Ultraviolet (UV) spektroskopi adalah teknik fisik dari spektroskopi optik yang

menggunakan cahaya di terlihat, ultraviolet, dan dekat rentang inframerah. Hukum

BeerLambert menyatakan bahwa absorbansi larutan berbanding lurus dengan
konsentrasi spesies menyerap dalam larutan dan panjang jalan. Dengan demikian,
untuk panjang jalur tetap, UV / VIS spektroskopi dapat digunakan untuk menentukan
konsentrasi penyerap dalam larutan. Hal ini diperlukan untuk mengetahui seberapa
cepat absorbansi perubahan dengan konsentrasi.
Kimia Analitik
analitis kimia adalah ilmu yang berupaya sarana pernah diperbaiki mengukur komposisi
kimia dari bahan-bahan alami dan buatan. Komposisi kimia adalah seluruh gambar
(komposisi) dari bahan di skala kimia dan termasuk fitur geometris seperti morfologi
molekul dan distribusi spesies dalam sampel serta fitur dimensi tunggal seperti
komposisi persen dan identitas spesies [1 3].
Agar efektif dan efisien, menganalisis sampel membutuhkan keahlian dalam:
1. kimia yang dapat terjadi dalam sampel.
2. Analisis dan penanganan sampel metode untuk berbagai macam masalah (alat-of-
perdagangan).
3. Akurasi dan presisi metode ini.
Analisis 4. Data yang tepat dan pencatatan.
Tahapan utama dari proses analisis diuraikan sebagai berikut (Gambar 1). Analisis
farmasi terdiri dari prosedur yang diperlukan untuk menentukan identitas, kekuatan,
kualitas dan kemurnian dari senyawa tersebut. Ini juga mencakup analisis bahan baku
dan intermediet selama proses obat manufaktur.
Jenis kimia analitik
Analisis kualitatif
analisis anorganik kualitatif berusaha untuk membangun kehadiran elemen tertentu
atau senyawa anorganik dalam sampel.
Analisis organik kualitatif berusaha untuk membangun kehadiran kelompok fungsional
yang diberikan atau senyawa organik dalam sampel.
Analisiskuantitatif
Analisis kuantitatifberusaha untuk menetapkan jumlah senyawa tertentu elemen (atau)
dalam sampel.
Metode mendeteksi analit
1. Fisik
a. Mass
b. Warna
c. Indeks bias
d. Thermal Conductivity
2. Menggunakan Radiasi elektromagnetik (Spektroskopi)
a. Penyerapan
b. Emisi
c. Hamburan
 3. Menggunakan Listrik Mengisi
a. Elektrokimia
b. Mass Spectrometry
Ultraviolet Spektrofotometri Serapan
Spektrofotometri umumnya lebih disukai terutama oleh industri skala kecil karena biaya
peralatan kurang dan pemeliharaan masalah yang minimal. Metode analisis didasarkan
pada pengukuran penyerapan cahaya monokromatik oleh senyawa tidak berwarna di
jalur ultraviolet dekat spektrum (200-380nm). Metode fotometrik analisis didasarkan
pada hukum Bouger-Lambert-Beer, yang menetapkan bahwa absorbansi larutan
berbanding lurus dengan konsentrasi analit. Prinsip dasar dari operasi spektrofotometer
meliputi daerah UV terdiri cahaya interval pasti panjang gelombang melewati sebuah sel
dengan pelarut dan jatuh ke sel fotolistrik yang mengubah energi radiasi menjadi energi
listrik diukur dengan sebuah galvanometer. Spektroskopi Ultravioletvisible digunakan
untuk memperoleh spektrum absorbansi senyawa dalam larutan atau sebagai solid. Apa
yang sebenarnya sedang diamati secara spektroskopi adalah absorbansi energi cahaya
atau radiasi elektromagnetik, yang menggairahkan elektron dari keadaan dasar ke
singlet pertama keadaan tereksitasi senyawa atau bahan. Daerah UV-terlihat energi
untuk spektrum elektromagnetik mencakup 1,5-6,2 eV yang berkaitan dengan berbagai
panjang gelombang 800-200 nm [4,5].
The Beer-Lambert Hukum (Equation1) adalah prinsip di belakang spektroskopi serapan.
