SINTESIS DAN AKTIVITAS ANTIBAKTERI SECARA IN VITRO DARI

BEBERAPA ANTIBIOTIK BARU CEPHEM

ABSTRAK
Pada komunikasi sekarang sejumlah sefalosporin semisintetik (1-9) telah
disintesis dan ditandai dengan spektra UV, 1H NMR, 13C NMR dan juga dievaluasi untuk
aktivitas antibakterinya secara in vitro terhadap sejumlah strain bakteri patogen. Senyawa
7, 8 dan 9 telah menunjukkan hasil yang sangat menggembirakan sebagai antibakteri
dengan MIC pada kisaran 0,391 sampai 0,097 g/mL dan molekul 1-6 telah menunjukkan
tingkat tindakan penghambatan yang substansial terhadap sebagian besar bakteri yang
diskrining dalam penelitian ini. Dengan demikian, semua antibiotik cephem yang baru
disintesis berperan sebagai agen antibakteri spektrum luas. Aktivitas yang disempurnakan
dari obat ini mungkin karena adanya peningkatan konsentrasi obat di lokasi target karena
semua molekul memiliki ikatan ester biodegradable. Selain itu, antibiotik cephem yang
baru disintesis dengan menggunakan enzim 7ACA secara enzimatik sehingga dapat
menyebabkan sintesis yang lebih ekonomis dan ramah lingkungan.

Pendahuluan
Cephalosporins merupakan antibiotik -laktam dan bersama dengan penisilin,
merupakan bagian utama pasar farmasi di seluruh dunia. Pada sefalosporin C, terdapat
cincin -laktam beranggota empat (yang terutama bertanggung jawab atas aktivitas)
disatukan dengan enam cincin dihidrothiazine beranggota untuk membentuk inti dasar,
7aminocephalosporanic acid (7-ACA), dimana sisi asam -aminoadipat Rantai dilekatkan
melalui ikatan amida (Gambar 1).
 Mereka digunakan untuk mengobati berbagai infeksi bakteri dan jamur. Meskipun
sefalosporin ditemukan aktif melawan sejumlah besar bakteri patogen, hambatan utama
dalam penerapannya adalah stabilitasnya yang rendah. Juga, terjadinya strain bakteri yang
resisten terhadap antibiotik yang sudah ada seperti methicillin resisten Staphylococcus
aureus (MRSA) dan vankomisin resisten Enterococcus faecalis yang telah menyebabkan
pencarian sefalosporin semisintetik baru dengan kelarutan dan mekanisme tindakan yang
lebih baik. Hanya sefalosporin C (CPC) yang ditemukan secara alami dan dengan
sendirinya menunjukkan aktivitas antimikroba yang dapat diabaikan namun penggantian
pada posisi C3 dan C7 pada cincin -laktam bersama dengan struktur lainnya
menghasilkan sefalosporin semisintetik dengan aktivitas antimikroba beragam yang
dikelompokkan berdasarkan profil aktivitasnya, spektrum antibakteri. Setiap generasi
baru sefalosporin memiliki khasiat antimikroba Gram negatif yang jauh lebih besar
daripada generasi sebelumnya. Generasi keempat sefalosporin diketahui memiliki
aktivitas spektrum luas.
Dalam penelitian ini, upaya telah dilakukan untuk mensintesis beberapa
sefalosporin semi-sintetis baru dan beberapa dengan memodifikasi sefalosporin semi-
sintetik yang sudah ada seperti cefotaxime yang merupakan antibiotik spektrum luas
dengan resiten tinggi terhadap -laktamase. Tapi masalah utamanya adalah kurang larut
dalam air. Oleh karena itu, upaya telah dilakukan untuk mempersiapkan sefalosporin
yang memiliki kelarutan lebih baik dengan menggunakan cefotaxime. Semua
sefalosporin semi-sintetik ini berasal dari kunci antara 7- ACA, produk yang berasal dari
hidrolisis sefalosporin C. Mereka berbeda dalam sifat substituen yang dilekatkan pada
posisi 3 dan/atau 7- dari cincin cephem bakteri dan mengungkapkan berbagai efek
biologis dan farmakologis. 7-Formamido sefalosporin diisolasi sebagai produk
fermentasi berbagai bakteri gram negatif. Juga diketahui bahwa penggabungan kelompok
MeO di kedua sefalosporin dan penisilin telah menyebabkan peningkatan stabilitas -
laktamase yang cukup besar. Temuan ini mendorong kami untuk menyiapkan turunan
metoksi dan formamido sefalosporin dan menyaringnya untuk aktivitas antibakteri
mereka.
