Page 1

44
Dynein sitoplasmik adalah akhir minus bermotor mikrotubulus diarahkan
protein dengan berbagai fungsi selama interfase dan mitosis.
Bukti terbaru telah mengidentifikasi beberapa peran yang dimediasi oleh
fraksi dynein sitoplasma terkait dengan korteks sel.
Sejauh ini, ini termasuk migrasi nuklir, gelendong mitosis
orientasi, dan reorientasi cytoskeletal selama luka
penyembuhan, tetapi yang lain mungkin. Kemungkinan bahwa cortically
Bentuk terikat dynein mungkin mewakili paling kuno
Negara evolusi dibahas.
Alamat
University of Massachusetts Medical School, Biotech 4, Suite 312,
377 Plantation Street, Worcester, Massachusetts 01605, USA
Sekarang alamat: Departemen Patologi, Columbia University
College of Dokter dan Ahli Bedah, 630 Barat 168 Street, New York,
NY 10032, USA
* E-mail: Richard.Vallee @ umassmed.edu
Saat Opini Biologi, your 2.002 14:44-49
0955-0674/02 / $ - lihat hal depan
2002 Elsevier Science Ltd All rights reserved.
Singkatan
GFP
green fluorescent protein
Pengantar
Hubungan antara sitoskeleton dan korteks sel adalah penting
elemen dari organisasi arsitektur sel,
mempengaruhi morfologi dan motilitas, dan integrasi
kegiatan dengan orang-orang dari sel lainnya. Meskipun kortikal
interaksi yang melibatkan filamen intermediate dan aktin
mikrofilamen baik ditandai, interaksi antara
mikrotubulus dan korteks sel hanya baru-baru ini
didokumentasikan dan kurang dipahami dengan baik. Ini mungkin
karena karakteristik yang sangat dinamis mikrotubulus
dan mereka lebih transien pertemuan dengan margin sel.
Bukti terbaru telah terlibat dalam sitoplasma dynein
mediasi interaksi antara mikrotubulus dan sel
korteks dalam berbagai konteks fisiologis penting.
Dynein sitoplasma terkenal karena keterlibatannya dalam
pengangkutan berbagai membran dan nonmembran organel ke mikrotubulus dikurangi berakhir. -Nya
peran termasuk transportasi aksonal cepat surut dan aspek
posisi dan fungsi endosomes, lisosom, yang endoretikulum Plasmic, aparatus Golgi dan inti [1,2].
Dynein sitoplasma juga jelas terlibat dalam mitosis,
selama yang berpartisipasi dalam orientasi spindel, aspek

kromosom gerakan dan organisasi spindle pole.

Dynein berinteraksi dengan yang lain kompleks multisubunit, dynaktin, yang terlibat dalam menghubungkan dynein untuk kinetochores
dan organel vesikuler [3-5], dan juga telah dilaporkan
untuk meningkatkan processivity dynein di dalam tes motilitas vitro [6].
Review ini akan fokus pada penampakan terbaru dari sitoplasma
dynein dan dynactin di korteks sel, serta genetik
dan bukti genetika molekuler yang kedua kompleks
fungsi di situs ini. Pentingnya temuan ini untuk
sel dasar fisiologi, penyakit dan evolusi bermotor protein
akan dibahas.
Bukti untuk dynein kortikal dari rendah
eukariota
Beberapa data yang paling jelas melibatkan dynein sitoplasma
dan dynactin dalam interaksi antara mikrotubulus dan
sel korteks telah datang dari Saccharomyces ragi budding
cerevisiae. Dalam ragi, gelendong mitosis adalah intranuklear. Itu
gelendong mitosis tertutup menjadi berorientasi sejajar dengan
Ibu / bud sumbu dan kemudian ditransfer melalui leher
untuk mencapai segregasi kromosom yang tepat. Mutasi di
dynein sitoplasmik dan subunit dynactin menyebabkan kesalahan
dalam transfer nuklir ke kuncup dan, akibatnya, di kromatidsegregasi mosome [7,8]. Menggunakan protein fluorescent hijau
(GFP)-tubulin untuk mengikuti perilaku mikrotubulus dalam hidup
ragi selama mitosis, yang menyapu di sepanjang mikrotubulus berakhir
korteks [9] dan geser dari mikrotubulus keseluruhan [10

