Jurnal Sains dan Teknologi Farmasi, Vol. 17, No.

2, 2012, halaman 147-153 ISSN : 1410-0177

UJI SITOTOKSIK EKSTRAK DAN FRAKSI DAUN JATI

(Tectona grandis Linn. f.) DENGAN METODA BRINE SHRIMP LETHALITY BIOASSAY

Yohannes Alen, Mardha Akhsanita, Isna mulyani, Meri Susanti

Fakultas Farmasi, Universitas Andalas, Padang

ABSTRACT

The Study of cytotoxic effects of the methanolic extract and the fraction of Teaks leave (Tectona
grandis Linn. f.) by using Brine Shrimp Lethality Bioassay Method had been done. Results
showed that the methanolic extract have cytotoxic level of (LC50) 16,58 ppm, n-hexane fraction
21,83 ppm, ethyl acetate fraction 21,31 ppm and residue fraction 21,27 ppm, respectively.

Keywords: efek sitotoksik, ekstrak Tectona grandis. Linn. f., fraksinasi

PENDAHULUAN tumbukan daun jati dengan asam jawa.

Tanaman Tectona grandis Linn. f. adalah
salah satu jenis pohon yang kayunya
terkenal di dunia, yang disebut Teak.
Keunggulannya antara lain stabilitas
dimensi, daya tahan dan soliditas tekstur
yang juga tidak gampang membusuk. Secara
tradisional daun jati telah digunakan oleh
masyarakat di daerah Solok, Sumatera Barat.
sebagai pewarna makanan, dengan cara
memasukkan daun jati untuk bersama-sama
direbus dengan pisang, sehingga rebusan
pisang yang biasanya berwarna kuning
menjadi berwarna merah kecoklatan. Untuk
membuat gudeg di Yogyakarta, nangka
muda dimasak dengan santan, warna coklat
pada nangka dihasilkan oleh daun jati yang
dimasak bersamaan dengan santan. Daun jati
juga digunakan untuk pembungkus berbagai
makanan seperti pembungkus nasi oleh
masyarakat Jamblang, pembungkus tempe
oleh masyarakat Yogyakarta, Jawa Timur,
dan Jawa Tengah, dan pembungkus daging
oleh masyarakat Sukabumi. Di Jawa Timur
masyarakat Pulau Bawean menyeduh daun
jati untuk menghasilkan bahan pewarna
coklat merah alami. Orang Lamongan
memilih menyeduh tumbukan daun
mudanya. Orang Madura mencampurkan
Sekelompok mahasiswa IPB (Institut
Pertanian Bogor) dalam Program Kreativitas
Mahasiswa (PKM) menggunakan sari daun
jati sebagai pewarna alami gulali (permen)
ekstrak belimbing wuluh sebagai jajanan
sehat untuk anak. Berdasarkan Philippine
Medicinal Plants rebusan daun jati
digunakan mengobati hemoptisis (batuk
darah), gangguan menstruasi, pendarahan,
dan mengobati sakit tenggorokan dengan
cara dikumur air rebusannya.
Beberapa penelitian aktifitas farmakologi
terhadap jati, telah melaporkan bahwa jati
mempunyai efek farmakologi sebagai
antitukak, antianemia, antibakteri dan
menyembuhkan luka (Goswami, et al.,
2009). Penelitian lain juga melaporkan
bahwa jati mempunyai aktifitas yaitu
mengobati pilek, sakit kepala, laksatif,
sedatif, bronkitis, diuretik, anti diabetes,
kudis, analgetik, dan anti inflamasi (Singh,
et al., 1996; Nayeem, and Karverkar, 2010;
Ghaisas, et al., 2009; Diallo, et al., 2008).
Selain itu juga telah dilakukan uji aktifitas
sitotoksik dari ekstrak petrol akar kayu jati
Tectona grandis yang menunjukkan aktifitas
sitotoksisitas yang tinggi dengan
147
Yohannes A., et al.
menggunakan Metoda Brine Shrimp
Lethality Bioassay dengan Lc50 5 ppm
(Sandermann and Simatupang, 1966).
