TUGAS BIOANALISIS

Perbandingan penentuan Selenium dalam sampel hati

dengan Spektroskopi AAS dengan Spektroskopi massa

disusun oleh :
Usnul Alifa 068114004
Caroline Ester Daat 088114140
Fatrisia Vivi 088114143
Astaria Sekar Setiarum 088114144
Agatha Ratri Prasetyo 088114145
Dini Kristanti 088114146
Wenny Daniaty 088114147
Johana Maria P.W Rato 088114148
Siska Deselia 088114150

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA
YOGYAKARTA
2010
 BAB I

PENDAHULUAN

Selenium (Se) adalah mikronutrien esensial yang merupakan komponen integral dari
glutathione peroksidase, yang merupakan enzim antioksidan penting yang mengkatabolis
hydroperoxides. Defisiensi Selenium pada sapi dikaitkan dengan myodengeneration gizi (NMD),
penyakit myodengenerative perakut sampai subakut pada jantung dan rangka otot. NMD,
umumnya sering terjadi pada anak muda yang sedang tumbuh dengan pesat. Banyak bahan
pakan ternak yang mengalami defisiensi Se karena konsentrasi tanah yang rendah di Amerika
Serikat. Kekurangan ini mengakibatkan penyebaran Se untuk mencapai kinerja produktif yang
optimal. Namun,bila kelebihan dapat menyebabkan keracunan Se. Selain itu, tanah di beberapa
wilayah di Amerika Serikat tinggi Se, yang dapat menyebabkan tingginya konsentrasi Se pada
tanaman. Akumulasi di tanaman dapat menyebabkan keracunan pada ternak.

Selenium memiliki indeks terapeutik yang sempit. Persyaratan dietnya berada dalam
rentang 0,1-0,3 g/g. Selenium dapat mengakibatkan keracunan bila sebanyak 5 g/g Se,
diberikan dalam periode waktu yang relative singkat. Natrium Selenite diberikan secara subkutan
atau intramuskular dengan dosis hingga 0,18 mg/kg calves, sedangkan dosis parenteral sebesar
0,2 - 0,4 mg/kg dapat menyebabkan toksik.

Spesies burung dan mamalia laut yang memakan ikan memiliki konsentrasi Se yang
tinggi di dalam jaringan. Telah ditunjukkan bahwa bentuk kompleks Se tidak larut dalam merkuri
(Hg), yang dapat berfungsi untuk melindungi spesies tersebut dari keracunan Hg dengan
mencegah Hg berinteraksi dalam sel target. Deteksi dan kuantifikasi Se di sampel biologi dan
bahan makanan merupakan prosedur umum untuk mendiagnosis defisiensi Se atau intoksikasi.
Pemilihan sampel antemortem dan postmortem berasal dari darah dan hati. Contoh lain,yaitu dari
serum dan rambut, yang juga telah digunakan. Insiden defisiensi Se jauh lebih besar daripada
keracunan Se. Oleh karena itu, laboratorium hewan lebih sering digunakan untuk mendeteksi
level rendah Se dalam sampel diagnostik.

Idealnya, metode analisis harus dapat menentukan kadar Se dalam sampel secara akurat
dalam berbagai konsentrasi rendah microgram per kilogram sampai beberapa ratus mikrogram
per gram. Berbagai metode digunakan untuk mengukur Se. Metode yang dikembangkan oleh
Asosiasi Official Analytical Chemists (AOAC) adalah prosedur terbaik untuk analisis spesifik di
bawah kondisi terkontrol. Berdasarkan AOAC, penentuan Se bisa dengan menggunakan teknik
seperti fluorometry (FL) pada tanaman (969,06), generasi hibrida spektroskopi serapan atom
(HG-AAS) dengan pencernaan sistem asam nitrat (HNO3) pada makanan (986,15) yang dapat
bereaksi dg mg membentuk Mg(NO3)2, penggabungan spektrometri massa-plasma secara
induktif (ICP-MS) untuk air dan air limbah (993,14), penggabungan spektroskopi emisi atom-
plasma secara induktif (ICP-AES) untuk limbah padat (990,08). Penentuan dalam sampel
biologis dengan metode FL, kromatografi gas dengan deteksi penangkapan elektron (GC-ECD),
HG-AAS, deteksi electrothermal (ETAAS) dengan atomisasi, serapan atom dengan grafit
Zeeman dan koreksi deuterium (GFAAS), dan ICP-AES dengan atau tanpa generasi hybrid.

