Abstrak: Nanoencapsulation tiamin dilauryl sulfat (TDS),

turunan vitamin B1, itu terbukti efektif menghambat

perkecambahan spora Fusarium oxysporum f. sp. raphani (F.
oxysporum), serta pertumbuhan miselium. Diameter rata-rata
nanopartikel diukur sebagai 136 nm dengan menjadi dikemas
dengan encapsulant dimakan, lesitin, yang enkapsulasi efisiensi
sekitar 55% di mengandung 200 ppm konsentrasi TDS: 100
ppm solusi TDS nanopartikel menunjukkan tingkat
penghambatan pertumbuhan miselia 59% . Hasil ini sekitar
sama atau bahkan lebih baik dari kasus mengobati 100 ppm
Dazomet, kontrol antijamur positif (64%). Selain itu, analisis
kinetik menghambat perkecambahan spora diperkirakan
sebagai pengurangan 6,6% dari tingkat perkecambahan spora
setelah pengobatan 24 jam, yang 3,3% mirip dengan kasus
mengobati 100 ppm dari kontrol positif (Dazomet) untuk waktu
perawatan yang sama. Hal itu juga menemukan bahwa TDS itu
sendiri bisa bekerja sebagai agen anti jamur dengan
menghambat baik miselium pertumbuhan dan perkecambahan
spora, meskipun kemanjurannya lebih rendah dibandingkan
nanopartikel. Nanopartikel terutama memainkan peran yang
lebih efisien dalam membatasi perkecambahan spora, karena
penetrasi mudah mereka ke dalam membran sel keras dan
lama penduduk pada permukaan dinding spora shell. Dalam
karya ini, pertama kali menunjukkan bahwa nanopartikel dari
TDS bukan bahan kimia berbahaya dapat mengontrol
pertumbuhan F. oxysporum dengan menggunakan dosis yang
lebih rendah dari herbisida komersial, serta
AKSES TERBUKA
Int. J. Mol. Sci. 2013, 14 4284
mekanisme menghambat dari TDS. Namun, uji coba lapangan
dari nanopartikel TDS dikemas dengan lesitin harus lebih
dipelajari untuk digunakan secara efektif untuk aplikasi
lapangan.
Kata kunci: tiamin dilauryl sulfat; nanoencapsulation; lesitin;
spora; pertumbuhan miselium; Fusarium oxysporum f. sp.
Raphani

1. Perkenalan
Lobak putih (Raphanus sativus) merupakan tanaman
tahunan atau dua tahunan dari papaverales dikotil crucifer
keluarga dan tumbuh untuk mendapatkan besar, akar
berdaging. Bagian yang dapat dimakan dari akar memiliki
berbagai bentuk, termasuk bulat, persegi panjang dan
silinder panjang, tergantung pada varian. Ini telah ada
secara luas di wilayah beriklim China, Korea Selatan,
Jepang dan Eropa [1]. Salah satu sayuran yang mewakili
Korea Selatan, lobak putih sekarang dapat tumbuh
sepanjang tahun, berkat budidaya varietas baru dengan
thermosensitivity rendah untuk suhu rendah dan subdivisi
baru pola tanam. Penyakit dan gangguan fisiologis lobak
putih, bagaimanapun, secara bertahap meningkat.
Sembilan belas jenis penyakit di lobak putih telah
dilaporkan sampai saat ini, termasuk layu Fusarium dan
antraknosa [2]. Salah satu penyakit dari lobak putih, layu
Fusarium, pertama terjadi di California, Amerika Serikat,
dan telah tersebar di seluruh AS [3,4]. Di Korea Selatan,
pertama kali dilaporkan pada perkebunan lobak putih di
pinggiran kota Chuncheon, dan insiden secara bertahap
meningkat, karena budidaya berulang [5,6]. Fusarium
oxysporum, yang menyebabkan layu Fusarium di lobak
putih, adalah Fungi Imperfecti tanah-ditanggung.
