Abstrak

potensi produksi bioetanol dari etanol-toleran Bacillus cereus regangan GBPS9

menggunakan ampas tebu dan
singkong kulit sebagai bahan baku diselidiki. The Bacillus cereus GBPS9
digunakan dalam penelitian ini diisolasi dari
agro-limbah berdampak tanah dan diklasifikasikan berdasarkan analisis
filogenetik gen 16S rRNA-nya. Urutan
isolat tersebut telah disimpan di GenBank di bawah nomor aksesi KT318371.1.
Isolat terpilih
berdasarkan kemampuan selulolitik, toleransi konsentrasi etanol dari 6% (v / v)
dan kemampuan untuk memfermentasi gula menjadi etanol.
Substrat yang digunakan dalam penelitian ini adalah kulit singkong dan ampas
tebu. analisis komposisi kimia
menunjukkan total karbohidrat dan isi lignin (% berat kering) dari 69,6 1,2 dan
13,9 0,4 untuk kulit singkong dan 70,3
1,9 dan 16,2 1,2 untuk ampas tebu, masing-masing. Bahan baku menjadi
sasaran asam, alkali dan uap
pretreatments ledakan untuk meningkatkan konten selulosa dan karena itu,
mengurangi kandungan lignin. Pretreatment terbaik
metode (steam ledakan untuk ampas tebu dan asam untuk kulit singkong)
peningkatan isi total karbohidrat
untuk 85,4 2,33 dan 80,4 2,5 untuk ampas tebu dan singkong kulit, masingmasing. Isi lignin masing
setelah pretreatment yang 4,2 0,44 dan 4,8 0,8 untuk ampas tebu dan kulit
singkong. kondisi budaya
(PH, suhu, sumber nitrogen, ukuran inokulum dan konsentrasi substrat) dari
bakteri yang dioptimalkan untuk
meningkatkan produksi selulase. Skala laboratorium fermentasi dari bahan baku
untuk etanol dilakukan di 250
mL Erlenmeyer termos. Gas Chromatography - spektrometri massa (GC-MS)
analisis kaldu fermentasi
ampas tebu dan singkong kulit substrat mengungkapkan isi etanol 18,40 dan
17,80 g / L, masing-masing.
Penelitian telah menunjukkan produksi bioetanol efisien dengan Bacillus cereus
GBPS9 menggunakan ampas tebu

dan kulit singkong sebagai bahan baku gula menjadi etanol. Komponen nonkarbohidrat lignin juga
memiliki nilai tambah aplikasi [13].
Penelitian ini bertujuan untuk menyelidiki produksi bioetanol oleh
etanol-toleran Bacillus cereus regangan GBPS9 menggunakan ampas tebu
dan kulit singkong sebagai bahan baku.
Bahan dan Metode
Ampas tebu dan pengumpulan singkong, pengolahan dan
penumbukan
The ampas tebu (SB) dan kulit singkong (CP) yang digunakan dalam
studi diperoleh dari penjual tebu lokal di Port Harcourt dan
petani singkong di Nonwa, Tai LGA, Rivers State, Nigeria, masing-masing.
biomassa dicuci dan dikeringkan pada suhu atmosfer selama 3
hari. Biomassa kering selanjutnya digiling dengan blender listrik
(Philips blender HR2001, Jepang), disaring dengan 60 Mesh (0.250 mm)
saringan dan disimpan dalam kondisi kering sampai digunakan.
Analisis kimia dari bahan baku
Metode yang dijelaskan oleh Milne et al. [14] digunakan untuk menentukan
bahan kering, asam serat deterjen (ADF) dan serat deterjen netral
(NDF) isi dari ampas tebu dan singkong kulit. Mentah
protein ditentukan dengan metode Kjeldahl dan total karbohidrat oleh
Metode Clegg Anthone seperti yang dijelaskan oleh Sluiter et al. [15]. Metode
dijelaskan oleh Sluiter et al. [16] digunakan untuk menentukan serat kasar dan
abu Total.
Selulosa: Serat deterjen asam (ADF) konten digunakan untuk
estimasi selulosa, menggunakan metode standar yang dijelaskan oleh
Sluiter et al. [15]. Isi wadah tertutup dengan didinginkan
(15oC) 75% (24 N) H2SO4 dan diaduk dengan batang kaca untuk pasta halus,

