Seminar Nasional Teknologi Peternakan dan Veteriner 2010

KEBERADAAN KANDUNGAN KUMARIN DALAM DAUN

GAMAL (Gliricidia sepium) SEBAGAI AKARISIDA
[Status of Coumarin Content in Gamal (Gliricidia sepium)
Leaves as Acaricides]
YUNINGSIH

Balai Besar Penelitian Veteriner, Jl. R.E. Martadinata No. 30, Bogor 16114

ABSTRACT

In order to know activity and effectivity from medicinal plants, so we have to know a status of their active
substance content. The determanation of coummarin as active substance in gamal leaves (acaricides) have
been developed by using solvent extraction with proportion ethanol-water: 100, 90,80,70,60 and 50% and
time of shaking during 1, 2, 3, 4 and 5 minutes for optimal extraction. Then, intensity of fluoresence as
concentration of kumarin in filtrate is detected by thin layer chromatography (TLC) under UV lamp with
wave length 366nm, after developing plat in eter : toluen (1 : 1) and spraying with 5% of KOH ethanol.
Validation of improved method can be conducted are recovery and limit of detection (LOD). The result of
optimal extraction is 50% ethanol-water with shaking during 5 minutes and recoveries after adding 5,0, 2,5
and 1,25 g kumarin (in triplicates) standard solution in leaves is 108% respectively, which its in range 70
110% (range of Validation Acceptance Criteria). So, this improved method is quite significant (valid) for
kumarin analysis in leaves with LOD: 0.0005 g.
Key Words: Kumarin Analysis, Gliricidia sepium Leaves, Thin Layer Chromatography (TLC)

ABSTRAK

Keaktifan dan keefektifan penggunaan dari tanaman obat dipengaruhi oleh keberadaan kandungan bahan
aktif yang terdapat dalam tanaman obat tersebut. Telah dicoba analisis kumarin sebagai bahan aktif dalam
daun gamal (Gliricida sepium) sebagai akarisida dengan cara menggunakan variasi proporsi pelarut ekstraksi
100, 90, 80, 70, 60 dan 50% etanol- air dan variasi lama pengocokan mulai 1, 2, 3, 4 dan 5 menit dengan alat
vortex untuk memperoleh hasil ekstraksi yang optimum. Kemudian hasil filtrat dispot pada plat kromatografi
lapis tipis (KLT) silika gel 60 (F 254) dengan eluen campuran eter : toluen (1 : 1) yang dijenuhkan dengan
asam asetat pekat dan hasil pengembangan plat disemprot dengan 5% KOH etanol. Intensitas fluoresence
yang dihasilkan sebagai penunjuk konsentrasi kumarin dalam sampel dideteksi dengan lampu UV pada
panjang gelombang 366 nm. Untuk uji validasi metode dilakukan uji perolehan kembali dan penetapan limit
deteksi. Hasil pelarut ekstraksi optimum yaitu 50% etanol-air dengan lama pengocokan selama 5 menit dan
hasil uji perolehan kembali setelah penambahan standar kumarin: 1,25; 2,5 dan 5,0 g, yang masing-masing
penambahan 3 ulangan menunjukkan nilai yang sama, yaitu rata-rata 108% yang masuk dalam kisaran
kriteria uji validasi uji perolehan kembali (80 110%), maka metode analisis kumarin cukup valid dengan
limit deteksi 0,0005 g.
Kata Kunci: Analisis Kumarin, Daun Gamal, Kromatografi Lapis Tipis (KLT)

PENDAHULUAN pencegah erosi. Beberapa peternak

Tanaman gamal dengan nama latinnya
Gliricidia sepium (famili Fabaceae) merupakan
tanaman yang mudah tumbuh dengan cepat di
daerah tropis. Di Indoensia dikenal oleh petani
terutama di Jawa, Sumatera dan Sulawesi
digunakan untuk pupuk, kayu bakar dan
memanfaatkannya untuk makanan ternak
(ruminansia) karena daunnya mengandung
lebih dari 20% protein kasar meskipun cukup
toksik untuk hewan lain, seperti kuda (DUKE,
1983). Menurut DUKE dan WAIN (1981) bahwa
daun gamal tersebut dapat digunakan sebagai
insektisida, rodentisida dan pengobatan
penyakit kulit, luka dan reumatik. Sifatnya