Membentuk chlamydospores dan ada dalam keadaan tidak
aktif dalam tanah selama beberapa tahun, bahkan tanpa
tanaman inang. Kemudian, ketika perubahan tanah untuk
suatu lingkungan di mana penyakit terjadi,
chlamydospores berkecambah, masukkan akar tanaman
inang dan menyebabkan Fusarium layu [7]. Berbagai
langkah-langkah yang diambil untuk mengendalikan layu
Fusarium, seperti rotasi tanaman, fumigasi tanah,
desinfeksi bibit dan larangan berlebihan pupuk nitrogen,
tetapi langkah-langkah ini tidak ekonomis dan tidak
memiliki efek kontrol yang jelas. Ada juga tidak ada
disinfektan terdaftar untuk layu Fusarium, sehingga sulit
untuk mengontrolnya [8]. Selain itu, karena kebanyakan
pestisida memiliki efek mengendalikan pertumbuhan atau
tanaman pembunuhan miselium patogen penyakit,
sebuah, metode yang dapat diandalkan efisien untuk
mengendalikan spora diperlukan untuk mencegah layu
Fusarium, yang dimulai dengan perkecambahan
chlamydospores sebelum pembentukan miselia.
Sementara itu, untuk mencegah penyebaran penyakit
tanaman tersebut, banyak negara di seluruh dunia,
termasuk Korea Selatan, telah mengakui kebutuhan untuk
pestisida biotik ramah lingkungan dan mengerahkan
 banyak usaha untuk mengembangkan teknologi yang
terkait dan produk. Kebanyakan pestisida biotik adalah
pestisida mikroba, yang tidak berbahaya bagi orang-
orang, ternak dan tanaman, sementara secara efektif
mengendalikan penyakit target dan hama. negara-negara
maju telah menemukan mikroorganisme yang
menguntungkan yang tepat dalam lingkungan mereka dan
telah memanfaatkan ini selama bertahun-tahun. Global
kimia dan pestisida produsen telah berfokus pada proyek-
proyek bioteknologi akhir-akhir dan telah memperkuat
strategi mereka untuk maju ke pasar pestisida biotik.
Khususnya di Korea Selatan, yang memiliki luas lahan
yang relatif kecil dan sumber daya alam yang terbatas,
ada kebutuhan mendesak untuk memaksimalkan
Int. J. Mol. Sci. 2013, 14 4285
daya saing industri nasional melalui pengembangan
pestisida biotik yang dapat secara aktif menanggapi tren
liberalisasi global. Untuk alasan ini, vitamin B1 derivatif,
tiamin dilauryl sulfat (TDS), yang telah dilaporkan memiliki
aktivitas antijamur [9], digunakan dalam penelitian ini
sebagai pestisida biotik. Untuk meningkatkan efek
menghambat pertumbuhan miselia patogen penyakit
tanaman, serta efeknya mengendalikan layu Fusarium,
yang dimulai dengan perkecambahan chlamydospores
efisien, TDS itu nanoencapsulated. Teknologi
nanoencapsulation ini menjebak komponen aktif dalam
ukuran kecil 10-9 m, tidak hanya untuk memperpanjang
durasi mereka, tetapi juga untuk menyesuaikan aktivasi
mereka di tempat yang diinginkan. Dengan demikian,
penggunaannya secara bertahap meningkat [10,11].
Dalam studi ini, kemungkinan menggunakan TDS sebagai
pestisida untuk menghambat perkecambahan spora
melalui teknologi nanoencapsulation, efisien mengontrol
perkecambahan spora F. oxysporum, yang menyebabkan
layu Fusarium, dieksplorasi.

2. Hasil dan Pembahasan

2.1. Produksi TDS Nanopartikel dan Identifikasi
Karakteristik mereka
Gambar 1A menunjukkan foto TEM dari nanopartikel TDS
diproduksi yang 200 nm dalam ukuran atau lebih kecil. Hal
ini menunjukkan bahwa nanopartikel berbentuk bulat dan
bahwa mereka memiliki ukuran seragam sekitar 120 nm.
dispersibility mereka di fase solusi juga sangat baik.
Gambar 1B menunjukkan pengukuran DLS dari solusi TDS
nanopartikel. Distribusi ukuran partikel rata-rata dari solusi
TDS nanopartikel adalah 136 nm, yang menunjukkan,
bersama dengan foto TEM, bahwa 150 nm atau lebih kecil
nanopartikel terjebak. Hasil ini menunjukkan bahwa
penjebakan TDS solusi dengan lesitin dimakan membuat
aman untuk digunakan dalam makanan dan dapat
langsung diterapkan pada pembuatan spora
penghambatan pestisida. Selanjutnya, penjebakan TDS
solusi dalam ukuran nano dari 150 nm atau lebih kecil
meningkatkan luas permukaan yang bekerja pada spora F.
oxysporum, serta kemampuan penetrasi spora dari TDS,
sehingga menghasilkan efek kontrol lebih besar dari
pestisida umum yang bekerja pada miselia [9].