melanggar semua benjolan. Kemudian wadah itu setengah penuh dengan asam.
setelah 1
h ketika asam dialirkan, wadah diisi ulang dengan asam 72%.
Tiga jam kemudian, asam disaring sebanyak mungkin dengan vakum;
konten dikeringkan pada 100oC semalam dan ditimbang. Hilangnya berat
diambil sebagai selulosa dan dihitung menggunakan rumus sebagai berikut:
() Berat ADF Wr. setelah trt asam. 100
Berat sampel
ADF%
=
Wr = Berat residu kering.; trt. = Pengobatan
Hemiselulosa: hemiselulosa ditentukan oleh perbedaan
antara netral serat deterjen NDF (%) dan ADF (%).
Hemiselulosa (%) = NDF (%) - ADF (%)
Lignin: Residu yang tersisa setelah penentuan selulosa
diperlakukan dengan 25 ml KMnO4 penyangga selama 90 menit pada 20-25oC.
lignin adalah
terlarut meninggalkan cutin dan silika sebagai bahan larut. Isi
kemudian disaring melalui beraspal sinter wadah menggunakan hisap lembut
dan residu dicuci dengan air suling, kemudian dengan aseton. Percobaan
dan residu dikeringkan dalam oven pada 100 C.
protein kasar (CP): protein kasar ditentukan dengan Kjeldahl
Metode (15). Satu gram sampel diproses (W) telah dicerna dengan
H2SO4 pekat dengan adanya campuran katalis yang mengandung
HgSO4 dan K2SO4 (1: 9). sampel dicerna diencerkan dengan air
untuk volume 250 ml; 10 ml aliquot sampel diencerkan dicampur
dengan 10 ml larutan NaOH (40%). reaksi alkali berlebih dan
campuran disuling dengan uap di hadapan 50 mg seng debu

dalam peralatan distilasi mikro-Kjeldahl. amonia sehingga dibebaskan

dikumpulkan di 2% larutan asam borat yang mengandung beberapa tetes
campuran
Indikator (metil merah dan biru metilen). distilat yang diperoleh
dititrasi terhadap 0,01 N H2SO4. Sebuah kosong juga berjalan di bawah
kondisi yang sama. Dari volume aktual 0,01 N H2SO4 digunakan,% yang
nitrogen dihitung dengan menyamakan 1 ml 0,01 (NH3) 2SO4 ke 0,00014
g nitrogen. Untuk mendapatkan persentase protein kasar,% nitrogen adalah
dikalikan dengan 6,25.
Nitrogen () X 0,00014 250 100 100
10 W
%

=
CP (%) = Nit% 6,25
X = ml 0,01 N H2SO4 digunakan
1 ml 0,01 N H2SO4 = 0,00014 g NH3 nitrogen
W = Berat sampel dalam gram
250 = Faktor Pengenceran; 6.25 = N faktor konversi protein
Bahan baku pra-perlakuan
Bahan baku masing-masing dikenai uap ledakan, asam dan
metode pra-perlakuan alkali.
Uap ledakan (SE) pretreatment dari bahan baku: SE
Metode pretreatment dijelaskan oleh Sharma et al. [17] dipekerjakan
untuk pra-pengobatan biomasa yang digunakan dalam penelitian ini dengan
sedikit
modifikasi. Sepuluh (10) gram setiap biomassa ditangguhkan di 90

