Uji Anti Resid Menggunakan Metode Uji Tapis

1
Metode uji tapis (screening test) residu antibiotik pada

daging dan telur secara bioassay
BAB I
PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
Bioassay merupakan analisis atau pengukuran dari sesuatu zat untuk
menentukan keberadaan dan dampaknya. umumnya yang diuji adalah efek
obat dan kadar hormon.pengujiannya boassay merupakan estimasi atau
penentuan konsentrasi atau potensi fisik ,kimia atau zat biologi yang sesuai
dibawah standar set kondisi .dalam bioanalisis respon yang dihasilkan oleh
senyawa uji dibandingkan dengan sampel standar .
Bioassay terutama digunakan untuk standarisasi obat-obatan vaksin,toksin
atau racun ,desinfektan antiseptik dan lain-lain karena ini semua digunakan
atas sistem biologi dalam beberapa atau bentuk lainya .pada praktikum ini
dilakukan pengujian terhadpa beberapa sampel untuk mengetahui adanya
residu dari antibiotik yang diberikan pada hewan .
Secara biologis kerusakan pada telur disebabkan oleh mikroorganisme
diantaranya adalah bakteri. Masuknya bakteri ke dalam telur setelah telur
berada di luar tubuh induknya,misalnya berasal dari kotoran yang menempel
pada kulit telur. Kotoran diantaranya adalah feses, tanah, atau suatu bahan
yang banyak mengandung bakteri perusak. Bakteri ini masuk ke dalam telur
melalui kulit telur yang retak atau menembus kulit ketika lapisan tipis protein
yang menutupi kulit telur telah rusak,dan lubang-lubang kecil yang terdapat
pada permukaan telur yang disebut pori-pori sehingga menyebabkan
kerusakan pada telur.
Penggunaan antibiotik tentu sangat dipertimbangkan dalam ransum.

Dampak negatif tersebut membuat antibiotik sudah tidak digunakan lagi di
beberapa negara. Penggunaan antibiotik dalam ransum dialihkan dengan
suatu produk yang lebih bermanfaat yaitu dengan pemberian probiotik dalam
ransum.Probiotik sendiri dapat diartikan sebagai sejumlah mikroorganisme
yang di aplikasikan secara oral kedalam tubuh ternak dengan tujuan untuk
meningkatkan kesehatan ternak, dan meningkatkan nilai kecernaan dengan
cara memanipulasikan mikroorganisme didalam saluran pencernaan unggas.
Flora Reny Pakage Rahmat Muliadi S.Farm

F1F1 13 067
2
Penggunaan probiotik ini memiliki kelebihan dibandingkan dengan

antibiotik, bila antibiotik menimbulkan residu dalam telur yang dihasilkan,
namun penggunaan probiotik tidak menimbulkan residu didalam telur.Probiot
ik banyak mengandung mikroorganisme yang mampu melawan mikroorganis
me patogen.
Pemberian probiotik dapat meningkatkan kualitas telur terutama pada
kekentalan albumin. Namun,saat ini probiotik yang digunakan berasal dari
probiotik impor. Probiotik impor memiliki kekurangan seperti harganya
mahal dan mikroba yang terkandung didalam probiotik kurang beradaptasi
dengan baik terhadap kondisi lingkungan di Indonesia,sehingga diperlukan
suatu alternatif untuk menangani masalah tersebut. Salah satunya yaitu
dengan penggunaan probiotik dari mikroba lokal
Antibiotik dipakai secara luas dalam industri peternakan dengan tujuan
untuk pengobatan ,sehingga dapat mengembalikan kondisi ternak menjadi
normal kembali (sehat) dewasa ini kebutuhan pangan hewan tidak terbatas
pada kwantitas tetapi lebih dipertimbangkan dari segi kualitasnya bergisi
tinggi dan aman pangan asal hewan dapat mengandung bahaya biologis dan
kimia .salah satunya adalah residu antibiotik dalam pangan dapat mengancam
kesehatan masyarakat.
Metode uji tapis (screening test) merupakan suatu cara pengujian

untuk mendeteksi kandungan residu antibiotika secara kualitatif sesuai
dengan batas deteksi tertentu pada daging dan telur pengujian bioassay pada
praktikum ini merupakan suatu pengujian yang menggunakan organism
bakteri bacillus subtillis ATCC 6633 untuk mendeteksi senyawa antibiotik
yang masih aktif .
B. Rumusan Masalah

F1F1 13 067
3
Rumusan masalah yang terdapat dalam prcobaan ini yaitu bagaimana cara
mengetahui sampel daging dan telur mengandung residu antibiotik?
C. Tujuan
Tujuan percobaan ini yaitu untuk mengetahui sampel daging dan telur
mengandung residu antibiotik.
D. Manfaat
Manfaat dari percobaan ini yaitu mampu menberikan informasi terkait
bahan makan asal hewan berupa daging maupun telur yang mengandung
residu antibiotik.
BAB II