Untuk panjang gelombang tunggal, A adalah absorbansi (unit kurang, biasanya dilihat
sebagai unit arb. Atau unit sewenang-wenang), adalah absorptivitas molar dari senyawa
atau molekul dalam larutan (M-1cm-1),b adalah panjang jalur cuvette atau pemegang
sampel (biasanya 1 cm), dan c adalah konsentrasi larutan (M).
A = abc
Dimana, A = Absorbance,
a = absorptivitas,
b = panjang jalur,
c = konsentrasi.
C = A / ab
Ada tiga jenis instrumen absorbansi digunakan untuk mengumpulkan spektra UV-
Visible:
1. balok spektrometer tunggal.
2. balok spektrometer ganda.
3. spektrometer simultan.
Semua instrumen ini memiliki sumber cahaya (biasanya deuterium atau tungsten
lampu), pemegang sampel dan detektor, tetapi beberapa memiliki filter untuk memilih
satu panjang gelombang pada suatu waktu. Single instrumen balok (Gambar 2) memiliki
filter atau monokromator antara sumber dan sampel untuk menganalisis satu panjang
gelombang pada suatu waktu. Ganda balok instrumen (Gambar 3) memiliki satu sumber
dan monokromator dan kemudian ada splitter dan serangkaian cermin untuk
mendapatkan berkas untuk sampel referensi dan sampel yang akan dianalisis, ini
memungkinkan untuk monokromator yang lebih akurat antara sampel dan sumber;
sebagai gantinya, ia memiliki array detektor diode yang memungkinkan instrumen untuk
secara bersamaan mendeteksi absorbansi pada semua panjang gelombang. Instrumen
simultan biasanya jauh lebih cepat dan lebih efisien, tapi semua jenis spektrometer
bekerja dengan baik (Gambar 4).
spektra UV-Visible
Data spektroskopi UV-Visibledapat memberikan informasi kualitatif dan kuantitatif
senyawa atau molekul tertentu. Terlepas dari apakah informasi kuantitatif atau kualitatif
diperlukan adalah penting untuk menggunakan sel referensi ke nol instrumen untuk
pelarut senyawa ini dalam. Untuk informasi kuantitatif pada senyawa, kalibrasi
instrumen menggunakan konsentrasi diketahui dari senyawa tersebut dalam suatu
larutan dengan pelarut yang sama dengan sampel yang tidak diketahui akan diperlukan.
Jika informasi yang dibutuhkan adalah bukti hanya itu suatu senyawa dalam sampel
yang dianalisis, kurva kalibrasi tidak akan diperlukan; Namun, jika sebuah studi
degradasi atau reaksi sedang dilakukan, dan konsentrasi senyawa dalam larutan
diperlukan, sehingga kurva kalibrasi diperlukan. Untuk membuat kurva kalibrasi,
setidaknya tiga konsentrasi senyawa tersebut akan dibutuhkan, tapi lima konsentrasi
akan sangat ideal untuk kurva yang lebih akurat. Konsentrasi harus mulai tepat di atas
estimasi konsentrasi sampel yang tidak diketahui dan harus turun ke sekitar urutan
besarnya lebih rendah dari konsentrasi tertinggi. Solusi kalibrasi harus berjarak relatif
sama terpisah, dan mereka harus dibuat seakurat mungkin menggunakan pipet digital
dan termos volumetrik bukan silinder lulus dan gelas [6,7].
Kalibrasi dan referensi
Sebuah referensi Kosong akan diperlukan pada awal analisis pelarut yang akan
digunakan (air, heksana, dll), dan jika analisis konsentrasi perlu dilakukan, solusi
kalibrasi perlu dibuat secara akurat. Jika solusi tidak dibuat cukup akurat, konsentrasi
sebenarnya dari sampel yang bersangkutan tidak akan akurat ditentukan akan.
Pilihan pelarut atau wadah
Setiap pelarut memiliki absorbansi cutoff panjang gelombang UV-terlihat. Cutoff pelarut
adalah panjang gelombang di bawah ini yang pelarut itu sendiri menyerap semua
cahaya. Jadi ketika memilih pelarut menyadari absorbansi yang dipotong dan di mana
senyawa diselidiki diperkirakan menyerap. Jika mereka dekat, memilih pelarut yang
berbeda. Tabel 1 memberikan contoh pelarut cut off [8,9].