]
diamati. Setiap jenis gerakan dikaitkan
dengan peristiwa pemindahan nuklir. Dalam dynein atau dynactin
sel mutan, mikrotubulus meluncur di sepanjang korteks adalah
dihambat, dan mikrotubulus yang rimbun dan lemas,
seolah-olah yang tepat lampiran dynein dikendalikan tidak hanya
mikrotubulus motilitas namun dinamika pertumbuhan serta. Ini
pengamatan dapat dijelaskan jika dynein dikaitkan
dengan korteks sel, dari mana situs itu diberikan berlaku pada
berakhir atau sepanjang sisi mikrotubulus sitoplasma
(Gambar 1a). Biokimia bukti interaksi
antara dynein dan Num1p protein kortikal memiliki
baru-baru ini diperoleh (lihat di bawah), mendukung ini
kemungkinan, namun, dynein atau dynactin sejauh
hanya ditemukan di kutub spindle dan sepanjang
sitoplasma mikrotubulus, dan lokalisasi protein
di korteks masih kurang.
Dalam pombe Schizosaccharomyces, dynein tidak diperlukan untuk
posisi dan orientasi dari inti selama mitosis,

tetapi malah terlibat dalam 'osilasi' nuklir diamati

selama profase meiosis [11]. Dalam sistem ini, GFP-tagged
dynein bisa dideteksi biasanya sebagai tempat yang berhubungan dengan
astral mikrotubulus dalam daerah kontak dengan sel
korteks dan ke arah mana nukleus diambil.
Dalam Aspergillus berfilamen jamur dan nidulans
Neurospora crassa, dynein sitoplasma dan dynactin yang
diperlukan untuk redistribusi inti dalam syncytial hifa saat mereka memanjang. Rantai dynein berat adalah
lokal ke ujung hifa dalam setiap organisme [12,13];
Namun, tidak jelas apakah dynein asosiasi dengan
korteks, atau jika ia mengikat struktur vesikular pada hifa
ujung [14,15]. GFP-tagged rantai dynein berat juga telah
ditemukan di ujung mikrotubulus (lihat di bawah), di mana itu lagi
Dynein di korteks
Denis L Dujardin dan Richard B Vallee *
Halaman 2
Dynein di Dujardin korteks dan Vallee 45
ditemukan untuk mempengaruhi dinamika mikrotubulus [16]. Meskipun
mikrotubulus dapat menghubungi korteks, tidak jelas apakah
dynein terkait menghasilkan kekuatan traksi yang mampu
bergerak inti.
Selama pengembangan awal Caenorrhabditis elegans
embrio, kompleks Sentrosom / nuklir berputar sehingga,
dalam garis keturunan sel P, divisi berturut-turut akan berlangsung
sepanjang sumbu anteroposterior [17]. RNAi pembungkaman
salah satu dari dua subunit dynactin atau rantai berat dynein
menghambat rotasi kompleks Sentrosom-nuklir
baik dalam zigot, P0 dan P1 blastomere [18,19]
(Gambar 1b). Pada embrio yang tidak diobati, poros di P1
blastomere selaras menuju tempat kortikal DNC-1 (yang
dynactin subunit p150
Terpaku
) Terletak di lokasi yang sesuai
ke midbody dari divisi sebelumnya [18] di mana ia
diusulkan untuk melayani sebagai pelabuhan untuk memutar
Sentrosom-nuklir yang kompleks. Gonczy et al. [19] melaporkan
dynein pewarnaan rantai berat dalam pola yang lebih luas di seluruh
daerah kortikal terletak antara AB dan blastomer P1.
Apakah perbedaan distribusi antara dynein dan
dynactin memiliki implikasi fungsional atau mencerminkan perbedaan
dalam sifat-sifat antibodi tidak pasti.
Pada Drosophila, dynein rantai berat bisa jelas lokal
ke korteks posterior dari oosit bersama dengan dynactin
[20,21]. Sebuah peran dynein di RNA transportasi ke oosit

masih dalam penyelidikan intensif [21-23]. Mutasi di

para DLIS-1 protein dynein-peraturan (lihat di bawah) yang terkena dampak
nuklir posisi dalam oosit dan dynein pengungsi
dari korteks [24], namun, efek pada mikrotubulus
distribusi juga diamati, dan peran khusus untuk
dynein kortikal di oosit masih harus sepenuhnya didirikan
dalam sistem ini. Dynein juga telah terdeteksi di
blastoderm acellular tahap embrio di mana ia melokalisasi dalam
konsisten dengan aktin-kaya topi kortikal dalam pola
yang mitosis terjadi [25