F1F1 13 067
4
TINJAUAN PUSTAKA
A. Teori umum
Produksi senyawa antibiotik baru penghambat/pembunuh mikrobia eu-
kariot patogen.Selain sulitnya menemukan antibiotik baru juga sulit
memproduksinya . Beberapa medium dan kondisi optimal yang cocok perlu
dicoba untuk penghasilan antibiotik. Beberapa faktor substrat berpengaruh
terhadap mekanisme biosintesis antibiotik yang bersangkutan,misalnya sumbe
karbon (C), nitrogen (N) dan beberapa vitamin (margino,2008).
Berdasarkan struktur kimianya, antibiotika dapat digolongkan menjadi
beberapa golongan, yaitu golongan -laktam seperti penisilin, ampisilin,
golongan aminoglikosida seperti gentamisin, streptomisin,golongan
tetrasiklin seperti tetrasiklin,oksitetrasiklin, golongan makrolida seperti tilosin,
tilmikosin,golongan peptide seperti basitrasin,colostin golongan polieter
seperti salinomisin,monensin dan golongan kloramfenikol contohnya seperti
kloramfenikol, tiamfenikol. Berdasarkan daya kerja antibiotik dapat
digolongkan menjadi 2 sifat, yaitu bersifat kemampuan spektrum luas (Broad
Spectrum), yang artinya antibiotika memiliki kemampuan melawan sejumlah
besar bakteri patogen (daya kerja luas). Sebagai contoh dalam golongan ini
adalah tetrasiklin. Kemudian sifat lainnya adalah spektrum sempit (Narrow
Spectrum), yang artinya antibiotika memiliki daya kerja sempit atau spesifik,
misalnya antibiotika penisilin(Yuningsih,2010).
Analisis residu antibiotik dalam makanan asal hewan dapat dilakukan
dengan menggunakan metode instrumen berbasis kimia, seperti Kromatografi
Cair Kinerja Tinggi (KCKT), Spektrofotometri Massa (MS) dan metode
bioassay, seperti mikrobiologi, Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay
(ELISA). Metode Bioassay berbasis mikrobiologi memberikan keuntungan
seperti, proses analisis mudah dan ekonomis, karena tidak memerlukan
instrument yang sangat mahal (Daode,2007).
Setiap mikroba akan tumbuh dengan baik di dalam lingkungannya

hanya selama kondisinya menguntungkan bagi pertumbuhan dan untuk

F1F1 13 067
5
mempertahankan dirinya. Begitu terjadi perubahan fisik atau kimiawi, seperti

misal habisnya nutrient atau terjadinya perubahan radikal dalam hal suhu atau
pH. Adapun faktor-faktor lingkungan yang mempengaruhi viabilitas mikroba
yaitu suhu, atmosfer gas, keasaman dan kebasaan (pH), dan faktor-faktor
lainnya. Bakteri secara makroskopis membentuk koloni berwarna putih krem,
secara mikroskopis sel berbentuk batang dan tersusun streptobasil, Gram
positif. Spora berbentuk oval dan terletak sentral (Noviana dan Budi, 2009).
Antibiotika pertama kali ditemukan oleh Alexander Fleming pada
tahun 1929, yang secara kebetulan menemukan suatu zat antibakteri yang
sangat efektif yaitu penisilin. Penisilin ini pertama kali dipakai dalam ilmu
kedokteran tahun 1939 oleh Chain dan Florey. antbiotik ialah suatu bahan
kimia yang dikeluarkan oleh jasadrenik/hasil sintetis semi-sintetis yang
mempunyai struktur yang sama dan zat ini dapatmerintangi/memusnahkan
jasad renik lainnya (Widjajanti, 1996).
Terdapat enam marga bakteri penghasil endospora yaitu Bacillus,
Sporolactobacillus, Clostridium, Desulfotomaculum, Sporosarcina,
Thermoactinomycetes.Sebelum digolongkan menjadi enam marga, bakteri
penghasil endospora dibagi menjadi dua kelompok, yaitu termasuk Marga
Bacillus jika merupakan gram positif, dan termasuk marga Clostridium jika
merupakan gram negatif (Hatmanti, 2000).

F1F1 13 067
6
BAB III
METODE PRAKTIKUM
A. Tempat Dan Waktu Praktikum

Praktikum bioassay ini berlangsung pada hari kamis tanggal 29
desember 2016 di Laboratorium Farmasi ,Jurusan Farmasi ,Fakultas
Farmasi Univesritas Haluoleo Kendari .
B. Alat dan Bahan
1. Alat
Alat-alat yang digunakan pada percobaan ini adalah:
- Autoclave
- Batang pengaduk
- Botol Selai
- Bunsen
- Cawan Petri
- Erlenmeyer 100 ml, 250 ml, 500 ml
- Gelas Kimia 100 ml, 500 ml
- Gelas Ukur 10 ml, 25 ml, 50 ml
- Hot Plate
- Inkubator
- Labu Takar 25 ml, 100 ml, 1000 ml
- LAF (Laminar Air Flow)
- Lumpang dan Alu
- Ose Bulat
- Ose Lurus
- pH meter
- Pipet Mikro
- Pipet Tetes
- Pinset
- Rak Tabung

F1F1 13 067
7
- Sentrifuge
- Spatula
- Spoit 3 ml, 5 ml, 10 ml
- Tabung Reaksi
- Tabung sentrifuge
- Timbangan analitik
- Vial
- Vortex
- Waterbath
2. Bahan
Bahan-bahan yang digunakan pada percobaan ini adalah:
- Agar
- Alkohol 70%
- Aluminium foil
- Aquades
- Aqua Pro Injection (API)
- Daging Ayam
- Daging Kambing
- Daging Sapi
- Ekstrak Beef
- Injeksi Kanamisin
- Kapas
- Kassa
- KH2PO4
- NaCl
- NaCl fisiologis
- Na2HPO4
- Paper Disk
- Pepton
- Spiritus

F1F1 13 067
8
- Telur Ayam Kampung

- Telur Ayam Ras
- Telur Bebek
- Tissue
C. Uraian Bahan
1. Agar (Ditjen POM, 1979 : 74)
Nama Resmi : Agar
Nama Lain : Agar-agar
Pemerian : Tidak berbau atau bau lemah, berasa musilago
pada lidah
Kelarutan : Tidak larut dalam air dingin, dan larut dalam air
mendidih
Penyimpanan : Dalam wadah tertutup baik
Kegunaan : Bahan pemadat medium
2. Aquades (Ditjen POM, 1979 : 96)
Nama Resmi : Aqua Destillata
Nama Lain : Aquades, Air Suling
Rumus Molekul : H2O
Berat Molekul : 18,02
Pemerian : Cairan jernih, tidak berwarna, tidak berbau, tidak
mempunyai rasa
Penyimpanan : Dalam wadah tertutup
Kegunaan : Pelarut
3. Ekstrak Beef (Ditjen POM, 1995 : 1152)
Nama Resmi : Beef Extract
Nama Lain : Kaldu nabati, kaldu hewani, ekstrak beef
Pemerian : Berbau dan berasa pada lidah. Kaldu daging sapi
konsentrat diperoleh dengan mengekstraksi
daging sapi segar tanpa lemak, dengan cara
merebus dalam air dan menguapkan kaldu pada
suhu rendah dalam hampa udara sampai