7-ACA diperlukan untuk produksi sebagian besar turunan sefalosporin yang
digunakan secara klinis seperti sefalosporin semisintetik. Ini dihasilkan dari sefalosporin-
C (CPC) baik secara kimia maupun enzimatik. Metode kimia untuk produksi 7-ACA
memakan waktu dan melibatkan banyak langkah; Oleh karena itu, pendekatan enzimatik
lebih disukai oleh sejumlah pekerja. Proses enzimatik ini memiliki keuntungan
menghasilkan sedikit limbah dan membutuhkan bahan kimia yang lebih murah.
Sefalosporin asilase merupakan enzim yang penting secara industri yang dimana enzim
tersebut menghidrolisis sefalosporin menjadi asam 7- aminocephalosporanic (7-ACA).
Dalam penelitian ini, metode enzimatik ini telah digunakan untuk menghasilkan 7-ACA,
sebagai kunci yang kemudian digunakan untuk mensintesis sefalosporin semisintetik
baru. Asam nikotinat, benzimidazol, imidazol atau sistem benzimidazol tersubstitusi telah
terbukti memiliki efek farmakologis yang berbeda termasuk efek antijamur, antibakteri
dan antivirus. Benzimidazol 2-tersubstitusi, dengan berbagai jenis aktivitas biologis,
memiliki hubungan dekat dengan metabolisme asam nukleat. Oleh karena itu,
sefalosporin semi-sintetis yang mengandung nukleus ini disiapkan dan penilaian
molekul-molekul ini telah diperiksa untuk menghambat berbagai proses seluler dan
metabolisme.
MATERI DAN METODE
Kimia
Semua reaksi dilakukan pada peralatan oven yang kering dan campuran diaduk secara
magnetis. Thiophene-2-carboxylic acid, phenyl acetic acid, hydroxybenzotriazole
(HOBT), Nmethylmorpholine (NMM), 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide
hydrochloride (EDC), nicotininc acid, pyrazine-2carboxylic acid, imidazole-4-
carboxylic acid, 2-methyl mercaptobenzimidazole, di-t-butyl dicarbonate,
tbutyltrichloroacetimidate, dimethylaminopyridine (DMAP), pnitrophenylchloroformate,
2,6-lutidine, 4-imidazole carboxylic acid, dan semua pelarut yang di deuterasi dipesan
dari Sigma- Aldrich, USA dan sisanya dari pelarut dan bahan kimia yang umum
digunakan diperoleh dari Merck, India. Pengukuran UV dilakukan pada spektrofotometer
Hitachi 220S. Semua spektrum NMR dicatat pada instrumen varian pada suhu 300 MHz
(1H) dan 75 MHz (13C) dengan D2O atau CDCl3 sebagai pelarut dan Me4Si (TMS) sebagai
standar internal. Pergeseran kimia dinyatakan dalam nilai (ppm) dari puncak referensi
internal TMS. Multiplisitas ditunjukkan dengan menggunakan singkatan berikut: s
(singlet), d (doublet), t (triplet), q (kuartet), m (multiplet), dd (doublet of doublet). Rincian
karakterisasi semua senyawa diberikan dalam tabel-1. Analisis KLT dilakukan pada pelat
silika precoated (Merck) dengan menggunakan pelarut AcOEt dan petroleum ether (PE)
atau CH2Cl2 dan MeOH sebagai fase gerak. Bintik-bintik itu divisualisasikan dengan
sinar UV pada = 254 nm dan dikonfirmasi dengan ninhydrin charring. Semua pelarut
dikeringkan dan didistilasi sebelum digunakan, THF disuling dari campuran Na dan
benzofenon, dan MeCN dan Et3N yang telah disuling dari CaH2. Pelarut organik
dikeringkan di atas anh. Na2SO4 dan konsentrasi dengan penguapan dilakukan secara in
vacoa.
O-methyl ester dari asam 7-aminocephalosporanic (A)
500 mg asam 7- aminocephalosporanic dilarutkan dalam 5-10 mL metanol kering di labu
bulat bawah (RB). 5 mL thionyl chloride ditambahkan dan campuran reaksi direfluks
selama 5-6 jam pada penangas minyak. Setelah selesainya reaksinya, pelarut diuapkan
pada pompa dengan tekanan rendah dan O-methyl ester dari asam 7-aminosfalosporanat
(A) yang diperoleh digunakan pada tahap berikutnya tanpa pemurnian lebih lanjut.