] (Gambar 1c). Injeksi

antidynein antibodi atau subunit dynamitin dari
dynactin kompleks menghambat tiang Sentrosom dan spindle
pemisahan [25

, 26]. Efek ini mungkin hasil dari

gangguan dalam interaksi dengan mikrotubulus astral
kortikal dynein dan dynactin.
Bagaimana sel mamalia?
Bukti dari sel mamalia telah mendukung peran
kortikal dynein dalam fungsi mitosis spindle, termasuk beberapa
bukti yang paling jelas untuk peran dalam orientasi spindle di
Gambar 1
Cortical dynein dalam sistem yang beragam. Gerak-gerik
mikrotubulus (hitam dan garis putus-putus), sebagaimana
serta poros inti dan mitosis, yang
ditunjukkan dalam sejumlah sistem yang
dynein kortikal telah terlibat. (Lihat teks
untuk rincian lebih lanjut.) (a) Dalam S. cerevisiae, baik
lateral dan end-on interaksi antara
mikrotubulus dan korteks sel yang terlibat
dalam posisi nuklir. Meskipun sitoplasma
dynein telah terlibat dalam proses ini,
belum diterjemahkan ke korteks. (b) Dalam
C. elegans, kompleks Sentrosom-inti
dari P1 blastomere berputar untuk memungkinkan sel
Pembagian berlangsung sepanjang anteroposterior
sumbu secara dynein-dependent. Dynein
pewarnaan rantai berat (merah) diamati
seluruh korteks antara AB dan P1
blastomer, meskipun dynactin (titik kuning)
memiliki distribusi yang lebih terbatas di lokasi
yang midbody dari divisi sebelumnya.
(C) Dalam embrio Drosophila, dan dynein
dynactin telah dilaporkan diperlukan

untuk pemisahan Sentrosom selama profase

dan tahap selanjutnya dari mitosis. Dynein (red)
itu diterjemahkan ke aktin-kaya topi
sekitarnya setiap domain nuklir. (d) Dalam
terpolarisasi epitel sel MDCK, dynein,
dynactin, LIS1 dan CLIP-170 (semua dalam warna merah)
melokalisasi ke sabuk kortikal selama mitosis, seperti
serta mikrotubulus astral. Dengan metafase,
gelendong mitosis menjadi paralel berorientasi
ke pesawat epitel pada tingkat dynein
dan dynactin pewarnaan. LIS1 berlebih
ditemukan untuk mengganggu pola ini dan
mengacak orientasi spindle. Hipotesis
menarik pasukan yang terlibat dalam reorientasi spindle
ditunjukkan (hijau).
Dynein
Dynein + Dynactin
+ + LIS1 CLIP-170
Dynein?
Dynein
Dynactin
Saat Opini dalam Biologi Sel
AB
P
1
(A)
(B)
(C)
(D)
Page 3
46 your struktur dan dinamika
tertentu. Terpolarisasi, filter-dewasa MDCK sel, seperti benar
epitel, berkembang biak melalui divisi di pesawat epitel.
Dynein dan dynactin telah terlokalisasi pada situs kortikal
bawah persimpangan ketat dalam sabuk melingkar di
tingkat kumparan, serta pada mikrotubulus astral di
mitosis sel MDCK [27]. Pewarnaan yang paling menonjol
selama akhir prometaphase / metafase, periode saat
spindle menjadi berorientasi sejajar dengan epitel
pesawat, menunjukkan bahwa orientasi poros adalah
dimediasi oleh dynein menarik pada mikrotubulus astral dari
korteks [27] (1d Gambar).
Sebuah tes dari peran dynein dan dynactin di vertebrata
lapisan epitel telah datang dari studi tentang LIS1, penyakitterkait protein dalam jalur dynein. Mutasi pada

manusia LIS1 gen penyebab tipe I lissencephaly, yang parah

perkembangan otak penyakit yang ditandai dengan saraf
disorganisasi dalam korteks serebral dan dramatis
penurunan convolutions permukaan [28]. Dalam mamalia berbudaya
sel, protein LIS1 ditemukan pelokalan sama
wilayah korteks sel sebagai dynein dan dynactin selama
akhir prometaphase dan anafase, serta mitosis
kinetochores [29