Singkatnya, untuk ukuran sampel yang besar digunakan HG-AAS dan FL, untuk
penghancuran bahan organik sebelum analisis menggunakan asam pekat untuk GC-ECD, FL,
HG - AAS, dan ICP-AES, derivatisasi sampel menggunakan GC-ECD dan FL, diperlukan
kondisi oksidasi untuk mencegah penguapan Se di ETAAS, dan untuk menggunakan pengubah
matriks untuk ETAAS dan GFAAS. HG-AAS merupakan metode analisis unsur secara
kuantitatif yang pengukurannya berdasarkan penyerapan cahaya dengan panjang gelombang
tertentu oleh atom logam dalam keadaan bebas. Kelebihan dari HG-AAS sangat spesifik karena
punya lampu yang berbeda untuk tiap unsur dan sensitif, dapat untuk menganalisa logam yang
membentuk campuran yang sangat kompleks, memungkinkan eksitasi unsur-unsur dengan
tingkat energi eksitasi yang randah. Kekurangannya sampel harus jernih, harus menggunakan
lampu sumber yang berbeda-beda tiap unsur, hanya untuk logam mineral. Laporan menunjukkan
bahwa HG-AAS adalah salah satu metode yang paling banyak digunakan untuk mendeteksi Se
dalam sampel biologi. Metode ini memungkinkan terjadinya gangguan matriks yang minim
karena pemisahan selektif Se dari matriks oleh generasi hidrida kovalen volatile, meskipun
semua Se harus dikonversi ke dalam bentuk yang akan menghasilkan pembentukan hidrida.
Deteksi Se menggunakan HG-AAS telah berhasil digunakan untuk sampel hati dan otot seperti
daging sapi dan ayam, jaringan paru-paru manusia, jeroan daging sapi dan ikan, kulit, tanaman,
tanah, dan plasma. Kemampuan deteksi ion pada ICP-MS menunjukkan bahwa ICP-MS dapat
digunakan untuk deteksi unsur dalam biologi sampel secara akurat dan sensitif. Keuntungan
metode ICP-MS ,yaitu dapat digunakan untuk berbagai jenis sampel dalam range, sensitivitas
tinggi, persiapan sampel minimal, ukuran sampelnya kecil, analisis multielemen simultan dan
spesimen tinggi. Tetapi, setiap metode pasti memiliki kelemahan, yaitu ICP-MS tidak dapat
digunakan untuk mendeteksi Se karena potensi ionisasi Se yang tinggi menyebabkan proporsi
atom yang lebih kecil dalam plasma akan diubah menjadi ion sehingga sensitivitas instrument
rendah. Namun, ada informasi yang memberitahukan bahwa dimungkinkannya deteksi Se oleh
ICPMS dalam sampel biologis seperti rambut, tulang, otak, jantung, hati, serum, plasma, dan otot
dengan batas deteksi serendah 0,09 g / liter dalam serum dan 0,8 g / g pada rambut.

Sejumlah studi yang membandingkan metode Se yaitu meliputi pengukuran serum Se

menggunakan HGAAS dan GFAAS, analisis suplemen diet dengan ETAAS dan HG-AAS,
analisis makanan seperti telur, roti, susu, dan hati sapi menggunakan ETAAS dan HG-AAS, dan
perbandingan FL dengan HG-AAS, injeksi alir AAS dan HG dengan deteksi rongga emisi
molekuler untuk penentuan Se pada standar (SRM) dari hati sapi dan albacore tuna. Tujuan
artikel ini adalah untuk membandingkan konsentrasi Se yang terkandung dalam hati dengan ICP-
MS dimana nilai yang diperoleh berasal dari sampel yang sama dengan menggunakan HG-AAS.

BAB II

METODE ANALISIS
A. Bahan Baku dan metode
1. Bahan baku

- HNO3 logam kelas bereaksi dg mg membentuk Mg (NO3) 2

- HCl untuk mengencerkan Se
- NaBH4 (Natrium Boro Hidrida) larutan reduktan
- Mg (NO3) 2) Mineralisasi , agar sampel yang terbaca benar Se
- NaOH melarutkan NaBH4
- Kalibrasi standar Se dan yttrium (Y) larutan standar internal yang diperoleh dari
HNO3 2%.
- SRM 1577b hati sapi dan dorm-2 otot Dogfish digunakan sebagai kontrol eksternal.
- Larutan Tuning, pembuluh Teflon-PFA, tabung sampel polypropylene bebas logam
- pipet tipsh digunakan dengan ICP-MS
- Sistem air ultra murni (Milli-Q RG dan Milli-RO1s0) digunakan untuk memproduksi
air dengan resistivitas 18 M cm.

