Isolasi Bakteri dari Rongga Mulut (plak/gigi)

Prinsip

Bakteri dari rongga mulut dikumpulkan dengan menggunakan cotton swab

dan dilarutkan ke dalam nutrient broth. Larutan diinkubasi pada suhu 37C
selama 24 jam dan di tebar pada permukaan Nutrient Agar, diinkubasi
selama 2 hari dan diamati pertumbuhan koloni bakteri yang terbentuk

Tujuan

Mempelajari bagaimana cara membuat media pertumbuhan bakteri

Mengisolasi bakteri dari rongga mulut
Mengamati pertumbuhan koloni bakteri pada media nutrient agar

Alat dan bahan

-petridish -nutrient broth -hotplate stirrer

-eppendorf 1,5 mL -nutrient agar -kapas

-sentrifus -akuades -plastic wrap

-pipet mikro -inkubator -erlenmeyer

-jarum ose -autoklaf -gelas piala

-bunsen -tabung reaksi -alkohol

Prosedur (hari I)

Nutrient broth ditimbang berdasarkan instruksi dan dilarutkan dengan

akuades, dihomogenkan dengan menggunakan hotplate stirrer hingga
homogen
Nutrient broth disterilisasi dengan menggunakan autoklaf
Dituang sekitar 10 mlL nutrient broth ke tabung reaksi
Scrub rongga mulut (buccal/plak gigi) dengan menggunakan cotton swab
Masukkan cotton swab tadi ke dalam tabung reaksi yang berisi nutrient
broth
Tutup tabung reaksi dengan kapas
 Inkubasi dalam inkubator pada suhu 37 C selama 24 jam
Hari ke II
Nutrient agar ditimbang berdasarkan instruksi, dan dilarutkan ke dalam
akuades, dihomogenkan dengan menggunakan hotplate stirrer, dan
disterilisasi dalam autoklaf
Nutrient agar yang telah steril dituang ke dalam petridish dan dibiarkan
membeku
Dilakukan pengenceran bertingkat pada kultur yang telah diinkubasi dengan
cara memipet 0,1 mL kultur ke dalam 0,9 mL nutrient broth didalam
eppendorf 1,5 mL, lakukan pengenceran bertingkat hingga pengenceran ke-3
Tebar kan kultur pada pengenceran ke -3 pada nutrient agar, sebanyak 0,1
mL
Inkubasi petridish pada suhu 37C selama 48 jam
Hari ke III
Amati bentuk koloni yang terbentuk
Hitung Colony Forming Unit
Lakukan simple staining dengan cara :
Fiksasi bakteri dengan menggunakan kaca benda dan bunsen
Teteskan dengan crystal violet, diamkan selama 60 detik
Cuci dengan air keran
Teteskan iodin, diamkan selama 30 detik
Cuci dengan air keran
Amati kaca benda di bawah mikroskop