F1F1 13 067
9
terbentuk residu kental berbentuk pasta. Massa

berbentuk pasta, berwarna coklat kekuningan
sampai coklat tua, bau dan rasa seperti daging,
sedikit asam.
Kelarutan : Larut dalam air dingin
Penyimpanan : Simpan dalam wadah tertutup rapat, tidak tembus
cahaya
Kegunaan : Sumber protein untuk pertumbuhan
mikroorganisme
4. Etanol (Ditjen POM, 1979 : 65)
Nama Resmi : Aethanolum
Nama Lain : Alkohol, etanol
Rumus Molekul : C2H5OH
Berat Molekul : 46,07
Pemerian : Cairan tidak berwarna, jernih, mudah menguap
dan mudah bergerak, bau khas, rasa panas. Mudah
terbakar dengan memberikan nyala biru yang
tidak berasap.
Kelarutan : Sangat mudah larut dalam air, dalam kloroform P,
dan dalam eter P
Penyimpanan : Dalam wadah tertutup rapat, terlindung dari
cahaya, ditempat sejuk, jauh dari nyala api
Kegunaan : Antiseptik
5. Pepton (Ditjen POM, 1995 : 1191)

Nama Resmi : Pepton
Pemerian : Serbuk, kuning kemerahan sampai coklat, bau
khas tidak busuk
Kelarutan : Larut dalam air, memberikan larutan berwarna
coklat kekuningan yang bereaksi asam.
6. Kalium Dihidrogen Fosfat (Ditjen POM, 1979 : 687)

F1F1 13 067
10
Nama Lain : Kalium Bisolfat, Kalium Fosfat Monobasa

RM/BM : KH2PO4/136,086 g/mol
Pemerian : Serbuk hablur putih
Kelarutan : Mudah larut dalam air
Kegunaan : Sebagai bahan pembuat pepton
7. Dinatrium Hidrogen Fosfat (Ditjen POM, 1979 : 227)
Nama Resmi : Dinatrii Hydrogenphosphas
Nama Lain : Dinatrium Hidrogen Fosfat, Natrium Fosfat
RM/BM : Na2HPO4 . 12H2O / 358,14
Pemerian : Hablur, tidak berwarna, tidak berbau, rasa asin
Kelarutan : Larut dalam 5 bagian air, sukar larut dalam etanol
(95%)P
Penyimpanan : Dalam wadah tertutup rapat
Kegunaan : Sebagai bahan pembuat medium pepton
8. Natrium Hidroksida (Ditjen POM, 1979 : 412)
Nama Resmi : Natrii Hydroxydum
Nama Lain : Natrium Hidroksida
RM/BM : NaOH/40,00 g/mol
Pemerian : Bentuk batang, butiran, massa hablur atau keeping,

kering, keras, rapuh dan menunjukkan susunan
hablur; putih, mudah meleleh basah. Sangat
alkalis dan korosif. Segera menyerap
karbondioksida.
Kelarutan : Sangat mudah larut dalam air dan etanol (95%) P.

F1F1 13 067
11
D. Uraian Obat
1. Kanamycin Sulfat Injeksi (Kanamycini Sulfatis Injection) (Ditjen POM,
1979;334-335)
Kandungan : Injeksi kanamycin sulfat mengandung
kanamycin sulfat. C18H36N4O11 H2SO4
tidak kurang dari 90,0% dan tidak
lebih dari jumlah yang tertera pada
etiket.
Struktur Kimia :
Pemerian : Larutan jernih; tidak berwarna hingga

kuning pucat
Indikasi : Menurut Identifikasi A yang tertera
pada Kanamysin sulfat, menggunakan
sejumlah larutan (l) yang dibuat
sebagai berikut : Encerkan sejumlah
volume injeksi dengan air secukupnya
hingga kadar 2 % b/v.
Keasaman-Kebasahan : pH 4,5 sampai 6,0
Penyimpanan : Dalam wadah dosis tunggal,
terlindung dari cahaya.
Kanamycin termasuk dalam golongan aminoglikosida.14 Tersusun

atas tiga unit senyawa, yaitu 6-D-glukosamina, 1,3-diamino-4,5,6-
trihidroksi sikloheksana, dan 3-D-glukosamina. Kanamycin memiliki
aktivitas antimikroba untuk gram negatif yang aerob. Kanamycin aktif

F1F1 13 067
12
terhadap Neisseria sp., Shigella, P. aeruginosa, E.coli, Proteus, dan lain

sebagainya.
Kanamycin bersifat sangat polar sehingga sulit diabsorbsi dalam
saluran cerna, sehingga pemberian kanamycin sebaiknya diberikan secara
parenteral melalui intramuskuler. Kerja dari antibiotik tersebut
menghambat sintesa protein. Resistensi terhadap kanamycin dapat
dikarenakan kegagalan penetrasi obat ke dalam kuman, rendahnya
afinitas obat pada ribosom atau inaktivasi obat oleh enzim kuman.
Kanamycin memiliki ikatan protein yang rendah dan efek samping, yaitu
ototoksik dan nefrotoksik.
D. Uraian Bakteri
1. Klasifikasi bakteri Bacillus Subtilis (Dwidjoseputro. 2005)
Kingdom :Bacteria
Phylum :Firmicutes
Class :Bacilli
Order :Bacillales
Family :Bacillaceae
Genus :Bacillus
Species : Bacillus Subtilis
(Bacillus Subtilis)
E. Prosedur kerja