2. Persiapan standar dan solusi

- Siapkan 20%(wt/vol) Mg(NO3)2 dalam HNO3 dan 0,06% (wt/vol) NaBH 4 dalam
NaOH.
- Untuk HG-AAS : membuat seri pengenceran standar Se 10 g/ml dengan HCl 30%
sehingga dihasilkan konsentrasi standar 0,05; 0,03; 0,02; 0,01 dan 0,005 g/ml.
- Untuk ICP-MS : tambahkan 0,250 ml standar stok (1.000 g/ml) ke dalam 49,75 ml
HNO3 2%
- Range standar 0005, 0,01, 0,05, dan 0,10 g/ml yang disiapkan dengan seri
pengenceran standar campuran 5,0 g/ml ke dalam volume total 30,0 ml HNO 3 2%
setelah penambahan 0,3 ml Y 2 g/ml
- Masukkan Y dengan konsentrasi ke dalam larutan kosong yang hanya terdiri dari 2%
HNO3.
3. Preparasi sampel
Analisis Selenium dengan HG-AAS diperlukan 1,0 g hati atau 0,25 g dorm-2 dan
0,25 g 1577b.
- Sampel ditempatkan dalam beaker gelas 100 ml dan diperlakukan dengan 10 ml dari
20% Mg (NO3) 2 dan dicerna pada suhu rendah di hot plate sampai kering.
- Sampel ditempatkan dalam tungku saringan pada 5000C selama 1 jam
- Beaker kemudian didinginkan pada suhu kamar
- Residu diperlakukan dengan 8,0 ml HCl pekat, dan ditempatkan ke pelat panas
selama sekitar 1 menit untuk memfasilitasi reduksi Se (VI) sampai Se (IV).
- Larutan dipindahkan ke dalam labu volumetrik 25 ml, dan add dengan aquadest
hingga tanda.
 - ICP-MS : 0,4 g sampel masing-masing dan 0,25 g dari dua SRMnya ditempatkan ke
dalam pembuluh Teflon PFA dan dicerna dengan 5,0 ml HNO 3 pada 90oC selama
sekitar 12 jam.
- Dinginkan sampel pada suhu kamar
- Masukkan 0,2 ml ke dalam labu ukur 10 mL, tambahkan 0,1 ml Y kemudian add
dengan aquadest sampai tanda.
- MS diatur untuk mendeteksi Se total
1577b dan dorm-2 dianalisis sebelum analisis sampel untuk memastikan kebenaran
dan keakurtan alat HG-AAS dan ICP-M. Semua konsentrasi akhir dilaporkan secara
berat basah dalam satuan mikrogram per gram (ppm). kemungkinan hilangnya setiap
volume sampel pembuluh Teflon-PFA diperiksa dan ditemukan bervariasi dengan
faktor 1,04 dengan volume sampel asli untuk menguji n 10. Semua konsentrasi Se
akhir dikoreksi dengan faktor 1,04

4. Pengkondisian HG-AAS
AAS seri 906 dan sampler ini dilengkapi dengan api HG, Se lampu katoda
berongga diatur pada panjang gelombang 196 nm dengan lebar celah 1.0 nm dan
lampu debit electrodeless sebesar 15 mA.
Sebelum analisis sampel, 1,0mg/ml Se standar harus menghasilkan serapan
minimal 0,8 dan baseline didirikan dengan larutan HCl 30%. dicerna sampel (10 ml)
atau standar diperkenalkan ke HG diikuti dengan penambahan HCl dan NaBH 4.
Reaksi selenide hidrogen ini kemudian diperkenalkan ke dalam sel penyerapan. Rata-
rata 3 pembacaan absorbansi untuk setiap sampel tercatat, dan tinggi puncak
digunakan untuk menghasilkan kurva kalibrasi Se dengan nilai R2 minimum 0,99.

5. Pengkondisian ICP-MS

ICP-MS SETTINGS
Nebulizer gas flow 0.93 liters/min
RF Power 1,200 W
Detector mode Dual
Auto lens On
Scanning mode Pek hoping
Quadrapole rod offset 0.0 V
AC rod offset -5.0 V
Dwell time 100 msec
Number of sweeps 20
Number of replicates 3
Blank subtraction After internal standar
Calibration Linear through 0
Correction Se-1.008696 Kr
Rinse time 80 sec at 48 rpm
Equilibration time 30 sec at 24 rpm
Sample uptake time 20 Sec at 48 rpm
6. Batas batas deteksi dan batas kuantisasi
Nilai Instrumen batas deteksi (ILOD) untuk ICP-MS dan HG-AAS ditentukan
berdasarkan 10 pengukuran konsentrasi blanko Se. ILOD Se didefinisikan sebagai
konsentrasi terendah yang dapat terukur dalam blanko. ILOD dinyatakan sebagai 3
kali standar deviasi (SD) absorbansi pengukuran blanko dan 3 HG-AAS32 SD
penghitungan blanko untuk ICP-MS22 berkorelasi dengan standar kalibrasi terendah.
Batas kuantisasi (LOQ) didefinisikan sebagai konsentrasi analit minimum
yang dapat ditentukan dari matriks hati dengan 99% level.32 pengenceran
kepercayaan Serial SRM dipersiapkan dengan benar dianalisis tanpa pengenceran Se
prosedur koreksi sampai tingkat yang tidak dapat diandalkan ditentukan.

