oktadesilsilan
(ODS atau C18) dan kebanyakan pemisahannya adalah fase
terbalik. Sebagai fase gerak adalah campuran metanol atau
asetonitril dengan air atau dengan larutan bufer. Untuk solut yang
bersifat asam lemah atau basa lemah, peranan pH sangat krusial
karena kalau pH fase gerak tidak diatur maka solut akan mengalami
ionisasi atau protonasi. Terbentuknya spesies yang terionisasi ini
menyebabkan ikatannya dengan fase diam menjadi lebih lemah
dibanding jika solut dalam bentuk spesies yang tidak terionisasi
karenanya spesies yang mengalami ionisasi akan terelusi lebih
cepat.
3) Kromatografi penukar ion
KCKT penukar ion menggunakan fase diam yang dapat menukar
kation atau anion dengan suatu fase gerak. Ada banyak penukar ion
yang beredar di pasaran, meskipun demikian yang paling luas
penggunaannya adalah polistiren resin. Kebanyakan pemisahan
kromatografi ion dilakukan dengan menggunakan media air karena
sifat ionisasinya. Dalam beberapa hal digunakan pelarut campuran
misalnya air-alkohol dan juga pelarut organik. Kromatografi penukar
ion dengan fase gerak air, retensi puncak dipengaruhi oleh kadar
garam total atau kekuatan ionik serta oleh pH fase gerak. Kenaikan
kadar garam dalam fase gerak menurunkan retensi solut. Hal ini
disebabkan oleh penurunan kemampuan ion sampel bersaing
dengan ion fase gerak untuk gugus penukar ion pada resin.
4) Kromatografi Pasangan ion
Kromatografi

pasangan

ion

juga

dapat

digunakan

untuk

pemisahan sampel-sampel ionik dan mengatasi masalah-masalah

yang melekat pada metode penukaran ion. Sampel ionik ditutup
dengan ion yang mempunyai muatan yang berlawanan.
5) Kromatografi Eksklusi Ukuran

34

Kromatografi ini disebut juga dengan kromatografi permiasi gel

dan dapat digunakan untuk memisahkan atau menganalisis
senyawa dengan berat molekul > 2000 dalton. Fase diam yang
digunakan dapat berupa silika atau polimer yang bersifat porus
sehingga solut dapat melewati porus (lewat diantara partikel), atau
berdifusi lewat fase diam. Molekul solut yang mempunyai BM yang
jauh lebih besar, akan terelusi terlebih dahulu, kemudian molekulmolekul yang ukuran medium, dan terakhir adalah molekul yang jauh
lebih kecil. Hal ini disebabkan solut dengan BM yang besar tidak
melewati porus, akan tetapi lewat diantara partikel fase diam.
Dengan demikian, dalam pemisahan dengan eksklusi ukuran ini
tidak terjadi interaksi kimia antara solut dan fase diam seperti tipe
kromatografi yang lain.
6) Kromatografi Afinitas
Dalam kasus ini, pemisahan terjadi karena interaksi biokimiawi
yang spesifik. Fase diam mengandung gugus-gugus molekul yang
hanya dapat menyerap sampel jika ada kondisi-kondisi yang terkait
dengan muatan dan sterik tertentu pada sampel yang sesuai
(sebagaimana dalam interaksi antara antigen dan antibodi).
Kromatografi jenis ini dapat digunakan untuk mengisolasi protein
(enzim) dari campuran yang sangat kompleks.
Adapun Bagian-bagian alat KCKT yaitu:
a. Tempat Fase Gerak
Peralatan

KCKT

dilengkapi

dengan

satu

atau

beberapa

tampungan fase gerak berbahan gelas dengan ukuran bekisar 100

ml

hingga

1000

ml.

peralatan

degasser

disertakan

untuk

menghilangkan gas terlarut berupa oksigen atau nitrogen yang

akan mempengaruhi dengan membentuk gelembung pada kolom
dan detektor.

35

Gambar 7. Botol Fase Gerak

b. Pompa
Berfungsi untuk mengalirkan pelarut ke dalam kolom selama
proses analisis suatu sampel. Gerakan pompa diatur sedemikan
rupa dapat mengatur kecepatan alir pelarut. Kecepatan alir pelarut
dapat diprogram secara manual atau dengan alat tambahan. Jika
kecepatan alir sejak awal hingga akhir analisis tidak berubah maka
disebut sistem isokratik. Jika kecepatan alirnya diubah-ubah selama
analisis maka disebut elusi gradien.
c. Injektor
Sistem injeksi sampel merupakan keterbatasan dari sistem
kromatograf cair. Masalah ini dapat mengakibatkan pelebaran
puncak yang diakibatkan kolom mengalami kelebihan kapasitas.
Maka hal itu, volume injeksi harus dibatasi. Untuk menginjeksikan
sampel ke dalam kolom terdapat tiga metode yang dibagi menjadi:
1) Injeksi pada Kolom
Metode injeksi ini juga dikenal sebagai injeksi aliran
terhenti

(stopped

flow

injection).

Dalam

penggunaan

metode ini, aliran pompa dimatikan kemudian katup injeksi

dibuka untuk menginjeksikan sampel pada injektor. Setelah
itu pompa dinyalakan kembali dan aliran fase gerak kembali
seperti pada pengaturan awal.

36

2) Injeksi menggunakan Syringe

Septum yang digunakan pada KCKT sama dengan yang
digunakan pada Kromatograf Gas. Sampel diinjeksikan
melalui

sebuah

penyegel

septum.

Injektor

ini

dapat

digunakan pada kinerja sampai 60 - 70 atmosfer.

3) Injeksi menggunakan Katup
Tipe injektor yang umum digunakan pada saat ini.
Sampel yang dialirkan ke dalam fase gerak berlangsung
dengan cepat, aliran fase gerak tidak dihentikan, mudah
untuk

digunakan,

dan

dapat

disesuaikan

dengan

penggunaan injeksi otomatis. Katup enam jalur digunakan

berpasangan dengan loop sampel.
Pada saat menginjeksikan sampel, katup terpisah dari
jalur aliran fase gerak dan tidak terjadi tekanan sehingga
dapat terisi sampel. Dengan memutarkan rotor pada posisi
injeksi, loop akan yang telah terisi akan berhubungan
dengan aliran fase gerak dan terbawa ke dalam kolom.

