STUDI INTERAKSI: PENGARUH Orthosiphon

Stamineus EKSTRAK PADA MANUSIA sitokrom P450

Obat herbal telah banyak digunakan di dunia dan pasar telah berkembang pesat
dalam beberapa tahun terakhir. Orthosiphon stamineus Benth, milik keluarga
Lamiceae, adalah salah satu tanaman obat yang paling populer di Asia Tenggara,
termasuk Indonesia dan Malaysia. O. stamineus secara lokal dikenal sebagai Misai
Kucing atau remujung, dan telah mendapat perhatian besar dari para peneliti.
Tanaman ini digunakan sebagai obat alternatif di Malaysia dan juga telah dijual
sebagai suplemen makanan dalam beberapa tahun terakhir (Wiart, 2002). Di
banyak negara Eropa, O.
stamineus dikonsumsi sebagai teh herbal untuk meningkatkan kesehatan karena
sifat antioksidan yang tinggi (Indubala dan Ng, 2000).

O. stamineus mengandung beberapa konstituen kimia aktif; salah satu kelas yang
paling penting dari senyawa adalah kelompok fenolik. Beberapa peneliti telah
mengisolasi senyawa fenolik termasuk flavones lipofilik, glikosida flavonol, dan
turunan asam caffeic, seperti 2,3-dicaffeoyltartaric asam
dan asam rosmarinic, yang telah diidentifikasi dan diukur oleh High Performance
Liquid Chromatography (Sumaryono et al., 1991). daun O.stamineus berisi
polymethoxylated flavones, sinensetin, tetramethylscutellarein dan 30-
hydroxy5,6,7,40-tetramethoxyflavone, seperti dilansir Pietta
et al. (1998). Peneliti lain (Tezuka et al., 2000) menemukan kandungan kimia dari O.
stamineus untuk menyertakan turunan asam caffeic, ester diterpen, saponin
triterpen, flavonoid, antioksidan dan minyak atsiri.

Sejumlah studi interaksi O.Stamineus telah diterbitkan. Chin et al. (2009)

melaporkan bahwa ekstrak daun metanol O. stamineus meningkat baik UGT dan
GST aktivitas di hati tikus diabetes. Sebuah penelitian in vitro penghambatan O.
Stamineus pada isoform UGT menunjukkan bahwa ekstrak menghambat UGT1A9,
UGT1A1, UGT1A6 dan UGT1A8 dengan IC
50 dari 10,83, 24,65, 30,02 dan 43.39g / mL, masing-masing. Namun, ekstrak
menunjukkan IC50 lebih dari 50g / mL untuk
UGT1A3, UGT1A10, UGT2B7 dan kegiatan UGT2B15 (Ismail et al., 2010). Dagu dan
Hussin (2011) melaporkan bahwa O. stamineus peningkatan metabolisme
aminopyrine dengan menghambat protein kinase-A di hepatosit tikus betina.

Penggunaan obat herbal yang sering dipakai bersamaan dengan obat yang
diresepkan telah menyebabkan peningkatan interaksi ramuan obat (Zhou et al.,
2004) .Ini interaksi ramuan obat memiliki prevalensi tinggi tetapi sering tidak
diketahui, yang menandakan kelalaian konsumen sehubungan dengan pelaporan
ramuan obatinteraksi atau reaksi yang merugikan ketika mengambil obat-obatan
herbal (Barnes et al., 1998). Ada banyak laporan yang memberikan bukti untuk
interaksi ramuan obat klinis penting, di mana penggunaan bersamaan obat-obatan
herbal dengan sintetik
obat dicatat (Fugh-Berman, 2000).

Interaksi ramuan obat dapat terjadi dengan penggunaan O. stamineus dan obat-
obatan yang diresepkan sejak rempah yang biasa digunakan untuk mengobati
diabetes mellitus, hipertensi dan asam urat masalah di banyak negara Asia
Tenggara (Wiart, 2002). Interaksi dapat terjadi selama fase farmakokinetik, yang
mencakup proses penyerapan, distribusi, metabolisme atau ekskresi, dan juga
dalam fase farmakodinamik (Izzo et al., 2002). Perubahan konsentrasi obat oleh
bersamaan Penggunaan obat-obatan herbal dapat terjadi melalui penghambatan
atau induksi hati obat-metabolisme enzim, terutama sitokrom P450s (CYP)
(Wilkinson, 1997; Ioannides, 2002;. Zhou et al, 2003). Tujuan dari penelitian ini
adalah untuk menguji Pengaruh O. stamineus pada kegiatan manusia CYP450
isoform, terutama CYP1A2, CYP2C9, CYP2D6 dan CYP3A4..

bahan tanaman
ekstrak O. stamineus diberikan oleh Prof. Zhari Ismail dari Sekolah Ilmu Farmasi,
Universiti Sains
Malaysia. Ekstrak yang diperoleh sesuai dengan penelitian sebelumnya. daun O.
stamineus werecollected di sore hari, dari tanaman berusia 30 sampai 45 hari,
tanaman berbunga putih dan
spesimen voucher bahan tanaman yang
disimpan di Bilik Herba, Sekolah Farmasi Sciences, Universiti Sains Malaysia.
ekstraksi metanol O. stamineus dilakukan dengan mengekstraksi daun kering (10g)
dengan 100mL dari metanol sekitar 40 C selama 4 jam dengan pengadukan terus
menerus. Ekstrak disaring
melalui kertas saring Whatman (No 1), dan kemudian berkonsentrasi dan semprot-
kering untuk mendapatkan ekstrak metanol mentah (Akowuah et al., 2004).