Gambar 1. Karakterisasi solusi nanopartikel tiamin dilauryl
sulfat (TDS). (A) Foto dari solusi TDS nanopartikel dari
microphotography elektron transmisi (TEM); (B) Distribusi
solusi TDS nanopartikel melalui hamburan cahaya dinamis
(DLS).
(SEBUAH)
Int. J. Mol. Sci. 2013, 14 4286
Gambar 1. Cont.
(B)
2.2. Encapsulation Efisiensi TDS Nano Partikel
Untuk menentukan efisiensi enkapsulasi TDS di
nanopartikel, konsentrasi TDS dalam larutan diukur
setelah melarutkan nanopartikel lesitin dengan analisis
HPLC. Gambar 2A adalah standar TDS (100 ppm), dan
Gambar 2B adalah diagram puncak TDS larutan
penyangga setelah dibubarkan oleh PBS penyangga oleh
mengandung ca. 55 ppm TDS. Hasil ini mewakili bahwa
efisiensi enkapsulasi TDS nanopartikel dengan lesitin
adalah sekitar 55%, yang yield relatif sangat efisiensi.
Hasil ini mirip dengan efisiensi enkapsulasi zat aktif yang
larut dalam air lainnya dalam rentang 40% -60% [12].
Berdasarkan hasil tersebut, dapat disimpulkan bahwa
lecithin adalah pembawa cocok untuk enkapsulasi solusi
TDS.
Gambar 2. Kromatogram HPLC dari nanopartikel TDS. (A)
TDS standar, 100 ppm; (B) TDS setelah melarutkan
nanopartikel.
Int. J. Mol. Sci. 2013, 14 4287
2.3. Aktivasi Penghambatan Fusarium oxysporum Mycelia
Pertumbuhan dengan TDS Nano Partikel Solusi
Pengamatan penghambatan pertumbuhan miselia F.
oxysporum dengan solusi TDS nanopartikel
mengungkapkan bahwa efek hambatan pertumbuhan
miselium muncul di setiap kelompok eksperimen yang
bertentangan dengan kelompok kontrol dan bahwa efek
hambatan pertumbuhan meningkat seiring dengan
konsentrasi TDS. Kelompok eksperimen yang
menunjukkan aktivitas penghambatan pertumbuhan
tertinggi miselium adalah bahwa di mana 100 ppm TDS
solusi nanopartikel digunakan, yang khasiat mirip atau
sedikit lebih rendah dari hasil dalam menambah 100 ppm
Dazomet, kontrol positif (Gambar 3). Selain data pada
Gambar 3 yang membandingkan efektivitas
penghambatan pada titik akhir percobaan, analisis kinetik
menghambat aksi sampel dibandingkan pada Gambar 4,
sesuai dengan waktu pengobatan, yang hasilnya dapat
lebih mewakili aksi sampel pada yang miselium
pertumbuhan dan perkecambahan spora. Tingkat
hambatan pertumbuhan miselium dari 38% ditunjukkan
dalam menambah 100 ppm TDS itu sendiri, sedangkan
tingkat pertumbuhan penghambatan tertinggi miselium
dari 59% ditunjukkan dalam menambah konsentrasi yang
sama nanopartikel TDS, meskipun 64% dari
penghambatan tertinggi diamati di menambahkan
herbisida komersial, Dazomet. Untuk kasus menambahkan
lecithin (encapsulant) itu sendiri, (G) pada Gambar 4,
pertumbuhan miselia juga hampir mirip dengan kasus
tidak ada pengobatan (A). Hasil ini menyiratkan bahwa
lesitin tidak menunjukkan efek positif atau negatif pada
pertumbuhan miselia untuk percobaan ini. Hasil ini
menunjukkan bahwa menggunakan TDS solusi
nanopartikel secara dramatis dapat meningkatkan area
permukaan yang bekerja pada miselia dari F. oxysporum,
serta kegigihan TDS di miselia, sebagai lawan untuk
menggunakan umum solusi TDS [13,14]. Selain itu,
sedangkan bubuk air terdispersi dari oksiklorida
metalaksil-tembaga, sebuah sterilisasi kimia dikenal,
menunjukkan tingkat penghambatan 50%, 100 ppm solusi
TDS nanopartikel menunjukkan tingkat penghambatan
yang lebih tinggi miselium pertumbuhan 60% [15].