Pemeriksaan fitokimia ekstrak etanol daun
jati (Tectona grandis Linn. f.) Verbenaceae.
Menunjukkan adanya golongan senyawa
flavonoid, saponin, tanin galat, tanin katekat,
kuinon, dan steroid/triterpenoid (Hartati, et
al., 2005).
Mengingat pemanfaatan daun jati yang
beragam dimasyarakat yang masih
berdasarkan pengalaman yang turun
temurun, maka sangat diperlukan informasi
ilmiah mengenai keamanannya. Untuk
keamanan pemanfaatan daun jati, maka
perlu dilakukan pengujian sitotoksik dari
ekstrak, fraksi dan subfraksi daun jati secara
In vitro terhadap larva Artemia salina Leach
dengan metode Brine Shrimp Lethality
Bioassay.
METODA PENELITIAN
Alat dan Bahan. Sampel yang digunakan
dalam penelitian ini adalah daun jati Tectona
grandis Linn. f., yang diperoleh dari daerah
Lubuk Minturun, Padang, Sumatra Barat.
Berat sampel segar yang digunakan adalah
69 kg. Sampel segar dibersihkan dan
dirajang.
Bahan kimia yang digunakan adalah
metanol, n-heksana, dan etil asetat. Untuk
pengujian digunakan telur udang laut
(Artemia salina Leach.), dimetil sulfoksida
(DMSO), air laut dari Pantai Padang, kertas
saring dan alumunium foil.
Dalam penelitian ini digunakan alat
timbangan analitik, rotary evaporator,
corong pisah, kolom kromatografi, bejana
kromatografi lapis tipis, gelas ukur, tabung
reaksi, pipet kapiler, pipet tetes, vial, kertas
J. Sains Tek. Far., 17(2), 2012
saring, corong, pinset, kapas, spatel,
alumunium foil, timbangan, timbangan
analitik, lampu UV.
Penyiapan Ekstrak daun Jati. Ekstraksi
Sebanyak 6,9 Kg daun Tectona grandis
Linn. f. segar dirajang dengan pisau
sehingga menjadi potongan kecil. Sampel
dimaserasi dengan pelarut metanol selama 5
hari sambil sesekali dikocok. Setelah 5 hari
perendaman, diambil maseratnya dengan
cara disaring dan perendaman dilanjutkan
sampai 2 kali. Maserat yang didapat
diuapkan pelarutnya secara in vacuo
sehingga didapatkan ekstrak kentalnya dan
ditimbang.
Penyiapan fraksi n-heksana, etil asetat,
dan sisa. Fraksinasi dilakukan secara
bertingkat menggunakan berbagai pelarut
dengan tingkat kepolaran yang berbeda
dengan menggunakan corong pisah.
Fraksinasi diawali dengan pelarut non polar
(n-heksana) tiap kalinya sebanyak 500 ml.
Proses dilakukan sampai fraksi n-heksana
hampir tidak berwarna, sehingga diperoleh
fraksi n-heksana dan fraksi air. Fraksi n-
heksana digabung dan kemudian diuapkan
secara in vacuo sehingga diperoleh fraksi
kental n-heksana. Fraksinasi dilanjutkan
dengan pelarut semi polar (etil asetat).
Proses yang sama diulangi seperti pada
pengerjaan fraksi n-heksana, sehingga
diperoleh fraksi etil asetat dan fraksi air.
Fraksi etil asetat diuapkan secara in vacuo
sehingga diperoleh fraksi kental etil asetat.
Penyiapan Kromatografi Kolom Fraksi
Etil Asetat. Komponen yang terdapat dalam
masing-masing fraksi dimonitor dengan
KLT. Dari hasil penampakan noda di bawah
lampu UV, fraksi etil asetat dengan eluen
kloroform memperlihatkan pemisahan yang
bagus dengan bercak noda yang memiliki
berbagai warna berbeda. Kemudian
148
Yohannes A., et al.
dilakukan pemisahan dengan menggunakan
kolom kromatografi dengan fasa diam silika
gel 60 yang dielusi secara isokratik oleh
eluen kloroform.