]. Ekspresi dari LIS1 atau anti-LIS1

injeksi antibodi mengganggu perkembangan mitosis. Di
sel MDCK terpolarisasi, LIS1 overekspresi membubarkan
kortikal dynein / dynactin sabuk dan spindle acak
Orientasi [29

], Secara langsung mendukung peran dynein di

mengatur proses ini. Dynein juga mungkin terlibat dalam
aspek lain dari posisi spindle. Misalnya, dalam
normal atau eksperimental terdistorsi NRK sel, mitosis yang
spindle mampu menemukan pusat geometris dari
cell [30

]. Proses ini dihambat oleh injeksi

antidynein antibodi. Apakah fungsi dynein dari
korteks dalam situasi ini, dan apakah ia terlibat
dalam situasi lain yang melibatkan posisi spindle acentric
masih harus dilihat.
Bukti terbaru menunjukkan bahwa dynein mungkin sitoplasma
terlibat dalam lebih luas fungsi kortikal di
vertebrata. Hal ini juga ditetapkan bahwa, selama penyembuhan
dari terluka lapisan berbudaya fibroblast, sel-sel pada luka
tepi pertama reorientasi centrosomes dan mikrotubulus
jaringan terhadap luka, dan kemudian bermigrasi untuk mengisinya masuk
Untuk menguji apakah dynein terlibat dalam proses ini, dynein
atau dynactin fungsi dihambat oleh overekspresi tersebut
dari subunit dynamitin dari dynactin, atau dengan injeksi
antidynein antara rantai antibodi [31

, 32

]. Itu
reorientasi Sentrosom dan mikrotubulus
jaringan yang diblokir. Apakah dynein bertindak pada sel
korteks atau di tempat lain dalam sel belum diketahui;
Namun, berdasarkan bukti-bukti untuk
reorientasi mikrotubulus sitoplasma melalui kortikal

dynein, itu menarik untuk berspekulasi bahwa perilaku

mikrotubulus selama tahap awal penyembuhan luka
merupakan manifestasi lain dari proses ini. Kami mencatat
bahwa reorientasi Sentrosom dan mikrotubulus
jaringan yang terkait dengan penyembuhan luka memerlukan
aktivasi Cdc42 GTPase kecil. Hal ini juga telah
ditemukan kasus setelah kontak sel T dengan
antigen-presenting sel [33], meskipun seorang keterlibatan
dynein dalam penyusunan ulang sel T cytoskeletal tetap
untuk diselidiki.
Dynein sitoplasma telah baru-baru ini telah diterjemahkan ke
adherens persimpangan di PtK2 sel epitel oleh immunofluoresensi mikroskop [34

]. Yang berlebih dari

cateninmenyebabkanperturbasidariorganisasiradial
mikrotubulus dan kontak mereka dengan adherens persimpangan
kurang sering. Pewarnaan dynein di persimpangan itu
berkurang, meskipun hanya setelah berkepanjangan ekspresi.
Dynein sitoplasma mungkin, akhirnya, terlibat dalam tambahan
mode interaksi antara mikrotubulus dan sel
korteks. Berakhir mikrotubulus telah dilaporkan untuk berinteraksi
dengan adhesi focal [35]. Mikrotubulus tumbuh menuju dan
yang distabilkan oleh adhesi fokus dan, pada gilirannya, jelas
mempengaruhi omset struktur ini. Sebuah peran potensial
untuk dynein dan dynactin dalam menengahi mikrotubulus fokus
interaksi adhesi disarankan oleh overekspresi tersebut
dari subunit p62 dari dynactin. p62 kuat diterjemahkan ke
focal adhesi melalui domain LIM nya [36], motif
ditemukan dalam sejumlah komponen adhesi focal, namun,
bukti masih kurang untuk kehadiran endogen
dynein atau dynactin pada adhesi fokus, atau fisiologis
peran p62 dalam mikrotubulus menargetkan struktur.
Molekul dasar dynein asosiasi dengan
korteks
Korteks sel adalah kompleks dan tidak sempurna didefinisikan
struktur. Hal ini membuatnya sangat menantang untuk
menjelaskan mekanisme attachment untuk sitoplasma
dynein, namun petunjuk telah datang dari berbagai
sistem. Karena tidak ada subunit dynein memiliki
membran-mengikat motif urutan, telah tampaknya tidak mungkin
yang dynein mungkin mengasosiasikan dengan membran plasma
(Meskipun melihat [37]). Itu dynein dapat berinteraksi dengan
sitoskeleton kortikal adalah, sebaliknya, disarankan oleh kerugian
lokalisasi dynein kortikal dalam sel MDCK diperlakukan dengan
cytochalasin D [27], namun, depolimerisasi tersebut dari

