Aktivitas ion hidrogen berperan penting dalam katalisis enzimatik.

Dalam percobaan
penentuan aktivitas enzimatik yang menggunakan uji katalitik standar, penentuan pH optimal
merupakan langkah pertama pada percobaan karena penggunaan larutan buffer mencakup kisaran
pH yang lebar sehingga perlu diperiksa secara spesifik mengenai efek larutan penyangga.
Rekomendasi ini menunjukkan dengan tegas bahwa selain pH, sifat larutan penyangga
mempengaruhi kinerja enzim. Hal ini dikarenakan larutan buffer memiliki spesifitas yang berbeda-
beda dan biasanya terdapat reaksi samping yang tidak diinginkan. Salah satu kasusnya ada
beberapa enzim yang kinerjanya dihambat oleh buffer fosfat dengan cara mengendapkan sebagian
besar kation polivalen dan itu juga metabolit atau inhibitor di banyak sistem seperti
karboksipeptidase, urease, kinase dan dehidrogenase. Buffer borat dapat membentuk kovalen
kompleks dengan mono- dan oligosakarida, bagian ribose nukleat asam, nukleotida piridin, dan
permata-diol lainnya serta dapat membentuk kompleks dengan berbagai senyawa organik.
Sedangkan buffer tris dan buffer amina lainnya dapat membentuk basa Schiff dengan aldehida dan
keton.

Sifat kimia dari larutan buffer dipengaruhi oleh elektrolit lemah yang digunakan untuk
mengatur pH secara biologis. Penggunaan buffer memungkinkan terjadinya reaksi samping dan
hal tersebut dapat dianalisis dengan membandingkan pengaruh dari jenis buffer yang berbeda.
Pada sistem yang diteliti, terutama yang terkandung Protein atau enzim termasuk juga larutan asam
lemah (basa) dan nya basa terkonjugasi (asam) yang bertindak sebagai pH buffer. Dalam
percobaan biokimia diakui bahwa larutan buffer diperlukan untuk mengatur pemurnian
protein,katalisis enzim, dan untuk menjaga stabilitas protein terhadap denaturasi reversibel atau
ireversibel sehingga salah satu syarat utamanya dari larutan buffer yang ideal yaitu larutan tidak
berinteraksi dengan substrat /produk atau kofaktor logam.

Larutan buffer yang baik tidak selalu menampilkan perilaku yang ideal. Hal ini
menunjukkan bahwa sebenarnya terdapat efek penyangga yang spesifik bahkan dengan tidak
adanya reaksi kimia samping. Ini disebabkan oleh elektrolit kuat yang diakui berasal dari
'fenomena Hofmeister' dan elektrolit lemah yang berinteraksi secara khusus dengan antarmuka
polar / bermuatan dan khususnya dengan sifat biologis. Interaksi tersebut terjadi pada situs yang
terisi dan juga pada petak biomedromolekul yang tidak bermuatan sebagai akibat dari interaksi
yang rumit antara elektrostatika, dispersi, dan hidrasi kekuatan