Gambar 3. Perbandingan kegiatan antijamur dalam larutan
20 mL TDS dan 20 mL TDS solusi nanopartikel untuk dua
konsentrasi yang berbeda. (A) kontrol negatif (tidak ada
perawatan); (B) kontrol positif (Dazomet), 100 ppm; (C)
solusi TDS, 50 ppm; (D) TDS solusi, 100 ppm; (E) TDS
solusi nanopartikel, 50 ppm; (F) TDS solusi nanopartikel,
100 ppm; (G) vesikel lesitin kosong.
ABC
DEFG
Int. J. Mol. Sci. 2013, 14 4288
Gambar 4. Pertumbuhan Fusarium oxysporum f. sp.
raphani concentratio saat yang berbeda

2.5. Pengamatan dari Spore Kepunahan Pengaruh TDS

Nano Partikel Solusi
Spora difoto di bawah mikroskop elektron scanning (SEM)
untuk mengamati mekanisme spora kepunahan solusi TDS
nanopartikel. Gambar 7A menunjukkan miselia pada
kelompok kontrol (tanpa mengobati nanopartikel TDS),
sekitar yang spora yang terbentuk dengan baik dan
bahkan tampaknya mulai perkecambahan. Sebagai
perbandingan, Gambar 7B menunjukkan bahwa pada 0
jam, semua spora di disc tampak seperti normal, tapi pada
24 jam, sebagian besar spora yang rusak dan mulai
dicerna saat menambahkan 100 ppm nanopartikel TDS.
Gambar 7. SEM gambar dari spora di Fusarium oxysporum
f. sp. raphani setelah pengobatan solusi TDS nanopartikel.
(A) kontrol negatif (tidak ada perawatan) setelah 24 jam
inkubasi; (B) solusi TDS nanopartikel, 100 ppm.
SEBUAH
B (0 h) B (24 h)
Untuk memahami mekanisme penghambatan nanopartikel
TDS, penetrasi TDS nanopartikel ke dalam kuman diamati
dengan mikroskop confocal, sesuai dengan waktu
pengobatan pada Gambar 8. Dari hasil, itu menegaskan
bahwa nanopartikel TDS bisa menembus ke dalam
membran spora dalam 12 jam dan mulai menghambat
fungsi normal dari berbagai jenis molekul dalam sitosol.
Setelah 12 jam, FITC fluoresensi mulai diamati dalam
spora dan merata di seluruh spora setelah 6 jam dan
benar-benar tertutup disk dengan melanggar semua
kuman. Namun, untuk kasus menambahkan 100 ppm TDS
itu sendiri, TDS FITC berlabel perlahan-lahan melewati
membran sel setelah 6 jam, dan penetrasi itu tidak sangat
berkembang, bahkan setelah pengobatan 12 jam. real-
time hasil observasi confocal ini pertama kali dilaporkan
bahwa nanopartikel TDS dapat menembus ke dalam
kuman yang dikenal sangat tahan dan dapat bekerja pada
menghambat fungsi sel.
Int. J. Mol. Sci. 2013, 14 4291
Disarankan bahwa serapan seluler nanopartikel lebih
efektif dibandingkan penyerapan partikel berukuran mikro,
karena sifat berkelanjutan-release, ukuran sub-seluler dan
kemampuan target untuk sel [16]. Untuk penjelasan rinci
lebih lanjut dari pengamatan ini, pengaruh ukuran
nanopartikel pada menghambat perkecambahan spora
akan dilakukan, karena sebagian besar dari ukuran
nanopartikel berada di kisaran 150-200 nm dalam
percobaan ini. Sebuah ukuran partikel yang lebih kecil
akan lebih efektif dalam menembus ke dalam membran
sel, meskipun itu tidak akan mudah untuk membuat
nanopartikel berukuran lebih kecil. Toleransi jamur
terhadap bahan kimia mungkin karena perubahan
biokimia dari dinding sel jamur yang menghambat
masuknya pestisida ke dalam sel untuk tingkat yang lebih
besar atau lebih kecil dan, dengan demikian, tidak
mencapai lokasi aksi. Perubahan tersebut dapat
mengakibatkan penurunan permeabilitas membran sel
dan detoksifikasi pestisida, bahkan sebelum situs aksi
[17]. Konversi dari kimia dalam bentuk aktif mungkin juga
bertanggung jawab untuk mekanisme detoksifikasi [18].