Sebanyak 1,7 g fraksi etil asetat dipersiapkan
secara preabsorpsi dengan menambahkan
silika gel satu setengah dari berat sampel
yang dimasukan ke dalam sampel yang
dilarutkan dengan etil asetat kemudian
pelarutnya di uapkan secara in vacuo
sehingga diperoleh campuran sampel dan
silika gel dalam bentuk kering.
Kolom dipersiapkan dengan cara membuat
suspensi silika gel dengan menggunakan
pelarut kloroforom, kemudian suspensi
tersebut dimasukkan ke dalam kolom sambil
diketok perlahan agar silika gel memadat.
Dua per tiga sampel ditaburkan merata di
atas suspensi silika gel dan dielusi dengan
komposisi eluen sebagai berikut:
Kloroforom 100% 1500 ml
Kloroforom : metanol (95 : 5) 200 ml
Kloroform : metanol (1 : 1) 200 ml
Metanol 100% 100 ml
Fraksi yang keluar di tampung dengan vial
volume + 10 ml. Hasil kromatografi kolom
dimonitor dengan KLT, noda diamati
dengan lampu UV. Noda yang memberikan
Rf sama digabung dan diuapkan.
Hasil gabungan dimonitor pola KLT dan
ditimbang. Hasil monitor didapatkan 13
subfraksi (MA-07-01-026* s/d MA-07-013-
026). Sisa sampel yang telah dipreabsorbsi
di kromatografi kolom dengan cara sama
seperti di atas dan didapat 16 subfraksi (MA-
07-01-035 s/d MA-07-016-035). Dari hasil
pemisahan di atas, karena memiliki Rf noda
target yang hampir sama, subfraksi ke 10
(MA-07-10-026) dari kromatografi kolom
pertama dan subfraksi ke 12 (MA-07-012-
035) dan subfraksi 13 (MA-07-013-035) dari
J. Sains Tek. Far., 17(2), 2012
kromatografi kolom kedua digabung
sebanyak 64 mg dan kemudian dilanjutkan
kembali kromatografi kolom dengan eluen
sebagai berikut:
Kloroform 100% 750 ml
Kloroforom : metanol (95 : 5) 100 ml
Kloroform : methanol (1 : 1) 100 ml
Metanol 100% 50 ml
Fraksi yang keluar di tampung dengan vial
volume + 5 ml. Hasil kromatografi kolom
dimonitor dengan KLT, noda diamati
dengan lampu UV. Noda yang memberikan
Rf sama digabung dan diuapkan. Hasil
gabungan dimonitor pola KLT dan
ditimbang. Hasil monitor didapatkan 8
subfraksi.
Subfraksi yang ketiga (MA-07-03-044)
sebanyak 29 mg dimurnikan kembali dengan
kromatografi kolom menggunakan eluen
sebagai berikut:
*) Notasi MA-07-01-026 artinya: MA
merupakan singkatan dari nama peneliti
(Mardha Akhsanita); 07 adalah tahun
angkatan peneliti; 01 adalah nomor urut
subfraksi pada halaman tersebut; dan 026
adalah halaman buku kerja.
Klroform : etil asetat 9 : 1 500 ml
Metanol 100 % 100 ml
Fraksi yang keluar di tampung dengan vial
volume + 5 ml. Hasil kromatografi kolom
dimonitor dengan KLT, noda diamati
dengan lampu UV. Didapatkan 5 subfraksi.
Uji Toksisitas dengan metoda Brine
Shrimp Lethality Bioassay. Metoda Meyer
et. al., (1982), digunakan untuk mempelajari
toksisitas sampel secara umum dengan
menggunkan Larva udang (Artemia salina
leach.)
149
Yohannes A., et al.
Penetasan Larva Udang. Disiapkan wadah
untuk menetaskan telur udang wadah
penetasan terdiri dari dua bagian, yaitu
bagian terang yang disinari lampu terus-
menerus dan bagian gelap yang ditutup, serta
dilengkapi dengan sistem airasi (gelembung
udara). Sumber cahaya diletakkan untuk
menarik larva, sedangkan sistem airasi
berguna untuk pertumbuhan larva. Telur
ditempatkan pada bagian gelap dari wadah