aktin tidak berpengaruh pada reposisi Sentrosom

selama penyembuhan luka [31

, 32

] Atau pada fungsi dynein di

ragi [38]. Apakah perbedaan ini mencerminkan alternatif
mode lampiran untuk dynein, situs yang berbeda dari tindakan atau
perbedaan sejauh dari depolimerisasi aktin adalah
pasti. Dalam ragi, dynein belum diterjemahkan ke
korteks, namun, rantai dynein berat telah ditemukan
untuk coimmunoprecipitate dengan Num1p, protein yang ditemukan di
korteks ibu dan sel tunas selama pembelahan sel
[39

, 40

]. Tidak homolog jelas Num1p belum pernah

diidentifikasi pada eukariota lebih tinggi.
Dynein terkait dengan setidaknya dua kelas organel melalui
kompleks dynactin. Gangguan dynactin oleh
berlebih dari subunit dynamitin dirilis dynein
dari kedua kinetokor mitosis [3] dan Golgi
permukaan [5]. Apakah ini hirarki interaksi adalah
Page 4
Dynein di Dujardin korteks dan Vallee 47
terlibat di korteks sel masih harus diuji. Mutasi
dalam homolog LIS1 Drosophila, DLIS-1, rilis dynein
dari korteks oosit [24]. Hasil ini menunjukkan peran
untuk LIS1 dalam lampiran kortikal, meskipun kemungkinan ini
masih harus diuji dalam sistem lain.
Sebuah peran untuk spectrin komponen sitoskeleton kortikal di
menghubungkan dynein ke berbagai struktur subselular juga telah
telah diusulkan. Spectrin atau protein dibandingkan adalah
membayangkan untuk membentuk kisi dengan dynactin pada permukaan
organel vesikuler [1,41]. Spectrin atau yang setara adalah
membayangkan untuk berinteraksi dengan filamen pendek Arp1, yang
aktin-seperti protein kompleks dynactin, dengan cara
sebanding dengan interaksi spectrin dengan aktin di
eritrosit. Diekspresikan Arp1 ditemukan untuk membentuk
struktur filamen yang spectrin direkrut, dan
dua protein coimmunoprecipitated dan berinteraksi dalam
tes biokimia lainnya [41-43]. Pada Drosophila, dynein memiliki
juga co-lokal untuk fusome, sebuah spectrin kaya
struktur membran yang terlibat dalam posisi mitosis spindle

selama oogenesis [21]. Dengan demikian, spectrin sendiri tampaknya

calon yang sangat baik untuk menghubungkan dynein untuk beragam
subselular struktur, meskipun bukti untuk seperti peran di
korteks yang kurang.
Interaksi dynein dengan adherens junction mungkin
melibatkan mekanisme yang berbeda. Dalam kasus ini, dynein ditemukan
untuk coimmunoprecipitate dengan yang berinteraksi
langsung dengan rantai menengah dynein di in vitro
tes [34