7. Kasus seleksi
Diagnostik kasus diserahkan ke Laboratorium Toksikologi dari hati Se
diminta untuk terlibat dalam penelitian (n 5310). Mayoritas sampel spesies hewan
lokal diberikan untuk membedakan antara defisiensi dan kecukupan Se. Sampel dari
sisa spesies yang diketahui mengandung hati yang sangat beragam konsentrasi Se dan
untuk berbagai diagnostik belum ditentukan. Oleh karena itu, subset hasil dari ternak
dievaluasi secara terpisah. Diagnostik untuk subset dari jangkauan ini berasal dari
nilai yang dihasilkan. Sebuah kasus dianggap kurang dengan metode yang baik jika
nilai Se hati kurang dari nilai terendah dari kisaran yang memadai diterbitkan. Nilai-
nilai HG-AAS yang diasumsikan sebagai nilai Se sebenarnya dan digunakan untuk
menentukan apakah hewan itu di kisaran Se memadai atau kurang.

8. Evaluasi data statistik

Membandingkan Se dari 2 teknik berdasarkan representasi plot grafis berbeda,
rata-rata pengukuran Se dengan HG-AAS dan ICP-MS untuk setiap sampel ([HG-
AAS ICP-MS] / 2) telah diplot terhadap perbedaan pengukuran sampel individu (HG-
AAS 2 ICP-MS). Mean dan SD dari semua perbedaan yang digunakan untuk
menghitung kisaran 95% dari yang diharapkan perbedaan pendapat (''batas''
perjanjian) yang dapat diamati antara 2 metode (rata-rata 6 2 * RSD).
9. Evaluasi diagnostik ICP-MS
Perhitungan ini didasarkan pada 4 uji klasifikasi results, 66 baik kasus dianggap
positif benar (TP) atau negatif benar (TN) jika konsentrasi Se hati masih dalam batas
yang ditentukan oleh defisiensi Se atau cakupan yang memadai Se, masing-masing
sebagaimana ditentukan baik oleh HG-AAS dan ICP-MS.
Positif palsu (FP) didefinisikan sebagai kasus di mana konsentrasi Se hati masih
dalam batas kurang ditentukan oleh ICP-MS tapi dalam rentang yang cukup ditentukan
oleh HG-AAS. Sebaliknya, negatif palsu (FN) didefinisikan sebagai kasus di mana
konsentrasi Se hati berada dalam batas yang ditentukan oleh ICP-MS tetapi dengan HG-
AAS diperoleh hasil yang tidak mencukupi. Akurasi Diagnostik (DA) didefinisikan
sebagai kemampuan ICP-MS untuk menentukan defisiensi atau kecukupan Se bila
dibandingkan dengan HG-AAS (TP + TN) / (TP + FP + TN + FN). Nilai prediksi ICP-
MS dievaluasi berdasarkan kemampuan mereka untuk mendeteksi hewan dengan
defisiensi Se (nilai prediksi positif tes atau PVT) dan hewan dengan memadai (nilai
prediksi negatif pengujian atau PVN) Se ditentukan oleh HG-AAS. PVT didefinisikan
sebagai TP / (TP + FP) dan PVN sebagai TN / (TN + FN). DA, PVP, dan PVN dinyatakan
dalam persentase.
 BAB III

HASIL DAN PEMBAHASAN

1. Metode Linieritas, LOD, LOQ, dan akurasi

Dengan menggunakan metode linieritas, kurva kalibrasi menunjukkan linieritas yang baik
pada kisaran 0,005-0,05 g/mL untuk HG-AAS dan 0,005 - 0,10 g/mL untuk ICP-MS. Hasil
absorbansi pada setiap standar yang digunakan adalah 196 nm untuk dapat menghasilkan kurva
tinggi puncak vs konsentrasi untuk HG-AAS, sehingga dihasilkan kurva linier dengan koefisien
korelasi R2 > 0,995. Untuk respon standar ICP-MS dapat dihasilkan kurva linier dengan R 2 >
82
0,999 berdasarkan bobot molekul (m/z) dari Se. Seri pengenceran standar kalibrasi terendah
dengan generasi tingkat rendah kurva kalibrasi menunjukkan bahwa linieritas respon instrumen
standar bisa diturunkan hingga 0,00031 mg/ml (R2 > 0,997) untuk HG-AAS dan 0,00015 mg/ml
untuk ICP-MS dengan R2 > 0,999.
Nilai ILOD untuk HG-AAS dan ICP-MS masing-masing adalah 0,091 dan 0,101 ng/ml,
diperoleh pada titik 0,5 dan 0,2 ng/g berdasarkan pengenceran sampel SRM yang digunakan
sebagai standar dalam analisis. Nilai LOQ untuk Se pada jaringan hati ditetapkan masing-masing
0,01 dan 0,12 g/g untuk HG-AAS dan ICP-MS. Pada SRM dan DORM-2 dianalisis dan
dievaluasi sebelum analisis tiap sampel untuk menunjukkan stabilitas sistem.
Akurasi dari setiap metode dievaluasi atas dasar pendekatan kesesuaian antara jumlah Se
yang terukur dan nilai SRM yang diperoleh. Hasil recovery SRM dan DORM dengan
menggunakan HG-AAS masing-masing adalah 101% dan 91% dan dengan menggunakan
ICPMS masing-masing adalah 116% dan 104%. Keberulangan deteksi Se pada hati sapi oleh
HG-AAS dan ICP-MS dievaluasi berdasarkan standar deviasi relatif (SDR) masing-masing
adalah 6,33% dan 7,10%.