875
 Seminar Nasional Teknologi Peternakan dan Veteriner 2010
sebagai pestisida ini karena keaktifan senyawa
toksik kumarin yang terdapat dalam daun
gamal tersebut. Disamping senyawa toksik
kumarin juga ditemukan adanya senyawa
toksik dicoumarol (furan ring) sebagai
derivatnya dari kumarin yang dapat
menyebabkan perdarahan lebih luas, paralysis
dan mati apabila kandungannya melebihi dari
10 ppm. Sementara ditemukan dicoumarol
tersebut dalam daun gamal apabila daun gamal
mengalami pembusukan (kering) dengan
adanya kontaminan jamur (CORNELL
UNIVERSITY DEPARTMENT OF ANIMAL
SCIENCE, 2010).
Begitu juga pendapat dari EVERIST (1974)
bahwa ditemukan bentuk derivat kumarin
(senyawa kimia benzopyrone) dalam tanaman
dan ada 4 bentuk derivatnya, yaitu derivat
pertama dicoumarol yang bersifat antikoagulan
dan dapat menyebabkan perdarahan lebih luas
Derivat kedua: dihydroxykumarin glycoside
yang mempunyai sifat racun akut karena
mengandung glikosida. Derivat ketiga:
aflatoksin yang mempunyai sifat toksin hati
yang sangat kuat dan karsinogenik yang cukup
tinggi dan merupakan hasil produksi dari
Aspergillus. Kemudian derivat keempat:
furokumarin mempunyai sifat keaktifan
photosensitisasi yaitu bereaksi langsung
merusak sel-sel jaringan dengan adanya sinar
matahari.
Seperti telah disebutkan di atas bahwa daun
gamal dapat dipergunakan untuk pengobatan
penyakit kulit dan diantaranya untuk
pengobatan penyakit skabies (PHILIPPINE
MEDICINAL PLANTS, 2009). Sementara
keaktifan dan keefektifan dari penggunaan
tanaman obat sebagai akarisida tersebut
dipengaruhi oleh keberadaan kandungan bahan
aktifnya, maka telah dicoba analisis kumarin
sebagai bahan aktif dalam daun gamal dengan
modifikasi metode kromatografi lapis tipis
(KLT) menurut CELEGHINI et al. (2001).
MATERI DAN METODE
Sebagai bahan penelitian adalah berupa
daun gamal (Gliricida sepium) asal sekitar
lokasi Balai Besar penelitian Veteriner, Bogor,
kemudian daun dikeringkan dan digiling
sampai menjadi bentuk powder (DG). Sebagai
blanko digunakan daun sirih kering dalam
876
bentuk powder (PB) dan telah dianalisis tidak
mengandung kumarin.
Metode analisis kumarin dalam DG
Dilakukan analisis kumarin dalam DG
dengan metode menurut CELEGHINI et al.
(2001), yaitu: timbang 1 gram DG dan
ekstraksi dengan 10 ml campuran etanol: air
(50%) dengan cara pengocokan dengan
menggunakan alat sonikator selama 20 menit.
Hasil filtrat yang diperoleh dispot pada plat
KLT dengan eluen campuran eter-toluen (1:1)
yang dijenuhkan dengan 10% asam asetat,
kemudian plat disemprot dengan 5% KOH
etanol. Konsentrasi kumarin dihitung
berdasarkan dengan hasil intensitas fluoresence
yang dideteksi dibawah lampu UV dengan
panjang gelombang 366 nm dan kadar kumarin
dalam sampel dihitung dengan
membandingkan antara intensitas fluoresence
sampel dengan standar kumarin.
Modifikasi metode
Dilakukan analisis kumarin dengan
modifikasi metode menurut, CELEGHINI et al.
(2001) dengan cara sebagai berikut:
Penetapan proporsi pelarut ekstraksi dan
pengocokan yang optimum.
Analisis kumarin dalam daun gamal
dilakukan sebanyak 6 kali, masing-masing
menggunakan 10 ml pelarut ekstraksi dari
campuran etanol: air dengan proporsi mulai
dari 100, 90, 80, 70, 60 dan 50%, kemudian
kocok dengan alat vortex dengan variasi waktu
mulai 1, 2, 3, 4 dan 5 menit. Hasil filtrat diukur
volumenya dan dispot pada plat KLT silica gel
60 (F254), kemudian plat dikembangkan dalam
eluen campuran eter : toluene = 1: 1 yang telah
dijenuhkan dengan asam asetat pekat. Hasil
intensitas fluorescence-nya dideteksi di bawah
lampu UV dengan panjang gelombang 366 nm.
Kemudian kadar kumarin dihitung seperti telah
dilakukan di atas.
Validasi modifikasi metode
Uji perolehan kembali: dilakukan analisis
kumarin dalam DB dengan metode yang telah