Gambar 8. gambar confocal mikroskop dari spora di
Fusarium oxysporum f. sp. raphani dalam menambahkan
solusi TDS nanopartikel, sesuai dengan waktu pengobatan.
 (A) TDS solusi nanopartikel, 100 ppm; (B) solusi TDS, 100
ppm.

3. Bagian Eksperimental
3.1. Budidaya Putih Lobak
biji lobak Songbaek digunakan untuk percobaan untuk
menetapkan metode uji ketahanan terhadap penyakit.
bedsoil Hortikultura No 5 (Bunongsa, Korea) adalah
masukan ke 8 16 pot terkait (20 mL tanah per pot,
Bumnong, Korea), dan biji lobak yang tumbuh di pot
sebelum mereka dibudidayakan di rumah kaca (25 5
C) selama 14 hari.
3.2. Fusarium oxysporum f. sp. raphani Spora
Fusarium oxysporum f. sp. raphani (KACC 40.146, Korea)
digunakan untuk mengetahui aktivitas penghambatan
perkecambahan spora. Untuk media kultur, potato
dextrose agar (PDA, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA)
digunakan. Strain dibudidayakan pada 25 C selama tujuh
hari, dan plectenchyma telah dihapus dari koloni dan
diinokulasi ke malt ekstrak kaldu
Int. J. Mol. Sci. 2013, 14 4292
(Becton, Dickinson dan Co, Seoul, Korea). Mereka
kemudian kocok-dikultur pada 150 rpm pada 25 C dalam
keadaan gelap selama tujuh hari. strain yang
dibudidayakan disaring melalui empat lapis kain kasa
untuk menghapus hifa, dan konsentrasi spora diukur
dengan hemositometer di bawah mikroskop optik (Zeiss
Axioskop Mikroskop, Heidelberg, Jerman). Sampel
diencerkan dengan air steril dengan konsentrasi spora dari
1,0 10-7 konidia / mL.
3.3. Produksi TDS Nano Partikel Solusi
Untuk menghasilkan solusi TDS yang digunakan dalam
percobaan ini, 100 g TDS bubuk dimasukkan ke dalam 1 L
dari 60% alkohol dan diaduk selama sekitar 10 menit,
sampai benar-benar dibubarkan. Salah satu mililiter
larutan TDS ini telah ditambahkan ke 499 mL air suling,
dan campuran yang dihasilkan diaduk selama 60 menit
untuk menghasilkan 200 solusi ppm TDS. Untuk
meningkatkan keselamatan tanaman, lesitin, yang dapat
dimakan, digunakan untuk nanoencapsulation dari solusi
TDS. Untuk lesitin, L--fosfatidilkolin (Sigma-Aldrich, St.
Louis, MO, USA) digunakan. Hal itu meleleh di kloroform
(Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) dan dimasukkan ke
dalam labu alas bulat. Semua kloroform diuapkan dalam
keadaan didekompresi untuk membentuk multilayers
lesitin. Solusi TDS ditambahkan ke labu dasar bulat di
mana beberapa lapisan lesitin dibentuk setelah
pengeringan lengkap dan dihomogenisasi pada suhu
kamar selama satu jam untuk menghasilkan TDS solusi
nanopartikel [19]. Untuk mengumpulkan 200 partikel nm
atau lebih kecil, itu disaring dengan 0,2 m jarum suntik
filter. 3.4. Pengamatan dari Nanopartikel TDS
Untuk memeriksa bentuk partikel nanopartikel TDS yang
dihasilkan, nanopartikel TDS negatif bernoda dengan
larutan asam fosfotungstat dan tetap dengan formvar /
karbon. Mereka kemudian diiris tersebar di grid dan
kering. Kemudian nanopartikel difoto di bawah mikroskop
elektron transmisi (EF-TEM, LEO 912AB Omega, Carl Zeiss,
Oberkochen, Jerman) pada 120 kV untuk menangkap
ukuran dan bentuk [20] mereka. Untuk mengukur
keseragaman dan ukuran distribusi solusi TDS
nanopartikel yang dihasilkan, distribusi ukuran
nanopartikel TDS diukur melalui hamburan cahaya
dinamis (DLS, Brookhaven Instrumen Co, New York, NY,
USA).