Gambar 8. Skema Injeksi menggunakan

Katup

d. Kolom
Kolom pada kromatograf cair kinerja tinggi digunakan kolom
yang berbentuk lurus, tidak bengkok dan melingkar agar mencegah
terjadinya turbulensi. Dua jenis kolom yang digunakan dalam KCKT
yaitu:

37

Kolom dengan jenis porous particle berisi partikel dengan

diameter 3-10 m yang terbuat dari alumina, silika, resin, sintetis
divinil benzene polystirena yang kemudian dilapisi lapisan tipis flm
berbahan organik.
Jenis pellicular terdiri dari partikel dengan bentuk bola, tidak
berpori, berbahan dasar gelas dengan diameter 30 hingga 40 m.
Kolom merupakan jantung dari sebuah Kromatograf. Berhasilnya
suatu

KCKT

tergantung

pada

pemilihan

kolom

serta

kondisi

percobaan yang sesuai. Kolom umumnya dibuat dari stainless steel

dan biasanya dioperasikan pada temperatur kamar, tetapi bisa juga
digunakan temperatur lebih tinggi.

Gambar 9. Kolom pada KCKT

e. Detektor
Suatu detektor dibutuhkan untuk mendeteksi adanya komponen
sampel di dalam kolom (analisis kualitatif) dan menghitung
kadamya

(analisis

kuantitatif).

Detektor

yang

baik

memiliki

sensitiftas yang tinggi, stabil dan memiliki keterulangan yang baik

dalam

pembacaan,

respon

yang

linear

terhadap

kenaikan

konsentrasi, dan waktu respon yang singkat.

Jenis detektor yang dapat digunakan pada KCKT adalah :
1) Detektor Visible dan Ultra Violet
Untuk mendeteksi zat yang menyerap cahaya pada
daerah cahaya tampak atau pada daerah UV, detektor ini
mempunyai kepekaan cukup tinggi.
2) Detektor Refraktif Indeks

38

Setiap zat yang dapat memberikan respon, kepekaan

yang dihasilkan rendah dan sangat peka.
3) Detektor Elektrokimia
Detektor dengan mendasarkan kerjanya berdasarkan
pada pengukuran arus listrik yang dihasilkan dari reaksi
reduksi oksidasi suatu zat.
4) Detektor Spektra Massa
Detektor ini digunakan untuk pengukuran rumus struktur
suatu senyawa yang telah diionisasikan serta dipisahkan
oleh analisator dan kemudian menghasilkan spektrum
massa.

5) Detektor Fluorosen
Detektor ini hanya dapat mendeteksi zat-zat yang dapat
berfluoresensi.

Gambar 10. Skema Detektor Fluoresense

f.

Pengolahan Data

39

Hasil dari pemisahan kromatograf biasanya ditampilkan dalam

bentuk kromatogram pada recorder. Waktu retensi dan volume
retensi dapat diketahui atau dihitung. Hal ini bisa digunakan untuk
mengidentifkasi secara kualitatif suatu komponen. Lebar puncak
dan tinggi puncak sebanding atau proporsional dengan konsentrasi
dan dapat digunakan untuk memperoleh hasil secara kuantitatif.
Ilustrasi dari sistem kromatograf Cair Kinerja Tinggi:

Gambar 11. Skema Kromatograf Cair Kinerja Tinggi

B. Jaminan Mutu Pengujian

1. Umum (ISO/IEC 17025)
Sesuai dengan klausul 5.9 dalam SNI 17025-2005, laboratorium harus
mempunyai prosedur pengendalian mutu untuk memantau keabsahan
pengujian yang dilakukan. Data yang dihasilkan harus direkam sedemikian
rupa

sehingga

semua

kecenderungan

dapat

dideteksi

dan

bila

memungkinkan teknik statistik harus diterapkan pada pengkajian hasil.

Pemantauan tersebut harus direncanakan dan dikaji serta mencakup tapi
tidak terbatas pada hal-hal berikut:

40

1) Keteraturan

penggunaan

bahan

acuan

bersertifikat

dan/atau

pengendalian mutu internal menggunakan bahan acuan sekunder.

2) Partisipasi dalam uji banding antar laboratorium.
3) Replika pengujian menggunakan metode yang sama atau berbeda.
4) Pengujian ulang atas barang yang masih ada.
Data pengendalian mutu harus dianalisis dan bila ditemukan berada di
luar kriteria tindakan yang telah ditentukan sebelumnya, tindakan tertentu
harus dilakukan untuk mengoreksi permasalahan dan mencegah pelaporan
hasil yang salah.
2. Jaminan Mutu dan Pengendalian Mutu Pengujian
Untuk menjamin mutu hasil pengujian aflatoksin, hal-hal berikut ini harus
mendapat perhatian:
a. Jaminan Mutu
1) Simpan sampel uji maupun sampel cadangan (retain sample) pada
kulkas (temperatur di bawah 0).
2) Gunakan bahan kimia p.a untuk ekstraksi.
3) Gunakan alat gelas bebas kontaminasi.
4) Pengujian dilakukan oleh analis yang kompeten.
5) Lakukan uji konfirmasi aflatoksin

b. Pengendalian Mutu
Pengendalian Mutu Pengujian dapat dilakukan dengan penyertaan
pengujian Reference Material bersama dengan sampel pengujian. Apabila
hasil pengujian Reference Material mendekati nilai benarnya, maka hal ini
menunjukkan bahwa pengujian sampel yang telah dilakukan sesuai prosedur.
Definisi umum Reference
homogen

dan

memiliki

Material
nilai

adalah suatu bahan yang cukup

yang

dapat

dipertanggungjawabkan, sehingga dapat digunakan untuk :