yang sebelumnya telah diisi dengan air laut.
Sebelum dimasukkan ke dalam penetasan,
air laut disaring terlebih dahulu untuk
menghilangkan kotoran-kotoran yang
mungkin terdapat pada air laut. Kemudian
telur dibiarkan menetas selama 48 jam.
Setelah menetas larva akan berenang
melewati pembatas bercelah kearah sisi
bejana dengan pencahayaan. Larva yang
berhasil melewati pembatas bejana
penetasan dapat digunakan sebagai larva uji.
Prosedur pengujian metoda Brine Shrimp
Lethality Bioassay. Pengujian aktifitas
dilakukan dengan 5 variasi konsentrasi yaitu
500, 250, 125, 61 dan 31 ppm, dan setiap
konsentrasi dibuat rangkap 3. Estrak, fraksi
n-heksana, fraksi etil asetat, dan fraksi sisa
ditimbang sebanyak 40 mg. Sebanyak 40 mg
sampel dilarutkan dalam 50 L DMSO ad. 8
mL dengan air laut, homogenkan (larutan
induk 5000 ppm). Larutan induk dipipet 3 x
kali masing-masing 500 L, masukkan
dalam vial yang berbeda. Kemudian pada
masing-masing vial ad. 5 mL air laut
(konsentrasi larutan 500 ppm). Larutan
induk dipipet 3 x kali masing-masing 250
L, masukkan dalam vial yang berbeda.
Kemudian pada masing-masing vial ad. 5
mL air laut (konsentrasi larutan 250 ppm).
Larutan induk dipipet 3 x kali masing-
masing 125 L, masukkan dalam vial yang
berbeda. Kemudian pada masing-masing vial
ad. 5 mL air laut (konsentrasi larutan 125
ppm). Larutan induk dipipet 3 x kali masing-
J. Sains Tek. Far., 17(2), 2012
masing 62 L, masukkan dalam vial yang
berbeda. Kemudian pada masing-masing vial
ad. 5 mL air laut (konsentrasi larutan 62
ppm). Larutan induk dipipet 3 x kali masing-
masing 31 L, masukkan dalam vial yang
berbeda. Kemudian pada masing-masing vial
ad. 5 mL air laut (konsentrasi larutan 31
ppm). Sedangkan sebagai kontrol negatif
disiapkan larutan uji yang hanya
mengandung 50 L larutan DMSO, 10 larva
udang dan air laut ad. 5 mL. Setelah 24 jam
dilakukan pengamatan dengan menghitung
jumlah larva yang masih hidup pada setiap
konsentrasi visual. Kemudian uji aktifitas
dilakukan dengan menurunkan konsentrasi,
pengujian aktivitas dilakukan dengan 1
variasi konsentrasi yaitu 15 ppm, dan dibuat
rangkap 3. Estrak, fraksi n-heksana, fraksi
etil asetat, dan fraksi sisa ditimbang
sebanyak 2 mg. Sebanyak 2 mg sampel
dilarutkan dalam 50 L DMSO ad. 4 mL
dengan air laut, homogenkan (larutan induk
500 ppm). Larutan induk dipipet 3 x kali
masing-masing 150 L, masukkan dalam
vial yang berbeda. Kemudian pada masing-
masing vial ad. dengan 5 mL air laut
(konsentrasi larutan 15 ppm). Pada subfraksi
etil asetat dilakukan pengujian sitotoksik
dengan konsentrasi 30, 20 dan 10 ppm.
Analisis Data. Analisis data untuk
menghitung LC50 menggunakan metode
kurva, menggunakan nilai probit yang
didesain bagi perhitungan dosis atau respon.
Kemudian dilanjutkan dengan menghitung
selang kepercayaan diambil pada tingkat
kepercayaan 95%.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Ekstraksi daun jati. Ekstraksi daun jati
menggunakan pelarut metanol menghasilkan
ekstrak kental metanol 312 gram (4,52%).
Dari 104 gram (1,5%) ekstrak kental
difraksinasi didapatkan fraksi kental n-
150
 Yohannes A., et al. J. Sains Tek. Far., 17(2), 2012