ml air suling dalam labu kerucut (PYREX Erlenmeyer Flask,

USA) dan ditempatkan dalam autoclave selama 45 menit pada 121oC. Setelah
45 menit,
autoklaf paksa tekanannya oleh spontan menghapus
tutup. Residu padat dikumpulkan dan ekstensif dicuci dengan tap
air sampai pH netral tercapai. Residu padat kemudian dikeringkan
60oC semalam dengan oven listrik kelas laboratorium (Zhengzhou
Nanbei Instrumen Co Ltd, Cina) dengan menggunakan metode yang dijelaskan
oleh Fan
et al. [18]. Hidrolisat kering dianalisis untuk selulosa, hemiselulosa
dan kadar lignin dan disimpan dalam tas polypropylene steril untuk lebih lanjut
menggunakan sebelum sakarifikasi simultan dan fermentasi (SSF).
Asam (H2SO4) pretreatment dari bahan baku: pretreatment asam
metode yang dijelaskan oleh Olanbiwoninu dan Odunfa [19] dipekerjakan
untuk pretreatment dari ampas tebu dan singkong kulit. Itu
Asam yang digunakan adalah H2SO4 (Sigma-Aldrich, Jerman).
Alkali (NaOH) pretreatment dari ampas tebu: Alkali
Metode pretreatment dijelaskan oleh Olanbiwoninu dan Odunfa [19])
dipekerjakan untuk pretreatment dari ampas tebu yang digunakan dalam
belajar. Alkali yang digunakan adalah NaOH (Oxoid, UK).
Isolasi dan penapisan bakteri selulolitik
Untuk mengisolasi bakteri selulolitik, aliquot dari berbagai pengenceran
(10-3-10-6) yang berlapis dalam rangkap pada selulosa Carboxylmethyl
(CMC) agar [20]. CMC agar yang terdiri dari (g / L) CMC (SigmaAldrich, Jerman), 5; NaNO3 (Lab M, India), 1; K2HPO4 (Applichem,
Jerman), 1; KCl (Lab M, UK), 1; MgSO4 (Sigma-Aldrich, Jerman),
0,5; ekstrak ragi (Sigma-Aldrich, Jerman), 0,5; glukosa (Oxoid, UK),
1 dan Agar (Sigma-Aldrich, Jerman), 17) dibuat dengan melarutkan
bahan dalam 1 L air suling. campuran dipanaskan sampai mendidih

untuk menghomogenkan sampel dan disterilisasi dalam autoklaf pada 121oC

selama 15
menit pada 15 psi. Steril cair agar CMC setelahnya dipertahankan pada
45oC dalam bak air. Lima belas sampai dua puluh (15-20) mililiter yang cair
agar ditiadakan dalam cawan petri steril dan diizinkan untuk memantapkan. Itu
diinokulasi CMC piring agar diinkubasi pada suhu 40oC selama 48 jam [20,21].
Setelah 48 jam inkubasi, masing-masing dari duplikat piring diputar
untuk kegiatan selulase dengan membanjiri piring dengan 0,1% Kongo merah
(SigmaAldrich, Jerman) solusi dan dibiarkan selama 15-20 menit dan
Kutipan: Ezebuiro V, Ogugbue CJ, Oruwari B, Ire FS (2015) Produksi Bioetanol oleh
Bacillus cereus Saring Ethanol-Toleran GBPS9 Menggunakan
Tebu Ampas tebu dan singkong Peels sebagai Bahan baku. J Biotechnol Biomater
5: 213. doi: 10,4172 / 2155-952X.1000213
Halaman 3 dari 9
J Biotechnol Biomater Volume 5 Issue 4 1000213
ISSN: 2155-952X JBTBM, sebuah jurnal akses terbuka
kemudian destained dengan 1 M NaCl (Oxoid, UK) [21]. zona halo di sekitar
bakteri selulolitik tumbuh dikonfirmasi isolat yang positif. Rasio
dari diameter zona bening diameter koloni diukur dan
tertinggi selulase dan xilanase produsen dipilih. Rasio terbesar
diasumsikan mengandung aktivitas tertinggi. isolat yang dipilih adalah
ditransfer ke minimal CMC agar miring dan miring dipertahankan pada
4oC untuk analisa lebih lanjut.
Tes toleransi etanol untuk bakteri selulolitik
Isolat yang menunjukkan aktivitas selulolitik tinggi menjadi sasaran
menjadi etanol tes toleransi. CMC kaldu diubah dengan berbagai
konsentrasi etanol (Sigma-Aldrich, Jerman) mulai dari 0
(Kontrol) sampai 10% (v / v) yang digunakan dalam prosedur penyaringan.
Sepuluh