1) Penggunaan Bahan Acuan

dipercaya

dan

41

Bahan acuan adalah suatu bahan yang satu atau lebih sifatsifatnya telah diketahui dengan prosedur teknis tertentu. Sampel
bahan acuan adalah Certified Reference Material (CRM) dan
Standarized Reference Material (SRM). CRM merupakan bahan
acuan yang satu atau lebih sifat-sifatnya diberi sertifikat dengan
prosedur teknis yang telah baku, dan dapat ditelusuri ke suatu
sertifikat atau dokumen lain yang diterbitkan oleh badan sertifikasi
yang diakui secara luas di seluruh dunia. Sedangkan SRM
merupakan bahan acuan yang nilai benarnya diperoleh melalui uji
profisiensi.
Mengingat
umumnya

SRM dan CRM relatif sukar diperoleh, maka

pengujian

SRM/CRM

hanya

dilakukan

pada

saat

laboratorium menyiapkan dan menetapkan nilai analit pada In house

Reference Material (IRM) maupun Control Sample.
2) Penggunaan IRM (In house Reference Material)
Setiap kali melakukan pengujian/analisis sampel rutin, harus
disertai dengan pengujian control sample sebanyak 2 ulangan.
Diupayakan agar control sample mempunyai matriks dan tingkat
konsentrasi yang setara dengan sampel rutin yang diuji. Pengujian
control sample dilakukan bersamaan dengan working sample pada
satu batch pengujian yang sama.
Nilai rata-rata dan standar deviasi pengujian kontrol sampel.
Kemudian diplot hasil pengujian kontrol sampel

pada grafik

pengawasan mutu / control chart. Apabila hasil pengujian kontrol

sampel terletak pada daerah > X + 2 SD atau < X 2 SD, maka
hasil pengujian working sample dan control sample harus diulang
setelah dilakukan kajian untuk mencari penyebab kesalahan analisis.
Keberterimaan Hasil Pengujian kontrol sampel, sebagai berikut:

42

Gambar 12. Grafik Pengawasan Mutu (Control Chart)

Apabila nilai yang diperoleh dari pengujian bahan acuan berada

di luar batas yang diijinkan, berarti telah terjadi ketidakbenaran atau
kesalahan dalam pengujian yang dapat berasal dari alat atau
pelaksana
Apabila terjadi kasus (item a) harus dicari sumber kesalahan
tersebut dan lakukan tindakan perbaikan.
3) Pengujian Spike Sample
Pada kondisi laboratorium tidak memiliki Reference

Material,

maka pengujian spike sample dapat dilakukan untuk pengendalian

mutu internal. Spike sample dibuat dengan cara menambahkan
larutan standar analit yang diketahui jumlah dan konsentrasinya ke
dalam sejumlah tertentu sampel. Dilakukan pengujian secara
bersamaan dengan metode pengujian yang sama terhadap:
a) sampel tanpa penambahan larutan standar
b) sampel dengan penambahan larutan standar

Lakukan perhitungan terhadap:

a) kandungan analit pada sampel tanpa penambahan larutan
standar (A).
b) kandungan analit pada sampel dengan penambahan larutan
standar (B).
c) kandungan analit yang ditambahkan kepada sampel (C).
Nilai temu balik (Recovery) diperoleh dari persamaan berikut :
% Recovery = B A x 100 %
C

43

Tabel 5. Persyaratan nilai recovery Berdasarkan AOAC Peer Verified Method Program
Analit (%)

Rasio Analit

Satuan

% Recovery

100

100 %

98-102

10

10-1

10 %

98-102

10-2

1%

97-103

0.1

10-3

0.1 %

95-105

0.01

10-4

100 ppm

90-107

0.001

10-5

10 ppm

80-110

0.0001

10-6

1 ppm

80-110

0.00001

10-7

100 ppb

80-110

0.000001

10-8

10 ppb

60-115

0.0000001

10-9

1 ppb

40-120

44

C. Metode Analisis
1. Dasar
Sampel yang mengandung aflatoksin dipisahkan dari lemak dan
protein, diekstrak dengan methanol. Kemudian dilakukan proses
clean-up (pemurnian) menggunakan kolom imunoafnitas (aflatest)
dan di elusi. Hasil pemurnian yang telah ditampung dalam vial
kemudian dikeringkan. Diderivatisasi menggunakan TFA (Tri Fluoro
Asetat) dan didiamkan. Ditambahkan fase gerak. Sampel siap untuk
diinjeksikan pada alat Kromatograf Cair Kinerja Tinggi (KCKT). Kadar
aflatoksin

diperoleh

dengan

mengalikan

konsentrasi

dalam

kromatogram dengan faktor pengenceran dan dibagi bobot sampel

yang dianalisis.
2. Tujuan
Menetapkan kadar aflatoksin campuran (B 1, G1, B2, G2)

dalam

contoh sampel kacang tanah secara Kromatograf Cair Kinerja

Tinggi dalam satuan konsentrasi ppb.
3. Alat dan Bahan
a. Alat-alat yang digunakan, yaitu:
1) Botol Schott
2) Erlenmeyer 300 ml
3) Gelas ukur 100 ml
4) Corong
5) Kromatograf Cair Kinerja Tinggi
6) Vortex
7) Neraca Digital
8) Nitrogen Generator
9) Neraca digital
10) Piala gelas 100 ml
11) Pipet mikro 100 l dan 1000 l
12) Rak tabung reaksi
13) Sonikator
14) Spatula
15) Syringe 5 ml
16) Tips
17) Vial

45

18)
19)
20)
21)

Vakum milipore
Tabung sentrifuse 50 ml
Kolom imunoafnitas (aflatest)
Blender

b. Bahan-bahan yang digunakan, yaitu :

