TESIS

PEMBERIAN L-ARGININE ORAL MENCEGAH

PENURUNAN NITRIC OXIDE (NO) DAN JUMLAH
ENDOTEL AORTA PADA TIKUS
(Rattus norvegicus) JANTAN YANG DIPAPAR
ASAP ROKOK

JURIAH

PROGRAM PASCA SARJANA

UNIVERSITAS UDAYANA
DENPASAR
2016
 PEMBERIAN L-ARGININE ORAL MENCEGAH
PENURUNAN NITRIC OXIDE (NO) DAN JUMLAH
ENDOTEL AORTA PADA TIKUS
(Rattus norvegicus) JANTAN YANG DIPAPAR
ASAP ROKOK

Tesis untuk Memperoleh Gelar Magister

Pada Program Magister Program Studi Ilmu Biomedik
Program Pascasarjana Universitas Udayana

JURIAH
1490761027

PROGRAM MAGISTER
PROGRAM STUDI ILMU BIOMEDIK
PROGRAM PASCASARJANA
UNIVERSITAS UDAYANA
DENPASAR
2016

ii
 LEMBAR PERSETUJUAN PEMBIMBING

TESIS INI TELAH DISETUJUI

PADA TANGGAL 20 Juli 2016

Pembimbing I, Pembimbing II,

Prof. Dr. IGM. Aman, Sp.FK Dr.dr.Gde Ngurah Indraguna Pinatih, M.Sc,Sp.GK
NIP. 194606191976021001 NIP. 195805211985031002

Mengetahui

Ketua Program Studi Ilmu Biomedik Direktur

Program Pascasarjana Program Pascasarjana
Universitas Udayana, Universitas Udayana,

Dr.dr.Gde Ngurah Indraguna Pinatih, M.Sc,Sp.GK Prof.Dr.dr.A.A.Raka Sudewi, Sp.S(K)

NIP. 195805211985031002 NIP. 195902151985102001

iii
 PENETAPAN PENGUJI

Tesis ini telah diuji pada

Tanggal 20 Juli 2016

Penguji tesis berdasarkan SK Rektor Universitas Udayana,

No : 841//UN14.4/HK/2016, Tanggal 7 Juni 2016

Ketua : Prof. Dr. IGM. Aman, Sp.FK

Sekretaris : Dr. dr. Gde Ngurah Indraguna Pinatih, MSc, SpGK

Anggota : 1. Prof. Dr. dr. Wimpie Pangkahila, SpAnd, FAACS

2. Prof. Dr. dr. J. Alex Pangkahila, MSc, Sp.And

3. Dr. dr. Desak Made Wihandani, M. Kes

iv
 SURAT PERNYATAAN BEBAS PLAGIAT

NAMA : dr. Juriah

NIM : 1490761027
PROGRAM STUDI : ILMU BIOMEDIK

JUDUL TESIS : PEMBERIAN L-ARGININE ORAL MENCEGAH

PENURUNAN NITRIC OXIDE (NO) DAN JUMLAH
ENDOTEL AORTA PADA TIKUS (Rattus norvegicus)
JANTAN YANG DIPAPAR ASAP ROKOK

Dengan ini menyatakan bahwa karya ilmiah Tesis ini bebas plagiat.

Apabila dikemudian hari terbukti terdapat plagiat dalam karya ilmiah ini, maka
saya bersedia menerima sanksi sesuai Peraturan Mendiknas RI No. 17 Tahun
2010 dan Peraturan Perundang-undangan yang berlaku.

Denpasar, Mei 2016

(dr. Juriah)

v
 UCAPAN TERIMA KASIH

Puji syukur penulis panjatkan kepada Tuhan Yang Maha Esa atas berkat,

rahmat, karunia serta petunjuk-Nya, sehingga penulis dapat menyelesaikan tesis

yang berjudul Pemberian L-Arginine Oral Mencegah Penurunan Nitric oxide

(NO) dan jumlah Endotel Aorta pada Tikus (ratus norvegicus) Jantan yang di

Papar Asap Rokok dalam rangka memperoleh gelar Magister pada Program Studi

Ilmu Biomedik, kekhususan Anti Aging Medicine, di Program Pascasarjana

Universitas Udayana, Bali-Indonesia.