3.5. Pengukuran Encapsulation Efisiensi TDS Nano Partikel
Nanopartikel kebesaran dalam larutan dihilangkan dengan
kromatografi gel-permeasi menggunakan Sephadex G-100
kolom (1,6 cm x 40 cm, ukuran manik 40-120 m) yang
dibeli dari GE Healthcare (Uppsala, Swedia). Fraksi
nanopartikel TDS yang dikumpulkan disentrifugasi selama
30 menit pada 16.770 g, dan endapan dibubarkan
dengan menambahkan 25 mL aseton (Sigma, St Louis,
MO, USA). Setelah 30 menit dari pengadukan, 250 mg L-
 sistein (Sigma, St Louis, MO, USA) ditambahkan. Sampel
disonikasi pada 60 kHz selama 30 menit dan disaring
melalui 0,2 um jarum suntik penyaring [21]. Kandungan
TDS dalam filtrat kemudian ditentukan oleh HPLC (M600E,
M7725i / Waters, 996PDA, Waters, Milford, MA, USA).
Untuk analisis HPLC, kolom C18 (250 4,6 mm, Waters,
Milford, MA, USA) digunakan, di mana fase gerak air dan
asetonitril dan rasio gradien air: asetonitril = 80:20 ~
20:80 pada 1,0 mL / menit laju alir dan 270 absorbansi
nm. Volume injeksi adalah 25 uL.

3.6. Pengukuran F. oxysporum Mycelia Penghambatan Pengaruh

TDS Nano Partikel Solusi
Kegiatan antijamur diukur untuk memeriksa F. oxysporum
miselia aktivitas penghambatan solusi TDS nanopartikel.
Alunan Fusarium oxysporum f. sp. raphani (KACC 40.146, Korea)
yang diterima dari Institut Nasional Ilmu Pengetahuan dan
Teknologi Pertanian digunakan untuk percobaan ini. Potato
dextrose agar (PDA, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA)
digunakan sebagai medium kultur, dan sampel dibudidayakan
pada 20 C dalam keadaan gelap. Untuk pengukuran aktivitas
antijamur, versi modifikasi dari metode yang dikembangkan di
[22] digunakan. Untuk kelompok eksperimen, TDS umum solusi
dan TDS solusi nanopartikel diencerkan ke 50 dan 100 ppm,
masing-masing, dan 20 volume mL digunakan. Sebuah
herbisida komersial, Dazomet (3-5-dimethyltetrahydro-l-3-5-2 H
thiadiazine 2 tiona), juga digunakan sebagai kontrol positif.
Setiap sampel ditambahkan ketika media kultur PDA diproduksi.
strain oxysporum F. dibudidayakan pada 20 C dalam keadaan
gelap selama lima hari. Sebuah koloni 0,5 cm diinokulasi di
pusat dari masing-masing media yang mengandung solusi TDS
dan TDS solusi nanopartikel, dan pertumbuhan koloni diamati.