mikroliter (10 ml) inokulum dari budaya kaldu 24 jam setiap mengisolasi
digunakan untuk menyuntik tabung reaksi yang berisi kaldu CMC steril
dengan berbagai konsentrasi etanol. tabung tes diinokulasi yang
diinkubasi selama 48 jam. Setelah 48 jam inkubasi, absorbansi membaca
pada 600 kegiatan nm dan selulase ditentukan. Isolat dengan
OD membaca tertinggi serta aktivitas selulase pada etanol tinggi
konsentrasi diambil untuk analisa lebih lanjut.
Estimasi aktivitas enzim
Kegiatan selulase diuji menggunakan asam dinitrosalisilic (DNS)
reagen (Lab M, India) dengan estimasi mengurangi gula dilepaskan dari
CMC dilarutkan dalam 0,05 penyangga M fosfat pada pH 8 [22]. kaldu budaya
disaring menggunakan Whatman kualitatif Filter Paper (Whatman,
UK) dan supernatan yang jelas menjabat sebagai sumber enzim kasar. Mentah
enzim ditambahkan ke 0,5 ml dari 1% CMC di 0,05 M dapar fosfat
dan diinkubasi pada 50oC selama 30 menit. Setelah inkubasi, reaksi adalah
berhenti dengan penambahan 3 ml DNS reagen dan direbus di 100 C di
Mandi air selama 5 menit. Pengembangan warna diamati setelah mendidih
dan gula dibebaskan ditentukan dengan mengukur absorbansi pada 540
nm. produksi selulase diperkirakan dengan menggunakan kalibrasi glukosa
kurva. Satu unit (U) aktivitas selulase dinyatakan sebagai kuantitas
enzim, yang diperlukan untuk melepaskan 1 mole glukosa per menit per ml di
bawah
kondisi pengujian standar [21].
Pemilihan calon bakteri fermentasi
Yang terbaik selulase-memproduksi bakteri (VCE-19) terpilih
berdasarkan aktivitas selulase, kemampuannya untuk memfermentasi gula
menjadi etanol
dan toleransi terhadap konsentrasi etanol hingga 6% v / v. kultur murni
VCE-19 dalam rangkap tiga yang dipertahankan pada CMC dilengkapi minimal

agar miring di kulkas (Haeir Thermocool, Cina) untuk digunakan lebih lanjut.
pengembangan inokulum
kultur murni VCE-19 diinokulasi dalam media kaldu CMC
yang mengandung 1 L air suling: 7 g K2HPO4; 0,1 g MgSO4; 2 g
KHPO4 (Applichem, Darmstadt, Jerman); ekstrak ragi 1 g; 0,5 g
Natrium sitrat (Lab M, India); 10 g glukosa (Sigma-Aldrich, Jerman)
(PH 7) dan diinkubasi selama 24 jam dalam inkubator rotary shaker (Zhengzhou
Nanbei Instrumen Co Ltd, Cina). Setelah 24 jam periode fermentasi
sel vegetatif digunakan sebagai sumber inokulum.
Optimasi kondisi budaya untuk selulase dan mengurangi
produksi gula
Pengaruh suhu pada produksi selulase dan
gula pereduksi: Pengaruh suhu inkubasi yang berbeda (25, 30,
35, 40, 45, 50 dan 60oC) pada produksi selulase isolat yang
belajar sementara parameter lainnya tetap konstan.
Pengaruh pH pada produksi selulase dan mengurangi
gula: Pengaruh pH yang berbeda (5, 6, 7, 8, 9, 10 dan 11) pada
produksi selulase isolat yang dipelajari dengan menyesuaikan pH
dari media kultur yang mengandung ampas tebu pra-diperlakukan dan singkong
kulit dengan 0,1 M HCl dan NaOH 0,1 M.
Pengaruh sumber nitrogen pada produksi selulase dan
mengurangi gula: Untuk mengetahui pengaruh sumber nitrogen yang berbeda
pada produksi selulase oleh isolat, setiap media kultur
mengandung pra-diperlakukan ampas tebu dan singkong kulit telah dilengkapi
dengan 1% (w / v) dari masing-masing sumber nitrogen berikut: NaNO3, kasein,
NH4NO3, pepton, urea dan ekstrak ragi.
Fenotipik dan karakterisasi biokimia yang dipilih
bakteri