F1F1 13 067
13
1. Pembuatan Media Pertumbuhan
a. Pembuatan Media Spora Bacillus subtilis
Pepton
- Ditimbang 5 g
- Dimasukkan ke dalam erlenmeyer
- Ditambahkan beef extract sebanyak 3 g
- Dilarutkan dalam sebagian air suling
- Ditambahkan bacto agar sebanyak 15 g sampai dengan 18 g
-Ditambahkan air suling hingga volume keseluruhan menjadi

1000 ml
Hasil Pengamatan

F1F1 13 067
14
b. Pembuatan Media Uji
Pepton
- Ditimbang 5 g
- Dimasukkan ke dalam erlenmeyer
- Ditambahkan beef extract sebanyak 3 g
- Dilarutkan dalam sebagian air suling
- Ditambahkan bacto agar sebanyak 15 g sampai dengan 18 g
- Ditambahkan air suling hingga volume keseluruhan menjadi

1000 ml
Hasil Pengamatan

F1F1 13 067
15
1. Pembuatan Spora Bacillus subtilis ATCC 6633

Media Agar
- Dibuat media agar miring nomor 1 dalam botol media sebanyak

100 ml
- Diinokulasikan kuman B. Subtilis ATCC 6633 ke dalam botol-botol

yang telah berisi media agar nomor 1 tersebut dengan cara
melakukan goresan dengan menggunakan ose
- Diinkubasikan selama 1 minggu dalam inkubator dengan

Biakan Bakteri
- Dipanen dengan cara mengerok permukaan media yang ditumbuhi

kuman dengan kawat steril
- Dimasukkan ke dalam larutan NaCl fisiologis steril 20 ml sebanyak

4 tabung sentrifus (tergantung pada banyaknya hasil panen spora)
- Dipanaskan larutan tersebut dalam penangas air pada temperatur

650C selama 30 menit
- Disentrifus dengan kecepatan 3000 rpm selama 10 menit
- Dibuang supernatannya (lapisan atas)
- Ditambahkan larutan NaCl fisiologis steril secukupnya
- Dikocok
- Dimasukkan ke dalam refrigerator dengan temperatur 40C sampai

dengan 80C selama 18-24 jam
Hasil Pengamatan

F1F1 13 067
16
2. Pembuatan Dapar Fosfat
a) Pembuatan Dapar Fosfat Nomor 2

KH2PO4 Na2HPO4
- Ditimbang 6,4 g - Ditimbang 18,9 g
- Dilarutkan - Dilarutkan
dengan sedikit dengan sedikit
aquades - Dicampurkan aquades
- Ditambahkan aquades hingga 1000 ml
- Diatur pH menjadi 7,0 0,1
Hasil Pengamatan
b) Pembuatan Dapar Fosfat Nomor 3

KH2PO4 Na2HPO4
- Ditimbang 3,5 g - Ditimbang 3 g
- Dilarutkan - Dilarutkan dengan

dengan sedikit sedikit aquades
- Dicampurkan
- Ditambahkan aquades hingga 1000 ml
- Diatur pH menjadi 6,0 0,1
- Disterilkan dengan autoklaf pada temperatur
Hasil Pengamatan

F1F1 13 067
17
3. Pembuatan Larutan Baku Pembanding
Baku Pembanding untuk Kanamisin
Kanamisis
- Dilarutkan sejumlah baku pembanding kanamisin dalam

larutan dapar nomor 3 sehingga di dapat konsentrasi 1.000
g/ml.
- A
Kanamisin
- Dipipet 2 ml larutan stok baku kanamisin, diencerkan
sampai dengan 20 ml dengan dapar nomor 2
- Dihomogenkan agar diperoleh larutan baku kerja 100
g/ml.
- Dilakukan pengenceran serial hingga diperoleh
konsentrasi 1,0 g/ml.
Larutan Baku Pembanding
4. Preparasi Sampel
a) Preparasi Sampel Daging

Dagin Kambing
- Ditimbang sebanyak 10 gram
- Dipotong kecil-kecil
- Ditambahkan pelarut dapar fosfat nomor 2 sebanyak 20 ml
- Dihomogenkan dengan menggunakan alat homogenizer
- Disentrifus 3.000 rpm selama 10 menit.
- Diambil supernatant dan siap untuk digunakan sebagai

larutan uji

F1F1 13 067
18
- Dilakukan hal yang sama pada daging sapi dan daging

ayam
LarutanUji
b) Preparasi Sampel Telur
Telur Ayam Kampung
- Ditimbang telur (putih dan kuning telur) sebanyak

10 gram
- Ditambahkan pelarut dapar fosfat nomor 2 sebanyak

20 ml
- Dihomogenkan dengan menggunakan alat

homogenizer
- Disentrifus 3.000 rpm selama 10 menit
- Diambil supernatant dan siap untuk digunakan

sebagai larutan uji
- Diulang perlakuan yang sama pada sampel telur

bebek
LarutanUji
5. PengujianMikrobiologi
Media Cair
- Dimasukkansporasebanyak 5 ml
- Dihomogenkan
- Dituang media kedalam cawan petri sebanyak 10 ml
- Didiamkan hingga mengeras

F1F1 13 067
19
Media Padat
-
- Disiapkan larutan baku, larutan uji(daging kambing, daging

sapi, daging ayam, telur ayam kampung, dan
telurbebek),control positif (kanamisin), control negative
(larutardapar no 2), kertas cakram
- Direndam kertas cakram dalam larutan baku, didiamkan

beberapa menit,
- Diambil kertas cakram dari larutan baku dengan pinset yang

telah dipanaskan
- Didiamkan selama 1 jam kemudian dimasukkan kedalam

incubator
- Diinkubasi selama 24 jam

Hasil Pengamatan
-
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Hasil Pengamatan
1. Tabel Pengamatan Pertumbuhan Bacillus subtilis ATCC 6633
Hari Hasil pengamatan Hari Hasil pengamatan

kel III
Kel.III

F1F1 13 067
20
Hari ke Hari ke 5
Hari ke Hari ke 6
Hari ke 3 Hari ke 7
Hari ke 4
1. Tabel Pengamatan Pengujian Mikrobiologi

a) Larutan Pembanding
No Diameter Zona Hambat (cm)