Luciferin persiapan kurva standar

Luciferin kurva standar masing-masing CYP dilakukan dengan menyiapkan solusi
saham D-luciferin pada konsentrasi 2mm. Kemudian, konsentrasi pengenceran
serial standar D-luciferin (empat kali konsentrasi) dibuat untuk mendapatkan solusi
standar dengan konsentrasi akhir 2M, 0.4M, 0.08M dan 0.016M. Campuran
reaksi dan reaksi
campuran kontrol untuk setiap CYP (CYP1A2, CYP3A4, CYP2C9 atau CYP2D6) dibuat
pada empat kali konsentrasi, sedangkan
sistem NADPH regenerasi disiapkan pada konsentrasi dua kali. Reaksi dimulai
dengan menambahkan 12.5L standar D-luciferin ke piring putih buram 96-baik di
sumur yang sesuai; di 0M sumur D-luciferin, 12.5L air luciferin bebas
ditambahkan.
Campuran reaksi kontrol (12.5L) kemudian ditambahkan dan piring terguncang
dengan menekan piring dengan hati-hati. Sistem reaksi preincubated untuk
10 menit di 27C dan 25L sistem regenerasi CYP NADPH ditambahkan ke setiap
sumur. piring disadap lagi dan diinkubasi selama 30 menit pada 27C. The
dilarutkan deteksi luciferin reagen (50L) ditambahkan ke
semua sumur, sempat dicampur dan kemudian diinkubasi selama 20 menit pada
27C untuk menstabilkan sinyal luminescent. Sinyal itu direkam menggunakan
piring-membaca luminometer (Hidex Plat
CHAMELEON, Hidex Oy, USA) dan nilai-nilai yang ditampilkan sebagai unit cahaya
relatif (RLU).

assay enzim
Assay enzim dilakukan dengan menambahkan senyawa uji O. solusi stamineus
(12.5L) dengan konsentrasi mulai dari 0,01 ke 1000g / mL atau positif
solusi kontrol mulai dari 0,02 sampai 200M ke sumur dari piring microtiter. Di
sumur tidak diobati, senyawa uji digantikan dengan

12.5L air luciferin bebas. Kemudian, 12.5L dari campuran reaksi kontrol
ditambahkan dan reaksi dilanjutkan seperti yang dijelaskan di bagian "luciferin
persiapan kurva standar".

Analisis data
Data disajikan sebagai persentase aktivitas dibandingkan dengan kelompok kosong
dan IC 50 bertekad untuk menguji
potensi penghambatan ekstrak stamineus O. dan kontrol positif pada aktivitas
enzim sitokrom P450. 232

HASIL DAN DISKUSI

Penelitian Interaksi ini menggunakan empat isoform CYP450 manusia yaitu CYP1A2,
CYP3A4, CYP2D6 dan CYP2C9 untuk menguji pengaruh O. stamineus dan kontrol
positif pada enzim
kegiatan menggunakan alat tes luminescent. Alpha naphtoflavone, ketoconazole,
quinidine dan sulphaphenazole digunakan sebagai kontrol positif terhadap CYP1A2,
CYP3A4, CYP2D6 dan
CYP2C9, masing-masing. Dalam pengujian ini, luciferin kumbang diambil sebagai
luminogenic substrat P450 penyelidikan. luciferin kumbang akan dikonversi oleh
enzim P450 yang berbeda untuk luciferin. Kemudian, enzim luciferase akan
menciptakan cahaya dari luciferin gratis sebagai substrat dan didukung oleh ATP
dan oksigen. Cahaya
diproduksi berbanding lurus dengan aktivitas enzim CYP450 dan diukur
menggunakan pembaca lempeng. assay luminescent lebih menguntungkan
dibandingkan dengan uji neon, karena tidak memiliki gangguan fluorescent (Bosetti
et al., 2005)