Isolat bakteri yang dipilih menjadi sasaran beberapa biokimia

tes seperti yang dijelaskan oleh Holts et al. [23]; MacFaddin [24] dan Madigan et
Al. [25].
identifikasi molekuler isolat
ekstraksi DNA, PCR amplifikasi dari bakteri gen 16S rRNA
dan elektroforesis gel dari isolat tersebut dilakukan di Molekuler
Biologi Laboratorium Institut Nasional untuk Penelitian Medis (Nimr)
Yaba, Lagos, Nigeria. Produk PCR dikirim ke GATC Biotech AG
(Eropa Genome dan Diagnostik Centre - Jakob-Stadier-Platz 7,
78.467 Constance, Jerman) dimana Sanger Sequencing dilakukan
di luar.
DNA kromosom ekstraksi: ekstraksi DNA dilakukan
langsung dari sampel menggunakan ekstraksi kit Qiagen QiaAMP DNA
sesuai dengan instruksi produsen.
PCR amplifikasi bakteri gen 16S rRNA: The PCR
amplifikasi gen 16S rRNA dilakukan menggunakan primer
mengatur 27F- 5'AGA GTT TGA TYM TGG CTC AG -3 ', dan 515R 5'
TTA CCG CGG CKG CTG GCA C-3 '. Reaksi dilakukan
menurut metode yang dijelaskan oleh Yamada et al. [26] dan Katsura et
Al. [27]. Dua puluh microlitres (20 ml) campuran reaksi yang mengandung 1X
PCR
penyangga (Solis Biodyne, Estonia), 1,5 mM Magnesium klorida (Solis
Biodyne, Estonia), 0,2 mM setiap dNTP (Solis Biodyne, Estonia), 2 U
Taq DNA Polymerase (Solis Biodyne, Estonia), 20 pmol primer masing-masing
dan air steril digunakan untuk membuat campuran reaksi. PCR adalah
dilakukan dalam thermal cycler Eppendorf Nexus dengan berikut ini
parameter bersepeda: sebuah denaturasi langkah awal pada 95 C selama 5
menit,
diikuti oleh 30 siklus berturut-turut dari denaturasi pada 95 C selama 30 detik.,

annealing pada 55 C selama 45 detik. dan ekstensi pada 72 C selama 1

menit. Sesudah ini,
ekstensi akhir pada 72 C selama 10 menit dilakukan.
Agarosa gel elektroforesis: Setelah reaksi PCR, PCR
produk dipisahkan pada gel agarosa 1,5% (Solis Biodyne, Estonia).
Seratus pasangan basa (100 bp) DNA ladder (Solis Biodyne, Estonia)
digunakan sebagai DNA marker berat molekul. Elektroforesis dilakukan
pada 80 V selama 1 jam 30 menit dan gel dilihat di bawah sinar UV setelah
pewarnaan dengan etidium bromida (Solis Biodyne, Estonia).
analisis urutan: Urutan yang dihasilkan oleh sequencer
divisualisasikan menggunakan Chromaslite untuk dasar panggilan. Bioedit
digunakan
untuk urutan editing, sebelum melakukan Penyelarasan lokal Dasar
Cari Tool (BLAST) menggunakan NCBI (Pusat Nasional untuk Bioteknologi
Informasi) Database (https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi).
urutan serupa download dan selaras dengan CLUSTALW dan
pohon filogenetik digambar dengan MEGA 6 software [
Hasil dan Diskusi
Analisis kimia dari ampas tebu dan kulit singkong
Analisis komposisi proksimat sebelum dan setelah pra-perawatan
dari biomassa yang digunakan dalam penelitian ini diberikan pada Tabel 1 dan 2.
Hasil
menunjukkan bahwa total karbohidrat yang tersedia dari ampas tebu dan
singkong
kulit sebelum pretreatment yang 70,3 1,9 dan 69,6 1,2 masing-masing.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa total yang tersedia karbohidrat untuk
ampas tebu dan
kulit singkong meningkat menjadi 85,6 2.33and 81,5 5,8 masing-masing.
Sementara
kadar lignin berkurang dari 19,2 1,2-4,2 0,44 untuk tebu
ampas tebu dan 13,9 0,4-4,8 0,8 untuk kulit singkong. Hasil yang diperoleh