ANALITIS PARAMETER
Validasi dapat didefinisikan sebagai suatu proses yang melibatkan konfirmasi atau
mendirikan oleh penelitian laboratorium bahwa metode / sistem / analis memberikan
hasil yang akurat dan direproduksi untuk aplikasi analitis dimaksudkan dalam berbagai
terbukti dan ditetapkan.
Metode Validasi
Metode validasi selesai untuk memastikan bahwa metodologi analisis akurat, spesifik,
direproduksi dan kasar selama rentang ditentukan bahwa analit akan dianalisis. Validasi
metode memberikan jaminan keandalan selama penggunaan normal, dan kadang-
kadang disebut sebagai "proses pemberian bukti yang terdokumentasi bahwa metode
melakukan apa yang dimaksudkan untuk melakukan dan parameter yang ditunjukkan
pada Gambar 5.
Presisi
Presisi adalah ukuran dari . tingkat pengulangan dari suatu metode analisis pada
operasi normal dan biasanya dinyatakan sebagai persen relatif standar deviasi untuk
sejumlah signifikan secara statistik sampel Menurut ICH, presisi harus dilakukan pada
tiga tingkatan yang berbeda: pengulangan, presisi menengah, dan reproduktifitas.
pengulangan adalah hasil dari metode operasi selama interval waktu pendek di bawah
kondisi yang sama (antar-assay presisi). ini harus ditentukan dari minimal sembilan
penentuan meliputi kisaran tertentu dari prosedur (misalnya, tiga tingkat, tiga
pengulangan masing-masing) atau dari minimal enam penentuan pada 100% dari
konsentrasi uji atau target. Menengah presisi adalah hasil dari dalam variasi lab karena
peristiwa acak seperti hari yang berbeda, analis, peralatan, dll Dalam menentukan
presisi menengah, desain eksperimen harus digunakan sehingga efek (jika ada) dari
variabel individu dapat dipantau. Reproduktifitas mengacu pada hasil studi kolaboratif
antara laboratorium. Dokumentasi dalam mendukung studi presisi harus mencakup
standar deviasi, standar deviasi relatif, koefisien variasi, dan selang kepercayaan [10].
Akurasi
Akurasi adalah ukuran dari ketepatan suatu metode analisis, atau kedekatan perjanjian
antara nilai yang diterima baik sebagai, nilai sebenarnya konvensional atau nilai
referensi diterima dan nilai yang ditemukan. Hal ini diukur sebagai persen dari analit
pulih dengan alat tes, oleh spiking sampel dalam studi buta. Untuk uji bahan obat,
pengukuran akurasi diperoleh dengan perbandingan hasil dengan analisis bahan
referensi standar, atau dengan perbandingan metode kedua, wellcharacterized. Untuk
pemeriksaan produk obat, akurasi dievaluasi dengan menganalisis campuran sintetis
dibubuhi jumlah yang diketahui dari komponen. Untuk kuantisasi kotoran, akurasi
ditentukan dengan menganalisis sampel (zat obat atau produk obat) dibubuhi jumlah
diketahui dari kotoran. (Jika kotoran tidak tersedia, lihat spesifisitas.)
Kekhususan
Spesifisitas adalah kemampuan untuk mengukur secara akurat dan secara khusus
analit kepentingan di hadapan komponen lain yang dapat diharapkan untuk hadir dalam
matriks sampel. Ini adalah ukuran dari tingkat gangguan dari hal-hal seperti bahan
lainnya aktif, eksipien, kotoran, dan produk degradasi, memastikan bahwa respon
puncak adalah karena komponen tunggal saja. Bahwa tidak ada coelution ada.
Spesifisitas diukur dan didokumentasikan dalam pemisahan dengan resolusi, piring -
count (efisiensi), dan tailing faktor. Spesifisitas juga dapat dievaluasi dengan yang
modern detektor dioda array membandingkan spektrum dikumpulkan di puncak
matematis sebagai indikasi puncak homogenitas. ICH juga menggunakan kekhususan
istilah, dan membagi menjadi dua kategori: identifikasi, dan tes assay / pengotor.