Cawan Petri 4 5
. 1 2 3

F1F1 13 067
21
1. - - - - -
2 - - - - -
3 - - - - -
Keterangan :
1. Larutan Baku Kanamycin 4 ppm
4. Larutan Baku Kanamycin 0,5 ppm
5. Larutan Baku Kanamycin 0,25 ppm
b) Daging Ayam
Diameter Zona Hambat (cm)

Kontrol
No. Cawan Petri Kontrol Sampe
Positif
Negatif (-) l
(+)

F1F1 13 067
22
1 0,6 - -
2 2,3 - 0,1
3 0,7 0,33 0,4
Keterangan : Kontrol (+) = Larutan baku kanamycin 1000 ppm

Kontrol (-) = Larutan dapar nomor 2
Sampel = Supernatan daging ayam
c) Daging Kambing

Kontrol
Positif
Negatif (-) l
(+)

F1F1 13 067
23
1 2,43 - -
2 1 - -
3 1,2 - -

Sampel = Supernatan daging kambing
d) Daging Sapi

Kontrol
Positif
Negatif (-) l
(+)

F1F1 13 067
24
1 1,76 - -
2 1,66 - -
3 1,76 - -

Sampel = Supernatan daging sapi
e) Telur Ayam Ras

Kontrol
Positif
Negatif (-) l
(+)

F1F1 13 067
25
1 2,43 - -
2 2,2 - -
3 1,36 0,36 -

Sampel = Supernatan telur ayam ras
f) Telur Ayam Kampung

Kontrol
Positif
Negatif (-) l
(+)

F1F1 13 067
26
1 1,13 - -
2 0,83 - -
3 1,9 - -

Sampel = Supernatan telur ayam kampung
g) Telur Bebek

No. Cawan Petri Kontrol Kontrol Sampe
Positif Negatif l

F1F1 13 067
27
1 1 - -
2 1,2 0,23 -
3 0,9 1,2 -

Sampel = Supernatan telur bebek
2. Perhitungan Konsentrasi Larutan Standar
a. Perhitungan Konsentrasi Larutan Baku Pembanding
1) Konsentrasi 4 ppm dalam 20 ml

F1F1 13 067
28
1000 ppm .x = 4 ppm . 20 ml
4 . 20
x = 1000
x = 0,08 ml
80 l
1000 ppm .x = 2 ppm . 20 ml
2. 20
x = 1000
x = 0,04 ml
40 l
1000 ppm .x = 1 ppm . 20 ml
1. 20
x = 1000
x = 0,02 ml
20 l
4) Konsentrasi 0,5 ppm dalam 20 ml
1000 ppm .x = 0,5 ppm . 20 ml

F1F1 13 067
29
0,5. 20
x = 1000
x = 0,01 ml
10 l
5) Konsentrasi 0,25 ppm dalam 20 ml
1000 ppm .x = 0,25 ppm . 20 ml
0,25. 20
x = 1000
x = 0,005 ml
5 l
b. Perhitungan Diameter Zona Hambat
1) Daging Ayam
a) Kontrol Positif
Cawan Petri 1
( 1, 50,6 ) + ( 1,10,6 )+(10,6)

Diameter Zona Hambat = 3
0,9+ 0,5+0,4
= 3
1,8
= 3

F1F1 13 067
30
= 0,6 cm
Cawan Petri 2
( 2,20,6 ) + ( 30,6 ) +(3,50,6)

1,6+ 2,4+2,9
= 3
6,9
= 3
= 2,3 cm
Cawan Petri 3
Diameter Zona Hambat =
( 1,50,6 ) + ( 1,40,6 )+(1,10,6)

3
0,9+ 0,8+0,5
= 3
2,2
= 3
= 0,73 cm
b) Kontrol Negatif
Cawan Petri 3

F1F1 13 067
31
( 0,90,6 )+ (10,6 ) +(0,90,6)

0,3+ 0,4+ 0,3

= 3
1
= 3
= 0,33 cm
c) Sampel
Cawan Petri 2
( 0,70,6 )+ ( 0,70,6 ) +(0,70,6)

3
0,1+ 0,1+ 0,1

= 3
0,3
= 3
= 0,1 cm
Cawan Petri 3
( 10,6 ) + ( 10,6 ) +(10,6)


F1F1 13 067
32
0,4+0,4 +0,4
= 3
1,2
= 3
= 0,4 cm
2) Daging Kambing
Kontrol Positif
Cawan Petri 1
( 3,50,6 ) + ( 2,30,6 ) +(3,20,6)

3
2,9+ 1,7+2,6
= 3
7,2
= 3
= 2,4 cm
Cawan Petri 2
( 1,60,6 )+ (1,60,6 )+(1,60,6)

3

F1F1 13 067
33
1+1+1
= 3
3
= 3
= 1 cm
Cawan Petri 3
( 1,70,6 )+ (1,90,6 ) +(1,80,6)

3
1,1+1,3+1,2
= 3
3,6
= 3
= 1,2 cm
3) Daging Sapi
Kontrol Positif
Cawan Petri 1
( 2,60,6 )+ ( 2,10,6 ) +(2,40,6)

3

F1F1 13 067
34
2+1,5+1,8
= 3
5,3
= 3
= 1,76 cm
Cawan Petri 2
( 2,30,6 )+ ( 2,20,6 ) +(2,30,6)

3
1,7+ 1,6+1,7
= 3
5
= 3
= 1,67 cm
Cawan Petri 3
( 2,40,6 ) + ( 2,30,6 ) +(2,40,6)

3
1,8+ 1,7+1,8
= 3

F1F1 13 067
35
5,3
= 3
= 1,76 cm
4) Telur Ayam Kampung
Kontrol Positif
Cawan Petri 1
( 2,10,6 ) + ( 1,60,6 ) +(1,50,6)