1) Aquabidest
2) Kacang tanah
3) Metanol
4) Natrium klorida
5) Acetonitril
6) Standar induk Aflatoksin total 2,6 ppm
7) Gas nitrogen
8) Tri Fluoro Asetic acid (TFA)
9) Kertas saring berabu
10) Kertas saring microfber
4. Cara Kerja
a. Preparasi Sampel
1) Ditimbang 25 g contoh dan 5 g NaCl.
2) Dilarutkan dengan 125 ml metanol 75% ke dalam piala gelas 250
mL.
3) Dimasukan kedalam blender, atur kecepatan tinggi biarkan selama
2 menit.
4) Disaring dengan kertas saring berabu dan filtratnya ditampung
dalam wadah Erlenmeyer.
5) Hasil filtrat dipipet sebanyak 15 ml, pindahkan ke tabung
centrifuge.
6) Ditambahkan 30 ml aquabidest dengan gelas ukur.
7) Disaring kembali menggunakan kertas saring mikrofiber.
8) Dipipet 15 ml filtrat, dimasukan kedalam kolom Imunoafinitas.
9) Sampel dikeluarkan dengan kecepatan alir 1 tetes/detik.
10) Kolom dicuci dengan aquabidest sebanyak 10 ml, dengan
kecepatan alir 2 tetes/detik.
11) Kemudian aflatoksin dielusi dengan metanol 100% sebanyak 1
ml, hasil dimasukan kedalam vial.
12) Vial dikeringkan dengan nitrogen, hingga volume berkurang dan
terlihat hampir kering.
13) Ditambahkan 100 l TFA, kemudian dikocok dan didiamkan
selama 2 jam.
14) Kemudian ditambahkan 900 l acetonitril : air (1:9).
15) Sampel siap diinjeksi pada KCKT.

b. Pembuatan Standar Aflatoksin Total

1) Dipipet sebanyak 384,6 l dari Standar induk 2,6 ppm,
ditambahkan 615,4 l metanol

46

2)
3)
4)
5)
6)
7)

Dimasukan kedalam vial dan homogenkan

Dipipet berturut-turut sebanyak 10 l, 20 l, dan 50 l.
Dikeringkan dengan gas nitrogen hingga agak kering.
Diderivatisasi dengan 100 l TFA.
Didiamkan selama 2 jam.
Dilarutkan standar dengan 900 l acetonitril : air (1:9).

c. Pembuatan Fase Gerak sebanyak 1000 ml

1) Disiapkan alat Erlenmeyer Milipore, vakum, dan botol
schott.
2) Dimasukkan Acetonitril 100 ml, Metanol 300 ml, dan
Aquabidest 600 ml ke dalam botol schoot.
3) Saring dengan membran flter dengan ukuran pori 0,45
m.
4) Dimasukkan larutan fase gerak ke dalam botol schott dan
disonikasi dengan alat sonikator selama 30 menit dan siap
digunakan.
d. Kondisi alat KCKT
Diukur konsentrasinya pada KCKT dengan kondisi :
Kolom
: C18 Inert Sil ODS-3
Detektor
: Fluoresens, em 365 nm dan eks 425
nm
Volume Injeksi : 20 l
Waktu retensi
: 15 menit
Mode pompa
: Isokratik
Fase gerak
: Metanol : Acetonitril :
Aquabidest
(30 : 10 : 60)

47

BAB IV
PEMBAHASAN

A. Hasil dan Data Analisis

Berdasarkan hasil pengujian, linearitas pada larutan standar
aflatoksin total (B1, G1, B2, G2). diperoleh hasil seperti terlihat pada
Tabel dibawah ini:
Tabel 6. Hasil Uji Jangkauan Kerja Linear
Aflatoksi
Luas Area
Konsentrasi
(ppm (g/kg))
n
AFB1
776570
10.11
1525289
19,87
3842512
50,03
AFG1
350541
9,88
702922
19,81
1778027
50,10
AFB2
310098
2,82
664795
6,10
1647758
15,01
AFG2
185694
2,94
328631
5,20
967911
15,33
Keterangan : syarat batas uji linearitas > 0,995.

Koefsien Korelasi
0,9999
0,9999
0,9997
0,9957

Gambar 13. Kurva Linearitas AFB1 dan AFB2

Gambar 14. Kurva Linearitas AFG1 dan AFG2

48

Berdasarkan hasil analisis aflatoksin total (B1, G1, B2, G2) pada sampell
kacang tanah secara KCKT, diperoleh data seperti terlihat pada tabel berikut.
Tabel 7. Data Sampel
Nomor
sampel

Bobot
sampel
(g)

Aflatoksin

Fp

Slope

Area
sampel

25.0360

Aflatoksin G1

35488.41

TT

35488.41

TT

76799.02

362543

76799.02

372687

63139.00

TT

63139.00

TT

130646.38

83756

130646.38

83326

25.0634
Ratarata
25.0360

Aflatoksin B1

25.0634

12.010

Ratarata
25.0360

Aflatoksin G2

25.0634
Ratarata
25.0360

Aflatoksin B2

25.0634
Ratarata
Keterangan : Tidak Terdeteksi (TT)

Berdasarkan hasil analisis kadar aflatoksin total (B1, G1, B2, G2) pada
sampel kacang tanah secara KCKT, diperoleh hasil seperti terlihat pada tebel
berikut.
Tabel 8. Kadar Sampel
Sampel

Hasil (ppb atau g/kg)

Jumlah
(g/kg)

12.010 a

G1
TT

B1
4.72

G2
TT

B2
0.77

5.49

12.010 b

TT

4.86

TT

0.76

5.62

Rata-rata
Keterangan : Tidak Terdeteksi (TT)

5.55

49

Berdasarkan hasil pengujian, didapatkan data kontrol sampel

penetapan analisis total aflatoksin (B1, G1, B2, G2) sebagai berikut:

Tabel 9. Data Kontrol Sampel

Nomor
sampel

Bobot
sampel
(g)

Aflatoksin

Fp

Slope

Area
sampel

25.0012

Aflatoksin G1

25

35488.41

214984

25

35488.41

210099

25.0631
Ratarata
25.0012

Aflatoksin B1

25

76799.02

812623

25

76799.02

812005

Ratarata
25.0012

Aflatoksin G2

25

63139.00

105220

25

63139.00

109083

Ratarata

25.0631
Ratarata

5.91

10.58
10.55
10.56

25.0631

25.0012

6.06

5.98

25.0631
Kontrol
Sampel

Kadar
sampel
(g/kg)