Metode umum untuk sintesis 1-4
Thiophene-2-carboxylic acid, phenyl acetic acid, nicotinic acid dan pyrazine-2-
carboxylic acid (1 equi.) Dilarutkan secara terpisah dalam empat labu dasar bulat yang
berbeda dalam 15 mL MeCN pada 0C. Nhydroxybenzotriazole (HOBT, 3 equi.)
Bersamaan dengan jumlah katalis NMM ditambahkan dan campuran diaduk selama 15
menit. Untuk suspensi ini, EDC (4 equi.) Dan setelah itu COOH protected 7-ACA (A, 1,5
equi.) Ditambahkan dan dibiarkan mengaduk dalam semalam. Keesokan harinya, pelarut
dihilangkan dengan vakum dan senyawa diambil di AcOEt, dicuci dengan larutan asam
sitrat, larutan NaHCO3 jenuh, air garam dan dikeringkan pada Na2SO4. Lapisan organik
dikonsentrasikan dan dimurnikan dengan cc (AcOEt/PE 3:7) untuk diberikan pada 1-4
secara bertururt.
Methyl ester dari 7 (-imidazole-2-acetamido) cephalosporanic acid (5)
Untuk suspensi dari 4-imidazole carboxylic acid (500 mg), dalam 10 mL benzena absolut,
bubuk phosphorus pentachloride (PCl5) ditambahkan dan diaduk pada r. t. Campuran
reaksi pertama menjadijernih dan kemudian berwarna akibat pembentukan asam klorida.
Asam klorida yang diendapkan digunakan pada langkah berikutnya tanpa pemurnian
lebih lanjut. Asam klorida ini ditambahkan ke metil ester 7-ACA dan campuran diaduk
selama 1 jam pada 0C dan tambahan 2 jam pada r.t. Campuran reaksi diasamkan dengan
HCl 1N dan diekstraksi dengan AcOEt (tiga kali). Lapisan organik dicuci dengan larutan
NaHCO3 jenuh dan air garam, dikeringkan di atas Na2SO4 padat dan dipekatkan in vacuo.
Metil ester dari 7(-imidazole-2-acetamido) cephalosporanic acid (5) dikristalisasi
menggunakan etanol.
7(pyrazine-formamido)-3-mercapto methylbenzimidazole cephalosporanic acid
(6)

Asam klorida dari pyrazine-2- carboxylic acid dibuat seperti di atas digunakan pada
langkah berikutnya tanpa pemurnian lebih lanjut. Untuk larutan garam natrium 7-ACA
(540 mg) dan NaHCO3 (540 mg) dalam air (10 mL) dan aseton (7 mL), larutan asam
klorida (terbentuk sebelumnya) ditambahkan setetes demi setetes pada 0C dengan
pengadukan . Campuran reaksi diaduk selama 1 jam pada 0C dan tambahan 2 jam pada
r.t. Campuran reaksi diasamkan dengan HCl 1N dan diekstraksi dengan AcOEt (tiga kali).
Lapisan organik dicuci dengan larutan NaHCO3 jenuh dan air garam, dikeringkan di atas
Na2SO4 padat dan dipekatkan secara in vacuo untuk memberi 7-(pyrazine-2-formamido)
aminocephalosporanic acid. Kemudian dikristalisasi menggunakan etanol. Larutan 7-
(pyrazine-formamido) aminocephalosporanic acid (500 mg), NaHCO3 (100 mg) dan
mercaptobenzimidazole (300 mg) dalam buffer fosfat diaduk selama 6 jam pada suhu
60C. Campuran reaksi diasamkan dengan HCl 1N dan diekstraksi dengan AcOEt (tiga
kali). Lapisan organik dicuci dengan larutan NaHCO3 jenuh dan air garam, dikeringkan
di atas Na2SO4 padat dan dipekatkan in vacuo. Senyawa akhir 7(pyrazine-formamido)-
3mercapto methylbenzimidazole cephalosporanic acid (6) dimurnikan dengan silika gel
cc dengan menggunakan pelarut DCM dan MeOH dan dikristalisasi menggunakan
aseton.