3
1,5+1+ 0,9
= 3
3,4
= 3
= 1,13 cm
Cawan Petri 2
( 1,50,6 ) + ( 1,40,6 )+(1,40,6)

3
0,9+ 0,8+0,8
= 3

F1F1 13 067
36
2,5
= 3
= 0,83 cm
Cawan Petri 3
( 3,40,6 ) + ( 2,10,6 )+(20,6)

2,8+ 1,5+1,4
= 3
5,7
= 3
= 1,9 cmp
5) Telur Ayam Ras
a) Kontrol Positif
Cawan Petri 1
( 3,90,6 ) + ( 2,30,6 ) +(2,90,6)

3
3,3+ 1,7+2,3
= 3

F1F1 13 067
37
7,3
= 3
= 2,43 cm
Cawan Petri 2
( 3,90,6 ) + ( 2,10,6 ) +(2,40,6)

3
3,3+ 1,5+ 1,8

= 3
6,6
= 3
= 2,2 cm
Cawan Petri 3
( 1,90,6 ) + ( 20,6 ) +( 20,6)

1,3+1,4 +1,4
= 3
4,1
= 3
= 1,36 cm

F1F1 13 067
38
b) Kontrol Negatif
Cawan Petri 3
( 10,6 ) + ( 10,6 ) +(0,90,6)

0,4+0,4 +0,3
= 3
1,1
= 3
= 0,36 cm
6) Telur Bebek
a) Kontrol Positif
Cawan Petri 1
( 1,50,6 ) + ( 1,70,6 )+(1,60,6)

3
0,9+ 1,1+ 1
= 3
3
= 3
= 1 cm

F1F1 13 067
39
Cawan Petri 2
( 1,90,6 ) + ( 1,70,6 ) +(1,80,6)

3
1,3+1,1+1,2
= 3
3,6
= 3
= 1,2 cm
Cawan Petri 3
( 1,50,6 ) + ( 1,50,6 ) +(1,50,6)

3
0,9+ 0, 9+0,9
= 3
2,7
= 3
= 0,9 cm
b) Kontrol Negatif
Cawan Petri 2

F1F1 13 067
40
( 0,90,6 )+ ( 0,90,6 )+(0,70,6)

3
0,3+ 0,3+0,1
= 3
0,7
= 3
= 0,23 cm
Cawan Petri 3
( 1,90,6 ) + ( 1,70,6 ) +(1,80,6)

3
1,3+1,1+1,2
= 3
3,6
= 3
= 1,2 cm

F1F1 13 067
41
B. Pembahasaan
Residu antibiotika adalah senyawa asal dan/atau metabolitnya yang
terdapat dalam jaringan produk hewani dan termasuk residu hasil uraian
lain nya dari antibiotika tersebut. Residu dalam bahan pangan meliputi
senyawa asal yang tidak berubah, metabolit dan/atau konjugat lain.
Beberapa metabolit obat diketahui bersifat kurang atau tidak toksik
dibandingkan dengan senyawa asalnya, namun beberapa metabolit
bersifat lebih toksik.
Metode uji tapis pada umumnya merupakan Uji kualitatif atau
semi kuantitatif. Uji ini didesain agar dapat memberikan hasil positif atau
negatif yang mengindikasikan hadir atau tidaknya residu antibiotika dalam
daging dan telur atau dalam bentuk lainnya. Uji tapis ini tidak dapat
mengidentifikasi secara spesifik residu antibiotika yang ada dalam
sampel. Uji ini berfungsi untuk mengidentifikasi kehadiran residu
antibiotika dengan cepat, mudah digunakan dan relatif tidak mahal. Salah
satu metode uji tapis yang umum digunakan untuk mendeteksi residu
antibiotika pada pangan, termasuk daging dan telur adalah bioassay.
Beberapa langkah yang dilakukan dalam praktikum ini adalah

pembuatan media .tujuannya untuk menumbuhkan dan
mengembangbiakan bakteri mengandung pepton nitrogen dan ektrak
daging yang mengandung garam-garam mineral yang cocok untuk
pertumbuhan bakteri .kemudian dilanjutkan dengan menumbuhkan spora
B.subtillis dengan cara dibuat agar miring dan botol media sebanyak 100
ml kemudian diinokulaasi kedalam botol media dengan melakukan
goresan memakai ose agar bakteri tersebar merata kemudian diinkubasi
selama 7 hari / 1 minggu untuk melihat pertumbuhannya .setelah satu
minggu kemudian biakan bakteri dipanen dengan cara menggerok
permukaan media yang ditumbuhi kuman dengan kawat steril dimasukan
kedalam larutan NaCl fisiologi .

F1F1 13 067
42
Berdasarkan praktikum yang dilakukan pengujian terhadap

beberapa sampel yaitu daging ayam,daging sapi ,daging kambing ,telur
ayam kampung ,telur ayam ,dan telur bebek .untuk menguji apakah
terdapat residu penggunaan antibiotik pada sampel hewani tersebut dengan
mengunakan metode screening test dengan pembandingan antbiotik
kenamisin yang merupakan antibiotik golongan aminoglikosida yang
bekerja menghambat proses sintesis protein mikroorganisme spektrum luas
kenamisisn mampu berikatan dengan bakteri gram negativeataupun positif
kenamisin digunakan untuk pengobatan infeksi ,jika penisilin ataupun obat
yang kurang toksisk lainnya tidak dapat digunakan .
Berdasarkan pengamatan yang dilakukan pada sampel daging ayam

,daging kambing ,daging sapi ,telur ras ,telur ayamg kampung ,dan telur
bebek positis mengandung antibiotik adalah daging ayam . pada daging
ayam terjadi diameter zona hambat kontol positif (+) yaitu 1 = 0,6 cm,2
=2,3 cm ,dan 3 = 0,7 cm,untuk kontrol negatif pada no 1 dan 2 tidak ada
kemudian nomor 3 =0,4 dan dan sampel mengalami zona hambat.