1.67
1.72
1.69

Aflatoksin B2

25

130646.38

233176

25

130646.38

233734

1.78
1.78
1.78

50

B. Pembahasan
Menurut ISO/IEC 17025:2008 klausul 5.9, Pemantauan jaminan mutu
dapat dilakukan dengan beberapa cara, berikut merupakan hal-hal yang
dilakukan:
1. Keteraturan

penggunaan

bahan

acuan

bersetifikat

dan/atau

pengendalian mutu internal menggunakan bahan acuan sekunder,

misalnya Certified Reference Material (CRM) atau Standarized
Reference Material (SRM).
2. Partisipasi dalam uji banding antar laboratorium atau program

uji

profesiensi.
3. Replika pengujian atau kalibrasi menggunakan metode yang sama
atau berbeda, misalnya melakukan pengujian ulang (duplo) pada saat
pengujian, melakukan uji verifikasi pada metode yang digunakan.
4. Pengujian ulang atau kalibrasi ulang atas barang yang masih ada.
5. Kolerasi hasil untuk karakteristik yang berbeda dari suatu barang.

Pada pengujian aflatoksin total (B1, B2, G1, G2) dengan sampel kacang
tanah, pemantaun jaminan mutu hasil analisa yang dilakukan, berupa uji
jangkauan kerja liniear, pengerjaan duplo dan kontrol sampel (sampel yang di
spike), Hal ini sering dilakukan oleh laboratorium penguji.
Akan tetapi, pemantauan jaminan mutu hasil analisa seperti ini hanya bias
dilakukan dalam laboratorium tersebut (intra lab), tidak dapat dibandingkan
dengan laboratorium lainnya. Pengujian ini bertujuan untuk memantau
keabsahan hasil pengujian yang dilakukan dengan menggunakan data yang
sedemikian rupa agar dapat tertelusur.
Pada pengujian penetapan aflatoksin total (B1, B2, G1, G2) kali ini,
jaminan mutu pengujian yang digunakan adalah menggunakan alat
penunjang yang sudah terkalibrasi, uji linearitas pada standar, uji pungut
ulang pada sampel atau duplo, dan kontrol sampel.
Uji linearitas pada standar aflatoksin didapatkan hasil koefisien
korelasi sebagai berikut:

51

Tabel 10. Hasil Koefisen Korelasi Standar Aflatoksin

Aflatoksin
AFB1
AFG1
AFB2
AFG2

Koefisien Korelasi
0,9999
0,9999
0,9997
0,9957

Jangkauan kerja linear (linearitas) merupakan kisaran konsentrasi

analat yang secara eksperimen mampu memenuhi persyaratan mutu metode
uji melalui penetapan presisi, akurasi dan lineritas pengujian (Wood et al,
1998). Berdasarkan hasil pengujian linearitas pada larutan standar campuran
aflatoksin diperoleh hasil koefisien relasi yang memenuhi standar yang
dipersyaratkan oleh SNI ISO/IEC 17025:2008 dengan batas hasil uji linearitas
>0,995. Maka, hasil uji linearitas pada standar aflatoksin yang ditetapkan
sudah memenuhi persyaratan.
Hubungan linear menunjukkan bahwa semakin tinggi konsentrasi
maka luas areanya pun akan semakin tinggi pula atau berbanding lurus.
Semakin linear suatu grafik, maka semakin berbanding lurus pula koefisien
korelasi dengan luas area serta koefisien korelasi akan mendekati nilai satu.
Pengujian ulang dari suatu pengujian dalam 1 laboratorium uji
(intralab), dilakukan untuk mengukur kemampuan suatu metode pengujian
untuk menunjukan kedekatan atau presisi. Untuk dua kali pengulangan
(duplo)

dinyatakan

dalam

RPD

(Repeatability

Persen

Difference),

persyaratan RPD menurut persamaan Horwitz adalah sebagai berikut:

0,66 x CVHorwitz
Dimana CV (Nilai Horwitz) = 2(1-0.5logC)
Dimana nilai C (fraksi konsentrasi) = 1 x 10-9

Pada pengujian aflatoksin didapatkan hasil nilai RPD pada kontrol sampel
dan sampel sebagai berikut:
Tabel 11. Nilai %RPD pada Kontrol Sampel
Aflatoksin

Kadar
sampel
(g/kg)

%RPD

Aflatoksin G1

6.06

2.55

52

5.91
Rata-rata

5.98

Aflatoksin B1

10.58

0.32

10.55
Rata-rata

10.56

Aflatoksin G2

1.67

3.36

1.72
Rata-rata

1.69

Aflatoksin B2

1.78

0.01

1.78
Rata-rata

1.78

Tabel 12. Nilai %RPD pada sampel

Aflatoksin

Kadar
sampel
(g/kg)

%RPD

Aflatoksin G1

0.00

0.00

0.00
Rata-rata

<0.50

Aflatoksin B1

4.71

2.65

4.84
Rata-rata

4.78

Aflatoksin G2

0.00

0.00

0.00
Rata-rata

<0.12

Aflatoksin B2

0.64

0.62

0.64
Rata-rata

0.64

Uji temu balik atau Recovery test dilakukan apabila suatu metode
memerlukan cara kerja yang panjang, akan tetapi kadar yang dihasilkan kecil
dan dapat juga untuk mengetahui jumlah analit yang hilang dalam proses
pengujian. Cara ini dilakukan dengan spiking sample (contoh uji yang
diperkaya dengan larutan baku dengan konsentrasi tertentu) kedalam analit.
Nilai uji temu balik dapat dicari dari persamaan berikut:

53

% Recovery = B A x 100 %
C
Dimana:
1. kandungan analit pada sampel tanpa penambahan larutan standar (A)
2. kandungan analit pada sampel dengan penambahan larutan standar (B)
3. kandungan analit yang ditambahkan kepada sampel (C)