menunjukkan bahwa uap ledakan dan metode pra-perlakuan asam adalah

metode terbaik untuk ampas tebu dan singkong kulit.
Skrining dan toleransi etanol uji
Dari 45 isolat bakteri dari tanah limbah pertanian disaring
untuk produksi selulase, 27 menunjukkan berbagai zona clearance. Satu
selulase-memproduksi isolat (VCE-19) dengan kapasitas untuk fermentasi
glukosa menjadi etanol dan tumbuh pada konsentrasi etanol 6% dipilih.
Zona clearance diperoleh untuk VCE-19 adalah 2,75 0,02 sementara
pembacaan kerapatan optik dari 0,4729 0,03 untuk tes toleransi etanol.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa isolat yang dipilih mampu tumbuh pada
etanol
konsentrasi 6% (v / v).
Optimasi kondisi budaya untuk produksi
selulase
Pengaruh suhu: Pengaruh inkubasi yang berbeda
suhu pada produksi selulase oleh VCE-19 menggunakan yang berbeda
limbah pertanian disajikan pada Gambar 1. Menggunakan ampas tebu sebagai
substrat,
produksi selulase maksimum 532,18 5,17 U / ml diperoleh
pada suhu 40oC. Ketika kulit singkong digunakan sebagai substrat maksimum
produksi selulase adalah 570,84 4,64 U / ml diperoleh pada suhu 40oC. Ini
Hasil penelitian menunjukkan bahwa VCE-19 menghasilkan selulase tertinggi
pada inkubasi
suhu 40oC sambil memanfaatkan kedua ampas tebu dan kulit singkong.

ampas tebu dan kulit singkong menggunakan B. cereus regangan GBPS9. bakteri
ini
adalah kandidat yang unik untuk produksi bioetanol karena mampu
mentolerir konsentrasi etanol dari 6% v / v, melaksanakan hidrolisis dan
fermentasi hidrolisat. Kualitas memiliki keuntungan dari

membuat proses produksi etanol lebih ekonomis. Tebu

ampas tebu dan singkong kulit adalah contoh dari limbah pertanian dan kaleng
dikonversi untuk bioetanol [1,31]. Analisis kimia sebelum dan sesudah
kominusi dari ampas tebu dan singkong kulit menunjukkan Kapasitas bahan baku
untuk produksi etanol. Selain itu, telah
melaporkan bahwa perbedaan kecil dalam komposisi kimia dari ampas tebu
antara varietas yang berbeda dari tebu ada [32]. Amores et al.
[5] melaporkan karbohidrat total 65% berat kering untuk tebu
ampas tebu digunakan dalam produksi etanol. El-Tayeb et al. [33] melaporkan
Total
komposisi karbohidrat dari 86,9% w / w untuk ampas tebu. Hasil
analisis komposisi untuk kulit singkong mentah yang digunakan dalam penelitian
ini adalah
mirip dengan yang diperoleh oleh Marx dan Nquma [34]. Sebanyak karbohidrat
persentase berat kering 67% dilaporkan oleh Marx dan Nquma [34]
untuk kulit singkong yang digunakan dalam produksi bioetanol. Pilihan singkong
sebagai bahan baku untuk produksi bioetanol sangat menarik
terutama di Nigeria. Hal ini karena singkong diproduksi dalam jumlah besar
kuantitas dan Nigeria tetap menjadi produsen terbesar singkong di
dunia sejak tahun 2005 [8]. Selain itu, gersang, tanah marginal di mana tanaman
lain,
seperti, tebu dan gula bit gagal dapat dengan mudah mendukung pertumbuhan
singkong
[4,9]. Isi selulosa tinggi bahan baku membuat mereka cocok
untuk produksi etanol.
Pra-pengobatan merupakan langkah penting dalam penggunaan lignocellulosics
untuk
produksi bioetanol. Joshi et al. [35] dijelaskan pra-perawatan sebagai
paling penting tingkat membatasi langkah dalam produksi bioetanol secara
keseluruhan
proses. Pre-treatment dilakukan untuk mematahkan lignin-hemicellulosepectin