(T-BOC)2O perlindungan cefotaxime (untuk analog 7-9)
500 mg cefotaxime (1 mmol, 1eq) dilarutkan dalam larutan natrium bikarbonat jenuh dan
diaduk pada 0C. 330 mg (tBOC)2O (1,5 mmol, 1,5 eq) dilarutkan dalam dioksan dan
ditambahkan ke dalam campuran reaksi yang diaduk pada 0 C dan diijinkan untuk diaduk
selama 3-4 jam. Setelah selesainya reaksi, campuran reaksi diasamkan menggunakan
larutan asam sitrat jenuh (HCl 1N tidak dapat digunakan jika sebaliknya BOC akan
memecah), diekstraksi dengan AcOEt (tiga kali). Lapisan organik dicuci dengan larutan
asam sitrat jenuh dan air garam, dikeringkan dengan natrium sulfat padat dan dipekatkan
in vacuo. Senyawa padat yang diperoleh digunakan pada langkah selanjutnya tanpa
pemurnian lebih lanjut.
(4-carboxamido)-cefotaxime methyl ester)-7-aminocephalos poranic acid (7)

Garam natrium dari cedotaxime (B, 500 mg) dilarutkan dalam metanol (10 mL) dan 5-6
mL thionyl chloride ditambahkan, campuran reaksi direfluks selama 4-5 jam. Semua
pelarut dihilangkan dengan menggunakan rotavapour dan kemudian diolah dengan TFA
murni selama 2 jam pada r.t. TFA dilepas dan COOH dilindungi cefotaxime (C) sehingga
digunakan lebih lanjut. 500 mg 7-ACA (1,8 mmol, 1eq) dilarutkan dalam larutan
NaHCO3 jenuh dan diaduk pada 0C. 590 mg (t-BOC)2O (2,7 mmol, 1,5 eq) dilarutkan
dalam dioksan dan ditambahkan ke dalam campuran reaksi yang diaduk pada 0C dan
dibiarkan mengaduk selama 3-4 jam. Setelah selesainya reaksi, campuran reaksi
diasamkan menggunakan larutan asam sitrat jenuh (HCl 1N tidak dapat digunakan jika
sebaliknya BOC akan memecah), diekstraksi dengan AcOEt (tiga kali). Lapisan organik
dicuci dengan larutan asam sitrat jenuh dan air garam, dikeringkan di atas Na2SO4 dan
dipekatkan in vacuo. Senyawa padat yang diperoleh digunakan pada langkah selanjutnya
tanpa pemurnian lebih lanjut. 744 mg BOC yang dilindungi 7ACA (2 mmol, 1 eq) diambil
di labu dasar bundar dan dilarutkan dalam MeCN pada suhu 0C. 810 mg HOBT (6 mmol,
3 eq) ditambahkan bersamaan dengan jumlah katalitik NMM pada 0C dan diaduk selama
15 menit. Untuk suspensi ini, 1,5 g EDC (8 mmol, 4 eq) dan kemudian 1,3 g COCC
cefotaxime C yang dilindungi (3 mmol, 1,5 eq) ditambahkan dan dibiarkan mengaduk
dalam semalam. Hari berikutnya TLC diperiksa, pelarut dikeluarkan dengan vakum dan
senyawa diambil di AcOEt, dicuci dengan larutan asam sitrat, larutan NaHCO3 jenuh dan
air garam (larutan natrium klorida jenuh), dikeringkan pada Na2SO4 padat. Lapisan
organik dikonsentrasikan dan dimurnikan dengan kromatografi kolom dalam kloroform
dan metanol (10%) untuk memberi turunan BOC dari analog 7. BOC yang dilindungi
analog 7 (500 mg) dilarutkan dalam metanol (10 mL) dan 5-6 mL thionyl cloride
ditambahkan, campuran reaksi direfluks selama 4-5 jam. Semua pelarut dihilangkan
dengan menggunakan rotavapour dan kemudian diolah dengan asam trifluoroasetat murni
selama 2 jam pada r. t. TFA dihilangkan dan (4-carboxamido)-cefotaxime methyl ester)-
7-aminocephalosporanic acid atau analog 7 diperoleh dalam jumlah yang tepat.