Tabel 13. Nilai %Recovery pada Kontrol Sampel

Aflatoksin
Aflatoksin
G1

Aflatoksin
B1

Aflatoksin
G2

Aflatoksin
B2

Kadar
sampel
(g/kg)

Spike
(ug/kg)

Recovery
(%)

6.06

5.77

105.00

5.91
5.98

5.77

102.36
103.68

10.58
10.55
10.56

5.77
5.77

101.69
98.90
100.30

1.67
1.72
1.69

1.73
1.73

96.28
99.57
97.93

1.78
1.78
1.78

1.73
1.73

103.12
103.11
103.11

Pada pengujian aflatoksin total (B1, B2, G1, G2). Nilai Recovery

yang

digunakan dalam pengujian ini antara 60% sampai dengan 115%. Jika hasil
pengujian spike sample berada di luar kriteria, maka pengujian sampel harus
diulangi.
Metode penetapan kadar aflatoksin total (B1, B2, G1, G2) dalam kacang
tanah, dilakukan berdasarkan metode AOAC (Association of Official
Analytical Chemistry) Official Method 991.31 yang menggunakan alat KCKT
yang sudah mengalami pengembangan.
Pada tahap awal yaitu ekstraksi, sampel sebanyak 25 gram dicampurkan
dengan metanol : aquabidest (70 : 30) sebanyak 125 ml guna untuk

54

mengekstrak aflatoksin dalam matrik, dan mengurangi pengotor yang

terdapat di dalamnya. Penggunaan sebanyak 125 ml metanol juga bertujuan
untuk mendapatkan 0.2 gram sampel tiap 1 ml metanol. Metanol dipakai
karena aflatoksin larut dalam metanol, proses yang dilakukan lebih hemat
bahan maupun biaya, waktu dan menyesuaikan pereaksi dengan kolom
afinitas yang digunakan. Penambahan garam NaCl juga bertujuan untuk
mengoptimasi saat pengekstrakan berlangsung. Matrik yang tidak larut dalam
metanol dapat dihilangkan dengan cara proses penyaringan.
Pada

tahap

kedua,

sampel

melalui

proses

pemurnian,

sebelum

dimurnikan dengan kolom afinitas, sampel akan ditambahkan aquabidest, ini

bertujuan untuk mengencerkan sampel, agar diharapkan terdapat 0,0667 g
sampel tiap 1 ml metanol. Setelah itu disaring kembali dengan kertas saring
mikrofiber, hal ini bertujuan agar menyaring partikel-partikel yang tidak larut
sehingga tidak menyumbat saat proses penggunaan kolom afinitas.
Sebanyak 15 ml larutan filtrat dimasukan kedalam kolom, ini bertujuan agar
didapatkan kurang lebih 1 gram sampel yang akan dianalisa. Pengaturan
tetes saat pemurnian maupun saat pencucian menggunakan kolom afinitas,
nantinya akan mempengaruhi hasil yang didapatkan. Diusahakan saat
permunian, kecepatan alir harus 1 tetes per 1 detik dan saat pencucian
kecepatan alir harus 2 tetes per 1 detik. Proses permurnian berguna untuk
menangkap ekstrak aflatoksin dengan antibodi, sehingga zat selain ekstrak
aflatoksin dapat dikeluarkan dari kolom afinitas.
Setelah itu dielusikan dengan pelarut metanol 100 %, dengan tujuan agar
senyawa aflatoksin yang terikat pada kolom afinitas akan terelusi. Ekstrak
yang telah dielusi dikeringkan dan diderivatisasi, perlakuan derivatisasi ini
bertujuan untuk membentuk gugus senyawa yang sensitif terhadap detektor
fluoresens, pada alaminya golongan B1 dan B2 sudah terdapat gugus ini,
tetapi pada golongan G1 dan G2, gugus ini tidak ada. Maka dari itu proses
derivatisasi harus dilakukan. Kemudian dibaca dengan KCKT menggunakan
fase gerak acetonitril : metanol : aquabidest (10 : 30 : 60) dengan kecepatan
alir 1,0 ml/menit.
Berdasarkan hasil analisis kadar aflatoksin campuran (B 1, G1, B2, G2) yang
telah dilakukan terhadap sampel kacang tanah dengan menggunakan
metode Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT), didapatkan hasil yang

55

positif terhadap sampel kacang tanah dengan kisaran konsentrasi aflatoksin

5,55 g/kg. Dengan batas toleransi yang dikeluarkan oleh BSN pada SNI
7385:2009 sebesar 20 ppb atau 20 g/kg, sampel yang telah dianalisis
berada dibawah batas toleransi dan aman dimakan oleh manusia maupun
hewan ternak.
Tabel 14. Batas Toleransi Aflatoksin pada Pangan

No
.
1.

Pangan

Jenis
B1

2.

Kacang tanah dan produk

olahan
Jagung dan produk olahan

Batas Maksimum
(ppb atau g/g)
15

Total
B1

20
15

3.

Rempah-rempah bubuk

Total
B1
Total

20
15
20

Sumber: SNI 7385:2009

Walaupun manusia maupun hewan ternak mengkonsumsi kacang tanah

yang mengandung aflatoksin yang berada dibawah batas toleransi standar,
konsumsi dalam jangka waktu panjang akan menyebabkan efek samping
yang disebut aflatoksikosis (keracunan akut). Aflatoksikosis dipengaruhi oleh
umur, dosis yang termakan dan lamanya aflatoksin yang terpapar dan jenis
makanan.
Aflatoksin tidak meyebabkan keracunan secara akut, namun secara kronis
dapat menyebabkan kelainan organ hati. Kemampuan aflatoksin menginduksi
kanker hati diduga disebabkan aflatoksin dapat terikat pada makromolekul
hati dalam jumlah rendah dan bila tinggi makan akan menyebabkan
kematian.