heksana 37,487 gram (0,54%), fraksi kental LC50 16,58 ppm, dan hasil uji sitotoksisitas
etil asetat 12,45 gram (0,18%) dan fraksi air pada masing-masing fraksi, menunjukkan
54,063 gram (0,78%). semua fraksi mempunyai aktifitas sitotoksik,
secara berturut-turut nilai LC50 masing-
Pada pengujian kontrol negatif masing fraksi adalah fraksi sisa 21,27 ppm,
menggunakan DMSO 50 L ad. 5 mL air fraksi etil asetat 21,31 ppm, dan fraksi
laut diperoleh tidak ada kematian pada larva heksan dengan 21,83 ppm. Dari hasil uji
udang Artemia salina Leach. Hasil kontrol sitotoksik nilai LC50 masing-masing fraksi
menunjukkan bahwa tidak ada kematian berada dibawah 30 ppm, berdasarkan
larva, sehingga dapat disimpulkan bahwa parameter tersebut aktifitas sitotoksik
bahwa DMSO dengan konsentrasi 50 L masing-masing fraksi dikategorikan sangat
tidak menyebabkan kematian pada larva. toksik. Sedangkan untuk masing-masing
fraksi, fraksi yang paling toksik dapat dilihat
Tabel 1. Pengukuran nilai LC50 dengan dari kemampuan menyebabkan kematian
metoda Brine Shrimp Lethality Bioassay hewan uji yang lebih besar dengan semakin
Sampel Jumlah Kematian Larva Udang Artemia Lc50
kecilnya konsentrasi. Dari hasil perhitungan
salina Leach. Pada tiap-tiap Konsentrasi LC50 masing-masing fraksi selang
500 250 125 62 31 15 kepercayaan 95%, didapatkan rentang LC50
ppm ppm ppm ppm ppm ppm untuk fraksi n-heksana 21,83 (18,95-24,71)
Ekstrak 10 10 10 10 9 4 16,58 ppm, fraksi etil asetat 21,31 (18,44-24,18)
ppm
10 10 10 10 9 5 ppm, fraksi sisa 21,27 (18,04-24.5) ppm.
10 10 10 10 9 3 Berdasarkan hasil di atas dapat disimpulkan
Rata- 10 10 10 10 9 4 tidak terdapat perbedaan antara masing-
rata
Fraksi 10 10 10 10 10 2 21,31 masing fraksi daun jati karena nilai LC50
etil ppm berada pada rentang (18,04-24,71 ppm),
asetat 10 10 10 10 7 2
10 10 10 10 8 2 yang artinya tingkat toksik dari masing-
Rata- 10 10 10 10 8,33 2 masing fraksi sama tidak ada fraksi yang
rata lebih toksik dibanding fraksi yang lain.
Fraksi 10 10 10 10 9 1 21,83
n- ppm
Suatu zat dikatakan aktif
heksana 10 10 10 10 9 1 sitotoksik bila nilai LC50 < 1000 ppm untuk
10 10 10 10 9 2 ekstrak, dan < 200 ppm untuk suatu
Rata- 10 10 10 10 9 1,33
rata senyawa. Dari data diatas didapat ekstrak,
Fraksi 10 10 10 10 10 1 21,27 fraksi n-heksana, fraksi etil asetat, dan fraksi
air ppm sisa bersifat sitotoksik.
10 10 10 10 9 1
10 10 10 10 9 2
Rata- 10 10 10 10 9,33 1,33
rata