Selama penelitian ini, penulis mendapat banyak pengalaman berharga yang

memperkaya wawasan, serta sebagai proses pembelajaran hidup penulis baik dari

segi ilmiah maupun aspek nilai sosial. Semua ini tidak lepas dari peran serta

orang-orang disekeliling penulis yang senantiasa mendukung dengan tulus dan

ikhlas. Pada kesempatan ini, perkenankanlah penulis menyampaikan rasa hormat,

penghargaan, dan terimakasih yang sebesar-besarnya kepada :

1. Prof. Dr. IGM. Aman, Sp.FK, selaku Pembimbing I, yang telah

meluangkan waktunya untuk membimbing, mengarahkan, dan

memberikan masukan kepada Penulis selama penyusunan tesis ini mulai

dari awal hingga selesai.

2. Dr. dr. Gde Ngurah Indraguna Pinatih, MSc, SpGK selaku Pembimbing II,

yang telah meluangkan waktunya untuk membimbing, mengarahkan, dan

memberikan masukan kepada Penulis selama penyusunan tesis ini mulai

dari awal hingga selesai.

3. Prof. Dr. dr. Wimpie Pangkahila, SpAnd, FAACS, selaku Penguji I, yang

telah memberikan masukan, saran, serta koreksi yang sangat berharga

dalam penyusunan tesis ini. Serta selaku Ketua Program Studi Ilmu

vi
 Biomedik yang telah memberikan kesempatan kepada Penulis untuk

menuntut ilmu di Program Magister Ilmu Biomedik, Universitas Udayana-

Bali.
4. Prof. Dr. dr. J. Alex Pangkahila, MSc, Sp.And, selaku Penguji II, yang

telah memberikan masukan, saran, serta koreksi yang sangat berharga

dalam penyusunan tesis ini.

5. DR.dr. Desak Made Wihandani, M.Kes selaku Penguji III, yang telah

memberikan masukan, saran, serta koreksi yang sangat berharga dalam

penyusunan tesis ini.

6. Prof. Dr. dr. Ketut Suastika, Sp.PD-KEMD selaku Rektor Universitas

Udayana atas kesempatan dan fasilitas yang diberikan kepada Penulis

untuk mengikuti dan menyelesaikan pendidikan Program Magister di

Universitas Udayana, Bali.

7. Prof. Dr. dr. A. A Raka Sudewi, Sp. S (K), selaku Direktur Program

Pascasarjana Universitas Udayana yang telah memberikan kesempatan

kepada Penulis untuk menjadi mahasiswi pada Program Magister Ilmu

Biomedik, Universitas Udayana, Bali.

8. I Gede Wiranatha, S.Si, selaku staf di Laboratorium Farmakologi Fakultas

Kedokteran, Universitas Udayana-Bali. Yang telah banyak membantu

secara teknis proses penelitian ini.

9. Ayahanda tercinta (Alm. H. Jamhari) dan Ibunda tercinta (Hj. Nawati),

atas iringan doa, dukungan, perhatian dan kasih sayang yang tulus dan

tidak terhingga kepada Penulis, sehingga Penulis mampu menyelesaikan

tesis ini.
10. Suami dan Anak-anakku tersayang (Teddy Junaidi Sofyan, Naila putri,

Raffasyah), atas doa, dukungan dan pengertian selama Penulis menempuh

pendidikan dan menyelesaikan tesis ini.

vii
 11. Seluruh Dosen Ilmu Biomedik Pasca Sarjana Universitas Udayana, Bali.

Yang telah memberikan ilmunya yang sangat bermanfaat.

12. Para staf Ilmu Biomedik Pasca Sarjana Universitas Udayana, Bali. Yang

telah memberikan informasi dan bantuan kepada Penulis mulai dari awal

sampai akhir menuntut ilmu di Bagian Biomedik.

13. Teman-teman angkatan 9, tahun 2014 Anti Aging Medicine, terutama

dr.Herti E. Silalahi, MARS. PhD, dr. Fransisca Mochtar, SpOG., dr syska

martala dewi, dr. Widya chistine manus, dr. Iftitah yang telah memberikan

semangat selama penyusunan tesis ini berlangsung.

Semoga Tuhan Yang Maha Esa senantiasa memberikan Rahmat-Nya

kepada semua pihak yang telah membantu penyelesaian tesis ini. Penulis

menyadari bahwa tesis ini jauh dari sempurna, karena itu Penulis mengharapkan

kritik dan saran yang membangun. Akhir kata Penulis ucapkan, Semoga hasil

penelitian ini dapat memberikan manfaat bagi perkembangan ilmu pengetahuan di

masa yang akan datang.