Keseksamaan (precision)
 Keseksaman diukur sebagai simpangan baku relatif.

Sample Certified Measured N Method

value value used
(g/g) (g/g)*
1577b 0.73 + 0.06 0.85 + 0.06 36 ICP-MS
1577b 0.73 + 0.06 0.74 + 0.05 10 HG-AAS
DORM-2 1.40 + 0.09 1.46 + 0.28 6 ICP-MS
DORM-2 1.40 + 0.09 1.27 + 0.10 29 HG-AAS
Semua nilai di presentasikan sebagai rata-rata (+) SD dari jumlah n dari replikasi pada SRM
yang sama.

Kecermatan (accuracy)

Kecermatan dinyatakan sebagai % perolehan kembali (recovery).

Sample Recovery Method

(%) used
1577b 116 ICP-MS
1577b 101 HG-AAS
DORM-2 104 ICP-MS
DORM-2 91 HG-AAS

2. Batas kesesuaian antara ICP-MS dan HG-AAS

Lebih dari 300 sampel hati dimasukkan ke laboratorium toksikologi untuk dilakukan
analisis Se dengan HG-AAS dan ICP-MS. Termasuk didalamnya 161 hewan lokal, 45 mamalia
laut, 14 ikan, 84 loons, 3 jerapah, 1 badak, dan 1 angsa. Semua data yang diplotkan berdasarkan
metode selisih rata-rata dan ditunjukkan pada Gambar. 1A.
 Hal ini jelas bahwa nilai data meningkat seiring dengan meningkatnya konsentrasi, Se
bergantung pada konsentrasi tersebut, diperoleh anggapan bahwa peningkatan konsentrasi Se
akan meningkatkan selisih nilai hasil ICP-MS dan HG-AAS. Karena adanya anggapan tersebut,
batas-batas kesesuaian yang dapat diamati pada Gambar 1A menjadi tidak sesuai untuk
menginterpretasi data. Batas kesesuaian akan cenderung menjadi terlalu tinggi untuk sampel
dengan konsentrasi Se yang kecil, begitu pula sebaliknya. Untuk menghapus anggapan ini,
semua pengukuran dibuat dalam bentuk logaritmanya (log), karena hanya dalam bentuk ini data
dapat kembali linear.
 Gambar 1B menunjukkan perbedaan plot log dengan pengukuran biasa dan tidak
memiliki hubungan yang berarti. Selisih perbedaan pada skala log (-0,054) menghasilkan -0,374
dan batas kesesuaian 0,266, nilai validasi untuk konsentrasi Se terukur. Perubahan kembali
menghasilkan daerah perbedaan yang berarti pada 0,88 g/g dengan batas kesesuaian 95% untuk
1,84 dan 0,42 g/g, mengindikasikan bahwa pembacaan Se dengan ICP-MS berada di antara
1,84 0,42 kali nilai pada HG-AAS. Dengan menggunakan semua data yang diperoleh, maka
dapat ditarik kesimpulan bahwa metode ICP-MS berbeda 70% dari metode HG-AAS.

Hal ini ditunjukkan pada gambar 1B, kejelasan 2 garis luar mungkin akan mempengaruhi
semua interpretasi data. Dua poin data yang hilang tidak ditunjukkan menghasilkan batas
kesesuaian sebesar 95% pada skala log dari -0,279 dan 0,184, range perbedaan nilai Se minimum
yang diharapkan. Nilai ini berarti batas kesesuaian 1,20 dan 0,76 g/g, menunjukkan bahwa
tanpa 2 garis luar utama dari data perhitungan Se pada ICP-MS berbeda lebih dari 24% dan
dibawah 20% dari HG-AAS. Jika seluruh data dilihat lebih saksama diungkapkan bahwa
penelitian yang bergantung pada konsentrasi Se dideteksi dengan dua metode karena besar
konsentrasi Se yang terdapat pada sampel mamalia laut, ikan, dan loons menyebabkan batas
kesesuaian semu untuk hewan lokal yang mengandung Se yang berkisar pada 1 g/g. Karena
perbedaan antara adequate dan defisiensi Se merupakan hal yang penting, defisiensi
didefinisikan sebagai nilai yang berada dibawah nilai adequate, derajat kesesuaian antara metode
ICP-MS dan HG-AAS telah diuji ulang dengan menggunakan 137 hewan lokal diperoleh total
kandungan Se < 1,0 g/g, dideteksi oleh HG-AAS (gambar2).
 Data-data ini menggambarkan defisiensi Se pada hewan spesies lokal. Perbedaan rata-
rata yang baru -0,043g/g menghasilkan batas-batas kesesuaian dalam rentang 0,300g/g sampai
0,215 g/g, dengan semua data yang tidak menunjukkan adanya hubungan dengan perbedaan
rata-rata. Data didistribusikan secara acak sekitar garis ''Mean'' (Gbr. 2). Kesesuaian yang baik
menunjukkan hasil antara HG-AAS dan ICP-MS mencapai nilai Se 1,0 g/g tanpa ada
transformasi log tambahan.