kompleks, mengganggu / melonggarkan-up struktur kristal selulosa

dan meningkatkan porositas dari biomassa yang digunakan dalam penelitian ini.
Kapan
perubahan ini dicapai, sakarifikasi enzimatik menjadi lebih mudah,
sehingga kadar gula difermentasi lebih tinggi [36-38]. Pra-perlakuan
metode dipekerjakan mencapai delignifikasi tinggi dari yang berbeda
biomassa pertanian. Metode pretreatment juga diperlukan
untuk mengurangi kandungan sianida dari kulit singkong. Hal ini diperlukan
karena sianida adalah bahan kimia beracun untuk kebanyakan bakteri dan
konstituen
dari kulit singkong. Kehadiran sianida dapat secara signifikan mengurangi
efisiensi bakteri fermentasi untuk menghasilkan bioetanol [11].
Para peneliti [5,39] telah melaporkan metode pra-perlakuan yang berbeda
untuk ampas tebu. Dalam penelitian ini metode pra-perawatan yang dipilih
untuk ampas tebu adalah ledakan uap. Penggunaan ledakan uap pradiperlakukan
ampas tebu didukung oleh beberapa penelitian. Ferreira-Leito et al. [39] dan
Amores et al. [5] telah melaporkan ledakan uap pra-pengobatan untuk
ampas tebu digunakan sebagai bahan baku untuk produksi etanol. Martin et al.
[40]
melaporkan ampas tebu pra-perlakuan dengan ledakan uap menggunakan yang
berbeda
meresapi agen. Asam pra-perawatan adalah pilihan pra-perlakuan
Metode yang digunakan pada kulit singkong dalam penelitian ini. Encer H2SO4
pretreatment
dipekerjakan mencapai hingga 65% delignifikasi dari singkong
kulit. Hal ini mirip dengan pekerjaan yang dilakukan oleh Olanbiwoninu dan
Odunfa
[19]; mereka mempelajari peningkatan mengurangi produksi gula
dari kulit singkong dengan studi pra-perlakuan yang berbeda dan memperoleh
tertinggi gula pereduksi dengan asam (H2SO4) pra-perawatan. hasil yang sama

telah dilaporkan oleh Kongkiattikajorn dan Yoonan [41].