Untuk menanggulangi bahaya aflatoksin, harus dilakukannya pengawasan

dari saat pra panen hingga masa pasca panen. Dalam hal penyimpanan
suatu kacang tanah harus memperhatikan pula aspek kritis yang dapat yang
mempengaruhinya suatu pertumbuhan kapang atau cendawan. Serta
pengetahuan terhadap sifat kapang atau cendawan penghasil aflatoksin
haruslah diketahui.

56

BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
A. Kesimpulan

Berdasarkan analisis terhadap aflatoksin campuran (G1, B1, G2, B2) yang
telah dilakukan, didapatkan hasil kadar aflatoksin pada kacang tanah 5,49
g/kg dan 5,62 g/kg. Dari 2 sampel yang telah dianalisis, semua sampel
kacang tanah mengandung aflatoksin dan semua sampel berada dibawah
batas toleransi yang ditetapkan dalam SNI 7385:2009 tentang batas
maksimum kandungan mikotoksin dalam pangan yaitu sebesar 20 g/kg
(ppb).
Pada uji jangkauan kerja linear didapatkan koefisien korelasi atau yang
disebut regresi untuk aflatoksin G1 sebesar 0,9999, aflatoksin B1 sebesar
0,9999, aflatoksin G2 sebesar 0,9957, dan aflatoksin B2 sebesar 0,9997. Hasil
ini memenuhi persyaratan menurut SNI ISO/IEC 17025:2008 dengan batas
uji linearitasnya >0,9950
Sedangkan pada pengujian ulang pada sampel (duplo), didapatkan nilai
%RPD untuk G1 sebesar 2.55%, aflatoksin B1 sebesar 0.32%, aflatoksin G2
sebesar 3.36%, dan aflatoksin B2 sebesar 0.01%. Pada sampel didapatkan
hasil untuk aflatoksin B1 sebesar 2.65 dan aflatoksin B2 sebesar 0.62%. untuk
nilai Horwitz pada konsentrasi <10 g/kg sebesar 16.00%, maka untuk
pengujian ini semua hasil memenuhi kriteria %RPD.
Pada uji temu balik pada sampel yang dispike, didapatkan nilai recovery
untuk aflatoksin G1 sebesar 103.68%, aflatoksin B1 sebesar 100.30%,
aflatoksin G2 sebesar 97.93%, dan aflatoksin B2 sebesar 103.11%. Hasil
pengujian ini, memenuhi kriteria nilai % recovery antara 60% sampai dengan
115%.

56

57

B. Saran
Analisis aflatoksin total (B1, G1, B2, G2) dengan metode Kromatografi Cair
Kinerja Tinggi memiliki sensitifitas yang tinggi, analisis harus dilakukan
dengan teliti dan presisi, untuk mendapatkan hasil yang maksimal dalam
melakukan analisis kadar aflatoksin sebaiknya diperhatikan:
1

Saat menggunakan kolom Imunoafinitas, jangan sampai ada kebocoran

saat melakukan ekstraksi, karena dapat terjadi kesalahan negatif.

Pembilasan setelah contoh saat menggunakan kolom Imunoafinitas,
harus dipastikan kolom terbebas dari aquabidest agar mempermudah

dalam penguapan setelah ditambahkan metanol.

Saat membuat fase gerak, terlebih dulu disaring dan di hilangkan
gelembungnya (dihilangkan dengan supersonic) agar mempermudah dan
dapat memberikan hasil yang terbaik saat membaca respon contoh
dengan KCKT.
Perlu dilakukan kontrol residu aflatoksin pada kacang tanah yang rentan

ditumbuhi oleh kapang Aspergillus flavus saat pra panen, pasca panen
(penyimpanan, distribusi, dll.) sebelum didistribusikan untuk diolah menjadi
makanan bagi manusia dan diolah menjadi pakan ternak untuk hewan ternak.

57

DAFTAR PUSTAKA
Anonimus. 2009. Standar Nasional Indonesia (SNI) 7385-2009. Batas Maksimum
Kandungan Mikotoksin dalam Pangan.Dewan Standarisasi Nasional
(DSN).
Annisa.Analisis Pengujian Residu Aflatoksin Campuran pada Pakan Ternak
Secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT).Bogor.Smakbo.
Wati, Yatmika.Jaminan Mutu Pengujian Aflatoksin B1 pada Kacang Tanah.
Bogor.Smakbo.
Makfoeld, D. 1993. Mikotoksin Pangan. Yogyakarta. Universitas Gajah Mada.
Bimo Setiarto, Haryo dan Rahmansyah, Maman. 2011. Profil Zat Racun
Aflatoksin. Bogor: Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia.
Blount, W.P. 1961. Turkey X Disease. J. Brit. Turkey Fed. 9:52.
C. Lu, Frank. 1995. Toksikologi Dasar. Jakarta: Universitas Indonesia.
Goldbatt, Leo A. 1969. Afaltoxin (Scientific Background, Control, and
Implications). New York: Academic Press.
Ismail, E. Krisnandi dan Arifin, Zaenal. 2014. Kromatografi Cair Kinerja Tinggi
(KCKT). Bogor: Departemen Perindustrian. Pusdiklat Industri. SMAK
Bogor.
Makfoeld, Ir. Djarir. 1993. Mikotoksin Pangan. Yogyakarta. Kanisus Yogyakarta
Aksi Agraris Kanisius. 1990. Kacang Tanah. Yogyakarta: Kanisius.
Bainton, S.J., dkk. 1980. Micotoxin Training Manual. London: Tropical Products
Insitute.
Horwitz, William (editor), dan George W. Latimer, Jr. (Assistant editor). 2005.
Official Methods of Analysis of AOAC International, edisi Kelima. USA:
AOAC International Suite.
HS, Suprapto. 1998. Bertanam Kacang Tanah. Bogor: Penebar Swadaya.
Imamkhasani, Soemanto. 1990. Keselamatan Kerja dalam Laboratorium Kimia.
Jakarta: PT Gramedia.
ISO/IEC 17025. 2005. Persyaratan Umum Kompetensi Laboratorium Pengujian
dan Laboratorium Kalibrasi. Jakarta: Komite Akreditasi Nasional.
La Ega C.C Nurnitri, Rizal Syarif. 2003. Mikotoksin Bahan Pangan. Bogor: IPB
Press.