Untuk menguji tingkat penghambatan pertumbuhan detail,
diameter koloni diukur dengan tanggal, dan miselium tingkat
pertumbuhan penghambatan diukur dengan menggunakan
rumus berikut. Penelitian dilakukan tiga kali untuk masing-
masing kelompok perlakuan [9]. tingkat penghambatan
pertumbuhan miselium (%) = (1 - diameter miselia di TDS-
diperlakukan menengah / diameter miselia dalam media tanpa
pengobatan) 100 (1)
3.7. Pengukuran Spore perbenihan Penghambatan Pengaruh
TDS Nano Partikel Solusi
Untuk menguji spora efek penghambatan solusi TDS
nanopartikel, media PDA diproduksi tanpa solusi TDS
nanopartikel. Untuk kelompok eksperimen, solusi TDS dan TDS
solusi nanopartikel yang ditambahkan ke konsentrasi akhir 100
ppm selama produksi media PDA, serta konsentrasi yang sama
3-5-dimethyltetrahydro-l-3-5-2 H thiadiazine 2 tiona (Dazomet)
sebagai kontrol positif. Untuk kelompok kontrol dan untuk
semua kelompok eksperimental, spora dengan 1,0 103
konidia konsentrasi / mL diinokulasi dan dibudidayakan pada 25
C dalam keadaan gelap. Setelah beberapa waktu, media
dimana spora dibudidayakan dipotong menjadi 1 1 buah cm
dan diamati di bawah mikroskop optik (Zeiss Axioskop
Mikroskop, Oberkochen, Jerman). Untuk menguji tingkat
hambatan pertumbuhan spora, spora dengan 1,0 103 konidia
konsentrasi / mL diinokulasi ke media kontrol dan kelompok
eksperimen. Kemudian, mereka dibudidayakan pada 25 C
dalam keadaan gelap. Konsentrasi spora dalam memotong
media ke 2 2 buah cm diukur dari waktu ke waktu.
Selanjutnya, untuk menguji tingkat perkecambahan spora
secara detail, itu diukur dengan rumus berikut menggunakan
konsentrasi spora diukur dengan jam. Tiga percobaan dilakukan
untuk masing-masing kelompok perlakuan. Tingkat spora (%) =
(konsentrasi spora dalam konsentrasi menengah / spora
sampel-dirawat di media tanpa pengobatan) 100 (2)
3.8. Pengamatan dari Spore Kepunahan Pengaruh TDS Nano
Partikel Solusi
Untuk menguji mekanisme induksi solusi TDS nanopartikel ini
dari spora kepunahan, spora dibudidayakan di media yang TDS
solusi nanopartikel ditambahkan selama
Int. J. Mol. Sci. 2013, 14 4294
pengukuran efek penghambatan spora yang diamati. Sebuah
mikroskop elektron scanning digunakan untuk mengukur
permukaan. Untuk pretreatment, sampel segar yang tetap
dalam larutan glutaraldehid 2,5% pada suhu kamar selama 3
jam, dicuci dengan buffer 0,1 M fosfat dan dehidrasi dengan
alkohol. Setelah dehidrasi, sampel dikeringkan dengan CO2
kritis titik kering (CPD2, Pelko, Melbourne, FL, USA), dan
permukaan sampel yang dilapisi emas dengan (coater SC7640
menggerutu, Pocaron, Cambridge, UK) goldcoater selama 2
menit . Mereka kemudian diamati dengan mikroskop elektron
(LEO-435VP, SEM, North Billerica, MA, USA). Juga, untuk
gambar penetrasi TDS nanopartikel ke dalam spora, sebuah
confocal laser scanning mikroskop (LSM510 META NLO, Carl
Zeiss Jena, Jerman) bekerja sebagai berikut: spora dibuat
dengan hidangan confocal; 200 uL nanopartikel yang
mengandung isothiocyanate fluorescein (FITC) berlabel TDS
solusi kemudian diterapkan ke spora dan diamati setiap 12 jam
sampai kuman yang benar-benar rusak. Penampang dicitrakan
di 543 nm menggunakan confocal laser scanning mikroskop
[23].
3.9. Pengolahan statistik
Statistik dari nilai-nilai eksperimental diverifikasi melalui uji-t
berpasangan dengan aplikasi SPSS. Semua nilai-nilai
eksperimen dinyatakan sebagai mean standard error.

4. Kesimpulan
Dalam penelitian ini, vitamin B1 turunan tiamin dilauryl sulfat
(TDS), yang telah dilaporkan memiliki aktivitas antijamur, itu
nanoencapsulated, dan dampaknya dalam hal penghambatan
pertumbuhan miselium dan spora dari penyakit layu Fusarium
diselidiki. Penjebakan solusi TDS dengan lesitin dimakan
melalui nanoencapsulation membuat solusi aman untuk
digunakan dalam makanan dan memungkinkan untuk langsung
diterapkan pada pembuatan spora penghambatan pestisida.