dimodifikasi di atas sebanyak 10 ulangan dan
 Seminar Nasional Teknologi Peternakan dan Veteriner 2010
pada tahap awal ekstraksinya dilakukan pada
sampel 1 gram DB dengan penambahan 3
variasi konsentrasi standar kumarin: 50, 25 dan
12,5 l dengan konsentrasi 100 ppm kumarin
(5,0, 2,5 dan 1,25 g kumarin) dan masing-
masing penambahan 3 ulangan (9 kali analisis)
dan 1 kali analisis tanpa penambahan standar
(blanko).
Penetapan limit deteksi lakukan spot
larutan standar kumarin sebanyak 0,5; 1,0; 2,0;
3,0; 4,0 dan 5,0 l pada plat KLT dari masing-
masing konsentrasi 100; 10 dan 1 ppm,
kemudian plat dikembangkan dalam eluen
campuran eter-toluen (1 : 1) dan lakukan
pengamatan intensitas fluorescence-nya sampai
tidak terdeteksi.
Aplikasi modifikasi metode
Dilakukan sampling daun gamal dari
beberapa lokasi sekitar Bogor dan lakukan
analisis kumarin dengan menggunakan metode
yang telah dimodifikasi tersebut.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil analisis kumarin menurut metode
CELEGHINI et al. (2001) dalam daun gamal asal
sumber yang sama menunjukkan intensitas
fluoresence yang berbeda atau kandungan
kumarinnya berlainan yang membuktikan
bahwa hasil ekstraksi daun gamal belum
mencapai optimum, maka perlu konfirmasi
penggunaan pelarut ekstraksi optimum dan
modifikasi lama pengocokan dengan alat
vortex dan hasilnya sebagai berikut:
Pelarut ekstraksi optimum: berdasarkan
hasil pengamatan intensitas fluoresence pada
plat KLT dari hasil ekstraksi daun gamal
dengan 6 macam variasi proporsi pelarut
ekstrasi etanol- air menunjukkan bahwa pelarut
ekstraksi 50% etanol dalam air merupakan
pelarut ekstraksi optimum sesuai dengan
pendapat dari CELEGHINI et al. (2001), yaitu
hasil deteksi dari ekstraknya menunjukkan
intensitas fluoresence yang paling optimum
dibandingkan dengan pelarut ekstraksi lain (10,
20, 30 dan 40% etanol dalam air)
Waktu pengocokan optimum. Setelah
dilakukan pengamatan intensitas fluoresence
dengan pengocokan sampel dengan alat
sonikator kurang optimum dan memerlukan
waktu lebih lama (20 menit). Maka perlu
dimodifikasi dengan alat vortex yang lebih kuat
pengocokannya dan akan memerlukan waktu
yang lebih singkat. Setelah dilakukan
pengocokan selama 1, 2, 3, 4 dan 5 menit dan
ternyata pengocokan selama 5 menit
merupakan waktu pengocokan optimum yang
sesuai dengan hasil pengamtan intensitas
fluorescence-nya paling tinggi dibandingkan
dengan lama pengocokan lain (1, 2, 3 dan 4
menit) yang rata-rata menghasilkan sekitar 40-
90% fluoresence optimum (intensitas
fluoresence dari pengocokan 4 menit hampir
sama dengan pengocokan 5 menit).
Modifikasi konsentrasi asam asetat untuk
menjenuhkan larutan pengembang.
Berdasarkan metode menurut CELEGHINI et
al. (2001) bahwa penambahan asam asetat 10%
dalam menjenuhkan eluen (eter-toluen)
menghasilkan nilai Rf yang tidak beraturan
(bergelombang posisinya). Hal ini disebabkan
adanya kandungan air (polar) cukup tinggi
dalam eluen yang menyebabkan eluen kurang
homogen dan menghasilkan nilai Rf tidak sama
(bergelombang). Maka asam asetat 10%
diganti dengan asam asetat glasial (kandungan
air lebih sedikit) dan asam ini berfungsi
sebagai kondisi (jenuh) dan ternyata nilai Rf
menunjukkan hasil yang sama dari beberapa
ulangan spot baik dari standar kumarin maupun
dari spot sampel. Kemudian pemakaian bahan
pereaksi KOH etanol harus selalu fresh karena
berfungsi sebagai visualisasi fluoresence yang
sangat menentukan keberadaan kandungan
konsentrasi kumarin.
Validasi modifikasi metode
Untuk mengetahui sejauhmana ketepatan
hasil modifikasi metode dilakukan uji validasi
metode dengan cara uji perolehan kembali,
yaitu penambahan 5,0; 2,5 dan 1,25 g standar
kumarin dan hasilnya diperoleh nilai yang
sama, yaitu rata-rata 108% (Tabel 1)
877
 Seminar Nasional Teknologi Peternakan dan Veteriner 2010