3-(mercaptobenzimidazole) cefotaxime methyl ester (8)

BOC dilindungi cefotaxime (500 mg) dilarutkan dalam metanol (10 mL) dan 5-6 mL
thionyl chloride ditambahkan, campuran reaksi direfluks selama 4-5 jam. Semua pelarut
dihilangkan dengan menggunakan rotavapour. Larutan metil ester yang dilindungi BOC
dari cefotaxime (500 mg), NaHCO3 (100 mg) dan mercaptobenzimidazole (300 mg)
dalam buffer fosfat diaduk selama 6 jam pada suhu 60C. Campuran reaksi diasamkan
dengan HCl 1N dan diekstraksi dengan AcOEt (tiga kali). Lapisan organik dicuci dengan
larutan NaHCO3 jenuh dan air garam, dikeringkan di atas Na2SO4 padat dan dipekatkan
in vacuo. Senyawa akhir dimurnikan dengan kromatografi kolom silika gel menggunakan
diklorometana dan metanol sebagai pelarut. Semua pelarut dihilangkan dengan
menggunakan rotavapour dan kemudian diolah dengan asam trifluoroasetat murni selama
2 jam pada r. t. TFA dihapus dan analog 8 i. e. 3-(mercaptobenzimidazole) cefotaxime
methyl ester diperoleh. Kemudian dikristalisasi menggunakan aseton.
3-[1-(2-methylenebutyl)-4-nitrobenzene] cefotaxime methyl ester (9)

555 mg amino dilindungi cefotaxime (1 eq, 1 mmol) ditangguhkan dalam diklorometana

(1- 15 mL). Hidroklorida anhidrat (4N dioksoks, 1,3 eq, 300 l) ditambahkan, dan
campuran reaksi diaduk selama 30 minat r. t. tert-Butil trikloroacetimidat (3 eq, 200 l, 3
mmol) ditambahkan, dan campuran ralat diaduk semalaman di r.t. Keesokan harinya,
campuran reaksi dicuci secara berurutan dengan air, larutan natrium bikarbonat jenuh dan
air garam. Lapisan organik dikeringkan menggunakan natrium sulfat padat dan pelarut
dihilangkan dengan vakum. O-tersier butil ester dari (t-BOC)2O cefotaxime yang
dilindungi dimurnikan dengan saringan cc eluting dengan pelarut yang terdiri dari AcOEt
dan heksana. Untuk larutan ini dalam dimetilformamida (DMF) dan diklorometana
(DCM) ditambahkan asam trifluoroasetat (1 mL), dan larutan diaduk selama 2 jam pada
r. t. Pelarut dilepaskan dan etil eter ditambahkan. Padatan disaring dan dicuci dengan eter
untuk memberi O-tersier butil ester sefotaksim yang (1,2 g, 1 eq, 2,2 mmol) dilarutkan
dalam metanol (10 mL) dan kalium karbonat padat (120 mg) ditambahkan. Campuran
diaduk selama 2 jam pada r.t. dan asam asetat (200 l) ditambahkan untuk memadamkan
reaksinya. Pelarut tersebut telah dilepas dan produk tersebut dimurnikan dengan flash cc
eluting dengan aseton 10% di DCM untuk menghasilkan D 28% yield.
Senyawa D dilarutkan dalam anhy THF, dan DMAP, pnirophenylchloroformate (0,2 g, 1
mmol) dan 2,6-lutidin (120 l, 1 mmol) ditambahkan secara berurutan. Campuran reaksi
diaduk semalaman di r.t. Pelarut dilepaskan dan produk dimurnikan dengan cara
dicelupkan dengan AcOEt 5% di DCM untuk menghasilkan obat akhir 3[1-(2-
methylenebutyl)-4-nitrobenzene] cefotaxime methyl ester (9) pada 65% yield.
Pharmocology
Untuk menentukan zona penghambatan dengan metode Kirby-Baur
Uji kepekaan antibakteri dilakukan dengan menentukan zona penghambatan dengan
metode Kirby-Baur. Larutan stok masing-masing sefalosporin semi-sintetis dibuat dalam
air/DMSO dan dilarutkan dua kali lipat (400, 200, 100, 50, 25 g/mL). Saringan disk
steril dicelupkan ke dalam larutan ini dan kemudian dikeringkan untuk menghilangkan
pelarut berlebih. Pelat medium Nutrisi Agar disiapkan menggunakan kaldu Muller-
Hinton dan dibiarkan mengeras. Strain bakteri yang berbeda dipilih, yaitu. Citrobacter
freundii, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli ATCC 25922,
Salmonella typhi MTCC 3216, Salmonella typhimurium, Salmonella paratyphi, Shigella
flexinii, Vibrio cholerae, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Proteus vulgaris dan
Helicobacter pylori (Gram-negatif) serta Gram-cocci positif seperti Enterococcus
facealis ATCC 29912, Staphlyococcus aureus I ATCC 25923, Listeria monocytogenes,
Staphlyococcus aureus II dan Streptococcus heamophila dan 1 mL setiap bakteri dan
kaldu budaya ditambahkan ke piring dan menyebar dengan bantuan penyebar steril.