Hasil interaksi dari O. stamineus dan kontrol positif terhadap empat isoform CYP450
ditunjukkan pada Gambar 1-4, sedangkan IC 50 hasil ditunjukkan pada Tabel I. metanol ekstrak
O. stamineus menunjukkan efek penghambatan pada aktivitas CYP450, dengan penghambatan
tertinggi terhadap CYP2C9 dan memiliki IC
50 di 20.12g / mL. O. stamineus ini IC 50 lebih besar
jika dibandingkan dengan sulphapenazole sebagai kontrol positif dengan IC
50 di 0.03g / mL (Gambar 1).
Fenomena yang sama juga ditemukan dalam hasil interaksi O. stamineus ekstrak terhadap
CYP1A2, CYP2D6 dan CYP2C9 kegiatan dengan nilai IC50 dari 49.90g / mL, 89.24g / mL
dan 97.82g / mL, masing-masing. Kontrol positif menunjukkan nilai IC50 dari 0.007g / mL,
2.9g / mL dan 0.003g / mL,
Sejalan (Gambar 2-4). Temuan ini menunjukkan bahwa tanaman ini menunjukkan penghambatan
lemah dibandingkan dengan kontrol positif. Hal ini mungkin karena ekstrak mengandung banyak
senyawa sehingga interaksi dengan setiap CYP450 tidak spesifik. ekstrak O. stamineus
dilaporkan memiliki asam rosmarinic sebagai komponen utama, dengan konsentrasi mulai dari
5,1% menjadi 29,9% dari total berat daun kering; juga,
ekstrak ini mengandung 3'-hidroksi-5, 6, 7, 4'tetramethoxyflavone, eupatorin dan sinensetin,
dengan tingkat mulai dari 0,05% menjadi 0,69%, 0,34% untuk 3,37% dan 0,22% menjadi 1,76%,
masing-masing. Dengan demikian, ia memiliki potensi besar untuk komersialisasi karena nilai
obat tinggi (Akhouwah et al, 2004;. Chin & Hussin,

Interaksi antara obat herbal dan isoform CYP (CYPs) telah dinilai dan sejumlah studi
telah dipublikasikan. Misalnya, efek penghambatan asiaticoside dan madecassoside
pada CYPs manusia dipelajari oleh Winitthana et al. (2011). Hasil penelitian
menunjukkan bahwa asiaticoside menghambat CYP2C19 dan CYP3A4.
Madecassoside juga menghambat CYP2C19 dan CYP3A4, namun keduanya
asiaticoside dan madecassoside tidak berpengaruh pada kegiatan CYP1A2, CYP2C9
dan CYP2D6 dan CYP2E1. Ohnishi et al. (2000) melaporkan efek derivatif
furanocoumarin dalam jus jeruk pada aktivitas sitokrom P450 3A4;
dihydroxybergamottin, bergamottin dan bergapten menunjukkan inhibisi kuat
dengan IC 50 mulai 0,075-1,0 pM. Dalam studi lain, efek wort St John (Hypericum
perforatum) pada manusia

Kegiatan P450 sitokrom diselidiki oleh Wang et al. (2001); hasil menunjukkan bahwa
wort St John adalah induktor selektif untuk CYP3A, namun tidak mengubah CYP1A2
itu,
CYP2C9 dan kegiatan CYP2D6 setelah wort St John diberikan. Ada banyak tanaman
obat yang
telah digunakan baik dalam bentuk asal atau digabungkan menjadi campuran obat-
obatan tradisional. obat tradisional telah dianggap non-toksik karena senyawa
berasal dari sumber alami (Zhou et al., 2004). konstituen farmakologi aktif seperti
alkaloid, flavonoid, terpenoid, polifenol, antrakuinon,
glikosida, saponin, coumarin, tanin dan minyak esensial dapat ditemukan pada
tumbuhan dan memiliki kemampuan untuk mempromosikan interaksi ramuan obat
(Zhou et al, 2004;. Markowitz et al, 2000.)Usus PGP dan CYP3A4 berperan
animportant dalam menentukan bioavailabilitas banyak obat '. Modulasi CYP3A dan
usus PGP merupakan mekanisme penting dari meningkatkan atau menurunkan
bioavailabilitas obat bersamaan (FughBerman, 2000; Fugh-Berman dan Ernst, 2001;
Izzo dan Ernst, 2001). Interaksi ekstrak stamineus O dengan CYP2C9 dan CYP1A2
yang disebabkan penghambatan moderat terhadap dua CYPs (Qiu et al., 2008),
menunjukkan bahwa ekstrak dapat memodulasi metabolisme obat dimetabolisme
oleh CYP2C9 dan CYP1A2. Diperkirakan bahwa CYP2C9 bertanggung jawab untuk
clearance metabolik hingga 15-20% dari semua obat menjalani fase I metabolisme
(Booven et al., 2010), sedangkan sitokrom CYP1A2 memainkan peran utama dalam
metabolisme banyak obat yang umumnya digunakan klinis (5-10%).

KESIMPULAN
Ekstrak standar dari O. stamineus menunjukkan penghambatan moderat terhadap
CYP2C9 dan CYP1A2 dengan IC
50 nilai-nilai 20,12 ug / mL dan 49,90 ug / mL. Sementara penelitian interaksi
dengan CYP2D6 dan CYP3A4 menunjukkan inhibisi dengan IC50
nilai-nilai 89,24 dan 97,82 mg / mL, masing-masing. Data ini menunjukkan bahwa
ekstrak O. stamineus dapat menyebabkan ramuan obat
interaksi, karena CYP2C9 atau CYP1A2 isoform bertanggung jawab untuk
metabolisme banyak obat.