Sebuah SEM dari 0,011 memberikan kisaran 95% untuk bias dari -0,065 sampai -0,021
g/g, menunjukkan bahwa 95% dari semua kasus dengan 1,0 g/g konten Se atau bawah ICP-
MS cenderung memberikan nilai lebih tinggi daripada Se HG-SSA tidak lebih dari 0,065 g/g.
Termasuk sampel dengan kadar Se 2 g/g atau kurang dalam perhitungan menyebabkan sedikit
peningkatan dalam nilai dengan ICP-MS yang berbeda dari HG-AAS (data tidak ditampilkan).
Untuk semua sampel hewan domestik dengan Se konsentrasi hingga 2 g/g, ICP-MS hasil
cenderung lebih tinggi daripada HG-SSA tidak lebih dari 0,08 g/g.

3. DA dan nilai prediksi ICP-MS

Untuk mengevaluasi nilai diagnostik dari hasil yang diperoleh dengan ICP-MS
dibandingkan dengan HG-AAS, 3 kriteria yang terpisah adalah DA, PVT, dan PVN. Berdasarkan
hasil laporan,batas bawah nilai Se memadai untuk spesies domestic. Nilai DA, PVT dan PVN
adalah 92,5 % 89% dan 93%. Berdasarkan perhitungan di atas tidak memperhitungkan analitik
variasi pengukuran. Berdasarkan pengukuran berulang Se pada SRM, variasi untuk kedua HG-
AAS dan ICP-MS sekitar 10%. Plot perbedaan mean untuk sampel 137 hati hewan lokal dengan
konsentrasi Se pada atau di bawah 1,0 g/g. Mean Perbedaan -0,043 g/g. SD untuk perbedaan
rata-rata 0,129 g/g, dan batas persyaratannya 0. 215 sampai -0,30 g/g. Data menunjukkan
tidak ada bias tergantung konsentrasi. Log transformasi tidak dilakukan. porting untuk kasus
diagnostik bisa bervariasi oleh 610%. Menghitung ulang kriteria diagnostik berdasarkan variasi
pengukuran 10% menghasilkan sederhana DA peningkatan sebesar 1% dan PVP sebesar 4%.

4. Pembahasan

Tujuan dari penelitian ini adalah untuk membandingkan 2 metode analisis , yaitu HG-
AAS dan ICP-MS, untuk mendeteksi dan kuantisasi Se dalam sampel hati untuk tujuan
diagnostik skrining. Kemampuan untuk menentukan Se dengan nutrisi lainnya dan
toxicologically pada logam penting sebagai bagian dari pandangan umum untuk meningkatkan
efisiensi dengan mengurangi preparasi sampel dan waktu analisis. Untuk diagnostik rutin yang
diinginkan.

Hal ini diyakini bahwa untuk perbandingan metode yang valid dalam penelitian, semua
sampel harus acak dan mewakili range nilai yang diharapkan untuk aplikasi yg spesifik.
Penelitian ini memenuhi persyaratan karena semua sampel diuji dari pengajuan laboratorium
rutin mewakili berbagai spesies hewan. Data Selenium yang diperoleh dari HG-AAS mempunyai
nilai-nilai yang dianggap benar untuk semua sampel yang diuji karena didapat dari metode
AOAC tersebut. Data yang disajikan dalam laporan ini menunjukkan bahwa 2 metode yang
sebanding dengan hasil uji reproduktifitas, linieritas, dan spesifisitas. Kelebihan dari HG-AAS
sangat spesifik karena punya lampu yang berbeda untuk tiap unsur dan sensitif, dapat untuk
menganalisa logam yang membentuk campuran yang sangat kompleks, memungkinkan eksitasi
unsur-unsur dengan tingkat energi eksitasi yang rendah. Kekurangannya sampel harus jernih,
harus menggunakan lampu sumber yang berbeda-beda tiap unsur, hanya untuk logam mineral.
Selain itu, ICP-MS memiliki keuntungan tambahan multielemen skrining dan kemampuan
ditingkatkan untuk memprediksi dan mengkoreksi kemungkinan terjadinya gangguan.