Cakram kertas saring yang direndam dalam strain bakteri ditempatkan secara aseptik di
atas piring yang diinokulasi menggunakan forsep steril. Pelat diinkubasi pada suhu 370C
selama 24 jam, dalam posisi tegak lurus. Zona penghambatan diukur dengan skala, tabel
2.
Menentukan MIC dengan metode Uji Kemampuan Suspensi Mikrodilusi
Larutan stok 400 g/mL masing-masing sefalosporin semi-sintetis dibuat dalam
air/DMSO dan dilarutkan dua kali lipat (200, 100, 50, 25, 12,5, 6,25, 3,125, 1,562, 0,781,
0,391, 0,1995, 0,978 g/mL). Konsentrasi yang berbeda dari semua senyawa disiapkan
dalam tabung uji kering steril untuk menentukan konsentrasi hambat minimum (MIC).
Kaldu nutrisi disiapkan dan 2,9 mL diambil di setiap tabung reaksi dan diberi sterlisasi
setelah dipasangkan. Setelah pendinginan 0,1 mL setiap pengenceran ditambahkan ke
tabung reaksi dan volume akhir dibuat sampai 3,0 mL. Untuk masing-masing tabung uji
0,1 mL kaldu kultur bakteri ditambahkan. Tabung uji diguncang untuk mencampur
inokulum dengan kaldu secara seragam. Tabung diinkubasi pada suhu 370C selama 24
jam. Konsentrasi terendah dimana tidak ada pertumbuhan mikroorganisme yang terlihat
dilaporkan sebagai MIC, tabel 3.
HASIL DAN DISKUSI
Rute sintetis umum yang digunakan untuk sintesis sefalosporin semisintetik baru 1-4,
metil ester dari asam cephalosporanat 7- (thiophene-2formamido) sefalosporanat (1), 7-
(fenilasetamido) (2), piridin-3-yl -formamido) Asam sefalosporanat (3) dan 7-pirazin-
formamido sefalosporanat (4) ditunjukkan pada skema 1.
Survei literatur mengungkapkan bahwa pada sefalosporin generasi kedua yang ada furan
atau tiofena (cincin heterosiklik beranggota lima) hadir yang mengandung O atau S
sebagai heteroatom. Pada penelitian ini, kami mencoba untuk mengetahui efek dari lima
anggota cincin pada aktivitas antibakteri dengan menggantinya dengan enam anggota
cincin piridin, memiliki satu cincin N dan pirazin dengan dua atom N pada sefalosporin
baru 3 dan 4, secara berurutan. Untuk pengembangan potensi yang lebih baik, kami juga
mensintesis analog 7(imidazoleformamido) cephalosporanic acid (5) dan 7-
(pyrazineformamido)-3-mercapto methylbenzimidazole cephalosporanic acid (6), di
mana kami mencoba mengganti inti thiazoline dari sefalosporin generasi ketiga dengan
inti imidazole dan kelompok asetat yang diganti dengan sebgaian benzimidazole, skema
2.
Diketahui bahwa nukleus benzimidazol memiliki khasiat biologis yang beragam dan
nukleus ini adalah bagian dari beberapa senyawa antibakteri yang ada, oleh karena itu
analog ini diharapkan dapat menunjukkan aktivitas spektrum yang lebih luas
dibandingkan dengan sefalosporin generasi ketiga yang ada. Cefotaxim (B), sefalosporin
generasi ketiga yang pertama, yang diperkenalkan pada tahun 1980, dikenal sebagai obat
yang mampu melawan serangan hampir semua -laktamase. Ini memiliki afinitas yang
lebih tinggi terhadap protein pengikat penisilin (PBPs) bakteri gram negatif dan mampu
menembus lebih cepat ke sel bakteri dibandingkan dengan sefalosporin generasi lama.