Tabel 1. Hasil uji perolehan kembali analisis kumarin dalam daun setelah penambahan larutan standar
kumarin

Ulangan ke Penambahan standar Hasil uji perolehan Hasil uji perolehan

kumarin (g) kembali (g) kembali (%)
1 5,0 5,4 108
2 5,0 5,4 108
3 5,0 5,4 108
1 2,5 2,7 108
2 2,5 2,7 108
3 2,5 2,7 108
1 1,25 1,35 108
2 1,25 1,35 108
3 1,25 1,35 108
Blanko - - -

yang masuk dalam kisaran kriteria uji kumarin cukup tinggi dan ternyata rata-rata
perolehan kembali (80 110%), maka kandungan kumarin cukup tinggi dalam daun
modifikasi metode analisis kumarin dalam asal tanaman yang tumbuhnya cukup subur dan
daun cukup valid. menghasilkan bau yang lebih menyengat
dibandingkan asal daun yang tanamannya
kurang subur. Sifat spesifik bau ini sesuai
Limit deteksi phytochemical kumarin dengan vanili
(PHYTOCHEMICALS, 2010). Sedangkan sampel
Berdasarkan hasil pengamatan intensitas daun lainnya yang kandungan kumarinnya
fluoresence dari hasil spot pada plat setelah cukup rendah umumnya daun asal tanaman
pengembangan dengan eter-toluene dari yang kurang subur atau asal daun yang tumbuh
beberapa variasi konsentrasi kumarin: 100, 10 dari batang tua yang telah dipotong berulang-
dan 1 ppm, maka batas konsentrasi kumarin ulang.
yang masih terdeteksi adalah 0,0005 g (hasil
spot 0,5 l dari konsentrasi 1 ppm kumarin) Tabel 2. Hasil analisis kumarin dalam daun gamal
yang cukup kecil konsentrasinya, maka metode asal beberapa lokasi di Bogor dan
analisis kumarin dengan cara KLT ini cukup sekitarnya
sensitif. Sementara sensitivitas analisis dengan
metode KLT umumnya rata- rata sekitar 0,1 g No. Asal lokasi sampling Kandungan
(seperti beberapa jenis pestisida umumnya daun gamal kumarin (ppm)
sekitar 0,1 0,001 g). 1 Bogor 1 272
2. Bogor 2 480
Keberadaan kandungan kumarin dalam 3. Bogor 3 240
daun gamal 4. Bogor 4 1040
5. Bogor 5 620
Sebagai aplikasi modifikasi metode telah
dilakukan analisis kumarin dalam daun gamal 6. Bogor 6 312
asal beberapa lokasi di Bogor. Setelah 7 Bogor 7 260
dilakukan analisis kumarin dengan metode
yang telah dimodifikasi tersebut dan hasilnya
seperti tertera pada Tabel 2. KESIMPULAN
Terlihat pada Tabel 2, daun gamal no. 2, 4
dan 5 menunjukkan rata-rata kandungan Berdasarkan nilai dari hasil uji perolehan
kembali analisis kumarin dalam daun (108%),

878
 Seminar Nasional Teknologi Peternakan dan Veteriner 2010
maka pengembangan metode cukup valid
dengan limit deteksi 0,0005 ug kumarin.
Dengan modifikasi metode analisis kumarin ini
dapat diketahui keberadaan kandungan
kumarin dalam daun sehingga dapat
mengetahui keaktifan dan kefektifan dalam
penggunannya sebagai akarisida.
DAFTAR PUSTAKA
CELEGHINI, R.M.S., J.H.Y. VILEGAS and
F.M. LANCAS. 2001. Extraction and
quantitative HPLC analysis of kumarin in
hydroalcoholic extarcts of Mikania glomerata
Spreng (guaco) leaves. J. of the Brazilian
Chemical Society. 12(6) 1 8.
http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arr
text&pid=SO103-50532001000600003
(11/9/2009).
CORNELL UNIVERSITY DEPARTMENT OF ANIMAL
SCIENCE. 2010. Plants poisonous to livestock.
http://www.ansci.cornell.edu/plants/toxicagent
s/kumarin.html (18/1/2010).
DUKE, J.A. 1983. Gliricidia sepium (Jacq.) Steud.
Handbook of energy crops. Unpublished.
http://www.hort.purdue.edu/newcrop/duke_en
ergy/Gliricidia_sepium.html (3/9/2009).
DUKE, J.A. and K.K. WAIN. 1981. Medicinal plants
of the world. Computer indexwith more than
85.000 entries. 3 vols.
EVERIST, S.L. 1974. Non nitrogenous organic
compounds. Poisonous Plants of Australia.
pp.39 42.
PHILIPPINE MEDICINAL PLANTS. 2009. Kakawate
Gliricidia sepium: Herbal therapy.
http://www.stuartxchange.org/Kakawati.html
(10/9/2009).
PHYTOCHEMICALS. 2010. Kumarin.
http://www.phytochemicals.info/phytochemic
als/kumarin.php (18 Januari 2010)
879