Kemampuan untuk mendeteksi Se dalam sampel biologis dengan ICP-MS diyakini sulit
karena ion Se menghasilkan respon hanya 10% dari sinyal yang dapat diamati dari hasil ioninasi
sempurna. Kelemahan lain dari menggunakan ICP-MS untuk mendeteksi dan menghitung Se hati
adalah potensi terjadinya gangguan melalui massa tumpang tindih. Hal ini mencakup
pembentukan ion bermuatan ganda (78Ge2+ mengganggu 78Se), gangguan dari unsur-unsur dengan
massa isotop yang sama (74Ge akan mengganggu 74Se), dan pembentukan ion poliatomik berasal
dari argon dasar plasma, terutama untuk elemen dengan massa < 80. Deteksi Selenium dapat
diganggu oleh poliatomik dari dimer argon (40Ar40Ar+) yang memiliki massa yang sama dengan
isotop Se yang paling melimpah (80Se = 49,6%). Pembentukan spesies poliatomik yang
adalah argon hasil dari tumpang tindih 5 dari 6 isotop Se, yang semuanya memiliki massa di
bawah (M/z) dari 80. Hal ini membatasi isotop Se yang dapat digunakan untuk screening
diagnostik. Meskipun 82Se memiliki kelimpahan isotop yang rendah (8,7%), telah terbukti sudah
mencukupi untuk mendeteksi Se di sampel biologi seperti serum dan urine dan digunakan dalam
penelitian ini.
 Penanganan sampel dan preparasi merupakan langkah yang baik untuk recovery Se
dengan deteksi HG-AAS. Hal ini telah menunjukkan bahwa sampel pencernaan yang tidak
efektif dapat mengakibatkan recovery Se kecil karena adanya pemecahan senyawa
organoselenium yang tidak sempurna. Kehilangan Se volatile diketahui terjadi karena sampel
charring atau sampel kering setelah penambahan HCl, diikuti dengan kemungkinan peningkatan
dalam gangguan dari logam transisi yang berkurang lebih lambat dari Se. Konsentrasi tertinggi
Se terdeteksi oleh ICP-MS dibandingkan dengan nilai acuan yang diperoleh dari metode lain
telah dilaporkan untuk serum, beras, dan susu bubuk SRMs.

Gambar 3. Plot selisih rata-rata untuk data Se diperoleh dengan 143 mamalia laut, ikan,
dan sampel Loon hati. Seperti dijelaskan pada Gambar. 1, selisih rata-rata (21,19 mg / g), SD
(4,04 mg / g), dan batas perjanjian (6,9-29,3 mg / g) dihitung. Penyebaran besar untuk batas
perjanjian adalah karena titik data semua dengan konten Se pada atau di atas 10 mg / g termasuk
outlier dengan Se tertinggi konsentrasi ditentukan oleh HG-AAS dan ICP-MS (46 dan 79 mg / g,
masing-masing).

Rata-rata 2 pengukuran adalah estimasi yang terbaik nilai sebenarnya untuk sampel yang
tidak diketahui, perbedaan antara pengukuran merupakan perwakilan dari kesalahan yang diukur
secara keseluruhan. Data yang disajikan dalam laporan ini menunjukkan korelasi yang baik
antara HG-AAS dan ICP-MS untuk semua sampel dengan konten Se pada atau di bawah 2,0
mg/g (Gbr. 2). Batas-batas persyaratan untuk data ini berkisar 95% untuk diamati bias
menunjukkan bahwa ICP-MS akan cenderung memberikan nilai Se 0,08 mg/g lebih tinggi dari
HG-AAS. Perbedaan kecil tidak mungkin untuk mengubah interpretasi hasil pengujian, yang
tercermin dalam 90% di atas DA, PVT, dan PVN. Se dalam spesies hati jauh lebih tinggi
dibandingkan dengan hewan domestik. Mean perbedaan plot untuk 143 mamalia laut, ikan, dan
Loon sampel ditunjukkan pada Gambar.3 dimana variasi terbesar antara 2 metode yang diamati
untuk sampel dengan Se konsentrasi di atas 10 mgg. Semua nilai pada spesies ini pada 10 mg/g
(115 sampel) atau kurang dari 10 mg/g yang revaluasi berdasarkan selisih rata-rata plot Metode
(data tidak ditampilkan).