Karena itu, itu dianggap obat yang menjanjikan yang mampu mengatasi mekanisme
resistensi antibiotik yang ada saat itu. Tapi saat ini, mekanisme resistensi yang lebih baru
terhadap antibiotik -laktam telah ditemukan karena aktivitas obat berharga ini telah
berkurang banyak. Dengan sintesis analog 7-9, kami mencoba memperbaiki sifat
antibiotik sefotaksim dengan memodifikasi di berbagai posisi. Asilasi 7-ACA atau
sefalosporin semi-sintetis dengan asam amino menimbulkan masalah yang umum terjadi
pada sintesis peptida, yaitu perlindungan gugus amino oleh beberapa fungsi sedemikian
rupa sehingga sisa molekul tidak terpengaruh. Tinjauan literatur menunjukkan bahwa
sefotaksim yang umum digunakan dilindungi menggunakan kelompok (t-BOC)2O dan
produknya melindungi kelompok Nt-butoxycarbonil dapat digunakan secara memuaskan
dalam dikonversi ke metil esternya (pada hasil yang lebih tinggi) dengan mengatasinya
dengan sintesis sefalosporin. Meski tidak bisa digunakan jika MeOH dan SOCl2. Hal ini
dapat digunakan untuk langkah berikutnya tanpa penisilin lebih lanjut karena tidak dapat
dihilangkan karena ketidakstabilan pemurnian. Dengan tujuan untuk menemukan
generasi baru turunan penisilin yang dihasilkan dalam asam. Stabilitas asam yang lebih
besar sefalosporin dengan efisiensi yang lebih baik sebagai obat antibakteri, kami
mencoba sistem -laktam di sefalosporin yang memungkinkan pengangkatan t- untuk
memasang dua cincin -laktam bersama-sama dalam kasus 7. Untuk tujuan ini, substituen
butoksikarbonil dalam kondisi asam dengan cefotaxime yang dilindungi karboksil
digabungkan dengan amino yang dilindungi dari reaksi samping yang tidak diinginkan.
Jadi, untuk analog 7-9, gugus amino ACA, dengan adanya HOBT, EDC dan NMM,
skema 3
 Akhirnya, kelompok (t-BOC)2O dihapus menggunakan TFA untuk mencapai
Sefalosporin semi-sintetik yang diinginkan 7. 3-(mercaptobenzimidazole) cefotaxime
methyl ester analog 8 diperoleh dari ester yang dihasilkan oleh perpindahan gugus
asetoksil dengan merkapto benzimidazol dalam larutan penyangga dan kemudian
menghilangkannya (t-BOC)2O dengan mengolahnya dengan TFA, skema 4.
 3-[1-(2-methylenebutyl)-4-nitrobenzene] cefotaxime methyl ester (9) diperoleh
dengan cara mengganti gugus 3-acetoxyl dari kelompok t-butyl ester cefotaxime dengan
kelompok p-nitrophenyl, Skema 5.
 Semua rincian karakterisasi, diberikan dalam tabel-1, konfirmasikan struktur
analog yang diharapkan. Semua molekul yang baru disintesis dicirikan oleh UV, 1H
NMR, 13C NMR, MS dan diskrining untuk aktivitas antibakteri mereka terhadap berbagai
strain bakteri gram positif dan gram negatif dengan menggunakan protokol standar.
Semua sefalosporin semi sintetis yang baru disintesis dievaluasi secara in vitro
untuk aktivitas antibakterinya terhadap panel Gram-negatif dan Gram positif cocci yang
ditunjukkan dalam zona penghambatan terhadap 18 strain standar pada tabel-2. Minimal
Konsentrasi hambat (MIC) didefinisikan sebagai pengenceran senyawa sintetis terendah
yang menghambat pertumbuhan mikro organisme yang diinokulasi dan MIC untuk semua
antibiotik yang disebutkan di atas dirangkum dalam tabel-3. Masing-masing gram positif
di atas dan bakteri gram negatif diuji dengan metode Kirby Bauer Disc Diffusion
(KBDD), sesuai protokol standar. Senyawa yang menunjukkan beberapa zona
penghambatan dengan metode ini dianalisis lebih lanjut dengan uji dilusi kaldu untuk
menentukan nilai MIC sesuai dengan protokol standar.
Sefalosporin yang disintesis dilarutkan dalam DMSO-H2O (50%) dan pengenceran
dua kali lipat kemudian disiapkan. Jumlah bakteri yang sama ditambahkan ke dalam
masing-masing tabung untuk membawa tingkat kekeruhan menjadi 0,5 Mcfarlands.
Tabung diinkubasi pada suhu 370C selama 18-24 jam dan diamati untuk kekeruhan yang
terlihat pada keesokan harinya. Data tidak diambil untuk larutan awal karena konsentrasi
DMSO tinggi (12,5%).