Isolat yang digunakan dalam penelitian ini diidentifikasi sebagai Bacillus cereus
regangan
GBPS9 berdasarkan analisis filogenetik gen 16S rRNA. Itu
Urutan yang dihasilkan telah disimpan di GenBank di bawah
nomor aksesi KT318371.1. Ada laporan produksi
selulase oleh strain Bacillus cereus dan akibatnya potensi mereka
dalam produksi bioetanol. organisme ini menunjukkan potensi tinggi
untuk selulase dan produksi bioethanol pada fase stasioner
pertumbuhannya dengan semua biomassa yang digunakan. Produksi selulase
oleh
strain Bacillus cereus didukung oleh banyak peneliti [21,42]. Di
Untuk mencapai produksi selulase maksimum kondisi budaya
medium inkubasi bakteri dioptimalkan. Efeknya
pH, suhu dan nitrogen pada produksi selulase oleh B.
cereus dipelajari. Hasil yang diperoleh menunjukkan perbedaan yang signifikan
(P <0,05) berlaku dari semua parameter tersebut pada produksi selulase.
Immanuel et al. [43] melaporkan bahwa kualitas selulosa, suhu,
aerasi, sumber karbon, masa inkubasi, aditif menengah, pH
dari media dan kehadiran inducer adalah parameter penting
untuk produksi dioptimalkan enzim selulase. peneliti lain
[21,44-46] juga telah melaporkan peningkatan produksi selulase oleh
optimasi kondisi budaya.
Suhu optimum, pH dan sumber nitrogen untuk selulase
produksi yang 40oC, 7 dan ragi ekstrak untuk kedua substrat. Ini
Temuan ini mirip dengan hasil yang diperoleh dalam penelitian lain. Fagade dan
Bamigboye [47] melaporkan aktivitas selulase optimum selama tiga Bacillus
spesies ketika diinkubasi pada suhu 40oC. suhu inkubasi
merupakan faktor penting dalam produktivitas enzimatik [48]. enzim maksimum

produksi dicapai pada suhu optimum dan penurunan

dalam produksi enzim pada suhu yang lebih rendah atau lebih tinggi mungkin
karena
untuk fakta bahwa pada suhu tersebut, pertumbuhan organisme itu
menghambat, menyebabkan penurunan dalam sintesis enzim [49]. Di
Selain itu, produksi lebih banyak aktivitas pada suhu optimum mungkin
disebabkan oleh aktivitas metabolisme lebih cepat dan meningkatkan
kandungan protein
dan produksi enzim ekstraseluler dalam supernatan budaya. pada sangat
suhu rendah, membran memperkuat dan suhu tinggi kerusakan
mikroorganisme oleh denaturasi enzim, operator transportasi dan lainnya
protein sehingga menurunkan aktivitas enzim [50]. Fagade dan Bamigboye
[42] melaporkan aktivitas selulase optimum pada pH 7 untuk Pseudomonas
putida, Bacillus subtilis dan B. lichenformis saya tumbuh rebus jagung. Tinggi
Kegiatan selulolitik adalah penting untuk produksi bioetanol optimal [1].
Hasil etanol diperoleh dari penelitian ini lebih tinggi dari hasil (7,5
g / L) yang diperoleh dari fermentasi ampas tebu hidrolisat
menggunakan Pichia stipitis DSM 3651 seperti dilansir Canilha et al. [51] dan
17,1 g / L seperti dilansir Ingale et al. [52] dari pisang semu batang.
Namun, hasil yang lebih rendah dari yang dilaporkan [53] etanol maksimum
hasil 58,6 g / L dari tetes kedelai oleh Saccharomyces cerevisiae.
Hasil ini diperoleh dapat dengan dibandingkan dengan hasil dari tipe liar lainnya
bakteri. Svetlitchnyi et al. [54] melaporkan hasil etanol maksimum 3,5
g / l dari jenis bakteri Caldicellulosiruptor DIB 004C liar. Sato
et al. [55] melaporkan produksi etanol dari 4 g / l berdasarkan jenis Clostridum
liar
thermocellum regangan I-1-B dan ditingkatkan 23,6 g / l etanol oleh yang sama
saring bila ditanam dalam media dioptimalkan. The fermentasi bakteri
B. cereus GBPS9 digunakan dalam penelitian ini mampu juga memproduksi lain

fermentasi penting produk (aseton, etil asetat, n-propanol,

isobutanol dan asam asetat). Produk ini bisa mengurangi
kualitas produksi etanol dari isolat tersebut. Untuk produksi komersial
etanol dari strain, produksi fermentasi ini
produk yang disertai produksi etanol, harus diatur
untuk hasil etanol ditingkatkan.
Kesimpulan
Penelitian telah menunjukkan produksi bioetanol efisien dengan
Bacillus cereus GBPS9 menggunakan ampas tebu dan singkong kulit sebagai
bahan baku. Ia juga mengamati bahwa kondisi budaya mempengaruhi
Kemampuan isolat untuk menghasilkan selulase.