Denpasar, Mei 2016

Penulis,
Juriah

viii
 ABSTRAK
PEMBERIAN L-ARGININE MENCEGAH PENURUNAN NITRIC OXIDE
(NO) DAN JUMLAH ENDOTEL AORTA PADA TIKUS (Rattus norvegicus)
JANTAN YANG DIPAPAR ASAP ROKOK

Perilaku merokok merupakan salah satu pola hidup yang tidak sehat yang
hingga saat ini masih merupakan perilaku yang umum dapat diamati baik pada
orang dewasa maupun remaja. Merokok dapat menurunkan aktivitas NO secara
langsung dan tak langsung, dan asap rokok mengandung senyawa kimia yang
menyebabkan kerusakan endotel. Nitric oxide dibentuk dari oksidasi L-Arginin
bersama kofaktor NADPH dan oksigen dengan katalisis enzim NO synthase
(NOS). Tujuan dari penelitian ini adalah untuk membuktikan pemberian L-
Arginin dapat mencegah penurunan Nitric Oxide (NO) dan kerusakan endotelium
pada tikus jantan yang dipapar asap rokok.
Penelitian ini adalah penelitian eksperimental dengan menggunakan
completely randomized post test only control group design yang menggunakan 36
ekor tikus putih (Rattus norvegicus) jantan, dewasa (berumur 2,5-3 bulan) sebagai
sampel, yang terbagi menjadi 2 (dua) kelompok masing-masing berjumlah 18
ekor tikus, yaitu kelompok kontrol P0 (paparan asap rokok + aquabides) dan
kelompok perlakuan P1 (paparan asap rokok + L-Arginine dosis 9 mmol/kgBB).
Hasil penelitian ini kemudian dianalisis dan disajikan menggunakan analisis
deskriptif, normalitas data, homogenitas data, uji komparabilitas, dan uji efek
perlakuan.
Hasil penelitian menunjukkan rerata kadar Nitric Oxide kelompok yang
diberi aquades (P0) adalah 882,46119,47 M, berbeda Bermakna jika
dibandingkan dengan kelompok yang diberi L-Arginine dosis 9 mmol/kgBB (P1)
yaitu 1233,03128,02 M (p<0,01). Rerata jumlah sel endotel P0 adalah
3,38891,57675 sel dan berbeda nyata dengan kelompok P1 adalah
8,85061,16810 sel (p<0,01).
Berdasarkan hasil penelitian ini dapat disimpulkan bahwa pemberian L-
Arginin dapat mencegah penurunan Nitric Oxide (NO) dan mencegah penurunan
jumlah endotel aorta pada tikus jantan yang dipapar asap rokok.

Kata kunci : L-Arginine, nitric oxide, endotelium, asap rokok

ix
 ABSTRACT
L-ARGININE PREVENTED THE DECREASE OF NITRIC OXIDE (NO)
AND THE NUMBER OF ENDOTELIAL CELL AORTA DAMAGE IN
CIGARETTE SMOKE-INDUCED MALE WISTAR RATS (Rattus
norvegicus)

Smoking is an unhealthy lifestyle which is still a common behavior

observed in both adults and adolescents. Smoking can decrease the activity of NO
directly and indirectly. Besides cigarette smoke contains chemical compounds that
cause endothelial damage. Nitric oxide is formed from the oxidation of L-
Arginine along cofactor NADPH and oxygen with enzyme catalysis NO synthase
(NOS). The purpose of this study is to prove the administration of L-Arginine to
prevent the decline of Nitric Oxide (NO) and endothelial damage in male rats
exposed by cigarette smoke.
This study was an experimental research using a completely randomized
post-test only control group design with 36 male albino rats (Rattus norvegicus) as
a sample, adult (aged 2.5-3 months), which is divided into two (2) groups
respectively amounted to 18 mice, the negative control group P0 was given
cigarette smoke exposure and aquabidest, while the treatment group called
treatment group P1 was given cigarette smoke exposure and L-Arginine dose of 9
mmol/kg body weight. The results of this research were then analyzed and
presented using descriptive analysis, data normality, homogeneity of data, and
comparability test to determine effects of treatment.
The results showed average levels of Nitric Oxide in kontrol group given
distilled water (P0) was 882.46 119.47 M significantly lower when compared
with the group given L-Arginine dose of 9 mmol / kg body weight (P1) which was
1233.03 128 , 02 M (p <0.01). The mean number of endothelial cells was
3.3889 1.57675 cells in P0 group and significantly lower compared to the group
P1 which was 8.8506 1.16810 cells (p <0.01).
Based on these results it can be concluded that the administration of L-
Arginine prevented the decrease of Nitric Oxide (NO) and the number of
endotelial cell aorta damage in male rats exposed by cigarette smoke.