F1F1 13 067
43
BAB V
PENUTUP
A. KESIMPULAN
Berdasarkan hsil uji maka dapat disimpulkan bahwa pengamatan
yang dilakukan pada sampel daging ayam ,daging kambing ,daging sapi
,telur ras ,telur ayam kampung ,dan telur bebek, positif mengandung
antibiotic adalah daging ayam.
B. SARAN
Sebaiknya dalam pengerjaan praktikum ini tetap dilakukan secara
aseptik dan dengan ketelitian tinggi agar tidak ada mikroorganisme yang
tidak diharapkan tumbuh.

F1F1 13 067
44
Daftar Pustaka
Badan Standarisasi Nasional (BSN) 2010. Standar Nasional Indonesia SNI
7587.3:2010. Metode Uji Residu Antibiotik secara Enzyme Linked
Immunoassay (ELISA) pada ikan dan udang-Bagian 3:
Chloramphenicol (CAP) Dewan Standarisasi Nasional DSN. Jakarta.
Badan Standarisasi Nasional (BSN) 2007. SNI 01-2705-2005. Udang Beku.
Dewan Standarisasi Nasional DSN. Jakarta.
Daodee, S., Wangboonskul, J., Jarukamjorn, K., Sripanidkulchai, B., dan
Murakami, T. (2007). Membrane Transport of Andrographolide in
Artificial Membrane and Rat Small Intestine. Pakistan Journal of
Biological Sciences 10(12): 2078-2085.
Ditjen POM ( 1979). Farmakope Indonesia. Edisi III. Jakarta:Departemen
Kesehatan RI. Hal. 15, 746, 748.
Ditjen POM ( 1995). Farmakope Indonesia. Edisi IV. Jakarta: Departemen
Kesehatan R.I. Hal. 450-451, 1124, 1144, 1165, 1210.
Dwidjoseputro. 2005. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Djambatan. Malang
Hatmanti, A. 2000. Penganalan Bacillus spp. Oseana, Vol. XXV, No.1, 200: 31-
41, ISSN 0216-1877.
Margino, S., 2008. Produksi metabolit sekunder (antibiotik) oleh isolat jamur
endofit Indonesia. Majalah Farmasi Indonesia,1 9: 86 94.
Noviana, L. dan Budi R., 2009, Viabilitas Rhizobakteri Bacillus sp. DUCC-BR-
K1.3 pada Media Pembawa Tanah Gambut Disubstitusi dengan Padatan
Limbah Cair Industri Rokok, Bioma, Vol. 11, No. 1, ISSN: 1410-8801.
Windyaswari sri ari , Faramayuda Fahrauk dan Dessy Ratnasari, 2015 , Kajian
Pendahuluan Potensi Anti Kanker Dengan Uji Toksisitas Metode Brine
Shrimp Test (Bslt) Terhadap Ekstrak Etanol Dan Fraksi-Fraksi Dari
Kulit Batang Kemiri Aleurites Moluccana (L.) Willd.Jurnal Ilmiah
Farmasi, Jun 2015, 3(1), 1-7ISSN 2354-6565.
Witra ,Djamaan Akmal,Dan Krisyanella, 2011, Optimasi Proses Produksi

Bioplastik Poli (3-Hidroksibutirat) Dengan Bakteri Bacillus Sp Faac
20801 Menggunakan Bahan Dasar Jerami Padi Setelah Fermentasi.
Jurnal Farmasi Higea, Vol.3, No. 2, 2011.
Widjajanti, V. N., 1999,Obat-Obatan, 76-77, Penerbit Kanisius, Yogyakarta.
Yuningsih,2010,Keberadaan Residu Anti Biotika Dalam Produk

Peternakan (Susu Dan Daging) , Lokakarya Nasional Keamanan
Pangan Produk Peternakan.
LAMPIRAN

F1F1 13 067
45
Skema Kerja
a. Pembuatan Media Pertumbuhan

1) Pembuatan Media Biakan Spora Bacillus subtilis
500 ml
AquadesPepton
5 g Pepton 1,25 g NaCl
3,75 g Beef Extract 15 gbacto agar
Dididihkan hingga bacto agar larut
Disterilkan dalam autoklaf
Dibuat 3 media lainnya dengan perlakuan yang sama

F1F1 13 067
46
2) Pembuatan Media Uji
5 g Pepton 500 ml Aquades
Pepton
3,7 g Beef Extract 15-18 g bacto agar
Dididihkan hingga bacto agar larut
Disterilkan dalam autoklaf
Dibuat 1 media lainnya dengan perlakuan yang sama

F1F1 13 067
47
b. Pembuatan Spora Bacillus subtilis ATCC 6633
Biakan bakteri 1 ose
Berisi Media Agar
Digores zig zag
Diinkubasi selama 1 minggu
Diamati pertumbuhannya setiap hari
NaCl fisiologis 20 ml
- Dipanaskan
- Disentrifus
- Dibuang supernatant
- Ditambahkan NaCl
fisiologis
- Dikocok
- Dimasukkan dalam
refrigerator 18-24 jam
Tabung Sentrifus - Dipanaskan kembali 30
menit
- Disentrifus
- Diambil supernatant
- Disimpan sebgai spora

F1F1 13 067
48
c. Pembuatan Dapar Fosfat

1) Pembuatan Dapar Fosfat Nomor 2
6,4 g KH2PO4 1000 ml 18,9 g Na2HPO4

aquades
Disterilkan
2) Pembuatan Dapar Fosfat Nomor 3
3,5 g KH2PO4 1000 ml 3 g Na2HPO4

aquades
Disterilkan

F1F1 13 067
49
d. Pembuatan Larutan Baku Pembanding Kanamisin
0,1 g Injeksi Kanamisin