58

Ningsih, Ratna. 2004. Pemisahan Aflatoksin B1, B2, G1, dan G2 dari Aspergillus
flavus Toksigen. Bogor: UNPAK.
RSNI 01. 2007. Batas Kandungan Mikotoksin dalam Pangan, edisi Keenam.
Jakarta: Badan Standarisasi Nasional.
Tim Kepala Pusat Informasi dan Keamanan Hayati. 2007. Pedoman Teknis
Pengujian Cemaran Kimia Mikotoksin pada Pangan Segar Asal Tumbuhan.
Winarno, F.G.1992. Kimia Pangan dan Gizi. Jakarta: PT Gramedia Pustaka
Utama.
Wood, Roger, Amders Nilsson, dan Harriet Wallin. 1998. Quality in The Food
Analysis Laboratory. London: The Royal Society of Chemistry.

59

LAMPIRAN
Lampiran 1. Struktur Jabatan PT Anugrah Analisis Sempurna

Manajer Puncak

Manajer Pemasaran
Manajer
Manajer Manajer
Keuangan
Manajer
MutuUmum Manajer
ManajerLitbang
Teknis

Tim Audit

Pengendali Dokumen

Petugas Pengambil Contoh

Penyelia PengambiilPenyelia
Contoh Lab.
Staff Umum
Penyelia Keuangan

Staff Keuangan

Analis

Penyelia

Staff Pemasaran

Lampiran 2. Bagan Alir Sampel

63

64

Lampiran 3. Prosedur Analisis Aflatoksin B1 Total dalam Pakan menurut

Park et al. 1994 of AOAC International 991.31 yang telah mengalami
pengembangan.
25 gr sampel kacang tanah
halus
+ 125 ml metanol 70%
+5 gr Nacl

Blender 2 menit kecepatan

high
Saring dengan KS.
Berabu
15 ml fltrate, tabung
centrifuge, + 30 ml
aquabidest
Saring dengan KS. microfber
15 ml fltrat

Kolom Afnitas (aflatest)

+ 10 ml Aquabidest

Elusi dengan 1 ml
methanol 100%
Dikeringkan dan + 100 l TFA
Siap diinjek ke dalam HPLC
Fase gerak metanol : asetonitril :
aquabidest (30 : 10 : 60)

65

Lampiran 4. Perhitungan Pembuatan Standar Aflatoksin Campuran (G 1,

B1, G2, dan B2).
Larutan standar yang tersedia, mempunyai komposisi sebagai
berikut:

Tabel 15. Komposisi Standar induk

Konsentra
si
10 ppb
20 ppb
50 ppb

AFB1

AFG1

AFG2

AFB2

4
8
20

4
8
20

1
2
5

1
2
5

Kemudian dikeringkan hingga agak kering, ditambahkan dengan

TFA sebanyak 100 l, lalu didiamkan selama 2 jam, kemudian
ditambahkan 900 l acetonitrile : aquabidest 1 : 9.

Apabila yang tersedia larutan induk dengan konsentrasi 2600

ppb maka diencerkan hingga konsentrasi 1000 ppb terlebih dahulu
sebanyak 1 ml atau 1000 l. Dengan rumus pengenceran:

V1 x K1 = V2 x K2
Keterangan: V1 = Volume awal (l)
V2 = Volume akhir (l)
K1 = Konsentrasi awal (ppb)
K2 = Konsentrasi akhir (ppb)

K1 = 2600 ppb

V1 x 2600 ppb = 1000 l x 1000

ppb
V1 = 384,6 l

Setelah didapatkan pengenceran dengan konsentrasi 1000 ppb, Dibuat

larutan dengan konsentrasi masing-masing sebesar 10 ppb ; 20 ppb ;

66

50 ppb. Kemudian dikeringkan hingga agak kering, ditambahkan

dengan TFA sebanyak 100 l, lalu didiamkan selama 2 jam, kemudian
ditambahkan 900 l acetonitrile : aquabidest 1 : 9.

67

Lampiran 5. Perhitungan Spiking sampel

Sebelum menghitung %RPD, harus diketahui sampel yang akan

dispike terlebih dahulu, kemudian dapat menghitung %RPD pada
kontrol sampel aflatoksin.
Misalnya ingin spiking sampel aflatoksin sebanyak 5 ppb, maka:

5 ppb=

5g
Xg
=
1000 g 25,0000 g

X =0,125 g
Standar aflatoksin yang tersedia sebesar 1000 ppb, maka:

1000 g 0,125 g
=
1000 ml
X ml
Pada ppb memiliki satuan g/L satuan tersebut dapat diubah
menjadi g/ml. Sehingga hasil yang ditambahkan dari standar
aflatoksin 1000 ppb sebanyak 125 l.
Apabila ingin mengetahui kosentrasi berapa yang di spike pada
aflatoksin G1 yang di spiking

sebanyak 10 ppb berdasarkan

perbandingan komposisi penyusunnya, yaitu:

4
x 10 ppb
10
Maka hasilnya sebesar 4 ppb.

68

Lampiran 6. Perhitungan Kadar Analisis Aflatoksin Total (G 1, B1, G2, dan

B2).
Tabel 16. Data konsentrasi (ppb) sampel kacang tanah
Sampel

Hasil (ppb atau g/kg)

Jumlah
(g/kg)

12.010 a

G1
TT

B1
4,72

G2
TT

B2
0,77

5,49

12.010 b

TT

4,86

TT

0,76

5,62

Keterangan: TT (Tidak Terdeteksi)

Contoh perhitungan kadar aflatoksin B1 dalam sampel 12.010 a:

areaintercept
fp
slope
ppb contoh=
bobot contoh

362543
25
76799.0219
ppb contoh=
25.0360

ppb aflatoksin B1 = 4,72 g/kg

68

69

Lampiran 6. Kromatogram Standar dan Sampel Kacang Tanah

70

71

72

73