Keywords: L-Arginine, nitric oxide, the endothelium, smoke

x
 DAFTAR ISI

Halaman

SAMPUL DALAM......................................................................................
ii

LEMBAR PERSETUJUAN .......................................................................

..................................................................................................................iii

LEMBAR PENETAPAN PENGUJI ...........................................................

..................................................................................................................iv

SURAT PERNYATAAN BEBAS PLAGIAT ..............................................

....................................................................................................................v

UCAPAN TERIMA KASIH .......................................................................

..................................................................................................................vi

ABSTRAK ..................................................................................................
..................................................................................................................ix

ABSTRACT ................................................................................................
....................................................................................................................x

DAFTAR ISI................................................................................................
xi

DAFTAR GAMBAR...................................................................................
xv

DAFTAR TABEL........................................................................................
................................................................................................................xvi

DAFTAR SINGKATAN..............................................................................
...............................................................................................................xvii

BAB I PENDAHULUAN.......................................................................
1

1.1 Latar Belakang....................................................................

...........................................................................................1
1.2 Rumusan Masalah...............................................................

...........................................................................................8

xi
 1.3 Tujuan Penelitian.................................................................

...........................................................................................8
1.4 Manfaat penelitian...............................................................

...........................................................................................9

BAB II KAJIAN PUSTAKA....................................................................

10

2.1 Proses Penuaan....................................................................

.........................................................................................10

2.2 Radikal Bebas .....................................................................

.........................................................................................15

2.2.1 Tahapan terbentuknya Radikal Bebas ......................

...............................................................................17

2.2.2 Peranan radikal bebas dalam proses penuaan .........

...............................................................................18

2.3 Endotelium .........................................................................

.........................................................................................20

2.4 Nitric Oxide (NO) ..............................................................

.........................................................................................22

2.4.1 Peran NO dalam pembuluh darah.............................

24

2.4.2 Patologi kelainan pembuluh darah diperantarai NO

akibat stress oksidatif yang dipicu radikal bebas......
...............................................................................27

2.5 Rokok..................................................................................
.........................................................................................29

2.5.1 Definisi rokok...........................................................

29

2.5.2 Radikal bebas dalam rokok.......................................

...............................................................................30

2.5.3 Hubungan antara rokok dan kadar NO .....................

...............................................................................37

xii
 2.6 L-Arginine ..........................................................................
.........................................................................................40

2.7 Hewan Coba Tikus ..............................................................

...............................................................................43

2.7.1 Penggunaan tikus .....................................................

...............................................................................43

2.7.2 Pemberian makanan dan minuman ..........................

...............................................................................44

BAB III KERANGKA BERPIKIR, KONSEP DAN HIPOTESIS............

46

3.1 Kerangka Berpikir...............................................................

.........................................................................................46

3.2 Kerangka Konsep................................................................

.........................................................................................48

3.3 Hipotesis Penelitian.............................................................

.........................................................................................49

BAB IV METODE PENELITIAN............................................................

50

4.1 Rancangan Penelitian..........................................................

.........................................................................................50

4.2 Lokasi dan Waktu Penelitian...............................................

.........................................................................................51

4.3 Populasi dan Sampel...........................................................

.........................................................................................51

4.3.1 Populasi.....................................................................
...............................................................................51

4.3.2 Kriteria sampel..........................................................

...............................................................................51

4.3.3 Besar sampel.............................................................

...............................................................................52

xiii
 4.3.4 Teknik pengambilan sampel .....................................
...............................................................................53

4.4 Variabel...............................................................................
53

4.4.1 Hubungan antar variabel...........................................

...............................................................................54

4.4.2 Definisi operasional variabel....................................

...............................................................................54

4.5 Bahan Penelitian dan Hewan Coba.....................................

Berat lahir
.........................................................................................55 Lama hidup
4.5.1 Bahan penelitian.........................................................
.........................................................................................55

4.5.2 Hewan percobaan ......................................................

.........................................................................................55

4.6 Instrumen Penelitian............................................................

.........................................................................................56

4.7 Prosedur Penelitian..............................................................

.........................................................................................56

4.7.1. Pemilihan dan pemeliharaan hewan uji.....................

.........................................................................................56

4.7.2 Prosedur perlakuan ...................................................

.........................................................................................57

4.7.3. Prosedur pengambilan darah ....................................

.........................................................................................57

4.7.4. Prosedur pemeriksaan kadar NO...............................

.........................................................................................58