Selanjutnya, penjebakan TDS solusi dalam ukuran nano dari
150 nm atau lebih kecil meningkatkan luas permukaan yang
bekerja pada spora F. oxysporum, serta kemampuan penetrasi
spora dari TDS, sehingga menghasilkan efek kontrol lebih besar
dari pestisida umum yang bekerja pada miselia [9]. Teknologi
nanoencapsulation ini digunakan untuk menjebak TDS, yang
memiliki stabilitas yang rendah dalam larutan, sebagai partikel
berukuran nano dan meningkatkan dispersi dalam larutan,
sehingga mengatasi stabilitas rendah [24]. Menggunakan TDS
solusi nanopartikel meningkatkan luas permukaan yang bekerja
pada miselia dari F. oxysporum, serta penetrasi yang mudah ke
kuman yang kaku [13], dibandingkan dengan TDS sendiri,
penghambatan lebih tinggi dari pertumbuhan miselium dan
perkecambahan. Setelah nanopartikel TDS melewati membran
sel dari miselia atau spora, TDS secara efektif dapat
menghambat metabolisme sel, karena menjadi turunan vitamin
B1, TDS sangat dapat melampirkan ke membran sel dan
menghambat diferensiasi sel dan proliferasi dalam sitosol [25].
Menurut mekanisme ini, nanopartikel TDS menghambat
pembelahan sel dengan melampirkan ke membran sel dari
miselia atau secara substansial menghambat proliferasi mereka
dengan menembus protoplasma [26]. Ini menunjukkan aktivitas
penghambatan pertumbuhan miselium lebih besar dari
pestisida kimia, yang merupakan bubuk air terdispersi dari
oksiklorida metalaksil-tembaga, sebuah alat sterilisasi kimia
dikenal. Penjebakan nanopartikel dengan lesitin dimakan
meningkatkan keselamatan dan menurunkan toksisitas
residual, yang merupakan masalah pestisida kimia, sehingga
membuatnya menjadi pestisida biotik yang aman. Pengukuran
spora efek penghambatan terhadap F. oxysporum, yang dimulai
dengan perkecambahan chlamydospores sebelum
pembentukan miselia, menunjukkan spora termurah
Int. J. Mol. Sci. 2013, 14 4295
tingkat perkecambahan dalam larutan TDS nanopartikel.
Nanopartikel lesitin dengan permukaan hidrofobik berada 100-
300 nm dalam ukuran dan bisa dengan mudah menembus sel
dan memfasilitasi transportasi materi molekul, meningkatkan
afinitas untuk sel-sel [27]. Selain itu, untuk meningkatkan
kemampuan TDS ini menembus sel-sel bahan larut, banyak
penelitian sedang dilakukan untuk memberikan TDS dengan
daya penetrasi yang tinggi dan bio-utilitas oleh manufaktur
bahan aktif terperangkap oleh minyak sebagai W / O-jenis
liposom [28]. Nanopartikel TDS dalam penelitian ini
ditingkatkan ketekunan TDS dalam spora, afinitas dan
kemampuan penetrasi spora nya. The spora efek
penghambatan solusi TDS nanopartikel menunjukkan nilai yang
sama dengan yang dilaporkan spora nilai efek penghambatan
asam hexanoic terhadap Botrytis cinerea pada tomat. Mirip
dengan mekanisme mengasamkan protoplasma untuk
meningkatkan kemampuan penetrasi membran selnya, TDS itu
nanoencapsulated dengan lesitin, yang memiliki permukaan
hidrofobik dan meningkatkan afinitas ke membran sel terdiri
dari phosphatide, dengan demikian meningkatkan kemampuan
penetrasi sel TDS [29]. Dibandingkan dengan pestisida
konvensional menghambat pertumbuhan miselia, dapat
mengontrol F. oxysporum, yang dimulai dengan
perkecambahan chlamydospores sebelum pembentukan
miselia, bahkan dengan konsentrasi rendah. Selain itu,
nanopartikel TDS dapat digunakan sebagai pestisida ekonomi
untuk kontrol yang efisien dari spora.
Ucapan Terima Kasih
Penelitian ini secara finansial didukung oleh Kementerian
Ekonomi (MKE) dan Korea Institute untuk Kemajuan Teknologi
(KIAT) melalui Penelitian dan Pengembangan Industri Daerah
(2010-2013).