Uji sitotoksisitas dengan metoda Brine

Shrimp Lethality Biaoassay. Uji sitotoksik
ekstrak, dan masing-masing fraksi
memperlihatkan hasil seperti tabel I.
Dari data tabel 1 diketahui bahwa hasil uji
sitotoksisitas terhadap ekstrak daun jati
memiliki aktifitas sitotoksik dengan nilai

151
Yohannes A., et al. J. Sains Tek. Far., 17(2), 2012

Tabel 2. Hasil perhitungan Selang
kepercayaan 95%
SAMPEL LC50 (SK 95%)
ppm
Ekstrak 16,58 (15,88-17,28)
a*)
Fraksi Etil 21,31 (18,44-24,18)
Asetat b potensinya dalam membentuk kelat dengan
Fraksi n- 21,83 (18,95-24,71)
heksana b
Fraksi Sisa 21,27 (18,04-24.5)
b
Berdasarkan uji sitotoksik yang dilakukan
menggunakan metoda Brine Shrimp
Lethality Bioassay, diketahui bahwa dari
ekstrak, fraksi n-heksana, fraksi etil asetat,
dan fraksi air semua mempunyai aktifitas
sitotoksik. Dengan parameter untuk ekstrak
bahwa nilai LC50 < 30 ppm dikatakan sangat
toksik. Nilai LC50 ekstrak 16,58 ppm, fraksi
n-heksana 21,83 ppm, fraksi etil asetat 21,31
ppm, dan fraksi sisa 21,27 ppm. Dari
keempat sampel nilai LC50nya berada di
bawah 30 ppm, sehingga ekstrak, dan
masing-masing fraksidari daun jati bersifat
sangat toksik. Sifat sitotoksik dari daun jati
diduga berkaitan dengan kandungan kuinon
yang dimilikinya. Menurut penelitian
sebelumnya telah diisolasi dan diidentifikasi
dari ekstrak kulit kayu jati 5-hidroksi-
lapachol yang memberikan aktifitas
sitotoksik (Sandermann and Simatupang,
1966), dimana 5-hidroksi-lapachol
merupakan golongan kuinon. Hasil uji
subfraksi dari fraksi etil asetat yang didapat
tidak bagus sehingga tidak dihitung
LC50nya, ini mungkin disebabkan karena
senyawa yang diisolasi bersifat tidak stabil
yaitu kuinon, karena senyawa kuinon tidak
stabil mungkin pada saat pengujian sub-
fraksi mulai mengalami perubahan sehingga
menyebabkan tidak aktif lagi, makanya hasil
pengujiannya menjadi tidak bagus. Selain itu
aktifitas sitotoksik daun jati juga disebabkan
karena kandungan senyawa fenolik
dimilikinya, aktifitas senyawa fenolik dialam
disebabkan kemampuannya sebagai inhibitor
kuat dalam proses pembelahan rantai DNA
dan kemampuannya sebagai pengikat radikal
oksigen, serta juga disebakan oleh
logam.
KESIMPULAN DAN SARAN
Ekstrak, fraksi n-heksana, fraksi etil asetat
dan fraksi sisa daun jati sangat toksik
terhadap larva Artemia salina Leach.
Ekstrak daun jati (LC50) 16,58 ppm lebih
toksik dibanding fraksi-fraksinya (LC50
fraksi n-heksana 21,83 ppm, fraksi etil asetat
21,31 ppm fraksi sisa 21,27 ppm). Tidak
terdapat perbedaan toksisitas yang nyata
antara masing-masing fraksi daun jati
dengan rentang LC50 (18,04-24,71 ppm).
Disarankan kepada peneliti selanjutnya
untuk melakukan pengujian sitotoksik
terhadap tiap-tiap subfraksi dengan metode
selain Brine Shrimp Lethality Bioassay,
sehingga bila telah diketahui subfraksi mana
yang bersifat aktif sitotoksik dapat
dilanjutkan dengan mengisolasi dan
mendapatkan senyawa murni.
DAFTAR PUSTAKA
Diallo, A., M. Gbeassor., A. Vovor., G. K. Eklu.,
and K. Aklikokou., (2008), Effect of
Tectona grandis Leaves on
Phenylhydrazine-Induced Anemia in Rats,
Fitother, 79 ( 5 ): 332-336.
Ghaisas, M., K. Navghare., A. Takawale., V.
Zope., M. Tanwar., and A. Desphande.,
(2009), Effect of Tectona grandis on
Dexamethazone Induced Insulin
Resistance in Mice, J Ethnopharmacol,
122 ( 2 ): 304-307.

152
Yohannes A., et al. J. Sains Tek. Far., 17(2), 2012

Goswami, D. V., S. A. Nirmal., M. J. Patil., N.

S. Dighe., R. B. Laware., and S. R.
Pattan., (2009), PHCOG REV: An
Overview of Tectona grandis: Chemistry
and Pharmacological Profile, Phcog Rev,
3 (5): 181-185. (Online).
(www.phcogrev.com).
Hartati, R., S. A. Gana., dan K. Ruslan., (2005),
Telaah flavonoid dan Asam Fenolat Daun
Jati (Tectona grandis L. f., verbenaceae),
(Skripsi). Bandung: Institut Teknologi
Bandung. (http://bahanalam.fa.itb.ac.id.).
Lembaga Penelitian Lembang, (1986), Analisis
Probit, Bandung.
Meyer, B. N., J. E. Ferrigni., L. B. Jacobsen., D.
E. Nichols., and J. L. Mclaughlin,. (1982),
Brine Shrimp A Convenient General
Bioassay For active Plant Constituents, J.
Of Medical Plant Research, Perdue
University.
Nayeem, N., and M. D. Karverkar., (2010),
Analgesic and Anti Inflammaetory
Activity of The Methanolic Extract of
Frontal Leaves of Tectona grandis,
Internet Journal Pharmacol, 8.
Pechmanee, T., (2009), Food Organism for
Seabass Larvae Rearing, Fao Corporate
Document Respiratory. Fisher and
Aquaculture Departement.
Sandermann, W. V., and M. H. Simatupang.,
(1966), On the Chemistry and
Biochemistry of Teak Wood ( Tectona
grandis L. f. ). Jg. Heft mai. 190-199.
Singh, J., T. C. Bhuyan., and A. Ahmed., (1996),
Enthnobotanical Studies on the Mishing
tribes of Assam with special reference to
food and medicinal plants, Eco Tax Bot,
12: 350-356.

153