Dilarutkan dengan 100 ml aquades, dan direndam paper
disk
Larutan Baku Kanamisin 1000 ppm
- Diencerkan
dengan 20 ml
4 ppm 2 ppm 1 ppm 0,5 ppm 0,25 ppm
larutan dapar
fosfat nomor 2
- Direndam paper
disk

F1F1 13 067
50
e. Preparasi sampel
1) Preparasi Sampel Daging
5 g Sampel Daging (Daging

Ayam, Daging Kambing,
Daging Sapi)
- Dihaluskan
- Ditambahkan 10 ml dapar
fosfat Nomor 2
- Disentrifus
- Diambil supernatan
- Direndam paper disk
2) Preparasi Telur
5 g Sampel Telur (Telur - Ditambahkan 10 ml dapar

Ayam Kampung, Telur fosfat Nomor 2
- Disentrifus
Ayam Ras, Telur Bebek) - Diambil supernatant
- Direndam paper disk
f. Pengujian Mikrobiologi
Media Agar Uji dicairkan
Ditambahkan 5 ml biakan spora
Dihomogenkan
Diambil 10 ml dan dimasukkan
ke dalam cawan petri
1 2
c a
5 3 Paper disk berisi larutan
4 b

F1F1 13 067
51
Diinkubasi selama 1 x 24 jam
Diukur zona hambat bakteri
Keterangan:
a : Kontrol Positif (Larutan stok kanamisin 1000 ppm)
b : Kontrol Negatif (Larutan Dapar Fosfat Nomor 2)
c : Sampel Uji(Larutan sampel daging dan telur)
1 : Larutan Kanamisin 4 ppm
4 : Larutan Kanamisin 0,5 ppm
5 : Larutan Kanamisin 0,25 pp

F1F1 13 067
52

F1F1 13 067

Uji Anti Resid Menggunakan Metode Uji Tapis

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Uji Anti Resid Menggunakan Metode Uji Tapis

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

1

Metode uji tapis (screening test) residu antibiotik pada

Penggunaan antibiotik tentu sangat dipertimbangkan dalam ransum.

Flora Reny Pakage Rahmat Muliadi S.Farm

Penggunaan probiotik ini memiliki kelebihan dibandingkan dengan

Metode uji tapis (screening test) merupakan suatu cara pengujian

Flora Reny Pakage Rahmat Muliadi S.Farm

Flora Reny Pakage Rahmat Muliadi S.Farm

Setiap mikroba akan tumbuh dengan baik di dalam lingkungannya

Flora Reny Pakage Rahmat Muliadi S.Farm

mempertahankan dirinya. Begitu terjadi perubahan fisik atau kimiawi, seperti

Flora Reny Pakage Rahmat Muliadi S.Farm

A. Tempat Dan Waktu Praktikum

B. Alat dan Bahan

Flora Reny Pakage Rahmat Muliadi S.Farm

Flora Reny Pakage Rahmat Muliadi S.Farm

- Telur Ayam Kampung

Flora Reny Pakage Rahmat Muliadi S.Farm

terbentuk residu kental berbentuk pasta. Massa

5. Pepton (Ditjen POM, 1995 : 1191)

Flora Reny Pakage Rahmat Muliadi S.Farm

Nama Lain : Kalium Bisolfat, Kalium Fosfat Monobasa

8. Natrium Hidroksida (Ditjen POM, 1979 : 412)

Nama Resmi : Natrii Hydroxydum

Nama Lain : Natrium Hidroksida

RM/BM : NaOH/40,00 g/mol

Pemerian : Bentuk batang, butiran, massa hablur atau keeping,

Kelarutan : Sangat mudah larut dalam air dan etanol (95%) P.

Penyimpanan : Dalam wadah tertutup baik

Flora Reny Pakage Rahmat Muliadi S.Farm

Pemerian : Larutan jernih; tidak berwarna hingga

Kanamycin termasuk dalam golongan aminoglikosida.14 Tersusun

Flora Reny Pakage Rahmat Muliadi S.Farm

terhadap Neisseria sp., Shigella, P. aeruginosa, E.coli, Proteus, dan lain

Flora Reny Pakage Rahmat Muliadi S.Farm

1. Pembuatan Media Pertumbuhan

a. Pembuatan Media Spora Bacillus subtilis

- Dimasukkan ke dalam erlenmeyer

- Ditambahkan beef extract sebanyak 3 g

- Dilarutkan dalam sebagian air suling

- Ditambahkan bacto agar sebanyak 15 g sampai dengan 18 g

-Ditambahkan air suling hingga volume keseluruhan menjadi

Flora Reny Pakage Rahmat Muliadi S.Farm

b. Pembuatan Media Uji

- Dimasukkan ke dalam erlenmeyer

- Ditambahkan beef extract sebanyak 3 g

- Dilarutkan dalam sebagian air suling

- Ditambahkan bacto agar sebanyak 15 g sampai dengan 18 g

- Ditambahkan air suling hingga volume keseluruhan menjadi

Flora Reny Pakage Rahmat Muliadi S.Farm

1. Pembuatan Spora Bacillus subtilis ATCC 6633

- Dibuat media agar miring nomor 1 dalam botol media sebanyak

- Diinokulasikan kuman B. Subtilis ATCC 6633 ke dalam botol-botol

- Diinkubasikan selama 1 minggu dalam inkubator dengan

- Dipanen dengan cara mengerok permukaan media yang ditumbuhi

- Dimasukkan ke dalam larutan NaCl fisiologis steril 20 ml sebanyak

- Dipanaskan larutan tersebut dalam penangas air pada temperatur

- Disentrifus dengan kecepatan 3000 rpm selama 10 menit

- Dibuang supernatannya (lapisan atas)

- Ditambahkan larutan NaCl fisiologis steril secukupnya

- Dimasukkan ke dalam refrigerator dengan temperatur 40C sampai

Flora Reny Pakage Rahmat Muliadi S.Farm

2. Pembuatan Dapar Fosfat