4.8 Analisis Data .......................................................................

.........................................................................................59

4.9 Alur Penelitian ....................................................................

.........................................................................................61

xiv
BAB V HASIL PENELITIAN ................................................................
62

5.1 Analisis Deskriptif .............................................................

62

5.2 Uji Normalitas Data ...........................................................

63

5.3 Uji Homogenitas Data antar Kelompok .............................

64

5.4 Uji Komparabilitas ............................................................

65

5.4.1 Uji Komparabilitas Kadar Nitric Oxide .....................

65

5.4.2 Uji Komparabilitas Jumlah Sel Endotel .....................

66

5.4.2 Hasil Histologi Endotel Aorta ....................................

67

BAB VI PEMBAHASAN .........................................................................

68

6.1 Subyek Penelitian ...............................................................

.........................................................................................68

6.2 Distribusi dan Homogenitas Data Hasil Penelitian ............

.........................................................................................68

6.3 Paparan Asap Rokok Menurunkan Kadar Nitric Oxide

dan Jumlah Sel Endotel ......................................................
.........................................................................................69

6.4 Pengaruh Pemberian L-Arginin Terhadap Kadar Nitric

Oxide dan Jumlah Sel Endotel ...........................................
.........................................................................................72

BAB VII SIMPULAN DAN SARAN ........................................................

75

xv
 7.1 Simpulan ............................................................................
75

7.2 Saran ...................................................................................

75

DAFTAR PUSTAKA...................................................................................
76

xvi
 DAFTAR GAMBAR

Gambar Halaman

Halaman

2.1. Molekul Nitric oxide (NO)........................................................................... 22

2.2. Skema Proses Sintesis Nitric oxide (NO).................................................... 23

2.3. Mekanisme Vasodilatasi NO di dalam Pembuluh Darah............................. 26

2.4. Interaksi antara Reactive Oxygen Species (ROS) dan Nitric Oxide............. 38

2.5. Struktur Kimia L-Arginine........................................................................... 40

2.6. Metabolisme L-Arginine.............................................................................. 41

3.1. Konsep Penelitian......................................................................................... 48

4.1. Rancangan Penelitian............................................................................

........................................................................................................50

4.2. Hubungan antar variabel ......................................................................

........................................................................................................54

4.3. Alur Penelitian......................................................................................

........................................................................................................61

5.1 Aquabides + Rokok ...............................................................................

........................................................................................................67

5.2 Arginine 9mmol/kgbb + Rokok ............................................................

........................................................................................................67

xvii
xviii
 DAFTAR TABEL

Tabel Halaman

2.1 Waktu Paruh NO dan Produknya........................................................

........................................................................................................24

2.2 Data Biologi Tikus .....................................................................

........................................................................................................44

5.1 Hasil Analisis Deskriptif Data Nitric Oxide ......................................

........................................................................................................62

5.2 Hasil Analisis Deskriptif Data Jumlah Sel Endotel ...........................

........................................................................................................63

5.3 Hasil Uji Normalitas Data Kadar Nitric Oxide Antar Kelompok ......
........................................................................................................63

5.4 Hasil Uji Normalitas Data Jumlah Sel Endotel Antar Kelompok ......
........................................................................................................64

5.5 Hasil Uji Homogenitas Variabel Penelitian Antar Kelompok ............

........................................................................................................64

5.6 Rerata Kadar Nitric Oxide antar Kelompok Sesudah Diberikan

Perlakuan ...........................................................................................
........................................................................................................65

5.7 Rerata Kadar Nitric Oxide antar Kelompok Sesudah Diberikan

Perlakuan ...........................................................................................
........................................................................................................66

xix
 DAFTAR SINGKATAN

ADMA : Asymmetric dimethyl arginine

cGMP : Cyclic Guanosine Mosophosphate

cNOS : Constitutive NO synthase

DHEA : dehydroepidanrosterone

eNOS : Endothelial NO synthase

FSH : Follicle Stimulating Hormone

GH : Growth Hormone

HB4 : Tetrahydrobiopterin

IGF-1 : Insulin Growth Factor-1

iNOS : Inducible NO synthase

LH : Luteinizing Hormone

LNMA : L-mono methyl arginine

MDA : Malondyaldehide

NANC : Nnonadrenergic-Noncholinergic

nNOS : Neuronal NO synthase

NO : Nitric Oxide

ROS : Reactive Oxygen Species

xx
sGC : Soluble guanylate cyclase

XO : xanthine oxidase

xxi