 Studi lebih lanjut difokuskan pada penentuan Minimum Bactericidal Concentration
(MBC) dari molekul-molekul short-listed. Mengikuti prosedur subkultur yang biasa dari
masing-masing tabung yang menunjukkan MIC, kami mengamati bahwa MBC sama
dengan MIC dan molekul obatnya dapat menjadi bakteri bakterisida yang efektif. Obat
ini memiliki efek bakterisida bila diberikan dalam konsentrasi melebihi dosis
bakteriostatik. Karena molekul yang diteliti bertindak sebagai agen bakterisida, dapat
diusulkan untuk menghancurkan sistem yang mengendalikan sifat osmotik dinding sel
bakteri. Cara kerja agen bakteri bakteri membunuh bakteri bervariasi dan termasuk
mengganggu membran, mengganggu metabolisme, dan menargetkan komponen
sitoplasma. Mungkin saja mereka menghambat enzim transpeptidase yang penting untuk
sintesis dinding sel bakteri. Bakteri akhirnya lyse akibat aktivitas enzim autolitik dinding
sel yang terus-menerus (autolysins dan murein hydrolase) sementara rakitan dinding sel
ditangkap. Dalam banyak kasus mekanisme pembunuhan sebenarnya tidak diketahui.
Dalam penelitian ini, penelitian lebih lanjut akan mengklarifikasi mekanisme tindakan
sefalosporin semi-sintetik yang baru disintesis, namun dapat dihipotesiskan bahwa
sefalosporin semi-sintetis ini juga bekerja pada salah satu dari mekanisme ini.

KESIMPULAN

Secara umum, upaya untuk memodifikasi sistem cincin thiazolidine -laktam dari
penisilin tanpa kehilangan aktivitas antibakteri tidak berhasil. Penemuan, penyuluhan
struktur dan modifikasi sefalosporin C, yang menyebabkan pemasaran antibiotik baru
yang penting, memberikan dorongan tambahan untuk studi dan sintesis antibiotik -
laktam. Dalam dekade terakhir, walaupun antibiotik sefalosporin telah membuat
kemajuan dan kontribusi yang luar biasa dalam pengobatan penyakit akut yang berasal
dari infeksi patogen di klinik, masih banyak upaya untuk mencapai spektrum luas yang
seimbang dan untuk memperbaiki stabilitas -laktamase. Dalam mencari antibiotik
sefalosporin yang unik dan poten, kita telah menyiapkan sefalosporin semi sintetis baru
1-9. Motivasi untuk mensintesis sefalosporin semi-sintetis ini adalah untuk meningkatkan
ketersediaan obat di lokasi sasaran dan absorptivitas oralnya, meningkatkan stabilitas.
Dengan demikian, kebutuhan berulang untuk kelompok penghambat yang mudah pecah
untuk asam karboksilat dalam kimia sintetis sefalosporin membentuk dasar dari pekerjaan
sekarang. Semua sefalosporin yang disintesis memiliki ester mudah terhidrolisis untuk
studi penyerapan oral; Mereka juga memiliki kelompok penghambat yang sesuai untuk
karboksil, yang mungkin akan dihapus kemudian tanpa gangguan pada cincin -laktam.
Meskipun ester sederhana, seperti metil ester, diketahui memiliki keaslian antibiotik yang
berkurang dibandingkan dengan asam bebas, ada kemungkinan bahwa ester yang mudah
terhidrolisis dengan mudah (dengan cara enzimatik atau kimia) dapat menunjukkan
aktivitas in vivo yang signifikan. Keuntungan terapeutik dapat diantisipasi dari senyawa
turunan jika lingkungan struktural gugus karboksil adalah bar untuk penyerapan melalui
dinding lambung atau usus. Aktivitas dapat melekat pada turunan atau dihasilkan hasil
pembelahan enzimatik ke senyawa induk setelah penyerapan telah terjadi. Variasi
cephalosporin C pada tiga posisi yang mungkin, yang dieksploitasi dalam penelitian ini,
menyebabkan antibiotik aktif, asam stabil, tahan penisilin, antibiotik tidak beracun
dengan potensi meningkat terhadap berbagai bakteri. Masih ada beberapa pertimbangan
teknis yang memerlukan resolusi. Namun, hasilnya, untuk sintesis sefalosporin generasi
baru dengan strategi pemrosesan yang berbeda, akan menjadi konsep yang berguna, yang
kemungkinan akan digunakan dengan keuntungan yang cukup besar.