Hasil penelitian menunjukkan (selisih rata-rata 0,43 mg/g, SD 0,80 mg/g) yang ICP-MS
memberikan nilai yang lebih tinggi Se tidak lebih dari 0,58 mg / g bila dibandingkan dengan
HG-AAS, nilai tidak mungkin diagnosa signifikan. Dalam sistem biologi Se anorganik mudah
berkurang dari selenate untuk selenide (S22). Selenide pada gilirannya dapat bereaksi dengan Hg
untuk membentuk sebuah aduk inert sebagian besar air raksa (II) selenide (HgSe), yang mungkin
beracun. Banyak studi pada mamalia laut, ikan, dan burung telah menunjukkan korelasi tinggi
antara konsentrasi Se dan Hg, terutama dalam hati, 12,13,39,62,73 dan diyakini bahwa bagian-
bagian dari 2 logam yang terdapat pada jaringan dalam bentuk HgSe dengan rasio molar 1:1,
sedangkan jumlah variabel Hg hati hadir dalam bentuk racun-Hg.10 metil, 15,18,73.
Pembentukan HgSe dapat dianggap sebagai jalur detoksifikasi Hg pada hewan. Dalam studi ini,
semua mamalia ikan, laut, dan loons hati dianalisa untuk Hg dengan uap dingin HG-AAS.
Konsentrasi Hg diukur berkisar antara 0,27 dan 145,0 mg/g. Rasio molar dihasilkan 1:0.9 untuk
Hg: SeICP-MS (untuk Se ditentukan oleh ICP-MS) diamati untuk semua sampel dengan
konsentrasi Hg pada atau di bawah 10 mg/g konsentrasi (Se rata-rata 4,5 mg/338 g) untuk n=86.
Data ini konsisten dengan penelitian lainnya yang menunjukkan korelasi yang tinggi antara Se di
hati dan jumlah Hg. Sebuah korelasi yang sedikit yang diamati untuk sampel yang sama dengan
Se diukur dengan HGAAS, dimana Hg: SeHG-AAS menghasilkan rasio molar 1:1.4. Konsentrasi Hg
diamati pada 145 g/g untuk 1 sampel menunjukkan antara HG-AAS dan ICP-MS Se dideteksi
dengan perbandingan molar 2,8 dan 3.1, masing-masing untuk Hg: Se ICP-MS dan Hg: SeHG-AAS. Hal
ini mungkin bahwa Se, bila dikombinasikan dengan jaringan Hg sebagai HgSe, tidak dapat
membentuk hidrida kovalen volatile Se dan karena itu tidak terdeteksi dengan mudah oleh HG-
AAS. Ini adalah salah satu alasan yang mungkin untuk pembacaan Se jauh lebih rendah
diperoleh untuk sampel ini oleh HG-AAS dibandingkan dengan ICP-MS. Rasio molar untuk
sampel dengan konsentrasi Hg lebih besar dari 10 g/g (n=35) adalah 2,75 dan 2,34 masing-
masing untuk Hg: SeICP-MS dan Hg: SeHG-AAS.

Karena kekurangan Se jauh lebih umum dari intoksikasi Se, perhatian utama studi ini
adalah kesesuaian antara 2 metode yang sesuai atau tidak sesuai dengan konsentrasi jaringan.
Pada hati konsentrasi Se 0,12< [Se] < 2,0 g/g, sifat diagnostik ICP-MS (DA, PVP, dan PVN)
sangat baik. Rata-rata, untuk konsentrasi Se sebesar < 2,0 g/g, ICP-MS memberikan nilai yang
lebih tinggi. Dengan demikian, intoksikasi Se tidak mungkin menjadi kesalahan diagnosa karena
FP lebih disukai daripada FN. Para peneliti menunjukkan bahwa sampel hati dengan nilai Se
dalam kisaran toksik dilaporkan sebagaimana ditentukan oleh ICP-MS harus dianalisis kembali
menggunakan HG-AAS. Jika hipotesis pengukuran Se dalam jaringan dalam bentuk HgSe
dengan HG-AAS bisa tidak akurat adalah benar, maka ICP-MS mungkin metode yang disukai
dalam penentuan Se dari spesies dimana HgSe ditemukan. Sampai alasan ketidaksesuaian antara
ICP-MS dan HG-AAS pada konsentrasi Se yang tinggi pada jaringan lebih baik didefinisikan,
metode HG-AAS masih disarankan ketika konsentrasi jaringan tinggi.
 BAB IV

PENUTUP

A. Kesimpulan
Metode HG-AAS merupakan metode yang baik untuk penentuan Se dalam
sampel hewan dibandingkan dengan metode ICPMS karena pada metode ini memiliki
lampu yang berbeda untuk tiap unsur dan sensitif terhadap logam yang akan dianalisis
sehingga kadar Se yang didapatkan lebih murni. Sedangkan pada ICPMS
kemungkinan terbesar mengalami hasil yang tumpah tindih antara logam yang satu
dengan yang lain sehingga kadar Se yang didapatkan kurang murni.
Hal ini dapat dilihat dari nilai LOD masing-masing untuk HG-AAS dan
ICPMS adalah 0,091 dan 0,101 ng/ml. Apabila nilai LOD kecil maka menunjukkan
bahwa dengan konsentrasi yang sedikit nilai Se sudah dapat dideteksi. Dari nilai LOQ
didapatkan hasil masing-masing untuk HG-AAS dan ICPMS adalah 0,01 dan 0,12
g/g. Apabila nilai LOQ kecil maka menunjukkan bahwa dengan jumlah yang sedikit
saja sudah dapat diukur nilainya dengan alat tersebut.

B. Saran
Sebaiknya pengukuran kadar suatu senyawa logam itu menggunakan metode
AAS karena pada AAS dapat menggunakan lampu sesuai dengan sifat senyawa
logam yang akan dideteksi.

DAFTAR PUSTAKA
www.jvdi.org/cgi/reprint/17/4/331.pdf diakses pada 23 September 2010

www.wikipedia.org

http://fpmipa.upi.edu/kuliah/mod/forum/discuss.php?d=2460&parent=10093