]. Hal yang menarik bahwa beberapa situs kortikal

pewarnaan dynein dan dynactin dalam membagi sel epitel
terletak di sekitar persimpangan adherens. Dengan demikian, apakah
interaksi dynein / terlibat dalam spindle
Orientasi tetap menjadi isu penting untuk menyelesaikan.
Dimana mikrotubulus berakhir dan
korteks dimulai
Protein pengayaan di ujung ditambah dari mikrotubulus adalah
perilaku awalnya dijelaskan untuk mikrotubulus terkait
protein CLIP-170 [44,45]. Dynein dan dynactin subunit
juga telah ditemukan untuk mengasosiasikan dengan mikrotubulus tumbuh
ditambah berakhir dalam tetap [46] dan dalam sel hidup ([16], KT Vaughan,
komunikasi pribadi). Perilaku protein
secara real time memberikan kesan kuat bahwa mereka sedang
diangkut ke pinggiran sel, menunjukkan
mekanisme pengiriman mungkin, namun, neon spekel
Analisis menunjukkan bahwa CLIP-170 yang direkrut di polimerizing ujung mikrotubulus dan jatuh tak lama
sesudahnya, menunjukkan treadmilling ketimbang transportasi
Mekanisme [44,47]. Karena CLIP-170 dan p150
Terpaku
menstabilkan mikrotubulus, mereka juga dapat berfungsi untuk memperpanjang
fase pertumbuhan mikrotubulus dinamis, meningkatkan mereka
kesempatan menghubungi korteks sel. Kami mencatat bahwa CLIP-170
mungkin fisiologis terkait dengan dynein dan dynactin.
CLIP-170 adalah dipisahkan dari kinetochores mitosis oleh
overekspresi dynamitin [48] asosiasi, dan
dari dynactin dengan mikrotubulus yang terganggu oleh overekspresi bentuk terpotong CLIP-170 [49].
Juga terkait dengan ujung mikrotubulus tumbuh adalah
berbagai protein lain yang terlibat dalam mikrotubulus-kortikal
interaksi. Ini termasuk eb1 dan berinteraksi dengan
protein APC (adenomatous polyposis coli) [47], dan
CLIP-170 Jepit berinteraksi protein [50], LIS1 ([29

, 51];

NE Faulkner, DL Dujardin, CY Tai, RB Vallee, tidak dipublikasikan

data) dan BICD2 [52]. Setidaknya beberapa dari protein ini dapat
secara diferensial mengungsi dari ujung mikrotubulus [29

],
tapi secara keseluruhan hirarki mengikat mereka masih sepenuhnya
dijelaskan. Adapun dynein, eb1 terlibat dalam spindle
Orientasi di kedua S. cerevisiae [8] dan Drosophila [53], namun
perannya dalam ragi tumpang tindih hanya sebagian dengan yang dynein.
Meningkatnya jumlah mikrotubulus akhir terkait
protein, sejauh ini hanya CLIP-170 ([54], DL Dujardin,
JR De Mey, data tidak dipublikasikan) dan LIS1 [29

] Co-melokalisasi
dengan dynein dan dynactin di korteks. Apakah ini akan
menjadi kasus untuk yang lain mikrotubulus-end terkait
protein, dan apakah protein berkomunikasi
antara ujung mikrotubulus dan korteks sel tetap
menarik misteri.
Kesimpulan dan pertimbangan evolusi
Meskipun relatif baru muncul dalam penyelidikan
motor protein, peran dynein sitoplasma di
menengahi interaksi antara mikrotubulus
sitoskeleton dan sel korteks menjadi mapan.
Bukti untuk seperti interaksi sporadis, dan apakah
itu terus berlanjut sepanjang siklus sel dan dalam sel beragam
jenis, atau terjadi sebagai diperlukan untuk fungsi yang ditetapkan tetap
pertanyaan yang luar biasa penting.
Mengingat keragaman proses fisiologis dengan yang
dynein dikaitkan dan jumlah struktur dan
protein interaksi dengan, tampaknya tidak mungkin bahwa
berbagai macam fungsi dynein bisa muncul sekaligus
selama evolusi. Lebih mungkin, kisaran awal terbatas.
Dalam ragi budding, fungsi utama dari dynein tampaknya
dalam menghubungkan mikrotubulus ke korteks sel. Hal ini menggoda untuk
berspekulasi bahwa ini bisa mewakili paling primitif dynein ini
peran. Dalam kapasitas ini, itu bisa memberikan kontribusi ke sel
divisi dan aspek lain dari reorganisasi cytoskeletal,
proses penting yang cukup untuk membuat hilangnya
dynein dari sel menguntungkan. Selanjutnya pekerjaan
harus mengungkapkan betapa luas dan jangkauan yang penting
fungsi dynein kortikal mungkin.